Apuntes de Virologia
Apuntes de Virologia
Apuntes de Virologia
b.
Apuntes de Virologa 2
Algunos hitos importantes:
Se han encontrado virus en la tumba de Ramses II (4000 aC.)
La viruela era endmica en Asia e ndia y en las Cruzadas se introdujo en Europa. Ms tarde,
los espaoles la llevaron a Amrica del Sur, ofreciendo mantas contaminadas a los indgenas.
En el S. X, en China y algunos otros pases se llevaba a cabo la variolacin que consista en
inyectar va nasal el virus de la viruela en dosis pequeas para inmunizar al individuo sin que
este muriera (un 1% mora). Exista la costumbre entre las madres de inoculabar costras de
enfermos de viruela para proteger a sus hijos de la viruela. Esta prctica fue observada en
Turqua por M. Montague (1721), quien la introdujo en Inglaterra y de esta forma muchas
personas quedaban protegidas, pero otras seguan muriendo, por lo que esta prctica dejo
de utilizarse.
El mdico ingls E. Jenner (1798) observ que las personas en contacto con ganado vacuno, a
veces resultaban infectadas por una forma de viruela que era muy benigna (la persona no
mora) y stas personas luego no padecan la viruela humana ( resistencia). Esto es debido a
que los determinantes antignicos (=
) de los dos virus son muy similares. Entonces
comenz a inocular a las personas con pus procedente de pstulas de vacas enfermas de
viruela vacuna, inventando la VACUNACIN.
El descubrimiento de los virus se atribuye a dos cientficos: Iwanovski (1892) haba observado que
la enfermedad del mosaico del tabaco (existencia de hojas con zonas de diversos colores) poda ser
reproducida experimentalmente usando el fluido homogenado que atravesaba los filtros de
porcelana de Chamberlain que normalmente retenan a las bacterias, pero siendo incapaz de aislar y
crecer el supuesto microorganismo, abandon la investigacin. Pocos aos ms tarde, y
probablemente sin tener noticias del trabajo de Iwanovski, Beijerink (1898) realiz experimentos
similares con el mismo sistema y avanz la idea de que el agente filtrable (=
)
deba de incorporarse al protoplasma vivo del hospedador para lograr su reproduccin.
Aquel mismo ao Loeffler y Frosch (1898) descubren los virus animales al comprobar que un virus
filtrable es responsable de la glosopeda del ganado. Reed (1901) descubre el primer virus humano, el
de la fiebre amarilla, y Landsteiner y Pope (1909) detectan el de la poliomielitis. A comienzos de siglo
Copeman desarrolla su tcnica de multiplicacin de virus animales en embriones de pollo, con la que
P. Rous (1911) aisla y cultiva el virus del sarcoma aviar.
Los virus bacterianos fueron descubiertos por Twort (1915) y dHrelle (1917); fue ste quien
acu el trmino bacterifago. Aunque su esperanza en la aplicacin de los fagos como elementos
bactericidas para uso mdico no pudo satisfacerse, la contribucin de los virus bacterianos al avance
de la Gentica y Biologa Molecular ha sido decisiva: de hecho, los primeros estudios cuantitativos
sobre replicacin virsica se realizaron sobre fagos de E. coli, lo que suministr modelos aplicables a
otros virus. Bordet y Bal (1925) describen por primera vez el fenmeno de lisogenia, pero las relaciones entre los ciclos ltico y lisognico de los fagos no fueron aclaradas hasta los estudios de Lwoff
(1950).
Pero los avances ms significativos en el estudio de la composicin y estructura de los virus se inician con la purificacin y cristalizacin, por Stanley (1935), del virus del mosaico del tabaco (TMV),
aplicando procedimientos tpicos de la cristalizacin de enzimas. Inicialmente comprob que el TMV
contena gran proporcin de protena, pero dos aos ms tarde, Bawder y Pirie (1937), determinaron
la presencia de cido nucleico (RNA).
Apuntes de Virologa 3
Delbruck (1940) descubri cmo era el ciclo de multiplicacin de los virus bacterianos. Se saba
que no podan crecer en medios de cultivo normales, pero s que lo hacan en seres vivos. Entonces,
al estudiar el ciclo, se vio que los virus necesitaban crecer dentro de las clulas.
En aos recientes han sido descubiertos dos nuevos tipos de entidades infectivas subvircas: Diener (1967) describi la existencia de partculas de ARN desnudas infectivas en plantas (=
), y Prusiner (1981) puso de manifiesto que determinadas enfermedades de mamferos
se deben a partculas proteicas aparentemente desprovistas de material gentico (=
).
Los genetistas Hershey y Chase (1952) demostraron que era en el DNA donde se encontraba la informacin gentica que constituye el material hereditario, comprobando que en el bacterifago T2,
era el ADN el que entraba en la bacteria E. coli. Para esto haban marcado las protenas de la cpside
con 35S y en otro cultivo el DNA del virus con 32P. Los virus se han usado y siguen usndose para estudiar aspectos importantes de la Biologa Celular.
En 1980 la OMS declara la viruela como enfermedad erradicada de la Tierra. Slo permanecen
dos stocks declarados en Rusia y en E.E.U.U.
estimadas.
Enterovirus (Picornaviridae) Poliomielitis. Evidencias desde el Antiguo Egipto.
Epidemias importantes en 1916 y entre 1940 y 1950. Afectaba a los nios de los pases
ms industrializados y dejaba muchos nios paralticos.
Retroviridae. Pandemia del Sndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Se inici
en 1981.
b) Brotes recientes:
Aphthovirus (Picornaviridae) Fiebre aftosa. Gran Bretaa, 2001. Infecta animales de
400 nm). Algunos se pueden ver al microscopio ptico; algunos son incluso ms grandes que
algunas bacterias (como el de la viruela, que es ms grande que las clamidias), pero las
tcnicas generales para su observacin son:
Apuntes de Virologa 4
Ultracentrifugacin + microscopa electrnica
Tincin con contraste + difraccin de rayos X
No se podan cultivar en medios de cultivo tradicionales para bacterias. Necesitan ser
cultivados en clulas vivas. Utilizan la maquinaria sinttica del husped, por tanto se dificulta
la eliminacin en tratamientos clnicos sin afectar las propias clulas del enfermo.
CARACTERSTICAS GENERALES
Los virus se definen por dos caractersticas fundamentales:
a. Organizacin
DEFINICIN DE VIRUS (Darnell y Luria, 1967). Partculas acelulares de pequeo tamao con
organizacin simple que contienen material gentico y que no pueden replicarse de manera
independiente sin la presencia de una clula viva parsitos intracelulares estrictos u obligados. La
partcula vrica completa (=
) est constituida por el genoma (DNA o RNA, nunca ambos),
una cubierta proteica (= #
) y en ocasiones por una envoltura membranosa.
No tienen sistemas de obtencin de energa para efectuar sntesis proteica y, en consecuencia,
explotan la maquinaria metablica de traduccin de la clula hospedadora, por lo que de modo
independiente a la estructura gentica del virus se necesita un mRNA que pueda ser traducido por
los ribosomas. No pueden replicarse en el aire, agua, alimentos o superficies; no son capaces de
llevar a cabo metabolismo ni multiplicarse. Los alimentos que pueden presentar contaminacin viral
tienen aspecto, olor y sabor completamente normal.
Son los microorganismos ms abundantes en ecosistemas acuticos, de 15 a 25 veces ms de
virus que de bacterias. Se han caracterizado unos 4000 virus de varias docenas de familias diferentes
(pequea fraccin de los que existen en el planeta).
Diagrama de flujos de materia orgnica supuesta para ser asociada con bacterias hetertrofas. El
pool de carbono orgnico disuelto (COD) y el carbono orgnico extracelular (COE) es alimentado por
la excrecin del fitoplancton (y de otras fuentes); las bacterias que crecen en este material son
eliminadas, ya sea por la depredacin de flagelados heterotrficos, o por lisis viral. La lisis viral libera
la materia orgnica de las clulas bacterianas, en parte como nuevas partculas virales. Suponiendo
que slo una pequea fraccin de los virus tienen xito en las nuevas infecciones, la produccin vrica
tambin se devuelve al pool de DOC.
Apuntes de Virologa 5
b. Ciclo de multiplicacin
Los virus slo pueden multiplicarse en el interior de clulas vivas. El genoma vrico carece de los
monmeros ni las enzimas necesarias para la replicacin; no pueden sintetizar ATP ni protenas, ya
que no poseen las estructuras necesarias para esta sntesis. El ciclo de multiplicacin se diferencia en
dos etapas:
1
sirve para la transmisin de los virus desde la clula husped original hasta los nuevos
hospedadores, siendo transportado pasivamente en el medio. El virin posee capacidad de
infectar gracias a unas protenas que poseen dominios hacia el medio externo (=
#
)
que
se
unen
a
los
receptores
de
membrana
(=
% %
) de la clula a infectar. Una vez unido al receptor,
por varios mecanismos dependiendo del tipo de virus, es introducido en el interior celular.
Intracelular. Estructura vegetativa. Dentro de la clula hospedadora el virus puede
replicarse. Durante esta fase el virus dispara su ciclo vital utilizando la maquinaria metablica
y gnica del hospedador (genoma activo duplicacin, transcripcin y traduccin a
protenas), para sintetizar nuevos componentes de virus, que se ensamblan para formar
partculas virales, que salen de la clula y son capaces de infectar nuevas clulas. Una vez en
la clula husped, se produce el desensamblaje de las cubiertas gracias a que son sensibles
a cambios del medio quedando el genoma descubierto y se expresa produciendo la
progenie viral que en una etapa posterior saldrn de la clula infectada en forma de virin.
Algunos virus no producen progenie viral inmediatamente sino que se integran en el DNA
celular, confiriendo, en algunos casos, nuevas propiedades no perjudiciales a la clula
hospedadora y beneficindose de las divisiones celulares. Comportndose como un gen ms
aumenta su nmero pasivamente, convirtindose en provirus. Una vez inducido, el virus se
hace activo, se reproduce y suele terminar con la vida de la clula infectada (virus latentes y
fagos lisognicos).
genoma epismico
El trmino virus es ms amplio que el de virin, ya que se aplica a todas las entidades virales presentes
durante todo el ciclo de multiplicacin (intra y extracelular).
Apuntes de Virologa 6
bacterianos, que presentan una cabeza icosadrica y un cuello y una cola helicoidal.
I. CIDO NUCLEICO
Los virus son muy variables en cuanto a la naturaleza
natu
del material gentico presente en el virin.
virin
Representa de un 150% dell total y lleva la informacin necesaria para la replicacin del virus y
formacin de nuevos viriones.
viriones Puede ser RNA o DNA de cadena simple/doble y
lineal/circular/fragmentado, pero nunca ambos a la vez. Existen unos virus que pueden usar tanto
RNA como DNA
A como material gentico, pero en diferentes fases
fases del ciclo de multiplicacin.
multiplicacin
Retrovirus: Los
os viriones tienen RNA, pero se replica el genoma a partir de una forma
intermedia de DNA.
Hepatitis B: Tiene
iene DNA dentro del virin pero en la replicacin del genoma
geno
se usa RNA
como forma intermedia.
intermedia
El tamao del genoma es muy variable. Los
os ms pequeos tienen 3 4 genes, mientras que los
ms complejos pueden tener varios cientos alrededor de 30 Kb RNAvirus y entre 2,5 Kb4Gb
Kb
DNAvirus. En general, los virus son haploides (slo
slo tienen una sola copia del genoma),
genoma pero existen casos
de retrovirus cuyo genoma est constituido por dos fragmentos de DNA iguales, lo que les hace did
ploides. Si existen varios fragmentos de material gentico pero que son diferentes, son haploides.
ha
Apuntes de Virologa 7
a. GENES ESTRUCTURALES: Tienen un papel estructural en el virin. Los promotores que regulan los genes estructurales son ms fuertes y se usan ms que los no estructurales.
Estabilidad Ofrecen proteccin y resguardo del material gentico.
Especificidad Reconocen la clula hospedadora. El espectro de hospedadores de cada
virus y el tipo celular que infecta (=
% ) vienen determinados por genes estructurales. Si es un virus sin envoltura, ser determinado por una protena transmembrana de la envoltura. La especificidad se puede modular en el laboratorio, haciendo
que los virus que no infectan humanos sean capaces de infectar lneas celulares humanas.
b. GENES NO ESTRUCTURALES: Genes que codifican para protenas o enzimas que tienen un
papel metablico en la fase intracelular y la replicacin del virus (transcriptasa inversa en retrovirus). Estas protenas son necesarias para la replicacin de los genes estructurales (e. g.
replicasas).
a. DNA viral
En algunos casos puede ser de cadena sencilla (= %
los virus con DNA, es de cadena doble.
), aunque en la mayora de
b. RNA viral
La mayora tiene una cadena sencilla de RNA (e. g. virus sin envoltura). Slo algunos tienen
cadena doble. En la mayora de los casos, es lineal, siendo muy pocos casos aislados los de cadena
circular.
El RNA de cadena sencilla o doble tiene informacin para la sntesis de nuevos virus. Este
concepto se descubri por primera vez en el VMT. En los aos 50, trabajando con este virus se
descubri que al purificar el RNA de cadena sencilla de este virus e introducirlo en clulas de plantas
sanas, el virus se reproduce, crendose nuevos virus. Posteriormente se descubri que en otros virus
RNA, al purificar el RNA no se consegua infectar otras clulas y producir nuevos virus. Estos
experimentos llevaron a la divisin de los virus RNA de cadena sencilla en dos grupos:
Virus RNA de cadena positiva (&'(+). Son aquellos en los que el RNA purificado es capaz
de infectar a las clulas con produccin de nuevos virus. Esto se debe a que el RNA del virus
tiene la misma secuencia de bases que los mRNA, que por definicin se consideran de
cadena +. Entonces, el RNA puro, al penetrar en la clula, es capaz de unirse directamente a
los ribosomas, actuando como mensajero y sintetizando ya protenas vricas (enzimas y
estructurales).
Apuntes de Virologa 8
Virus RNA de cadena negativa (&'(). Son aquellos que por s solos (al estar purificados)
no son capaces de infectar nuevas clulas y producir nuevos virus. En estos virus el RNA del
genoma tiene una secuencia de bases complementarias con los mRNA. Entonces cuando
entra en la clula hospedadora, el RNA tiene que entrar acompaado de una enzima vrica
que a partir del genoma sintetice mRNA.
El genoma est formado por una nica molcula de RNA, pero hay casos de virus en los que el
genoma est formado por varias molculas de RNA (virus con genoma fragmentado o segmentado).
Esto puede darse tanto en virus de cadena sencilla (e. g. virus de la gripe) o pueden ser varios
fragmentos de RNA de cadena doble (e. g. Reovirus), siendo los fragmentos diferentes (entonces
haploides), a excepcin de retrovirus como el del SIDA (diploide).
Algunos virus de plantas tienen genoma RNA segmentado, pero los diferentes fragmentos del
genoma estn incluidos en cpsides diferentes, denominndose entonces VIRUS MULTIPARTICULADOS,
ya que el virus est formado por varias partculas. Entonces, para infectar a una clula, tiene que ser
infectada por varios de estos virus a la vez.
II.
CPSIDE
Es una estructura que rodea y protege al genoma vrico y est formado por unas protenas
%
#
%
) codificadas por genes del virus.
(=
Capsmero: Subunidad proteica formada por una o ms protenas. Estn constituidos por un
conjunto de protenas individuales dispuestas segn un patrn preciso y repetitivo. La
informacin para el correcto plegamiento, agregacin y sntesis de estas protenas est
contenida en el genoma vrico, por lo que al proceso de formacin de la cpside se le
denomina autoensamblaje.
Funciones de la cpside
Transporte extracelular clula-clula
Proteccin del genoma frente:
Agentes fsicos y qumicos: Temperatura, radiacin, pH
Agentes biolgicos: Accin de nucleasas celulares, etc.
Interaccin con el hospedador (virus desnudos)
Las cpsides pueden ser de 3 tipos:
1. Helicoidales
Son las ms sencillas de todas. Estn formadas por un slo tipo de protmero que se va
enrollando, formando un tubo hueco. Las protenas se enrollan en forma de hlice. En el centro
queda un espacio para que se site el genoma del virus.
Tpica de virus vegetales y bacterifagos. Estas cpsides, en el caso de virus desnudos, son rgidas
(e. g. VMT y fag M13), mientras que en los que tienen envoltura, son flexibles y se pliegan en el interior de la envoltura.
Arquitectura de las cpsides helicoidales
Apuntes de Virologa 9
La hlice es una estructura simple que se puede definir por:
a) : Nombre de subunidades por cada vuelta (puede ser decimal)
b) : Desplazamiento de una subunidad respecto la siguiente
4 = 57
2. Icosadricas (=
Rotacin simtrica de 5:3:2. Hay 6 ejes de 5 pliegues de simetra a travs de los cuales el
icosaedro puede ser rotado pasando por sus vrtices, 10 ejes de 3 pliegues de simetra atravesando
cada cara y 15 ejes de 2 pliegues atravesando por los bordes. Hay 12 ngulos o vrtices y una
simetra de 5 pliegues alrededor de los vrtices. La cpside est hecha de repeticiones de
subunidades de la protena viral (puede haber uno o varios tipos de subunidades, dependiendo del
virus). Los capsmeros en los 12 cantones del icosaedro tienen una simetra de 5 pliegues e
interactan con 5 capsmeros vecinos, por tanto, a esta interaccin se le denomina pentmero. Los
virus ms grandes contienen ms capsmeros.
#
#
%
=
3%
.
Esto nos lleva al VALOR T (nmero de triangulacin). Una cpside isomtrica tiene:
20T lados
Apuntes de Virologa 10
12 pentmeros
60T monmeros o subunidades
60 monmeros que forman los pentmeros
60T-60 monmeros que forman los hexmeros
10T-10 hexmeros
10T+2 capsmeros
Ex: Comovirus/Picornavirus
Es T=3 60T = 180 protenas en el virin. Pero en realidad tiene 240, ya que en este caso, de las tres
protenas que lo forman (8 . + 8 3 + 8 / ) una se divide en dos protenas ms (8 . 8 - +
8 9) .
3. Complejas
Tienen varias estructuras: cabeza, cola y otras. Estas cpsides se estudiaran en cada caso de virus
concreto. Muchos de ellos son bacterianos. E. g.:
Poxvirus: Virus animales sin cpside diferenciada que presentan diversas envueltas proteicas
por encima del cido nucleico.
Muchos bacterifagos que tienen cpside polidrica y cola helicoidal.
III.
ENVOLTURA
Apuntes de Virologa 11
Esta envoltura tiene una estructura de membrana bicapa lipdica con protenas:
Lpidos: Proceden de las membranas de la clula hospedadora, ya que la envoltura se origina
de membranas celulares como membrana plasmtica, membrana nuclear o membranas de
vesculas.
Protenas: Estn codificadas por genes del virus. Durante la formacin de la envoltura
emigran a la membrana celular correspondiente donde se vaya a formar la envoltura y
sustituyen a las protenas de la clula hospedadora. Se diferencian en dos tipos:
1. Glucoprotenas. Tienen unidos azcares. Estn incluidos en la envoltura, pero la parte
glucdica sobresale hacia el exterior. A veces forman una estructura en la superficie
#
%
)
externa del virus, formando unas protuberancias (=
con valor taxonmico Posible relacin existencia de espculas y capacidad patognica.
Las glucoprotenas tienen varias funciones:
1. Sirven de unin a clulas hospedadoras. Algunos virus contienen glucoprotenas
que les permite unirse a glbulos rojos (pero no los infectan), entonces sirven
para unir diferentes glbulos rojos entre s, formando agregados (=
+ % ;
# ). Esta capacidad se usa para realizar una prueba de
deteccin de virus (ensayos de hemaglutinacin).
2. Alguna glucoprotenas tienen actividad enzimtica. Un ejemplo es una
%
), que es capaz de
glucoprotena del virus de la gripe (=
romper azcares derivados del cido neuramnico (presente en la superficie de las
clulas hospedadoras). Esta enzima le sirve al virus para:
- Salir de las clulas que infecta, porque en las clulas hospedadoras estos
azcares forman una maraa que impide salir a los virus.
- Tambin sirve al virus para penetrar en las clulas y para penetrar en las
mucosas. Existen medicamentos que inhiben la neuraminidasa.
Las glucoprotenas son los principales antgenos de los virus que tiene envoltura, ya
que estn localizadas en la superficie del virus y son las primeras estructuras que localiza
el sistema inmune. Tienen importancia clnica, existiendo algunas pruebas de deteccin
de virus que se basan en reacciones Antgeno-Anticuerpo.
2. Protenas de matriz. Estn insertadas en la bicapa lipdica pero no suelen sobresalir al
exterior, o localizadas debajo de esta formando una especie de capa (= %
<)
Protena M. Estas protenas confieren cierta estabilidad y rigidez a la envoltura (si no,
sera muy flexible).
IV.
Existen virus que en su interior, adems de la nucleocpside, contienen enzimas que estn
codificadas por el genoma vrico y suelen jugar papeles importantes en el proceso de infeccin:
Muchas de ellas son necesarias para los pasos iniciales de la infeccin. E. g., el bacterifago
T4 de Escherichia coli presenta lisozima necesaria para hacer un pequeo orificio en la pared
bacteriana para as inyectar su material gentico en el interior de la bacteria. Adems, la
lisozima se produce en mayor cantidad en las etapas posteriores de la infeccin para causar
la lisis de la clula hospedadora y poder liberar los viriones.
Muchos virus contienen sus propias polimerasas de cido nucleico para la replicacin del
genoma vrico y para la transcripcin del RNA. Es el caso de los retrovirus, un tipo de virus
Apuntes de Virologa 12
RNA que se replican a travs de intermedios de DNA.
Finalmente, algunos virus presentan enzimas que participan en su liberacin de la clula
hospedadora. E. g., algunos virus animales poseen neuraminidasas, enzimas que cortan
glicoprotenas y glicolpidos para la liberacin de los viriones.
Estas enzimas son importantes en el ciclo de multiplicacin del virus y suelen acompaar al
genoma porque normalmente intervienen en su replicacin.
En virus &'( de cadena sencilla y virus RNA de cadena doble tienen acompaando al
genoma una RNA polimerasa dependiente de RNA, que sintetiza RNA tomando RNA como
molde.
En retrovirus, a partir del RNA que forma su genoma, se forma DNA. Este proceso lo lleva a
cabo una enzima (= =>
? = = ?>@ =) dependiente de RNA.
Los Arenavirus llevan en su interior ribosomas de la clula hospedadora, pero no se sabe si
tienen funcin.
F=F = =
Los virus que presenten protenas de superficie alteradas, no reaccionarn bien con los
anticuerpos sintetizados por el hospedador en infecciones anteriores y la infeccin
podr persistir (e. g., gripe).
Los virus tienen una gran especificidad, es decir, tienen un espectro de hospedadores
bastante limitado.
Cuando un virus entra en una clula tiene efectos tanto metablicos como fsicos
#
#
# ). Estos efectos citopticos son inclusiones en el ncleo o en el
citoplasma, lisis celular, formacin de sincitios, transformacin o induccin a la apoptosis. A
parte, tambin encontramos efectos no citopticos (no afecten a la morfologa). El cell
shutdown es el mecanismo por el cual el virus hace que la maquinaria de la clula trabaje
para su beneficio.
(=
infecciones vricas. Los virus desestabilizan el ciclo celular e inducen la clula a su apotptosis
mediante:
Seales de receptores
Activacin de la interfern PKR
Activacin de p53
Sobrepresin de material gentico o de protenas desestabilizantes
El virus puede intentar evitar estas seales de muerte celular mediante la inhibicin de las
caspasas, de la p53, de los mecanismos Fas/TNF, etc.
Entrada o penetracin al interior de la clula hospedadora. Segn el tipo de virus, entrar el
virin entero o slo el genoma (=
## ).
Apuntes de Virologa 13
Cuando el virus se encuentra con el hospedador, el proceso no es dirigido. El virus llega a la
posicin donde el receptor celular se encuentra en contacto con el ligando vrico (=
#
# # ). Los receptores pueden ser carbohidratos, protenas de membrana, lpidos, etc. Se han adaptado para reconocer todos estos tipos de receptores. Hay excepciones de virus que requieren un reconocimiento de ms de un receptor celular o bien es
necesaria la accin de un co-receptor.
Una vez entra el virin, el genoma del virus suele quedar libre dentro de la clula hospeda#
;
%
G )
dora (=
a. Fusin de las membranas y liberacin.
b. El endosoma se va acidificando y llega a pH=5, cosa que estimula alguna protena del virus que la hace interactuar con el endosoma y se produce el escapamiento endosomal.
c. El pH del endosoma activa protenas de la cpside que provocan la lisis del endosoma.
Otra protena con afinidad por los poros nucleares permite la entrada del material
gentico en el ncleo.
Sntesis de componentes virales. El genoma del virus suele quedar libre dentro de la clula
hospedadora y usando la maquinaria biosinttica de la clula se sintetizan cidos nucleicos y
protenas (enzimas, estructurales, etc.). Segn los requerimientos replicativos del virus han
de existir:
- Receptores especficos para que pueda darse la adsorcin.
- Estructuras que permitan su entrada.
- Estructuras que permitan su multiplicacin en las clulas del hospedador diana.
Ensamblaje de los componentes para formar nuevas partculas vricas (= %
# ).
Liberacin de los nuevos virus de la clula hospedadora, que ya pueden infectar otras
clulas. Pueden producirse con o sin rotura de la clula, dependiendo de los virus. el
herpesvirus aprovecha el retculo endoplasmtico y el aparato de Golgi para salir del ncleo.
I.
MULTIPLICACIN VRICA
La duracin del ciclo de multiplicacin es variable. En bacterias pueden durar hasta 20-25 minutos
(los ms rpidos). En virus que afectan a animales, normalmente son ciclos ms largos, durando 5-50
horas. Para hacer una curva de crecimiento vrico son necesarias MOIs
(= %
# H
#
) altas, como mnimo de un virus por clula. Durante el ciclo de
un virus se diferencian varios perodos de tiempo:
PERODO DE ECLIPSE. En este perodo se estn sintetizando los diferentes componentes virales y
no hay partculas vricas en el interior celular. Dura desde que se inicia la infeccin hasta que
se sintetiza la primera partcula de virus.
PERODO DE ACUMULACIN INTRACELULAR. Una vez que se ha sintetizado la primera partcula,
antes de que se liberen los virus. Es el tiempo en el cual se acumulan virus dentro de la clula
hospedadora. Finaliza cuando se comienzan a liberar virus de las clulas.
PERODO DE LATENCIA. Tiempo que transcurre desde la infeccin de una clula por un virus y la
liberacin de virus al medio. Por lo tanto, puede considerarse como la suma del perodo de
eclipse y el perodo de acumulacin intracelular. Acaba cuando se empiezan a encontrar
partculas fuera de la clula.
PERODO DE AUMENTO. > BJ?B = > J C ?>. Vara por cada virus.
Apuntes de Virologa 14
Virus de hongos.
b)
Criterios de clasificacin por ICTV. En los comienzos de la Virologa, los cientficos que
estudiaban cada grupo no se ponan de acuerdo. En 1966, se cre el Comit Internacional
para la Taxonoma de Virus (ICTV). Este organismo intenta establecer una clasificacin
uniforme para todos los virus y ha creado una serie de grupos de virus. Para ello se ha
basado en unos caracteres de los virus:
a. Caractersticas morfolgicas y estructurales. Forma del virin, simetra de la cpside
(icosadrica, helicoidal, compleja), presencia o no de envoltura, tamao del virin.
b. Caractersticas del cido nucleico (o genoma). Tipo de cido nucleico (DNA o RNA),
cadena sencilla/doble (ss/ds), lineal/circular. Los de RNA de cadena sencilla, polaridad
+ , dependiendo si es complementario o no al mRNA viral. N de fragmentos.
Secuencia y modificaciones en extremos 5 o 3.
Distribucin del genoma:
Virus con genoma partido: Material gentico distribuido en dobles/triples partculas vricas. Por tal de ser infectivo, el virus tendr que introducir como mnimo
una partcula de cada una en las que est partido su genoma.
Apuntes de Virologa 15
c)
Clasificacin de Baltimore.
Baltimore El mRNA por consenso posee un sentido + (se
se puede traducir).
traducir Si
es + puede ser directamente traducido por ribosomas. Si el virus es &'( + su propio genoma podra ser un mensajero, pero hay &'( (=
%
G
) no se puede tradu),
cir, tiene que ser copiado a AKL + para traducirse en los ribosomas.
Baltimore (1971) estableci una clasificacin de los virus por categoras
categoras basada en la estrateestrat
gia de replicacin y obtencin del mRNA:
i.
Grupo I. dsDNA mRNA aa (sntesis) // dsDNA dsDNA (replicacin) e.g. Adenoviridae, Herpesviridae [HSV1
HSV1 (oral herpes), HSV2 (genital herpes), VZV (chickenpox), EBV
(Epstein-Barr
Barr virus), CMV (Cytomegalovirus)],, Poxviridae (smallpox virus, vaccinia virus)
+ bacterifagos con cola
ii.
iii.
Grupo III. dsRNA mRNA aa // dsRNA (+)ssRNA dsRNA e.g. Reoviridae (reovirus, rotavirus)
iv.
v.
vi.
vii.
Grupo VII. Genoma DNA pero clasificados como RETROVIRUS (uso de retrotranscriptasa)
e.g. Hepadnaviridae (hepatitis B)
Apuntes de Virologa 16
Estos caracteres diferencian a los virus en grupos: Orden, Familia, Subfamilia, Gnero y
Especie. El grado de Orden est en desarrollo. Hasta 1995 slo haba uno. Se estn desarrollando
segn el c. nucleico.
Para nombrar estos grupos, en virus, de Orden, Familia, Subfamilia y Gnero, deben
escribirse en cursiva o subrayados,
subrayados, y con la primera letra mayscula. La Especie no se escribe ni en
e
cursiva ni subrayado.
Cada grupo tiene una determinada terminacin (sufijo):
Finalmente cabe mencionar la clasificacin del ICTV (International
(International Committee on Taxonomy
of Viruses)) que es muy similar a la clasificacin de los seres vivos:
Apuntes de Virologa 17
Orden: -virales
Familia: -viridae (Herpesviridae). virus polidricos
Subfamilia: -virinae (Alphaherpesvirinae).
