Apuntes de Impregnaciones PDF
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Las tcnicas de impregnaciones metlicas, especialmente las que utilizan sales de plata,
son notoriamente caprichosas, de manera que tomar ciertas precauciones en su
ejecucin, ayudar a obtener mejores resultados.
RECOMENDACIONES.
1. Portaobjetos: stos deben ser silanizados, pues las soluciones de plata suelen ser
alcalinas lo que favorece el desprendimiento de los cortes.
2. No utilizar pinzas metlicas (tipo pato para manipular las lminas), pues al contacto
con metal la plata se reduce. Mantener estas precauciones al momento de pesar.
3. Usar reactivos pro anlisis
4. Usar agua destilada de buena calidad. La calidad del agua se chequea agregando
un grano de plata al agua, si se vuelve lechosa desecharla.
5. Lavado de material de vidrio acucioso.
6. Para la utilizacin de reactivos como el amonaco, hacerlo siempre bajo campana,
no pipetear cidos ni bases fuertes.
7. Para las soluciones amoniacales eliminar INMEDIATAMENTE aquellas donde se ha
formado un cristal negro brillante.
8. Mantener las soluciones de plata simples (soluciones madres de nitrato de plata)
en frascos ambar, bien tapados y rotulados a 4c
9. Evitar luz directa en soluciones y polvos de plata.
10. Eliminar soluciones de plata precipitadas
Ambas tienen en comn la reduccin del nitrato de plata a plata metlica, los mtodos en
dos tiempos lo hacen en fases sucesivas, mientras que los de un tiempo realizan una
reduccin ms severa.
IMPREGNACION ARGENTICA A DOS TIEMPOS
Impregnacin primaria: los tejidos son expuestos a una solucin ligeramente
alcalina en la que hay una concentracin no muy alta de AgNO3, que proporciona
iones plata en exceso. Este exceso se logra usando un volumen grande de AgNO3,
negras
amarillo
Es una impregnacin argntica en dos tiempos, usa como base fuerte el hidrxido de
sodio y como agente reductor el formol. Antes de la impregnacin se realizan
manipulaciones similares a la tcnica de Gomori, se reemplaza el metabisulfito por cido
oxlico. Finalmente se contrasta con cloruro de oro.
PROCEDIMIENTO TECNICO
FIJACIN : formalina, carnoy, etc
CORTES: delgados, portas silanizados
SOLUCIONES
A. Bao argntico de Wilder.
-nitrato de plata 1% acuoso
-hidrxido de sodio 3% acuoso
Se toman 5 ml de nitrato de plata; aadir gota a gota amoniaco puro hasta que
desaparezca el precipitado formado; agregar 5 ml de hidrxido (se forma un nuevo
negras azuladas
sin teir
PROCEDIMIENTO TECNICO
FIJACIN : formalina, evitar fijadores alcoholicos.
CORTES: en portas silanizados
SOLUCIONES
A. Solucin de Fontana
A 95 ml de nitrato de plata al 5%, aadir hidrxido de amoniaco hasta
obtener una solucin clara sin precipitados. Luego aadir gota a gota los
restantes 5 ml de nitrato de plata al 5% hasta que la solucin se torne
ligeramente turbia. Dejar reposar por 1 a 2 horas antes de usar.
B. Cloruro de oro 1%, tomar 10 ml y completar hasta 50 ml con agua destilada.
C. Tiosulfato de sodio 5% acuoso
D. Rojo nuclear rpido
PROTOCOLO
1. Desparafinar e hidratar hasta agua destilada
2. Incubar en solucin de plata a 56c por 1 hora o bien 24 a 48 horas a
temperatura ambiente a la oscuridad. Los cortes toman un color marrn
claro.
3. Lavar en agua destilada
4. Cloruro de oro 5 min
5. Lavar tres veces en agua destilada
6. Tiosulfato 5 min
7. Lavar
8. Contraste 5 min
9. Lavar
10. Deshidratar, aclarar y montar.
RESULTADOS
Sustancias reductoras de plata
Ncleos y fondo
negras
rosado
SOLUCIONES
A. Tampon acetato 0,1M pH 5,8 (ver gua de TH)
B. Solucin de impregnacin.
Nitrato de plata 0,5% en tampn acetato
C. Solucin reductora de Bodian.
Sulfito de sodio anhidro 5g + hidroquinona 1+ en 100 ml de agua destilada
D. Solucin fijadora
Tiosulfato de sodio 2%
PROTOCOLO
1. Desparafinar e hidratar hasta en agua destilada
2. Lavar 4 veces en agua destilada
3. Solucin de impregnacin por 3 horas a 60c
4. Solucin reductora de Bodian por 5 min a 60c. Debe aparecer color negro.
5. Lava r en agua destilada
6. Fijar por 30 segundos
7. Solucin de impregnacion 30 min a T. ambiente
8. Transferir a Solucin Bodian por 5 minutos (recin preparada)
9. Lavar
10. Fijar 20 segundos
11. Lavar
12. Deshidratar, aclarar y montar.
RESULTADOS
Clulas argirfilas
Clulas alfa 2 de islotes de pancreticos
negro
negro
ESTRUCTURAS ARGIROFILAS
La capacidad de atraer iones plata e impregnarse con plata metlica en los protocolos se
denomina argirofilia. Estos iones plata atrados al tejido son posteriormente precipitados a
plata metlica por reductores externos (hidroquinona por ejemplo).
Se demuestran en tincines de Bielchowsky, Sevier-Munger y Grimelius
ESTRUCTURAS ARGENTAFINES
Bibliografa