UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL

FCCNM EAP BIOLOGA BIOQUMICA II 2017 PRCTICA

Reporte N:1 Fecha de Entrega: 24/08/2017 Prof. Erik Mercado
CDIGO APELLIDOS Y NOMBRES
2014025428 Cervantes Quiones Laura
2015003703 Garca Armbulo Evelyn
2014020336 Gonzles Jaimes Brayan
2014023764 Legua Ramirez Andrea
2014021761 Leon Luna Diana
2014025624 Quenhua Huapula Alexandra

NOMBRE DE LA PRCTICA: Cromatografa

Muestra analizada:
Rojo de metilo
Azul de metileno
Ptalos de flores de color rojo, guinda, lila, anaranjado, amarillo y rosado.
Caractersticas:

Objetivos:
Reconocer las diferentes tcnicas de cromatografa
Determinar su uso en la prctica

DETERMINACIONES REALIZADAS
a) Nombres de los experimentos:

1) Cromatografa en Capa Fina

2) Cromatografa en Columna

b) Nombre de las Biomolculas o Procesos o Vas Metablicas relacionadas al

experimento:

Separacin, purificacin

Muestra(s) utilizada(s):
1) Cromatografa en Capa Fina
Muestra biolgica: ptalos de flores de color guinda, rosado, anaranjado,
rojo, amarillo, lila.
Reactivos: HCl metanlico 1%, Cloruro de Sodio 0.8 %
Tiza blanca
Tubo de ensayo
 Gradillas
Gotero
Mortero y piln
Metodologa:
En un mortero se coloc 2 g de ptalos de flores de color guinda, anaranjado y
rosado, en otro mortero se coloc los ptalos de flores de color rojo, amarillo y
lila; se aadi HCl metanlico (1%), NaCl (0.8 %) y se muele hasta que el lquido
quede fuertemente coloreado.
Filtrar y colocar 2 ml de cada muestra en un tubo de ensayo respectivamente,
colocar la tiza blanca entera (la marca del frente de corrido orientado a la parte
superior del tubo) en forma vertical en cada tubo cuidadosamente.
Tapar el tubo de ensayo para que el interior se sature de vapor del disolvente.
Una vez que la fase mvil sea adsorbido por la tiza retirar del tubo de ensayo y
colocar de forma vertical en una placa Petri que contiene 2 ml de NaCl para que
los pigmentos lleguen hasta el frente de corrido.
Tomar apuntes de las distancias recorridas de los pigmentos a lo largo de la tiza.

Figura 1. Cromatografa en capa fina.

2) Cromatografa en Columna
Muestras y reactivos:
Sephadex G-25
Cloruro de Sodio
Tubos de ensayo
Reservorio de buffer con mangueras
Gradilla de tubos de ensayo
Rojo de metilo
 Azul de metileno

Metodologa:
En dos columnas se agregar muestras sobre el Sephadex G-25, una con rojo
de metilo y la otra con azul de metileno, conectadas a un reservorio de cloruro
de sodio con un sistema de mangueras.

Figura 2. Rojo de metilo. Figura 3. Azul de metileno.

Luego se colect fracciones de 1ml en tubos de ensayo hasta que termin de

pasar toda la muestra por el Sephadex G-25, calculando un tiempo total de 35
minutos para el rojo de metilo en 30 tubos y 29 minutos para el azul de metileno
en 34 tubos.
.
Cada tubo de ensayo fue rotulado y colocado en una gradilla. Se observ cada
tubo, diferenciando la intensidad de color de la muestra colectada en la columna.

Finalmente se determinaron los volmenes totales, volmenes de elucin y

volumen muerto.
RESULTADOS OBTENIDOS:
Cromatografa en capa fina
Tabla 1. Colores observados de las flores de color guinda, anaranjado y rosado.

Color de la
Nmero Dm (cm) Ds (cm) Rf
mancha
1 Guinda 2 6,4 0,31
2 Morado 3,5 6,4 0,55
3 Rosado 6,4 6,4 1
Tiempo: 9min 49 seg.

Tabla 2. Colores observados de las flores de color rojo, amarillo y lila.

Color de la
Nmero Dm (cm) Ds (cm) Rf
mancha
4 Amarillo 2,7 6,6 0,41
5 Lila 5,5 6,6 0,83
6 Verde 6,6 6,6 1

Dm: Distancia recorrida por la muestra.

