5 Mejoramiento Genético
5 Mejoramiento Genético
5 Mejoramiento Genético
).
9. Los brotes separados, individualmente, se colocan en el Medio de
Regeneracin (Medio 3, sin reguladores de crecimiento), para su crecimiento y
formacin de races.
10. Luego de unos 30 das la plntula se transplanta a un recipiente con suelo
desinfectado en condiciones de alta humedad relativa (invernadero), para su
aclimatacin al ambiente externo.
4
Comunicacin personal con Y. sraeli, (1992).
34
11. Cuando se cumplan los primeros 30 das de permanencia en invernadero, las
plantas son transferidas a bolsas de polietileno y colocadas bajo sombra
(vivero).
12. Despus de 60 das de aclimatacin la planta puede ser cultivada en el
campo.
El cultivo asptico de pices de banano ha contribuido a la produccin libre
de virus a partir de material infectado.
Berg y Bustamante (1974) y Surga (1988), obtuvieron plantas del subgrupo
Cavendish AAA libres del CMV (Virus del Mosaico del Pepino) a partir del cultivo
in vitro de puntos meristemticos (domo meristemtico acompaado de 2-3
primordios foliares) de plantas infectadas. El CMV puede ser eliminado pero no
hay certeza que el mtodo sea eficaz contra otros virus o viroides (Krikorian y
Cronauer, 1984). Rivera et al (1990), reportan la presencia de 2 partculas
semejantes a virus asociadas al CMV en plantaciones comerciales de banano en
Costa Rica.
De acuerdo con Cronauer y Krikorian (1984), estas reas necesitan mayor
investigacin, particularmente, se requiere un esfuerzo para el desarrollo del
material estrictamente asptico de virus o viroides. Existe una gran posibilidad
que estos trabajos contribuyan a la obtencin de plantas ms vigorosas y a
incrementar la produccin.
A50(2ata5(;1 +, 6(tro S -0a1ta)
Las plantas producidas in vitro requieren un perodo de aclimatacin que les
permita crecer y adquirir los caracteres morfolgicos y fisiolgicos necesarios
para sobrevivir en el campo. Estas plantas cultivadas bajo condiciones de asepsia
han permanecido en un ambiente controlado, y necesitan fuentes de carbono
exgeno para su crecimiento (plantas hetertrofas), debido a que su aparato
fotosinttico es pobremente desarrollado. Adems, se han desarrollado en
presencia de una humedad relativa al 100%; esta condicin favorece el desarrollo
de un sistema foliar sensible a la deshidratacin ( mesfilo de empalizada con
grandes espacios intercelulares, pocos estomas y una cutcula delgada
desprovista de ceras) (Granada, 1988).
En el invernadero, la humedad relativa puede mantenerse alta mediante el
uso de micro aspersin o nebulizacin en recintos cerrados con una baja
intensidad lumnica. El suelo debe ser de textura adecuada, preferiblemente
esterilizado o proveniente de lugares libres de plantas de la Familia Musaceae
para permitir un buen drenaje y ptimo desarrollo radical (Sandoval, 1991). Con
frecuencia se preparan mezclas (1: 1: 1) de suelo, arena y fibra vegetal. Para
favorecer el desarrollo foliar se recomienda aplicar a las plantas una solucin de
macro y micronutrientes de Murashige y Skoog (1962) a los 15 y 30 das despus
35
de realizado el transplante (Sandoval, 1991). Cabe recalcar, que para poder evitar
el desarrollo de enfermedades las plantas deben ser fumigadas peridicamente.
36
Evaluac!"
a#$%"!&ca '
() $)**+)"ca
I"cac!" cul+v%
() &)$*+)&a*
Su,cul+v%* ca(a
- (.a*
P$%l/)$ac!"
')&a* v)#)+a+va*
A(a0+ac!" cl&1+ca
T$a"*0la"+) a *)&ll)$%
I"cac!" ()
,$%+)* &2l+0l)*
34 5 E"$a6a&)"+%
74 5 Mc$%0$%0a#ac!"
Mc$%0$%0a#ac!"
S)l)cc!" Sa"+a$a
S. $)acc!"
")#a+va
S. $)acc!"
0%*+va
D)*ca$+)
Pla"+a* "(ca(%$a*
S)$%l%#.a CM8
37
FIGURA 5.D. PASOS A SEGUIR DURANTE LA MICROPROPAGACIN CLONAL DE BANANO.
Fuente: Angarita y Castro, (1984).
El xito de la micropropagacin in vitro depende de la capacidad para
manejar en el invernadero plantas a gran escala con un alto grado de
sobrevivencia y a bajo costo durante el perodo de aclimatacin (Granada, 1988).
Es necesario investigar los diversos factores relacionados con el establecimiento y
manejo en invernadero y vivero de las plantas producidas in vitro! Entre estos
factores se encuentran las caractersticas morfolgicas y los requerimientos
nutricionales de las plantas, tipo de sustrato, prevencin de enfermedades,
condiciones ambientales y determinacin de variantes somaclonales.
'ariaci(n somaclonal
A pesar de las ventajas que representan las tcnicas de cultivo in vitro en la
micropropagacin y mejoramiento gentico de Musa, estos mtodos no garantizan
la uniformidad clonal del material producido, debido a la aparicin de mutaciones y
variaciones genticas. El trmino mutacin se utiliza para describir un cambio en
el genoma que se transmite meiticamente, de acuerdo con las leyes de la
herencia; cuando no se conoce la naturaleza del cambio(s) heredable(s) se utiliza
el trmino de variacin (Meins, 1983; citado por Pierik, 1990). El trmino 6ar(a5(;1
)o2a50o1a0 se aplica a la variacin que se origina en plantas producidas in vitro
(Larkin y Scowcroft, 1981). Las plantas que presentan este fenmeno han sido
denominadas con diferentes nombres, por ejemplo: "fuera de tipo, "off type,
"subclones, "atpicas, "mutantes, "vitro-variantes, "variantes, entre otros.
Adems de la variacin somaclonal, diversos autores utilizan 6ar(a5(;1
,-(g,19t(5a para referirse a los cambios en la expresin gentica inducida por las
condiciones del medio, es una variacin no heredable de acuerdo con las leyes de
Mendel, es reversible y relacionada principalmente con rasgos cuantitativos y
hbitos de crecimientos (Demarly, 1986).
Pierik (1990) indica algunos ejemplos de variacin epigentica:
1. En el caso de propagacin in vitro existe la posibilidad de obtener plantas libres
de virus, bien por el cultivo de meristemos o por la formacin de vstagos
adventicios. Las plantas libres de virus pueden ser completamente diferentes
en su aspecto externo de las plantas que contienen virus.
2. Se puede obtener diferentes fenotipos como consecuencia de la utilizacin de
citoquininas o auxinas (su elevado grado de ramificacin, fasciacin,
engrosamiento, entre otros); estos cambios no suponen la existencia de
mutaciones, aunque s tienen su apariencia.
3. Las plantas pueden presentar un aspecto anormal, como resultado de la
enfermedad fisiolgica denominada vitrificacin.
38
4. Las plantas pueden sufrir cambios (por ejemplo, en el nmero y morfologa de
los estomas, o en la composicin de las ceras cuticulares), debido al ambiente
que se produce en condiciones in vitro (por ejemplo, una elevada humedad
relativa).
39
A pesar de los estudios realizados con el propsito de conocer mejor estos
fenmenos de variacin in vitro (Krikorian, 1985; Demarly, 1986; Pierik, 1990)
existen controversias entre los diversos autores sobre el uso de estas
terminologas, debido posiblemente a que sus causas no estn bien definidas.
Los tipos de variantes somaclonales encontrados en Musa son:
Enanismo
Gigantismo o porte alto
Filotaxia anormal
Mosaico
Variegacin
Masada
Coloracin atpica del pseudotallo
Lmina foliar anormal
Peciolo alado
Reversin a tipo "French en "Currar (Falso Cuervo)
Reversin a "Valery en "Gran Enano
Tipo pltano en banano (Musa AAA)
Persistencia de flores (en variedades dehiscentes)
Malformacin de flores
Slo flores masculinas
Racimo anormal
Dedos deformes
Rajaduras de dedos
Resistencia a Fusarium oxysporium f. sp. Cubense
La frecuencia de variantes puede estar relacionada con origen del material
propagado. Stover (1987), observ que la frecuencia de variantes somaclonales
en plantas de "Gran Enano ("Giant Cavendish) propagadas in vitro vara de 9 a
25%. Resultados similares fueron publicados por Pool e rizary (1985). Por su
parte, Simmonds (1962), estim que la frecuencia de mutacin en plantas de
"Pequeo Enano ("Dwarf Cavendish) propagada convencionalmente sera de 2
por milln. Drew y Smith (1990), citados por Domergue (1990), encontraron 3%
de variantes con el mtodo de propagacin convencional y 22% en una poblacin
de plantas regeneradas de cultivo de callos.
Krikorian (1985), seala posibles fenmenos celulares y moleculares,
responsables de la variacin somaclonal en Musa. Sutter y Baker (1985), Evans y
Bravo (1986), Mateille y Foncelle (1989), indican que la variacin somaclonal se
puede atribuir a desequilibrios genticos provocados por divisiones celulares muy
rpidas causadas por fuertes dosis de BAP (citocinina) en el medio del cultivo
in vitro" sin embargo esta hiptesis aun no ha sido demostrada. Hwang y Ko
(1986), sealan que cuando se encuentran altas frecuencias de variabilidad se
debe tener cuidado especial con el tipo de medio de cultivo, las condiciones de
incubacin y el nmero de sub cultivos.
40
Las frecuencias de variantes somaclonales son variables y parecen
depender del cultivar y del tipo de variante. sraeli et al (1991), estudiando la
variacin somaclonal en plantas del sub grupo Cavensidh cultivadas in vitro,
observaron al menos 10 tipos de variaciones en los cultivares "Williams y "Gran
Enano y slo 2 de estas variaciones en los cultivares "Shai, "Eilon, "Arnon y
"Nathan. Por otra parte, en los cultivares "Williams y "Gran Enano la incidencia
fue alta para las variables enanismo (ms de 5%) y mosaico, media para la
variegacin y el mosaico severo, y baja para el gigantismo y la coloracin anormal
del pseudotallo. Estos mismos autores sealan que las variantes tambin difieren
en incidencia (nmero de veces que una variacin especfica aparece cuando se
cultiva in vitro un pice normal).
P0a1ta) +,0 5.6. ?Fa0)o C*,r1oA 5o1 -ort, a0to : 5o1 r,6,r)(;1 a ra5(2o) t(-o ?Fr,15FA.
P0a1ta at-(5a +,0 5.6. ?Fa0)o C*,r1oA 5o1 a=*1+a1t, -r,),15(a +, F(<*,0o) 0at,ra0,).
41
D,f(5(,15(a +, For2a5(;1 +, fr*to ,1 *1a -0a1ta +, 5.6. ?Fa0)o C*,r1oA #AAB& -ro+*5to +,
J-(5,) trata+o) 5o1 1 T EMS. S, o=),r6a ta2=(91 0a -o5a -r,),15(a +, F(<*,0o) 0at,ra0,).
%o<a +,0 5.6. ?Fa0)o C*,r1oA #AAB& 5o1 -r,),15(a +, 6ar(,ga5(;1 +,=(+a a0 ,f,5to
2*tag91(5o #EMS 8.5 T&.
Otros autores (Hwang y Ko, 1986; Stover, 1986; Ventura et al, 1988),
informan tambin la variable enanismo como la ms frecuente. Segn sraeli et al
(1991), el factor gentico que determina la altura del subgrupo Cavendish es
inestable y vara entre las plantas propagadas convencionalmente y a travs del
cultivo in vitro.
42
L
a
,
%
$
a
+
%
$
%
I
"
v
)
$
"
a
(
)
$
%
8
v
)
$
%
D
)
*
a
$
$
%
l
l
%
(
)
l
a
P
l
a
"
+
a
c
!
"
F
l
%
$
a
c
!
"
'
D
)
*
a
$
$
%
l
l
%
(
)
l
F
$
u
+
%
7
&
)
*
D
R
F
P
E
N
E
N
G
I
P
R
M
O
8
L
E
M
L
8
E
E
43
F
(
g
*
r
a
5
.
