Research In Surgery. Suplemento 5.

Julio 1990

La Eutanasia en los Animales de Laboratorio

Centro de Investigacin. Hospital General Universitario de Valencia
La palabraeutanasiasignifica etimolgicamente"muertesin dolor", yen sentidoaplicativo, "arte de sacrificar o mataranimalesde forma piadosa, evitandoel sufrimientofsico y psquico".Obviamente, esto no se logra si el animal luchao presenta sntomas de miedo durantela maniobra empleada, o si recupera el conocimiento despus del proceso. Sepodracalificar de buenmtodode eutanasia aqulen el que sealcanza con rapidezel estadode inconsciencia y stese mantienehastael momentode la muerte,es decir,la verdadera eutanasia suponeuna insensibilizacinrpida, mantenida hasta que seproduzca la muerte. Segnel Anexo 11 al artculo 5 de la Directiva del Consejode 24de Noviembrede 1986,respecto a la proteccinde los animalesutilizados para experimentacin y otros fines cientficos (86/609/CEE),en el punto 3.12. referente al Sacrificiohumanitariode los animales, seespecificaque: 3.12.1. Todo mtodo humanitario de sacrificio de los animalesexige conocimientos que s6lo puedenadquirirse mediante unaformaci6nadecuada. 3.12.2. Sepuededesangraranimalesen estadode inconsciencia profundapero no convieneemplear,sin anestesia previa. ni los medicamentos queparalizan los msculos antesdeque seproduzcala inconsciencia.ni los de efecto curarizante, ni la electrocuci6n sin pasode corriente por el cerebro. No debe permitirsela eliminacinde los cadveres antes de quesobrevenga el rigor mortis. INTRODUCCION Los mtodosde eutanasiams sofisticadosseguidos paralos animalesdomsticos rara vez sonprcticosen el casode los animalessalvajes, o los animalesque no estn acostumbrados a estarencerrados o a sermanipulados. La eutanasia de animalesde laboratorioen generalresulta ms difcil que en el casode los animalesde compai'la o de granja. El proceso de eutanasia debe caracterizarse por ser: a) humanoy libre de dolor, temoro lucha; b) seguro para el personal de laboratorio; c) fcil derealizar; d) rpido ensuaccin; e) apropiadopara la edad,especie, salud y nmerode animales; t) fiable y reproducible; g) irreversible; h) libre de impactosambientales negativos; i) singranderroche de fnnacos; j) econmico; k) libre de efectosqumicosa nivel tisular; 1) incapaz de inducir alteracioneshistolgicas en el animalde estudio. La eutanasia en animales de laboratorio puede ser necesaria por la aparicinde dolor severo o prolongadoresultado de un experimento,por ser parte integral de un experimento agudo,o porque el animal haya sufrido un accidente, estenfermoo porqueel/los animalesrebasan lasnecesi~es del laboratorio.

La eutanasia en generalpuede ser provocadade dos

modos:
-Por mtodos fisicos: disparo, aturdimiento,desnucadoy otros. -Por sustancias qu{micas:utilizndosegeneralmente anestsicos sobredosificados.
Las tcnicas de sacrificio varan segn la especie y el propsito para el que se est sacrificando al animal, es decir, el mtodo de eutanasia ser distinto si lo que queremos es eliminar al animal o si vamos a necesitar posteriormente el cuerpo para experimentar en l. As, el pentobarbital sdico a altas concentraciones produce una congestin de los alveolos capilares, amn de una esplenomegalia congestiva y alteraciones a nivel del sistema enzimtico microsomial heptico; adems, este tipo de sustancias afectan al feto, estando contraindicadas para la realizacin de las histerectomas con el fin de producir animales SPF o gnotobiticos. A su vez, la T -66 produce edema pulmonar y necrosis endotraqueal de los pulmones, adems de una edematizacin endotelial de los vasos glomerulares a nivel del rin. Por otra parte, incluso el dixido de carbono, componente natural del cuerpo, produce hemorragia alveolar focal y edema perivascularde los pulmones en ratas, al emplearse para inducir la eutanasia. En definitiva, cada agente qumico induce una serie de efectos especficos, como por ejemplo alteraciones en las lecturas de valoracin del sistema enzimtico del hgado o de los citocromos.

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El investigador debe verificar la defuncin del animal, O bien asegurarsede que se ha producido parada cardaca, antes de desechar los restos. Debe recordarse que algunos animales que sehallan en estadode paradacardacapueden presentar una ventilacin mnima, o bien puedenno haber consumido todas sus reservas de oxgeno, con lo cual es posible la recuperacin respiratoria con posterioridad. Cuando se emplean anestsicos, dos veces la dosis habitual suele producir parada respiratoria; cuatro veces la dosis anestsica induce parada cardaca en animales ventilados artificialmente; y tres veces dicha dosis suele producir la muerte de forma rpida y eficaz en animales no ventilados. Existe una variabilidad considerable en cuanto a las dosis con efectos anestsicos y letales, p.ej., con el pentobarbital en ratones puede necesitarse el doble de cantidad que en el gato. La toracotoma tras inducir la parada respiratoria asegura la irreversibilidad del proce-

Los mtodos fsicos de sacrificio son rpidos, humanitarios y prcticos si se realizan adecuadamente, no obstante, es imprescindible realizarlos con seguridad y

resolucin.
Algunos conllevan a la formacin de magulladuras y hemorragias en el lugar de la herida y por esta razn pueden resultar inadecuados en cienos casos, aunque en OIIOS, utilizando la decapitacin o la dislocacin cervical, sirven para examinar las vscerasabdominales.

