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I.

INTRODUCCION

La Artemia Salina o Brine Shrimps pertenece a un grupo de crustceo branquipodo que ha habitado la tierra por 300 millones de aos, viven en las aguas salobres del litoral o del interior, y sta ha sido un importante eslabn en la cadena alimenticia desde entonces. Es la presa viva ms adecuada para la alimentacin de los estadios post-larvarios de muchas especies de peces y crustceos marinos. En circunstancias normales son vivparos, slo en situaciones de estrs ponen huevos. Sus huevos pueden resistir a permanecer deshidratados durante aos; metablicamente inactivas durante largos perodos (incluso de 10 aos) en condiciones de total ausencia de agua y oxgeno, y a temperaturas por debajo del punto de congelacin. Esta caracterstica es llamada diapausa; una vez que el entorno es adecuado, la eclosin puede comenzar transcurridas las primeras ocho horas. El adulto alcanza un centmetro de largo en promedio, y su vida media es de un ao. Este rpido desarrollo, y la habilidad de sus huevos para soportar largos perodos en condiciones desfavorables, la hacen un modelo invaluable en investigaciones biolgicas, algunas incluso desarrolladas en el espacio exterior. Las propiedades nutricionales de este crustceo, particularmente en sus primeros estadios las hacen muy adecuadas para su empleo en acuariofilia como alimento vivo para alevines y peces pequeos. Son ricas en protenas altamente digeribles, vitaminas beta-carotenone; sustancia que realza e intensifica los colores en los peces, lpidos y cidos grasos insaturados, pero poseen muy poco en calcio. Estas caractersticas explican parcialmente la razn de la excepcionalmente alta salinidad del ambiente vital de Artemia, en el cual se hace difcil la coexistencia de posibles depredadores. Estas propiedades convierten a la Artemia en un alimento clave e insustituible para el desarrollo ptimo en la piscicultura y en otros tipos de acuicultura. En la presente prctica se narra la descapsulacin, incubacin y cuantificacin de Artemia, siguiendo una serie de pasos establecidos.

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II. OBJETIVOS

Acondicionare y manejar adecuadamente un sistema de cultivo para producir zooplancton Producir alimento de apoyo, mediante la Acuicultura del gnero Artemia Capacitarse para realizar la descapsulacin de Artemia Capacitarse en el uso de la cmara CIPA y cuantificar el nmero de nauplios nacidos y los embriones no eclosionados, determinando su nmero por gramo y su nmero por mililitro

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III. FUNDAMENTO TEORICO

3.1. CARACTERSTICAS GENERALES DE LA ARTEMIA Artemia sp. propio de hbitats acuticos de elevada salinidad, tpico habitante de lagos y pozas hipersalinas caracterizadas por comunidades con una baja diversidad de especies y simples estructuras trficas. La supervivencia de las poblaciones de Artemia sp. es fuertemente dependiente de las interacciones salinidad - temperatura y de la concentracin absoluta y relativa de sales en su ambiente, pudiendo tolerar temperaturas de 6 a 35 C estando ntimamente ligadas a las caractersticas de cada cepa geogrfica; tambin presenta caractersticas eurihalinas encontrndose poblaciones activas de formas autctonas en salinas con salmuera sobresaturadas a salinidades del orden de 330 partes por mil (Amat, 1985), si bien Artemia sp posee mecanismos fisiolgicos para vivir a bajas salinidades, el lmite inferior en el ambiente natural est en la mayora de casos, determinado por la presencia de predadores, que son abundantes en salinidades inferiores a 45 partes por mil. Ms sorprendente que los propios niveles de salinidad que soporta Artemia sp. puede ser la composicin inica de estas salmueras en las que vive, as se la encuentra en lagos salados sulfatados o con altos contenidos de carbonatos en los que las proporciones entre los iones no son slo diferentes a las que presenta el agua de mar, sino totalmente distintas. En relacin al pH del medio, Artemia sp. Se establece en ambientes que oscila entre la neutralidad y una relativa alcalinidad, se conoce muy poco acerca de la influencia del pH en juveniles y adultos. Para los quistes en particular, el pH es de gran importancia debido a que la eficiencia de su eclosin decrece cuando el pH del medio de incubacin es inferior a 8. Los diferentes biotopos en que vive Artemia hacen que est sujeto a una variedad de ambientes ecolgicos con caractersticas fsicas y qumicas muy diferentes entre s, presentando por lo tanto una serie de variaciones morfolgicas segn el origen geogrfico