5
.
E
)
H
*
,
2
a
)
o
=
r
,
0
a
(
+
,
1
t
(
f
(
5
a
5
(
;
1
t
,
2
-
r
a
1
a
+
,
6
a
r
(
a
5
(
o
1
,
)
)
o
2
a
5
0
o
1
a
0
,
)
#
E
E
U
,
V
t
r
a
,
1
a
1
o
.
L
$
U
0
J
2
(
1
a
6
a
r
(
,
g
a
+
a
.
M
E
U
2
o
)
a
(
5
o
,
V
t
r
,
2
o
.
M
O
U
2
o
)
a
(
5
o
.
P
R
U
-
)
,
*
+
o
t
a
0
0
o
r
o
<
(
I
o
.
G
t
U
g
(
g
a
1
t
,
.
E
N
U
,
1
a
1
o
.
F
P
U
f
0
o
r
,
)
-
,
r
)
(
)
t
,
1
t
,
)
.
D
R
U
+
,
+
o
)
r
a
<
a
+
o
)
&
.
F
u
e
n
t
e
:
s
r
a
e
l
i
e
t
a
l
,
(
1
9
9
1
)
.
La identificacin temprana de plantas variantes o "fuera de tipo antes de ser
transferidas al campo, es de gran valor comercial y ha sido tema de
investigaciones recientes. Particularmente, sobresalen los trabajos realizados por
sraeli et al, (1991) y Cte et al, (1991).
Cte et al (1991), informan que hay diferencia en la reaccin a la aplicacin
foliar de una solucin de giberalina (100 mg.1), entre plntulas de "Gran Enano
micropropagadas a partir de plantas variantes y normales. En las plntulas testigo,
la giberalina estimul la elongacin del peciolo de la hoja producida despus del
tratamiento; pero esta respuesta fue tarda en las plntulas variantes enanas.
S()t,2a) in vitro : R,g,1,ra5(;1 +, C*0t(6o)
En el proceso de modificacin gentica se requiere establecer un sistema de
regeneracin ptimo (obtener plantas completas a partir de clulas o tejidos). Este
es el primer paso fundamental en el proceso de transformacin gentica.
En el gnero de las Musas se ha empleado la propagacin clonal in vitro
desde el ao 1960 por Cox et al, quienes cultivaron embriones de la semilla de
Musa balbisiana! Desde entonces el cultivo de embriones se utiliza rutinariamente
por fitomejoradores de banano, con el fin de incrementar la viabilidad de los clones
que producen pocas semillas. Seguidamente se lograron cultivos de clulas libres
y agrupadas, procedentes de la pulpa del banano (Stover et al, 1986). Se pueden
utilizar varias tecnologas que permiten la obtencin de plantas completas.
Cultivo de Embriones
Las tcnicas de mejoramiento gentico por cruzamiento permiten algunas
veces obtener clones muy prometedores, pero la errtica y baja germinacin de
las semillas imposibilita una rpida propagacin, es por ello que resulta muy
conveniente la micropropagacin de los embriones, en un medio ptimo de cultivo
que permita una fcil y rpida proliferacin en un ambiente asptico. Esta tcnica
in vitro ha sido usada por largo tiempo (Escalant y Teisson, 1987). Rowe y
Richardson (1975), dicen que el cultivo de embriones de Musa ha sido una ayuda
muy valiosa en los programas de gentica y la tcnica ha sido de gran utilidad en
el mejoramiento de los diploides resistentes a Radophulus similis.
Cultivo de Protoplastos
Protoplastos son clulas cuya pared celular ha sido digerida por acciones
enzimticas. Desde los aos 70's los protoplastos han sido usados en programas
de cruzamientos y mejoramiento gentico. Bsicamente es el cultivo de clulas sin
pared celular (Matsumoto y Oka, 1998).
Al igual que en otras especies de monocotiledneas, slo utilizando clulas
embriognicas en suspensin se ha podido aislar protoplasto con un alto potencial
embriognico, es decir, capaces de producir embriones que darn origen a una
44
nueva planta completa de banano. Megia et al (1992), describi por primera vez el
aislamiento de protoplasto de banano, aunque slo se observ divisin y
formacin de callos. Posteriormente, el xito en la aplicacin de esta tcnica en el
sistema de transformacin gentica de banano ha sido muy limitado (F(g*ra 5.C).
FIGURA 5.C. FORMACIN DE EMBRIONES SOMRTICOS A PARTIR DE CULTI$O DE
PROTOPLASTOS. EL '7ITO EN LA APLICACIN DE PROTOPLASTOS %A
SIDO LIMITADO EN EL CASO DEL BANANO.
Fuente: Panis et al, 1994.
En 1998, Matsumoto y Oka, reportaron el aislamiento y regeneracin de
protoplastos de la variedad "Maa (AAB) del Brazil. Hasta ese momento se
haban reportado avances en el cultivo de protoplastos en bananos AA, AAA y
ABB. El protoplasto de esta variedad se obtuvo a partir de suspensiones celulares.
Cabe recalcar, que el cultivo de protoplastos requiere an mayor investigacin y
se ha utilizado en una fase experimental sin mayor xito.
El cultivo de clulas en suspensin corresponde al cultivo de clulas que no
estn diferenciadas ni organizadas en forma de tejidos. Se encuentran
"suspendidas en un medio lquido, donde se mantienen y dividen constantemente.
De las suspensiones de clulas se originan embriones somticos que son aislados
y transferidos a medios de germinacin slidos, con una eficiencia en la
recuperacin de plantas completas de un 20 a 36% en el caso de especies
diploides. Una de las ventajas de esta metodologa es que permite la seleccin de
los embriones mejor desarrollados que crecen en un medio libre de hormonas.
Esto aumenta el nmero de embriones normales, incrementando adems el
porcentaje de germinacin y el nmero total de plantas completas
histolgicamente (Escalant y Teisson, 1992).
La )*)-,1)(;1 +, 590*0a) +,0 g91,ro Musa ), -*,+, ,)ta=0,5,r a -art(r
+, t,<(+o) 6,g,ta0,) 5o2o 5or2o) o =a),) +, Fo<a). ,2=r(o1,) 5(g;t(5o)
(12a+*ro). 2,r()t,2a) in vitro ,1 +,)arro00o o ,2=r(o1,) )o2Jt(5o)
o=t,1(+o) a -art(r +, f0or,) 2a)5*0(1a) #Pa1() et al. 1KK5L SB,11,1 et al.
1KKE&.
45
Dale y Becker (1997)
MAY, G. 1997. Banana biotechnology. nstitute of Biosciences and Technology, Texas A&M
University. (Comunicacin personal).
71
M9to+o) F)(5o)
En los principales mtodos fsicos para transformacin gentica se encuentran la
aplicacin de electroporacin, microinyeccin y bombardeo de micropartculas.
E0,5tro-ora5(;1: A una suspensin de protoplastos se aade una alta
concentracin de ADN de un plsmido que contiene el gen de inters. La mezcla
se somete a un pulso elctrico de 200-600 V/cm. Este choque elctrico induce la
introduccin del ADN dentro de los protoplastos. Despus de la electroporacin,
los protoplastos son desarrollados en cultivos in vitro durante una a dos semanas
antes de empezar la seleccin de las clulas transformadas genticamente
(Davey et al, 1989) (F(g*ra 5.1@).
Cultivo de clulas
Gen de seleccin
ADN de inters
Mezcla de clulas y
ADN
Fuente de energa
Aplicacin de pulso elctrico de alto
voltaje
ADN se introduce en
el ncleo
FIGURA 5.1@. DIAGRAMA DEL PROCESO DE ELECTROPORACIN USADO EN
TRANSFORMACIN GEN'TICA. EL USO DE ELECTROPORACIN NO %A
72
SIDO E7ITOSO EN LOS ESTUDIOS DE TRANSFORMACIN GEN'TICA DE
BANANO.
Fuente: Furman, (1998).
Se ha logrado una expresin transitoria de genes incorporados en Musa c.v.
"Bluggoe a travs de la electroporacin de protoplastos. Se ha alcanzado una
transformacin gentica del 1,8% por la expresin del gen uidA. El material que
fue transformado se obtuvo de suspensiones de clulas.
Esta metodologa sirve tambin para el anlisis en el uso de diferentes
plsmidos y puede servir para producir plantas transgnicas estables en un futuro
cercano, pues an no ha sido una tecnologa exitosa en mejoramiento de banano
(Sgi et al, 1998b).
M(5ro(1:,55(;1: Utilizando una jeringa extremadamente delgada se inyectan
molculas de ADN directamente en el ncleo de la clula por ser transformada
(F(g*ra 5.1E). Este mtodo ha tenido xito regular en plantas, pues una de las
limitantes ms grandes es que se transforma tan slo una clula a la vez, y a partir
de esa clula hay que regenerar plantas enteras usando tcnicas de cultivo de
tejidos (Tacchini y Walbot, 198?). No se ha reportado el uso efectivo de esta
tecnologa en el mejoramiento gentico de banano.
FIGURA 5.1E. IN/ECCIN DE MATERIAL GEN'TICO POR MEDIO DE MICROPIPETA. ESTA
ES UNA TECNOLOGA USADA MRS FRECUENTEMENTE EN MODIFICACIN
GEN'TICA DE ANIMALES / DE REGULAR '7ITO EN PLANTAS.
Fuente: Alberts et al, (1994).
73
Bo2=ar+,o +, M(5ro-art5*0a): Una delgada capa de ADN que contiene el gen de
inters (vector) se precipita sobre la superficie de micropartculas (1
micrmetro de dimetro) de metal (normalmente de tungsteno u oro) utilizando
cloruro del calcio. Estas partculas se ponen en el extremo de una bala de
plstico dentro de un tubo de una "pistola de partculas". Las clulas de la
planta a transformar se ponen en el extremo de una pequea apertura al final
del tubo. Entonces, la bala se dispara hacia las clulas por medio de una
carga explosiva (normalmente impulsado por gas de helio o por verdaderas
balas) y las micropartculas se disparan directamente a las clulas de la
planta. Las clulas se transfieren hacia un plato para cultivo de tejidos y se
regeneran plantas completas (Davey, et al, 1989; Klein et al, 1992).
El mismo principio se usa con la pistola de micropartculas por medio de presin
de gas helio (F(g*ra 5.1K). En este otro sistema, las micropartculas con el
material gentico suspendido reposan en un disco que tiene una membrana de
ruptura. El gas ejerce presin sobre esta membrana hasta romperla y esta fuerza
lanza a las micropartculas sobre el material vegetal a transformar. Las
micropartculas junto al ADN penetran las clulas vegetales y se da inicio al
proceso de seleccin de tejidos transformados (Mliga, 1993).
Gas helio ejerce presin sobre
membrana de ruptura
Material vegetativo
Pelcula de retencin
Disco con ADN,
suspendido en
micropartculas
Presin rompe la
membrana
Disco detenido por la
pelcula de retencin
ADN suspendido
penetra en el
material
a
.
b
.
c
.
d
.
e
.
FIGURA 5.1K. DIAGRAMA ILUSTRATI$O DEL SISTEMA DE BOMBARDEO DE
MICROPARTCULAS.
E0 2at,r(a0 g,19t(5o )*)-,1+(+o ,1 -art5*0a) +, t*1g)t,1o ), ,15*,1tra )o=r, *1 +()5o. M,+(a1t, ,0 *)o +,
-r,)(;1 +, ga) F,0(o. ), ro2-, 0a 2,2=ra1a +, r*-t*ra H*, ), ,15*,1tra +,=a<o +,0 +()5o : 0a1Ia 0a)
2(5ro-art5*0a) H*, -,1,tra1 ,0 2at,r(a0 a tra1)for2ar #a : =&. S, ),0,55(o1a ,0 2at,r(a0 ,1 2,+(o) +, 5*0t(6o 5o1
a1t(=(;t(5o) #5&. S, r,g,1,ra1 -0a1ta) 5o2-0,ta) #+ : ,&.
74
Fuente: Mliga, (1993).