Ds: Distancia recorrida por el solvente (desde el origen hasta frente de solvente).
Rf: Dm/Ds (factor de retencin).
Figura 4. A: muestra obtenida de ptalos de flores de color rojo, amarillo y lila. B:

muestra obtenida de ptalos de flores de color guinda, anaranjado y rosado.

Cromatografa en columna
Tabla 3. Datos obtenidos al realizar los clculos de cromatografa en columna.

Muestras Volumen Volumen de Volumen Tiempo

Muerto Elucin Total
Azul de 15 ml 22 ml 27 ml 29 min
metileno
Rojo de 7 ml 15 ml 19 ml 35 min
metilo

Para calcular el volumen total:

Vt = Vo + Vx

Vo = Volumen Muerto
Azul de metileno: Vo = 15 ml
Rojo de metilo: Vo = 7 ml
 Ve = Volumen de elucin
Azul de metileno: Ve = 22 ml
Rojo de metilo: Ve = 15 ml
Vx = Volumen ocupado por las esferas del gel = rea del tubo con gel
rea del tubo con gel:
Azul de metileno:

A = . r2. h = 12 cm2

h = altura del gel en tubo = 5.25cm

r = radio del tubo con gel = 0.85cm

Rojo de metilo:

A = . r2. h = 12 cm2

h = altura del gel en tubo = 6 cm

r = radio del tubo con gel = 0.8 cm

Volumen total:
Azul de metileno: Vt = 15 ml + 12 cm2 = 27
Rojo de metilo: Vt = 7 ml + 12 cm2 = 19

Para calcular el volumen relativo de elucin:

Vr = Ve / Vo

Azul de metileno: Vr = 22 ml / 15 ml = 1.47 ml

Rojo de metilo: Vr = 15 ml / 7 ml = 2.14 ml
Figura 5. Tubos de ensayo con 1 ml de la muestra (rojo de metilo).

Figura 6. Tubos de ensayo con 1 ml de la muestra (azul de metileno).