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 TAXONOMIA

Phyllum Clase Subclase Orden Familia Gnero

Artrpoda Crustcea Branquiopoda Anostraca Artemiidae Artemia, Leach 1819

ALIMENTACIN: Artemia es un filtrador no selectivo obligado, por tratarse de un crustceo primitivo no posee sustancias de reserva que le asegure un sustento energtico por largos perodos de carencia, estando la actividad natatoria directamente relacionada con las actividades de alimentacin y respiracin. Su alimento se compone bsicamente de microalgas que estn presentes en los ambientes naturales hipersalinos (algunas especies de Chateoceros, Dunaliella, Tretaselmis,,Oscillatoria, Chlorella, etc.), pero tambin puede ingerir partculas de detritus ricas en bacterias haloflicas (Pseudomonas, Halobacterium, Acinetobacter, etc.) y toda una serie de alimentos microparticulados (levaduras, salvados de arroz, soja, maz, etc.) como los que se usan en el caso de cultivos intensivos. REPRODUCCIN: Existen formas bisexuales y partenogenticas, en ambos casos pueden reproducirse ovpara y ovovivparamente. El modo reproductivo ovparo se caracteriza por la formacin de quistes, a veces mal llamados huevos, ya que en realidad son embriones en estado de latencia, se manifiesta cuando las condiciones ambientales no son favorables. Al darse esta situacin, el embrin se desarrolla solamente hasta la fase de gstrula, comenzando as un estado ametablico o de diapausa, momento en que se rodea de una delgada cscara de naturaleza lipoproteica (hematina) denominada corion. El modo reproductivo ovovivparo consiste en la produccin de nauplios directamente. Se da generalmente cuando el animal no est expuesto a ARTEMIA Pgina 5

condiciones estresantes, es decir, en ambientes que gozan de una adecuada concentracin de oxgeno disuelto. VALOR NUTRICIONAL: Los nauplios recin eclosionados son presas que presentan un adecuado tamao (400 500 u), buena digestibilidad y buena palatabilidad (grado de aceptacin por los consumidores) presentando valores porcentuales entre 37-71% de protena, 12-30% de lpidos, 11 - 23% de carbohidratos y 4-21% de cenizas; a diferencia del estado adulto que presenta entre 50-67% de protenas, 2-19% de lpidos, 9-17% de carbohidratos y 9-25% de cenizas (Leger et al., 1986). En funcin a su contenido de cidos grasos (compuestos con un papel muy importante en el normal desarrollo larval tanto de peces como de crustceos) se propuso la existencia de dos tipos de Artemia sp., el tipo dulce acucola, con altos niveles de cido linoleico; y el tipo marino con buena presencia de cido eicosapentanoico y menores niveles de cido linoleico. OBTENCIN Y CONSERVACIN DE QUISTES: Existen cinco etapas fundamentales para la preparacin de quistes que son: colecta en zonas naturales o en cultivos intensivos, filtrado, lavado, secado, envasado y almacenado. En zonas naturales (salinas, lagos, zonas estuarinas), los quistes se acumulan en las orillas mezclndose con arena, lo que permite variaciones del nivel del agua y stos estn sometidos a deshidratacin e hidratacin, lo que disminuye su viabilidad, por lo que al colectarlos deben de ser pasados por tamices, lavarse alternativamente con agua de mar y agua dulce, incluso se recomienda su centrifugacin para eliminar la mayor parte de quistes no viables, y su secado por varios mtodos, entre ellos corrientes de aire. PRODUCCIN DE QUISTES: Es importante mencionar que a salinidades bajas (100 g/l), existe alta reproduccin. Este dato debe considerarse, pues permite un reclutamiento continuo, pudiendo partir de una pequea poblacin, se puede obtener en pocas semanas producciones altas. A salinidades muy altas no hay reclutamiento, se gener la produccin de quistes, acompaada de la muerte de los adultos. La produccin de quistes no slo se desencadena por altas salinidades, sino por alta temperatura y desecacin, niveles txicos de iones (K, Ca, etc.). ARTEMIA Pgina 6