Remy et al (1998) y Becker et al (1999), reportan una exitosa incorporacin
de genes mediante el bombardeo de micropartculas a suspensiones de clulas de
los siguientes cultivares:
- Cavendish "Grande Nain (AAA)
- Cavendish "Williams (AAA)
- Three hand Planty (AAB)
- Bluggoe (ABB)
- Cardaba (ABB)
- Monthan (ABB)
- Musa balbisiana Tani (BB)
- Goldfinger (AAAB)
S,0,55(;1 +, C90*0a). T,<(+o) : Orga1()2o) Tra1)g91(5o)
Para la seleccin de tejidos transformados se usan los genes marcadores
que indican su eficiente incorporacin en el genoma de la planta a travs de la
sntesis de protenas o enzimas. Mediante la seleccin sucesiva a travs de
medios que contienen herbicidas o antibiticos se pueden determinar los tejidos
que expresan la incorporacin de los transgenes.
Adems, se utilizan anlisis bioqumicos para confirmar la incorporacin y
expresin del nuevo gen. Los mtodos ms usados son el PCR (Reaccin en
Cadena de la Polimerasa), Southern, Northern y Western anlisis. En todos estos
anlisis es necesaria la aplicacin de electroforesis.
La electroforesis es un mtodo que permite separar sustancias segn carga
elctrica, tamao y forma. Utilizando un campo elctrico, las sustancias analizadas
se mueven a travs de un agar y migran al polo positivo o negativa segn su
carga. La velocidad a la que se mueven depende del tamao y forma del material
analizado (F(g*ra 5.38).
75
FIGURA 5.38. PROCESO DE ELECTROFORESIS. UTILIMANDO UNA CARGA EL'CTRICA SE
SEPARAN LAS SUSTANCIAS ESTUDIADAS SEG>N SU TAMAYO. CARGA /
FORMA.
E0 ADN -o),, *1a 5arga 1,gat(6a #G& -or 0o H*, ,2(gra a0 -o0o -o)(t(6o. La 6,0o5(+a+ 5o1 H*, 0o Fa5, +,-,1+, +, )*
ta2aPo : for2a. -or 0o H*, frag2,1to) 2J) -,H*,Po) ,2(gra1 2J) rJ-(+a2,1t,.
F*,1t,: A+a-ta+o +, BroB1. #1KK8&.
El PCR es un anlisis in vitro para la sntesis sistemtica de secuencias
especficas de ADN (Figura 13). El PCR permite la replicacin y una consecuente
acumulacin exponencial de un fragmento especfico de ADN. Finalmente, se
utiliza electroforesis para comparar el tamao del fragmento de ADN estudiado,
versus el control (generalmente cultivar original sin haber incorporado transgenes
76
o material vegetativo que ya contiene los nuevos genes) para determinar que se
ha aadido un nuevo gen (o genes) y ha aumentado el tamao de la cadena de
genes (Brown, 1990).
FIGURA 5.38. ANRLISIS PCR DE PLANTAS DE BANANO TRANSG'NICO.
La) 01,a) 1 a C 5orr,)-o1+,1 a 0a) -0a1ta) ,1 a1J0()(). 0a 01,a @ a *1 2ar5a+or H*, (1+(5a ,0 ta2aPo +, ADN : 0a
01,a E ,0 5o1tro0 -o)(t(6o +, *1 -0J)2(+o H*, -o),, ,0 g,1 +, (1t,r9). S, 5o2-r*,=a 0a -r,),15(a +,0 g,1 ,1 0a)
-0a1ta) ,1 ,)t*+(o.
F*,1t,: Cort,)a Dr. La)I0o SJg(. #1KKK&.
El anlisis Southern es una tcnica que detecta la presencia de segmentos
especficos de cido desoxirribonuclico (F(g*ra 5.31). Este se obtiene a partir de
clulas, tejidos u organismos completos. Mediante el uso de electroforesis, se
compara el ADN aislado con un testigo y se determina la incorporacin del o los
transgenes en el genoma de la planta (Alberts et al, 1994).
El anlisis Northern es una tcnica que detecta la presencia de segmentos
de cido ribonuclico (ARN). Al igual que el ADN, el ARN es aislado y purificado
de clulas, tejidos u organismos completos. A continuacin, los segmentos son
separados segn su tamao mediante la electroforesis. Se compara con un control
positivo para asegurar la produccin del ARN (Alberts et al, 1994).
El anlisis Western, detecta la presencia de protenas especficas. Una vez
ms, las protenas son aisladas y purificadas para finalmente pasar por el proceso
de electroforesis. Se identifica la presencia de la protena de inters en el
organismo investigado al comparar el resultado del anlisis con el control que
expresa la produccin de la protena identificada (Alberts et al, 1994).
FIGURA 5.31. ANRLISIS SOUT%ERN DE ADN REALIMADO A SIETE LNEAS
TRANSFORMADAS DE BANANO. UN CONTROL POSITI$O / UN CONTROL
NEGATI$O PARA DETECTAR LA INCORPORACIN DEL GEN NPT II #1.K"B&.
77
La) 01,a) 1G@ 5orr,)-o1+,1 a -0a1ta) H*, Fa1 (15or-ora+o ,0 tra1)g,1, a0 5o2-arar), 5o1 ,0 5o1tro0 -o)(t(6o
#01,a K&. E0 5o1tro0 1,gat(6o +,2*,)tra 0a 1o -r,),15(a +,0 g,1, #01,a E&.
Fuente: May et al, (1995).
Hay que recordar que el ADN del ncleo, codifica el ARN que ser el
responsable de la sntesis de protenas en los ribosomas. Por tanto, los anlisis
indicados determinan la incorporacin del gen en el genoma (Southern), la
produccin de ARN (Northern) y la sntesis de la protena codificada por el ARN
(Western).
78
Conservacin de Germoplasma
Hasta la fecha, el mejoramiento gentico de los bananos ha estado
diseminado en diferentes pases y organizaciones sin ninguna relacin entre s, las
colecciones de germoplasma se han mantenido ms por inters de grupos
cientficos que de organizaciones gubernamentales.
Algunos pases como Jamaica (Banana Board), Honduras (United Fruit Co.),
Filipinas (Los Baos), Nueva Guinea (LAU), ndia (Coimbatire) y Taiwan tienen
importantes colecciones de germoplasma, con el propsito de usar clones para
mejorar sus cultivares(C*a+ro 5.E).
Por las razones antes apuntadas el nternational Board For Plant Genetic
Resources (.B.P.G.R.), organizacin internacional que pertenece al grupo
consultivo para nvestigaciones Agrcolas nternacionales (C.G.J.A.R.), compuesta
por 15 miembros de 13 pases y cuya secretara pertenece a la Organizacin para
la Agricultura y la Alimentacin (FAO) de las Naciones Unidas, constituy en 1978
un pequeo grupo de trabajo para que determine la accin a seguir con respecto a
la coleccin y conservacin del germoplasma de bananos y "Plantains
(.B.P.G.R., 1978).
79
ese pas con un duplicado en Amrica Latina. Tambin establecer colecciones de
germoplasma procedentes de diversas partes del mundo (Tart, 1979). La United
Fruit Co. tiene una coleccin en La Lima, Honduras, formada entre otras por 119
clones y variedades de Malasia, 119 de Filipinas, 113 de ndonesia, 4 de Vietnam
y 1 de Campuchea (Valmayor, 1979a y 1979b).
CUADRO 5.E.
MA/ORES COLECCIONES DE GERMOPLASMA DEL MUNDO.
Pa) Tota0 Co0,55(o1,) F,5Fa +, I1(5(o +,
0a Co0,55(;1
D*-0(5a5(;1 D()-o1(=0,
C*0t(6a+a) S(06,)tr,)
Honduras
(United Fruit Co.)
D@8 100 1959-61 NO S
Jamaica
(Banano Board)
80 40 1920 NO
No de
momento,
pero se han
hecho
pedidos
Filipinas
(Los Baos)
68 1 1958-59
Planificado
en Davao
SI
Papua, Nueva
Guinea (LAU)
700 - 1969-72 NO SI
ndia
(Coimbatore)
48 3 1949 NO SI
Fuente: .B.P.G.R. (1978).
Colecciones menores se encuentran en los siguientes pases: (.B.P.G.G.R.,
1978).
AFRICA
CAMERUN
Esta coleccin fue iniciada por Office National de la Recherche Scientifique
et Technique au Cameroon en 1995, en 2 estaciones, Nyombe y Ekoma.
nclusive 5 especies y 74 clones, de los cuales 49 son del subgrupo "Plantain.
G%ANA
University of Ghana, Agricultural Research Station, Kade. nclusive 17
cultivares de "Plantain.
COSTA DE MARFIL
Ministre de la Recherche Scientifique de la Rpublique de Cte d lvoir,
nstitut de Recherches sur les Fruits et Agrumes, Azagui. Se inici en 1950 y
80
comprende 9 especies de las cuales 5 son de la forma Musa acuminata y 89
clones de diferente origen.
MALI
nstitut Franais de Recherches Fruitires Outre- Mer BANAKO (pequea
coleccin de clones).
MONMAMBI!UE
Agricultural Research nstitute, Lorenzo Marques, Coleccin de 61 cultivares.
NIGERIA
University of Nigeria, Permanent Crops Farm, Nsukka; tienen 982 "Plantains
no clasificados todava.
nternational nstitute of Tropical Agriculture, Farming Systems Program,
badan.
Existe una coleccin de clones de Nigeria y Ghana que se inici en 1974 se
esperaba expander en un futuro prximo.
TANMANIA
Ministry of Tropical Agriculture, Maraku Experiment Station. Se tienen 300
clones con nombres locales, sin ningn sistema botnico de clasificacin. La
coleccin se inici en 1961e incluye material de Uganda.
UGANDA
Department of Agriculture, Kawanda Research Station, Kampala.
MAIRE
National nstitute for Agricultural Studes, Kinshasa. Coleccin de 294 clones.
AMERICA
BRASIL
So Paulo e Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaria, Cruz das Almas,
Estado de Baha, Brasil.
Existe un nmero no determinado de cultivares.
Trabajos recientes de conservacin y enriquecimiento de los bananos de
germoplasma, han sido reportados por Alves y Ferreira (1980 y 1982).
81
COLOMBIA
Centro Nacional de nvestigaciones Agropecuarias, Palmita. Coleccin de
Especies y variedades de Musa.
COSTA RICA
Centro Agrnomico Tropical de nvestigacin y Enseanza (CATE),
Turrialba. Se tiene una coleccin de clones y especies no clasificados.
Recientemente se han hecho introducciones de La Lima, Honduras.
El autor posee una coleccin clasificada de 36 cultivares de banano y
pltanos y 8 especies en Pococ, Limn. Se usa como material de investigacin
botnica y para la enseanza.
CUBA
nstituto de Ciencias Agrcolas, Miramar.
ECUADOR
Programa Nacional de banano y frutas, Guayaquil. Coleccin de varios
cultivares.
%A[AII
University of Hawaii, College of Troplical Agriculture, Honolulu. Existe una
coleccin de alrededor de 50 clones.
$ENEMUELA
Centro de investigaciones Agronmicas, Maracay, as como tambin
ntroduction Garden, nstitute of Genetics, Faculty of Agriculture, Central
University, Maracay, Venezuela. La coleccin es de 70 cultivares, la mayora
triploides AAA, AAB y ABB.
ASIA
INDONESIA
Los recursos genticos de los bananos de ndonesia han sido desestimados
en el pasado.
Los taxonomistas han estudiado en aos recientes no ms de 35 clones
localizados en pueblos y bosques. Los botnicos y los horticultores no han puesto
atencin a la cantidad de cultivares de banano y pltanos existentes
(Valmayor, 1979a).
82
MALASIA
La coleccin de variedades del Malaysian Agricultural Research and
Development nstitute (MARD), es el nico banco de germoplasma existente en la
regin (Valmayor, 1979b).
TAILANDIA
No existe una coleccin de importancia en Tailandia. Existe una coleccin de
26 clones en la Universidad de Kasetsart, en Bangkhen, Bangkok, que se usa con
fines de instruccin a estudiantes de horticultura (Valmayor, 1979b).