DISCUSIN DE LOS RESULTADOS

Cromatografa en Capa Fina
La cromatografa de capa fina corresponde a una cromatografa plana lquido slido,
con una fase estacionaria (Tiza blanca) depositada en un tubo de ensayo y la fase mvil
es una mezcla de fluidos de colorantes obtenidos de ptalos de flores de diferentes
colores. Los componentes de la muestra son transportados de la fase estacionaria por
la fase mvil, las sustancias que tienen ms afinidad por la fase estacionaria quedan
retenidas mientras que las sustancias de tienen menor afinidad son arrastrados por la
fase mvil hacia la parte superior de la placa, de este modo cada sustancia migra de
forma diferencial, conforme a sus propias caractersticas fsicas y al tipo de fuerzas
intermoleculares que pueda establecer con ambas fases (UPC, 2009).
En los resultados obtenidos la distancia recorrida por los pigmentos es directamente
proporcional al Factor de retencin (Rf) donde los colores guinda y amarillo muestran
mayor afinidad por la fase estacionaria tal como se muestra en la tabla 1 y 2 con 2 cm
y 2,7 cm de recorrido respectivamente. Los colores con mayor afinidad por la fase mvil
son el rosado y el verde 6,4 cm y 6,6 cm de recorrido respectivamente.
El color de las flores se debe bsicamente a tres tipos de pigmentos, los flavonoides,
son los pigmentos ms comunes y contribuyen a un amplio rango de colores que va
desde el amarillo hasta el rojo y el azul. Los flavonoides que ms contribuyen a la
formacin de colores son las antocianinas, entre ellas el color anaranjado est dado por
la pelargonidina, el rojo por la cianidina y el azul por la delfinidina; los carotenoides:
contribuyen a formar los colores naranja/rojo, bronce y marrn; las betalainas, son los
menos abundantes y contribuyen a las varias gamas de marfil, amarillo, naranja, rojo y
violeta (Daz, 2007). Desde el punto de vista qumico, las antocianinas pertenecen a un
grupo denominado flavonoides y se encuentran ampliamente distribuidos entre las
plantas. El color est dado por los grupos hidroxilos de los anillos fenlicos y el
benzopirilio, de modo tal que en medio cido (PH menor a 5) toma coloraciones rojizas,
mientras que en un medio alcalino (pH mayor a 7) adquiere coloracin prpura
(Argenbio, 2007).
La forma del espectro UV-VIS de las antocianinas puede brindar informacin sobre su
concentracin y el tipo que se utiliza (Chandra, 1992; Wesche-Ebeling et al., 1996). Las
antocianinas son glucsidos de antocianidinas, pertenecientes a la familia de los
flavonoides, compuestos por dos anillos aromticos A y B unidos por una cadena de 3
C. Variaciones estructurales del anillo B resultan en seis antocianidinas conocidas. El
color de las antocianinas depende del nmero y orientacin de los grupos hidroxilo y
metoxilo de la molcula. Incrementos en la hidroxilacin producen desplazamientos
hacia tonalidades azules mientras que incrementos en las metoxilaciones producen
coloraciones rojas (Garzn, 2008).
Pero en nuestra demostracin en laboratorio no adquirimos estos colores pero si se
asemejan mucho por ejemplo el color morado (azul) y el color guinda (rojo) son las
aproximaciones a dicha teora que indica el autor en todo caso estaramos
asemejndonos a los incrementos de hidroxilacin y metoxilaciones.
La identificacin de los pigmentos a partir del cromatograma suele llevarse a cabo
mediante el parmetro Rf, factor de retencin, el cual es un parmetro caracterstico de
cada compuesto. El valor de Rf oscila entre 0 y 1, los pigmentos ms polares tendrn
un factor de retardo menor que los menos polares (Torossi, 2007). Segn los resultados
obtenidos las betalainas son los pigmentos de mayor polaridad donde el factor Rf oscila
entre 0,31 a 0,83 (guinda, morado, amarillo y lila) y los pigmentos menos polares son
las antocianinas (rosado) y la clorofila (verde) donde el factor Rf es 1. Debido a las
diferentes solubilidades de los pigmentos en disolvente orgnicos es muy usual que en
algunos textos se tome como parmetro esa diferencia para explicar su separacin
mediante cromatografa sobre papel, lo cual es un error (Toressi, 2007 tomado de
Maitland, P. & Maitland, D., 2002)
Debido a que la tiza es porosa y los pigmentos de los ptalos de las flores se disuelven
en el HCl metanlico y NaCl, ste los va separando hasta diferentes alturas a medida
que asciende y se va evaporando. Los pigmentos o colores son adsorbidos por la
superficie de la tiza con diferentes intensidades, as los ms adsorbidos se desplazan
menos y los menos adsorbidos o ms solubles en el disolvente se desplazan a mayor
distancia a lo largo de la tiza los cuales se da en forma de bandas (Figura 4).
Cromatografa en Columna
La cromatografa de filtracin molecular o cromatografa en columna es un mtodo de
cromatografa en columna por el cual las molculas se separan en solucin segn su
peso molecular, o ms precisamente, segn su radio de Stokes. En esta cromatografa,
la fase estacionaria consiste en largos polmeros entrecruzados que forman una red
tridimensional porosa. A los fines prcticos, las columnas se empaquetan con pequeas
partculas esferoidales formadas por esos polmeros entrecruzados. En consecuencia,
estas partculas son porosas, y el tamao de los poros es tal que algunas molculas (las
demasiado grandes) no podrn ingresar a esos poros, en tanto que otras (las
suficientemente pequeas) podrn pasar libremente. Los poros quedan conectados
formando una malla o red, lo cual determina una serie de caminos a ser recorridos por
las molculas que acceden al interior de esta (Figura 7). (Casas, et al., 1994)
Los dos compuestos utilizados en la experimentacin fueron Rojo de metilo y Azul de
metileno, siendo estos con densidades de 0,989 g/cmy 1.9 g/cm. El azul de metileno
muestra una mayor densidad, en relacin a los pesos moleculares de ambos son 373.9
g/mol (azul de metileno) y 269.31 g/mol (rojo de metilo) el azul de metileno presenta un
peso molecular ms grande que el rojo de metilo.

Figura 7. Cromatografa en columna.

