Cromatografa de gases

Determinacin de etanol
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Cromatografa
Mtodo fsico de separacin.
En qumica analtica se utiliza para separar,
identificar y cuantificar los componentes
de una mezcla.
La mezcla se separa entre dos fases:
Fase estacionaria (f.e.): donde se coloca la
muestra.
Fase mvil (f.m.): fluido que pasa a travs
de la fase estacionaria. 2
 Cromatografa
Se puede clasificar a partir de algunas variables:
Fase Mvil (puede ser gaseosa, lquida fluido supercrtico)
Fase Estacionaria (slido, lquida, papel, etc.)
Mecanismo de Retencin (tipos de equilibrios implicados en
la transferencia de los solutos entre las fases).
Adsorcin (procesos de sorcin y desorcin).
Particin (distribucin por solubilidad, particin o reparto).
Intercambio inico.
Exclusin por tamao (separa segn tamao de molcula)
Forma de Contacto entre las fases (columna superficie
plana). 3
Gradientes.
Cromatografa de Gases
Fase mvil
Siempre es un gas (Ar, He, N2, H2)
Tipos de cromatografa
Cromatografa gas-slido (GSC)
Los analitos se retienen en una fase estacionaria
slida por adsorcin fsica y los arrastra la fase mvil.
Aplicable a especies gaseosas de bajo peso molecular.
Cromatografa gas-lquido (GLC)
Los analitos se distribuyen entre la fase mvil gaseosa
y una fase estacionaria lquida inmovilizada sobre la
superficie de un slido inerte.
Tiene ms aplicacin analtica. 4
Cromatografa de Gases
Separacin cromatogrfica
Primero la muestra se inyecta
y se volatiliza en la cabeza de
la columna.
Segundo el gas inerte
transporta los componentes
de la muestra y los separa a
travs de la columna.
Tercero los analitos salen de
la columna (eluyen) segn la
afinidad que tienen con la
fase estacionaria, el flujo de
la fase mvil y la
temperatura, dando origen al 5
cromatograma.
Cromatograma
Seal que se obtiene proveniente del detector.
Grfica de alguna seal del detector que es
funcin de la concentracin de soluto contra el
tiempo que tarda el analito en salir de la
columna.

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Cromatgrafo de gases

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Sistema de inyeccin de muestras
Las muestras se inyectan con una microjeringa, a travs de un
diafragma de silicona.
El bloque de inyeccin est a 50C por encima del punto de
ebullicin del componente menos voltil de la muestra.
Tamao de muestras: desde menos de 1 L hasta 20 L.

http://fisica.laguia2000.com/conceptos-basicos/inyector
Sistema de gas portador
Se utilizan gases El tipo de detector define
qumicamente inertes (He, el gas ms adecuado.
Ar, N2, H2).
Las presiones de entrada El sistema de gas
suelen ser 1 4 atm portador incluye:
mayores que la presin Reguladores de
atmosfrica. presin
Lo que produce Medidores de flujo
velocidades de flujo de 25
150 mL/min en Tamiz molecular
columnas empacadas y de para eliminar
1 25 mL/min en impurezas y agua.
columnas tubulares
abiertas(capilares). 9
Columna empacada
Tubos de vidrio, metal (acero
inoxidable, Cu, Al) o tefln.
Longitud 2 -3 m, dimetro 2 a 4
mm.
Rellenas con slidos uniformes
y finamente divididos o con
slidos recubiertos con una
pelcula (0,05 1 m) de fase
lquida estacionaria.
Se arrollan en forma de espiral
10
de unos 15 cm de dimetro.
Columnas tubulares abiertas
Columnas capilares
Se construyen de acero
inoxidable o slice fundida
(SiO2) recubierto con polmero
de poliimida.
Dimetro interno de 0,1 a 0,53
mm, longitud de 15-100 m.
Ventajas
Alta resolucin
Mximos delgados
Tiempos de retencin cortos
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Se sobrecargan con facilidad
Columnas tubulares abiertas
Columnas capilares
Tubulares abiertas de pared recubierta
(WCOT)
Columnas capilares cubiertas con una delgada
capa lquida de fase estacionaria que recubre las
paredes del capilar y las soporta.
F.E. con espesor de 0,1 a 5 m.
Construidas en acero inoxidable, Al, Cu, plstico,
vidrio (tratado con HCl, HF o KF para obtener una
superficie rugosa que se une con ms fuerza a la
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fase estacionaria) o slice fundida (FSOT).
Columnas tubulares abiertas
Columnas capilares
Tubulares abiertas de soporte recubierto (SCOT)
La superficie interna del capilar posee un
revestimiento de una pelcula fina (~ 30 m)
de un material soporte (barro de diatomeas),
donde se adhiere la f.e.
Mayor capacidad para la f.e., por lo tanto
mayor capacidad de muestra.
Eficiencia menor que las columnas WCOT,
pero mayor que las columnas empacadas. 13
Columnas tubulares abiertas
Columnas capilares
Tubulares abiertas de capa porosa (PLOT)
Tiene partculas de fase slida adheridas a la pared
de la columna.
Separacin mediante procesos de adsorcin.
Se utilizan partculas de almina o de polmeros
porosos (mallas moleculares)
Se usan para cromatografa gas-slido
La eficiencia de resolucin en las columnas
capilares ser:
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WCOT> SCOT >PLOT
Fases estacionarias lquidas
Baja volatilidad (punto de ebullicin 100 C
mayor al de la temperatura mxima de trabajo
de la columna).
Estabilidad trmica.
Inercia qumica.
Debe generar diferentes cocientes de reparto,
para los distintos solutos permanezcan en la
columna un tiempo razonable segn la
compatibilidad (solubilidad) con la f.e. y los tR 15
sean adecuados para la separacin
Fases estacionarias lquidas
Las f.e. son polietilenglicoles y polisiloxanos que son
los ms comunes.
Los grupos funcionales determinan la polaridad de la
f.e.
Fases lquidas no polares, no son selectivas (pocas
fuerzas entre soluto y disolvente), las separaciones
tienden a seguir el orden de los puntos de ebullicin.
Fases lquidas polares presentan diversas
interacciones (dipolo, enlaces de H2, etc.), no
necesariamente siguen la correlacin entre elucin y
volatilidad. 16
Fases estacionarias comunes
Fase estacionaria Nombre Temperatura Aplicaciones usuales
comercial mxima (C)
comn
dimetilpolisiloxano OV-1, 350 Fase no polar de uso
SE-30 general, hidrocarburos,
compuestos aromticos
Difenil, dimetil poli- OV-3, 350 Esteres metlicos de cidos
siloxano (10 % fenil) SE-52 grasos, alcaloides, drogas
Poli(fenilmetil)siloxano OV-17 250 Drogas, esteroides,
(50% fenil) plaguicidas
Poli(trifluoropropildi- OV-210 200 Aromticos clorados,
metil) siloxano nitroaromticos, bencenos
alquilsustituidos
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Columna utilizada en la
prctica