$()ta -ar5(a0 +,0 Jar+1 BotJ1(5o +, 0a Co2-aPa Agr5o0a Ga1a+,ra Car(ar(. S.A.
#Car(ar(. Po5o5. Co)ta R(5a&.
Ba15o +, G,r2o-0a)2a +, 0a L(2a. %o1+*ra)
83
FIGURA 5.33. %UELLAS DE ADN DE DIFERENTES CULTI$ARES DE Musa.
Fuente: Novak et al, (1991).
84
FIGURA 5.34. ELECTROFORESIS SDS
DE PROTENAS SOLUBLES E7TRADAS
DE DIFERENTES %OJAS DE ?GRAN NAINA.
Fuente: Novak et al, (1991).
IMPACTO AMBIENTAL POR EL USO DE CULTI$OS TRANSG'NICOS
El uso de nuevas lneas de cultivo, con caractersticas novedosas por la
incorporacin de transgenes, tiene un impacto en el ambiente donde se cultiva. El
impacto puede ser positivo y/o negativo. Aqu se sealan algunos de los posibles
efectos por el uso de estas variedades.
D()2(1*5(;1 +, I1)*2o) AgroH*2(5o)
Una de las principales fortalezas de los cultivos transgnicos es que una vez que
se ha introducido un gen (o genes) de resistencia a un cultivar de importancia
comercial ya no se requiere de insumos adicionales para el control de la
enfermedad, mientras no se rompa la resistencia proporcionada por el gen. Este
aspecto es de gran importancia, en especial para la agricultura en pases en vas
de desarrollo, donde los plaguicidas son mucho ms difciles de conseguir (Kenn
et al, 1998).
85
FGURA 5.24. ELECTROFORESS DE
PROTENAS SOLUBLES EXTRADAS DEL
PLEGUE DE LAS HOJAS DE 4
DFERENTES CULTVARES DE Musa.
DC- Dwarf Cavendish; HG- Highgate; GN-
Grand Nain; SH- 3362.
Es quizs el punto ms importante que tendra la produccin bananera con
variedades trasngnicas que mantengan resistencia a las principales plagas.
Adems de la disminucin en el impacto ambiental por la adopcin de cultivares
que disminuyan o eliminen por completo las aplicaciones de productos fungicidas
o fungiestticos para el control de Sigatoka por ejemplo, y se disminuiran los
costos de produccin. Segn Soto (1998)
1
, un 35% del costo de la produccin de
bananos en la regin atlntica de Costa Rica se dedica exclusivamente al control
de Sigatoka negra. Las aplicaciones de agroqumicos se hace por va area,
utilizando avionetas o helicpteros para asperjar vastas extensiones de
plantacin.
Tambin, e !o"#$an "iminui# e% uo "e !#o"u&to a'#o(u$mi&o
uti%i)a"o !a#a evita# "a*o !ot+&oe&,a &omo !o# e-em!%o, !u"#i&ione
&aua"a !o# ,on'o. .% !oten&ia% "e "ea##o%%a# va#ie"a"e (ue
inteti&en !#in&i!io bio/un'i&i"a+/un'iet0ti&o !e#miti#$a evita# %a
a!%i&a&i1n "e !#o"u&to (u$mi&o "e imi%a#e &a#a&te#$ti&a. .% no uo
"e eto !#o"u&to ten"#$an &one&uente bene/i&io ambienta%e !ue
no ,ab#$a %a ne&ei"a" "e t#ata# a'ua #ei"ua%e (ue &ontienen t#a)a
"e% !#o"u&to, ni tam!o&o %o &onumi"o#e eta#$an e2!ueto a
#ei"uo (ue !ue"en !e#mane&e# en %a &0&a#a "e %a /#uta.
M,<ora2(,1to +, 0a Sa0*+ O5*-a5(o1a0 : D()2(1*5(;1 +,0 I2-a5to A2=(,1ta0
De la disminucin en el uso de agroqumicos se procede a una disminucin del
impacto ambiental provocado por la aspersin de productos sintticos. Es bien
conocida la mala reputacin que tiene el banano como un cultivo de alta demanda
de insumos qumicos y de fuertes impactos ambientales por las grandes
extensiones de monocultivo y aspersiones de fungicidas y nematicidas,
especialmente. Esto tiene un efecto en la salud ocupacional, pues los
trabajadores de campo estaran menos expuestos al contacto con agroqumicos.
Aunque actualmente ningn trabajador puede permanecer dentro de la plantacin
durante las aspersiones areas para el control de Sigatoka, el hecho de disminuir
o eliminar las aplicaciones sera un beneficio para los trabajadores, quienes no
tendran ningn o menor contacto con el producto. Adems, las empresas no
tendran que sacar de la plantacin a los obreros de campo, por lo que no se
veran interrumpidas sus labores cotidianas.
La disminucin del impacto ambiental que tiene la produccin bananera sera de
gran importancia para mejorar la imagen de los consumidores hacia la fruta. Hay
que recordar que los mayores importadores de banano son los norteamericanos,
europeos y japoneses, quienes cada vez son ms exigentes con aspectos de
impacto ambiental y proteccin laboral.
5
SOTO, M. 1998. Control de Sigatoka negra en Costa Rica. EARTH. Gucimo, Costa Rica.
(Comunicacin Personal).
86
D,)arro00o +, R,)()t,15(a ,1 P0aga)
Ha aparecido una polmica sobre el uso de cultivos resistentes al ataque de
plagas, se dice que es posible que se desarrollen nuevas plagas ms poderosas
que rompan la resistencia del cultivo. Para citar el caso de cultivos *t (cultivos con
un gen de *acillus thuringiensis que confiere proteccin a plagas insectiles), en el
cual se utilizan refugios de plantas no modificadas genticamente dentro de la
plantacin de cultivos transgnicos para evitar la posibilidad de un rpido
desarrollo de plagas con resistencia a la toxina producida por el gen *t (Monsanto,
1996; Union of Concerned Scientists, 1996b; Hruska, 1997). El desarrollo de
plagas resistentes provocara la prdida de una importante herramienta utilizada
por los agricultores en general.
gual caso se podra presentar para el banano. Se deberan mantener zonas de la
plantacin con variedades tradicionales para evitar el desarrollo de resistencia en
las plagas. De esta manera se mantendra una resistencia a la plaga por ms
tiempo pues la presin de seleccin es mucho menor.
Referente al efecto que cultivos trasngnicos con resistencias a plagas
puedan tener en insectos benficos, Smith (2000) indica que estudios realizados
con polen de maz *t sugieren que el polen transgnico podra afectar a otros
insectos como en el caso de la mariposa Monarca. Prakash (2001) resalta que el
efecto negativo causado por el polen de maz *t en la mariposa monarca se da
nicamente en condiciones de laboratorio cuando las larvas son alimentadas con
dosis 100 ms concentradas que a lo que el insecto estara expuesto bajo
condiciones de campo. La polmica an se mantiene sobre el potencial efecto
que plantas transgnicas con resistencia a plagas podra tener en su entorno.
I1t,r5a2=(o G,19t(5o 5o1 P0a1ta) S(06,)tr,)
Segn Smith (2000), solamente bajo condiciones muy peculiares se podra dar un
caso de intercambio gentico con plantas silvestres bajo condiciones de campo.
Hay muchas condiciones como la viabilidad del polen, supervivencia de semillas y
germinacin que deben coincidir para que genes sean transferidos de una
especia a otra. El reporte "Semillas de Oportunidad al Comit Cientfico del
Congreso de los EE.UU. indica que el riesgo de intercambio gentico de plantas
transgnicas es muy bajo y el mismo que para cualquier cultivar desarrollado
mediante cruzamiento convencional.
Debido a la no viabilidad del polen de variedades comerciales de banano, el
riesgo de intercambio gentico con plantas silvestres es mnimo. El riesgo para el
banano sera nicamente si en algn momento se desea cambiar el uso del suelo
y el banano se convirtiera en una maleza, pero an en este aspecto el cultivo
transgnico con tolerancia al ataque de Sigatoka no tendra diferencia alguna con
el material vegetativo convencional.
87
El riesgo de cruzamiento gentico y que el cultivo se convierta en maleza es ms
crtico para cultivos con tolerancia a herbicidas y que poseen polen viable. Grain
(1997) seala que en Australia se han documentado casos de desarrollo de
resistencia al herbicida Roundup en pastos como el ryegrass por el intercambio
gentico a travs del polen de maz transgnico.
An esta problemtica se podra eliminar mediante la transformacin gentica de
plstidos, en vez de modificar el ncleo. Mliga (1993) ha desarrollado protocolos
efectivos para la transformacin de plstidos de la clula vegetal. Esta tiene la
ventaja de que los plstidos no se transmiten por el polen a otras plantas
evitndose el fenmeno de "outcrossing y el nivel de presencia de la sustancia de
inters producida por los genes es ms alto dado el mayor nmero de copias de
plstidos en la clula vegetal. Ya se han reportado transformaciones genticas en
plstidos de tabaco y &rabidopsis.
PERSPECTI$AS DE MERCADO PARA LA COMERCIALIMACION DE $ARIEDADES DE
BANANO TRANSGENICO
Para determinar las perspectivas de la produccin de variedades
transgnicas de banano es importante fragmentar el mercado en dos grandes
sectores: los consumidores y los productores. Dentro de los consumidores se
puede hacer una distincin entre los consumidores de fruta importada (pases
desarrollados) y los consumidores locales (pases en vas de desarrollo).
Co1)*2(+or,)
Consumidores de Fruta mportada
En el caso del cultivo de banano, los principales mercados meta de la fruta
son Norteamrica, Europa y Japn, que segn la Unin de Pases Exportadores de
Banano (UPEB) en el ao 1990, importaron 53,843 cajas de 18,14 kg para un total
de 976,712 toneladas de fruta (Morales, 1992).
Actualmente existe una gran polmica en estos mercados sobre el uso de
variedades transgnicas. Grain (1997), Union of Concerned Scientists (1996a) y
Walsh (1998), por citar unos ejemplos, han sealado la no-aceptacin por parte de
la poblacin europea a consumir soya transgnica. Los consumidores exigen que
los productos de cultivos transgnicos sean sealados en su envase y no permiten
que se mezclen los granos del cultivo convencional con el transgnico. nclusive,
las filiales alemanas de Nestl y Unilever cancelaron sus pedidos de soya a
Estados Unidos a principios de 1998 para satisfacer las demandas de sus
consumidores (Grain, 1997).
De esta manera, el mercado europeo, a diferencia del norteamericano, no
acepta consumir productos transgnicos. Por ejemplo, en Estados Unidos,
aproximadamente el 32% del maz y un 38% de la soya proviene de cosechas de
88
plantas transgnicas. En Canad, posiblemente un 58% del aceite de canola, es
producto de cultivos modificados genticamente.
Se puede hacer entonces una fragmentacin del tipo de consumidores de los
productos transgnicos. Los principales mercados importadores de banano,
Estados Unidos y la Comunidad Europea, se diferencian entre s. El
norteamericano, no representara un problema serio en el consumo de bananos
modificados genticamente pues se encuentra muy expuesto a esta tecnologa, y
sera una opcin importante para disminuir el impacto ambiental en los lugares de
produccin. El consumidor europeo, se ha mostrado contrario a consumir
productos transgnicos y exige que estos posean una etiqueta de identificacin, lo
que sera una limitante fundamental para productos de exportacin. Por tanto,
hasta se podran diferenciar las plantaciones de variedades transgnicas y no
transgnicas, segn el mercado de destino de la fruta.
Consumidores Locales
Segn un estudio realizado por Aguilar (1998), en San Jos de Costa Rica, un
65% de consumidores encuestados desconoce de la existencia o investigaciones
que realiza la ingeniera gentica para el desarrollo de cultivos transgnicos. Cabe
resaltar, que el otro 35% que ha escuchado alguna informacin sobre cultivos
transgnicos por medio de la televisin, a travs de reportajes como los
presentados sobre la clonacin de animales y no directamente sobre ingeniera
gentica aplicada en cultivos.