El volumen muerto del azul de metileno fue mayor en comparacin con el rojo
de metilo, el azul de metileno muestra una densidad y peso molecular superior
al rojo de metilo lo que nos indica que este presenta molculas ms grandes y
debi tener un tiempo menor al rojo de metilo; Asumiendo que el volumen de
elusin del azul de metileno es ms grande que el rojo de metilo nos indicara
que el colorante empleado para esta experimentacin no es del todo puro o algn
 problema con el uso del gel que no dio un filtrado ptimo de las molculas de
gran tamao presentes en el colorante.( Raimond et al., 1995)

CONCLUSIONES
1. Cromatografa en Capa Fina
Tiene numerosas ventajas, aparte de ser rpida, sencilla, barata tiene
tambin la ventaja de utilizar poca cantidad de muestra.
En este trabajo, se ha demostrado que la cromatografa en capa fina es muy
sencilla e importante en muchas industrias de colorantes naturales.
El tipo de cromatografa depender del tipo de la naturaleza de la fase mvil
y estacionaria.
La polaridad de eluyente determinara la efectividad de este como disolvente
en la cromatografa de capa fina.

2. Cromatografa en Columna
Es una tcnica muy especfica, eficiente, ampliamente usada en bioqumica
para medicina y farmacia.
El tamao de las molculas por separar es un factor importante en la
cromatografa de columna, por el tamao de los poros del sustrato utilizado
en la columna.
El sustrato utilizado en la columna puede intervenir la separacin de
pigmentos segn la polaridad de los mismos.
La cromatografa en columna basada en el principio de retencin selectiva,
cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

CUESTIONARIO
1) Cromatografa en Capa Fina

Qu criterios permiten elegir al solvente adecuado para separar solutos?

El solvente debe ser solubles en la fase mvil

El solvente debe tener una temperatura de ebullicin baja para que se
evapore despus de la aplicacin.
El solvente debe ser capaz de interaccionar con la fase estacionaria
Si de un fluido biolgico deseas separar los lpidos. Cul sera el tratamiento
de la muestra, que soporte y que tipo de solvente utilizara?
Aunque la cromatografa gas lquido capilar (CG) es la tcnica ms utilizada para el
anlisis cuantitativo de los AG, tambin es posible utilizar otros mtodos
cromatogrficos. La cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR) ha sido utilizada,
ya que opera a temperatura ambiente, por lo que existe poco riesgo de prdida de
compuestos lbiles y de compuestos voltiles. Adems, al igual que la CG puede ser
acoplada a la EM con fines de identificacin o empleada con fines preparativos en la
coleccin de fracciones que pueden ser analizadas por otras tcnicas (Rezanka,
1990).Tomando en consideracin el tipo de cido y la aplicacin que se desea, se
buscarn las mejores condiciones para su separacin (adsorcin, quiral, aplicando iones
plata, etc.), as como para su deteccin (UV, dispersin de la luz, fluorescencia,
radiactividad, etc.(Brown, et al, 1989 y Zamir et al, 1991).
Sin embargo, la separacin de cidos grasos de muy elevada masa molecular (AGEMM)
de las ceras se dificulta por su poca solubilidad y la baja resolucin que pudiera mostrar
la tcnica por la presencia de series homlogas de otros compuestos similares. La
cromatografa en fluidos supercrticos tambin se ha empleado en la separacin de los
AG (especialmente para grasas y aceites), aunque ha ganado en aceptacin, no se ha
aplicado con xito a los compuestos de muy elevada masa molecular. La cromatografa
por exclusin molecular ha sido usada sustancias resinosas e incluso steres de alto
peso molecular formados entre los cidos grasos y alcoholes diterpenoides (Nogueira,
et al, 1995). El electro-cromatografa capilar ha sido utilizado para analizar AGL y sus
steres de fenacilo provenientes de aceites vegetales y ha mostrado ser superior a la
CLAR en cuanto a eficiencia, sensibilidad y rapidez, aunque no permite obtener buenos
resultados cuantitativos para cidos superiores (Dermaux, et al, 1999).

3. Cul sera el soporte y el solvente adecuado para separar terpenos de esteroles?

La extraccin en fase slida (EPS) es un mtodo cromatogrfico simple y econmico

que ha sido ampliamente utilizado en la preparacin de diferentes clases de lpidos;
asimismo se ha utilizado para extraer, purificar y diferenciar los esteroles libres de los
insaponificables esto se logra gracias a la utilizacin de una fase mvil que son
disolventes orgnicos con polaridad variada por ejemplo (hexano: acetato de etilo) el
hexano que es un solvente no polar y el acetato de etilo que tiene una polaridad
intermedia, adems se utiliza un fase estacionaria de silica gel 60 con un tamao de
partcula de 70- 230 mesh, esta tcnica consiste en utilizar cartuchos, los cuales son
acondicionados previamente con la silica gel 60 y posteriormente se adiciona la mezcla
de solventes ( figura 8). Por otra parte, se ha demostrado que para separar fitoesteroles
de algunos aceites vegetales sta tcnica presenta una mejor eficiencia y por lo tanto
sera ms conveniente que otras utilizadas para la separacin de fitoesteroles, debido a
que mejora la recuperacin de las fracciones de los mismos (Zhang, et al , 2005).