Gnero: -virus (Simplexvirus).
Especie: no tienen una forma determinada. Normalmente se suelen denominar en
animales y plantas por el nombre de la enfermedad que producen (p. ej. virus herpes
humano tipo 2), y los que infectan a bacterias con nombres alfanumricos (X174, T ).
4
NOTA: A veces se puede referir a los grupos, de manera informal, sin subrayar y sin poner en
cursiva. Es muy frecuente referirse a las familias terminando en -virus (p.ej. herpesvirus, poxvirus). La
desventaja es que puede llevar a equvocos por no poder diferenciar entre familia y gnero.
- Creixement en gra
No hi ha un creixement rectilini, sin que creixen en esgla:
- Fase declipsi: Perode comprs entre el final de la denudaci i maduraci. No es poden detectar
virions infectius ni dins ni fora de les cllules
- Perode de latncia: inclou el declipsi i es caracteritza per la no producci de nous virions extracellulars. Sinicia la replicaci del genoma. Durada de minuts a hores.
- Fase de Maduraci: Acumulaci de material vric en la cllules o als voltants daquesta. Les cllules
infectades amb virus ltics moren i cessa la producci de partcules i disminueix lentament el seu
ttol.
- Les cllules infectades amb virus no ltics poden produir virus indefinidament.
- Durada del cicle: 1 h - 40 h.
- Mida de la explosi: Quantitat de virus produts.
No se puede mostrar la imagen. Puede que su equipo no tenga suficiente memoria para abrir la imagen o que sta est daada. Reinicie el equipo y , a continuacin, abra el archiv o de nuev o. Si sigue apareciendo la x roja, puede que tenga que borrar la imagen e insertarla de nuev o.
Virus no liti
Apuntes de Virologa 18
creixent)
No se puede mostrar la imagen. Puede que su equipo no tenga suficiente memoria para abrir la imagen o que sta est daada. Reinicie el equipo y , a continuacin, abra el archiv o de nuev o. Si sigue apareciendo la x roja, puede que tenga que borrar la imagen e insertarla de nuev o.
Apuntes de Virologa 19
- Variabilitat genetica i fenotipica
- Processos selectius / Pressio selectiva
- Seleccio dindividus variants existents que generen descendents, tot i tenir pressio
selectiva
Els virus poden anar escapant a aquestes pressions selectives (anticossos, per exemple) i donar lloc a
canvis dhoste, mutacions, etc.
Hi ha diversos mecanismes de generacio de variabilitat: mutacio, recombinacio, reorganitzacions.
En RNAvirus i retrovirus per exemple es molt mes rapida donat lelevat index derror de la replicasa i
la RT.
Colls dampolla i seqncies consens:
Si tenim un entorn que no varia, hi haura una sequencia genomica optima per a un virus que promogui la seva multiplicacio (seqncia mster).
La sequencia master te una fitness = 100% (capacitat de generar descendencia viable). Es la que te
major representacio a la poblacio virica i la que genera mes descendencia.
Qualsevol mutacio produida a la sequencia master fara baixar la fitness.
- Mutacio letal
- Mutacio neutral
Si lentorn canvia (aparicio danticossos) els virus quedaran neutralitzats tots excepte aquells que
degut a una mutacio siguin resistents a lAc. Aquest(s) virus sera(n) els unics que infectaran la
cellula i donaran lloc a una descendencia amb una fitness = 0,8 o 1.
Es fan estudis computacionals de quasispecie per poder estudiar les sequencies predominants i les
semblants entre si, aixi com les mutacions que es van generant per sobreviure a les pressions selectives (de manera que es produeix un desplacament en lespai de la sequencia).
Quan mes gran sigui la distancia genetica entre la sequencia master inicial i la nova per a poder sobreviure al nou entorn, menys possibilitats hi ha de que el virus generi mutacions per a produir un
desplacament en lespai de la sequencia.
Si un individu infectat fa un tractament amb 3 farmacs diferents a la vegada, la carrega vrica baixara
i tardara molt en tornar a augmentar: necessitara de moltes mes mutacions per als 3 farmacs que no
pas amb un de unic (tot i que al final pot esdevenir resistent a tots 3). Aixo es terapia retrovirica (ex.
VIH).
Se sap que apareixen noves especies viriques quan un virus capac dinfectar un hoste esdeve capac
dinfectar un altre hoste diferent (virus derivats). Per exemple, el VIH huma prove del VIsimi (abans
de sorgir el VIH lespai de sequencia del VIH ja existia, tot i que el virus encara no).
Que aparegui una nova especie depen de:
a. Un precursor viric tingui una distancia genetica molt gran.
Apuntes de Virologa 20
b. Frequencia en la qual hi hagi contacte entre el virus inicial i el nou virus (ex: si un virus vegetal no
infecta humans, es perque necessitariem un numero molt elevat de mutacions)
Pressi selectiva, mutaci, fixaci:
Sense mutacio o variacio el genoma viric es mante.
Si un retrovirus muta, al fer la sequencia consens de la poblacio del virus sera la mateixa. En canvi si
hi apliquem un efecte selectiu (coll dampolla) fara que el canvi afecti fins i tot a la sequencia consens de lespecie.
Al llarg del temps es fixen les mutacions. La velocitat devolucio es molt constant per cada virus.
Daquesta manera es poden crear arbres evolutius de cada especie i veure salts evolutius.
>BD = ? >
>>D C ?F F C > B=
@ C ? = F @ CD ? =
B
Respecto al origen de los virus, existen varias teoras que intentan explicarlo:
1.
Son los seres ms primitivos, debido a su estructura sencilla. Pero los tienen que haber
surgido despus de las clulas (o simultneamente), ya que las necesitan para desarrollarse.
2.
Los virus se originaron a partir de los organismos celulares. Existen dos tendencias
principales dentro de esta teora:
Apuntes de Virologa 21
Orthomyxoviridae (Grip)
Flaviviridae (Dengue)
Bunyaviridae
Arenaviridae (contacte rosegadors/humans per mitj de maquinria agrcola)
Filoviridae (primats)
Retroviridae
Parvoviridae (salt de gat a gos)
Evoluci de lbola i el Marbug
Sn els principals causants de febres hemorrgiques, i el contagi entre humans es difcil.
T una mortalitat elevada, tot i que dek 1967 al 1992 hi ha hagut pocs casos.
T poca capacitat de fer mal a la cllula, el que causa la mort es la resposta immune excesiva de
lindividu: el virus afecta a les cllules de lendoteli que son atacades pel sistema immune desprotegint els vasos sanguinis causant hemorrgies, cosa que provoca hipovolmia (menys rec sanguini)
que conduir finalment a una acidosis i anxia als teixits, augmentant-ne la seva permeabilitat.
Virus de la grip aviar
Va fer un salt de aus a humans. Tot i aix, la transmissi entre humans s molt rara i es dona molt
ocasionalment.
West Nile Virus
Les aus rapaces i crvids la van portar a les costes dEEUU lany 1999. En 4 anys ja shavia estes per
tot els EEUU. Tot i aix lhum no era lhoste; la proporci dinfectats havia augmentat degut a les
espcies transmissores del virus.
2.
Cultivo de virus.
Apuntes de Virologa 22
3.
4.
Mtodos fisicoqumicos:
Ensayos de hemaglutinacin.
b)
Estudios de infectividad.
c)
d)
Las muestras recogidas para el anlisis de virus debern transportarse lo antes posible al
laboratorio, conservarse a 4C un mximo de 24 horas y realizar el tratamiento de la muestra lo antes
posible.
1.
CULTIVOS DE VIRUS
La replicacin de virus requiere clulas vivas. Los mtodos tradicionales de deteccin de virus se han
basado en ensayos de infectividad en lneas celulares. Los virus que infectan clulas procariotas son
los ms sencillos de cultivar y se utilizan medios lquidos o semi-slidos de agar.
Hay lneas se clulas que crecen en cultivo lquido, pero la mayora requieren superficies a les que
adherirse. Recipientes de cultivo:
-Rouxde diferentes superficies (T25, T75, T175)
-Placas o microplacas
-MicrotitersEl plstico esta tratado para permitir la adhesin de las clulas.
Hay lneas se clulas que se cultivan a gran escala en cultivo lquido o en superficies:
Requerimientos de las lneas celulares:
Sales inorgnicas
Aminocidos esenciales
Vitaminas
Glucosa
Agua
Suero: SFB, SFC Medio con 5-20% de suero= de crecimiento; Medio con 1-5% de suero= de
mantenimento
Tambin se aade un indicador de pH para controlar la acidificacin o basidificacin del medio y un
tampn. Para mantener el pH (la prdida del CO2 acidifica el medio) hay que incubar en incubadores
de CO2 o recipientes cerrados.
Apuntes de Virologa 23
Una idea esencial de cultivos de clulas: se realiza sobre soportes, que en la mayora de los casos son
placas de Petri donde las clulas de adhieren al soporte, y las mantenemos en un medio e cultivo
adecuado, la placa es Petri, el medio de cultivo que generalmente es Dulbecco, y la placa de cultivo
estn realizadas con plsticos especiales que permiten la adherencia celular. Las clulas para crecer
deben de tener un soporte donde adherirse (Excepto las sanguneas) para sobrevivir. Sobre las placas podemos observar que cuando entran en mitosisis se redondean, se dividen y vuelven a adherir
al soporte, salen en suspensin durante un tiempo para volver al fondo del mismo.
El medio de Dulbecco consiste en aminocidos esenciales, fuentes de energa como la glucosa, sales
para el equilibrio osmtico y adems sales que funcionan como cofactores, y un tampn.
Inicalmente este medio fue dise por Eagle pero lo modific Dulbecco , se denomina actualmente
DMEM.
En el ATCC podemos comprar lneas celulares se suele utilizar 3T3, de fibroblastos de ratn, (3 semanas para establecer la lnea celular) muy susceptibles a infecciones de virus.
Humanas: HeLa : Helen Lane, carcinoma humano
PK= pig kindey.
El origen de las clulas pueden modificar los resultados, entonces es conveniente poner en el paper
el origen y que tipo celular se ha utilizado.
Los virus se han de cultivar sobre clulas adecuadas. Depende del virus del que tratemos (si son
de plantas, bacterias, animales,...). Los ms fciles de cultivar son los virus de bacterias. Se cultivan
sobre cultivos de bacterias en medio lquido o slido.
Los virus animales, se pueden cultivar de diferentes formas:
Apuntes de Virologa 24
nutricionalment adient.
3. Les cllules tendeixen a crixer adherides a una superfcie slida fins formar
una monocapa.
4. Efecte citoptic: els virus infecten les cllules, es multipliquen i formen
calbes en la monocapa.
Pueden ser de 3 tipos fundamentalmente:
a) CULTIVOS PRIMARIOS.
Es aquel que se obtiene directamente a partir de un tejido animal. Para obtener un
cultivo de este tipo, se parte de un tejido aislado, que se deposita en recipientes
adecuados, que pueden ser placas petri, botellas tumbadas, erlenmeyer, etc. Luego se
aade un medio de cultivo adecuado, normalmente lquido. Estos medios de cultivo son
muy ricos, conteniendo vitaminas, aminocidos, sales, suero, p. ej. uno muy usado es el
medio EAGLE.
Las clulas comienzan a dividirse en el fondo del recipiente, cubriendo este fondo,
formando normalmente una monocapa de clulas. Los cultivos primarios se mantienen
cambiando el medio de cultivo 2 3 veces por semana, pero al cabo de varias semanas,
los cultivos terminan muriendo.
En ocasiones, tomando unas pocas clulas de un cultivo primario, y depositndolas en
otro recipiente, comienzan a dividirse y se obtienen lo que se denomina una cepa celular.
b) CEPA CELULAR.
Estas cepas celulares sirven para producir ms cultivos. Se pueden subcultivar (cultivar
varias veces). Entonces, una cepa celular es un cultivo de clulas animales obtenido a
partir de un cultivo primario y cuyas clulas pueden ser subcultivadas varias veces. Las
cepas celulares con el tiempo degeneran, no pudiendo volver a subcultivarse.
Se pueden obtener cultivos primarios y cepas celulares a partir de diferentes tejidos.
Para virus humanos, se suelen usar tejidos de hombre, pero tambin de monos
(africanos) y tambin de embriones (de monos y humanos).
Pero hay clulas de cepas celulares que sufren una alteracin y comienzan a
desarrollarse de forma indefinida, formando entonces una lnea celular.
c) LNEAS CELULAR.
Es un cultivo de clulas inmortales, en el sentido de que se pueden subcultivar
indefinidamente. Las lneas celulares se pueden obtener a partir de cepas celulares, pero
tambin, muy frecuentemente, a partir de clular tumorales, p. ej. dos lneas muy usadas
son:
Clulas HeLa. Iniciales procedentes de una mujer que tuvo cncer de cuello de
tero.
Apuntes de Virologa 25
mantenir indefinidament (immortals).
- Exemple de lnia contnua: cllules HeLa, allades duna dona que va morir de cncer de
mama lany 1951.
Una vez que se ha establecido a), b) o c), se inoculan sobre este cultivo celular los virus,
siendo, entonces, diferentes que el cultivo de virus de bacterias.. En virus animales, primero se
realiza el cultivo celular y luego se inoculan los virus. En ocasiones los virus animales se pueden
cultivar en cultivos de rganos, en medio lquido.
Los virus de planteas se pueden cultivar sobre plantas enteras, cultivos de tejidos de plantas,
cultivos de clulas aisladas y cultivos de protoplastos.
ELS CULTIUS
Procs:
1. LISAT VRIC: la majoria de particules viriques creixen adherides a linies cellulars. Busquem
doncs una maxima relacio de superficie en el minim volum possible. Per virus animals susen
tecniques com el Roller (ampolles de vidre plenes de medi de cultiu i de cellules en cultiu
que son adherides per sedimentacio a les parets de lampolla, la qual va girant); o per a major escala, els Bioreactors (per a cellules que creixen en suspensio, o be en el medi trobem
petites particules de latex en suspensio que permeten ladhesio del cultiu cellular en una
mena de suspensio).
2. PURIFICACI DELS VIRIONS: es du a terme per centrifugacio a alta velocitat. Les particules
viriques queden contingudes al sobrenedant, el pelet son restes cellulars. Per assegurar la
purificacio del sobrenedant, es pot fer una centrifugaci en gradient de densitat (de sacarosa, clorur de cesi), ja que la majoria de virions tenen una densitat homogenia.
3. QUANTIFICACI:
a.
b.
Quantificar partcules vriques infectives. Hi ha molts virus que cometen errors durant el proces dinfeccio i aixo fa que no puguin infectar lhoste (particules no infecti-
Apuntes de Virologa 26
ves). Per exemple, en el virus del mosaic del tabac, de cada 106 particules, una es infectiva; mentre que en el cas del Fag T4, la ratio es de 1. Es calcula mitjancant la PFU
(unitats formadores de calbes) mitjancant cultius confluents de virus i les seves
cellules hoste.
c.
Titolats:
i. Titolat de fags les cellules no creixen en monocapa.
ii. Titolat de cllules animals aquestes si creixen en monocapa. El problema que
tenim es que els virus poden flotar pel liquid i anar infectant tota la superficie del
cultiu. Per solucionar-ho es posa al medi de cultiu un determinat volum de particules viriques, es deixa un temps per a que infecti les cellules hoste i es substitueix
rapidament aquest primer medi per agar tou (fos) per evitar la posterior dispersio.
d.
2.
Excepcio: hi ha virus que no formen calbes, si no que transformen les cellules hoste (les immortalitza). En aquest cas es pot fer un recompte de colonies, ja que les
cellules transformants poden creixer en monocapa i formen colonies.
a) MTODOS FISICOQUMICOS.
Se basan en detectar a los virus al microscopio electrnico, como cuerpos fsicos que son, o
bien, se basan en una propiedad qumica que tienen algunos de estos virus, que es la capacidad de
aglutinar glbulos rojos (ensayos de hemaglutinacin).
a.1.
Tcnica del sombreado (para ME). Los virus son permeables la chorro
electrnico, por tanto, no se forma ninguna imagen. Se deben utilizar metales
pesados que son opacos a los electrones. Consiste en depositar a los virus
sobre una rejilla y hacer incidir sobre la misma un metal, normalmente platino,
con un cierto ngulo, respecto a la rejilla. El platino, cubre a los virus, pero
queda en un lado una sombra de color claro (el platino queda oscuro).
Entonces al observar la rejilla, se vern los virus oscuros y la sombra clara.
Entonces se observa una imagen de aspecto tridimensional. Las zonas de las
sombras son permeables a los electrones.
Apuntes de Virologa 27
muestra, pero tambin se pueden contar,
contar, por un procedimientos especial.
El mtodo que se utiliza para la cuantificacin de virus consiste en mezclar la
solucin de virus que se quiere cuantificar, con unas bolas de ltex. La mezcla se
somete a tincin negativa o sombreado, y se cuentan en el microscopio las partculas
vricas y las bolas que se observan en un campo de visin, se anota y para conocer la
concentracin de virus en la disolucin original, se aplica una frmula:
[bolas ] = 10 5 bolas
a.2.
ml [virus ] =
300 partculas
10 5 = 10 10 5 virus ml
30bolas
Apuntes de Virologa 28
como la inversa de la dilucin lmite. El ttulo de nuestro ejemplo sera 128. A mayor
ttulo indica que tenamos ms virus en la solucin original porque hemos tenido que
diluir ms hasta que no existe hemaglutinacin. Un ttulo de 256, tendra ms virus
que en la mezcla de nuestro ejemplo.
1 UHA (1 unidad de hemaglutinacin: depende del ensayo, depende de tamao usado de tubo y cantidad de sangre usada, es la cantidad mnima de virus para producir
la hemaglutinacin.
Los mtodos fisicoqumicos de cuantificacin tienen una serie de inconvenientes:
Mediante microscopa electrnica, se cuentan tanto virus con capacidad de infectar clulas
como virus que tengan algn defecto, y no puedan infectar clulas o incluso cpsides
vacas.
b) ESTUDIOS DE INFECTIVIDAD.
Hay otros mtodos que se pueden aplicar como los estudios de infectividad. Infectividad:
Infectividad capacidad
de formar placas de lisis, capacidad de producir una lesin o muerte celular en una monocapa de
clulas. Si cultivamos clulas en una placa de Petri, el virus encuentra a una clula susceptible, la
infecta, se multiplica y se expande a las clulas vecinas por difusin, dejando un halo de lisis. Un
hueco sin clulass destaca sobre un fondo de clulas no destruidas (=placa de lisis). Hay que tener
en cuenta que cada placa de lisis se origina por una partcula infectiva (=unidad formadora de placa
o UFP). No todos los virus son capaces de producir placas de lisis.
os estudios de infectividad nos permiten cuantificar las partculas de virus que son capaces
cap
de
Estos
causar una infeccin. Estos mtodos son varios:
b.1. Mtodo de formacin de placas.
Apuntes de Virologa 29
bacterias y los virus quedan extendidos, por tanto, en toda la superficie y las
bacterias comienzan a multiplicarse, formando un csped por la placa. Pero a su vez,
cada virus infecta a la bacteria que tenga ms prxima, se multiplica en ella, salen
nuevos virus que infectan a las bacterias vecinas y as, en la zona donde haba un
virus, se forman unas reas de bacterias muertas (por los virus) que se denomina
calva o placa de lisis, y por lo tanto, el recuento del nmero de calvas o placas de
lisis, nos da idea del nmero de virus infecciosos que tenamos en la muestra
original, aunque no es un mtodo del todo exacto.
Los resultados de este ensayo se expresan como unidades formadoras de calas o
placas de lisis (ufp). Es conveniente contar las placas de cultivo que contienen entre
30 y 300 calvas, pero a veces, como no sabemos cuntas calvas nos van a salir, lo que
conviene es realizar una serie de diluciones de la muestra original que contena a los
virus: 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, ... y de cada dilucin se toma un inculo. P. ej. de 0,1 mL
y se realiza lo que acabamos de ver; luego se cuentan las calvas de las placas y se
aplica la frmula:
ufp = n placas
1
1
inoculo dilucin
b.1.2. PARA VIRUS ANIMALES ENSAYO DE CALVAS. En este caso se parte de muestras o
diluciones de virus y de placas petri que contienen cultivos de clulas animales; se
elimina el medio lquido, a continuacin se aaden los virus (un inculo de la
solucin de virus sobre la placa) (0,1 mL, 0,2 mL) se deja un tiempo para que los virus
se unan a las clulas y despus de esperar a que esto suceda, y se aade un medio
solidificado (capa fina) de agar o gelatina, se incuba un tiempo, dependiendo del
virus puede ser de das o semanas, y se observa la aparicin de calvas (porque los
virus infectan a las clulas animales, a la ms prxima, los virus se multiplican, salen
de las clulas, infectan a las vecinas y se forman esas placas). Algunas de stas placas
no se pueden diferenciar directamente. Entonces, para observarlas, hay que aadir
una serie de colorantes de cultivo. Se pueden realizar 2 tipos de tincin en clulas
animales:
Colorante rojo neutro. Tien clulas vivas, aparecer teido el resto, no las
placas de lisis o calvas.
Colorantes que tien clulas muertas como el Azul Tripn, en este caso, las
placas aparecern de color azul.
Hay casos en que los virus no matan a las clulas y se pueden detectar de otras
formas. Ej.: virus cancergenos que transforman a las clulas y hacen que proliferan
de forma anormal y en ste caso lo que se hace es que observan en la placa de
cultivo unos cmulos o grumos de clulas que se pueden contar (virus tumorgenos).
Apuntes de Virologa 30
El ensayo de calvas tambin permite el aislamiento de cepas virales
virale puras, ya que, si
cada calva es producida por un nico virin, todos los virus de la calva deberan ser
genticamente idnticos.
b.2. Mtodo de produccin de lesiones en hojas de plantas.
Para cuantificar virus que infectan a plantas. Una muestra con virus
virus se extiende sobre
la superficie de hojas de plantas y se espera un tiempo hasta que aparecen lesiones
en las hojas de las plantas y se realiza un recuento de las lesiones, que aparecen. Es
un mtodo muy sencillo.
Tcnica del punto final. Se utiliza para el recuento de virus que no causan efectos
reconocibles en cultivos celulares pero s causan la muerte del animal hospedador
cuando se le inocula. Para ello se llevan a cabo diluciones sucesivas en un nmero fijo
de animales susceptibles y se haya la relacin entre animales muertos y
supervivientes, calculndose la dosis letal 50 (DL50)
A partir de una muestra se realizan disoluciones decimales 10-1, 10-2, 10-3, ... A partir
de cada dilucin, se toman alcuotas con
con las que se infecta a organismos prueba, que
pueden ser plantas, animales, huevos de gallina (se requieren muchos organismos
prueba). Se espera un tiempo y se cuentan los organismos que han resultado
infectados o muertos por el virus para cada dilucin y se calcula el %. Ej.: para 0,10,1
100%, para 0,2-90%,
90%, etc. Con estos datos se realiza una curva (fotocopia) y en esta
curva, en el eje de abcisas (x) se pone la dilucin 10-5, 10-6, 10-7
, etc, y en el eje de
ordenadas (y) se pone el % de individuos, o bien infectados,
infectados, o bien muertos, por
cada dilucin de virus. Si la solucin est poco diluida todos o la mayora de los
organismos prueba estarn infectadas; y en diluciones muy altas, poco o ninguno de
los organismos prueba estarn infectados.
Se calcula la dilucin
dilucin (una vez hecha la grfica), que produce que el 50% de los
organismos prueba estn infectados y esa es la DI50. Si hemos tenido como criterio la
muerte de los organismos prueba, se determina la dilucin que produce la muerte
del 50% de los organismos prueba y entonces tenemos la DL50 (en el ej. 10-6).
La observacin del ECP permite la cuantificacin de algunos virus
MtodoTCID50 Dosis infecciosa 50.
Mxima dilucin de la muestra que
provoca ECP en el 50% de los frascos
inoculados
MtodoMPN nmero ms probable.
Inoculacin de diferentes monocapas
con diluciones seriadas de la muestra y
uso de tablas estadsticas para
determinar
ar el nmero de virus presentes
en funcin del nmero de monocapas
con ECP en cada dilucin
Apuntes de Virologa 31
c.1.
Apuntes de Virologa 32
proceso anterior.
En el caso del SIDA, ya se venden unas membranas de nitrocelulosa con protenas del
virus ya separadas donde se realiza la prueba. Ver fotocopias.
La tcnica ELISA rene las caractersticas de sensibilidad, fiabilidad, poca complejidad y bajos costes. Dependiendo del curso de la enfermedad usamos un mtodo u
otro. Al principio por ejemplo una infeccin aguda, que prospere en el hospedador,
aumenta su cantidad de forma exponencial, para despus caer cuando se produce la
respuesta inmune puede ser comitante con la subida de anticuerpos. La zona primaria cuando no ay an anticuerpos, se suele utilizar la PCR, en etapas tardas puede
haber sido eliminado (PCR-) , las tcnicas de elisa pueden ser mucho ms revelantes
c.2.
c.3.
Inhibicin de hemaglutinacin.
Se basa en que si hacemos reaccionar virus con Ac y se produce una unin de los
virus con los Ac y se produce una unin de los virus con los Ac. Si aadimos a
continuacin glbulos rojos, se produce una disminucin de la capacidad de los virus
de aglutinar glbulos rojos. Si no existe unin, disminuye la capacidad de producir
hemaglutinacin.
Estos ensayos se realizan slo para virus que son capaces de llevar a cabo la
hemaglutinacin. Slo se usan para determinar la presencia de Ac frente a un virus
en el suero de un paciente (no se usa la otra posibilidad).
Hemaglutinaci:
Apuntes de Virologa 33
Hi ha virus capaos
capaos de reconeixer receptors de membrana dels eritrocits,
eritrocits mitjanant
una protena vrica anomenada hemaglutinina. Aix forma agregats deritrcits i viv
rus, provocant aglutinacio.
Una aplicacio daquestes proteines son els tests de deteccio,
deteccio, com per exemple, en
plaques dELISA. Es colloquen
col
suspensions deritrocits als pous, i despres shi afeaf
geixen les dilucions de la mostra a analitzar en diferents concentracions. Si no hi ha
virus a la mostra,
ra, baixaran tots els eritrcits al fons del pouet, i veurem un punt verve
mell al mig del pou. Si a la mostra hi ha virus (amb aquestes proteines), formara
aglutinacio i observarem una dispersio colloidal
col loidal o xarxa de fils vermells. Daquesta
manera, a banda de verificar la presencia o absencia de virus,
virus, podem estimar la concentracio del virus.
Actualment aquestes deteccions es fan amb boles de latex (de diferents colors fins i
tot) que ja incorporen els receptors per la hemaglutinina en comptes deritrocits.
Mediante estos mtodos se intenta detectar secuencias de genoma de virus en una muestra. stos
mtodos
todos se suelen usar como confirmacin de los mtodos inmunolgicos. Tambin se usan en
Apuntes de Virologa 34
casos especiales como, p. ej., estudios del cncer para investigar la presencia de genoma de virus en
clulas tumorgenas (p. ej. Verrugas, hepatitis).
Tambin se usan para detectar virus en recin nacidos. En el caso del VIH, es difcil aislar los virus y
los Ac, pueden proceder de la madre, entonces se detecta el cido nucleico.
Las pruebas de deteccin de cidos nucleicos se basan en tcnicas de hibridacin de c. nucleicos.
Estas tcnicas se fundamentan en el hecho de que cadenas sencillas de c. nucleico, que sean
complementarias entre s, tienden a formar un hbrido si se ponen juntas. Esta hibridacin puede ser
entre hebras: DNA-DNA, RNA-DNA, DNA-RNA.
Con estas pruebas se intenta detectar en la muestra la presencia del genoma de un determinado
virus (una secuencia), usando unas secuencias de c. nucleicos conocidos por nosotros, y que sean
complementarias con secuencias del genoma del virus.
Para realizar esta prueba, en primer lugar hay que generar molculas de c. nucleico de cadena
sencilla en la muestra, si el genoma que estamos buscando en de cadena doble, es decir, hay que
intentar separar las cadenas (si es doble) del virus por un tratamiento especial.
Una vez que tenemos las cadenas sencillas, se adiciona la secuencia conocida por nosotros
(secuencia sonda), que hibridar con la secuencia del virus, si sta est presente en la muestra. Para
detectar que se ha producido esta hibridacin, la secuencia sonda tiene que ir marcada de alguna
forma: con un compuesto radioactivo, fluorescente o una enzima (que es lo ms frecuente).
A continuacin, se valora si se ha producido la unin, con un contador de centelleo (radiactividad), o
con un contador de fluorescencia o bien aadiendo el sustrato de la enzima y viendo si ha aparecido
el producto. Con estas reacciones se puede intentar buscar en la muestra genomas de virus tanto de
RNA o DNA, siendo la sonda RNA o DNA. La sensibilidad de estos mtodo aumentan notablemente si
el genoma que estamos buscando es ampliado previamente por la aplicacin de la PCR (reaccin en
cadena de la polimerasa).
Diagnstic:
Moltes infeccions es diagnostiquen actualment per la presencia dIg-anti-virus. es pot realizar per
diferents tecniques:
1. IMMUNOASSAJOS: com per exemple ELISA, Western Blot
2. TCNIQUES DE DETECCI IN SITU: amb mostres directes de teixit (biopsia, saliva) processades i
per Microscopia Electronica. Es pot fer mitjancant sonda directa al teixit (ex: EBER(Epstein Barr)/MG
en teixit limftic infectat, amb sonda dirigida al genoma del virus), o mitjanant anticossos marcats
dirigits contra una protena vrica especifica.
3. PCR: per obtenir la carrega virica (si la PCR es quantitativa). Per exemple si volem saber si un farmac pel VIH t efectes sobre la multiplicaci vrica, anem realitzant cicles de PCR quantitativa al llarg
de X temps per obtenir el nombre de genomes vrics totals que contenia la mostra presa.