De los encuestados que dijeron conocer sobre cultivos transgnicos, el 66% ha
escuchado opiniones muy en contra de la aplicacin de ingeniera gentica
(F(g*ra 5.35). Este 66% de los encuestados que conocen sobre cultivos
transgnicos corresponde al 35% del total de la poblacin. Como se seal
anteriormente, muchas de estas opiniones provienen del caso recientemente
reportado sobre la clonacin de animales. El juicio negativo sobre la aplicacin de
ingeniera gentica se basa principalmente en razones de tipo tico que
consideran no correspondiente al ser humano alterar las leyes bsicas de la vida.
Muy en
contra
66%
Favorable
13%
Muy
Favorable
4%
Ni favor ni
en contra
14%
En contra
3%
89
FIGURA 5.35. PERCEPCIN DE LOS CONSUMIDORES !UE CONOCEN DE CULTI$OS
TRANSG'NICOS SOBRE SU APLICACIN.
Fuente: Aguilar, (1998).
Aunque la mayora de los encuestados dijeron haber escuchado opiniones
contrarias a la aplicacin de ingeniera gentica, un nmero similar de
encuestados (65%) se mostr dispuesto a consumir productos de cultivos
transgnicos. Luego, un 31% de los encuestados no mostraron una actitud ni
positiva ni negativa sobre su decisin de consumir o no productos de cultivos
transgnicos. Finalmente, un 4% se mostr completamente contrario a consumir
este tipo de productos (F(g*ra 5.3C).
S
65%
Tal vez
31%
NO
4%
FIGURA 5.3C. DISPOSICIN DE LOS ENCUESTADOS A CONSUMIR PRODUCTOS DE
CULTI$OS TRANSG'NICOS.
Fuente: Aguilar, (1998).
A pesar de una aparente oposicin a la aplicacin de cultivos modificados
genticamente, estos estn dispuestos a consumirlos si el uso de estas
variedades transgnicas ayudan a disminuir la aplicacin de agroqumicos, que
trae como consecuencia una produccin ms limpia, que no afecte a la salud de
los trabajadores ni consumidores. Por tanto, el consumo local de banano
transgnico no presentara una barrera para la implementacin de nuevas
variedades.
Pro+*5tor,)
Aguilar (1998), seala que el aspecto ms importante a resaltar en un estudio
realizado con gerentes de fincas bananeras asociadas a la Corporacin
Bananera Nacional (CORBANA, Costa Rica), es que todos dicen conocer sobre la
existencia de cultivos transgnicos.
Del total de los gerentes de finca, el 60% considera como favorable la aplicacin
de cultivos transgnicos en la agricultura. Un 20% considera que es muy
favorable, un 15% no se muestra una actitud contraria ni favorable y un restante
5% se muestra en contra de su uso en la agricultura.
90
Sin embargo, el 58% de los encuestados estn muy de acuerdo con la premisa de
que el uso de variedades mejoradas por ingeniera gentica puede reducir el
impacto por la aplicacin de plaguicidas, gracias a la induccin de resistencia a
plagas.
Ningn gerente de finca se muestra contrario a usar nuevas variedades de
banano modificadas genticamente que posean resistencia al ataque del hongo
Mycosphaerella fijiensis ( por ejemplo) y ayuden a disminuir las aspersiones para
su control. Esto se da a pesar de que un 5% de los gerentes que se mostraban
contrarios al uso de variedades transgnicas en la agricultura y otro 15% no se
mostr ni a favor ni en contra. Queda en evidencia que a pesar del criterio
personal que puedan tener los gerentes de finca sobre el uso de material
modificado genticamente, las necesidades de los productores por disminuir el
efecto de ataque del hongo que es el principal limitante de la produccin
bananera, los impulsara a usar nuevas variedades transgnicas.
En cuanto a la cantidad de dinero que los gerentes se encontraran dispuestos a
pagar ms por hectrea para obtener semilla transgnica, las tendencias se
muestran en la F(g*ra 5.3@. Es importante sealar que manteniendo una
densidad de 1.850 plantas por hectrea y pagando 60 centavos de dlar por
semilla proveniente de cultivos in vitro, el costo por hectrea es de 1.110 dlares,
y el costo de control de Sigatoka negra llega hasta 1.400 dlares por hectrea por
ao (Soto, 1998
2
). Estos valores ponen ms en evidencia la importancia que tiene
el control de la Sigatoka negra, que se vera compensado por la introduccin de
una variedad resistente. Hay una gran disposicin a pagar un monto mayor para
obtener nuevas variedades resistentes que disminuyan las aplicaciones para el
control del hongo.
> $ 3000
16%
$ 2001-
3000
26%
$1001-
2000
37%
$ 500-
1000
16%
< $ 500
5%
FIGURA 5.3@. DISPOSICIN DE LOS PRODUCTORES A PAGAR MRS POR %ECTRREA POR
LA SEMILLA TRANSG'NICA. \]8
Fuente: Aguilar, (1998).
2
SOTO, M. 1998. Control de Sigatoka negra en Costa Rica. Gucimo, Costa Rica, EARTH.
(Comunicacin Personal).
91
Sin embargo, aunque la mayor parte de gerentes de las fincas estn dispuestos a
utilizar una variedad transgnica no desean cambiar completamente su plantacin
por el nuevo material. La F(g*ra 5.3E muestra que el 37% de los encuestados
sembraran un 10% de su finca con la nueva semilla. Un 26% sembrara la mitad
de su finca con el nuevo material vegetativo y un 21% cambiara la totalidad de su
finca por las nuevas semillas. Un 11% cambiara el 30% de la totalidad de la finca
con semilla transgnica. Los valores son elevados, pues un 47% de los
encuestados sembrara ms de la mitad de la extensin de la finca con el material
nuevo. Estas impresiones reafirman la importancia que tiene la Sigatoka negra en
el cultivo de banano y la alta demanda por variedades que toleren el ataque del
patgeno.
100 %
rea
21%
No
respondi
5%
10 % rea
37%
30 % rea
11%
50 % rea
26%
FIGURA 5.3E. PORCENTAJE DE LA FINCA !UE EL GERENTE ESTARA DISPUESTO A
SEMBRAR CON SEMILLA TRANSG'NICA.
Fuente: Aguilar, (1998).
Por tanto, se puede determinar que los productores de banano estn
dispuestos a adoptar variedades trasngnicas que ayuden a aliviar su
problemtica ms importante que es el control de Sigatoka negra. Aunque un
porcentaje de los encuestados no se muestra muy de acuerdo a la aplicacin de
ingeniera gentica en la agricultura, las necesidades surgidas de la problemtica
productiva los inducen a utilizar nuevos materiales vegetativos, pero que sean
aceptados en el mercado.
POL'MICA POR EL USO DE CULTI$OS TRANSG'NICOS
En el mercado actual existe cierta polmica por el uso de cultivos transgnicos. A
pesar de los beneficios ofrecidos por las compaas biotecnolgicas sobre los
beneficios de nuevos cultivares transgnicos, su diseminacin no ha sido tan
rpida como fue durante sus primeros aos de adopcin. James (2000) resalta
que la tasa de adopcin de cultivos transgnicos ha disminuido en los ltimos
aos, especialmente en pases desarrollados. Uno de los principales argumentos
en contra de la diseminacin de cultivares transgnicos es la especificidad de
estas variedad a utilizar productos ofrecidos por las mismas compaas
productoras de semillas, lo que concentra el poder en pocas manos a nivel
mundial (Sagar et al!, 2000).
92
En el caso de sistemas de produccin orgnicos, la revista internacional
Ecology and Farming de la Federacin nternacional de Movimientos en
Agricultura Orgnica (nternational Federation of Organic Agriculture Movements,
1998b), seala que los organismos modificados mediante ingeniera gentica no
se pueden utilizar por parte de los productores orgnicos certificados. Considera
que el uso de cultivos transgnicos es contrario a los principios y prctica de la
agricultura orgnica. Adems exigen que los productos de cultivos transgnicos
sean identificados como tales en sus etiquetas.
Adems, se han reportado casos de impactos negativos al ambiente como
el caso del efecto de la plantacin de cultivos con resistencia a plagas. Segn
Novedades Editores (1999), investigadores de la Universidad de Cornell han
determinado que el polen producido por la variedad de maz transgnico que
contiene un gen de *acillus thuringiensis mata a las mariposas Monarca que
naturalmente se encuentran en los maizales. Es ms impactante an este efecto,
porque el polen del maz puede ser llevado a cientos de kilmetros de distancia,
extendindose el efecto en la fauna de otros ecosistemas. La polmica sobre el
potencial efecto de polen transgnico con gen *t se mantiene y no se ha aclarado
an, tal como fue discutido en la seccin sobre impacto ambiental.
nclusive, se han dado disturbios en contra de los centros de acopio de
semila transgnica, como en el caso ocurrido en Francia en contra de la compaa
biotecnolgica Novartis. Aproximadamente 120 ciudadanos franceses
arremetieron contra la bodega de almacenamiento de semilla de maz transgnico
(nternational Federation of Organic Agriculture Movements, 1998a). Otro ejemplo,
es la accin tomada por Nestl, que cancel sus pedidos de soya a Estados
Unidos, para respetar la opinin de sus consumidores de no aceptar granos de
soya que se desconoce si son o no transgnicos.
Esta polmica toma an mayor importancia, cuando el Departamento de
Agricultura de los Estados Unidos, "liber en diciembre de 1998 la
comercializacin de la papa modificada genticamente por la compaa Monsanto
(la variedad transgnica es resistente al ataque de insectos y virus). Es decir,
puede ser cultivada y comercializada como cualquier otra variedad de papa sin
restricciones especiales por ser una lnea manipulada genticamente. Despus de
estudios realizados en esta variedad se determin que no tiene un impacto
ambiental, no afecta a los consumidores y su comportamiento agronmico es
igual a variedades tradicionales, a pesar de ser una papa transgnica. Por estas
razones, ni la papa portadora de transgenes o sus subproductos deben portar un
sello que lo identifiquen como un producto modificado genticamente. Este tipo de
resoluciones pueden tener efectos negativos en la percepcin de los
consumidores (USDA, 1998).
La polmica en el consumo de productos transgnicos no se limita nicamente a
su comercio, sino que tambin se expande a programas de ayuda alimenticia
como ha sido en el caso de Ecuador. El diario La Hora (2001) seala que el
programa de alimentacin infantil denominado "Mi papilla apoyado por el
Programa Mundial de Alimentos y el gobierno ecuatoriano, fue suspendido por
93
encontrarse soya transgnica como componente de los alimentos donados. El
argumento presentado por la ONG Accin Ecolgica que motiv al gobierno a
suspender el programa fue el desconocimiento del efecto que pueda tener el
consumo de alimentos transgnicos por parte de madres y nios que participan
del programa. Como consecuencia de esta polmica, 670.000 nios que se
formaban parte del programa dejaron de recibir sus raciones alimenticias (Diario
La Hora, 2001).
Segn Altieri (1999) de la Universidad de California en Berkeley, la aplicacin de
cultivos modificados genticamente no llegar a alcanzar los beneficios que
resaltan las compaas de biotecnologa. As, seala varias razones principales
por las que el uso de cultivos transgnicos no ayudar a solucionar los problemas
de alimentacin, pobreza y a proteger los ecosistemas de pases en vas de
desarrollo.
Altieri (1999) seala que el problema actual de seguridad alimenticia no est
relacionado a una baja produccin, sino a una distribucin no equitativa de
alimentos entres los pases ricos del norte y los del sur, donde la poblacin no
cuenta con suficientes recursos econmicos para satisfacer sus necesidades
alimenticias. Por tanto, los mayores volmenes de produccin prometidos por la
adopcin de transgnicos no asegura un mejoramiento en las condiciones
alimenticias en pases pobres. Por su parte Prakash (2001) resalta que los
cultivos transgnicos pueden ayudar a aliviar los problemas de falta de alimentos,
pero que no podrn resolver estos problemas por s solos sin la correspondiente
voluntad poltica y econmica, entre otros factores.
Altieri (1999) resalta que los productos desarrollados por la ingeniera gentica
han sido manejados con la intencin de ofrecer ms ganancias a las
multinacionales. Este autor indica que las compaas de biotecnologa buscan
vender productos qumicos junto a la semilla que ellas mismas producen, dando a
los productores un paquete tecnolgico al que deben aferrarse y del que se
benefician por las actuales leyes de propiedad intelectual. El comercio de
productos transgnicos no beneficia ni a los productores ni a los consumidores.