METODOS FISICOS Los mtodosfsicos msgeneralizados son los que a continuacin pasaremos a describir; no obstante,en la tabla1 quedanreflejados otros, as como su uso o no en los mamferos de sangre caliente.

dimiento.
Tabla l. Mtodos fsicos de eutanasiaen mamferos.

Captive bolt

Descompresin Electrocucin Exanguinacin Decapitacin Dislocac. cervical

NR NR NR NR

Golpe
cabeza

Gato Ganado
Perro

NR

A A
A

NR NR NR

NR NR NR

NR A NR

A
A

NRA

Jer~ Cabra

NR

~
NR

NR A
NR NR NR

NR A
_A

A
-~ NR A

A
NR

NR A
NR NR NR NR NR NR

A
NR

~
NR

A
A

Harnster Ratn

NR NR

NR

~
NR
NR NR NR

A
A A A A A
NR
_A

A
A

Mono
Conejo
Rata

NR NR NRA A
NR

NR

A
A NR

-~

NRA

Oveja

NR
NR

A
NR NR NR NR

Cerdo Paloma Aves domsticas

A
NR
NR

NR

NR
A A A A NR

~
NR

A
A

A
NR

1~Q9omiz
Aves acuticas Mamferos acut.

NR
NR A

NR
NR NR

NR A

A
A

A
NR

NR A

NR: No recomendado; A: Aceptable La Electrocucinse acepta siemprey cuandose utilice un equiIXJ y un procesoespecficopara tal fm. La Exanguinacin siempre serealizar con el animal anestesiado y despus de haberpracticado un mtodofsico.

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Research In Surgery. Suplemento5, Julio 1990

Desnucado, decapitacin y aturdimiento Estos mtodos slo deben utilizarse para sacrificar animales que pueden manejarse con facilidad y que tengan el crneo relativamente fino. Es preciso cierta habilidad manual pero una vez se haya familiarizado el trabajador con la tcnica, el recelo y el sufrimiento del animal es mnimo, y la muene es rpida. Por otro lado, es habitual que muchas personas no se presten a efectuar estos procedimientos y prefieran usar otros mtodos. Sin embargo, no se debe pennitir que los sentimientos humanos influyan en la utilizacin de las tcnicas ms humanitarias. Aunque stas puedan ser del desagrado del trabajador, son a menudo menos angustiosas para el animal que otros procedimientos ms complicados con el uso de productos qumicos y otros medios.

Agentes
Eter

qumicos

inhalatorios

La electrocucin La electrocucinpuederesultaro indolorao muy dolorosa siendo esencialestanto el conocimiento tcnico comola habilidadpara el usoadecuado de estemtodo. Si sequiere lograr una electrocucinhumanitaria, es preciso quepasepor el cerebrodel animal unacorrientealternalo suficientemente potente; los mtodosque matanpasando la corriente por el corazn pero no por el cerebro no pueden sercalificadosde humanitarios. El disparo Existendos tipos: los que disparanun proyectil y lo que se suele denominar "martillo neumtico" ("captive bolt). En cualquier caso, el aparatodebe dispararsecon el cafln situadofirmementecontrala cabeza del animal,enfocadoen la direccincorrecta.Es precisoque el disparo penetre en el cerebro,y teniendoen cuentaque stees de un tamaflo relativamente pequeflo,es necesariosujetar fmnemente al animal. Conestemtodosedestruyeel cerebroy el estadode inconsciencia sealcanzainmediatamente; sin embargo,el cornzn seguir latiendo hasta su debilitacin por la hemorragia ~ionada. En el casode los gatos y perrosde tamaomedio, la heridainicial en la cabezaalcanzaalgunosde los principales vasossanguneos y ocasiona unasalidaconsidernble de sangre. Despusdel aturdimientoen los animalesms grandes, el desangrado debe acelerarse cortando los principalesvasossanguneos del cuello. Esta prdidade sangre acelerar la parnda cardaca.

Nonnalmente se utiliza en una cmara cerrada para sacrificar pequenosroedores,~ presentaalgunasdesventajas. Muchos autores dudan de que sea un mtodo humanitario por provocar una irritacin de piel y mucosas siendo altamente estresantepara el animal. Adems, al ser un agente inflamable, presenta riesgos en el laboratorio, teniendo que extremar las precauciones sobre todo del destino de las bolsas en las que se hayan introducido los animales muertos. El tracto respiratorio se ve seriamente afectado, producindose secreciones bronquiales y edema pulmonar; sto, inevitablemente va a interferir en la interpretacin de los cones histolgicos. Por otro lado, no se recomienda cuando sevaya a realizar un anlisis lipdico de los tejidos del animal muerto.