Tcnicas de tipificacin:
La secuenciacin y el anlisis filogentico es la tcnica de tipificacin ms utilizada actualmente en
virus. Un ejemplo de protocolo es:
-Amplicones obtenidos por nested-PCR se purifican usando el QIAquick purification kit(QIAGEN,
Inc.). Las reacciones de secuenciacin sepreparan con las dos orientaciones usando el ABI PRISM Big
Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction kit con Ampli Taq DNA polymerase FS (Applied
Biosystems)
Apuntes de Virologa 35
-La
La secuenciacin se hace en ABI PRISM 377 analyzer (Applied Biosystems) en los Serveis CientficoCientfico
Tcnics y las secuencias se comparan con el banco de datos GenBank usando el programa BLAST del
NCBI (National Center for Biotechnology Information).
-Las
Las secuencias se alinean usando el programa ClustalX 1.8 y el anlisis filogentico se hace por el
programa neighbour-joining
joining de PHYLIP software package comparando con secuencias
representativas caracterizadas previamente.
2.
A.
Ciclo ltico
B.
Ciclo lisognico.
A los virus bacterianos se les suele llamar bacterifagos o fagos. Parasitan tanto a bacterias y
arqueas. La mayora de los virus bacterianos tiene DNA como genoma. Este DNA normalmente es de
cadena doble (aunque tambin hay de cadena sencilla). Slo existe
existe unos pocos virus con RNA que
pueden ser tanto de cadena sencilla como doble.
Apuntes de Virologa 36
Fago MS2 de E.coli
El bacterifago de este
ste tipo que mejor se conoce es el fago
MS2 que infecta a Escherichia coli.
coli Su genoma codifica slo
cuatro protenas: la protena de maduracin (presente en
copia nica en la partcula vrica madura, es necesaria para
la produccin de los viriones), la protena
pro
de la cpsida, la
protena de lisis (necesaria para liberar los nuevos viriones)
y una subunidad de la replicasa de RNA (la enzima que
replica el RNA vrico); esta replicasa est compuesta por un
polipptido codificado por el virus y otro polipptido de la
clula hospedadora.
Dado que el genoma del fago MS2 es de RNA de
configuracin positiva (+), puede ser traducido directamente
una vez se introduce en la clula hospedadora. Despus de
que se sintetice la replicasa de RNA, se utiliza el propio
cido nucleico del virus de configuracin positiva (+) como
molde (ya que tiene la misma configuracin que el mRNA,
como hemos dicho) y se produce una molcula de RNA
complementaria de configuracin negativa (-).
( Este, a su vez,
se usa como molde para la produccin
producc
de nuevas molculas
de RNA de configuracin positiva (+). Finalmente, estas son
traducidas para sintetizar las protenas vricas.
El proceso de traduccin se inicia en la secuencia de bases
AUG, que es la zona ms accesible por el ribosoma de la
molcula
la de RNA molde (debido a su complicada estructura
secundaria). Cerca de esta secuencia de iniciacin se
encuentra la secuencia que codifica la protena de la
cpsida, por lo que esta es sintetizada en las etapas tempranas del proceso de infeccin.
La replicasa
icasa de RNA tambin se traduce temprano, pero conforme el nmero de molculas de la
protena de la cpsida aumenta, stas se unen al RNA que rodea a la secuencia AUG determinando
as el fin de su sntesis.
El gen que codifica la protena de maduracin se localiza en el extremo 5, pero la estructura
secundaria del RNA limita el acceso al mismo por el ribosoma. En consecuencia, tan slo se producen
unas pocas protenas de maduracin.
En cuanto a la protena de lisis, est condificada por un gen que se solapa
solapa con los genes que codifican
la protena de la cpsida y la replicasa (solapamiento gnico). El codn de iniciacin del gen de lisis
no resulta de fcil acceso para el ribosoma debido a la estructura secundaria del RNA; no obstante,
cuando el ribosoma est terminando la traduccin del gen que determina la protena de la cpsida,
dicha estructura secundaria se ve alterada permitiendo a veces que el ribosoma comience a traducir
el gen de la protena de lisis. Esta restriccin del proceso impide que se pueda producir la lisis
prematura de la clula hospedadora. As, slo cuando se han sintetizado suficientes copias de la
protena de la cpsida como para permitir el ensamblaje de los viriones comienza la lisis celular.
El ltimo estadio del proceso incluye el autoensamblaje
autoensamblaje de los viriones y su liberacin por lisis.
Apuntes de Virologa 37
eucariticas.
No obstante, s que se conocen virus RNA bicatenarios, como el 6c que infecta a Pseudomonas
syringae; se trata de un virus con envoltura que parece estar estrechamente relacionado con los
reovirus que infectan a clulas eucariticas.
Apuntes de Virologa 38
Fago M13 de E.Coli
El fago M13 que afecta a Escherichia coli es el mejor ejemplo de un bacterifago filamentoso. Estos
fagos se caracterizan porque son capaces de salir de la clula hospedadora sin provocar su lisis. La
infeccin vrica provocar una disminucin del crecimiento de dicha clula pero, por todo lo dems,
es perfectamente capaz de coexistir con el virus.
La replicacin de los fagos filamentosos es muy similar a la ya mencionada para el fago X174. La
liberacin de los viriones sin lisis obedece a un proceso denominado gemacin. En este mecanismo,
el extremo del virin contiene varias copias de la protena A y es liberado primero, seguido por el
resto del virin.
Con el fago M13 no se produce una acumulacin interna de viriones como en otros bacterifagos,
sino que stos se ensamblan en la cara interna de la membrana plasmtica de manera que dicho
ensamblaje est acoplado a su liberacin por gemacin.
Los bacterifagos DNA bicatenarios estn entre los ms estudiados de todos los virus.
Consideraremos slo dos grupos: los T-Pares y los atemperados (fago lambda).
Apuntes de Virologa 39
Una vez que el DNA vrico se localiza en el interior de la clula hospedadora, se replica primero como
una unidad y despus se recombinan varias unidades genmicas, extremo con extremo, para formar
una larga molcula de DNA denominada concatmero. Ya formado el concatmero,
concatmero, este tiene que
empaquetarse en los diferentes viriones. Para ello, es cortado al azar (sin la presencia de secuencias
especficas) en fragmentos lo bastante largos como para llenar la cabeza de los nuevos fagos. Como
en la cabeza del T4 cabe ligeramente
mente ms que la longitud del genoma, se produce la permutacin
circular anteriormente mencionada y la redundancia en los extremos.
Aproximadamente un minuto despus de la unin y la penetracin en la clula hospedadora, la
sntesis de DNA y RNA del hospedador
hospedador finaliza y comienza la transcripcin de los genes especficos
del fago. La traduccin del mRNA vrico comienza inmediatamente despus, y en cuatro minutos ha
dado comienzo la replicacin del DNA. T4 no codifica su propia RNA-polimerasa
RNA polimerasa para la transcripcin;
transc
sintetiza protenas que modifican secuencialmente la especificidad de la RNA-polimerasa
RNA polimerasa de la clula
hospedadora, de manera que esta vaya perdiendo especificidad de reconocimiento del propio
material gentico de la clula hospedadora y por el contrario
contrario vaya ganando especificidad en la
lectura del material gentico del fago.
El genoma del T4 puede dividirse en tres partes, que codifican protenas tempranas, protenas
medias y protenas tardas respectivamente. Las protenas tempranas y medias son
fundamentalmente
undamentalmente enzimas necesarias para la replicacin del DNA y la transcripcin y las que
modifican la citosina, mientras que las protenas tardas son principalmente las que conforman la
cpsida y la cola y las necesarias para la lisis.
Apuntes de Virologa 40
que se ha llenado la cabeza. El virus sale cuando la clula es lisada. Para ello, el fago codifica la
lisozima de T4 que ataca al peptidoglicano de la clula hospedadora.
Fagos atemperados (como Lambda de E.Coli)
Los bacterifagos T-Pares estudiados anteriormente son fagos virulentos que acaban por matar a la
clula hospedadora mediante el ciclo ltico, pero los denominados fagos atemperados son capaces
de llevar a cabo un ciclo de vida alternativo donde no daan al hospedador. Entran as en un estado
de lisogenia en el que sus genes no se expresan, y el genoma del virus (denominado profago) se
replica en sincrona con el material gentico de la clula hospedadora. Es la expresin del genoma
vrico lo que daa a la clula hospedadora, no la mera presencia del DNA vrico. Por lo tanto, las
clulas hospedadoras pueden albergar genomas vricos sin peligro siempre que la expresin de los
genes que controlan las funciones lticas del virus se mantengan bajo control. En las clulas que
albergan un virus atemperado, denominadas lisgenas, el genoma del fago se replica junto con el del
hospedador, y durante la divisin celular pasa de una generacin a la siguiente. En determinadas
condiciones, los virus lisgenos pueden revertir a la va ltica y comenzar a producir viriones.
Los fagos atemperados pueden entrar en modo ltico tras la infeccin o bien pueden establecer
lisogenia. Durante esta ltima, el virus no existe como partcula vrica en el interior de la clula; en
lugar de eso, el genoma vrico se integra en el cromosoma bacteriano o existe como plsmido en el
citosol (profagos). En cualquier caso, se replicar a la vez que el cromosoma bacteriano.
Normalmente, el control para que no se expresen los genes lticos revierte en una protena represora
codificada por el fago (obviamente, el gen que codifica dicha protena s ha de expresarse). Si este
represor se inactivado o se impide su sntesis, el profago se induce, se producen nuevos viriones y se
lisa la clula hospedadora. En algunos casos (por ejemplo el fago lambda) la alteracin de las
condiciones (especialmente dao producido al genoma bacteriano) induce el estado ltico.
El fago atemperado que mejor sirve como ejemplo es el bacterifago Lambda que afecta a
Escherichia Coli. Los viriones de lambda se parecen a los de otros bacterifagos con cola, aunque no
tiene fibras basales. Su genoma es DNA bicatenario lineal, con una regin de doce nucletidos de
cadena sencilla en el extremo 5; estos extremos monocatenarios son complementarios, y cuando el
DNA penetra en la clula hospedadora se aparean formando el sitio cos. A continuacin, el DNA se
liga y forma un crculo bicatenario.
Cuando lambda es lisgeno, se integra en el cromosoma de E.Coli en un nico sitio, conocido como
sitio att (de lambda attachment site, sitio de unin ). La integracin necesita la presencia de la
enzima integrasa de lambda, que reconoce los sitios de unin del fago y de la bacteria. A
continuacin, el DNA integrado de lambda se replica junto con el resto del genoma del hospedador y
es transmitido a la progenie.
Cuando lambda es ltico, sintetiza concatmeros de DNA largos y lineales mediante replicacin por
crculo rodante. El concatmero de doble cadena se corta en fragmentos del tamao del genoma por
los sitios cos. Entonces se empaquetan los genomas en las cabezas de los fagos, se aaden las colas y
finalmente se lisa a la clula con enzimas codificadas por el fago.
La decisin entre lisis o lisogenia durante la infeccin por lambda depende de un interruptor
gentico complejo. Los elementos clave son dos protenas represoras, el represor de lambda o
protena cI y el represor Cro.
Para establecer la lisogenia deben producirse dos hechos: se debe impedir la produccin de
protenas tardas y una copia del genoma de lambda ha de integrarse en el cromosoma del
hospedador. Si se sintetiza cI, sta reprime la sntesis del resto de protenas codificadas por lambda y
se establece lisogenia; por el contrario, Cro reprime la expresin de las protenas cII y cIII necesarias
para mantener la lisogenia. As, cuando se sintetiza Cro en grandes cantidades lambda pasa a modo
ltico.
Apuntes de Virologa 41
El resultado final est determinado, por tanto, por la protena que domina en el proceso de
infeccin: si domina Cro, la consecuencia es la
la lisis; si domina cI, la consecuencia es la lisogenia.
Apuntes de Virologa 42
1.
Existe gran diversidad de estrategias de multiplicacin de los fagos, pero un esquema general
podra ser este:
- Lcid nuclic dels virus cont uns pocs gens que codifiquen per als components estructurals del
viri i per alguns enzims necessaris per a la realitzaci del cicle vric.
- Els enzims necessaris per a la realitzaci del cicle vric no sencapsulen.
- Els enzims dels virions ms grans s que es poden encapsular per facilitar la posterior entrada a
una nova cllula hoste.
Los fagos se pueden mantener bien en medios slidos o lquidos que contengan la bacteria
husped. Titulacin: recuento del nmero de calbas en un medio slido (PFU/ml). Ahora vamos a
centrarnos en dos tipos de ciclos de multiplicacin, que son los ms conocidos:
A. CICLO LTICO. Modelo: Tomamos como ejemplo a los bacterifagos llamados Tpar (T2, T4, T6)
que pertenecen a la familia Myoviridae, que son virus desnudos, con DNA de cadena doble
que codifica para unos 100 genes y parsitos de E. Coli. Muchos virus bacterianos tienen un
ciclo de multiplicacin al que se denomina ltico porque los virus se multiplican en el interior
de la bacteria ay salen de la misma matando o lisando a la clula. A ste tipo de virus con
este ciclo, se les denomina virus virulentos. Vamos a tomar como ejemplo al VIRUS T4 como
caracterstico del ciclo ltico.
Caractersticas.
- Cabeza. Icosaedro modificado (alargado por una cadena de icosaedros).
- Collar. Une la cabeza con la cola.
- Cola. Consta de un tubo hueco rodeado de una vaina helicoidal contrctil.
- Placa basal. Al final de la cola, con forma hexagonal.
- Fibras de la cola. Son fibras largas que salen de la placa.
- Ganchos. Fibras cortas que salen de la placa.
El genoma del T4 es una molcula de DNA de cadena doble y lineal.
Ciclo biolgico del virus.
El ciclo comienza con la 1) fijacin o adsorcin que tiene lugar despus de que se
produzca una colisin accidental entre el fago y la pared bacteriana. Las fibras finales de
la cola del fago (=ligandos) se unen a los receptores complementarios de la clula
husped y el receptor celular suele ser una estructura superficial de la clula bacteriana,
como fmbrias o flagelos. A continuacin ocurre la 2) penetracin del genoma vrico al
interior de la bacteria (inoculacin). El fago libera un lisoenzima que tiene en la cola y
que hace un pequeo orificio en la pared husped. El fago inyecta el cido nucleico por
el agujero mediante la contraccin de la vaina de la cola. Normalmente la cpside queda
anclaa en el exterior celular i slo penetra el cido nucleico. No entra en virus, slo el
genoma.
Para que se produzca esta entrada, el virus se apoya mediante las fibras de la cola en la
superficie de la bacteria. A continuacin la placa basal contacta con pared de la bacteria
y la vaina de la cola se contrae y el tubo central se inyecta a travs de la pared. Por el
interior del tubo hueco, el c. nucleico del virus entra en la bacteria. Entonces el
genoma del virus comienza a usar la maquinaria celular para la sntesis de sus
componentes.
3)
Apuntes de Virologa 43
enzimas vricas que participarn en la replicacin del c. Nucleico, mediante enzimas,
nucletidos y aminocidos del husped. La expresin de los genes vricos se produce de
manera escalonada expresndose a medida
medida que sus productos se necesitan; control de la
expresin gnica:
1- Ess fan moltes cpies del DNA fgic.
2- Ess fa la sntesi de protenes a partir dels mRNAs transcrits.
Luego se produce esta replicacin y posteriormente se formarn protenas que
pertenecen a estructuras del virus y luego protenas que intervienen en la liberacin del
virus de la clula.
4)
Maduracin: A continuacin, tiene lugar el ensamblaje de las protenas de la
cpside y la encapsidacin de los cidos nucleicos. Las cabezas y las colas se forman
fo
por
separado: entra DNA en la cabeza y se une la cola. Por ltimo, se produce la 5) liberacin de
los virus al romperse la bacteria hospedadora (lisis celular debido a lisozimas codificadas por
el propio fago). En esta rotura interviene una enzima producida
producida por el virus llamada lisozima
T4. Despus del periodo de eclipse se pueden detectar nuevas partculas vricas en la clula.
- Temps
emps dexpressi = temps que passa des de ladsorci fins lalliberament (en
fags T-parells
parells s duns 20-40
20
minuts).
- Mida
da dexplosi = nombre de partcules alliberades a partir duna cllula (en
fags T-parells
parells s dunes 50-200
50
partcules).
Corba one-step
step-growth:
- Aquest
quest corba posa de manifest
les diferents fases daquest cicle.
- Sobt
obt de lextracci de mostres
dunaa
suspensi
bacteriana
infectada per fags a diferents
temps desprs de la infecci.
- Ell registre del nombre de
partcules fgiques es mant
constant i baix fins lexplosi, en
qu el nombre de partcules
fgiques sincrementa rpidament
fins un lmit estable.
esta
- Durant
urant el perode en el que no hi
ha augment el nombre de
partcules fgiques es pot detectar
un increment important de la
sntesi dcids nuclics i de
protenes per altres mtodes.
Apuntes de Virologa 44
Caractersticas.
Como ejemplo del ciclo lisognico estudiaremos el fago , que pertenece a la familia
Siphoviridae, que tiene una cabeza icosadrica y una cola que es muy sencilla (tubo hueco) y
Apuntes de Virologa 45
a veces una o varias fibras rudimentarias (segn la cepa).
Su genoma es una molcula de DNA doble, pero con la particularidad de que en los dos
extremos del DNA sobresale un segmento de cadena sencilla. Estos segmentos se
denominan extremos cohesivos, porque son complementarios entre s, y al unirse forman
una doble cadena circular.
Apuntes de Virologa 46
Hay virus lisognicos que modifican las caractersticas fenotpicas de las bacterias que
infectan. Este fenmeno se llama conversin fgica, destacando el que sufre la bacteria
Corynebacterium diphteriae,
diphteriae infectada por el fago . Esta bacteria produce la toxina diftrica
responsable de su patogenicidad, que es codificada por el virus, no por la bacteria.
Importncia industrial
indu
Aquests bacterifags
bacteri
tenen
una transcendncia industrial:
indu
- Fags de Lactobacils provoquen problemes a les indsind
tries lcties.
- Utilitzaci:
litzaci:
ba
Tipificaci bacteriana
Teraputica antibacteriana
antibact
Vectors de clonaci
cl
Enzims dorigen fgic: DNA
polimerases, ligases, etc..
2.
3.
Consecuencias
ncias de las infecciones vricas en animales: Patogenia de las infecciones vricas
A diferencia de lo que ocurre con los bacterifagos, en la clula animal siempre penetra el virin
completo, es en el ncleo de dicha clula donde tiene lugar generalmente el ciclo de replicacin y
como las clulas eucariticas carecen de pared celular los viriones maduros salen de ellas ms
fcilmente rompiendo la bicapa lipdica de su membrana plasmtica.
Aunque la estructura de los virus animales suele ser ms simple que la de los bacterifagos, existen
muchas especies que presentan envoltura. En cuanto al genoma, se conocen virus animales de todas
clases: con DNA bicatenario, con DNA monocatenario, con RNA bicatenario y con RNA
Apuntes de Virologa 47
monocatenario.
1.
2.
Cada virus animal puede multiplicarse slo en determinadas clulas. Algunos virus presentan
determinados enzimas que no se encuentran en los fagos. Las etapas son
son las mismas para DNAvirus y
RNAvirus, con pequeas diferencias en cuanto a los procesos de sntesis del material gentico. Se
denominan clulas susceptibles a aquellas en las que tiene lugar la multiplicacin de los virus, con
Apuntes de Virologa 48
formacin de nuevos viriones;
s; y clulas no susceptibles son aquellas en las que no tiene lugar la
formacin de nuevos viriones.
Dentro de las clulas no susceptibles, se diferencian 2 casos:
Clulas en las que no se llega a expresar ninguna protena del virus, lo cual se debe a que se
bloquean etapas tempranas de la infeccin del virus, bien la unin o penetracin del virus en la
clula.
Clulas en las que se expresan algunos genes vricos, con la produccin de algunas protenas
del virus. Algunos virus productores de cncer producen tumores en clulas en los que se expresan
slo algunos genes vricos.
En cuanto al ciclo de multiplicacin en clulas susceptibles, se dividen en varias etapas:
A) FASE INICIAL
1. Unin o adsorcin del virus a la clula.
clula. El virus se une mediante ligandos (fibras
(fi
o
espculas distribuidas por toda su superficie) (varian entre diferentes tipos de virus) a
molculas receptoras especficas de la membrana plasmtica de la clula
hospedadora, que suelen ser glucoprotenas, aunque tambin glucolpidos,
fosfolpidos, que interaccionan con los ligandos en presencia de cationes.
Un determinado virus slo puede unirse a clulas que tengan receptores para l, y la
presencia de estos receptores depende la especie animal, el tejido y tambin del
estado fisiolgico de la clula.
clula. Muchos anticuerpos actuales se dirigen a estos ligandos
para impedir la adsorcin.
Este hecho explica por qu existen preferencias de los diferentes virus para infectar
diferentes partes del organismo (la gripe, p. ej. afecta al tracto respiratorio, ...)
..
Las estructuras del virus que se unen a estos receptores celulares vara:
En virus desnudos, son protenas de la cpside, y en ocasiones son
proyecciones que sobresalen de la misma, como ocurre con los Adenovirus.
En virus con envoltura, las glicoprotenas
glicoprotenas de sta son las encargadas de la
unin a la clula hospedadora.
En virus con espculas, sern stas las que se unen a la clula.
Apuntes de Virologa 49
queda dentro del citoplasma celular, liberndose finalmente el genoma de esa
nucleocpside.
Por endocitosis: En el resto de virus con envoltura, y en todos los virus desnudos
tiene lugar un mecanismo de endocitosis, en el que la membrana plasmtica de
la clula experimenta una invaginacin que engloba a los virus, los cuales
quedan dentro del citoplasma celular, dentro de una vescula endoctica. Esta
vescula se fusiona con lisosomas de la clula hospedadora que vierten sus
enzimas a la vescula, las cuales favorecen la eliminacin y degradacin de las
cpsides. Los cidos nucleicos virales pueden salir del lisosoma de dos formas:
a. Al romperse la vescula, el virus se libera con las cubiertas parcialmente
degradadas, liberndose finalmente el genoma al citoplasma.
b. En algunos virus con envoltura, sta se fusiona con la vescula y,
entonces, la cpside queda ya en el citoplasma. La nucleocpside
tambin est parcialmente degradada. Permite la liberacin del genoma
vrico al citoplasma.
Translocacin
ocacin:: El receptor cambia su conformacin y el receptor entra a travs
de un poro.
Altres
ltres mecanismes de penetraci
penetraci:: es pensa que la desencapsulaci pot
comenar quan el virus est encara associat a la membrana plasmtica de la
cllula hoste.
Desprs ess produeix lalliberament del material gentic per protelisi inespecfica de la cpside.
B) FASE REPLICATIVA
3. Sntesis de componentes virales (cidos nucleicos y protenas).
A. Virus DNA.
Una vez que el genoma del virus queda libre en el interior de la
la clula hospedadora, el
virus se apodera de la maquinaria de la clula hospedadora para sintetizar
componentes de nuevos virus.
Este proceso de sntesis es diferente en virus RNA y DNA. En virus DNA, a partir del
Apuntes de Virologa 50
genoma se tiene que formar:
Por un lado ARN
AR m por el proceso de transcripcin, a partir de los cuales se
formaran protenas por el proceso de traduccin.
Por otro lado, a partir del genoma, se tiene que formar nuevos genomas de DNA
por el proceso de replicacin.
En el virus con DNA (papovavirus,
(
parvovirus,
arvovirus, herpesvirus i adenovirus),
adenovirus el proceso de
transcripcin tiene lugar en el ncleo de la clula hospedadora, excepto en unos virus
que son los Poxvirus (p. ej. virus de la viruela), en los cuales la biosntesis y en
ensamblaje de los componentes vricos
vricos tienen lugar en el citoplasma. Adems, el
proceso de transcripcin es un proceso ordenado:
1.
2.
Apuntes de Virologa 51
B. Virus RNA.
En estos virus el genoma tiene informacin para que se formen nuevos virus. A partir
de este genoma de virus RNA se tienen que formar protenas y nuevos genomas para
formar nuevos virus.
- La biosntesi dels components sol tenir lloc al citoplasma cellular.
- La maduraci t lloc de forma similar als virus DNA.
En estos virus RNA, en algunos casos, el genoma del virus puede actuar directamente
como mensajero para los sistemas de protenas, mientras que en otros virus, a partir
del genoma se tienen que formar RNAm para formar protenas.
Entonces se clasifican a los virus RNA en varios grupos, segn la naturaleza del genoma
(de RNA) y su relacin con el RNAm. En esta clasificacin se diferencian las 7 clases de
virus RNA que existen:
Clase I y II. Son virus de polaridad positiva (aquellos en los que el genoma tiene la
misma polaridad que los RNAm). Entonces en estos virus, cuando el genoma est
en la clula, acta directamente como RNAm. En estos virus el genoma es
infeccioso por s slo, por lo que no necesita entrar en la clula acompaado de
una RNApol. En virus de la Clase I (p. ej. Picornavirus), todo el genoma acta
directamente como mensajeros, se une a los ribosomas y se forma una protena
grande a la que se denomina poliprotena, que luego se rompe para dar lugar a
fragmentos ms pequeos. En virus de la Clase II (p. ej. Coronavirus), el genoma
entra en la clula y acta como mensajero, pero slo se lee una parte del
genoma, no todo. A partir de esa parte del genoma se forma una RNApol. Esta
RNApol genera cadenas complementarias (negativas) a partir del cual se forman
los mensajeros.
Clase III y IV. Son virus de cadena negativa y entonces el genoma tiene una
secuancia de bases complementarias con los RNAm. Entonces el genoma tiene
que servir de molde para la sntesis de genomas complementarios. Entonces el
genoma no es infeccioso por s slo y necesita entrar en la clula acompaado de
una enzima RNApol. Los virus de la Clase III (p. ej. Paramixovirus), el genoma es
slo una cadena de RNA de cadena sencilla, a partir de la cual, mediante la
RNApol que lo acompaa, se forman diferentes mensajeros a partir de los cuales
se pueden formar protenas. Los virus de la Clase IV (p. ej. Ortomixovirus) tienen
el genoma formado por varias molculas de RNA diferentes de cadena sencilla. A
part lir de cada molcula del genoma, mediante la RNApol que acompaa al
genoma, se forma un RNAm.
Clase V. Los virus de esta clase son un poco particulares porque se les considera,
tradicionalmente, de cadena negativa, y necesitan entrar en la clula
acompaados de una RNApol. Son particulares porque en realidad parte del
genoma es de polaridad positiva y parte negativa. Aunque parte del genoma es de
polaridad positiva, nunca funciona directamente como RNAm. Se dice que tienen
un genoma de polaridad ambisentido (p. ej. Arenavirus).
Clase VI. Son virus de cadena doble de RAN (p. ej. Reovirus). En este caso, el
genoma est formado por varias cadenas de RNA de cadena doble. Este genoma
no es infecciosos por s slo y necesita entrar en la clula acompaado de una
RNApol. En estos virus, a partir de cada fragmento del genoma (que son diferentes
entre s), se forma en general, una molcula de RNAm a partir de la cual se
Apuntes de Virologa 52
formar una protena (una a partir de cada molcula).
Clase VII. En estos virus (p. ej. Retrovirus) el genoma est formado por dos
molculas de RNA de cadena sencilla similares. Entonces son virus diploides.
Cuando el DNA entra en la clula, a partir del genoma se forma DNA mediante la
enzima transcriptasa inversa, que es una DNApol dependiente de DNA (sintetiza
DNA tomando como molde RNA). Este DNA se integra en el genoma de la clula
hospedadora y servir de molde para la sntesis de RNAm.
El proceso de replicacin del genoma de virus RNA depende del tipo de virus (cadena
sencilla, doble y en retrovirus es diferente).
En virus de cadena sencilla (Clases I y II), a partir del genoma se sintetiza una cadena
complementaria que sirve de molde para la sntesis de una cadena complementaria de
igual tamao, que a su vez sirve de molde para nuevos genomas.
Para virus de cadena doble (Clase VI), una de las dos cadenas de la cadena doble sirve
de molde para la sntesis de una cadena sencilla complementaria, a la vez esta cadena
sencilla sirve de molde para la sntesis de otra cadena sencilla complementaria que
queda unida, formando la cadena doble. Es un replicacin conservativa porque los
nuevos genomas no contienen ninguna de las dos cadenas originales.
C. Retrovirus (VIH y algn cncer)
El genoma est formado por dos cadenas sencillas de RNA (dmeros de ssRNA(+)).
Entonces, a partir del RNA, cada cadena sirve de molde para la sntesis de una cadena
doble de DNA [dsDNA] (por la transcriptasa inversa) que se inserta en genoma de
hospedador y sirve de molde para sntesis de nuevos genomas de RNA. Degradacin
del RNA vrico original.
- El DNA sintetitzat sincorpora al material gentic de la cllula hoste (provirus):
- Es pot mantenir latent durant generacions, multiplicant-se cada cop que la cllula
hoste es divideix (pot convertir la cllula en tumoral, ja que la pot transformar).
- Es pot transcriure a RNA per a la sntesi de les protenes vriques i multiplicar-se.
- El virus sintetitza les protenes de la coberta i lhoste sintetitza els lpids i
carbohidrats.
- Els components se situen a la membrana i es produeix lensamblatge espontani de
la cpsula i les protenes de la cpside sensamblen espontniament.
C) FASE DE LIBERACIN
4. Ensamblaje, maduracin y liberacin de los nuevos virus.
La formacin de nuevos virus es diferente en virus desnudos y en virus con envoltura.
En virus desnudos, por un lado se asocian las protenas para formar la cpside. En
estas protenas se inserta el genoma formndose ya un nuevo virus. En virus
desnudos, los virus se suelen acumular en el interior de la clula y se suelen liberar de
la clula cuando sta se rompe (lisis celular).
En virus con envoltura, por un lado se asocian las protenas de la cpside con el
genoma para formar la nucleocpside. Por otro lado, las protenas que van a formar
parte de la envoltura se dirigen a una membrana de la clula, que puede ser la
plasmtica, la de una vescula o membrana nuclear. Esta protena desplaza a las de la
Apuntes de Virologa 53
clula hospedadora. Los lpidos son de la propia clula, entonces la nucleocpside se
dirige a esa zona de la membrana y se forma una yema que rodea a la nucleocpside y
de sta forma queda constituida la envoltura alrededor de la nucleocpside.
Generalmente, los virus desnudos liberan los viriones
viriones por lisis y los virus con envoltura
primero incorporan a la membrana plasmtica protenas virales y la nucleocpsida se
libera al tiempo que la envoltura por gemacin.