La integracin de compaas de semillas con la venta de agroqumicos
significara, segn Altieri (1999) en un menor margen de ganancias para los
productores .
Por su parte James (2001) reporta un valor total de los beneficios de producir
cultivos transgnicos a nivel mundial que alcanza los 710 millones de dlares.
Este valor corresponde a los beneficios de sembrar soya y canola resistentes a
herbicidas y algodn y maz *t. En cuando a la distribucin de beneficios por uso
de transgnicos frente a cultivares convencionales en Mxico de un 60 a un 90%
de este beneficio se queda en manos de agricultores, este porcentaje se estima
en un 83% para China (James, 2001).
Como se puede observar en esta seccin, el debate sobre los beneficios o
perjuicios de la adopcin de cultivos transgnicos es acalorado y no existe
94
consenso. Sin duda, son los consumidores finales quienes tomarn la decisin
final de aceptar o no los cultivos transgnicos. Como se ha descrito en este
artculo, los organismos modificados genticamente tienen un impacto en el
ecosistema positivo y/o negativo. Lo ms importante es que el pblico en general
sea educado sobre la aplicacin de ingeniera gentica en cultivos, sus ventajas y
desventajas para luego decidir sobre su consumo.
95
K. CONCLUSIONES
La ingeniera gentica indudablemente es una herramienta que desde ya
mantiene una gran importancia en el mejoramiento gentico de banano. En los
ltimos aos se ha producido un avance muy importante en la bsqueda de genes
en plantas silvestres que puedan otorgar resistencia a las principales
enfermedades que afectan al cultivo de banano. Las tcnicas con mayor xito son
el bombardeo de micropartculas e infeccin con &grobacterium a cultivos de
clulas en suspensin. Otras tcnicas, como transformacin gentica a travs de
electroporacin no han tenido resultados satisfactorios.
Los proyectos ms avanzados son los de tolerancia a enfermedades
causadas por hongos y virus, por ser las de mayor impacto en el cultivo. Sin
embargo, tambin se deberan investigar y desarrollar lneas con resistencia al
ataque de nemtodos, condiciones de estrs, calidad nutricional y maduracin de
la fruta, etc. La aplicacin de ingeniera gentica en el mejoramiento de banano
constituye un campo infinito para su aplicacin.
Se han desarrollado un gran nmero de plantas con potencial de resistencia
a Sigatoka negra y BBTV. Estas plantas ya se encuentran en pruebas de campo.
As, se abre una nueva esperanza para la obtencin de cultivares que ayuden a
disminuir el uso de agroqumicos para el control de estas enfermedades.
El desarrollo y uso de nuevas variedades con tolerancia a enfermedades
tendrn un importante efecto positivo en los sistemas de cultivo, tanto para los
trabajadores como para el ambiente, por la disminucin de insumos para el control
de enfermedades. Tambin hay que analizar los posibles impactos negativos que
puede tener la introduccin de variedades transgnicas de banano en el
ecosistema, antes de una adopcin masiva.
El aspecto ms importante en el mercado bananero es el respeto de la
opinin de los consumidores y productores de aceptar o no el uso y consumo de
cultivos transgnicos. El mercado europeo es el ms reacio para aceptar
productos modificados genticamente, mientras el mercado americano es mucho
ms receptivo, pues est ms expuesto a la biotecnologa. Estos aspectos sern
muy importantes en el momento en que se lleguen a comercializar variedades
transgnicas de banano, haciendo inclusive una segmentacin del mercado de la
fruta segn su destino final.
A nivel del mercado local, se aceptara el uso de variedades transgnicas,
siempre y cuando ayuden a disminuir el uso de agroqumicos. Los productores de
fruta por su lado, necesitan de cultivares resistentes a las principales
enfermedades que afectan al cultivo y adoptaran las variedades transgnicas en
sus fincas si ayudan a disminuir costos asociados al control de estas
enfermedades. Por tanto, la adopcin y produccin y cultivares de banano
transgnico dependera de la aceptacin de los consumidores finales.
96
El crecimiento en el uso de cultivos transgnicos, el avance y
perfeccionamiento de las tcnicas de ingeniera gentica, la incertidumbre por
parte de muchos consumidores y el hecho que an no se ha podido medir en un
largo plazo el impacto ambiental por la adopcin masiva de nuevas variedades
transgnicas abren un gran espacio para la polmica. Este aspecto es tan
importante como la aplicacin de tecnologa y se le debe prestar la atencin
necesaria.
97
10. AGRADECMENTOS
El autor agradece al profesor Moiss Soto, editor de este libro, por la
oportunidad de presentar los avances alcanzados por la aplicacin de ingeniera
gentica en el mejoramiento del cultivo de banano. gualmente se agradece
invaluable colaboracin brindada por los doctores Maud Hinchee y Carlos Becco
(Monsanto Life Sciences), Narender Nehra (nternational Paper), Bert Kohlmann
(Universidad EARTH), Bonnie Furman (University of West Kentucky), James Dale
y Douglas Becker (Queensland University of Technology), Gregory May (Noble
Foundation), Florence Malafosse (nternational Network for the mprovement of
Banana and Plantain), Pamela George (The World Bank), Laszlo Sgi e ris
Engelborghs (University of Leuven) y el Profesor W. Paul Davies (Royal
Agricultural College). Sin su apoyo no hubiese sido posible presentar esta seccin
a los lectores.
LITERATURA CITADA
AGULAR, F. X. 1998. Perspectivas para la produccin de cultivos transgnicos en
el mercado agrcola de Costa Rica: El caso de la produccin bananera.
Trabajo de Graduacin. EARTH. Gucimo, Costa Rica. 106 p.
ALBERTS, B; BRAY, D; LEWS, J; RAFF, M; ROBERTS, K; WATSON, J. D. 1994.
Molecular Biology of the Cell. 3
era
ed. New York, Garland Publishing, nc.
1294 p.
ALVES, E. J; FERRERA, F. R. 1980. Banco activo de germoplasma de banana.
Simposio de recursos genticos vegetales. 21-25 de mayo 1979. Brasilia,
Brasil. CENARGEM/EMBRAPA. p 62-65.
ALVES, E. J; FERRERA, F. R. 1982. Conservacao e enriquecimiento colecao
activa de germoplasma de banana. n: Relatoria del Centro nacional de
Pesquisa en Mandioca e Fruticultura. p 61-62.
ANDOW, D. A; HUTCHSON, W. D. 1998. BT-Corn Resistance Management. I1
Now or Never. Serious Plans to Save a Natural Pest Control. Editado por
Margaret Mellon y Jane Rissler. Cambridge, USA, Union of Concerned
Scientists. p. 19-67.
ANGARTA, A; CASTRO, D. 1984. Nuevas perspectivas para el control de la
Sigatoka Nega. Augura (Colombia) 10(2):13-18.
98
BECKER, D; DUDGALE, B; SMTH, M; HARDNG, R. 1999. Genetic
trasnformation of Cavendish banana (Musa spp. AAA) group c.v. Grand
Nain via microprojectile bombardment. I1 The nternational Symposium on
the Molecular & Cellular Biology of Banana. (1999, New York, EE.UU.).
Editado por Gregory May. New York, EE.UU., Boyce Thompson nstitute for
Plant Research nc. p. 31.
BECKMAN, C. H; HALMOS, S. 1962. Relation of vascular occluding in banana
roots to pathogeneticity of root invading fungi. Phytopathology 52(9):893-
897.
BERG, L. A; BUSTAMANTE, M. 1974. Heat treatement and meristem culture for
the production of virus-free bananas. Phytopathology 64:320-322.
BORGES, O. L. 1971a. Estudio de la fertilidad femenina en clones de pltano y
cambures cultivados. Agronoma Tropical 21 (2): 135-137.
BRETKREUTZ, G. 1997. Queensland researchers genetically engineer bananas.
<http://www.netlink.de/de/gen/Zeitung/970227b.htm> Brisbane, The
Australian Asssociated Press. [Consulta: febrero, 1999].
BROWN, T. 1990. Gene cloning. An introduction. 2da edicin. Londres,
Chapman & Hall. 286 p.
BUDDENHAGEN, . 1992. Whence and Whither Banana Research and
Development I1 Biotechnology Applications for Banana and Plantain
mprovement. nternational Network for the mprovement of Banana and
Plantain (NBAP). San Jos, Costa Rica. p. 12-29.
BURROWS, P; DE WAELE, D. 1996. Engineering resistance against plant
parasitic nematode using anti-nematode genes. ACR.Rothamsted,
Laboratory of Tropical Crop mprovement. Belgium. 16 p.
CARDEOSA, R. 1953. El gnero Musa en Colombia. Pltanos, Bananos y afines.
Notas Agronmicas (Colombia) 6: 132-134.
CARLER, J; EL HADRAM, A; HAYDEN, H; ZAPATER, M; LAPEYRE, F. 1999.
Populations study of Mycosphaerella fijiensis and genetic improvement of
bananas for resistance to black leaf streak disease. I1 The nternational
Symposium on the Molecular & Cellular Biology of Banana. (1999, New
York, EE.UU.). Editado por Gregory May. New York, EEUU, Boyce
Thompson nstitute for Plant Research nc. p. 40.
CASTAEDA, D; DAS, T; ARANGO, F. 1999. -n vitro activity of tobacco class 1
chitinase and 1-3 glucanase against M! fijiensis and their interaction with
the chemical fungicides. I1 The nternational Symposium on the Molecular &
Cellular Biology of Banana. (1999, New York, EEUU). Editado por Gregory
99
May. New York, EEUU, Boyce Thompson nstitute for Plant Research nc.
p. 32.
CNPMF- EMBRAPA. 1997. Citogenetica y melhoramento gentico. I1 A cultura da
banana, Aspectos tcnicos, socioeconmicos e agroindustriales. p 128. 585
p.
CTE, F. X; ALVARD, D; DOMERGUE, R; NAVARRO, L; YETESSON, C. 1991.
Micropropagation in vitro du bananier. Fruits, Nmero especial 112-118.
CTE, F. X; FOLLOT, M; DOMERGUE, R; DUBOS, C. 1999. Field performance
of embryogenic cell suspension derived banana plants (Musa AAA, c.v.
Grand Nain). I1 The nternational Symposium on the Molecular & Cellular
Biology of Banana. (1999, New York, EE.UU.). Editado por Gregory May.
New York, EEUU, Boyce Thompson nstitute for Plant Research nc. p. 30.
CRONAUER, S. S; KRKORAN, A. D. 1984. Multiplication of Musa from excised
stem tips. Annals of botany. 53:321-328.
CRONAUER, S. S; KRKORAN, A. D. 1985. Reinitation of vegetative growth from
aseptically cultured terminal floral apex of banana. American Journal of
Botanic 72:1598-1601.
CRONAUER, S. S; KRKORAN, A. D. 1987. Adventious shoot production from
calloid cultures of banana. Plant Cell Reports 6:443-445.
CHAMPON, J. 1968. El pltano. Editorial Blume. Barcelona, Espaa.
CHEESMAN, E. E. 1931. Banana breeding at the mperial College of Tropical
Agriculture. Emp. Mktg. Bul. Rep. 47. 35 p.
CHEESMAN, E. E; DOODS, K. S. 1942. Genetical and cytological studies of Musa.
V Certain triploid clones. J. Of Genetic 43:337-357.
CHLTON, M. 198?. A vector for introducing new genes into plants. Scientific
American. s.p.
DAVEY, M. R; RECH, E.L; MULLGAN, B. J. 1989. Direct DNA transfer to plant
cells. Bio/Technology (EEUU) 13: 273-285.
DE LANGHE, E. 1961. De banana is meer daneen fruitgewas, Land, en
Tuinbunwkuding Jaarboek. Setiembre 1961.
DEMARLY, Y. 1986. Experimental and theorical approach of in vitro variations. n:
Somaclonal variation and crop improvement. Proceedings of a Seminar in
the CEC Programme of Coordination of Research on Plant Protein
mprovement., held in Gemloux, Belgium from 3-5 Septiembre, 1985. Semal
(ed.). Martinus Nijhoff Publishers, Hinghan, U.S.A. p 84-99.