Monxido de carbono La inhalacinde CO causainmediatamente la muerte por combinarse con la hemoglobina eritrocitaria produciendo anoxemia. El efectoes tanrpido que la prdida deconsciencia ocurreantesde que el animalseestrese. El animal seintroduceen una cmaray el CO se producir por un motor de combustino por la interaccin qumica entre cristales de formato sdico y cido sulfrico. En cuanto a las concentracionesde CO utilizadas, la bibliografarecogedesde0.5 a 14 %. Los animalesquedaninconscientes a los 40 s, dejande respirara los 2 min y la paradarespiratoriasobreviene de 5 a 7 min despus. Si en nuestroestudio quisieramosrealizar una valoracinde la hemoglobina, esevidenteque estemtodono debe utilizarse. No es recomendable por ser hepatot6xicopara el personaly paralos mismosanimales.
Dixido de Carbono Aunque hasta la actualidad se han utilizado otros agentes voltiles para la eutanasia de animales pequenos, la UFA W recomienda el CO2 como el agente qumico ms adecuado tanto para el animal, como para el trabajador. El C2 es 1.5 veces ms pesado que el oxgeno y no es combustible, no huele y es incoloro. Se almacena en balas como lquido bajo presin. La mayora de las balas llevan un aparato sencillo de cierre que se sustituye por un manmetro reductor antes de utilizarse. Para conectar la salida de la vlvula con el contenedor o cabina en el que el gas tiene que introducirse, se utiliza un tubo de plstico o de goma. La eutanasiapor CO2 puede realizarse bien en bolsa de plstico. o mediante una cabina especial disenada por la UFAW. Cloroformo

METODOS QUIMICOS La UFA W (The Universities Federation for Animals Welfare) ha realizado pruebas exhaustivas de los mtodos qumicos de eutanasiams adecuados;las recomendaciones que se describen a continuacin han sido aprobadas por el Scientific Advisory Committee. Podemos hacer una divisin de los agentes qumicos utilizados en eutanasia en dos categoras:

A) Aqullos que producenla accin por inhalacin, (tibIa ll). B) Agentesno inhaIatorios, (tibIas ni y IV).

a) Eutanasia 12Qr C~ medianteuna bolsade ulstico. El animal secolocaen unajaula dejandoque se acostumbrea sunuevomedio. En el casode los ratones,ratas, hmsters, conejos,periquitos,pichones y pollos, pueden

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La Eutanasia en los Animales de Laboratorio

colocarse varios animales (de la misma especie)en la misma caja siempreque hayasuficientesuperficiey que los animalesno luchenentres. Los gatos (con la excepcin de los jvenes),los visonesy otros carnvorospequef\os, deben enjaularse individualmente. Una vez se haya tranquilizadoel animal, la jaula se coloca dentro de una bolsa de polietileno transparente aproximadamente cinco veces msgrandeque el volumen de la jaula. La bolsase aprietacontralos ladosde la jaula y seintroduceel tuboelsticoqueconduceel C2 por la bocade la bolsa. El experimentador aprietala bocade la bolsa alrededordel tubo con una manoy con la otra gira la llave de la bala producindose unapaulatinaliberacin del gas. La bolsa de plstico comenzara hincharsey cuando la mitad del volumende la misma estocupado por el gas, el animal se habr narcotizado o estar inconsciente. El tiempo que puede transcurrir hastala inconsciencia vara segnla distanciaentrela cabeza del animal y el suelode la jaula. Los ratonessuelenmantener la nariz muy cerca del suelo,perdiendoel conocimiento entrelos 10 y 20 s. Los gatospueden tardarhasta 2 mino

Cuandola bolsade plstico estllena de gas,pero sin presin, se retira el tubo y la boca de la bolsa se cierra atndole un elstico o una cinta. En estos momentosel animalya estar inconsciente,pero debemantenerse bajo observacinhastaque se note la ausenciatotal de respiracin. Cuando sto ocurra, hay que dejar al animal otros 10 min en contacto con el gas,despus de los cuales sepuedeabrir la bolsa,y retirary vaciarla jaula.
b) Eutanasia ~r CQ utiliZ3ndo una cabina de eurnnasia de la UF A W -(fi2ura 1). Se coloca el animal o animales en una jaula dejando pasar un tiempo suficiente como para que se acostumbrea su nuevo ambiente. Hay que asegurarsede que la bandeja de tierra (o excrementos)de la cabina, est fmnemente colocada. Se abre la rnpaderade la cabina deslizndola hacia fuera y se introduce el tubo de entrada del gas de modo que la punta descanse sobre la bandeja. Se abre el gas para que entre paulatinamente, ya que una entrada fuerte de gas producira turbulencia.

Tabla ll. Eutanasiaen mamferos por inhalacin de gases

m
A Ganado
NR

C2

~ms
A
NR NR A NR

Clorofomlo

Nitrgeno

Argn

Cianida

A
NR

NR NR NR NR

NR
~~ NR

NR NR NR

~
IJerbo

~
A
NR

A NR A A A
A

~
NR NR NR NR NR NR NR

NR
NR

IL:abra

~
NR NR

I Cobav~ Ham~rel
Ratn

A A

NR
NR NR

A
A
NR

NR
NR NR NR NR NR

IMono

NR
A A
NR

NR
NR

A
Rata
A

NR

NR
1Cerdo

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A
A
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NR
NR

~
~
NR

NR

A A
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NR
Aves <!Q!!!-~c~
Codorniz