4.
Como consecuencia de la multiplicacin de los virus animales en las clulas, tiene lugar una serie de
daos en dichas clulas que conducen a la produccin de enfermedades en el organismo.
Los daos que se producen en las clulas hospedadoras pueden ser:
1. Alteracin de la sntesis de macromolculas celulares. Entonces alteraciones de sntesis
snte de
cidos nucleicos, protenas, producindose entonces la muerte celular.
2. Alteraciones en la membrana plasmtica de las clulas. Sobre todo ocurre con virus en los
que la envoltura se forma en la membrana plasmtica. Al incorporarse protenas vricas en
e
dicha membrana, el sistema inmune de la clula ataca a las clulas infectadas.
Apuntes de Virologa 54
3. Rotura de lisosomas. Entonces vierten sus enzimas al citoplasma celular y se daan las
clulas.
4. Acmulo de protenas vricas. Puede ser txico para las clulas.
5. Acmulo excesivo de virus en el interior de la clula, que se estn formando o ya formados.
Entonces se impide el desarrollo normal de las funciones celulares (incluso pueden formar
cristales).
6. Transformacin de clulas en clulas cancergenas. Existen virus que producen cncer.
Entonces se producen unas infecciones y daos en el hospedador, debido a los daos en la clula
hospedadora.
Efectes citoptics:
Efecto citoptico, en trminos genricos se asigna a un cambio celular en una infeccin viral. Estos
cambios son de distinto tipo:
Morfolgicos: A raz de una infeccin viral e. g. los fibroblastos en cultivo, las clulas redondean y pierden el contacto con las placas de cultivo, y se levantan del soporte , pierden
adherencia. Estos cambios morfolgicos puede dar lugar a al lisis celular. Hay una desorganizacin general de la clula: el citoesqueleto se desorganiza, las membranas pierden las
estructuras, el Golgi desaparece, la membrana nuclear puede destruirse, y la membrana
plasmtica se lisa. La lisis es el reflejo de cambios profundos en las macromolculas de las
clulas.
Cuerpos de inclusin (=factoras): Cualquier estructura en el citoplasma que corresponde a
sitios de las clulas donde se estn ensamblando virus; pueden ser nucleares o citoplasmticos.
Sincitios: son el producto de la fusin de las membranas infectadas, aparecen clulas multinucleadas, lo realizan virus con envuelta, con membranas, van a promover la fusin de
membranas celulares.
Transformacin: aparece focos de transformacin. En clulas normales aparecen monocapas, cuando aparece una virus trasformarte, las clulas pierden la adherencia y se producen abultamientos de varias capas de clulas, perdiendo el control del ciclo celular
Cambios bioqumicos: en el metabolismo de las clulas que pueden afectar a la sntesis de
protenas ac. nuclicos Alteracin de la sntesis de protenas, lo que quieren es propagarse, necesitan la maquinaria celular, y en una clula infectada compite con la maquinaria celular por la sntesis de la clula. Pueden tener el mecanismo de inhibir la sntesis de protenas de la clula, shut-off corte brusco por ejemplo poliovirus infectando a las HeLa.
El complejo de iniciacin, para que sea estable, hace falta la contribucin de factores, de iniciacin
eucariotas EIF para que pueda empezar la traduccin, aqu es donde acta mucos mecanismos de
regulacin. EIF4G , aglutina a otros muchos, este factor va a ser degradado especficamente por protenas del virus, proteasas, en sitios de corte exactos ( HIV, poliovirus) en casos de que est intacto
todo el mRNA podr traducirse, peor cuando se corta, los RNA normales de la clula con un cap, y
poliA no podrn ser traducidos, no es operativa se forma el complejo de iniciacin , slo se traducen
RNA del virus con estructuras llamadas IRES con una iniciacin interna, no en el extremo del CAP. Si
se clona el fragmento IRES en un gen, ser tambin independiente del EIF4G . Lo primero que se
produce es la proteasa, por lo que al poco tiempo, cuando la proteasa est lista de funcionar, slo se
sintetiza protenas del virus.
Apuntes de Virologa 55
En el caso de la polio acta a nivel de 4g igual que HIV, el virus de la fiebre aftosa, y hay virus a nivel
de otros factores, ya sean por degradacin o por modificaciones postraduccionales.
Uno de los mecanismos mejor conocidos y aparentemente de mayor eficacia de resistir a los virus a
nivel tradicional es la kinasa PKR, que es una kinasa citoplasmtica, se activa cuando aparece en el
citoplasma RNA de doble banda dsRNA, producto de la replicacin de muchos virus, no existe en la
clulas eucariotas. Dispara a la actividad de la PKR que tiene dominios de reconocimiento el resultado es una fosforilacion del EIF2 inaccin de la traduccin 2 se fosforila fuertemente por la kinasa. No
hay iniciacin de la sntesis de la protenas, a otro nivel, no son funcionales de la traduccin, el resultado es que no hay traduccin de ninguna clase. Inmunidad innata de las clulas.
Naturalmente el resultado la clula acaba muriendo, peor cumple su objetivo de detener la infeccin
del virus. La evolucin sigue y surgen virus para evitar el mecanismo de la PKR, los virus hacen protenas que inactivan a la PKR como muchs virus, como adenovirus, y herpes codifican protenas que
se unen a la pKR y la modifican, y por otra parte hay tambin estructuras del RNA hay IRES determinados que permiten la traduccin aunque EIF2 est fosforilado Producto de la evolucin. Una vez
que se ensambla la subunidad grande, se traduce de todas formas, los factores 1A Y 1B que regulan
la traduccin a este nivel, que son factores diana de la accin viral.
Virus de la gripe, los mensajeros de la gripe consiguen la mayor eficacia a nivel de traduccin. Dentro
del pool de mRNA tienen distintas capacidades de traduccin, con diferente eficacia, dependiendo
de la secuencias 5 prximas al Cap, +- afines a los ribosomas, este virus, los mensajeros de la clula
los degrada en 5 y aquellos extremos con mayor afinidad por los ribosomas, las captura las roba y
las aade a los mensajeros , como consecuencia tienen mayor afinidad a los ribosomas, y les permite
iniciar la traduccin con mayor eficacia: cap-snatching.
Apuntes de Virologa 56
Tropisme vric: fa referncia a lrgan concret on es dirigeix el virus per realitzar la infecci.
Apuntes de Virologa 57
TIPOS DE INFECCIONES VRICAS
Los virus pueden causar en los hospedadores diferentes tipos de infecciones que se suelen
clasificar en: Infecciones agudas, crnicas o latentes.
-
Infecciones agudas. As, los virus pueden causar infecciones que tienen una duracin
relativamente breve y en la que los virus terminan eliminndose del organismo. La aparicin
de los efectos citopticos es inmediata o bastante rpida. Estas infecciones producen una
sintomatologa clnica bastante definida: aparicin de lesiones concretas que, dependiendo
de la gravedad de la infeccin, pueden matar clulas hospedadoras o al individuo.
Generalmente van asociadas a virus que provocan lisis de las clulas hospedadoras.
amb una etapa principal de proliferaci vrica, totalment simptomtica i amb risc de contagi.
Exemples: Rhinovirus, rotavirus, influenza.
Crnicas. Los virus que estn en el organismo se multiplican, aunque a una velocidad
muy lenta (p. ej. infecciones crnicas por virus de la hepatitis B).
3) Infecci latent amb reactivaci: consta de brots recurrents on la titulaci de virus augmenta puntualment aix com el seu risc de contagi, per no implica que sigui simptomtica. Exemple: Herpes
virus.
4) Infecci per virus lents: consta duna infecci primria seguida dun perodo silencis on el virus
no es manifesta i es troba a ttols molt baixos, per pot continuar essent contagis. Finalment sol
acabar en la mort. Exemple: VIH, xarrampi.
Apuntes de Virologa 58
2. Als 4 dies, els limfcits T infectats entren al torrent sanguini, provocant la virmia primria, infectant el fetge, la melsa
3. Quan arriba a infectar la pell, es considera virmia secundria (cap al dia 14).
4. Aix dona lloc a laparici de ppules i pstules tpiques de la varicella.
5. Desprs de la infecci aguda a la pell, dona lloc a una infecci latent als cossos neuronals dels
ganglis sensorials del SNP. El sistema nervis no s gaire controlat pel sistema immunitari, per
tant s un bon lloc per amagar-se en latncia.
6. Al llarg de la vida de lindividu, si est exposat a UV o immunodeprimit pot provocar el inici
duna nova fase aguda. s lanomenada recurrncia (reactivaci secundria) del virus.
- INFECCIONS TRANSFORMANTS Hi ha altres virus que en alguns hostes transformen la cllula que
infecten, desprogramen el cicle cellular i la transformen en immortal.
Provoca tumors (benignes o malignes). Es un cul de sac: les cellules transformades no donen lloc a
mes virus.
p. ej.: virus de la varicela-Herpes zoster, cuando el virus infecta al organismo produce la varicela, pero
el virus permanece en el organismo durante mucho tiempo).
Herpes simple:
- El virus de lherpes simple t un procs vric latent.
- Hi ha persones portadores que mai sels manifesta la infecci ni cap tipus de smptoma.
Varicella - zster:
- Provoca smptomes diferents sent el mateix virus.
- La varicella sol afectar nens.
- Lherpes zster provoca una malaltia neurolgica que afecta els adults: es pensa que pot aparixer
en adults que ja han patit la varicella perqu es produeix una reactivaci del virus que estava latent
a certes cllules de lindividu)
Los virus animales pueden tener diversos efectos sobre la clula hospedadora en el proceso de
infeccin:
Infeccin ltica. Al igual que la mayora de los bacterifagos ya estudiados, algunos virus
animales liberan sus viriones del interior de la clula hospedadora por lisis de la misma provocando su muerte.
Infeccin persistente. En ocasiones, algunos virus con envoltura son capaces de liberar los viriones sin necesidad de lisar la clula por un proceso de gemacin. As, la clula infectada no
muere y contina formando virus indefinidamente.
Infeccin latente. Algunos virus animales se aletargan en el interior de la clula hospedadora
de manera que existe una demora entre la infeccin por el virus y los sucesos de lisis. La etapa latente no se debe a que el genoma vrico se integra en el de la clula hospedadora, sino
que se inactiva produciendo una baja transcripcin y sin replicarse.
Fusin celular. Unos pocos virus con envoltura son capaces de inducir una fusin mltiple
entre clulas animales, creando una clula gigante polinucelada que no se desarrolla correctamente y tiene una esperanza de vida corta. Esto evita al virus la exposicin al sistema in-
Apuntes de Virologa 59
mune del hospedador pudiendo moverse entre los ncleos de las clulas sin tener que
emerger de ellas.
Transformacin tumoral. Finalmente cabe mencionar que algunos virus animales pueden
convertir una clula normal en una clula tumoral.
DIVERSITAT PATOLGICA
labial grip
a. Patologies benignes: herpes labial,
b. Patologies greus: Verola (tot i que va desapareixer
desapareixe al 1979), bola (les dos varen ser les causes de
mortalitat mes elevades).
c. Patologies recurrents: Sarcoma de Kaposi (sorgeix a partir del SIDA)
d. Patologies que nomes es produeixen un cop:
cop: per anticossos de memoria. Es la base de les vacunes (rubeola, xarrampio)
La patologia depen de la virulencia de la cepa i de la resistencia de lhoste.
El virus de la grip, per exemple, va produir 20-40
20
milions de morts fa un segle.
Depenent de les persones, les patologies difereixen. Aixo es conegut com lEfecte Iceberg
Ex: Poliomielitis (enterovirus)
En molt pocs pacients, el virus produeix la
mort finalment.
Encara en menys pacients, el virus afecta als
nervis destruint fibres musculars.
En molts pocs casos, el virus arriba als nervis i
produeix meningitis, per sense deixar seqeles.
Uns pocs la pateixen, per de forma lleu i sense
se seqeles
Aixo fa que hi hagi moltes varietats de virus (si per cada especie hi ha 100 etc.).
COMPARACIONS
Virus i plasmidis?
Els plasmidis tenen mecanismes per autoreplicar-se.
autoreplicar
Els plasmidis necessiten linterior duna cellula.
c
Els plasmidis no tenen forma extracellular.
extracel
Als plasmidis no sels hi associa una patogenia.
Apuntes de Virologa 60
Virus i transposons?
Sintegra al genoma (dsDNA)
Transcripcio mRNA Traduccio proteines que sensamblaran amb algun RNA (que recorden a
virions) que tenen activitat retrotranscriptasa. Aixo fa que el ssRNA es converteixi en dsDNA i sigui
integrat en un altre lloc del genoma de la cellula hoste.
El cicle es com el de la Hepatitis B o dels retrovirus.
En el transposo succeeix intracellularment.
No te forma extracellular
Virus i bacteris?
BACTERIS
VIRUS
Tenen metabolisme
No tenen metabolisme
Familia Adenoviridae.
B.
Familia Parvoviridae.
C.
Familia Papovaviridae.
A. FAMILIA ADENOVIRIDAE.
Apuntes de Virologa 61
1. Caractersticas.
Estos virus tienen un tamao de 100 nm. aproximadamente. Son virus desnudos con una
cpside icosadrica de cuyos vrtices
rtices salen unas fibras o proyecciones. El genoma es una molcula
de DNA doble y lineal, que est rodeado por unas protenas. Al genoma y a las protenas que lo
rodean, se le denomina CORE.
El extremo 5 presenta unida covalentemente una protena terminal
termina esencial para la
replicacin y repeticiones invertidas (el nmero vara segn la cepa) que tambin intervienen en la
replicacin.
2. Multiplicacin.
Los virus se unen a la clula mediante las fibras.
Entran en la clula mediante endocitosis (en vesculas
endocticas). Estas vesculas endocticas se rompen,
liberndose los virus al citoplasma de la clula, con las
cubiertas parcialmente degradadas.
El genoma del virus penetra en el ncleo de la
clula donde tiene lugar la multiplicacin. El cido
nucleico see disgrega de la cpside y se convierte en un
complejo DNA viral-histona.
histona. Inmediatamente tiene lugar
una transcripcin temprana dando lugar a varios
transcritos primarios (mRNA tempranos que contienen
intrones) que salen al citoplasma y han de ser
procesados
os para dar posteriormente a los transcritos
maduros que sern modificados mediante la adicin de
CAP y colas de poli-A;
A; por ello, se unen a los ribosomas
formndose
protenas
tempranas
que
fundamentalmente intervienen en la replicacin del
genoma (proceso llevado a cabo por una RNApol viral.
Posteriormente se sintetizan unos RNAm tardos que en el citoplasma servirn de molde para
la sntesis de protenas tardas. Estas protenas tardas son sobre todo protenas estructurales.
Entonces se produce el ensamblaje
laje o maduracin de los nuevos virus, que salen de la clula cuando
sta se rompe. En ocasiones, en el ncleo entra el core entero.
Las protenas tempranas resultantes de la traduccin de estos transcritos lgicamente sern
aquellas que participan en la replicacin
eplicacin del DNA, y las ms tardas sern las que conformarn la
cpsida.
La replicacin del genoma viral comienza en cualquiera de los extremos utilizando a la protena
terminal como cebador y otra protena que actuar como DNA polimerasa. Las dos hebras
hebra se
replican asincrnicamente. Los productos de una ronda de replicacin son una molcula bicatenaria
y otra monocatenaria; tras esto, se produce la conversin de la cadena sencilla en cadena doble tras
circularizarse gracias a las repeticiones terminales y formarse la cadena complementaria que es
sintetizada a partir del extremo 5. Este mecanismo de replicacin es destacable porque no requiere
la formacin de una cadena retrasada; en su lugar, la sntesis de DNA se produce a modo de cadena
adelantada en ambas hebras.
Apuntes de Virologa 62
3. Patognesis.
Estos virus producen fundamentalmente enfermedades respiratorias y oculares. As, estos
virus son causantes de una enfermedad respiratoria aguda que es parecida a la gripe, pero ms leve,
que se caracteriza por fiebre (ms baja que en la gripe), faringitis y tos.
Suele causar epidemias en cuarteles del ejrcito ms frecuentemente que en poblacin civil
(aunque tambin se da), por lo que a esta enfermedad se le llama enfermedad respiratoria aguda de
los reclutas.
Adems, estos virus, tambin causan conjuntivitis y en otro casos gastroenteritis.
La forma de controlar a estos virus no es mediante compuestos qumicos, sino que existen
unas vacunas para la enfermedad respiratoria. La vacunacin frente a virus consiste en la
administracin al organismo de Ag vricos para que el sistema inmune genere una respuesta
especfica frente a esos Ag. Posteriormente, cuando el organismo entre de nuevo en contacto con el
virus, el sistema inmune responder rpidamente y de forma ms intensa para controlar la infeccin.
Las vacunas frente a virus pueden ser de tres tipos, formadas por:
- Virus vivos atenuados, que infectan al organismo, se multiplican, pero no se produce
enfermedad.
- Virus muertos (virus inactivados).
- Componentes de las partculas vricas.
En el caso de adenovirus existen vacunas de virus vivos y virus muertos. Estas vacunas no se usan
mucho.
Ependovirus o virus AAV asociados a adenovirus, con gran inters en terapia gnica, en ausencia de
un virus helper se inserta en un determinado locus en el genoma humano, que no confiere ninguna
enfermedad ni alteracin gentica, actualmente muchas empresas estn volcadas en aplicar estos
virus en terapias monognicas. Ya estn en fase clnica.
Estrategia bsica para obtener vectores recombinantes de AV.
Para insertar un gen de inters en un vector de AV, este gen est en la cpsida de AV, posicin del
vector recombinante de AV, el principal limitacin de AV, es su tamao de la cpsida, el genoma de
los parvovirus est entorno a 5 Kb, genes mayores no son capaces de empaquetarse , las icosadricas tienen un DNA limitado.
El gen de inters se flanquea de secuencias de los extremos del genoma de parvovirus, secuencias
ITR secuencias terminales e invertidas, importante para el empaquetamiento del DNA en la cpsida.
El gen de inters, le clonamos en un plsmido entre secuencias ITR, por ingeniera gentica, tenemos
que clonar otro plsmido con las protenas de replicacin y cpsida. Con el genoma completo de AV,
pero queremos evitar que el plsmido se inserte en las cpsidas, por lo que eliminamos las secuencias ITR ON LOS GENES ns Y vP, PERO SIN itr. son los que introducimos con una cotransfeccin la
coinfectamos con estos plsmidos y el adenovrus silvestre. Ser empaquetado slo el virus recombinante y no el silvestre ya que carece de las secuencias para empaquetar, adems salen los WT, debemos de separarlos por separacin en gradientes de densidad etc. Para eliminar el adenovirus.
Se inserta en el locus P1 porque hay parte de homologa de secuencia.
La betagalactosidasa, con un AV recombinante que aporta el gen Bgal, 5Kba, marcadores ideales, se
mostraba como los av si se inyectan en el cerebro de mono. Se observa la expresin de Lac Z en neuronas del hipocampo. Sin efecto patolgico, efector previos, como podran estar estables, en una
Apuntes de Virologa 63
regin delicada como es el hipocampo. Experimentos reales en los que los virus aportan genes exgenos.
Para que se inserte hay que meter las protenas Ns, QUEDIRIGE el genoma al locus NS, es un reto
que a veces se usa ms de un virus.
B. FAMILIA PARVOVIRIDAE.
1.
Caractersticas.
Son unos virus muy pequeos (unos 25 nm), de hecho, el sufijo parvo- significa pequeo. Son
virus desnudos con cpside icosadrica y con el genoma compuesto por una molcula de DNA
sencilla (monocatenario) y lineal.
Los virus de DNA parvovirus son capaces de evolucionar, el parvovirus fue capaz de infectar al perro
proveniente del gato, cambio de 2 aa, que puede reconocer el receptor del perro, los retos es intentar cristales de complejos de la cpsida unido al receptor. Podemos ver aa resistentes a anticuerpos
monoclonales, mutantes mar, los cambios de la cpsida se sitan en regiones expuestos de la partcula, definen sitios inmunodominantes.
2.
Multiplicacin.
Existen dos tipos de Parvovirus.
-
Los virus entran en la clula por endocitosis, se multiplican en el ncleo de la clula usando una
DNApol celular, saliendo de la clula cuando sta se rompe.
3.
Patognesis.
C. FAMILIA PAPOVAVIRIDAE.
1. Caractersticas.
Apuntes de Virologa 64
Tamao de unos 50 nm. Son desnudos, cpside icosadrica y el genoma est compuesto por
una molcula de DNA de cadena doble y circular.
2. Multiplicacin.
Los virus penetran por endocitosis en la clula, se multiplican en el ncleo de la clula
usando una DNApol celular, y se liberan por lisis de la clula.
Estos virus pueden producir diferentes tipos de infeccin en funcin de las clulas a las que
parasiten:
En clulas susceptibles se multiplican los virus, producindose nuevos viriones.
VIRUS DEL POLIOMA. Son virus productores de mltiples tumores, aunque habitualmente los
producen en especies que normalmente no son parasitadas por estos virus. Se usan mucho
para el estudio del cncer. P. ej. virus del polioma del ratn (infectan al ratn y producen
tumores en otros roedores como hamster, ratas, ...), SV40 (Virus de Simio 40, que se aisl
en una especie de mono en el cual no produce tumores, pero s los produce en otras
especies de mono o ratones), polioma humano (en el hombre, normalmente no son
patgenos ni cancergenos, produciendo enfermedades subclnicas. Pero en individuos con
sistema inmune alterado, pueden ocasionar una degeneracin progresiva neurolgica (del
sistema nervioso) que es mortal).
VIRUS DEL PAPILOMA. Son los causantes de las verrugas comunes. Las verrugas son unos
pequeos tumores benignos de la piel que se propagan de una persona a otra por contacto,
y dentro de una persona se pueden autopropagar por inoculacin (rascarse). Estos virus
tambin causan una serie de verrugas en zona de genitales y ano (ms rosadas) que se
denominan condiloma acuminado (que se transmite de diferentes formas, entre ellas el
contacto sexual). Se ha asociado con cncer de cuello de tero, de pene o de ano. Estos
virus tambin pueden causar una enfermedad llamada papiloma faringea, porque
aparecen en la laringe unas verrugas que pueden diseminarse por el tracto respiratorio, no
siendo grave, pero s molesta.
Las verrugas se pueden destruir por mtodos fsicos, como N2 liquido, lser, mtodos de
desecacin, ... Tambin existen compuestos qumicos antiverrugas, que no son antivricos
estrictamente, no son activos frente a virus, slo intentan destruir la verruga, por va
tpica. No se debe aplicar sobre la piel sana.
Algunos de estos compuestos tienen cidos en su composicin, como c. lctico o saliclico.
Tambin otros compuestos se basan en un compuesto llamado podofilotoxina, que es un
compuesto antimittico, pero tambin usado para verrugas.
Tambin se puede usar el interfern, que son unas protenas producidas por algunas
clulas del organismo y que actualmente se producen por tcnicas de Ingeniera Gentica
Apuntes de Virologa 65
en elevadas cantidades para su uso teraputico. Estas protenas tienen diferentes
propiedades, teniendo algunas, actividad antivrica. Existen diferentes interferones,
aplicndose para virus interfern alfa y en ocasiones el beta. El interfern se aplica en
concreto, en el condiloma acuminado, inyectndose en la piel bajo las verrugas, aunque no
es un tratamiento frecuente, porque es caro y no siempre efectivo. Tambin se puede
emplear interfern para Papilomatosis faringea, inyectando va sistmica el interfern,
pudiendo volver a aparecer la infeccin.
1.
En estos virus, el genoma es una molcula de DNA de cadena doble y lineal. El genoma est
enrollado alrededor de una estructura formada por protenas (como un hilo alrededor de un
carrete). La cpside es icosadrica y una envoltura con pequeas espculas en la superficie.
Entre la cpside y la envoltura se sita una zona amorfa que contiene protenas y que se
denomina tegumento. Estos virus miden unos 200 nm.
-
Tienen una estructura muy compleja formada por cuatro unidades morfolgicas: el centro
del virus, denominado ncleo, est formado por el genoma; la nucleocpsida le rodea y presenta simetra icosadrica; en el exterior de la misma existe una capa amorfa denominada
tegumento que es una estructura fibrosa nica de los herpesvirus; finalmente aparece la envoltura con una gran cantidad de pas.
El virin maduro contiene un buen nmero de protenas adicionales, muchas de las cuales
an no han sido caracterizadas.
Pueden llevar a cabo infecciones latentes y transformacin tumoral; adems, causan enfermedades importantes en humanos y otros animales como el herpes labial, el herpes genital,
la culebrilla, la varicela
induccin de fase S aunque los propios genomas de herpes llevan sus propias polimerasas, la fase S
no es estrictamente dependiente para que se replique. Genes cuyos significado tiene a nivel de organismo, ya que poseen genes que reprime la respuesta inmune, sistmico. Tienen un genoma bastante grande.
El DNA ds, 150-200KPB son icosadricos con envoltura, tienen la capacidad de ser latentes, prevalecen en los organismos que infecta en que haya una expresin gnica patente, demostrada.
Resultado de la evolucin, tiene un programa gentico de latencia. Para silenciar su expresin gnica
y prevalecer en la naturaleza. De dentro hacia fuera: entre la membrana y la nucleocpside se llama
tegumento de funcin casi desconcocido, una nucleocpsida, con DNA empaquetado con protenas.
Estn muy distribuidos en la naturaleza, muy bien asentados prevalecen e muchas especies. Virus
grandes adaptados a la prevalencia en al naturaleza haciendo poco dao al hospedador.
En simios etc, virus de otras especies etc.
Las partculas de herpes entran por las protenas de envuelta, se produce una fusin con el endosoma, la cpside se adhiere en el ncleo nuclear, se adhiere al ncleo e inyecta su DNA.
Una vez en el ncleo, puede ser reconocido, por la maquinaria de transcripcin de la clula que inicia
la transcripcin, lo realiza las polimerasas de la clula sobre todo la II, hay tres ondas de expresin
gnica bien definidos se les llama Alfa beta y gamma.
Apuntes de Virologa 66
Interacciones de tipo : induccin de fase S, modulan la respuesta del hospedador, inhiben la respuesta inmune, y muchos de ellos regulan la expresin gnica de la clula, factores de transcripcin.
Estos genes alfa, se trascribe dan lugar a mensajeros algunos de ellos son factores de tracripcion,
promueven la transcripcin de beta. Beta: protenas de replicacin DNApol en esta fase del ciclo del
virus hay una replicacin del genoma del virus en el que no hay transcripcin, por los genes Beta. La
fase de replicacin coincide con la fase S, la clula es inducida a proliferar. Algunos de ellos son factores de trascripcin que promueven la siguiente onda: inducen la expresin de los genes gamma.
Estos genes gamma son protenas estructurales. Han organizado su complejo genoma, en esto, expresin gnica ordenada. Miminizan interfernecia de expresin gnica maximizando su expresin.
Primero surge en forma de cpsida poco compacta, procpsida, se encapsida el genoma, va madurando adquiere envueltas las adquiere primero de las membranas nucleares, viaja por el citoplasma,
se fusiona con la siguiente consecutivamente (RER-GOLGI-MB) salen sin lisar las clulas.
Composicinn gnica del virus simplex humano 150Kpb, el virus se circulariza en la replicacintranscripcin.
En torno a 200 genes. Asignar funciones gnicas, cada caja es un orf, con lo cual es un gen. Protena
principal de la cpsidas. Helicasa, DNasa
Existen fundamentalmente tres subfamilias de herpesvirus:
Herpesvirus o neurotrpicos. Causan lesiones epiteliales, fundamentamente en el tegumento y en el rea genital (infecta neuronas). Suelen permanecer en estado latente durante
un tiempo en el interior de las clulas ganglionares y otras neuronas. A este grupo pertenecen las distintas clases de herpes simples y el virus varicela-zoster.
o Herpes simplex humanos HSV I, II
o Varicela-Zoster (HZV)
Herpesvirus o de glndulas salivales. Suelen afectar al rin y a las glndulas salivales provocando un aumento del tamao de sus clulas y despositando cuerpos de inclusin en sus
ncleos y citosoles.
o A este grupo pertenecen los citomegalovirus (CMV).
Herpesvirus o linfotrpicos. Tienen un tropismo (alta especificidad) elevado respecto a los
linfocitos, que son a las clulas que atacan.
o Es el caso del virus Epstein-Barr (EBV).
La infeccin por herpesvirus se produce tras el reconocimiento especfico entre el virin y la clula
hospedadora. Se produce la fusin de la membrana plasmtica y la envoltura del virin y este pasa al
interior de la clula hospedadora. Es entonces transportado al ncleo donde el DNA viral se disocia
de la cpsida. All comienza rpidamente la transcripcin, generndose tres tipos de mRNA:
- El inmediato se encarga de codificar varias protenas reguladoras que estimularn la sntesis
de las protenas retrasadas y tardas.
- El retrasado se sintetiza a continuacin y codifica protenas implicadas en la replicacin del
DNA viral, incluyendo la DNA polimerasa necesaria para ello, enzimas dedicadas a la sntesis
de desoxirribonucletidos y una protena de unin a DNA.
- El tardo es el ltimo en ser sintetizado y codifica las protenas estructurales de la partcula
vrica.
Tras la sntesis de las protenas necesarias para la replicacin, el DNA viral situado en el ncleo se
circulariza de una manera similar a como lo haca el bacterifago lambda y a continuacin se replica
por crculo rodante. Se generan largos concatmeros que son luego procesados para dar lugar a
fragmentos de la longitud del genoma.
Finalmente, la nucleocpsida viral se ensambla en el ncleo y la envoltura es aadida durante el
proceso de gemacin. Los viriones salen el ncleo hacia la membrana plasmtica a travs del retculo
Apuntes de Virologa 67
endoplasmtico.
2.
Multiplicacin.
Los virus se unen a la clula mediante las espculas y se produce la funcin de la envoltura
del virus con la membrana plasmtica de la clula.
Entonces, la nucleocpside
side queda en el citoplasma, se libera el genoma, que pasa al ncleo.
En el ncleo se sintetizan unos RNAm tempranos. Existen dos tipos de RNAm tempranos (se
producen dos oleadas):
-
Tempranos inmediatos o .
Tempranos retrasados o .
Patognesis.
Virus HHV 6.
Virus HHV 7.
- Virus HHV 8.