La Artemia es un organismo osmoregulador, por lo que dentro de su cuerpo la salinidad es baja y deshecha constantemente sales. PROCESO DE ECLOSIN: El fenmeno de eclosin es un fenmeno qumico puro (intercambio inico), relacionado con la concentracin de glicerol que posee el embrin, a mayor produccin de glicerol hay mayor absorcin de agua; en etapas crticas de presin osmtica la membrana se rompe, y despus la concentracin de glicerol sbitamente baja a cero, el glicerol es liberado. Si bien se ha observado que en altas densidades de quistes la presencia de glicerol es importante, pues interviene en la sincrona de la eclosin (ya que no acta txicamente sobre las larvas). Es recomendable cambiar esta agua antes de que transcurran diez horas de la eclosin, ya que la presencia del glicerol incrementa las poblaciones bacterianas.
http://www.fitoica.com/Biblioteca/TESIS/T03.pdf

CICLO DE VIDA DE LA ARTEMIA: Las hembras adultas, alcanzan mayor tamao que los machos (11 a 12 mm). El ciclo de vida de la Artemia es muy singular, lo que las hacen tan tiles y necesarios para su uso en la acuicultura de peces y crustceos. Se distinguen cuatro estadios morfolgicos: nauplio, metanauplio, pre-adulto y adulto. Nauplio : Larva recin nacida, se caracteriza por la ausencia de segmentos en el cuerpo y por presentar gran cantidad de reservas vitelinas, su sistema digestivo lo tienen en formacin (no se alimentan del exterior). Sus reservas nutricionales, su pequeo tamao y su forma de obtencin (eclosin de quistes), lo hacen un alimento vivo insustituible en la acuicultura. El nauplio es de color anaranjado, presenta en la base de la cabeza un ocelo central (ojo nauplio). Este estadio mide aproximadamente entre 400 a 480 micras segn la sepa (procedencia), y dura entre 6 a 10 horas a 25 grados centgrados, para luego pasar al sub-estadio de nauplio 2 donde comienza a alimentarse. Este estadio a su vez dura entre 15 a 20 horas.

Nauplio

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Metanauplio: Perido ms largo de la fase larval, en el que desarrolla los toracpodos, lo que permite diferenciarlos de la fase anterior, adems del tamao que alcanzan (2 a 3 mm). Preadulto: Estado en el que se manifiesta el dimorfismo sexual,

especialmente por la forma que adoptan las antenas. En los machos, como ya se describi, adoptan la forma de tenazas y en la hembra la forma de hoja bastante pequea. Adulto: Su cuerpo est dividido en tres partes diferenciadas: cabeza trax abdomen. En este estado, se observa un claro dimorfismo sexual, donde los animales alcanzan su madurez sexual, lo cual es fcilmente advertido con el comportamiento pre-copulativo, en el que el macho se adhiere (abraza) a la hembra fuertemente, nadando juntos (pegados). La hembra presenta en la regin abdominal al lado del tubo digestivo, unas bolsitas dond e desarrollan los huevos. Segn P.Sorgeloos una hembra adulta es capaz de producir ms de 300 quistes/nauplios cada cinco das, durante seis meses. En la prctica esta produccin est acondicionada a variables como: nutrientes y condiciones fsico-qumicas. La cantidad de quistes por gramo vara segn la sepa de Artemia, la que sacan de una lata importada (Utah-USA) es de

aproximadamente 200,000 quistes por gramo,

Hembra

Macho

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La sepa de Virril (Per) as como la de Salinas (Ecuador), llegan a ms de 300,000 quistes por gramo. Los nauplios pueden llegar a adultos en menos de tres semanas en ambientes naturales (entre 12 a 20 das), segn las variables del ambiente (temperatura y alimento disponible), pero bajo condiciones de laboratorio y cultivos intensivos, logramos obtener adultos en menos de 10 das.