NR
NR NR NR NR

NR
NR

NR
NR NR

NR
NR

NR
NR NR

~~~ticas

A NR

~
NR

Mamferos acut.

NR

NR

NR: No recomendado; A: Aceptable

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Figura 1. Cabinade eutanasia por C2 ideadapor la UFAW,

Cabina Eutansica

-.
Vista de

frente

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'

Segn se llene la cabina con el CO2, se desplaza el aire hacia arriba. El nivel del gas puede averiguarse introduciendo una cerilla encendida; el dixido de carbono no es combustible, y el nivel al que se extingue la cerilla indica la altura del gas; cuando el nivel llegue a 5 cm del techo, la jaula con el animal se coloca con cuidado dentro de la cabina descansndoloen la bandeja y e desliza la tapa del armario hacia el tubo, de forma que la holgura permitir la salida del aire.

Hay que observar al animal de cerca y cuando est inconsciente se sigue introduciendo gas durante otros 1Ss, despus de los cuales se retira el tubo y se cierra la tapadera de la cabina lo ms hermticamente posible. Deberemosobservar al animal hasta que deje de respirar, y la jaula permanecer dentro de la cabina durante otros 10 min, despusde los cuales puede retirarse y vaciarse. Tras el proceso quedar una cantidad de gas considerable en la cabina de forma que si se van a sacrificar ms

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animales slo hay que rellenarlo hasta el nivel necesario y continuar segn se describi anteriormente. Cuando hayamos tenninado el b"abajo,se puedevaciar el gas sacando la bandeja. Si la cabina es~ en una mesa por encima del nivel del suelo, el gas bajar al nivel ms bajo posible y se har inocuo por dispersin en el ambiente. Si la bandeja se ensuciara de orina y excrementos, se sacary limpiar antes de procedera la realizaci6n de Ob"dS operaciones. Sin embargo, sto generalmente no ocurre cuando se utiliza CO2 pudindose realizar varias operaciones seguidas sin tener que liberar el gas que tiene la cabina, y en consecuenciala cantidad que serequire aadir de la bala es menor. Al terminar la jornada, la bandeja debe retirarse y limpiarse, y debe pasarse un pano humedecido con un detergente suave por el interior del armario. Agentes qumicos no inhalatorios Pentobarbita/ sdico El pentobarbital sdico es un barbinrico de actividad media y de utilizacin general tanto en anestesiacomo en la eutanasia. La dosis letal puede considerarse como tres veces la dosis para anestesia. En cuanto a la administracin, puede realizarse por las vas intravenosa, intracardaca o intraperitoneal. Debido a la absorcin cutnea y los resultados irregulares encontrados, no se recomienda la administracin subcutnea; sin embargo, para facilitar la administracin y sobre todo en el caso de animales nerviosos y poco dciles, es mejor la va intraperitoneal. El polvo en cpsula puede administrarse oralmente, pero el efecto es a menudo inseguro; la narcosis puede tardar dos horas o ms, y an as resultar incompleta.

El tiempo de efectividad del fnnaco vara, pero el efectocompletodebe servisible en un tiempode 10 a 15 minoEl fnnaco induce una narcosis muy profunda,lo cual, a personasde poca experienciapuede parecerla muerte,por tanto deberealizarseun examenmuy cuidadosodel cadvery si existieracualquierduda,debeadministrarse unadosisadicional. ANFIBIOS, PECES Y REPTILES

Mtodos Fsicos Impactaci6n cervical (alurdimiento) La mayora de los anfibios, pecesy reptiles pueden sacrificarse sencillamentecon un golpe fuerteen la parte posteriorde la cabeza.Esto suelecomplementarse con la posterior decapitacin u otro procedimiento fsico.
Dislocacin cervical Peces pequeftos y medianos pueden sacrificarse colocando un lpiz, o el dedo pulgar, en la boca del animal, sujetando el pez con la otra mano, y desplazandola cabeza en sentido dorsal.

Decapitacin (tijeras. cuchillo,guillotina) Estemtodoresultaeficaz en el casode la eutanasia en anguilas, si bien algunosinvestigadores prefierenprimero efectuar un golpeen la cabeza. Secci6n medular La seccin medularpor delIsde la cabeza esunmtodo eficaz enpeces. ranasy otrospoiquilotermos.

Tabla ill. Mtodosqumicosde eutanasiaen vertebradosde sangrefra.

Agente Qumico

Va en agua en agua en agua en agua enagua en agua en agua en agua en agua (saturacin8.43ifo p/p a 15 C) en agua

Dosis 100-200 mg/l 20-25 mg/l 50-60 mg/l 80-95 mg/l 1.5-3 gIl 12-25 mg/l 15-20 mg/l 70-100 mg/l 20-30 ml/l > 400 ppm

Tiempo de exposicin
(min)

PECES

MS222 Clorobutanol Estrilpiridina Uretano Hidrato de cloral Tribrometano1 Amobarbitol Secobarbital Dietil ter Di6xido de carbonoI
(adici6n de Bicarb. sdico y HCI diluido) Pentobarbital Uretano (10-20 /fo sol.) y

10-20 10-30 10-30 15-30 20-40 20-40 100-120 100-200 15-30 15-20

ANFIBIOS y REPfll..ES

i.p. i.p.

60 mg/Kg 1-10 mi

Cloralosa (sol.sat.)
Metoxiflorano, Halo tano ,

i.p. inhalat.

1-10 mI a saturacin

Eter,Clorofonno, CO2
Nitr6geno, Arg6n inhalat. a saturacin

SloreemDla. el o,

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Mtodos Parenterales