Fase Nombre Temperatura Aplicaciones usuales

estacionaria comercial mxima (C)
comn
Polietilenglicol Carbowax 250 cidos libres, alcoholes,
20M teres, aceites esenciales y
glicoles

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Detectores en cromatografa de
gases
Determinan la presencia de las sustancias
eludas a la salida de la columna
cromatogrfica.

Comparan una propiedad fsica entre el gas

portador puro y el mismo gas portador con
cada uno de los componentes que van
saliendo de la columna, esta accin se
traduce en una seal tipo elctrica.
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Detectores en cromatografa de
gases
Detector de Conductividad Trmica (TCD): Mide la
conductividad trmica del gas portador, ocasionada por la
presencia de substancias eludas.

Detector de Ionizacin a la Llama (FID): Basado en la medida

de las variaciones de la corriente de ionizacin en una llama
oxgeno-hidrgeno.

Detector de Captura Electrnica(ECD): Basado en la habilidad

de las sustancias para formar iones negativos por captura de
electrones.
Detector de Fotometra a la Llama(FPD): Basado en la medida
de la intensidad de la emisin molecular de la fluorescencia de
heterotomos (S o P) en las molculas orgnicas.
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Detector de Espectrometra de Masas, etc.
Detector de ionizacin de llama
El efluente de la columna
se dirige hacia una
pequea llama aire/H2 y se
piroliza.
Muchos compuestos
orgnicos producen iones y
electrones cuando se
queman a la temperatura
de la llama aire/H2.
La deteccin consiste en
monitorear la corriente
que se produce al captar
las cargas. 21
Detector de ionizacin de llama
Ventajas:
Alta sensibilidad, del orden de 10-13 g/s.
No da respuesta a gases no combustibles como el
H2O, CO2, SO2 y NOx.
Amplio intervalo lineal de respuesta, 107 unidades.
Bajo ruido de fondo (elevada relacin seal/ruido).
Bajo mantenimiento, fcil de fabricar y de utilizar.
Detector sensible a masa, responde al nmero de
tomos de C/unidad de tiempo, un cambio de caudal
no le afecta.
Desventajas:
Destruye la muestra (la piroliza). 22
Anlisis por cromatografa de gases
Anlisis cualitativo
Cuando se mantienen constantes condiciones
experimentales como fase mvil, temperatura, velocidad
de flujo, etc., el tiempo de retencin es caracterstico
para cada analito.
El cromatograma se utiliza para identificacin o
principalmente para descartar la presencia de analitos.