Ciclo de crecimiento de la Artemia 3.2. MORFOLOGA Y METABOLISMO DE LOS QUISTES La cscara del quiste est formada de tres estructuras:

El corion: Capa dura formada de lipoproteinas impregnadas de quitina y hematina (= producto de descomposicin de la hemoglobina; la concentracin de hematina determina el color de la cscara, variando de un marrn plido a un marrn oscuro). La principal funcin del corion es la de proporcionar una proteccin adecuada al embrin contra rupturas mecnicas y radiaciones (ej. las radiaciones ultravioletas de los rayos solares). Esta capa puede ser completamente eliminada (disuelta) por un tratamiento oxidativo a base de hipoclorito (= descapsulacin del quiste; ver apartado 5.2.).

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La membrana cuticular externa: Protege al embrin de la penetracin de molculas mayores que la molcula del CO2 (= membrana compuesta de varias capas y con una funcin de filtro muy especial, actuando como barrera de permeabilidad).

La cutcula embrionaria: Una capa transparente y altamente elstica que queda separada del embrin por la membrana cuticular interna (que se transforma en membrana de eclosin durante el proceso de incubacin).

Desarrollo del quiste de Artemia desde la incubacin en agua de mar (AM) hasta la liberacin del nauplio. 3.3. TCNICAS PARA LA ECLOSIN DE QUISTES Y LA SEPARACIN DE NAUPLIOS DE LOS DESECHOS DE ECLOSIN TEMPERATURA La temperatura deber mantenerse en el intervalo de 2530C. A temperatura por debajo de 25C la eclosin es ms lente y por encima de 30C el metabolismo de los quistes se detiene irreversiblemente. Es mejor mantener una temperatura constante en el medio de eclosin para obtener una produccin mxima de nauplios en estado I en el mismo periodo de incubacin; para ello se deben poner a punto mtodos rutinarios de eclosin y recogida de nauplios, asegurando unos resultados de eclosin constantes, independientemente de las fluctuaciones estacionales de la temperatura. ARTEMIA Pgina 10

SALINIDAD Y pH Por razones de conveniencia prctica, se usa mayormente el agua de mar para la eclosin de los quistes. Sin embargo, a una salinidad de 5 aumenta la tasa de eclosin y se han registrados eficiencias de eclosin ms elevadas para algunas cepas de quistes, teniendo los nauplios un mayor contenido energtico. OXGENO A fn de lograr una eclosin mxima (tanto en tasa como en eficiencia), se recomienda mantener unos niveles de oxgeno por encima de 2 mg/l. Las tasas ptimas de aireacin han sido controladas localmente en funcin del tamao del tanque y de la densidad de quistes incubados. La tasa de aireacin se puede determinar facilmente midiendo el volumen de agua desplazado por las burbujas de aire en una probeta invertida durante un perodo de tiempo prefijado 3.4. METODOLOGIA EMPLEADA EN EL CULTIVO DE ARTEMIA 1er Paso: Hidratacin De Los Quistes Se desea eliminar por completo el corion y esto se puede lograr nicamente cuando los quistes tienen su apariencia original o cuando son esfricos, para esto se necesita hidratar a los quistes de artemia, en la mayora de las cepas la hidratacin completa se logra tras 2 horas de mantener sumergidos los quistes en agua dulce o salada a 25C (el tiempo de hidratacin se incrementa cuando disminuye la temperatura y aumenta la salinidad). Se recomienda la utilizacin de los mismos recipientes, con fondo en forma de embudos usados para la eclosin con el fin de conseguir un hinchamiento homogneo de los quistes por medio de un burbujeo de aire desde el fondo del tanque. 2do Paso : Tratamiento con la solucin decapsuladora Una vez que los quistes hayan tomado su forma esfrica y estn hidratados, se debe transferirlos a la solucin de hipoclorito, para esto se tiene que: pasar los quistes a travs un tamiz (filtro) de 125 micras, lavar eventualmente para eliminar las impurezas y escurrir el exceso de aguay colocarlos en vaso de precipitado de ARTEMIA Pgina 11