- Virus HHV 4. Virus EpsteinEpstein Barr.
Todos los HHV tienen la caracterstica de que producen infecciones latentes y recurrentes.
Esto significa que en estos virus, una vez que el virus ha infectado por primera vez el organismo,
despus de la infeccin inicial, el virus permanece latente en el organismo aparentemente sin
multiplicarse, durante toda la vida. En determinados momentos el virus comienza a multiplicarse de
nuevo, produciendo una nueva infeccin.
A continuacin
n pasamos a considerar las consecuencias patolgicas de varios tipos de herpesvirus
comenzando con los herpesvirus simplex.
Apuntes de Virologa 68
A.
Los herpes simples producen enfermedades latentes. Entonces una vez que pasa la
infeccin inicial, los virus emigran a travs de los nervios sensitivos hacia los ganglios
nerviosos prximos, permaneciendo all latentes. En un determinado momento pueden
volver a multiplicarse, estando inducidos por diferentes factores, p. ej., factores ambientales
(como fro, calor, exposicin excesiva al sol), factores hormonales (menstruacin), estrs,
fiebre, inmunodepresin, etc.
Entonces, los virus se multiplican, migran por los nervios y vuelven a la piel, donde
vuelven a aparecer ampollas (llamadas calenturas cuando estn en los labios). En los ojos, las
recurrencias pueden ser peligrosas porque pueden ocasionar cegueras.
Estos virus pueden presentar complicaciones ms severas en individuos con
inmunosupresin, que van a ser sometidos a transplantes, enfermos del sistema inmune, por
lo que en estos casos la enfermedad est ms diseminada.
Herpes simplex: se transmite desde el principio de la vida, desde la cavidad bucal,
llega a las terminaciones nerviosas de las cuales viaja hasta alcanzar en el soma neuronal, es
generalmente, neuronas del ganglio dorsal de la espina dorsal. Prevalecen a lolargo de toda
la vida, encontramos el virus en estado latente. esta en forma de episoma , DNA lineal no integrado. es demostrable por PCR. si hacemos un explante y la disociamos sobre clulas susceptibles en cultivo, produce ciclos lticos en cultivo. la varicela, produce una infeccin ms
extendida sisttica, formando eritemas, forman tambin estado de latencia en los somas
neuronales, puede reactivarse, entra en ciclo ltico, produce lesiones en los epitelios que
inherban. Bajada de defensas etc. lesiones benignas producto de la reactivacin del soma de
los ganglios dorsales. el herpes se mantiene el mismo no cambia el hrpes e spara siempre.
B.
Apuntes de Virologa 69
Suele afectar al epitelio tegumentario.
Suele permanecer en estado latente en el ganglio
de la raz dorsal de la mdula espinal y
posteriormente se desplaza en direccin
centrpeta
eta por el nervio sensorial de la misma
causando la varicela. En ocasiones el virus puede
reactivarse y causar el denominado herpes zster
generalmente por estrs. El virus causante de
estas enfermedades es el mismo, el HHV 3.
Cuando el virus infecta por primera
p
vez el
organismo, suele producir la VARICELA, que es ms
tpica de nios. En esta enfermedad los virus se
contraen, sobre todo por va respiratoria, aunque
tambin pueden entrar por la mucosa del ojo.
El virus se multiplica sobre todo en el
tracto respiratorio
espiratorio superior y luego en los ganglios
linfticos prximos, pasando luego a sangre y
entonces se extiende a diferentes rganos del cuerpo (viremia), como el hgado o el bazo.
Tambin se extienden en la piel, produciendo unas vesculas que aparecen primero
pr
en tronco
y cabeza y luego en extremidades. Las costras desaparecen al cabo de unos 10 das,
remitiendo la enfermedad.
En ocasiones existen complicaciones en nios, pudiendo verse afectados el hgado,
el corazn y el sistema nervioso, producindose incluso meningitis. La enfermedad es ms
grave en adultos, siendo especialmente grave en
inmunodeprimidos, donde se pueden afectar
rganos internos como hgado, pulmn y
sistema nervioso central.
Una vez que ha pasado la varicela, los
virus emigran a travs
s de los nervios sensitivos
hacia ganglios nerviosos de la mdula espinal,
donde permanecen latentes. Por diferentes
motivos (inmunodepresin, estrs,...) pueden
comenzar a multiplicarse de nuevo, emigrando
desde los ganglios hacia la piel, de nuevo,
producindose
ucindose la enfermedad llamada HERPES
ZSTER. En este caso aparece dolor en zona de
vesculas (en herpes simple no aparece dolor),
teniendo, las vesculas, una distribucin
unilateral en el cuerpo (en un lado determinado
del cuerpo). El herpes zoster puede
pued cursar con
fiebre o molestias, siendo peligroso en
individuos con cncer o inmunodeprimidos, en
los que se pueden afectar diferentes rganos,
siendo muy frecuente en individuos con SIDA,
que aparezca retinitis.
Para el control de la varicela usamos una
vacuna,
acuna, la cual est formada por virus vivos,
pero no se suele aplicar porque parece que la
inmunidad proporcionada por sta, no dura toda
la vida, prefiriendo pasarla de nios que no de
Apuntes de Virologa 70
adultos. Tambin se puede aplicar la inmunizacin pasiva, la cual consiste en aplicar a un
individuo Ig (Ac) obtenidos a partir de la sangre de otras personas. Estas Ig no las produce la
propia persona, por lo que se llama entonces inmunizacin pasiva, a diferencia de la
vacunacin, en la que el individuo fabrica Ac ante un Ag. sta inmunizacin se utiliza en el
caso de que una persona haya entrado en contacto con un virus, para que sta no desarrolle
la enfermedad o para atenuar la enfermedad. En la varicela, se usa para prevenir o atenuarla.
Tambin usamos esto en nios inmunodeprimidos.
el varicela-zoster, se activa formando un zster, culebrilla, pueden ser dolorosas, inflama el
nervio, en inmunocompetencia normal se controlan por el sistema inmune.
Respuesta immune del hospedador:
Presentacin de pptidos por clulas infectadas, presentados a linfocitos TC, se hace por una
moleculas MLHCI.
Este complejes reconocido por el TCR este complejo dispara la respuesta citotxica del linfocito.
Esa presentacin del pptido extrao suelen ser casi todas las clulas del organismo, permite
que el linfocito se active, y produce la lisis celular, respuesta inmune contra virus ms importante que los anticuerpos.
Puede evitar que maduren miles o decenas de virus.
Los organismos evolucionan para bloquear los virus y los virus al contrario.
Los herpes impiden la presentacin de pptidos por MHCI, que los presente al TC. Distintas
protenas de los hrpes interfierne en el viaje del RER. Interfiere con el MHCI sacarlo fisicamente del RER, lo lleva al proteasoma para que sea degradado, disminuye los niveles de
MHCI, no presenta bien a los pptidos.
No se entenda porqu, no haba clula citotxica en la clula inhibicin de transporte MHCI,
tambin lo tienen los poxvirus.
C.
Apuntes de Virologa 71
El mismo virus puede producir:
En frica est asociado con el linfoma de burkitt agresivo, produce metstasis.
Carcinoma nasofarngeo, cncer en la cavidad bucal, asociado a infecciones de Epstein Bar,
sucede en china.
Porque sucede esto? Esta diferencia? Un mismo virus en diferentes partes del mundo produce diferentes enfermedades.
Cuando esto se enfrent en los aos 80 la mentalidad clsica era que haba diferentes variables, que en diferentes partes del mundo da diferentes enfermedades. Se secuenci el genoma del virus y ver los cambios genticos que den estas diferencias, forma de pensar clsica.
Se encontr que no era as no existen diferentes variantes, es genticamente homogneo,
produce diferentes enfermedades.
La MI, cuando el virus es controlado pasa a estar en latencia, la latencia del Epstein Bar, es
sorprendente de su programa gentico de latencia, es una estrategia evolutiva para prevalecer.
Se observa lo siguiente: est en forma de episoma, peor en contra del simplex, hay alguna
expresin gnica, como la LMP latent membrane protein, los antgenos nucleares: EBNA (EB
nuclear antigen), produce el estado de latencia, el EBNA1,2 replica el virus con el linfocito
para mantener la poblacin del virus, y el LMP, induce mitosis.
En occidente, generalmente el nmero de linfocitos es pequeo, lo controla el S.inmune, y
no genera linfomas.
Tiene diferentes consecuencias en diferentes partes del mundo; en el caso de frica: el virus
se transmite en una poblacin infantil malnutridos, la respuesta inmune es ineficaz, puede
infectar a muchos ms linfocitos, y esa poblacin no es controlada adecuadamente por el
sistema inmune, esos linfocitos estimulados a proliferar, adquiere otras mutaciones que
produce que sea un linfoma agresivo. Es una cuestin de cantidad.
Se relacion con la malaria peor no es as, los mapas de la malaria de frica. El linfoma de
Burkit despus de un par de aos aumentaba en la zona, no era causa-efecto sino que se relaciona por: la malaria debilita el sistema inmune hace que el nmero de linfocitos infectado
son sea eliminado, por lo que hay cooperacin entre parsitos pero la base est en la incompetencia del sistema inmune.
nOSOFARNGEO: No SE SABE BIEN LA CAUSA, Causa esta enfermedad en china, da igual donde vivan sino ms bien de la raza, no est clara, pero puede ser por base gentica de la poblacin china, la infeccin del virus puede cooperar para producir este cncer o con regimenes alimenticios o de vida.
D.
Citomegalovirus.
Muy extendido. Se contrae por va oral, sangunea, sexual. En individuos normales
causa una infeccin leve, con fiebre baja, etc. El virus permanece toda la vida en el individuo.
El problema surge en la mujer embarazada y en personas inmunodeprimidas. Por lo
tanto durante el embarazo los virus pasan al feto, el cual puede que no resulte muy afectado,
pero en muchos casos puede producir la enfermedad de la glndula salivar del recin nacido.
Los virus se extienden por diversos sitios (cerebro, hgado, pulmones, ojos, odos)
produciendo graves secuelas, incluso la muerte. En personas inmunodeprimidas la virulencia
es extraordinaria pudiendo afectar a diferentes rganos y producir la muerte.
Apuntes de Virologa 72
E.
HHV 6.
HHV 7.
Parece que produce enfermedades parecidas la HHV 6.
G.
HHV 8.
Es el menos conocido pero parece el causante de SARCOMA DE KAPOSI, que es un cncer que
afecta a clulas endoteliales que recubren los vasos sanguneos linfticos.
4.
Quimioterapia antivrica.
FAMILIA POXVIRIDAE.
1.
Caractersticas.
Son virus de gran tamao (400 nm) que se pueden observar al microscopio ptico (se
replican en el citoplasma!). Son muy complejos. El genoma es una hlice de DNA de cadena doble y
lineal (las dos cadenas se unen mediante un enlace fosfodister), rodeado por dos membranas que
contienen lpidos y protenas. El conjunto de genoma y membrana recibe el nombre de nucleoide.
A ambos lados de nucleoide hay unos cuerpos formados por protena llamados cuerpos
laterales cuya funcin no se conoce todava. El virus tiene una cubierta donde se observan unas
astas y filamentos. En su interior el virus contiene la enzima RNApol permite que el virus no se
tenga que multiplicar en el interior del ncleo.
Virus complejos, estructura poco definida, son partculas virales grandes, con un contorno
oval, son virus que les diferencia en que son capaces de replicar en el citoplasma de las clulas. No
invaden el ncleo no utilizan la maquinaria de replicacin de la clula.
Encontramos viriones en forma oval, con un nucleoide bicncavo, producto del DNA compactado con
protenas, rodeado de varias membranas 2-3-+ y ambos lados del nucleoide hay 1-2 cuerpos
Apuntes de Virologa 73
laterales, no se sabe cul es su funcin. Por lpidos de protenas.
Sn bastante grandes, 300nm, casi se llegan a ver en MO. En el lmite de resolucin.
Esta familia de virus, est bien representada den la naturaleza. Pox= pstula, alude a las lesiones que
produce, estructurales en la piel. Muchos de los nombres tiene que ver con la palabra
pa
pox.
Canaripox, pjaros, capripox (Cabra). Lepridos , conejos o liebres, levoripoxvirus: myxoma. Produce
myxomatosis.
mueren los conejos , diezma la poblacin, y los cazadores tienen que cazar otras cosas
Especies proximas a humanos y a monos.
2.
Ciclo
iclo de multiplicacin de Poxvirus.
3.
Patognesis.
Asimptomtica
Apuntes de Virologa 74
Perode dincubaci
(Duracio 12 dies)
No altament contagis
Simptomtica
Primera erupci
(Duracio: uns 4 dies)
Perode mes contagis
A.
Viruela Humana.
Es una enfermedad que ha causado grandes epidemias en la humanidad y era muy temida
debido a la elevada mortalidad (un tercio de las personas infectadas) y tambin por las lesiones
desfigurantes que produca en las personas que la haban contrado. En 1980 se consider que se
consigui erradicar oficialmente.
El virus se contrae por inhalacin, se multiplica en tracto respiratorio superior, en los ganglios
linfticos y entonces, el virus pasa a la sangre, y mediante viremia, se diseminan a diferentes rganos
del cuerpo. El virus tambin pasa a la piel donde se producen unas pstulas caractersticas que
producen heridas desfigurantes.
El control de la viruela se ha ejercido fundamentalmente por vacunacin, que comenz de
forma emprica gracias a un mdico ingls, Jenner, quien a finales del s. XVIII observ que las
personas que trabajaban con vacas (que tenan una enfermedad, la viruela vacuna), luego no
contraan la viruela humana. Entonces comenz con la prctica de inocular con material procedente
de pstulas de vaca que tenan la viruela vacuna. Comprob que stas personas as inoculadas
(vacunadas) no contraan la enfermedad.
Posteriormente, ya conocidos los fundamentos de los experimentos de Jenner, se comprob
que el virus de la viruela de vacas, causa en las personas una enfermedad leve que induce una
respuesta inmune frente al virus de la viruela humana tambin (adems de contra el virus de la
viruela vacuna).
Posteriormente se comenz a vacunar de forma masiva usando un virus que modernamente
se ha comprobado que es diferente al de la viruela de vaca (el que se usa ahora), llamndose Virus
vacuna o Virus vaccinia. El origen de ste virus no est muy claro. Se piensa que pudiera ser un
Apuntes de Virologa 75
mutante del virus de la viruela vacuna o viruela humana (que por error en algn laboratorio hubiera
sido sustituido con el virus de la viruela humana), o un virus recombinante entre virus de viruela
vacuna y humana.
Sin embargo, a pesar de que la enfermedad ha sido oficialmente erradicada, el virus no ha
sido destruido, mantenindose oficialmente en dos laboratorios de alta seguridad en EE.UU y Rusia.
Existe un compuesto qumico, la Isatina--Tiosemicarbazona, que inhibe la multiplicacin
del virus y tambin la sntesis de protenas tardas. Este compuesto no ejerce su accin cuando la
persona tiene viruela, pero s que evita el desarrollo de enfermedad en personas que han mantenido
contacto con el virus. Entonces se puede usar para vacunacin de forma que las personas quedan
protegidas mientras desarrollaban la inmunidad por la vacuna.
Vriuela en humanos:
Orthopoxviurs.
Cowpoxvirus
Monkeypoxvirus
Variola
Smallpoxvirus viruela humana, sus pstulas era pequeas pero la enfermedad era letal el virus que
ha matado ms gente en la historia de la humanidad. Ramses II muri de viruela? Proyecto ara
resucitar el virus de la viruela .
Relacionado con monkeypox relacionado con smallpox, antgnicamente relacionado con el cowpox.
Variola: viruela menor, ms benigna que la viruela.
1960: campaa de la OMS WHO para erradicar la viruela, gracias a la guerra fra hubo competencia
entre las dos potencias para impulsar una campaa de erradicuacin del virus. Se erradic en 1978 al
ser un virus muy estable.
Se diagnosticaba a primer golpe de vista. Se diagnosticaba casi desde helicptero y si vean un
rostro picado bajaban y vacunaban
No hay reservorio animal.
Vacuna muy eficaz. Arranca, desde 1789 Jenner en Inglaterra los introdujo la vacunacin, observ
que las personas que trabajaban con vacas no padecian la viruela. Cogiendo pstulas de las vacas e
inoculndolo en personas sanas, prevena la enfermedad. El Cowpox , previene del smallpox. Ya que
estn relacionados antignicamente.
Paradjicamente la vacuna que se utiliza, es el virus Vaccinia. N se sabe donde viene, puede que
venga del Cowpox peor no se sabe, parece que los laboratorios evolucin a una cepa muy venigna.
Es menos agresivo que el cowpox. Produce una enfermedad benigna. Liofilizado, producan una
herida en la piel y la inoculaban.
En 1982 se escap del laboratorio, 8 muertos. Se orden eliminarlo de los laboratorios. Solamente
hay 2 laboratorios de viruela. (USA, Y MOSCU) arma biolgica ideal.
Si se produce un ataque biolgico con viruela, yo no morir y vosotros si porque estoy vacunado
contra la viruela
Hay vrus en la naturaleza que podra producir un nuevo virus que infecte a humanos: desde
monkeypox por ejemplo.
En frica hay pequeos brotes de moneypox. Que diferencias genticas: parece que son demasiado
distintos.
Apuntes de Virologa 76
Carlos II: Balmis, llevando la vacuna a Sudamrica, siglo XVIII.
Estos virus son bastantee eficaces es mucho ms simple que los dems al ser ms independiente de
las clulas la expresin gnica maduracin etc., son los ms rpidos y eficaces al ser autnomos;
tienen una enorme ventaja. En horas forma placas de lisis.
Entorno a las 6 h se forma la progenie viral.
Su RNAp, expresa todos los genes del virus. Va a ser atrada a promotores tempranos o tardas por
factores de transcripcin tempranos o tardos. ETF (tempranos); intermedios ITF, tardos LTF.
Posibilidad de utilizar estos virus como vectores para vacunar de otras enfermedades.
Por ejemlo el sida y otras enfermedades:
El virus vaccinia, dentro de los pox, es bioseguro, portar virus recombinantes. Como hacer un virus
recombinante que porte un virus exgeno.
Recombinacin natural.
Contruir un plsmido, que prote un gen de inters exgeno por ejemplo la GP120 de HIV, flanqueado
de unas secuencia de vaccinia de un gen dispensable, el virus sigue siendo infeccioso. Por ejemplo el
gen de la TK , de virus vaccinia, este plsmido lo introducimos en una clula y esa clula la
infectamos con un virus helper normal. Cuando
se replique, habr recombinaciones con una frecuencia baja, pero existe algunos.
Finalmente tenemos un virus vaccinia donde se ha insertado el gen de inters a la vez que ha
inactividado el gen de la
TK. Este recombinante es viable. Y se puede selleccionar (ing gentica)
Se ha hecho para el sida, y se ha dejado a personas para ver si con el tiempo llegan a desarrollarlo o
no.
Apuntes de Virologa 77
El virus de la rabia, rabdovirus, enfermedad difcil de controlar y vacunar ya qe hay un reservorio
animal. Si introducimos pedazos de carne con el vaccinia recombinante con el virus de la rabia, baja
la incidencia de la zona de la rabia, parece que funcion.
En realidad se utiliza poco, problemas de virulencia, aunque funciona bien en personas sanas, si se
utilizan en nios desnutridos estn comprometidos pudiendo a ser letales. En la vacunacin contra la
viruela mereca la pena porque era muy grabe y muy mortal, mientras que la vacuna mataba
1/50.000-100.000 se intenta rebajar antes de lanzarlos a gran escala.
Protenas interferentes que bloquean o impiden la respuesta inmune: importante en la virulencia y
se intenta combatir.
Receptores solubles que bloquean interleuquinas e interfern. Expresan receptores solubles sin
anclados a las clulas, que bloquean las interleuquinas. Ay una uni de alta afinidad, la respuesta
inmune se ver muy afectada, es muy frecuente tienen esta capacidad de disminuir la produccin de
mHCi la presentacin de antgenos de las clulas infectadas y por ellos la presentacin al TCR de los
TC y por ello la respuesta citotxica.
Se est intentando eliminar estos genes para bajar la incidencia de muerte. Se intenta utilizar la
mutagnesis dirigida y por recombinacin como en el caso de arriba.
Vas de entrada que usan los virus para infectar el organismo.
La piel es una barrera infracreable en general. La piel ,esa capa de clulas muertas, es la primera que
para los microorganismos. Peor hay orificios con el exterior, con clulas vas: va de netrada.
Va respiratorio a atravs del aire. La gripe, rhinovirus, vaccinia, variola, alcanzan las respiratorias
altas y en algunos casos alcanzaban los pulmones. Desde los pulmones pueden quedarse ah o bien
repartirse por todo el cuerpo
Las vas de entrada: restringidos a la zona de entradA: infecciones locales. Epitelio de las clulas
epiteliares, queda confinado ah O sistmicas: a todo el organismo.
(Virus del resfriado comn, no baja nunca al sistema respiratorio profundo) por una razn trmica,
crecen muy bien a
30-32 no crecen bien a 37, (los vapores: aumenta la temperatura de la nasofaringe)
Papilomas, se replican en la piel, en la capa de clulas vivas, no entran al torrente sanguneo, es una
razn de diferenciacin.
Ojos: adenovirus y herpes (neurotrpico, puede ir al nervio ptico produciendo cegeras e infecciones
del SNC)
Enterovirus: al sistema digestivo: reovirus, coronavirus (navidad reovirus en Madrid, con diarreas)
poliovirus, entra por la va digestiva, desde las temrianciones nerviosas del digestivo puede ir al
sistema nervioso central y producir parlisis.
Sexual: papilomas , HIV, Hrpes,
Hay virus capaces de atravesar la barrera placentaria, parvovirus B19, produce abortos, rubeola,
produce abortos
Citomelagovirus,
Heridas en la piel: agujas encisiones, HIV, linfotrpicos, rbia por mordeduras, hepatitis B,
transmisin parenteral.
Todas las clulas de las vas de entrada hay defensa innata: macrfagos, mucus, ciliadas,
los enterovirus no entran enteros
Viremia: ver los niveles de virus, esta viremia es combatida por el sistema de macrfagos y clulas
Apuntes de Virologa 78
fagocticas todo ese sistema son las clulas de Kuppfler macrfagos entre hepatocitos. Si vemos el
tiempo que esta viremia es combatida por las clulas de kuppfler es el aclarado, como las
labadoras
En general depende del tamao del virus, como el VV es rpido, y el ms pequeos como un
polivirus o picornavirus son ms lentos.
Bacterifago T4 por ejemplo que no es infectivo: lo elimina por el tamao, hay excepciones pero
depend Edel tamao, aplcia a la mayora de los virus.
Vacunas/proteccin.
Clsicas
DNArecombinante
Muertas
Vectores:
Poxvirus
Picornavirus
Adenovirus
Vectores: cualquier virus puede ser desarrollado como vector. Todos los vectores tiene la marca de la
bioloa del virus. Adems de eficacia cnica de gran escala, hay ah determinados vectores que van
pro delante en su impacto social:
Poxvirus: ya mencionado por sus capacidades para clonar, su tamao tan grande que puede tolerar
inserciones tan grandes. Adems de la patogenia etc.
Le siguen de cerca, los picornavirus, concretamente poliovirus es un vector con el aval de la vacuna
contra la olio. Se podra erradicar. Estos virus, desde el punto de vista de ser empleados como
vectores, tienen la desventaja del tamao, porque son pequeos no se puede meter un gen exgeno
porque no podra empaquetarse.
Pequeas protenas, pptidos exgenos que son presentados por la va humoral como la sepa sarn,
introducimos una secuencia exgena, en un punto del genoma flanqueado por el sitio de corte de la
proteasa del virus, estos tipos de RNA+ hace una poliprotena que es procesada por su proteasa. Para
que se exprese correctamente: flanqueado un sitio de corte, flanqueado por la protena y presentado
al sistema inmune.
Polio tiene una ventaja adicional, un poco ms difcil de ver:
Componentes del sistema INME en sangre o tejido linfoide, la respuesta inmune: importancia apara
constituir una barrera. Inmunidad que lo confiere la inmunoglobulina A esos epitelios son sitios
donde el organismo producimos esta inmunoglobulina que va a parar muchos patgenos.
Potencial la respuesta inmune en los epitelios, no solo la srica o de suero.
Esta produccin de iGA est inducida por los antgenos inducidos en el epitelio intestinal, en las
placas de peyer, se reunen en microestructuras clulas presentadoras de antgen APC, linfocitos y
clulas M. Son eficiente eficaces a la hora de procesar antgenos extraos que entran por la va
entrica, esas placas, dispara una respuesta inmune humoral, que se produce IGA en el epitelio que
entr el patgeno y adems epitelios mucosos lejanos que lo llvan los linfocitos.
Encuentra una respuesta en todas las mcosas para proteger las sucesivas infecciones de este
Apuntes de Virologa 79
organismo. Este virus que estimula este circuito: el principal es la cepa sarn de polio.
Esto es un aval que tiene la cepa arin: es un impotente inductor de la respuesta humoral.
Adenovirus,
de pequeo me decan, pinta un virus! y yo pintaba un adenovirus, es hasta infantil
35KPB
Para manipularlo: eliminable algn gen dispensable peor tiene un genoma muy compactado, nada
dispensable, hay una regin del virus:
regin late: estrcuturales VP
regin temprana early donde se codifican genes tempranos reguladores.
Los ms importantes son E1A y E1B protenas que inducen proliferacin celular, interaccionan con
p53 y Prb
La manipulacin clsica es introducir en naselula que se utilizar como vector: las protenas E1A e1B
: INDUCEN INMORTALIZACION: LINEAS ESTABLES, AHORA, SON TRANSFECTADAS POR UN
ADENOVIRUS QUE HEMOS REEMPLAZADO LOS GENES E1A E1B POR UN gen exgeno. De tamao
similar.
As se produzcan adenovirus recombinantes, con el gen X que queremos expresar.
Terapia gica , adenovirus que infecten selectivamente tumores que estn sobreexpreados p53 y
pRB.
Se manipulen los genes e1a y e1b que se expresen en tumores con alto p53 y prb: terapia oncolisis.
Lo que se construye son virus con estos genes alterados de forma que solamente crecen en clulas
que tienen estos niveles alterados.
Diversidad de formas
Ciclos vitales y eso les permite una presenca importante en la biosfera, infectan a todas las formas de
vida, asentados en nuestros propios genomas.
Responsables de enfermedades, revelantes, adems de funcionalmente darn emergencias o
reemergencias. Conviene seguir estudiando vrologia porque puedne reaparecer patgenos.
Modelos de biologaa molecular, inmunloga, estc
los virus son profesores en biologa
B.
Viruela de mono.
Enfermedad que afecta a monos en frica ecuatorial, pero pueden pasar al hombre,
causando un 15 % de muertes, aunque parece que la transmisin entre hombres es baja.
C.
Viruela vacuna.
Enfermedad que afecta a vacas, a las que produce unas lesiones en las ubres a partir de las
cuales se puede infectar los hombres., En el hombre producen una enfermedad y unas pstulas en
los dedos nicamente (es el virus que usaba Jenner).
D.
Paravacuna.
Apuntes de Virologa 80
Es un virus que afecta a la vaca, pero es diferente de la viruela de vaca. El hombre se puede
contagiar, producindose unas lesiones en manos y brazos.
E.
Molusco contagioso.
Hepadnavirus (Hepadnaviridae)
Los hepadnavirus son un tipo de virus animales muy especiales porque utilizan una trancriptasa
inversa en su ciclo de replicacin como los retrovirus. Son los virus ms pequeos que se conocen y
son de simetra icosadrica, presentando envoltura y un tegumento fibroso en ocasiones. Su genoma
se caracteriza por ser DNA circular parcialmente bicatenario; una de las hebras es adems
incompleta. Su pequeo tamao obliga a la existencia de solapamiento gnico.
Tras entrar en el citosol de la clula hospedadora, el cido nucleico se disgrega de la cpsida y la DNA
polimerasa que contiene el virin inicia su replicacin. Esta polimerasa es verstil: posee actividad
polimerasa de DNA, de retrotranscriptasa y tambin es capaz de funcionar como cebador proteico
para la sntesis de una de las cadenas de DNA. La replicacin implica la transcripcin mediante una
RNA polimerasa celular que genera un transcrito con repeticiones terminales. Estas repeticiones se
forman porque la polimerasa contina ligeramente ms all de una ronda de la molcula circular. La
retrotranscriptasa copia entonces esta molcula a DNA y lo empaqueta en el interior de los nuevos
viriones.
Patolgicamente hablando, el hepadnavirus ms importante es el virus de la hepatitis B, una
enfermedad que puede ser aguda o crnica, que se transmite por sangre, contacto sexual o
secrecin corporal, y que tiene como principales sntomas mal funcionamiento del hgado, ictericia,
inflamacin, aumento de las enzimas hepticaspuede finalizar en cirrosis y cncer heptico.
Apuntes de Virologa 81
Arenaviridae: te el genoma segmentat en dos parts. El seu genoma es denomina ambisense. Esta
composat per el fragment L (large) que es (+) ssRNA i el S (small) que es (+/-) ssRNA.
Per la transcripcio del gen GPC ens cal un intermediari replicatiu, ja que el gen GPC surt quan es
llegeix el fragment S en sentit contrari (-). En sentit directe (+) obtenim directament el mRNA per
traduir la proteina N.
* El clon infeccis
Si a partir de un RNA viric (+)ss podem transfectar un cultiu amb clons (+ss ds vector). Aixi que si
a partir dun vector de dsDNA obtenim el RNA i transfectem el cultiu in vitro, tambe el podrem infectar.
Pero, en el cas descollir un (-)ssRNA, no es generaran virions al cultiu perqu sense la transcriptasa
que porten els virions no podra dur a terme la multiplicacio virica. Per tant els genomes dels virus -ss
no son infectius per si mateixos, si no que els hi cal laccio de la transctiptasa/replicasa en tot cas
(excepte el virus de la Polio, que t un genoma infectiu per si sol).
Daltra banda, els retrovirus son un cas excepcional. Son +ssRNA i primer es produeix la biosintesi
amb lajut de la transcriptasa reversa (si no introduim TR i nomes posem genoma pur, no hi haura
infeccio). Ara be, el DNA al que dona lloc el RNA del retrovirus s es infectiu per si sol.