100
DODDS, K. S. 1943. The genetic system of bananas varieties in relation to banana
breeding. Emp. J. Exp. Agric. 11, 89-98.
DODDS, K. S; SMMONDS, N. W. 1948. Sterility and parthenocarpy in diploid
hibrids of Musa. Heredity 2, 101-107.
DODDS, K. S. 1958. Problems and techniques in breeding new varieties of
bananas. ndian Journal Horticulture. 15:210-214.
DOMERGUE, R. 1990. Contribution a lameliorement de la micropropagation du
bananier plantain. DEA. Universit des Sciences et Techniques du
languedoc, Academie de Montpellier, U.S.T.L. 70 p.
DORE, R; SRNVASA, N. K; CHCKO, E. K. 1982. Trissue culture propagation of
banana. Scientia Horticulturae, 18:247-252.
EFE. 1999. Alimentos con cambios genticos. El Universo, Guayaquil (Ecuador);
Junio. 18: 10.
ESCALANT, J; TESSON, V. 1987. Comportements in vitro de lembryon isol du
bananier (Musa sp). Fruits 42(6)333-342.
ESCALANT, J; TESSON, V. 1992. Somatic Embryogenesis and Cell Suspensions
I1 Musa. Biotechnology Applications for Banana and Plantain mprovement.
San Jos, Costa Rica, nternational Network for the mprovement of Banana
and Plantain. p. 177-180.
EVANS, D. A; BRAVO, J. E. 1986. Phenotypic stability of tissue cultured plants. n:
Tissue cultured as a plant production system for horticulture crops. R. H.
Zimmerman. Ed. Martinus Nijott Publ. Dordrech. The Netherland. p 73-94.
FAO. 1993. Production Year book 1992. Roma. 265 p.
FAO. 1995. Production Year Book 1994. Vol. 48. Roma.
FHA (FUNDACON HONDUREA DE NVESTGACON AGRCOLA). 1993.
Programa de banano y pltano. La Lima, Honduras. nforme Tcnico 1992.
54 p.
FHA (FUNDACON HONDUREA DE NVESTGACON AGRCOLA). 1994.
Programa de banano y pltano. La Lima, Honduras. nforme Tcnico 1993.
24 p.
FHA (FUNDACON HONDUREA DE NVESTGACON AGRCOLA). 1999.
Pltano resistente a la sigatoka negra. <http://www.fhia.hn/FHA_21.htm>.
[Consulta: abril, 1999].
FLARROQUN et al. 1992. En prensa.
101
FURMAN, B. J. 1998. Desarrollando una planta modificada genticamente usando
ingeniera gentica. EARTH. Gucimo, Costa Rica. (Documento interno).
GANAPATH, T. R; HGGS, N; VEN ECK, J; BALNT-KURT, P. J; MAY, G. 1999.
Transformation and regeneration of the banana cultivar Rasthali (AAB). I1
The nternational Symposium on the Molecular & Cellular Biology of
Banana. (1999, New York, EE.UU.). Editado por Gregory May. New York,
EE.UU., Boyce Thompson nstitute for Plant Research nc. p. 34.
GEORGE, P. 1999. Banana improvement project activities. World Bank,
Washington. <[email protected]> (Correspondencia personal). 6 p.
GRAN. 1997. La soja transgnica de Monsanto en el tapete. Biodiversidad
(Uruguay) 12(13): 3-8.
GRANADA, C. 1988. Manejo de plantas en el invernadero. n: Fundamentos
terico-prcticos del cultivo de tejidos vegetales. V. Villalobos (ed.).
Laboratorio de Biotecnologa, Colegio de Posgrados, Chapingo, Mxico.
Centro Agronmico de nvestigacin y Enseanza (CATE). Turrialba, Costa
Rica. p 151-158.
HALLAM, D. 1995. The world banana economy. I1 Bananas and Plantains.
Editado por S. Gowen. Chapman & Hall, London, UK. p. 509-533.
HORSCH, R. 1997. Biotechnology and sustainable development. Presentacin al
Consejo Directivo de EARTH, Gucimo, C.R.
HRUSKA, A. 1997. Cultivos transgnicos en la agricultura mesoamericana. I1
Plantas transgnicas *acillus thuringiensis en la agricultura
mesoamericana. Editado por Allan Hruska y Milton Lara. Zamorano;
Tegucigalpa, Honduras, Escuela Agrcola Panamericana. p. 1-6.
HWANG, S. C; KO, W. H. 1986. Somaclonal variation of bananas and screening
for resistance to Fusarium Wilt. n: Bananas and plantain breeding
startegies; Proceedings of an nternational Workshop help at Cairns,
Australia, 13-17. October 1986. ACAR Proceedings 21:151-156.
BPGR ( nternational Board for Plant Genetic Resources). 1978. Working Group
on the genetic resources of bananas and plantains. Roma, talia. Julio 1977.
p 25-78.
NBAP (nternational Network for the mprovement of Banana and Plantain). 1993.
Medium term Plan 1994/1998. Francia.
SRAEL, Y; REUVEN, O; LAHAV, E. 1991. Qualitative aspects of somaclonal
variations in banana propagated in vitro techniques. (Amsterdam) Scientia
Horticulturae 48:71-88.
102
JAVER, L. 1998. PhenylPhenalenone-type phytoalexins and phytoanticipins from
susceptible and resistant cultivars of Musa species. ts potential
forengineering resistance to fungi and nematodes in banana. Proc. nt.
Symp. Banana in Subtropics. Editado por Galn Sauco. Acta Hort. 490.
SHS 1998. p. 425-431.
JAMES, C. 1997. Global Status of Transgenic Crops in 1997. thaca, EEUU,
nternational Service for the Acquisition of Agri-Biotech Applications
(SAAA). No 5:31 p.
JAMES, C. 1998. Global review of commercialized transgenic crops: 1998 thaca,
EE.UU., nternational Service for the Acquisition of Agri-Biotech Applications
(SAAA). No 8:31 p.
KEEN, N. T; BENT, A; STASKAWCZ, B. 1998. Plant disease resistance genes:
nteractions with pathogens and their improved utilization to control plant
diseases NY, USA. 1993. <http://www.nbiap.vt.edu/articles/NOV9311.HTM>
[Consulta: 23 de agosto 1998]
KRATTGER, A. 1997. nsect Resistance in Crops: A Case Study of *acillus
thuringiensis (*t) and its Transfer to Developing Countries. thaca, NY,
nternational Service for the Acquisition of Agri-biotech Applications
(SAAA). No. 2: 42 p.
KRKORAN, A. D; CRONAUER, S. S. 1983. Tcnicas del cultivo asptico para el
mejoramiento del banano y pltano. nforme mensual, UPEB 7(55):42-47.
LARKN, P. J; ACWCROFT, W. R. 1981. Somaclonal variation, a novel soruce of
variatibility from cell cultures for plant improvement. Theor. Appl. Genet.
60:197-214.
LARTER, L. N. H. 1954. Report on banana breeding. Dep. Agric. Jamaica. Journal
Horticulture Science. 29:1-11.
LOYOLA, J. L; SHEPHERD, K; DE OLVERA, S; DA SLVA, A; ALVES, E. J;
MACEL, Z. J; DOS SANTOS, W. 1997. Citogentica e melhoramento
gentico. I1 A cultura da banana, aspectos tecnicos, socieconomicos e
agroindustriales. Embrapa- CNPMF. Brasilia, Brasil. 585 p.
MA, S. S; SH, C. T. 1972. n vitro formation of adventitious buds in banana shoot
apex following decapitation. J. Chin. Soc. Hort. Sci. 18:135-142 (n chinese,
whit english summary).
MAK, C; HO, Y. W; TAN, Y. P. 1998. Micropropagation and mutation breeding
techniques for the improvement of bananas. Acta Hort. 461. Editado por
R.A. Drew. nternational Society for Horticultural Science, Leuven, Blgica.
p. 219-223.
103
MALGA, P. 1993. Toward plastid transformation in flowering plants. TBTECH
(EE.UU.) 11:101-107.
MATELLE, T; FONCELLE, B. 1989. Techniques de production de vitroplants de
bananier cv. Poyo. P. H. H. revue Horticole, # 294:37-45.
MATSUMOTO, K; OKA, S. 1998. Plant regeneration from protoplasts of a brazilian
dessert banana (Musa spp. AAB group). I1 Proc. nt. Symp. Banana in
Subtropics. Editado por Galn Sauco. Acta Hort. 490. nternational Society
for Horticultural Science, Leuven, Blgica. p. 455-467.
MAY, G; AFZA, R; MASON, H; WECKO, A; NOVAK, F; ARNTZEN, C. 1995.
Generation of transgenic banana (Musa acuminata) plants via
&grobacterium-mediated transformation. Bio/Technology (EE.UU.) 13: 486-
492.
MEGA, R; HACOUR, R; ROSSGNOL, L; SHACHAKR, D. 1992. Callus formation
from cultured protoplasts of banana (Musa spp.). Plant Science 85:91-98.
MENNDEZ, T. 1973. Application of mutation methods to banana breeding. n:
nduced mutation in vegetatively propagated plants. nternational atomic
Energy Agency. Vienna, Austria. p 75-83.
MENNDEZ, T; LOOR, F. H. 1979. Recent Advances in vegetative propagation
and their application to banana breeding. .N..A.P. Ecuador. Memorias V
Reunin ACORBAT.
MENNDEZ, T; SHEPHERD, K. 1975. Breeding new bananas. Wold Crops
27(3):104-112.
MLLAN, S; WLSON, A; BURNS, A. T. 1991. ntroduction to DNA solation and
Analisis. I1 Molecular Biology: ts practice and role in Crop Protection. No.
48:3-22. MONSANTO. 1992. The new biology: the science and its
applications. St.Louis, EEUU. 28 p.
MONSANTO. 1998. Biotechnology trends-impacts on the grain, feed and
processing industry. Presentacin a la Asociacin Nacional Estadounidense
de Granos y Alimentos. Orlando, EEUU.
MORALES, V. 1992. Comercio, Economa y Poltica Mundial del Banano. I1
Bananos. Cultivo y Comercializacin. Editado por Moiss Soto. San Jos,
Costa Rica. p. 501-580.
MOURCHON, X; CARLER, J; FOUR, E. 1997. Enfermedades de Sigatoka. Hoja
divulgativa No. 8. Montpellier, Francia, NBAP. 4 p.
MOY, Y; HANSON, B; ENGLER, D; GUTTERSON, N. 1999. Analysis of uid& gene
expression from transgenes in field grown Grand Nain (AAA) banana plants.
104
I1 The nternational Symposium on the Molecular & Cellular Biology of
Banana. (1999, New York, EE.UU.). Editado por Gregory May. New York,
EE.UU., Boyce Thompson nstitute for Plant Research nc. p. 33.
MURASHGE, T; SKOOG, F. A. 1962. A revised medium for rapid growth and
biossay with tobacco tissue culture. Physiologia Plantarum 15:473-497.
NEHRA, N; CHBBAR, R; KARTHA, K; DATLA, K; CROSBY, W; STUSHNOFF, C.
1990. Genetic transformation of strawberry by Agrobacterium tumefaciens
using leaf disk regeneration system. Plant Cell Reports (EE.UU.). 9:293-
298.
NEW, S; MARROT, J. 1974. Post harvest physiology of tetraploids banana fruit,
response to storage and ripening. Ann. Appl. Bot. 78.
NCHOLSON, R. A. 1958. A posible source of error in the chemical detection of
indolacetic acid in plants. Natur 181.e. London, England. 919-920.
NOVAK, F. J; MORPURGO, R; VAN DUREN, M; SACCH, M; KHATR, A. 1991.
mprovement of Musa through biotechnology and mutation breeding. I1
Biotechnology Applications for Banana and Plantain mprovement.
nternational Network for the mprovement of Banana and Plantain
(NBAP). San Jos, Costa Rica. p. 143-158.
NOVEDADES EDTORES. 1999. Maz transgnico mata a mariposas Monarca.
(Correspondencia personal). 1 p.