Vas intraperitoneal/intratorcica: Pentobarbital s6dico y otros barbitricos El pentobarbital (60 mgkg) y otros barbitricos pueden administrarse por va intraperitoneal en la mayora de las especiesde sangre fra. Va intrapleuroperitoneal: Clorhidrato de Procana y clorbutanol Las serpientes pueden sacrificarse mediante una inyeccin de procana (0.47 mg/kg) en la cavidad pleuroperitoneal. La administracin intraperitoneal de soluciones saturadas de unos pocos mI de clorbutanol en ranas logra la eutanasia en pocos minutos.

El MS-222 en forma de 1-3 gil de agua en especies acuticas reduce la movilidad antesde procedera ob'os mtodosde eutanasiafsica. La exposicinms prolongadaconducea la muerte.Estemtodo resultamuy caro, pero es de una gran eficacia. y no planteaproblemasde saludparael personal de laboratorio. Para inducir la eutanasiase pueden aftadir al agua muchosotros compuestos, como el alcohol y el formol. Mtodos de Inhalacin Campana letal deDixido de carbono Si estemtodo no va seguido de otro tipo de procedimiento fsico, la muerte del animal debe ser perfectamente verificada. Campanas de inhalaci6n: Eter, Halotano. Meto.rifluraro

Vapercutnea: Uretano (Etil carbamato) y Metanosu/fatodetricana (MS-222) Las especies acuticas pueden sacrificarse colocando al animal en una disolucinde uretanoal 1-2%. Serequiere la adopcin de precauciones, como el llevar guantes, dado que el uretano es un carcingeno.

Este tipo de eutanasiaes relativamente rpido, pero conllevael riesgode dejarexpuesto al personalde Iaboratorio. En algunas especies de sangrefra, como es el caso de las tortugas, serequiereuna exposicinmsprolongada que enlos mamferos para lograrla eutanasia. En todo caso,debeevitarseel contactodirectoentre el lquido inhaIatorioy el animal.

Tabla IV. Agentcsfarmacol6gicos no inhalatorios parala eutanasia en mamferos.

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La Eutanasia en los Animales de Laboratorio

AVES
Mtodos Fsicos
Dislocacin cervical (manual)

Mtodos Parenterales
Vias intravenosa, intraperitoneal. intratorcica. intracardacao intramJJScular.. Barbitricos

El pentobarbital sdico a concentracionesde 100 En el casode avesde gran tamao, se sujetaal animal mgjkg puedeinyectarse con facilidad en la cavidadabdocon una mano, y se sobreextiende el cuello con la otra; minal. La administracindel pentobarbital por otrasvas este procedimiento sirve para la toma de muestrasde esms difcil, y menoseficaz. A su vez, el pentobarbital sangre de forma inmediata. y resulta rpidoy eficaz. semezclacon hidratode cloral y sulfatode magnesio para Las aves de menor tamao puedenser sacrificadas inducir anestesia y eutanasia enaves. torciendo el cuello, o bien apretndolo contrael bordede una mesa.Alternativamente, la cabeza puede doblarsecon Mtodos de Inhalacin la mano en sentidocaudal. Si ejercemos presinsobrela Di6xido de carbono. Eter. Halotano. Metoxiflurano. trquea y el esfago hastaque cesenlos movimientos etc. sirve evitaremosla aspiracin de alimentodel buchehacia El mtodoquesesueleemplearparasacrificarlasaves lasvas respiratorias. es la dislocacincervical,bien manualmente o bien con el emasculador de Burdizzo; pero el inconveniente de este Dislocacin cervical (emasculador de Burdizzo) mtodoes la gran prdida de plumas y el polvo que se Este procedimiento es similar al mtodo manual, si desprende por el batido de las alas.El polvo desprendido bien se emplea con avesde mayor tamao, como sonlos puedellevar organismos infecciosossobretodocuandose pavoso gansos. destruyen los pjarosal final de un experimento en el que La fractura seproduceal cerrarlos forceps a nivel del se haya utilizado un patgeno; por tanto, cualquier cuello del animal. mtodode sacrificio que disminuyala cantidadde polvo merece unaconsideracin. La cabinarecomendada por la UF A W para sacrificar Decapitacin(tijeras. cuchillo.guillotina) Este procedimiento resulta rpido y eficaz en aves avespor inhalacin de C2 sepuede observar enla figura jveneso de pequeotamao,y es de utilidad encasode 3. Para aseguraruna distribucin igualada del gas, se obtener muestras cerebrales. acopla la cmaraunatuberiade cobrede 1.25cmcon un orificio de salida del gas de 3.6 mm cada 10 cm. La Impactacin cervical tuberarecorredos alturasdentro de la cmara, a 5 cm y En las aves, se emplea un palo de madera con un re65 cm del suelo de la misma. Las aves se colocaronen borde metlico, para efectuar un golpe seco sobre la parte unajaula de polipropileno con suelode rejilla, ya que de posterior de la cabeza. no ser as seobstacularizara la difusin del C2 por la Un instrumento efectivo para estepropsito (figura 2) cmara. puede hacerse del siguiente modo: se requiere un b"Ozo de El procedimiento parasacrificaravesen la cmara de madera de 40 cm de largo x 5 cm de ancho x 1 cm de CO2 es el siguiente: se llena la cmarahasta30 cm del grosor; se forma un asa de 13 cm de largo; se clava una bordesuperior.La jaula con los animalessealza con una barra de metal de 28 cm de largo x 0.5 cm de ancho x 1 polea,y se va introduciendoen la cmarade gas;la jaula cm de grosor a los dos bordes de los restantes28 cm de se baja y se subevarias veces con el fin de desplazar madera. Se levanta el ave con las manos sujetndole por cualquierbolsade aire que puedahaberentre lasavesy/o las patas, cola y las plumas largas de las alas; a sus plumas. La inconscienciase alcanza en un tiempo continuacin se le da un golpe seco en la parte posterior mediode 30 a 45 s. de