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    Digestibilidad in Situ

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    Ale Hurtado
    Este documento describe el procedimiento de digestibilidad in situ, que consiste en colocar muestras de alimento en bolsas de tela dentro del rumen de animales canulados por diferentes periodos de tiempo. Se obtienen valores de digestibilidad a diferentes tiempos que luego se analizan con modelos matemáticos. También describe métodos de digestibilidad in vitro como la producción de gas y Tilley & Terry, y cómo modelar los datos obtenidos.

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    Digestibilidad in Situ

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    Este documento describe el procedimiento de digestibilidad in situ, que consiste en colocar muestras de alimento en bolsas de tela dentro del rumen de animales canulados por diferentes periodos de tiempo. Se obtienen valores de digestibilidad a diferentes tiempos que luego se analizan con modelos matemáticos. También describe métodos de digestibilidad in vitro como la producción de gas y Tilley & Terry, y cómo modelar los datos obtenidos.

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    Este documento describe el procedimiento de digestibilidad in situ, que consiste en colocar muestras de alimento en bolsas de tela dentro del rumen de animales canulados por diferentes periodos de tiempo. Se obtienen valores de digestibilidad a diferentes tiempos que luego se analizan con modelos matemáticos. También describe métodos de digestibilidad in vitro como la producción de gas y Tilley & Terry, y cómo modelar los datos obtenidos.

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    Este documento describe el procedimiento de digestibilidad in situ, que consiste en colocar muestras de alimento en bolsas de tela dentro del rumen de animales canulados por diferentes periodos de tiempo. Se obtienen valores de digestibilidad a diferentes tiempos que luego se analizan con modelos matemáticos. También describe métodos de digestibilidad in vitro como la producción de gas y Tilley & Terry, y cómo modelar los datos obtenidos.

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    de 35

    Digestibilidad in situ

    MZD Miguel F Zamudio Delgado

    Digestibilidad in situ
    Consiste en colocar dentro del rumen bolsas de tela sinttica con el alimento que se pretende evaluar Las bolsas permanecern en el rumen tiempos crecientes de 0 a 72 horas Generalmente se introducen al rumen en orden inverso, primero las de 72 horas y al final las de 3, 2, o 1 h

    Digestibilidad in situ

    Digestibilidad in situ

    Digestibilidad in situ
    El orden inverso es para retirar las bolsas el mismo tiempo Se lavan con agua (puede ser en lavadora) Por cada tiempo de incubacin se debe agregar una bolsa de las mismas caractersticas que las que contienen muestra pero vaca. Esto servir para estimar la adherencia de bacterias y otros componentes presentes en el rumen

    Digestibilidad in situ
    No se necesitan reactivos pero si animales canulados Se obtienen valor de digestibilidad a diferentes tiempos de incubacin que tiene ventajas sobre la digestibilidad in vivo en la que se obtiene un solo dato Por ser varios datos es necesario utilizar un modelo matemtico para interpretarlos

    Los resultados son similares a los que se obtienen con la cintica enzimtica de Michaelis La mxima digestibilidad corresponde a Vmax El tiempo medio de degradacin corresponde a la constante de Michaelis, Km Adems se puede utilizar un modelo matemtico que estima la fase LAG, que es el tiempo que las bacterias tardan en iniciar la degradacin del alimento As como en cintica enzimtica se utiliza la ecuacin de Lineweaver-Burk en Digestibilidad in situ se utiliza este otro modelo

    Cintica enzimtica

    La Vmax empricamente es difcil de obtener

    MZD

    MZD

    10

    Procedimiento para el uso del modelo


    En orden descendente se escriben los tiempos de incubacin y sus correspondientes porcentajes de desaparicin En la siguiente columna se escribe el porcentaje de desaparicin considerando la desaparicin mxima como el 100 % (desaparicin potencial) En la siguiente columna se escribe la diferencia entre 100 y la desaparicin potencial y se obtiene el logaritmo natural del resultado que se escribe en la siguiente columna (LN del residual de la MS degradable) Se realiza una ecuacin de regresin donde el tiempo es la variable independiente x y la desaparicin la dependiente y

    Para realizar esta grfica se utiliza la ecuacin de la lnea, que normalmente se estudia en la preparatoria en la materia Geometra Analtica

    y = mx + b
    MZD 13

    y = mx + b
    Donde: y = variable dependiente m = pendiente de la lnea b = intercepto en el eje de la y
    MZD 14

    La pendiente (m) se calcula con la siguiente ecuacin:

    O ms fcil la suma de productos de x y, entre la suma de cuadrados de x En nuestro caso x es 1/[S] y y es 1/Vo
    MZD 15

    El intercepto en y se calcula:

    Donde y y x barra son los promedio de los valores de x y y


    MZD 16

    Finalmente y solo para estimar que tan relacionadas estn los valores de x con los valores de y se calcula r