150ml. Una hidratacin excesivamente prolongada antes de someter los quistes al tratamiento de hipoclorito parece afectar drsticamente la tasa y la eficiencia de eclosin de los quistes decapsulados. Los quistes hidratados que no puedan ser tratados inmediatamente podran ser conservados durante algunas horas en una refrigeradora entre un rango de (04C).Se deber acondicionar le recipiente que contiene a los quistes, con aireacin para ayudar a que la descapsulacion sea mas efectiva y rpida. Existen dos tipos de hipoclorito que pueden ser utilizados, leja (NaOCl) o polvo blanqueador (Ca(OCl)2). La actividad de este ltimo producto suele venir indicada en su etiqueta comercial (generalmente, el 70% de actividad en peso). El mtodo ms sencillo es la determinacin del ndice de refraccin, a condicin que la solucin sea reciente o que haya sido conservada adecuadamente, ej. Con un refractmetro. El peso de producto activo en el volumen de la solucin decapsuladora por gramos de quistes secos a tratar es idntico en ambos hipocloritos, (2 g de producto activo por gramo de quistes y 14 ml de solucin decapsuladora por gramo de quistes). Las soluciones decapsuladoras se debern preparar con agua de mar y tendrn que ser enfriadas hasta obtener temperaturas de trabajo de 15 a 20C. 3er Paso: Lavado y tratamiento de desactivacin En el vaso de precipitado ya con la aireacin, se agrega la solucin descapsuladora que est compuesta por 20ml de de cloro y 8ml de agua de mesa, tan rpido como se pueda se debe de extraer una gota de esta solucin para ser observada al microscopio y este proceso termina cuando los quistes dejen de tener el color marrn y pasen a un color naranja vistoso lo que significa que ya ha terminado el proceso de descapsulacion se filtrarn los quistes decapsulados y se lavarn con abundante agua dulce (del laboratorio) hasta que el olor a cloro haya desaparecido por completo. Para eliminar los residuos de hipoclorito absorbidos por los quistes ya decapsulados sern desactivados en un bao de solucin neutralizadora compuesta por 0.5ml de tiosulfato y 500ml de agua.

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Esta desactivacin tomar menos de un minuto, tras este tratamiento se lavarn otra vez los quistes con agua dulce o salada. IV. MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS

2 botellas no retornables de tres litros desinfectadas. Litro y de agua de mar desinfectada

Sistema de mangeritas y paliglobos desinfectadas. 2 litros de agua dulce desinfectadas

Una cinta de embalaje Vaso chico 150 ml. ARTEMIA Pgina 13

Leja y tiosulfato

Quistes de Artemia deshidratados

Tijera

Vaso grande

Pizeta Baja lengua

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Una pipeta d 2/10 (0.2) ml.

Una pipeta de 2 ml.

Filtro de malla de 125 micras

Cmara de conteo de zooplancton

Salinometro Esteroscopio

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V. PROCEDIMIENTO 5.1. ACONDICIONAMIENTO DEL SISTEMA DE CULTIVO 5.1.1. Desinfeccin de equipos y materiales: En primer lugar empleamos detergente y abundante agua para la limpieza de las botellas de 3 litro, luego utilizamos una solucin hipoclorito de sodio (500mL de agua destilada y 6,25 mL de hipoclorito de sodio) que su nica finalidad es reducir en tamao las partculas contaminantes, ya que lo consigue por su alto grado de corrosin. Despus, hicimos uso de una solucin de tiosulfato de sodio (500 mL de agua destilada y 0,5 ml de tiosulfato de sodio) con una concentracin de 150 ppm, cuya objetivo es eliminar las partculas del hipoclorito de sodio, ya que si queda alguna sera perjudicial para el cultivo. En la ltima parte de la desinfeccin se us agua destilada para eliminar las partculas de tiosulfato de sodio. 5.1.2. Acondicionamiento del sistema de cultivo: Para el acondicionamiento de sistemas de cultivo se siguieron los siguientes pasos: Se procedi a realizar un corte en las 2 botellas descartables de tres litros previamente desinfectadas; en una se le realizo un corte a la altura de la mitad de la botella, a manera que sirviera de respaldo para la segunda botella, a la cual se le realizo un corte en la parte inferior. La botella a la que se le ha realizado el corte en la parte inferior debe de estar tapada, se introdujo en la otra botella cortada a manera de embudo generando un ambiente para la incubacin, se aseguro esta unin con cinta de embalaje.