OSBORNE, R. E. Bodles altafort, a new banana for Jamaica. Ban. Bd. Res. Dep.
Jamaica Occ. Byll. 3, 7.
PANS, B; SG, L; SWENNEN, R. 1994. Regeneration of plants from protoplasts
of Musa Species (banana). Biotechnology in Agriculture and Forestry. Plant
Protoplast and Genetic Engineering V. Editado porY.P.S. Bajaj. Berln,
Alemania, Springer-Verlag. Vol. 34:102-114.
PANS, B; COTE, F; ESCALANT, J; SG, L. 1995. Aspects of genetic engineering
in banana.
PEREZ, L; ACUA, P; RUZ, E; VNCENT ESCALANT, J. 1992. Posicin
taxonmica, Clasificacin y Mejoramiento Gentico de los clones de
banano. I1 Bananos. Cultivo y Comercializacin. Editado por Moiss Soto.
San Jos, Costa Rica, LL, S.A. p. 139-210.
PREZ HERNNDEZ, J; SWENNEN, R; GALN SAUCO, V; SG, L. 1999.
&grobacterium mediated transformation of banana embryogenic cell
suspension cultures. I1 The nternational Symposium on the Molecular &
Cellular Biology of Banana. (1999, New York, EE.UU.). Editado por Gregory
105
May. New York, EE.UU., Boyce Thompson nstitute for Plant Research nc.
p. 32.
PEREA DALLOA, M. 1998. Pollen and anther culture in Musa spp. I1 Proc. nt.
Symp. Banana in Subtropics. Editado por Galn Sauco. Acta Hort. 490.
nternational Society for Horticultural Science, Leuven, Blgica. p. 415-423.
PERK, R. L. M. 1990. Cultivo in vittro de las plantas superiores. Trad. Mateo-
Sagasta, L. Mundi-Prensa, madrid. 326 p.
PLOETZ, R. 1999. The most important disease of a most important fruit. Plant
Pathology on/line. [En lnea]
<http://www.scisoc.org/feature/banana/Top.html> (Consulta: Abril de 1999).
POOL, J; RZARRY, H. 1985. "Off type Bananas plants obseved in a commercial
plantaing of Grain Naine propagated using the in vitro culture technique. n:
memorias V Reunin ACORBAT. San Jos, 23-27 Septiembre. CATE,
Turrialba, Costa Rica. p 99-102.
PRAKASH, C. 1998a. First gene for resistance to an animal pest identified in
plants. [En lnea]. Tuskegee, EE.UU. 1997.
<http://www.nbiap.vt.edu/articles/MAR9704.htm> [Consulta: 23 de agosto,
1998].
PRAKASH, C. 1998b. Powerful Plant Gene Confers Resistance to Nematodes and
Aphids. [En lnea]. nformation Systems For Biotechnology - National
Biological mpact. <[email protected]> Tuskegee, EE.UU.
1998. [Consulta: 1 de septiembre, 1998].
REMY, S; FRANOS, B. P; CAMMUE; SWENNEN, R; SG, L. 1998a. Co-
transformation as a potencial tool to create multiple and durable disease
resistance in banana (Musa spp.). Acta Horticulturae 461. Editado por R.A.
Drew nternational Society for Horticultural Science, Leuven, Blgica. 361-
365 p.
REMY, S; BUYENS, B. P; CAMMUE; SWENNEN, R; SG, L. 1998b. Production
of transgenic banana plants expressing antifungal proteins. Acta
Horticulturae. 490 nternational Society for Horticultural Science, Leuven,
Blgica. 433-436 p.
RSSLER, J; MELLON, M. 1996. The Ecological Risks of Engineered Crops.
Londres, nglaterra, Mit Press. 168 p.
RVERA, C; RAMREZ, P; PERERA, R. 1990. Preliminary characterization of
viruses infecting banana in Costa rica. n press.
106
ROWE, P. R; RCHARDSON, D. L. 1975. Breeding bananas for disease
resistance, fruit quality and yoeld. Tech. Bull. #2. Trop. Agri. Res. Serv.
(SATSA). La Lima, Honduras. p. 41.
ROWE, P. R. 1976. Possibilits damelioration gntique des rendements de
plantains. Fruits 31(9):531-539.
ROWE, P. R. 1983a. Breeding an "ntroctable crop: bananas. United Fruit
Company. La Lima, Honduras. 26 p.
ROWE, P. R. 1983b. Mejora de los pltanos de postre y los pltanos para cocer.
United Fruit Company. La Lima, Honduras. Reunin V, ACORBAT 1983.
SG, L; REMY, S; VERELST, R; SWENNEN, R; PANS, B. 1994. Genetic
transformation in Musa species (banana). I1 Biotechnology in Agriculture
and Forestry. Plant Protoplast and Genetic Engineering V. Editado por
Y.P.S. Bajaj. Berln, Alemania, Springer-Verlag. Vol. 34:214-227.
SG, L; SWENNEN, R. 1995. Recent developments in biotechnological research
of banana (Musa spp.). I1 Agricultural Biotechnology. 2
nd
Asis Pacific
Conference. New Delhi, Oxforg & BH Publishing Co. p.201- 211.
SG, L; REMY, S; VERELST, B; PANS, B; CAMMUE, B; VOLCKAERT;
SWENNEN, R. 1995. Transient gene expression in transformed banana
(Musa cv. Bluggoe) protoplasts and embryogenic suspensions. Euphytica
(Neherlands) 85:89-95.
SG, L; MAY, G; REMY, S; SWENNEN, R. 1998a. Genetic Transformation for
the improvement of bananas a critical assessment. I1 Annual report 1997.
nternational Plant Genetic Resources nstitute. talia. n.p.
SG, L; MAY, G; REMY, S; SWENNEN, R. 1998b. Recent developments in
biotechnological research on bananas (Musa spp.). I1 Biotechnology and
Genetic Engineering Reviews. Vol. 15: 313-327.
SANDOVAL, J. A. 1985. Micropropagacin de Musaceas. Revista ASBANA. Costa
Rica. 24-21.
SANDOVAL, J. A. 1991. Micropropagacin de pltano y banano (Musa AAB, AAA)
en el CATE. Serie Tcnica. nforme Tcnico CATE 186. Turrialba, Costa
Rica. 24 p.
SHEPHERD, K. 1954. Seed fertility of the Gros Michel banana in Jamaica. Journal
Hort. Sci. 29:1-11.
SHEPHERD, K. 1968. Banana breeding in the west ndies. Pest articles and News
summmaries 14(4):370-379.
107
SHEPHERD, K. 1974. Banana research at .C..A. Tropical Agriculture 51(4):485-
489.
SHEPHERD, K. 1976. Banana germoplasm. Roma: BPGR. 7 p.
SMMONDS, N. W. 1948. Genetical and cytological studies or Musa. X. Stomat
size and planta vigour in relations to polyploidy. Journal Genetic. 49.57-68.
1948.
SMMONDS, N. W. 1962. The classification and nomenclature of the abananas
and potatoes; someimplications. Proc. Linn. Soc. Lond. 173:111-113.
SMMONDS, N. W. 1973. Los pltanos. Editorial Blume. Barcelona, Espaa. 539
p.
SMTH, L. W; ATKE, E. A; GODWN, . D. 1998. Potential for the use of molecular
markers in improvement of Musa for disease resistance. I1 Acta horticulture
461. nternational Society for Horticultural Science, Leuven, Blgica. p. 149-
155.
SOTO, M; SANCHO, H. 1992. Ecologa del banano. I1 Bananos. Cultivo y
Comercializacin. Editado por Moiss Soto. San Jos, C.R., LL S.A. p.
105-138.
SPEJER, P. 1999. Musa nematode resistance; a proposal for research directions.
I1 The nternational Symposium on the Molecular & Cellular Biology of
Banana. (1999, New York, EE.UU.). Editado por Gregory May. New York,
EE.UU., Boyce Thompson nstitute for Plant Research nc. p. 32.
STEWARD, F. C; SMMONDS, N. W. 1954. Growth promoting substances in the
ovary and the immmature fruit of the abananas. Nature p .173. 1083 p.
STOVER, R, H; BUDDENHAGEN, . N. 1986. Mejoramiento Gentico de Banano
y Pltano en Brasil y Honduras (Fitomejoramiento del Banano: Poliploida,
resistencia a enfermedades y productividad). Editorial UPEB, CD.
Panam, Panam. p. 20-55.
STOVER, R. H. 1987. Somaclonal variation in Grain Naine and Saba bananas in
the nursey and field. n: Bananas and Plaintain Breeding Atrategies:
Proceedings of an nternational Worshop help at cairns, Australia. 13-17
October. ACAR Proceedings 21:136-139.
SURGA, J. G. 1988. Obtencin de plantas libres del Virus del Mosaico del pepino,
por cultivo de pices meristemticos aislados in vitro de dos cultivares de
banano. Fitopatologa venezolana 1:69-72.
SUTTER, E. G; BAKER, P. B. 1985. n vitro propagation of nature liquindanbar
atryraciflua. Plant Cell Tissue Organ Culture 5:13-21.
108
SWENNEN, R; VAN DEN HOUWE, S; SG, L; SCHOOFS, H. 1998.
Biotechnological approaches for the improvement of Cavendish bananas. I1
Proc. nt. Symp. Banana in Subtropics. Editado por Galn Sauco. Acta
Hort. 490. nternational Society for Horticultural Science, Leuven, Blgica.
p. 415-423.
TACCN, P; WALBOT, V. 198?. Transformation of plants. Scientific American.
s.p.
TART, R. 1979. Futuro de la industria bananera. nforme mensual UPEB.
2(14)26-30.
TERRAS, F. R. G; EGGERMONT, K; KOVALEVA, V; RAKHEL, V; OSBORN, R;
KESTER, A; REES, S. B; VANDERLEYDEN, J; CAMMUE, B. P. A;
BROEKAERT, W. F. 1995. Small cysteine-rich fungical proteins from radish
(Raphanus sativus L.) seeds. Journal of Biological Chemistry. 267:15301-
15309.
UNON OF CONCERNED SCENTSTS. 1996a. Consumer firestorm in Europe.
The Gene Exchange (EE.UU.) 7(1):3.
UNON OF CONCERNED SCENTSTS. 1996b. *t cotton fails to control
bollworm. The Gene Exchange (EE.UU.) 7(1):1.
UNON OF CONCERNED SCENTSTS. 1996c. Organic business is booming.
The Gene Exchange (EE.UU.) 7(1):3.
(USDA) UNTED STATES DEPARTMENT OF AGRCULTURE. 1998.
USDA/APHS Petition 97-204-01p for determination of nonregulated status
for Colorado Potato Beetle and Potato leaf Roll Virus resistant potato lines
RBMT21-129 and RBMT21-350. 21 p.
VALMAYOR, R. V. 1979a. Banana and plantain collection in ndonesia. Plant
Genetic Resources Newsletter 36:10-14.
VALMAYOR, R. V. 1979b. Bananas in Thailand and Malaysia. Plant Genetic
Resources Newsletter 39:10-14.
VENTURA, J; et al. 1988. Variacin somaclonal (Musa spp) obtenida mediante
propagacin in vitro. Ciencia y Tcnica en la Agricultura. Viandas Tropicales
(Cuba) 11(1):7-16.
VESSEY, J. C; RVERA, J. A. 1981. Meristem culture of bananas. Turrialba, Costa
Rica. 31(2):162-163.
VUYESTEKE, D. R; DE LANGHE, E. 1985. Feasibility of in vitro propagation of
bananas and plantains. Tropical Agriculture, Trinidad. 62(4):323-328.
109
VUYESTEKE, D. R. 1989. Shoop-tip Culture for the propagation, Conservation and
Exchange of Musa germoplasm. nternational Board for plant genetic
resources. Rome, taly. 56 p.
WALSH, J. 1998. Alien seed. TME (EE.UU.) 152 (8):38-43.
WANTCHAKORN, R; JAMES, A; L HAFNER, G; HORSER, C; HARDNG, R;
DALE, J. 1999. Functional analysis of the genes of banana bunchy top
virus. (Correspondencia personal). 2 p.
YOSHDA, T. 1994. La situacin actual. Correo de la Unesco, Pars. 47: 32-35.
110