la cabeza (detrs de la crestaen su caso)con el borde del Paraasegurar que todaslasavesestnmuertas debern aturdidor; acto seguido, se procede a la decapitacin, permanecer los animales en la cmara,al menos5 min exanguinacin, etc., segn el caso. ms,no obstante a los dos min de haberintroducido los animales en la cmaraes convenienteaadir ms CO2 (duranteunos 30 a 45 s) para reemplazarel gas que se Figura 2. Aturdidorde aves. hayautilizado en el sacrificio. Parasacrificaraves adultasde forma individual o una pequeftacantidad de polluelos, bastarcon utilizar una bolsa de polietileno transparente(preferentemente de calibre 500) que se llenar de CO2 y se cerrar con un elstico. El tiempo de exposicin al gas no debe ser menora 5 mino En cuanto a la utilizacin del ter, halotano y metoxiflurano,entre otros, resultabastante eficaz y tico. Seccin medular con o sin exanguinacin No obstante, existen reticencias crecientes frente al Los principales vasos cervicales pueden ser seccioempleode cualquieragenteque no seael C2,debido al nados a travs de la cavidad bucal, sin necesidadde proceriesgode exposicin queconllevan.

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der a la decapitacin, y una vez realizada la seccin

medular .

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Figura 3. Cmarade eutanasia por C2 para avesdisciadapor la UFAW.

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GATOS y PERROS
Mtodos Parenterales Vfasinlravenosa. intraperitoneal. intratorcica e intracardfaca:Barbitricos Tres veces la dosis anestsica de pentobarbital sdico (90-100 mg/kg. iv) producir parada respiratoria, y seguidamente cadaca. en perros y gatos. La va intravenosa es la ms recomendadaa esteefecto. La premedicacin con sedantes intramusculares o subcutneos facilita la posterior inyeccin intravenosa de pentobarbital. La inyeccin intraperitoneal se reserva para animales difciles de manejar. La inyeccin intracardaca puede emplearse en perros ya anestesiados,y en animales no anestesiados siempre que sea realizado por personal formado. VEas intravenosa. intraperitoneal. e intratorcica: T-61 Este frmaco (0.3 ml/kg) acta como narctico, ademsde ser un depresorrespiratorio en gatos y perros. Se asocia a dolor cuando se administra va intraperitoneal. Las vas intracardaca, intratorcica y otras pueden aplicarse en el caso de animales neonatoso anestesiados. Vas intramuscular y subcutnea: Clorhidrato de ketamina. narc6ticos. y/o tranquilizantes Estos agentes se emplean para la inmovilizacin de peITOS y gatos. Pueden a su vez combinarse con la administracin subsiguiente de pentobarbital o la aplicacin de medidas fsicas tales como la exanguinacin en animales

queresultan dificiles demanejar.No serecomiendan como agentes nicosen la induccinde la eutanasia.

Mtodos de Inhalacin Di6xido de carbono (balas de gas. hielo seco) Se requieren altas concenb"aciones (al menos 40%, y preferiblemente el 70%). El llenado de la cmara antes de introducir el animal aumenta la eficacia. Puesto que la densidad del C2 es mayor que la del aire, la apertura de la cmaraderer estaren la parte superior. Este mtodo es muy eficaz en los gatos, puesto que se produce la prdida del sentido a los 90 s, y la muerte a los 5 min (con concentraciones por encima del 60%). En el caso de cachorros y gatos pequenos, puede emplearse una bolsa de plstico, llena de gas, y dejando al animal dentro de la misma hasta 20 min despus de inducida la parada respiratoria. Este es el mtodo preferido en aquellos casos en los que debe evitarse el empleo de frmacos o agentes qumicos. Puede emplearse hielo seco en lugar de balas de gas, pero en tal caso debe evitarse el contacto directo entre el animal y el hielo. Cmara letal y mascarilla: Ha/otano y Metoxijlurano

Estosagentessonde utilidad en gatosque puedenser difciles de inmovilizar,y encachorros. El riesgo para el personal de laboratorio puede minimizarse mediante el empleode sistemas especiales de ventilacin.

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La Eutanasia en los Animales de Laboratorio

HURONES Y ZORROS
Mtodos Parenterales Vfa intraperilonea/: Barbitricos La administracin intraperitoneal de pentobarbital sdico (100 mg/Kg) es de utilidad para la induccin de la eutanasia en estas especies. Las vas intravenosa e intratorcica han sido recomendadas en el rorro, pero son de acceso ms difcil y doloroso. El pentobarbital sdico tambin puede administrarse por va oral en los zorros, para inducir un estado anestsico previo a la eutanasia por otros mtodos.

Dislocacin cervical Serecomienda paraconejosque pesen menosde 1 Kg. El animal se sujeta. por las patasa la altura de la cintura con una mano,la cabezase sujeta. con la otra mano y se sobreextiende el cuello. Esta. tcnica tambin se puede realizartumbandolateralmente al animal encima de una mesa o superficieplana. Decapitacin La utilizacin de este mtodo se reserva para los estudios especiales enlos que los frmacosestn contraindicados. ya quela guillotina por unalado espeligrosapara el personal, adems de ser un mtododesagradable desde unpuntode vista. esttico. Tras anestesiarlos animales, la exanguinacin se realizar por aislamiento de la arteriacartidao venipuntura va intracardaca. Mtodos Parenterales Va intravenosa: Aire El aire, 5-50 ml/Kg, produce una muerte rpida que puede ir acampanada de convulsiones, opistotonos y dilatacin pupilar. No se recomienda en animales no anestesiados. Vas intravenosa. intraperitoneal. intratorcica o intracardaca:Barbilricos Los barbitricos en general son sustancias controladas pero su coste no es elevado y normalmente estn dispoExanguinacin