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 El paliglobo que permitir llevar el aire al fondo de nuestro medio de incubacin, proveniente del sistema de aireacin, se sujet a la botella por medio de cinta de embalaje. Por ltimo se usaron unas mangueras y llaves de plstico para llevar el aire proveniente de la tubera a nuestro medio de incubacin. 5.1.3. Hidratacin de Artemia: Teniendo en cuenta que la Artemia salina se reproduce a travs de quistes de gran resistencia que se mantienen intactos incluso en largos periodos alejados de cualquier fuente de agua. En ese momento los quistes se encuentran en una especie de parntesis biolgico por lo que para su incubacin necesitamos hidratarlo, colocando dos gramos en un recipiente con agua por una a dos horas.

5.2. DESCAPSULACIN Los quistes que tienen una cpsula denominada corion. Deberemos proceder a

eliminar con hipoclorito sdico (leja) diluido en agua aproximadamente con unos 0,5 gr por cada gramo de quiste. Como esta proporcin es compleja de determinar bastar con preparar la mezcla y sumergir los huevos que con la oxidacin pasarn de tener un color marrn oscuro a un naranja vivo. Para lo que se realizo lo siguiente: Primero preparamos una solucin

neutralizadora para lo que se agrego en un vaso de precipitado 500ml de agua de mesa sin gas y 0.5ml de tiusulfato.

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Se prepar una solucin descapsuladora

para lo que usamos una probeta a la cual le agregamos 20ml de leja y 8ml de agua de mesa sin gas. Al mismo tiempo se proceda a realizar el filtrado de los quistes de artemia, por lo que se les coloco en un filtro y por medio de los bajalenguas se les agrego a la solucin

descapsuladora.

Se prepar una lnea de aire para permitir que la solucin descapsuladora trabajase homogneamente en los quistes de

artemia, tambin se extrajo una muestra la que se llev al microscopio para observar el avance de la actividad corrosiva de la lega sobre el corion, el color de los quistes de artemia pasaban de un color marrn oscuro a un naranja vivo, se tomaba el tiempo que durara los quistes en la solucin.

5.2.1. Lavado: Cuando el corion se ha oxidado totalmente se le agrega la solucin neutralizadora y se anta el tiempo que duro la descapsulacin.

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5.3. INCUBACIN Teniendo en consideracin que la perdida de embriones de artemia era significativa se us como volumen un litro del agua preparada a 20 para muestro medio de cultivo, Se llev el filtro y se introdujeron las artemias. Para permitir que todos los embriones de artemia que se encontraban en el filtro se separ el agua de mar a 20 en dos cantidades de medio litro, un volumen del agua se encontraba en nuestro medio de cultivo y se uso el volumen restante para introducir por medio de un lavado los embriones que se quedaran adheridos. Luego se procedi a cubrir el cultivo para evitar el ingreso de predadores.

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VI. OBSERVACIN Y REGISTROS (MUESTREO) Se observaron quistes de artemia hidratada.

Para la obtencin de nuestra muestra se extrajo con una pipeta de 5ml un volumen de 4ml del sistema de incubacin y se llev a una placa petri. Se extrajo 4ml de formol y se llev a la nuestra obteniendo un volumen de 8ml. Con una pipeta se extrajo 0.2ml de nuestra y se llev a una cmara de conteo de zooplancton CIPA" y se procedi a observar al microscopio. Se tomaron 5 muestras que se observaron en el microscopio. En las observaciones del microscopio determinamos el nmero de nauplios, metanauplios, instar, membranas y no nacidos.

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VII. CALCULOS Y RESULTADOS Preparacin del medio de cultivo (Agua de mar con salinidad de 20) Para preparar el medio de cultivo se contaba con: Agua de mar a 36 de salinidad Agua de mesa a 0 de salinidad

Se desea tener 2000 ml de agua con una salinidad de 20 Se aplic la frmula: (Vi) x (Da) = (V2) x (Dc) (2000 ml) x (20) = (V2) x (36) (V2) = 1111.11 ml.