Figura 8. Cartuchos utilizados para la extraccin en fase slida (EFS)

La extraccin en fase slida (EFS) muestra una ventaja sobre cromatografa de columna
(CC), ya que se puede hacer en poco tiempo, utiliza un pequeo volumen de disolvente,
reduce el tiempo de exposicin de la muestra al aire, y por lo tanto la formacin de
productos no deseables en el proceso de oxidacin de esteroles (Azadmard y Dutta,
2009).
2) Cromatografa en Columna
 Cul es la relacin entre el Peso Molecular de los solutos separados por
cromatografa en columna y el volumen de elucin?

Los pesos moleculares del azul de metileno y rojo de metilo respectivamente son 373.9
g/mol y 269.31 g/mol y sus volmenes de elusin fueron 22ml de azul de metileno y
15ml de rojo de metilo; indicndonos que la relacin de los pesos moleculares con el
volumen de elucin estn en relacin directamente proporcional. Las molculas se
separan en funcin de su tamao, eluyendo en orden decreciente de peso molecular.
(BROWNING, D. R. 1971)

Indique 3 soportes utilizados para la cromatografa de exclusin, mencionando sus

caractersticas.

Los medios utilizados para la cromatografa de exclusin en gel incluyen dextrano

(Sephadex ^ {TM}), poliacrilamida (Bio - Gel P ^ {TM}) y dextrano - poliacrilamida
(Sephacryl ^ {TM}) y agarosa (Sepharose ^ {TM} y BioGel A ^ {TM}). Cada uno est
disponible con una variedad de diferentes rangos de tamao de poro en las perlas,
permitiendo la separacin de macromolculas de diferentes tamaos. (WALSH, G.;
2002).

a) Sephadex
El Sephadex es un gel formado en perlas preparado mediante reticulacin de
dextrano con epiclorhidrina. El gel es extremadamente hidrfilo debido al gran
nmero de grupos hidroxilo, y por lo tanto se hincha fcilmente en agua y
soluciones electrolticas. Los G-tipos de Sephadex difieren en su grado de
reticulacin y por lo tanto en su grado de hinchamiento y su rango de
fraccionamiento. Sephadex tambin se hincha en dimetilsulfxido y formamida.
Sephadex es insoluble en otros disolventes no acuosos (a menos que est
qumicamente degradado). Es estable en agua, soluciones salinas, disolventes
orgnicos y soluciones alcalinas y dbilmente cidas. Sephadex no se derrite.
(WALSH, G.; 2002).

Caractersticas clave
Amplia seleccin de lmites de exclusin: amplia gama de soportes para
extraer contaminantes tales como sales, tintes, radioactivos y etiquetas.
Alta recuperacin de desalinizacin y cambio de tampn: alta calidad
grupo separacin de diferentes tamaos de biomolculas.
Preenvasado en una variedad de formatos: amplia gama de preenvasado
columna y formatos de placa para la comodidad y la reproducibilidad.
Bien probados: ampliamente utilizado en laboratorios y aplicaciones
industriales desde hace ms de 50 aos.

b) Sephacryl
El sephacryl se prepara mediante la reticulacin covalente de alil dextrano con
N, N-metilen bisacrilamida y da un gel rgido con un rango cuidadosamente
controlado de tamaos de poro. Generalmente se usa en soluciones acuosas.
Sin embargo, su estructura de gel permite reemplazar el agua con disolventes
 orgnicos que tienen un efecto mucho menor sobre el tamao de poro que en el
caso de Sephadex. El sephacryl es insoluble en todos los disolventes a menos
que est qumicamente degradado. Puede utilizarse en el intervalo de pH 2 a 11,
con eluyentes que contienen detergentes (por ejemplo, SDS) y con medios que
rompan la estructura, tales como cloruro de guanidinio 6 M y urea 8 M. Sephacryl
no se funde y puede autoclavarse repetidamente a 120 C y pH neutro sin
afectar significativamente sus propiedades cromatogrficas. (WALSH, G.; 2002)