Per a que lRNA sigui infectiu (-ss, +/-ss, ds) hem de posar TR al medi. Les tecniques que sutilitzen
per introduir TR sanomenen reverse genetics (usant un aport extra que codifica per la TR)
Qualsevol modificacio genetica que vulguem fer en qualsevol virus de RNA, cal pasar-lo primer a
dsDNA per poder treballar amb ell.
Expressi gnica en retrovirus
Els retroviridae tenen una molecula de +ssRNA i es val de la RNApol II de la cellula hoste. Amb
la TR passen de +ssRNA a cDNA i despres a dsDNA.
Te un unic promotor al genoma: la transcripcio dona lloc a un unic transcrit que sutilitza per
Produir mes virions
Produir diversos mRNAs
Familia Picornaviridae.
Enterovirus, Rinovirus, Hepatovirus, Aftovirus.
A.
Familia Caliciviridae.
B.
Familia Astroviridae.
Los virus con RNA de cadena positiva son aquellos en los que el genoma (desnudo) sin
ninguna protena es infeccioso. Esto se debe a que el genoma RNA tiene la misma secuencia que el
RNAm. Entonces el genoma al entrar en la clula, acta como mensajero, sintetizndose protenas
del virus y teniendo lugar la infeccin.
FAMILIA PICORNAVIRIDAE.
Apuntes de Virologa 82
1.
Caractersticas.
Multiplicacin.
Los virus entran en la clula por endocitosis, en vesculas endocticas. Se libera el genoma del
virus y a partir del genoma se tienen que sintetizar protenas y nuevos genomas.
El genoma acta como RNAm, se lee todo entero por ribosomas, formndose una gran
protena llamada poliprotena que se rompe en otras protenas individuales. Algunas de estas
protenas son estructurales, mientras que otras son enzimas. Algunas de estas enzimas participan en
la replicacin del genoma. Concretamente se forma una RNApol. En esta replicacin, a partir del
genoma, que es de polaridad positiva, se forman cadenas complementarias de polaridad negativa, a
partir de las cuales se forman los genomas nuevos de polaridad positiva. Estas cadenas positivas
adems de ser genomas, tambin pueden actuar de mensajeros.
Se produce luego el ensamblaje de nuevos genomas y de protenas estructurales
formndose los virus que salen de la clula cuando sta muere y se rompe. stos virus se multiplican
y ensamblan y sintetizan en citoplasma, ya que todos los virus RNA se multiplican en citoplasma
excepto los Ortomyxovirus y retrovirus que lo hacen en el ncleo.
3.
Patognesis.
Existen varios generos dentro de esta familia (Picornaviridae) diferentes subfamilias:
A.
2.
Virus Coxsackkie
3.
Virus Echo.
B.
C.
D.
A. Enterovirus.
Apuntes de Virologa 83
A.1.
Poliovirus
Poliomelitis.
Se trata de picornavirus de simetra icosadrica, con una molcula de RNA monocatenaria de configuracin positiva lineal como genoma (que a pesar de carecer de CAP puede utilizarse como mRNA
porque presenta una larga secuencia que se pliega en forma de bucle imitando al complejo CAP) que
llevan a cabo las etapas de sntesis y autoensamblaje de su ciclo de multiplicacin en el citosol de la
clula hospedadora. La transcripcin genera una gran poliprotena que tiene que ser procesada, y
posteriormente la replicacin ocurre de la forma explicada para el bacterifago MS2 de E.coli.
Patologa: el virus del polio es el ms importante, pudiendo transmitirse por agua y alimentos; causa
infecciones orofarngeas-intestinales y en ocasiones del sistema nervioso.
Se transmite va fecal-oral, y se contrae por contacto directo mediante las manos, agua y
alimentos contaminados. Se diferencian varias etapas:
1. Fase digestiva. Los virus se multiplican en el tracto digestivo. En muchas ocasiones la
infeccin acaba en esta etapa.
2. Fase linftica. Los vius se multiplican en ganglios linfticos (pasan del tracto digestivo a
ganglios).
3. Viremia. Los virus se diseminan por el organismo y pueden pasan al sistema nervioso
comenzando la siguiente etapa.
4. Fase neurolgica. Se afecta al SNC (mdula y cerebro) pudiendo producir parlisis e incluso la
muerte, sobre todo si afecta al bulbo raqudeo.
Para controlar esta enfermedad existen vacunas que pueden ser de dos tipos:
- Vacunas con virus inactivados (muertos) con formaldehdo (formol). Se llama vacuna de Salk.
Se aplica mediante inyeccin y se usa menos que la de virus atenuados. Se recomienda en
mayores de 18 aos y en inmunodeprimidos. Dentro del virus de la polio existen 3 tipos
inmunolgicos y la vacuna debe contener los 3 tipos de virus (1, 2 y 3).
- Vacuna con virus atenuados (vivos). Son virus que infectan al organismo pero no producen
enfermedad. Aunque la vacuna puede ocasionar molestias como fiebre, sntomas digestivos, ...
Fue desarrollada por Sabin, se administra por va oral. Como no requiere uso de material
estril, su uso est ms extendido.
Esta vacuna es obligatoria en Espaa y se realiza a los 2, 4, 6 y 18 meses de edad y luego a los 4
6 aos, dependiendo de la Comunidad Autnoma (4 en Madrid y 6 en Castilla la Mancha). La
vacuna de Sabin tiene el inconveniente de que en ocasiones la cepa 3 puede revertir a
patgena y producir entonces una enfermedad neurolgica. Ocurre en uno de cada 10
millones de personas vacunadas (en EE.UU se han dado casos, en Espaa no).
Poliovirus: virus de RNA de desarrollo citoplasmtico. El ncleo no participa en nada en su replicacin y ciclo vital
Entra a travs de un receptor, es un virus de +RNA , puede actuar como un mRNA, se copia a dsRNA
a travs de una polimerasa de RNA, se genera a partir de este dsRNA se forman RNA que son mensajeros. Esto se generaliza al RNA.
Una cosa para replicarse que pasa a travs de RNAds, y otra cosa es que ahcer RNAM transcripcin.
En seguida libera su genoma, interacciona con el receptor y enseguida la cpsida se abre y libera el
RNA, cambios de conformacin del acpsida, apsa a ser un mensajero ms de la clula es te RNA
Apuntes de Virologa 84
accide a los ribosomas y es traducido. Entonces en el caso de la polio, hay ods proceos distintos
complementarios, uno es la traduccinnd e protenas y otro es el metabolismo del virus, replicacin
y transcripcin, sucee en estas vesculas grandes de las celulas en una especie de nucleo que el virus
que fabrica a partir de las vesiculas celulares dos compartimentos, dedicaso da prtoteinas y al replicarse.
Todo el genoma del virus se transforma en una gran proteina que va a ser procesada a las protenas
que la compone pro cortes proteolticos para dar lugar a las protena del vius, es muy importante en
poliovirus.
Maximizan el potencial genetico, dependiendo del corte da lugar a una proteina u otra.
Estas proteinas hay polimerasas del virus, que replican y transcriben los RNA viruales. Hace estso
intermedios de doble banda, hay un paso de doble banda y una vez as, se transcribe por la prolimerasas del virus, esta fbrica de mensajeros, van saliendo estas vesculas, y van a los ribosomas , a
mayores cantidades, y todo va aumentando en cascada. L RNA no se sabe como atraviesa la vesculas.
Otas veces estos mrna interaccionan con protenas de la cpsida y se forman las partculas virales,
organiza el citoplasma a su medida para expresar su material gentico de forma gentica, se forman
factoras, donde se hacen macromolculas del virus (Rna o protenas, estas vesculas seran factoras).
En general producen infecciones leves del tracto respiratorio y en ocasiones del digestivo,
pero producen en ocasiones enfermedades ms graves.
Virus Coxsackie (el nombre se lo debe a una ciudad de EE.UU). Suele causar resfriado
comn, aunque tambin pueden afectar al corazn (produciendo miocarditis), al pncreas
(pancreatitis), rin (nefritis), etc.
Virus ECHO. Pueden producir tambin infeccin de va respiratoria, gastroenteritis y en
ocasiones miocarditis y meningitis entre otras enfermedades.
B. RINOVIRUS.
Son causantes del resfriado comn, que es una enfermedad que afecta al tracto respiratorio
superior y no suele cursar con fiebre. Las manifestaciones clnicas son la rinitis (inflamacin de la
regin nasal, especialmente de las membranas mucosas), congestin (obstruccin) nasal,
estornudos, dolor de garganta, mucosidad (descargas nasales acuosas), tos, y una sensacin general
de malestar generalmente sin fiebre. La transmisin es area, se produce por los aerosoles (al toser),
o tambin por contacto directo por manos, objetos, .. (entre personas).
Es una enfermedad leve, pero es molesta y una persona puede tener varios resfriados al ao,
debido a que el resfriado es causado por diferentes virus (no solo Rinovirus) como los Coxsackie o los
Coronavirus. Adems, dentro de los Rinovirus existen ms de 115 tipos inmunolgicos diferentes.
Es imposible obtener una vacuna frente a todos estos virus.
C. HEPATOVIRUS.
Apuntes de Virologa 85
D. AFTOVIRUS.
Producen la fiebre aftosa. Es una enfermedad que afecta a animales de pezua partida, tanto
domsticos (vacas, ovejas, cabras, cerdos), como salvajes (jabals, ciervos, ...). El hombre rarsima vez
se infecta.
Los sntomas en los animales son: elevada fiebre, aparicin de vesculas (llamadas aftas) en
boca, patas y ubres sobre todo. Esta enfermedad produce una prdida de peso del animal,
disminucin de produccin de leche. La mortalidad es mayor en animales jvenes por afectacin del
corazn.
Se transmite muy fcilmente, es uno de los virus animales ms contagiosos. Se elimina por el
aire que elimina el animal al respirar, saliva, semen, leche, heces, orina, ... Se transmite por contacto
directo entre animales y tambin a travs de objetos contaminados y productos de origen animal.
La importancia de la enfermedad no radica en que afecte al hombre, sino en las
implicaciones socioeconmicas que implica esta enfermedad ya que supone elevadas prdidas para
el sector ganadero y de alimentacin y tambin conlleva elevados gastos para su control.
La enfermedad se controla impidiendo de forma absoluta el ingreso del virus en zonas libres
de la enfermedad, lo que implica el sacrificio de animales infectados, desinfeccin de material en
contacto con animales (entonces elevadas prdidas econmicas).
Familia Caliciviridae.
1.
Caractersticas.
2.
Patognesis.
Los Calicivirus son causantes de gastroenteritis viral aguda. Esta enfermedad es causada
fundamentalmente por 3 tipos de virus: Calicivirus, Astrovirus y Reovirus (Rotavirus).
Las gastroenteritis pueden ser leves o pueden causar una deshidratacin grave y a veces
mortal. Es una de las principales causas en pases subdesarrollados.
Para el control de esta gastroenteritis lo nico que se puede hacer es la reposicin de
lquidos.
En esta familia se incluyen los virus causantes de la Hepatitis E.
Apuntes de Virologa 86
Familia Astroviridae.
Son virus pequeos de 30 nm con cpside icosadrica y el genoma es una molcula de RNA
de cadena sencilla y polaridad +.
Reciben su nombre porque al microscopio electrnico se observaban con forma de estrella
(luego se vio que esa forma de estrella era debida al pH alcalino de heces, pero son icosadricos).
Son causantes de gastroenteritis.
Familia Togaviridae.
Familia Flaviviridae.
Familia Coronaviridae.
Familia Togaviridae.
1. Caractersticas.
Reciben este nombre porque tienen envoltura (toga = envoltura). Tienen un tamao de 60
nm y una envoltura en la que se distribuyen unas pequeas espculas. Tiene cpside icosadrica y el
genoma es una molcula de RNA de cadena sencilla y configuracin positiva subgenmica (polaridad
+).
Organitzaci gentica de virus ssRNA
Togaviruses
Estructura: 5-- CAP (com als mRNA) UTR (regio no codificant) proteines no estructurals
proteines estructurals UTR AAAAAAA3
2. Multiplicacin.
En cuanto a la replicacin de estos virus, es muy similar a la de los poliovirus y los fagos de RNA
monocatenario de configuracin positiva: el RNA presenta en el extremo 3 una secuencia CAP y en
el extremo 5 una secuencia poli-A; este material gentico es replicado a una nueva molcula
monocatenaria de RNA complementaria (configuracin negativa) y a partir de esta se origina una
nueva molcula de RNA igualmente monocatenaria y complementaria (configuracin positiva) pero
ms pequea que la anterior porque slo se duplica parte del molde (de ah el nombre de
subgenmico). Posteriormente se aadir el otro fragmento de RNA para conformar un genoma
completo.
En cuanto a la traduccin, el RNA original viral es transcrito a un mRNA que codifica protenas no
estructurales; el RNA subgenmico es transcrito a un mRNA que codifica protenas estructurales.
Apuntes de Virologa 87
Los virus entran en la clula por endocitosis. El genoma del virus se libera de sus cubiertas y
al ser de cadena + puede actuar directamente como RNAm, pero no es ledo todo el genoma, slo se
lee en parte.
Luego se forma una poliprotena (protena grande) que se rompe en diferentes protenas que
son enzimas. Estas enzimas participan en la replicacin del genoma. A partir del genoma se forman
cadenas - que sirven de moldes para la sntesis de nuevos
nuev genomas de cadena +.
A partir de ese RNA de cadena -,, tambin se forman unos RNA de cadena + ms pequeos,
que se denominan RNA subgenmicos (que son ms pequeos que el genoma) que se unen a los
ribosomas y dan lugar a una poliprotena que se rompe en protenas estructurales del virus (esta es
la zona del genoma que no se ley). Luego se produce el ensamblaje. Por un lado se forman las
nucleocpsides y por otro las protenas de la envoltura emigran a la membrana citoplasmtica y los
virus salen por gemacin
cin en la superficie de las clulas.
Gnero Alphavirus.
Son virus que se transmiten por mosquitos.. Las enfermedades producidas por estos virus se
dan sobre todo en reas tropicales. Estos virus, normalmente infectan a diferentes animales y el
hombre es un
n hospedador accidental, que se infecta cuando es picado por un mosquito.
Suelen producir en el hombre enfermedades leves que cursan con fiebre y dolores
musculares y articulares. En ocasiones, se produce afectacin del cerebro, producindose encefalitis.
Ejemplos de estos virus:
- Virus de las encefalitis equina.
equina. Se denomina as porque los virus se aislaron por primera vez
en caballos, aunque en realidad parasitan a aves, siendo el hombre y el caballo
hospedadores accidentales. Estas encefalitis en ocasiones
ocasiones son graves, pudiendo a veces
ocasionar grandes daos en el cerebro e incluso la muerte. Por ejemplo encefalitis equina
occidental (en parte occidental de EE.UU), encefalitis equina oriental y encefalitis equina
venezolana. Todas estas enfermedades se dan
da en Sudamrica.
- Otras son producidas por el virus Chikungunya (frica y Asia) y el virus Mayaro (Sudamrica).
Gnero Rubivirus.
Apuntes de Virologa 88
por va respiratoria, se multiplica en el tracto respiratorio, luego se multiplica en ganglios linfticos y
luego pasa mediante la sangre a diferentes rganos del cuerpo. Los sntomas son generales (fiebre,
cansancio). Es tpica la aparicin de una erupcin roja en el cuerpo que NO sobresale sobre la
superficie de la piel.
La rubola prenatal. En las mujeres embarazadas el virus es capaz de atravesar la placenta,
invadiendo el feto y producindolo daos, que son mayores cuanto ms temprana sea la infeccin.
Se producen daos en los ojos, odos, corazn, cerebro y se puede producir la muerte (se considera
como aborto teraputico).
El control de la rubola se hace mediante una vacuna por virus vivos atenuados. Esta vacuna
no tiene como objeto proteger a los adultos (donde la enfermedad no es grave), sino que el objetivo
fundamental es proteger al feto. Por ello la vacuna es obligatoria en Espaa. Se administra a los 15
meses y a los 4 6 aos, segn la comunidad autnoma. Se administra de forma conjunta con la de
las paperas y el sarampin, constituyendo todas la vacuna llamada triple vrica.
Es recomendable que se vacunen las mujeres en edad de tener hijos y que no estn
inmunizadas frente a la rubola, no debindose quedar embarazada hasta pasados 3 meses.
Otra forma de controlar la enfermedad es la inmunizacin pasiva. Para intentar prevenir o
atenuar la rubola se administran Ac. P. ej. las mujeres embarazadas no inmunizadas y que han
estado en contacto con alguien que la est pasando. No est muy clara la eficacia de la inmunizacin
pasiva.
Familia Flaviviridae.
1. Caractersticas.
Tamao de 45 nm. Tienen una envoltura con espcula, cpside icosadrica y el genoma es
una molcula de RNA de cadena sencilla y polaridad +.
2. Patognesis.
Se diferencian en esta familia los Gneros Flavovirus (que incluye virus transmitidos por
mosquitos) y el virus de la Hepatitis.
Gnero Flavovirus.
Fiebre amarilla. Es una enfermedad grave porque tiene una mortalidad del 15 %.
Esta enfermedad se da en zonas tropicales de frica y Asia. Los virus infectan a
diferentes rganos del cuerpo, sobre todo al hgado, bazo y riones, produciendo
grandes daos y hemorragias internas. El nombre de la enfermedad viene del
color que toma la piel de los enfermos, al acumularse en la misma pigmentos
biliares, como consecuencia de la rotura de clulas del hgado. Se diferencian dos
tipos de fiebre amarilla:
Apuntes de Virologa 89
Para el control de la fiebre amarilla ha sido muy efectivo el control de los
mosquitos mediante insecticidas. El problema de este tipo de control es que no se
puede acabar con la variedad de la jungla (por la gran extensin y por motivos
ecolgicos). Existe una vacuna constituida por virus atenuados (vivos). Se usa en
zonas endmicas de la enfermedad. En Espaa se recomienda a viajeros que
vayan a determinadas reas.
-
Dengue. Es una enfermedad que suele ser ms leve que la fiebre amarilla. Tiene
una distribucin mundial (sobre todo en las zonas tropicales). En las zonas
tropicales de Asia, el denguie suele ser ms peligroso. Se denomina dengue
hemorrgico porque produce hemorragias internas teniendo una mortalidad del
30 %.
Otros flavovirus causan enfermedades ms leves que suelen cursar con fiebre,
dolores articulares y musculares, etc.
Familia Coronaviridae.
Estos virus tienen un tamao de 120 nm, envoltura. La cpside no se sabe bien como es (en
el libro oficial de taxonoma aparece como helicoidal, pero los dems de este tipo de virus es
icosadrico). El genoma tiene polaridad +, siendo una molcula de RNA de cadena sencilla.
El nombre de estos virus viene de que tienen unas espculas muy prominente dndole un
aspecto de corona solar.
Estos virus son causantes de enfermedades del tracto respiratorio, sobre todo faringitis y
resfriados. Tambin parece ser que causan gastroenteritis.
Coronaviruses
Tal i com entra a la cellula infecta als ribosomes, ja que es com un mRNA.
Te ORFs amb STOPs pel mig, i aixo fa que es pari lactivitat de traduccio en un principi.
1. A la traduccio primaria, es tradueix nomes un gen no estructural: la polimerasa/replicasa virica
(es RNA polimerasa-RNA depenent).
2. Mitjancant lactivitat REPLICASA, produeix lantigenoma (o intermediari replicatiu) per poder
traduir. Aquest intermediari, dona lloc al genoma parental.
3. Mitjancant lactivitat TRANSCRIPTASA, acaba de transcriure els altres gens que havien quedat
sense expressar (per l STOP) i codificara per els virions.
Generalidades.
Familia Orthomyxoviridae.
Virus de la gripe.
Apuntes de Virologa 90
Variacin antignica.
Familia Paramyxoviridae.
1.
Generalidades.
Todos los virus de cadena son con envoltura.
Los virus con RNA de cadena son virus en los que el genoma desnudo del virus no puede
producir por s slo una infeccin en la clula, porque el genoma es complementario en su secuencia
de bases con los RNAm. Entonces, el genoma de stos virus necesita entrar en la clula acompaado
de una enzima RNApol que formar mensajeros a partir del genoma y entonces producir la
infeccin.
En este grupo de virus, destacan dos familias:
-
Familia Orthomyxoviridae.
Familia Paramyxoviridae.
Orthomyxovirus
Paramyxovirus
Dimetro
180 nm
Multiplicacin
Genoma
Espculas
Hemlisis
No
Un fragmento de RNA
Familia Orthomyxoviridae.
Apuntes de Virologa 91
1.
Caractersticas.
Son virus con envoltura, en la que se diferencian dos tipos de espculas, unas con actividad
neuraminidasa y otras con actividad hemaglutinina. Debajo de la bicapa lipdica se localiza una capa
de protenas denominada capa matriz, que confiere estabilidad a la envoltura.
El genoma est formado por varios fragmentos diferentes de RNA de cadena sencilla y
polaridad negativa segmentado.
Existen tres tipos de virus de la gripe: A, B y C. Los A y B tienen 8 fragmentos de RNA y los C
slo 7. Cada fragmento de RNA esta rodeado por una cpside helicoidal. Adems, el genoma est
acompaado de enzimas RNApol.
2.
Multiplicacin.
Debido a la manera en la que se produce la gemacin que libera al virus, se dice que ste no tiene
forma definida, por lo que se le denomina polimrfico. En la envoltura externa hay presentes dos
protenas que interaccionan con la superficie del hospedador:
- Una de ellas es la hemaglutinina, llamada as por su capacidad de producir hemaglutinacin,
esto es, aglutinacin de los hemates de la sangre. Los glbulos rojos no son el tipo de clula
hospedador normalmente infectada por este virus, pero estos tienen en su superficie el
mismo componente de membrana, el cido silico, que las membranas de las clulas de las
mucosas de las vas respiratorias. Por tanto, los hemates resultan un tipo celular muy conveniente para llevar a cabo ensayos y determinar la hemaglutinacin. Un aspecto importante
de la hemaglutinina del virus es que el uso de anticuerpos especficos contra esta hemaglutinina neutraliza el virus y es el mecanismo que se utiliza en las vacunas contra estos virus.
- Un segundo tipo es la neuraminidasa, que rompe cido silico en la membrana citoplsmica
del hospedador. Parece actuar fundamentalmente durante el proceso de ensamblaje del virus, eliminando el cido silico de la membrana del hospedador que por otro lado bloqueara
dicho ensamblaje.
Adems de neuraminidasa y hemaglutinina, los viriones tienen otras dos enzimas clave en el interior:
una replicasa de RNA que convierte el genoma de cadena negativa en cadena positiva (como ya
hemos estudiado para los rhabdovirus) y una endonucleasa de RNA que corta un cebador a partir de
mRNA precursores con CAP del hospedador.
Tras el reconocimiento especfico virus-hospedador, el primero penetra en el segundo y se dirige al
ncleo donde el cido nucleico se disocia de la cpsida. La liberacin activa la replicasa de RNA. Las
molculas de mRNA se transcriben en el ncleo a partir del RNA viral utilizando como cebadores
oligonucletidos derivados de un corte llevado a cabo por la endonucleasa viral en el extremo 5 de
mRNA del hospedador con CAP recin sintetizados. Por tanto, los mRNA del virus llevan CAP en su
extremo 5, y posteriormente se les aaden colas de poli-A al extremo 3. Una vez maduros, son
llevados al citosol y all se traducen.
Los ocho segmentos del genoma del virus de la gripe codifican diez protenas Los mRNA se
transcriben a partir de seis de los segmentos dando lugar cada uno de ellos a una protena, mientras
que los otros dos codifican dos protenas cada uno. Estos ltimos no son traducidos como mRNA
policistrnicos como en procariotas, ya que los ribosomas eucariontes slo reconocen como codn
de iniciacin el AUG ms cercano al extremo 5 del m RNA. Por ello, slo pueden fabricar una
protena de cada molcula de m RNA. As, los dos mRNA completos transcritos a partir de esos dos
segmentos son inicialmente traducidos dando lugar slo a una protena cada uno. Pero en cada uno
de los casos, se traduce una protena adicional a partir del mensajero tras la maduracin del mismo
Apuntes de Virologa 92
por accin de la maquinaria de maduracin del RNA del hospedador.
Los Ortomixovirus,, al igual que
los retrovirus, son los nicos virus
rus con
RNA en los que parte del ciclo de
multiplicacin se produce en el
interior del ncleo de la clula
hospedadora.
Los virus entran en la clula
mediante endocitosis. De la vescula
endoctica
se
liberan
las
nucleocpsides y el genoma del virus
entra al ncleo. A partir de cada
fragmento del genoma por un lado se
forman un RNAm que es de un tamao
ms pequeo que ese fragmento del
genoma de menor tamao. Por otro
lado a partir de cada fragmento del
genoma se forman unas cadenas de
polaridad positiva de igual tamao que
el fragmento que servirn de molde
para la sntesis de cadenas negativas
(nuevos genomas).
Los mensajeros salen al citoplasma donde se forman las protenas. Parte de las protenas
vuelven al ncleo, donde se ensamblan las nucleocpsides. Las protenas que van a formar parte de
las envolturas van a la membrana plasmtica de la clula. Las nucleocpside salen del ncleo,
emigran a la membrana plasmtica y el virus sale de la clula mediante gemacin.
La actividad neuraminidina presente en espculas
espculas de la envoltura del virus, es importante
para la transmisin del virus desde clulas infectadas a clulas sanas. Esta actividad neuroaminidasa
libera residuos de azcares que estn localizados en la superficie de la clula, en glicoprotenas y
glicolpidos.
olpidos. Esto favorece la salida de los virus de la clula (sino, quedara atrapado en esa maraa).
Adems esa actividad neuroaminidasa facilita que los virus atraviesen esas capas mucosas
que rodean a las clulas y la entrada de nuevas clulas.
Virus de la gripe
Protena muy prominente HA, hemaglutinina (aglutinacin de eritrocitos) le permite hincar la infecinfe
cin, el receptor
tor de la clula res reconocido por la hemaglutinina. Esta protena tiene pptidos de
fusin. Fusionar membranas,
nas, est en la misma protena.
protena. es una protena muy prominente, con seal
de anclaje, y con un dominio enorme extraviral, son alfa hlices que confieren la conformacin de la
protena, hay lminas beta donde exponen los tios de glicosidacin, hay que ver la cantidad
cant
que hay
de ellos,
os, se ha propuesto que estos azcares impiden la accin de los anticuerpos, sale de la resre
puesta inmune, la protena tiene un pptidos de fusin, no interviene hasta el momento adecuado,
el dominio del receptor esta en la parte ms distal, definida pro las
las lminas beta, el dominio del
recptor est bastane deprimido, est bastante conservada, los variantes de cada ao, en base de su
capacidad de variabilidad gentica, hay una region no puede cambiar mucho reconocer al receptor,
esa regin est deprimida, en la parte distal de la protena, es difcil que el sistema inmune reconozrecono
ca esa parte, as pude evadir el sistema inmune.
Hay interacciones de la nucleocpsida entre las protenas virales y esta, por lo tanto, concentra las
protenas de los virus, y salen pro gemacin, el virus, solamente suele tener protenas vricas.
Apuntes de Virologa 93
1.
Patognesis.
Los Ortomixovirus son los causantes de la gripe. Vamos a hablar de 3 aspectos de la gripe.
A.
B.
Variacin antignica de virus de la gripe. Desde que se aislaron los primeros virus de la gripe,
se observ que haba diferentes tipos de virus. Estos virus se diferenciaban por diferentes
caractersticas, entre ellas, por las protenas de la nucleocpside, por las protenas de la
envoltura hemaglutinina y neuraminidasa, adems de otras caractersticas. Entonces, en un
principio, segn las diferencias en protenas de nucleocpside se diferencian en 3 grupos: A, B
y C.
Grupo A y B. Son los que causan epidemias de gripe. Los virus del grupo A afectan al
hombre, a animales y a aves. Los del grupo B slo afectan al hombre. A su vez tambin
se vieron diferencias dentro de los virus A y B, entonces se clasificaron en subtipos y
variantes. Estos diferentes subtipos y variantes se deban a que estos diferentes virus
mostraban diferencias en protenas hemaglutinina y neuraminidasa. Entonces al ser las
protenas diferentes, inducan en el organismo la formacin de Ac diferentes y
reaccionaban con Ac diferentes.
Grupo C. Causan algn caso aislado de gripe y no tienen importancia clnica.
Adems de la existencia de los diferentes subtipos de virus, se comprob que los virus
de la gripe van surgiendo, con el tiempo, una variacin antignica que es la responsable de
que existan diferentes tipos y variantes del virus de la gripe.
La variacin antignica puede ser de 2 tipos:
a.
b.
La existencia de esta variacin tiene gran importancia clnica, ya que cuando una
persona es infectada por un virus determinado, produce Ac frente a ese virus. Pero si esa
persona resulta infectada posteriormente por un virus diferente, los Ac que han producido
frente al primer virus, sern menos eficaces o incluso ineficaces. Sobre todo se da esto cuando
se han producido variaciones antignicas mayores, quedando la poblacin mundial
Apuntes de Virologa 94
desprotegida, producindose entonces grandes epidemias (como la gripe espaola de 19171918, en la que murieron 20 millones de personas).
C.
Familia Paramyxoviridae.
1.
Caractersticas.
Los Paramyxovirus tienen una envoltura membranosa en la que se diferencia dos tipos de
espculas. Unas de estas espculas tiene actividad hemaglutinina y neuraminidasa (ambas actividades
juntas), y otras espculas con protenas que favorecen la fusin de la envoltura del virus con la
membrana celular (entonces protenas F de fusin), teniendo adems actividad hemolisina.
Debajo de la bicapa se sita una capa matriz. El genoma es una molcula de RNA de cayena
sencilla y polaridad negativa, rodeada de una nucleocpside helicoidal y unida a enzimas RNApol.
2.
Ciclo de multiplicacin.
Apuntes de Virologa 95
Los virus entran en la clula mediante fusin de la envoltura con la membrana plasmtica
celular. Al final queda libre el genoma en el citoplasma, donde tiene lugar la multiplicacin. A partir
del genoma se formarn protenas y nuevos genomas.