Por diferencia se obtuvo que la cantidad de agua dulce era 888.89 ml, para finalmente tener agua tratada con una salinidad de 20 .
Volumen total = Volumen de agua de mar Volumen de agua de mesa

Volumen total = Volumen de agua de mar Volumen de agua de mesa Volumen de agua de mesa = Volumen total Volumen de agua de mar Volumen de agua de mesa = 2000 ml 1111.11 ml Volumen de agua de mesa = 888.89 ml

Volumen de agua de mesa = 888.89 ml

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Preparacin de la solucin descapsuladora

Para la preparacin de la solucin descapsuladora se tiene unos requisitos que se deben tener en cuenta, por ejemplo: 0.5 gr de Hipoclorito de sodio -------- 1 gr de quistes X gr de hipoclorito de sodio ----------- 2 gr de quistes

1 gr de hipoclorito de sodio

Hacindose los siguientes clculos, La leja usada tena una concentracin de 50 gr de Hipoclorito de sodio para 1 000 ml de leja. 50 gr de H de Sodio ---------------- 1 000 ml de leja 0.5 gr de H de Sodio ---------------- X X = (1 gr de H de Sodio)(1 000 ml de leja) 50 gr de H de Sodio X = 20 ml de leja

Por diferencia se obtiene la cantidad de agua para obtener la solucin descapsuladora: Volumen S.D. = Volumen de leja + Volumen de agua

Volumen de agua = Volumen S.D. Volumen de leja Volumen de agua = 28 ml 20 ml 8 ml

Volumen de agua =

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Por motivo de falta de informacin del contenido de la hoja de prctica no se realizaron los 5 conteos respectivos por da como debi ser, se ha tomado ste nico conteo como valores promedios tanto del da viernes como el conteo del da sbado, esperando que nos permita seguir exponiendo nuestro trabajo. PRIMER CONTEO NO NACIDOS INSTAR NAUPLIOS MEMBRANA METANAUPLIO 8 1 3 1 0

VIERNES 5 DE AGOSTO DEL 2011 T= 24C

SEGUNDO CONTEO NO NACIDOS INSTAR NAUPLIOS MEMBRANA METANAUPLIO 16 7 11 9 0

SBADO 06 DE AGOSTO DEL 2011 T= 24C

TERCER CONTEO

T = 25 ARTEMIA NAUPLIO

9:00 a11: a.m. 1 2 6 6 9 2 2 10 2 13 3 1 10 1 15 4 2 7 2 11 5 4 9 5 15

volmen = 1880 ml. Promedio 2.2 8.4 3.2 12.6 2.2 x 2 = 4.4 8.4 x 2 = 16.8 3.2 x2 = 6.4 12.6 x 2 = 25.2 Pgina 23

METANAUPLIO INSTAR MANBRANA ARTEMIA

NO NACIDOS

5.6

5.6 x 2 = 11.2

OBSERVACIONES DEL CONTEO:

NAUPLIO

INSTAR

En este nuesteo encontramos nauplios instar y meMbranas, no se encontraron metanauplios debido a que el nauplio alcansaria este estadio al segundo dia.

PROMEDIO NO NACIDOS INSTAR NAUPLIOS MEMBRANA METANAUPLIO 9.87 3.73 5.4 7.2 8.4

DETERMINACIN DE LA EFICIENCIA DE ECLOSIN

N = Nmero de nauplios e instar nacidos. Vi = Volumen de incubacin en ml. ARTEMIA Pgina 24

Vm = Volumen de muestra. P = Peso de los quistes puestos a incubar. N = 5.4 Nmero de nauplios e instar nacidos. Vi = 2000 ml de volumen de incubacin. Vm = 0.2 ml de volumen de muestra. P = 2g de peso de los quistes puestos a incubar.

DETERMINACIN DEL PORCENTAJE DE ECLOSIN

P.E.= porcentaje de eclosin. NN= nauplios nacidos. NV= nauplios viables. Nota: se determinara el porcentaje de eclosin segn los siguientes datos:

NN = 5.4 nauplios nacidos. NV =3.73 nauplios viables.