    O ms fcil la suma de productos de x y, entre la raz de suma de cuadrados de x por la raz de la suma de cuadrados de y Si r = 1 (o 1) la correlacin es perfecta, si r = 0 es desastrosa (no existe correlacin), si r esta cercana a 0 la correlacin es baja si esta cercana a 1 (o -1) es alta
    MZD 17

    Una vez realizada la ecuacin de regresin se obtiene:


    Tiempo medio = 0.693/m Fase LAG = (LN (100)- b)/m Degradacin/hora = -m Degradacin mxima = la obtenida en el tiempo mximo de incubacin

    Digestibilidad in vitro
    Tilley y Terry 1963

    Se realiza por triplicado en tubos de ensaye con tapn que permite la salida de gases, se utilizan blancos para corregir MS procedente del fluido ruminal Se utiliza 20 % de lquido ruminal Y 80 % de solucin amortiguadora (saliva de McDougall) Las incubaciones para todos los tiempos se preparan al mismo tiempo, segn los tiempos de incubacin se para la fermentacin por refrigeracin

    Digestibilidad in vitro

    (Mertens y Loften, 1980) R = Doe k(t-L) + U

    Donde t > L y R = D0 + U, donde, 0 < t < L, donde: R = residuo de MS o FDN al tiempo de incubacin = t; D0 = fraccin digestible en el tiempo t L, D0 = R U; k = constante de grado de digestin; L = tiempo discreto lag; U = fraccin indigestible.

    Para calcular el tiempo discreto lag: D0 = D e k(t-L), ln D0 = LnD -k(L); L = (ln D0 ln D)/ -k, donde, D = interseccin de la ecuacin de ln (RU) sobre el tiempo al tiempo t = 0. La MS o FDN residual en cada tiempo de incubacin se usa para hacer un modelo de regresin no linear empleando el procedimiento PROC NLIN (SAS, 1999)

    bolsa 2A 52 A 25 A 39 A 82 A 85 A

    TFA1 72 48 12 9 6 3

    1 1 1 1 1 1

    100-ddig MS MS desa residual MSd de ln Msde del re 29 71.31 100 0 36 63.73 89 10.6214 2.363 64 35.63 50 50.0345 3.913 72 27.55 39 61.3577 4.117 81 18.71 26 73.7661 4.301 89 10.97 15 84.609 4.438

    Estadsticas de la regresin Coeficiente de correlacin mltiple Coeficiente de determinacin R^2 R^2 ajustado Error tpico Observaciones ANLISIS DE VARIANZA Regresin Residuos Total

    0.99839416 0.9967909 0.9957212 0.05504882 5

    Grados de Suma libertad Promedio de cuadrados de los cuadrados Valor F crtico de F 1 2.824 2.824 931.8 8E-05 3 0.009 0.003 4 2.833

    Intercepcin Variable X 1

    Coeficientes Error tpico Estadstico Probabilidad t Inferior Superior 95% Inferior 95% Superior 95.0% 95. 4.53782474 0.034 133.8 9E-07 4.43 4.646 4.43 4.646 -0.0456139 0.001 -30.5 8E-05 -0.05 -0.04 -0.05 -0.04

    Variable X 1 Curva de regresin ajustada


    5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 10 20 30 Variable X 1 40 50 60 Y Pronstico para Y Lineal (Pronstico para Y) Y

    Una vez realizada la ecuacin de regresin se obtiene:


    Tiempo medio = 0.693/m; 693/-0.0456 = 15.2 h Fase LAG = (LN 100)- b]/m; (4.605 4.54)/0.0456 = -1.42 h (si LAG negativo entonces = 0 Degradacin/hora = - m = 0.045 o 4.5% Degradacin mxima = la obtenida en el tiempo mximo de incubacin = 71.31 %

    Digestibilidad por produccin de gas


    Se realiza por triplicado o quintuplicado en frascos de vacuna de 100 mL con tapn hermtico a 39oC El medio tiene 10% de lquido ruminal y 90% de solucin amortiguadora La solucin debe estar en anaerobiosis, como indicador se utiliza resazurina Se mide la produccin de gas por desplazamiento de agua (a 39oC) O por medio de un medidor de presin y el uso de una ecuacin de regresin para transformarla a volumen

    Desventajas
    Ms sensible a la presencia de oxgeno que la digestibilidad in vitro (Tilley y Terry, 1963) Es necesario hacer mediciones durante la noche Las condiciones de obtencin del lquido ruminal son ms estrictas Parte del gas obtenido no se debe a su produccin sino a la neutralizacin de los AGV (AGCC)

    Digestibilidad por produccin de gas


    Ventajas
    La misma muestra se utiliza para las primeras mediciones que para la ltima No es necesario obtener los residuos por cada tiempo de incubacin Se pueden determinar los componentes del gas producido Se puede incubar con estimulantes o inhibidores de la fermentacin

    Modelos para graficar datos de produccin de gas in vitro (Pitt et al 1999)

    Gracias

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