As, por una parte, a partir del genoma se forman varios RNAm que se unen a los ribosomas
para formar protenas. Por otro lado tiene lugar la replicacin del genoma en la cual, a partir de la
cadena -, se forma una cadena complementaria +, que sirve de molde par la sntesis de cadenas
que forman los nuevos genomas.
A continuacin se ensamblan las nucleocpsides con el genoma y las protenas de la cpside.
Por otro lado, las protenas que van a formar parte de la envoltura emigran a la membrana
plasmtica y a esas zonas se dirige la nucleocpside y los virus salen de la clula por gemacin en la
membrana plasmtica.
3.
Patognisis.
Son los causantes de las paperas o parotiditis. Tambin causantes del sarampin y tambin
se incluyen en esta familia los virus respiratorio sinticial (VRS) y el virus de la parainfluenza. Estos dos
ltimos causan enfermedades del tracto respiratorio.
Apuntes de Virologa 96
inmunizacin pasiva en ciertos casos (administrar Ac) para prevenir o atenuar la
enfermedad. P. ej. en nios inmunodeprimidos se administra la inmunizacin pasiva
para evitar el desarrollo de la enfermedad.
3. Virus Respiratorio Sincitial (VRS). Es causante de infecciones respiratorias. En adultos
estas infecciones, en general, slo afectan al tracto respiratorio superior y produce
infecciones leves. En nios (sobre todo pequeos) el virus tiende a producir neumonas
(tracto respiratorio inferior), siendo este virus la principal causa de enfermedades del
tracto respiratorio inferior en nios pequeos. En nios prematuros puede ser muy
grave. Adems es la causa ms frecuente en infecciones nosocomiales (en hospitales) en
nios. Para el tratamiento de esta enfermedad existe un compuesto que es la Ribavirina,
que es un anlogo de nucletido. Es un antivrico de amplio espectro (tiene efecto
frente a diferentes virus), pero en clnica slo se usa frente al virus respiratorio sincitial,
tambin se ha probado su uso (el ao pasado) en hepatitis C, y tambin frente a unas
fiebres hemorrgicas llamadas fiebres hemorrgicas de Lassa. Se administra slo en
hospitales en forma de aerosol oral, para el tratamiento en nios. Hasta el ao pasado
este era el nico tratamiento, pero se aprob un compuesto llamado Palizumab que es
un Ac monoclonal activo slo frente a ste virus (VRS) y que se obtiene por tcnicas de
Ingeniera Gentica (es como una inmunizacin pasiva). Slo se aplica para prevenir
enfermedades graves del tracto respiratorio inferior en nios de alto riesgo (prematuro
en hospital). De momento no se aplica como tratamiento.
4. Virus Parainfluenza. Causan infecciones respiratorias agudas que en adultos suelen ser
leves y en nios son de gravedad variable (de leves a agudas), pero tiene menor
importancia que el VRS.
2. Ciclo de multiplicacin.
en el proceso de replicacin y transcripcin, se utiliza una replicasa de RNA que crea una
nueva cadena monocatenaria de RNA a partir del genoma viral, que ser complementaria y por tanto
tendr configuracin positiva. Esa ltima ya podr transcribirse o utilizarse como molde para crear
nuevas cadenas de RNA complementarias (de configuracin negativa, como la original) que podrn
servir de genoma a los futuros viriones.
Como ya hemos mencionado, una replicasa de RNA presente en el virin maduro es la responsable
de la creacin de una nueva molcula de RNA monocatenaria complementaria a la del genoma viral
que por tanto ser de configuracin positiva. Una vez creada, puede darse la transcripcin en el
Apuntes de Virologa 97
citosol de la clula hospedadora. Este proceso origina dos tipos de mRNA:
- La primera clase es una serie de mRNA monocistrnicos (codifican una sola protena) que
codifican protenas estructurales
tructurales del virus.
- La segunda clase son RNA de cadena positiva que suponen una
una copia del genoma vrico y
que podrn utilizarse para la sntesis proteica o como moldes para la creacin de los genogen
mas de los futuros viriones.
El virus entra en la clula por
endocitosis, formndose vesculas
endocticas liberndose el genoma del
virus
rus en el citoplasma celular y a
partir de l. Por un lado se forman
RNAm que darn lugar a protenas, y
por otro tiene lugar la replicacin del
genoma, en la que a partir del
genoma de cadena -,, se forma un RNA
de cadena + que sirve de molde para
la sntesis
sis de nuevos genomas de
cadena -.
A continuacin, se produce el
ensamblaje de los nuevos virus: se
forman nucleocpsides, que emigran
hacia la membrana plasmtica, donde
estaban insertadas las protenas de la envoltura y el virus sale de la clula por gemacin.
gemacin.
Durante este ciclo, se acumulan en el citoplasma celular grandes cantidades de
nucleocpsides que forman unos corpsculos llamados Corpsculos de Negri,
Negri que sirven para
diagnosticar la rabia. stos se observan en clulas de la mdula y del cerebro de animales rabiosos
mediante colorantes especficos y tambin utilizando Ac marcados (tcnicas de inmunocitoqumica).
3. Patognesis.
Patolgicamente hablando, el ms importante es el causante de la rabia, que es una
enfermedad infecciosa que se transmite por mordedura de animales infectados y que afecta a todos
los mamferos. El hombre es infectado a partir de la saliva de animales rabiosos, normalmente
mediante mordedura del animal, aunque tambin puede ser infectado por heridas o araazos que
entran en contacto
ontacto con dicha saliva.
Cuando infecta a un humano, se multiplica en el msculo esqueltico y el SNC; posteriormente
avanza por todo el cuerpo a travs de los nervios perifricos hasta llegar a las glndulas salivales.
La sintomatologa tpica incluye encefalitis,
encefalitis, dolor, ansiedad, irritabilidad, depresin, fatiga,
sensibilidad a la luz y el sonido, hidrofobia (miedo a tragar), espasmos musculares y finalmente
parlisis; la muerte viene por la destruccin de las zonas del cerebro que controlan la funcin
respiratoria.
los principales reservorios de la misma suelen ser animales salvajes como lobos, zorros o
murcilagos y en ocasiones animales domsticos como el perro. En dichos reservorios se multiplica
en sus glndulas salivales, de ah que suela transmitirse
transmitirse por mordedura o por contaminacin con la
saliva. Los animales que infectan al hombre pueden ser domsticos (perros, gatos, ...) o salvajes
(lobos, zorros, mofetas, ... y murcilagos, en cuyo caso, no slo por la mordedura, sino tambin en
cuevas donde hayan
ayan numerosos murcilagos infectados, crendose un ambiente de aerosoles de la
saliva del murcilago, infectndose el hombre al respirar estos aerosoles).
Apuntes de Virologa 98
El virus se multiplica en el lugar de la infeccin y despus, progresa a lo largo de los nervios
hasta el SNA, produciendo una encefalitis mortal. El perodo de incubacin de la enfermedad es largo
y variable (de unas semanas a un ao).
Su control se ejerce fundamentalmente mediante vacunacin que puede ser de los animales
domsticos (en pases desarrollados, donde se ha eliminado prcticamente la rabia, aunque sigue
existiendo el peligro de sta en animales no domsticos, que pueden atacar a los domsticos). Es
fundamental tener gran precaucin a la importacin de animales para evitar la llegada de la rabia.
Tambin se puede controlar, aplicando la vacuna en el hombre, pudiendo realizarse una
vacunacin preventiva previa a la exposicin al virus, en personas con peligro de entrar en contacto
con el virus (ej, veterinarios, cuidadores de animales en zoos, guardabosques, espelelogos, ...) y
tambin se puede realizar una vacunacin posterior a la exposicin al virus, en personas mordidas
por un animal rabioso, o que no se haya podido capturar para ver si est o no rabioso.
Aunque la vacuna se aplica despus de la exposicin al virus, sigue siendo una vacuna, pues
debido al largo perodo de incubacin de la enfermedad, al organismo le da tiempo a fabricar Ac
antes de que el virus llegue al SNC. Todas las vacunas estn formadas por virus muertos.
Adems, tambin en el caso de una posible exposicin al virus, se emplea una inmunizacin
pasiva, administrando al individuo Ac contra el virus.
-RNA: rhabdovirus ejemplo el de la rabia, en estos casos el virus, tiene envuelta, y tiene una nucleocpsida helicoidal, entran a travs de receptores el RNA se libera en el citosol, este RNA es un RNA-,
no pude ser traducido a los ribosomas, y es una molcula de RNA que se quiere replicar en el citoplasma y no puede traducir y replicar, su propia partcula lleva alguna molcula de polimersas, de
forma que el RNA del propio virus, sin que haya traduccin, va a ser copiado mensajeros del virus, y
alguna replicacin, el virus se relaja su estructura y as polimerasas queda rodeadas en el RNA que lo
protegen y lo usa para transcribir, hay una transcripcin localizada, y se producen los primeros mensajeros, entonces, estos mensajeros van a ser traducidos y se producen protenas que disparan el
ciclo vital del virus, algunas de esas protenas son polimerasas, replican las protenas para que el
ciclo amplifique su cascada.
-RNA s propia polimersasa se produce mensajeros + (pequeos) que se van a traducir, y va a ver
copia a doble banda, que van a servir como olde para hacer mas mensajeros.
Moforgnesis de un virus con envuelta es diferente, la morfognesis : hay dos caminos de producir
virus, las protenas de la envuelta y las protenas d ela nuclocpisda, las protena de la envuelta va a
la via de la exportacin, RER, GOLGI y se anclan a la membrana de la clula, la clula infectada esta
llenado su membrana de protenas del virus, para madurar la propia membrana plasmtica, a partcula se forma en la propia membrana plasmtica. Sucede pero una interaccin protena protena
entre la nucleocpsida helicoidal que se acaba de hacer y la proteina anclada.
Para formar la morfologa de bala de can.
Virus icosadricos que maduran en membranas.
La interaccin entre las protenas del virus excluyen las protenas de las clulas. Salida por gemacin
nunca emos partculas nacientes en el citosol, solo las veramos en la membrana.
Familia Filoviridae.
1. Caractersticas.
Reciben este nombre porque son virus alargados o filamentosos, con 8mm de grosor y 1301.000mm de largo (incluso los hay de 14.000mm). Adquieren formas diversas, plegndose.
Tienen envoltura, con cpside helicoidal y su genoma es una molcula de RNA de cadena
Apuntes de Virologa 99
sencilla y polaridad -.
2. Patognesis.
En esta familia se incluyen los virus Harburg y bola,, causantes de fiebres hemorrgicas en
diversas zonas de frica, que son muy graves por producir
producir la mortalidad del 50-90%
50
de los
infectados, debido a la aparicin de hemorragias internas en diferentes rganos del cuerpo.
No se conoce el reservorio del virus en la naturaleza, pero se cree que sean monos y
roedores salvajes.
Se han detectado han detectado Ac en personas sanas, pero de pronto aparecen epidemias
mortales, desconocindose la causa, siendo difciles de estudiar por su peligrosidad, dndose en
zonas donde no existen medios para ello.
Para el control de la enfermedad, decir que no existe
existe tratamiento, debiendo contener las
infecciones mediante cuarentena, tomando precauciones en el cuidado de personas enfermas
(heces, sangre, orina,...).
Familia Bunyaviridae.
1. Caractersticas.
Tienen envoltura, y el genoma est formado
por 3 molculas de RNA, cada una rodeada por una
cpside helicoidad y acompaado de enzimas
RNApol.
El genoma, aunque se considera de
polaridad -,, en realidad es un genoma ambisentido,
pues parte es de polaridad +.
2.
Patognesis.
En esta familia se incluyen 4 gneros que afectan al hombre, tpicos de pases tropicales.
Producen infecciones muy variables, que van desde fiebres leves a enfermedades con fiebres
hemorrgicas graves.
Son transmitidas por mosquitos y garrapatas, y en algunos casos tambin por roedores.
Destacan el virus Bunyamwera,
Bunyamwera, que se da en frica, Asia y Amrica, que se transmite por
mosquitos y produce una enfermedad leve con fiebre y dolor de cabeza y muscular.
Tambin destaca el virus de la fiebre hemorrgica de Congo-Guinea,, que se da en frica y
que es ms grave, se transmite al hombre por garrapatas, siendo su reservorio diferentes mamferos.
Por ltimo, los Hatavirus,
Hatavirus, que causan las fiebres hemorrgicas renal, pues producen
hemorragias en los riones. Estos virus estn presentes en roedores y se transmiten
transm
al hombre
mediante mordiscos y mediante inhalacin de aerosoles de heces, saliva y orina de los roedores.
Entre ellos, destaca el virus Hantaan que causa la muerte de un 10% de las personas en frica, y el
virus Puuneala,, en el noreste de Europa que produce
p
poca mortalidad.
Familia Arenaviridae.
1.
Caractersticas.
2.
Patognesis.
Son causantes de fiebres hemorrgicas, que tienen como reservorio diferentes roedores,
transmitindose al hombre a travs de aerosoles de heces y orina de los roedores, que son inhalados
por el hombre. No se descarta tambin la existencia de vectores como artrpodos.
Destacan:
Fiebre hemorrgica
hemorrgi de Lassa, en frica.
Fiebre de Junin,, en Amrica del Sur.
Caractersticas.
Gnero Orthoreovirus.
Gnero Rotavirus.
Gnero Orbivirus.
El genoma de estos virus est formado por varios fragmentos de RNA diferentes, que son:
-
11 fragmentos. Rotavirus.
1.
Ciclo de multiplicacin.
Los virus entran en clulas por endocitosis. Dentro de las vesculas endocticas comienza a
degradarse la cpside de los virus, principalmente la externa y de la vescula endoctica se libera lo
que se denomina una partcula subvrica (es como un virin pero con la cpside externa
prcticamente degradada). A continuacin se produce la sntesis de protenas y nuevos genomas,
que tiene lugar en el citoplasma de la clula y adems para sta sntesis, el genoma del virus no es
liberado de las partculas subvricas.
A la partcula subvrica entran los nucletidos necesarios, formndose por un lado los RNAm
tomando como molde una de las 2 cadenas de los RNA dobles (la cadena -). A partir de cada
fragmento de cadena doble se forma un mensajero, lo cuales salen de la partcula subvrica al
citoplasma, se unen a los ribosomas y se forman las protenas (estos RNA salen por los canales que
existen en vrtices de cpside). Por otro lado, dentro de partculas subvricas se forman unos RNA de
cadena + sencilla que sirven para formar los nuevos genomas. Estos RNA de cadena sencilla se
asocian y se rodean de protenas que van a formar parte de la cpside interna.
A continuacin tomando como molde cada fragmento de cadena sencilla, se forma la cadena
complementaria que queda unida a la cadena anterior. Entonces se forma el RNA de cadena doble.
Entonces la replicacin de estos virus es conservativa porque ninguna de las dos cadenas que
forman parte del RNA doble original, forma parte de los nuevos genomas. Los nuevos genomas estn
formados por cadenas de nueva sntesis.
Una vez formado el RNA doble se termina de completar la cpside externa.
As se forman virus que salen de la clula cuando sta se rompe.
2.
Patognesis.
Virus con RNA de cadena sencilla que luego se convierte en DNA. Los Retrovirus reciben este
nombre porque son virus que tienen el enzima transcriptasa inversa (=retrotranscriptasa), que es un
enzima que es una DNApol dependiente de RNA, es decir, sintetiza DNA tomando como molde RNA.
Hasta el descubrimiento de los retrovirus, se pensaba que la informacin gentica iba
siempre en el sentido DNA RNA, pero al descubrirse esta enzima se vio que poda ir al revs
RNADNA (=retrotranscripcin o transcripcin inversa).
En la Familia Retroviridae, se incluyen los virus causantes del SIDA y de diferentes tumores.
Camino inverso de RNA a DNA, agrupa a estos virus en una familia con mucho xito Biolgico.
Generalidades: envuelta con glicoprotenas, cuyo interior tiene una nucleocpsida proteica. Tienen
envuelta, las glicoprotenas suelen ser dos gp1 gp2. El genoma son dos molcula de RNA en forma de
genoma diploide, no se sabe el porqu.
Se pueden dividir su genoma en 3 genes: gag pol env
Env envuelta, glicoprotenas del virus con un dominio transmembrana y una protena ms exterior
(generalmente unida covalentemente a la anterior).
Pol se agrupan la sporteinas que replican el genoma: la reversotranscriptasa y la integrasaintegra el
genoma del virus en una clula.
Estas dos protenas estn en el interior de la partcula viral, el virion.
Los genes gag, antgenos de grupo, gag las protenas que permiten clasificar los virus por serotipos,
aqu hay que agrupar a la cpsida, la nucleocpsida, el genoma asociado a ciertas protenas que la
acompaan.
Matriz, capa de protena en virus con envuelta, entre la propia envuelta y la cpsida, se le llama la
matriz. Las funciones muchas veces no son conocidas. Y la proteasa permite procesar sus protenas.
En los extremos del RNA del virus encontramos una secuencia repetida o R, importante en la replicacin y a coninuacin en un extremo nica, en el extremo 5 est U5 y en el 3 U3
RU5 GAG POL ENV U3R
1.
Caractersticas.
Los Retrovirus son virus con una estructura compleja. Son virus con envoltura y en la
envoltura se localizan 2 glicoprotenas, una llamada
glicoprotena transmembrana (porque atraviesa toda
la envoltura) y otras glicoprotenas de superficie
Forma icosadrica.
Forma de bastn .
Forma de cono.
Transcriptasa inversa.
Integrasa.
Proteasa.
Estas enzimas son importantes en el ciclo de multiplicacin del virus (y tambin en clnica)
porque los frmacos se basan en su inactivacin.
El genoma del virus contiene genes que codifican para las protenas virales, pero tambin en
genoma del retrovirus contienen a veces genes derivados de los genes de la clula hospedadora.
Tambin puede contener genes implicados en el desarrollo de tumores (oncogenes).
Estos genes pueden ser adicionales a los normales del virus, o en algunos casos, pueden
sustituir a algunos de los genes del virus. En este ltimo caso (de la sustitucin) estos virus no
pueden multiplicarse por s solos, necesitando de un virus ayudante para la multiplicacin.
La razn de que el virin presente la retrotranscriptasa es porque aunque el genoma viral es
monocatenario de configuracin positiva (+) y presenta modificaciones de CAP y poli-A, no se utiliza
directamente como mRNA; en su lugar, una de las copias es convertida en DNA bicatenario por la
enzima e integrada en el cromosoma del hospedador. El DNA que se forma finalmente es una
molcula lineal bicatenaria que se sintetiza en el citoplasma dentro del ncleo viral liberado de la
cpsida
La retrotranscriptasa es esencialmente una DNA polimerasa que posee tres actividades enzimticas:
- Actividad de transcripcin inversa, esto es, sntesis de DNA a partir de un molde de RNA.
- Actividad de sntesis de DNA a partir de un molde de DNA.
- Actividad ribonucleasa H (una actividad enzimtica que degrada de la hebra de RNA de un
hbrido RNA-DNA).
- Precisa un cebador para la sntesis de DNA; dicho cebador es un tRNA celular especfico.
1.
Ciclo de multiplicacin.
Usando al cebador, los primeros nucletidos del extremo 5 son retrotranscritos a DNA. Una vez que
la transcripcin inversa alcanza el extremo del RNA, el proceso se para. Para copiar el RNA restante,
se utiliza otro mecanismo. Primero, las secuencias de RNA terminales redundantes del extremo 5
son eliminadas por la actividad ribonucleasa H de la retrotranscriptasa. Esto conduce a la formacin
de un fragmento pequeo de DNA monocatenario que es complementario al segmento equivalente
Todos los retrovirus contienen tres genes: gag, pol y env organizados en ese orden en el genoma:
-
El gen gag se localiza en el extremo 5 y codifica varias protenas estructurales. Estas son sinsi
tetizadas primero como poliprotenas y posteriormente son procesados por una proteasa viv
ral.
Despus, el gen pol se traduce para dar lugar a una gran poliprotena. Para que se sinteticen
los productos de este gen el ribosoma debe o bien saltarse un codn de terminacin al final
del gen gag o llevar a cabo un cambio
cambio preciso a otro marco de lectura, eventos poco frecuenfrecue
tes. Una vez sintetizado, el producto del gen pol se procesa: primero es separado de las propr
tenas gag y luego la transcriptasa inversa se separa de la integrasa, una enzima implicada en
la integracin
n del NA en el genoma.
Para que se traduzca el producto del gen env, el mRNA completo debe ser primero procesaproces
do para eliminar las regiones gag y pol. El producto del gen env es entonces traducido y propr
cesado para dar lugar a dos protenas de la envoltura.
e
La clase 1 , hay genes gag y pol y en el medio hay un stop, la maquinaria traduccional, leera los genes gaga y no empezara con los genes pol, no sera capaz de iniciarla, los retrovirus hacen que el
codn stop, no lo respete el ribosoma , se lo salte y forma una proteina grande gag-pol, que ser
procesada. Obvia un codn de terminacin.
De esta protena se libera las protenas gag y protenas pol, rt y la integrasa la RT tiene dos subunidades .
Una vez procesado, se produce un splicing, que puede ser entonces usado el gen env, que forma una
proteina larga, y se corta para dar lugar a las dos protenas de la envuelta.
Muchas veces son asintomticas, porque se produce baja cantidad de virus, y la clula no muere.
Sin embargo en otras ocasiones, estn asociados a la produccin de tumores, de cncer, antes de la
aparicin del sida, en los aos 60, atrajeron el inters porque son virus que estn asociados a la produccin de tumores, de cncer.
En la oncognesis por retrovirus, hay que distinguir dos mecanismos:
Retrovirus que portan oncogenes en su genoma, onc+, son distintos a virus oncognicos onc-.
El virus mc-29 por ejemplo son defectivos, no pueden dar lugar a un ciclo vital por ellos mismos, se
acompaan por virus silvestre, helper, que le soportan a las que las infecciones se propaguen, aportan el encogen y el silvestre los genes estructurales. El virus del sarcoma de Rous, este retrovirus,
por una razn no muy bien conocido puede trasmitir el encogen src, y adems los estructurales. La
expresin de oncogenes, la posibilidad de producir un cncer est ligada a que no son lticos, se insertan como un gen ms , adquiere el encogen y por ello la clula empieza a dividirse, hace que la
clula se transforme y lleve a cncer.
Sin llevar oncogenes provocaban cncer: lo hace de forma ms lenta y producen generalmente leucemias, se vio en este caso que aislando los genomas de las leucemias que se podran inducir experimentalmente, cuando se estudi las leucemias, buscando el retrovirus, aparecen insertados ,
prximo a oncogenes, aunque el virus no lleve oncogenes cuando lo hace es en puntos prximos,
altera profundamente es la expresin encogen, en un dominio vecino al punto de insercin es la
alteracin se puede realizar de varias formas, derivan en el echo que la LRT es un enhancer poderoso
, que aumenta la expresin gnica abundante de este encogen, el promotor que regulaba ha sido
sustituido por la LTR del virus.
Si se ha insertado en la mitad del encoge y ha eliminado un exn, va a producir una eliminacin de
un dominio por ejemplo el control del receptor, la insercin si es al azar, porque se inserta ah? Esto
es el resultado de una seleccin, el RV se inserta en muchos sitios, peor cuando se inserta en estos
sitios, se va a seleccionar, va a llevar a una leucemia, y ese es el fenotipo que observamos, es la seleccin ya que proliferan las clulas infectadas ms por ello, se seleccionan +. Es la seleccin la que
produce la enfermedad.
1.
Patognesis.
En esta familia se engloban 7 gneros de virus que infectan a diversos vertebrados, pudiendo
cursar enfermedades muy diversas: inmunodeficiencias, tumores, enfermedades del SN, incluso
neumonas.
En el hombre hay 3 gneros de retrovirus que producen enfermedades:
Gnero Lentivirus. En el que se incluyen los virus HIV 1 y HIV 2 (virus de la
inmunudeficiencia humana), causantes del SIDA.
Gnero DLV-HTLV. Es el virus de la leucemia bobina-virus de la leucemia de clulas T
humanas, destacando 2 virus que afectan al hombre, que son el HTLV 1 (causa la leucemia de los
linfocitos T del adulto) y el HTLV 2 (se cree que causa una leucemia llamada leucemia de clulas
peludas).
Gnero Spermavirus, desconocindose que enfermedades producen en el hombre,
aunque se ha asociado con algunos casos de hepatitis y tiroiditis.
Vs. el VIH
1) Bloqueig de lentrada: es dona receptors CD4 en forma soluble als pacients, per caldrien uns 30
receptors per bloquejar cada virus, per tant la dosi tant alta que seria subministrada resultaria inviable.
2) Bloqueg dins la cllula: mecanismes dinhibici de la Transcriptasa Reversa.
3) Bloqueig al nucli: mecanismes dinhibici de les integrases.
4) Bloqueig de la sortida: inhibidors de la proteasa que provoca la gemmaci del virus.
Tamb sadministren anlegs de nucletids per interferir amb la replicaci del material gentic, ja
que el virus te la seva propia kinasa que sintetitza els seus propis nucletids.
Altres vies que sestudien s ls de nucletids molt ms afins a la TR que a la DNApolimerasa, o
partcules que sacoblen a la RT i anullen el seu efecte.
El tratamiento del SIDA presenta diferentes problemas. Uno de ellos es que los compuestos
antiretrovirales no proporcionan una cura para la enfermedad, debido a que con estos compuestos el
virus no se erradica o elimina del organismo. Entonces el tratamiento dura toda la vida del paciente.
El objetivo del tratamiento es conseguir la mxima supervivencia del paciente con la mnima
toxicidad.
Otro problema del tratamiento es el desarrollo de mutantes del virus resistentes a los
compuestos antiretrovirales. La aparicin de resistencias se debe sobre todo a la elevada tasa de
mutaciones que se producen durante la multiplicacin del virus. Esto es as porque la enzima
transcriptasa inversa origina ms mutaciones que las DNApol normales.
En un individuo determinado debido al elevado nmero de mutaciones que se producen al
multiplicarse el virus, existen variantes del virus, que varan en sus protenas. Entre estas variantes se
encuentran virus que presentan variaciones en la transcriptasa inversa y en la proteasa, que son los
lugares de accin de los compuestos antiretrovirales. Si en los individuos con mutantes resistentes,
administramos la terapia antiretroviral, eliminaremos a los virus sensibles al compuesto, pero los
mutantes resistentes se desarrollarn y se producir entonces el fracaso teraputico.
La terapia recomendada para el SIDA ha variado mucho desde que se comenz a aplicar.
Cada ao, un comit de expertos emite un informe del tratamiento a seguir. Hasta 1997 el
tratamiento a seguir era la aplicacin de un compuesto antiretroviral al paciente y cuando se
desarrollaban mutantes resistentes, se aplicaba otro compuesto diferente.
Gnero DLV-HTLV.
Los virus de este gnero producen leucemias. Dentro del gnero DLV-HTLV, existen 2 virus
que infectan al hombre:
-
HTLV 1
HTLV 2
Estos virus producen leucemias. Ambas se transmiten de un individuo a otro al igual que el
SIDA (sangre, contacto sexual y de madre a hijo).
El virus HTLV 1 es causante de la denominada Leucemia de clulas T del adulto. Se denomina
as porque es una leucemia que afecta a linfocitos T colaboradores tarda muchos aos despus de la
infeccin por el virus, normalmene 30 aos (entonces slo en adultos).
Una vez que se desarrolla, la supervivencia del individuo es muy baja (aproximadamente 1
ao), aunque parece ser que slo un 1 % de las personas infectadas desarrollan la leucemia. La
infeccin en nuestro pas es muy rara. Tiene incidencia ms alta en Japn, frica y Sudamrica.
El virus HTLV 2 se piensa (pero no es seguro) que es causante de la leucemia de clulas
pilosas (peludas) que tambin afecta a linfocitos T y se denomina as porque los linfocitos afectados
desarrollan unas protuberancias en las membranas que les da una apariencia de tener pelo.
Diversos virus pueden causar hepatitis aunque los principales virus son 5: virus de la
hepatitis A, B, C, D y E. Aunque desde antiguo se conocan las hepatitis, el primer virus que se
descubri fue el de la hepatits B en 1967. En un principio se conocan 2 formas de hepatitis:
-
Las hepatitis no producidas por los VHA o VHB se las denomina virus de la hepatitis no A no
B, que luego se clasificaron en virus de la hepatitis C, D y E. Se habla tambin de la existencia de
otros virus de la hepatitis (F, G, ...), pero no est bien estudiado, pudiendo ser variaciones de la
hepatitis anteriores.
1.
Caractersticas.
Las hepatitis A, B, C, D y E estn causadas por virus que pertenecen a diferentes familias. Los
virus causantes de las hepatitis son virus con RNA excepto el de la hepatits B, que tiene DNA. Todos
estos virus tienen cpside icosadrica y la VHA y VHE son desnudos y el resto con envoltura.
Respecto a la enfermedad, los VHA y VHE se transmiten va fecal-oral y el resto va
sangunea, sexual o vertical. Los VHA y VHE causan hepatitis agudas, mientras que VHB y VHC
pueden ser agudas o crnicas. La VHD siempre es crnica, pero slo se desarrolla en personas con
VHB. Existen vacunas frente a VHA y VHBB
Hepatitis A.
Patognesis.
Transmisin. Va fecal oral, a travs de contacto de persona a persona y tambin a travs de
agua de bebida y por alimentos contaminados.
Distribucin. Aunque es mundial, en pases desarrollados es poco frecuente, dndose ms
en pases con un nivel sanitario (y entonces econmico) bajo. En pases desarrollados, los
casos que se dan suelen ser importados por viajeros o tambin de personas que vienen de
estas zonas.
Clnica. En ocasiones cursa como una hepatitis subclnica (sin sntomas), pero lo normal es
que aparezcan sntomas tanto especficos como inespecficos. Es frecuente la aparicin de
fiebre elevada.
El perodo de incubacin es de 2 a 6 semanas y se trata de una infeccin aguda, que en
ninguna ocasin parece que evoluciona a crnica. En ocasiones se puede producir casos
fulminantes. No se relaciona con el cncer de hgado.
Control. Se basa en evitar el contagio mediante medidas higinicas personales, potabilizacin
de aguas, control de manipuladores de alimentos, etc.