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OBSERVACIONES DEL SEGUNDO MUESTREO

En estas fotos tenemos las imgenes de metanauplios y no nacidos

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VI. DISCUSIONES Para hacer el conteo de Artemia en la cmara CIPA se us 2 ml de muestra del cultivo y 2 ml de formol al 5 %. Se comprob la rusticidad de las artemias porque en un conteo, a pesar que se le haba agregado formol an seguan vivas. La solucin descapsuladora no debe estar ni mucho ni muy poco tiempo en contacto con los quistes de Artemia por las siguientes razones: Muy poco tiempo === no se produce la descapsulacin Mucho tiempo ==== muerte de los embriones

Para un eficiente trabajo al momento de la descapsulacin deben trabajar mnimo 3 persona: uno para que agregue la solucin descapsuladora y haga la aireacin, otro para que tome la muestra y observe en el microscopio y otro para que controle el tiempo de descapsulacin. Deben hacerse los clculos correctamente para obtener buenos resultados, en el caso de la preparacin del medio de cultivo. Una vez terminada la descapsulacin de debe contar con abundante agua para lavar los quistes y embriones; y eliminar el olor a leja

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VII. CONCLUSIONES Se aprendi a acondicionar y manejar un sistema de cultivo para cultivar artemias. Las artemias sirven de alimento para larvas de peces o crustceos cuando estn en la fase de INSTAR, una vez llegadas a nauplios son muy grandes. Se aprendi a hacer diluciones con agua de mar y agua dulce para obtener un medio de cultivo con 20 de salinidad. Se aprendi a usar la cmara CIPA para cuantificar el nmero de embriones no nacidos, INSTAR y Nauplios de Artemia. El cambio de coloracin en la descapsulacin fue por un periodo de 1 min y 50 seg. Las Artemia son organismos muy rsticos.

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VIII.

RECOMENDACIONES

Uso obligatorio del guardapolvo, toca y cubre cabello como norma general de evitar contaminacin. El agua de mar debe obtenerse con tiempo de anticipacin para no estar en ltimo momento haciendo la filtracin y desinfeccin (Puede obtenerse malos resultados por el apuro) La desinfeccin del agua de mar con calor debe hacerse con cuidado. Contar con todos los materiales solicitados tanto para la prctica, como para los conteos para un eficiente trabajo. Trabajar con cuidado al momento del conteo en la adicin con la pipeta de la muestra y el formol. La prctica debe hacerse en forme ordenada para mejores resultados.

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IX. BIBLIOGRAFIA

http://www.fao.org/docrep/field/003/ab474s/AB474S00.HTM http://www.botanical-online.com/animales/cria_artemia.htm http://www.fao.org/docrep/field/003/ab474s/AB474S00.HTM

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NDICE PGINA

I.

INTRODUCCION ...................................................................................................... 3

II. OBJETIVOS.............................................................................................................. 4 III. FUNDAMENTO TEORICO ......................................................................................... IV. MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS ................................................................ 5 V. FUNDAMENTO TEORICO ....................................................................................... 8 4.1. CARACTERSTICA GENERALES DE LA ARTEMIA ....................................... 8 4.2. MORFOLOGA Y METABOLISMO DE LOS QUISTES .................................. 13 4.3. TCNICAS PARA LA ECLOSIN DE QUISTES Y LA SEPARACIN DE NAUPLIOS DE LOS DESECHOS DE ECLOSIN ................................................. 14 4.4. METODOLOGIA EMPLEADA EN EL CULTIVO DE ARTEMIA ......................... 15 VI. PROCEDIMIENTO .................................................................................................. 17 5.1. ACONDICIONAMIENTO DEL SISTEMA DE CULTIVO .................................. 17 5.2. DESCAPSULACIN........................................................................................ 19 5.3. INCUBACIN .................................................................................................. 20 VII. OBSERVACIONES Y REGISTROS ....................................................................... 21 VIII. CLCULOS Y RESULTADOS .......................................................................... 22

IX. DISCUSIONES ....................................................................................................... 32 X. CONCLUSIONES ................................................................................................... 33 XI. RECOMENDACIONES ........................................................................................... 34 BIBLIOGRAFIA............................................................................................................. 35 ARTEMIA Pgina 31