Mtodos de Inhalacin
Dixido de carbono y Nitrgeno

El empleo del C2 es como en el gato y el perro; el nitrgeno en el hurn es muy eficaz; el animal sequeda inconsciente al minuto,y fallece a los 5 mino PRIMA TES

Mtodos Parenterales
Vfasinrravenosa. intraperiloneal. intratorcica. e intracardaca: Pentobarbilal sdico El pentobarbial sdico (100 mg/Kg) puede administrarse sobre todo va intravenosa e intraperitoneal, tras premedicacin con clorhidrato de ketamina para facilitar el procedimiento. A su vez, el pentobarbial puede combinarse con otros agentes o procedimientos fsicos tales como la exanguinacin. Vfas intramuscular y subcutnea: Clorhidrato de ketamina

nibles.
La va intravenosa es la primera eleccin si pueden utilizarse las venas auriculares; la va intracardaca puede ser dolorosa o lenta si se hace la inyeccin en el espacio pericardial; y por ltimo, la va intratorcica es til si el animal ya est2anestesiado.

Esteanestsico se empleafrecuentemente en primates de gran tarnafio. como paso previo a la eutanasiacon pentobarbital sdicoo algnanestsico de inhalacin.

Mtodos por Inhalacin Cmara de eutanasia deDixidode carbono Dixido de carbono. Halo/ano. Metoxiflurano Las concentraciones del 40 al 100% son segurasy Estassust3ncias seempleanpara inducirla eutanasia a solas,o tras premedicaci6n con ketamina u otros agentes efectivas para los conejos. Este es el mejor agente utilizadoparala eutanasia por inhalacin de gas. anestsicos.

Mtodos de Inhalacin

CONEJOS
Mtodos Fsicos
Impactaci6n cervical

Cmarao mscara de eulanasia para Eter. Halotanoo Metoxiflurano Los vaporespuedenirritar las mucosas y provocar un forcejeoporpartedel animal.El gaslquido no debeentrar en contacto con el animal.

Este mtodo se utiliza cuando estcontraindicadoel uso de frmacos,y consiste en golpear al conejo en la ROEDORES nuca con un objeto de metal o madera,o con un golpe (Chinchilla, Jerbo, Cobaya, Hrnster,Ratn, Puerco fuertey secocon la mano.Algunas~rsonas rechazan este mtodo por motivos estticos, adems este tipo de Espny Rata) eutanasia requierehabilidad y no asegura la muerte,por Mtodos Fisicos ello, a menudova seguidode la decapitacin, toracotoma lmpactacin cervical o exanguinacin. El aturdimiento es un mtodo generalmente desaconSu ventajaes la de que se evita el uso de un frmaco, sejado debido a que es dificil de aplicar bien. pero por otro lado es incompatible con la realizacina Las cobayas pueden ser aturdidas con un golpe seco en posteriori de estudioshistolgicosa nivel cerebral.
la nuca; a continuacin se suele realizar una exan-

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Research In Surgery, Suplemento 5, Julio 1990

guinaci6n,toracotoma,u otro procedimiento. Estemtodo tambinse utiliza en ratonesy otros animalespequeliosoLas ratas puedenenvolverseen una toalla antesde darles un golpe en la nucao contrauna pila o mesa.Esta tcnicase utiliza principalmente en ratas jvenes. Dislocaci6ncervical manual Este mtodo es muy satisfactorio para los ratones. Tambinpuede utilizarse para otros animalesque pesen menosde 250 g. Se colocanlos dedospulgar e ndice,o un lpiz, un trozo de madera, o un objeto de metalcontra la nuca,apretandofmnementecontrauna superficiedura como una mesapara realizarla maniobra. La efectividad del mtodopuedeverificarseseparando los tejidoscervicales.Puedeque tambinse disloquenlas vrtebras torcicas.Este procedimientoesms dificil de efectuaren los hmsters y las cobayasdebido a que el cuello es ms corto, los msculos del cuello son ms fuertes,y la piel del cuello y hombros es ms flcida. Un mtodo alternativo para efectuar la eutanasiade los cobayas consiste en cogerlos por la cabezadesde la direccin cranealy dandoun chasquido rpido,comounlatigazo.
Dislocaci6n cervical con un emasculador de Burdizzo

rpido, que se considera ideal para los roedores, puestoque puederealizarse la eutanasia simultnea de varios ratones, ratas u otros animales pequeftos. Pueden colocarse las jaulas en una cmara grande o en una bolsa de plstico que luego se llena de CO2' Este ltimo mtodo puede utilizar ms CO2, o necesitar ms tiempo que una cmara, la cual puede cargarse anteriormente y abrirse desde arriba. Los roedores neonatos tienen ms resistencia al CO2 que los animales mayores. Algunos laboratorios guardan los roedores sobrantes para los parques zoolgicos locales; en estecaso es mejor que se realice la eutanasiacon CO2 que con barbitricos u otros fnnacos para evitar el envenenamiento secundario de los animales y pjaros de los zoos. Cmara de Eter. Ha/otano o Metoxiflurano Estos agentes se consideran satisfactorios pero pueden irritar las mucosas (ver otras especies). La cmara debe situarse en un rea bien ventilada. El ter es explosivo y est contraindicado si se estn realizando estudios de lpidos. Los recipientes que se utilizan para efectuar la eutanasia de los roedores con ter deben ser preferentementede cristal en vez de plstico. El halotano es el ms rpido; en 30 s se produce un paro cardaco. y el animal no presenta sntomas de lucha. Ninguno de estos agentes debe entrar en contacto con el animal en su forma lquida. Esto se logra separando el animal del agente por medio de una pantalla de red metlica. El coste y la exposicin del personal son las desventajas de estos agentes.