Tambin se puede aplicar una vacuna constituida por virus inactivados (muertos). La OMS
recomienda la vacunacin en personas que pudieran estar expuestas a la enfermedad
(trabajadores sanitarios, trabajadores de depuradoras de aguas, basuras, manipuladores de
alimentos, etc.). En Espaa, realmente, debido a la baja incidencia de la enfermedad,
prcticamente slo se recomienda a viajeros que vayan a desplazarse a zonas donde exista la
enfermedad y cuando existe un brote de hepatitis, a personas en contacto con el enfermo.
Prevenir la infeccin antes de la exposicin al virus, para personas que viajan a zonas
endmicas. Protege durante 3 meses (se usa para viajes imprevistos).
Despus de una posible exposicin al virus. Entonces se administra la Ig dentro de las dos
semanas siguientes a la exposicin al virus. Se puede aplicar en el caso de que surja un brote
de hepatitis. Entonces dems de vacunas, se administra inmunidad.
Hepatitis B.
Familia Hepadnaviridae.
1.
Caractersticas.
Son virus con envoltura, en la cual se diferencian unas protenas (con gran importancia en
clnica), a las que se suele denominar Ag de superficie del virus del la hepatitis B (A-HBS).
Adems tienen una cpside icosadrica. Su genoma es DNA de cadena doble y circular, pero
dentro del virin, ste DNA no es del todo de cadena doble y el crculo no est cerrado. Cuando el
2.
Ciclo de multiplicacin.
Los virus
us se unen a la clula
hospedadora. El mecanismo de
entrada no se conoce.
El genoma del virus entra
en el ncleo de la clula, en el cual,
se termina de completar la doble
cadena de DNA y el crculo se
cierra.
Como siempre, a partir del
genoma, se tienen que
ue formar
protenas por un lado, y los nuevos
genomas por otro. La cadena del
genoma, sirve de molde para la sntesis de RNAm + que salen al citoplasma para formarse las
protenas. Por otro lado, la replicacin es un proceso complejo. A partir de la cadena
cade de DNA-, se
forma una cadena de RNA de polaridad + y lineal, que se suele denominar RNA pregenmico.
Entonces tomando como molde ese RNA pregenmico, se forma una cadena de DNA que es la
cadena -,, que es un rizo. Este proceso es llevado a cabo por la RNApol por su actividad transcriptasa
inversa. Luego, tomando como molde esta cadena de DNA -,, se forma la + S, ayudada por la
transcriptasa inversa.
Una vez que se ha formado el RNA pregenmico, ste comienza a rodearse de las protenas
de la cpside, y a la vez que se forma, comienza a sintetizarse el DNA. Posteriormente, la envoltura se
forma en vesculas del retculo endoplsmico. Luego, los virus salen al exterior de la clula a travs
de vesculas.
Expressi gnica en el VHB
Els Hepadnaviridae tenen
n una cadena de
DNA (+) positiva i una (-)) negativa circulacircul
ritzades (ja que tenen sequencies comco
plementaries) amb modificacions a 5
(com proteines) per tal de que no quedin
qu
tancats.
Un cop entra al nucli (no se sap com) les
dos cadenes es tanquen totalment
totalmen
(dsDNA circular supercoil).
il). Sintegra al
genoma de la cellula
lula hoste i es transtran
criu per la DNApol II.
Aixo produeix mRNA i unes proteines de
la capside. Aquestes
proteines envolten diferents mRNAs
juntament amb TR. Dins daquesta nun
cleocapside immadura, la TR sintetitzara
Patgnesis.
1.
Hepatitis D.
Caractersticas.
Se produce por un virus que no est incluido dentro de ninguna familia, sino dentro de un
gnero que es le Gnero Deltavirus. Son virus con envoltura, que tienen una protena que es el Ag de
la hepatitis B, que son Ag de superficie, por lo cual slo se multiplican en clulas infectadas por virus
de la hepatitis B.
La cpside parece ser icosadrica, y la protena s que est codificada por el propio virus. El
genoma es una molcula e RNA de cadena sencilla y circular, de polaridad posiblemente -, aunque no
est claro.
Patognesis.
Hepatitis C.
1. Caractersticas.
Es una enfermedad producida por un virus de la Familia Flaviviridae, que presenta envoltura.
2. Patognesis.
El virus se transmite por va sangunea, sexual y vertical. Se descubri en 1988. Es de
distribucin mundial y en Espaa es una enfermedad endmica.
La VHC puede producir una infeccin aguda, pero lo normal es que sea crnica, de evolucin
variable, siendo normal que curse de forma asintomtica, aunque con los aos puede evolucionar a
cirrosis y a cncer de hgado.
Se ha de evitar el contagio, emplendose interfern, aplicndose ste con la intencin de
eliminar la infeccin crnica, aunque el resultado puede ser variable. El tratamiento es largo, de 6 a
12 meses, con inyeccin del interfern 3 veces en semana. Va a salir al mercado el interfern
pegilado, que es un interfern unido a polietilenglicol, con una vida media unas 10 veces superior al
normal. Slo es necesaria una aplicacin de ste interfern nuevo, semanal, cuya eficacia es mayor
pues permanece ms tiempo en la sangre.
Tambin se usa ribavirina para el tratamiento de neumonas producidas por el virus
respiratorio sincitial (Paramyxoviridae), que se aplica en diferente forma galnica (cpsulas),
aplicndose con el interfern.
Del mismo modo, tambin se puede aplicar inmunizacin pasiva para la prevencin en caso
de exposicin accidental al virus. No existe vacuna frente al VHC debido a su gran variabilidad.
Hepatitis E.
1.
Los tumores son acmulos de tejidos que se producen en el organismo debido al crecimiento
o proliferacin anormal y descontrolada de las clulas del mismo. La causa primara de muerte por
cncer es la metstasis o diseminacin del tumor por otras zonas del organismo que resultan
lesionadas y pierden su funcin.
Relaci entre virus i cncer:
-Wilhem Ellerma i Olaf Bang (1908) demostren la relaci entre cncer i virus: intentant allar lagent
causant de la leucmia de les gallines van veure que es podia transmetre a travs dun filtrat lliure de
cllules per que contenia el virus.
-Francis Rouss (1911): observa que el sarcoma (cncer del teixit conjuntiu) de les gallines era
transms de manera similar.
-el 1936: es va veure que els adenocarcinomes (cncer del teixit epitelial de les glndules) de
ratol i altres tumors es desenvolupaven per infecci vrica.
s difcil establir una relaci clara entre virus i cncer:
-alguns virus no sempre provoquen cncer.
-altres poden trigar molt o molt poc temps a provocar cncer.
-la majoria de cncers no sn contagiosos.
Existen 2 tipos de tumores teniendo en cuenta el patrn de crecimiento:
-
Las causas que originan un tumor son: agentes cancergenos que puedan afectan el material
gentico celular agentes qsicos, compuestos qumicos y virus.
Terpia gnica: es duu a terme mitjanant la introducci dcids nucleics dins la cllula (iRNA).
Oncognia
Hi ha virus que desprs dinsertar-se a lhoste i sortir, han deixat incorporat un oncogen que
produir transducci i formar tumor.
Tamb hi ha oncgens cellulars que sactiven per infecci dun virus, ja que el virus fa que es transcrigui loncogen ja present al DNA cellular.
Els DNAviruses no son oncognics, per modifiquen el cicle cellular degut a la seva capacitat
dincorporaci a diversos punts del genoma (provoca transformaci cellular).
1.
ii.
- Noms els retrovirus: la seva capacitat per induir laparici de tumors ve donada per la presncia de
la transcriptasa inversa i la seva integraci al genoma de la cllula hoste.
- Virus de la leucmia humana de cllules T: associats a leucmies i limfomes.
- Virus del sarcoma dels gats, gallines, rosegadors.
- Virus de la leucmia dels gats.
- Virus de tumors mamaris a ratolins.
- Alguns retrovirus tenen oncgens o promotors doncgens propis que poden provocar la
transformaci cellular.
Diversos Retrovirus son portadores de oncogenes, y estos Retrovirus suelen producir
tumores rpidamente tras la infeccin del organismo (varios meses). Suelen producir sarcomas
(tumores en tejido conjuntivo) aunque algunos producen leucemia en animales. Destaca como
ejemplo el virus del Sarcoma de Rouss.
Hay otros Retrovirus que producen tumores pero que no son portadores de oncogenes,
produciendo cncer activando los protooncogenes celulares, causan leucemias como el virus de la
2.
Se ha comprobado que hay diferentes familias de virus con DNA productores de cncer en
animales, vindose tambin la existencia de unos genes involucrados en el proceso, que son muy
diferentes de los oncogenes de Retrovirus.
Estos genes no estn relacionados con genes de la clula hospedadora, no derivando de
genes de la clula hospedadora. Son genes propios del virus, que desempean funciones normales
para el virus. Estos genes, normalmente, estimulan la maquinaria de sntesis de DNA de la clula
hospedadora, lo cual es beneficioso para el virus pues estos virus la usan. Son genes tempranos del
virus.
Estos virus slo suelen producir cncer en clulas en las que no se producen nuevos virus,
produciendo cncer slo en clulas en las que slo se expresan los genes tempranos del virus. Si en
una clula se producen nuevos virus, la clula acaba muriendo. Sin embargo, si en una clula slo se
expresan los genes tempranos, stos pueden inducir la maquinaria de sntesis de DNA celular
produciendo una replicacin anormal del genoma celular, y como las clulas no mueren (no se
producen nuevos viriones) pueden convertirse en clulas tumorales. Entre estos virus destacan:
-
En papillomavirus: los virus oncognicos son limitados no hay modelos como polyomavirus, de forma agresivas, estn muy adaptados, lo hacen de forma sutil, en muchos casos son peligrosos por esa adaptacin a la especie humana.
Son controvertidos si producen o no:
Papillomavirus si se les tom como claramente el grupo de virus ms oncognicos en
humanos, carcinomas de piel y de cuello de tero.
Son virus de dsDNA 8KBS , un grupo muy amplio. Se estudio primero los bovinos BPV, y
despus el HPV, hay 100 serotipos de HPV. Dos grandes tipos: papilomas de grabes riesgo: gnesis del cncer en humanos virus asociado a
O bajo riesgo cuyas infecciones no producen cncer, el de alto riesgo: 8-6-18 de bajo
riesgo el resto.
Porque produce siempre en epitelios?: Epitelios estratificado como es la piel, solamente
se multiplican en epitelio estratificado, por eso son virus que en condiciones normales
producen verrugas, manchas, infecciones benignas, que pueden degenerar en cncer.
Lo que sucede es que los virus infectan solamente a piel, y lo hace en las clulas basales,
las proliferativa. El crneo estn muertas, se replican en las clulas vivas solamente. Los
virus infectan el estrato basal: trascripcin temprana, la replicacin lo hacen el espumoso, y la tarda en el estrato granuloso.
Virus del polioma. Se incluyen varios virus muy utilizados para el estudio del
cncer, aunque realmente estos virus producen cncer cuando infectan a
clulas que no son hospedadoras naturales, pues slo expresan los genes
tempranos. Destacan el virus del polioma del ratn, productor de cncer al
inyectarse en otros roedores, o el virus SV-40, que produce tumores en
roedores y en monos diferentes al que se aisl (utilizado para la preparacin
de vacunas). Tambin existen virus del polioma que afectan al hombre en el
que no producen tumores.
- Durant la infecci del virus SV40 i del virus del polioma:
- Sincrementa molt la sntesi de DNA de les cllules hostes.
- Apareixen els antgens TSTA i T a la superfcie de les cllules infectades.
- El DNA del virus sintegra (provirus).-apareixen les caracterstiques d la
cllula transformada.
Los Polyomavirus se llaman as porque Poly (varios) oma (tumores) + virus descrito por
cross 1965, en ratn virus oncogncio. En muchos tejidos. Se estudia bases moleculares
del cncer, dispersa agresivos.
Sv40 (virus de simio que puede infectar clulas humanas, bases genticas del cncer en
los aos 70) en humanos no existe este tipo de cncer tan agresivo.
En humanos estn los papillomavirus, que s que producen cncer.
DNA de doble banda circular, d eun tamao de 5KpB. Tienen cadena doble . unos de los
genomas mas estudiado en funciones gnicas, SV40 se descubrieron los Cap de RNAS
poliA se descubrieron en etse virus. Como modelo de cncer. Tenemos el ORi de replicacin, se emplea hay en da para meterlo en plsmido que replicado en la clula transfectada.
En este sitio solapando con el ori, estn el origen de transcripcin, se lanza la sonda de
transcripcin, porlo tanto el ciclo vital del virus, el origen coincide cuando hay replicacin no puede haber transcripcin. La transcripcin sucede en las dos direcciones, los
El interfern.
Quimioterapia antivrica.
Vacunas.
Los interferones son un grupo de protenas, algunas de las cuales tienen accin antiviral,
aunque pueden tener otros efectos como actividad antitumoral o reguladores del sistema inmune.
Existen diferentes tipos de interferones, pero fundamentalmente existe varios tipos
principales que son alfa, beta y gamma (tambin omega y theta que se producen en placenta pero
se conocen poco), que son producidos por diferentes clulas.
El interfern alfa, se produce principalmente por los Linfocitos B y macrfagos.
El interfern Beta, se produce principalmente por fibroblastos, aunque tambin por otras
clulas como macrfagos y clulas epiteliales.
El interfern Gamma, se produce principalmente por los Linfocitos T.
Los interferones alfa y los Beta, tienen actividad antiviral adems de otras actividades,
mientras que el gamma no tiene actividad antiviral, sino que acta como regulador del sistema
inmune.
Los interferones son producidos por diferentes clulas pero no tienen actividad sobre las
clulas que los producen, sino que son secretados al medio por las clulas productoras. Luego, en
clulas infectadas por virus stos interferones inducen la produccin de diferentes protenas y
enzimas con actividad antiviral.
Los efectos sobre los virus pueden ser diversos, pero fundamentalmente lo que se produce
es una inhibicin de los sistemas de protenas del virus.
La sntesis de protenas celulares, tambin se ve afectado y la clula infectada por el virus
puede morir debido a ello. Se impide la multiplicacin de virus, aunque se tengan que sacrificar
algunas clulas para ello.
Los interferones son activos fundamentalmente en clulas de la misma especie que ha
producido el interfern. Esto supuso un problema para la aplicacin clnica del interfern, pero
actualmente se produce interfern por Ingeniera gentica. Entonces se ha posibilitando el uso de
interfern para el tratamiento de enfermedades vricas.
Para virus, se usa fundamentalmente el interfern alfa, en ocasiones los Beta. Se aplican por
2. Quimioterapia antivrica.
El tratamiento de virus con compuestos qumicos presenta el problema de disponer de
compuestos que sean selectivos que afectan a los virus sin perjudicar a la clula. En bacterias no
existe este problema porque tienen compuestos diferenciales.
Existen algunos compuestos que se pueden usan para el control de virus. Se usan
fundamentalmente frente a herpesvirus y retrovirus, aunque existen otros compuestos frente a otros
virus.
Herpesvirus. Compuestos antiherpticos. Son inhibidores de la sntesis del DNA viral al
actuar sobre la DNApol del virus, preferentemente a la celular, aunque tienen cierta
toxicidad. La mayora son anlogos de nuclesidos, excepto el Foscarnet.
La Viradina no se usa. Existe una serie de compuestos activos sobre Herpes simple y
Varicela-Zster: Aciclovir, Penciclovir y Idoxiuridina. En el caso de virus de Varicela- Zster,
se usa slo en general para el tratamiento de Herpes Zoster. La varicela slo se trata en
casos extremos (en personas inmunodeprimidas o muy graves). La Trifluridina slo para
Herpes simple.
Existen unos compuestos usados frente a Citomegalovirus: Ganciclovir, Cidofovir y
Fuscarnet. Estos compuestos son bastante txicos usndose en casos extremos
(inmunodeprimidos y casos graves, p. Ej. Enfermedad de glndula salival del recin nacido).
Retrovirus. Agentes antirretrovirales. Algunos son inhibidores de la transcriptasa inversa o
de la proteasa. Estos compuestos no proporcionan una cura para la enfermedad, ya que no
erradica a los virus del organismo, por lo que el tratamiento tiene que durar toda la vida.
El tratamiento, ha de ser individualizado, teniendo en cuenta fundamentalmente el
recuento de linfocitos T, la carga del virus en sangre y sntomas del enfermo.
Actualmente se recomienda la aplicacin simultnea de varios compuestos
antirretrovirales, normalmente 2 anlogos de nuclesidos y un inhibidor de la proteasa.
Tener en cuenta la formacin de mutantes resistentes.
4. Vacunas.
La vacunacin frente a virus consiste en la administracin de Ag de virus al organismo, con el
fin de que el sistema inmune genere una respuesta especfica frente al virus. As, posteriormente
cuando tenga lugar una infeccin natural, el sistema inmune responde de forma rpida y eficaz para
controlar la infeccin. La vacunacin constituye un sistema de inmunizacin activa porque es el
propio organismo al que se ha vacunado el que genera los Ac.
Las vacunas pueden estar constituidas por virus enteros o por porciones. Dentro de las
vacunas formadas por virus completos, pueden estar formados a su vez con virus vivos (atenuados) o
virus muertos (inactivados).
Estas vacunas tienen el peligro de que las cepas de virus reviertan a patgenas (p. Ej. en
la polio).
Estas vacunas deben ser conservadas con ms cuidado que las de los virus inactivados
(muertos).
d. Inmunizacin Pasiva.
Consiste en administrar Ac a un individuo, para tratar o prevenir enfermedades. En el caso
de las infecciones vricas, esta tcnica se usa para prevenir el desarrollo de enfermedades en
personas que van a estar expuestas a un virus o tambin a personas que han estado expuestas
recientemente al virus, para que no se desarrolle la enfermedad. Tambin se usan para tratar la
enfermedad cuando sta se ha desarrollado.
Hasta el ao 2000, las Ig usadas frente a virus se obtena a partir de personas, y se
llamaban Ig humanas.. Pero se aprob la utilizacin de Ig obtenidas mediante Ingeniera Gentica
insertando un gen de la Ig humana en microorganismos para que la produzcan.
Las Ig obtenidas de la sangre de personas son de 2 tipos: Inespecficas y Especficas o
Hiperinmunes.
1.
2.
Gentica clsica:
En ocasiones las poblaciones de virus, tienen una diversidad gentica alta, como los de RNA, cambios
frecuentes de material gentico, de manera espontnea. Los virus DNA tienen frecuencias de mutacin ms baja,aislar mutantes es ms difcil. Si queremos entonces obtener una gran variabilidad,
podemos inducir mutaciones para aumentar la fr de mutantes. Con agentes mutagnicos: qumicos
biolgicos, fsicos.
Nitrosoguanidina, ultravioleta
Tipos de mutantes:
1) Mutantes de morfologa de placa: muy comn muy visible. Si tenemos un virus silvestre, que
sabemos la morfologa que da las placas de lisis, si a partir de esta muestra la irradiamos con UV , si
se aade sobre una monocapa de clulas susceptibles: encontrar alteraciones en las placas de lisis.
Cada una de estas placas de lisis vine de un clon (conjunto de individuos de genotipo idntico) podemos picarlas y ah podemos obtener un mutante. El por qu: la placa de lisis es muy sensible a los
cambios genticos del virus, cambios del genotipo a muchos niveles: EJEMPLO: ms pequea la placa
de lisis , puede tener una mutacin en el receptor a la clula husped, tendr problemas para infectar. Ms grandes: las polimerasas pueden ser mucho mas activas.
2) Mutantes resistentes a anticuerpos: podemos tener un virus, en el que puede ser reconocido por
un anticuerpo que hemos obtenido, es ms til tener un anticuerpo monoclonal Mab, que casi
siempre lo hemos obtenido en ratn, reconoce slo un eptopo de la partcula. Cando el virus silvestre se pone en contacto con un monoclonal no forma placas de lisis , est neutralizado, es incapaz de
infectar se lo impide el anticuerpo.
Hay mutantes que podran escapar al anticuerpo: apareceran placas de lisis, se les llama MAR (Monoclonal antibody resistant). Deben de tener un cambio gentico que les permite ser resistente , de
inters seguro para entender el mecanismo de infeccin, analizamos estos mutantes MAR, analizamos el genoma , observamos los cambios genticos, que sern los responsables de la cpsida, definan un dominio de la cpsida donde podemos suponer que se une el anticuerpo. EXAMEN: Cmo
definiras el dominio que reconoce el anticuerpo?, gracias a los mutantes MAR. Porque adems es
incapaz de infectar? Pude que reconozca es aparte el receptor de la clula.
3) Mutantes resistentes a frmacos-drogas: tienen actividad contra virus, son antivirales . Ejemplo
HIV en placas de lisis (terico) tenemos un antiviral eficaz AZT de los primeros que se produjeron, si
es eficaz, no forma placas de lisis. Pude aparecer de forma espontnea resistentes a la AZT, podemos
ver de forma espontnea mutantes resistentes son virus AZTR, realmente son mutantes o se han
escapado? , clonamos este virus, y lo volvemos a plaquear en presencia de AZT, si realmente es mutante debe de dar miles de placas de lisis. Los mutantes AZTR son bastante comunes, tiene gran capacidad d emular, cuando se inici tratamientos de hace 10 aos con AZT, los virus que circularon
por Madrid eran sensibles hoy el porcentaje de resistencia se acerca al 50%, se seleccionan, la seleccin de mutantes que tienen ventaja. Estos resistentes tienen mutantes en la reverso-trascriptasa,
por estructura, podemos localizar las mutaciones que permiten que sean resistentes, permiten con
bastante precisin el sitio de unin con este frmaco, sino estamos seguro sera cristalizar la protena junto con el frmaco. Interesa que se unen en varios puntos , varios frmacos diferentes y la inhiban. Intentamos predecir un frmaco a partir de la estructura, que frmaco diseo para que se una
en un punto y la inhiba.
Mutacin tiene que ver con lo anterior, con la fidelidad de las pilimerasas, se generan
sobre todo en la naturaleza, por las polimerasas del virus cuando copian los genes. En el
mundo de DNA la frecuencia de mutacin cuando es replicado est en torno a 10-8, 1011, en el mundo de RNA esta frecuencia puede oscilar entre 10-3, y 10-6, de cada 1000
veces 1 vez va a cometer un error en la replicacin en ese punto especfico. Es muy importate en la naturaleza as evolucionan ms rpidamente que los hospedadores. Lo
hacen con un milln de veces ms frecuente, tienen una capacidad de evolucin 1
milln de veces ms rpido, esto es muy revelante para la vida de los virus RNA. (porque los virus de RNA son tan difciles de eliminar como la gripe o VIH) es un arma muy
poderosa. En el mundo de DNA tienen mecanismo de reparacin, y en el RNA no hay
mecanismos de reparacin ni sus polimerasas lo tienen, por lo que las mutaciones prevalecen en vez de eliminarse.
En os virus de RNA todos los individuos no son iguales, las poblaciones no hay homogeneidad gentica por lo que se ha acuado el trmino de cuasiespecie.paradgicamente, si le hace uan secuencia a toda la poblacin, y la secuencia
promedio es idntica a la suencia homognea, pero si clonas los clones son diferentes,
cada una de los cambios genticos, no lo ves con una secuancin porque te saca el
promedio, ningn individuo tendr la secuencia prototpica de la especie. Si hay una
presi selectiva d etal forma que todos los indivduos desaparece excepto uno (solo
prospera un tipo de genmico) (por ejemplo en salto de especie) cuando empiece a replicar ene la nueva especie, produce su cuasiespecie, la secuencia promedio es la secuencia del primer virus que pudo infectar pero ninguno de sus descendientes lo tienen.
Con mucha frecuencia mete mutaciones letales, muchos individuos son inviables o
prximos a la extincin de baja variabilidad, la especie prevalece porque son poblaciones muy grandes (Caracterstica de cuasi-especie).
Hay virus de RNA que no generan cuasiespecie, no son muy diversos.
2)
Recombinacin, sucede en virus de RNA y DNA, pueden reocminar porque las polimerasas puedne saltar de molde, cambiando de molde para generar genoma recombinantes
copy choice peor no genera la diversidad gentica de la mutacin.
3)
Vacunes recombinants
1. Clonar gen del virus que provoca la resposta immune.
2. Es reprodueix a un hoste (E.coli).
3. Es purifiquen les protenes de la envolta, cpside
RESPOSTA ANTIVRICA
IgG, IgM
IgA (mucoses)
La neutralitzaci es la perdua dinfectivitat de les particules viriques per mitja de la interaccio amb
anticossos (neutralitzants). Cada antics monoclonal pot ser neutralitzant o no, per el conjunt en el
serum fa que aquest sigui neutralitzant en la seva totalitat
El paratop es el lloc especific dunio de lanticos lantigen. Pertany a la regio variable del receptor
de lanticos.
Lepitop es la regio de lantigen que es reconeguda per lanticos.
Tipus de neutralitzacions
1. Lanticos fa de bloquejant per la regi del virus que reconeix el receptor, impedint el possible contacte amb la cellula hoste.
2. Lanticos reconeix diversos epitops virics formant xarxes o agregats virics (tot i que aixi no es bloqueja el lloc dunio).
3. De vegades, lanticos inhibeix el procs dencapsidaci del virus des de dins de la cellula.
Ex1: Vius del refredat hum (HRV)
Te al voltant de 115 serotips diferents. T=3
El virus reconeix la proteina ICAM-1 de lhoste (els 115 serotips). Com pot ser que la protena virica
que reconeix lICAM-1 no sigui la mateixa per als 115 serotips (ja que si fos la mateixa, un mateix
anticos serviria per als 115 serotips)?
Hiptesi del Cany: El virus de lHRV reconeix la proteina
ICAM-1 de les cellules hoste mitjancant un receptor viric en forma de vall: la part inferior es prou
estreta com per a que entri i pugui reconeixer la proteina hoste pero que no entri lantics, i per
tant, que no hi hagi reconeixement Ag-Ac
Ex2: Vius de la Poliomielitis (HPV)
En el cas de la Polio, el virus no te el receptor situat a un canyo, si no disposats en 5 pous que fan
una funcio semblant.
Altres virus formen bucles que consten duna regi bsica de reconeixement (uns 27aa) i la resta del
bucle amb altres aa. Lanticos es formara per reconeixer el bucle sencer pero el virus al llarg de successives multiplicacions, provocaran canvis en la sequencia de lepitop (el bucle) que fara que no
pugui ser reconegut per lanticos, pero sigui igualment funcional, si conserva intacta la regio dels 27
aminoacids basics.
Viroides.
Los viroides son molculas infecciosas de RNA monocatenario pequeas y circulares; a diferencia de
los virus, carecen de una cubierta proteica externa y son los agentes patgenos ms pequeos que
se conocen y slo infectan a plantas.
De esta manera, la forma extracelular de un viroide es el RNA desnudo; si bien es un crculo cerrado
de cadena sencilla, tiene una compleja estructura secundaria que lo hace parecer una molcula corta
de doble cadena con los extremos cerrados. Aparentemente, esto confiere al viroide la estabilidad
suficiente para existir en el exterior de la clula hospedadora. Al carecer de cubierta proteica, el
viroide no utiliza un receptor para penetrar en dicha clula, sino que para ello aprovecha la
existencia previa de heridas. Una vez dentro, se desplazan de clula en clula a travs de los
plasmodesmos.
An ms curioso es el hecho de que la molcula de RNA de los viroides no contiene genes que
codifiquen protenas, por lo que el viroide es casi completamente dependiente de las funciones del
hospedador para su replicacin. El viroide es replicado en el ncleo de la clula hospedadora o en el
cloroplasto por una RNA-polimerasa celular; el resultado es un RNA multimrico formado por
muchas unidades de viroides unidas por los extremos. El viroide aporta una funcin a su propia
replicacin: parte del propio viroide posee actividad ribozmica y corta el RNA multimrico para
producir los viroides individuales.
Algunos ejemplos de enfermedades causadas por viroides en vegetales son:
- Ahusamiento del tubrculo de la patata.
- Descortezamiento de los ctricos.
- Enanismo del crisantemo.
- Enanismo del lpulo.
- Enanismo apical del tomate.
- Cadang-cadang del cocotero.
- Moteado amarillo de la vid.
Satllits:
Sn genomes de RNA (500 a 2000 nt) necessiten daltres virus per multiplicar-se (anomenat helper).
Genoma sense similitud amb el helper. Aquests codifiquen per protenes prpies de la cpside. Replicaci del genoma depenen dels enzims del helper.
Virus satllit: especies viriques que no porten suficient informacio en el seu genoma com per a multiplicar-se de forma auto infectades per un altre virus (virus Helper) de la replicasa.
Virusoids:
Sn una classe de satllits (viroides-like RNA) ms grans que els viroids (1000 nt)
La multiplicaci depn de la replicaci dun virus. Els virusoids sn encapsidats a les cpsides del
virus helper.
Viroides. Agentes infecciosos de menor tamao, que causan enfermedades en plantas. Son
2.
3.
Kuru. Enfermedad que se da en una tribu de Nueva Guinea llamada Fore, debido a que existe
una costrumbre de canibalismo, ya que se coman el cerebro de las personas muertas.
Hiptesis per explicar que protenes puguin actuar com a agents infecciosos:
1)Lagent infeccis s un virus animal:
-que sigui un virus normal amb un cid nuclic extremadament difcil de detectar.
2)Lagent infeccis s un cid nuclic indetectable:
-el seu cid nuclic s petit i no es detecta perqu est entre les protenes de lhoste.
-per aix tamb est protegit de latac per part dels anticossos.
-potser no codifica cap protena per pot induir la malaltia per interrupci dalgunes funcions
essencials de la cllula.
3)Lagent infeccis s realment exclusivament protic:
-hi ha el problema per explicar la seva replicaci.
Evidncies actuals: malalties espongiformes del bestiar
-lagent causant de les malalties espongiformes del bestiar s una protena.
-sha demostrat que el material gentic de la cllula hoste codifica aquesta protena.
-la protena del pri s la mateixa que la normal de la cllula hoste per modificada.
Procs dinfecci:
1-el pri modifica les protenes normals produdes per la cllula hoste.
2-les protenes normals modificades pel pri perden la seva funci habitual.
Patogenia.
2.
Protena PrP. La protena i el gen es troben tant en cllules infectades com a les normals. La PrP
anmala presenta canvis conformacionals terciaris i alteracions a la seva estructura secundria.
Lesions vacuolizants i depsits amiloides sense reacci inflamatria.
Agents causals de malalties degeneratives transmissibles del sistema nervis central