Caractersticas clave
Excelente purificacin sobre un amplio rango de peso molecular
Alta reproducibilidad debido a la elevada estabilidad.
Altas velocidades de flujo y recuperaciones
Bien adaptado a escala industrial uso

Los medios de Sephacryl cubren una amplia gama de fraccionamiento (desde

Mr 103 hasta > 108). La gama de productos incluye medios de comunicacin de
seis porosidades alternativas (relacionadas con el contenido de dextrano), con
cada porosidad dando un perfil de selectividad diferente. (WALSH, G.; 2002)

Sephacryl S-100 HR para la separacin de pptidos y protenas

pequeas.

Sephacryl s-200 HR y Sephacryl s-300 hr para anticuerpos

purificantes, protenas sricas y protenas de tamao medio.

Sephacryl s-400 HR y Sephacryl s-500 hr para separar

macromolculas como polisacridos complejos.

Sephacryl S-1000 SF para purificar pequeas partculas tales como

DNA del plsmido.

c) Sepharosa

Sepharosa es un gel formado en perlas preparado a partir de agarosa mediante

un proceso de purificacin que elimina los polisacridos cargados y da un gel
con slo un nmero muy pequeo de grupos residuales cargados. La
Sepharosa es estable en agua y soluciones salinas en el intervalo de pH 4 a 9
y en ausencia de agentes oxidantes. Se funde calentando por encima de 40
C, y la estructura de taln puede ser daada irreversiblemente por congelacin.
La Sepharosa reticulada, preparada por reaccin con 2,3-dibromopropanol bajo
condiciones fuertemente alcalinas, se llama Sepharosa CL. Ha aumentado
considerablemente la estabilidad trmica y qumica. Por ejemplo, Sepharosa
CL se usa en medios acuosos en el intervalo de pH de 3 a 14. (WALSH, G.;
2002)

Caractersticas clave
 Versatilidad qumica: varias opciones para estabilidad de la fijacin de
diferentes ligandos aumentar el nmero de posibles aplicaciones.
Estabilidad fsica: mecnicamente estable cartera matriz para distintos
tipos de cromatografa.
Baja absorcin inespecfica: excelente para cromatografa de
afinidad.
Amplia seleccin de medios: disponible como medios masivos o pre
envasados en columnas.
Bien probados: ampliamente utilizado en laboratorios y aplicaciones
industriales.

Si tenemos una protena de 700 KDa y tiene como soporte para

cromatografa de exclusin sephadex G-25, sephadex G-75, sephadex G-
200, Cul de ellos utilizara? Justifique su respuesta.

Existen distintos tipos, segn el tamao de poro, proporcionando lmites de

exclusin comprendidos entre 1 y 200 000 daltons. Estos geles se identifican
por una denominacin de G-10 hasta G-200, lo que se refiere a la capacidad
de retencin de agua del gel multiplicada por 10. Si tenemos una protena con
700KDa esta tiene como soporte para cromatografa al sephadex G-25 ya que
este comprende a protenas de 100 5000KDa. (ABBOTT, David y
ANDREWS, R. S 1973)

Figura 9. Tabla de propiedades del Sephadex. Imagen tomada de:

http://www3.uah.es/bioquimica/Sancho/farmacia/practicas/filtracion-en-
gel.pdf

Qu otras concentraciones de Sephadex hay?

Sephadex: Sephadex G-10, Sephadex G-15, Sephadex G-25, Sephadex G-50,

Sephadex G-75, Sephadex G-100, Sephadex G-150 y Sephadex G-200.

Molculas de qu tamao separa el Sephadex?

 Figura 10. Tabla del rango de fraccionamiento de Sephadex. Imagen tomada
de:https://bioquimexperimental.files.wordpress.com/2009/08/cromatografc3a
das.pdf

Qu concentraciones de agarosa hay?

% Agarosa: Agarosa al 0.3%, Agarosa al 0.5%, Agarosa al 0.7%, Agarosa al
1%, Agarosa al 1.2%, Agarosa al 1.5%, Agarosa al 2% y Agarosa al 3%

Molculas de qu tamao separa la Agarosa?

Figura 11. Tabla del rango de fraccionamiento de la agarosa. Imagen tomada

de:
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/6799/mod_resource/conte
nt/0/Separacion_de_biomoleculas.pdf
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