Es un mtodopoco esttico.y adems deberealizarlo siempre personal entrenado.

Decapitaci6n por guillotina Se reserva nicamente en aquellos casos en los que se contraindican los frmacos. Debe tenersela precaucin de realizarse en una sala distinta a la que estn el resto de animales a sacrificar, y sobre todo debe limpiarse el material y el banco utilizado cada vez que se sacrifique un animal. La decapitacin es desagradable y peligrosa para el operador pero su uso es corriente para los estudios farmacolgicos. Este mtodo es ms difcil de usar en los cobayas, hmsters y ratones que en las ratas. Mtodos Parenterales Vas intravenosa. intraperitoneal. intratorcica e intracardaca:Barbitlicos El pentobarbital sdico es el agente que se utiliza ms corrientemente. La ruta intraperitoneal es ms fcil si se ene que efectuar la eutanasiaa varios animales a la vez o si el animal es difcil de manejar. La inyeccin intravenosa es ms difcil y larga pero es eficaz en manos de una persona con prctica en el manejo de ratones, ratas y jerbos. La.~vas intratorcicas e intracardiales pueden resultar dolorosas y serecomiendan slo para animales a los que se haya administrado un sedante. El paro respiratorio se induce con 150-200 mg/Kg por administracin intraperitoneal. Hay que examinar los animales cuidadosamente para asegurar el paro cardaco, sobre todo con la administracin de pentobarbital por va intraperi tonea!.

RUMIANTES (Terneros. Ganado.Cabras y Ovejas)

Mtodos Fsicos La Electrocucin o Aturdimiento Elctrico Estos mtodos parecen ser ms aceptables con las especies bovinas y equinas. Los electrodos deben colocarsepara que pase la corriente por el cerebro. Las t&:nicas en las que la corriente pasa por el corazn en vez de por el cerebro no se consideran humanitarias. Estos mtodos se ulizan ms bien en mataderos en los que se sacrifican un gran nmero de animales. Disparo con "martillo neumtico" (captive bolt) Los "captive bolt", bien penetrantes o no-penetrantes, se disparan por medio de plvora o aire comprimido. Este mtodo es aceptable en un matadero, pero puede que el personal de laboratorio lo considere desagradable. El animal debe estar correctamente sujeto y el cann de la pistola debe situarse en ngulo ra;to al crneo y enfocado hacia el centro del cerebro. No debe dispararse la pistola si el animal mueve la cabeza.

Mtodos por Inhalacin

Cmara de dixidode carbono Este es un mtodo seguro,humanitario, econmicoy

La exanguinacin se utiliza de manerasecundaria al disparocon "martillo neumtico", la contusincranealo el aturdimientoelcbico. No se recomiendacomo medio primariopara realizarla eutanasia.

Exanguinaci6n

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La Eutanasiaen los Animales de Laboratorio

Mtodos Parenterales Vfaintravenosa: Barbitricos El pentobarbitaI sdico (100 mg/Kg) inyectado va yugular es rpido y bien tolerado por los terneros, ovejas y cabras que se utilicen en la investigacin quirrgica. El paro cardiorespiratorio tambin puede inducirse con efectividad con la administracin endovenosa de una solucin de hidrato de cloral (30 g), sulfato de magnesio (15 g), Y pentobarbitaI sdico (6.6 g) en 1000 mI de agua. Esto puede combinarse con la exanguinacin, toracotoma y otros medios.

traindicado el usode fnnacos. El caftndebedirigirsehaciael cerebrodesdeun punto centrailigeramente por arribade la lneaentrelos ojos.

Mtodos Parenterales
Vfas inlravenosa. intraperitoneal. intratorcica e inlracardfaca:Barbitricos El pentobarbital sdico (100 mg/Kg) es un agente anestsico muy til para el cerdo. Es difcil administrar este agente va intravenosa en cerdos pequeiios. Puede utilizarse la ruta intraperitoneal o puede administrarse la ketamina antesde la inyeccin intravenosa para facilitar la administracin de pentobarbital.

Mtodos por Inhalacin

Mscara o Cono de Eutanasia: Halotano y Metoxifl ur ano

Vias intramuscular y subcutnea: Hidrocloruro de Sepuedepracticarla eutanasia enlas ovejas(corderos) ketamina o cabras(cabritos)pequeftos, situndoles la cabezaen un Este es un tranquilizante excelentepara el cerdo y cono o mscara.Este mtodono serecomienda para los facilita la inyeccin intravenosa del pentobarbitalo la animales msgrandes eutanasia por mediosfsicos u otros mediosqumicos.

CERDO
Mtodos Fsicos AturdimientoElctrico Este mtodo seha mostradoefectivo cuandosetiene disponibleun equipamiento especial.
Disparo con "martillo neumtico"

Mtodo pr Inhalacin Cmara deEutanasia: Dixidode carbono Seha utilizado el CO2 en concentraciones del 65-90% para inmovilizar y narcotizar los cerdos durante varios aosen los mataderos con un xito variable,de cualquier forma suele ser un mtodo de utilidad para los cerdos pequeftos en el laboratorio.

Este mtodo se utiliza nicamentecuando estcon-

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