Anlisis cuantitativo
La composicin de analitos en la muestra se puede
relacionar con la altura o el rea de la seal (pico) en el
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cromatograma.
Anlisis por cromatografa de gases
Una separacin cromatogrfica se optimiza
variando las condiciones experimentales de la
determinacin.
Objetivos de la optimizacin
Reducir en ensanchamiento de los picos.
Modificar las velocidades relativas de los analitos en la
columna.

Las condiciones cromatogrficas requieren un

compromiso entre velocidad, resolucin y
24
sensibilidad.
Anlisis por cromatografa de gases
Factores que afectan la eficiencia de la separacin.
Fase estacionaria
Longitud, dimetro y material de la Columna.
Tamao de las partculas del relleno.
Cantidad y tipo de fase estacionaria.
Fase mvil
Velocidad del gas portador.
Temperatura
Del inyector, de la columna y del detector.
Cantidad y tipo de muestra que se inyecta 25
Un analito no voltil, se puede convertir en un derivado.
Anlisis por cromatografa de gases
Temperatura (T)
En el inyector
Alta T segn estabilidad trmica de analitos, para evaporar
la muestra rpidamente y entre completa a la columna.
Menor ensanchamiento y mayor resolucin.
En la columna
Alta T, elucin rpida de analito, pero mala resolucin.
Baja T, elucin lenta, aumenta resolucin, disminuye la
sensiblidad.
En el detector
Suficientemente alta para evitar condensacin de analitos. 26
La sensibilidad, dependiendo del detector es funcin de T.
Anlisis por cromatografa de gases
Programacin de temperatura
Un aumento en la temperatura, aumenta la velocidad de
elucin de analitos.
El aumento puede ser lineal, exponencial, escalonado, etc.

Cromatogramas de
Hidrocarburos con
Temperatura programada ,
primero escalonada
y luego lineal

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Anlisis por cromatografa de gases
Mtodos para cuantificacin
Curva de calibracin, a partir de las reas o alturas de los
picos del cromatograma.
Curva de adicin estndar, a partir de las reas o alturas
de los picos del cromatograma, este mtodo evidencia la
presencia del analito con el incremento en el rea del
mximo de la seal analtica.
Estndar interno, a partir de la relacin de reas (o alturas)
del analito y del estndar interno.
Mtodo de la normalizacin de reas, a partir de la
relacin del rea del analito con el rea total de los picos.
Factor de respuesta, a partir de la relacin de reas de 28
cada componente con su masa y la relacin de reas con la
masa del estndar interno.
Anlisis por cromatografa de gases
Error de inyeccin
Las tcnicas de inyeccin manual proporcionan resultados
reproducibles entre un 2-5 % o ms.
Se inyectan volmenes muy pequeos (L) en un bloque
caliente.
La velocidad de inyeccin de muestra y patrones puede
variar.
Para mejorar ese error se cuantifica con estndar interno.
Muestra y patrones con una cantidad conocida y
constante de un soluto de naturaleza qumica similar al
analito.
El estndar interno separado de los analitos en la muestra,
pero cerca del analito de inters.
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Compensa variacin en la inyeccin y velocidad de flujo.
Se logran precisiones inferiores al 1 %.
Procedimiento de laboratorio
Condiciones del equipo.
Prepare disoluciones patrn individuales al 0,1 % en
balones de 25,00 mL de los alcoholes en el laboratorio.
Prepare una mezcla de los alcoholes, cada uno al 0,1% en
baln de 25,00 mL.
Inyecte 1 L de la mezcla, tomando en cuenta las
temperaturas de detector, inyector y columna que se
indican en el folleto de laboratorio.
Vare la temperatura del horno y la velocidad de flujo de
la fase mvil para optimizar las condiciones de separacin.
Inyecte 1 L de cada uno los alcoholes individuales para 30
identificar a partir del tR.
Procedimiento de laboratorio
Cuantificacin de etanol.
Determinacin de la concentracin de etanol
Con un picnmetro determine la concentracin de etanol
de la disolucin madre al 95 %.
Curva de calibracin con estndar interno
Prepare un curva de calibracin entre 0,1% y 0,5 % de
etanol en balones de 25,00 mL, donde cada patrn
contiene 0,1 % de butanol como estndar interno.
Muestra de guaro
Diluya la muestra real para leer en la curva de calibracin,
a partir de lo reportado en la etiqueta, recuerde que la
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muestra debe contener 0,1 % de butanol .
Procedimiento de laboratorio
Cuantificacin de etanol.
Anlisis en el laboratorio con las condiciones ptimas
Inyecte 1 L de cada uno de los patrones y de la muestra.
Mida el rea para cada una de las seales (analito y
estndar interno).
Clculos
A partir de la relacin entre el rea de analito y estndar
interno, en funcin de la concentracin de etanol, calcule
por interpolacin la concentracin de etanol en la
muestra en la recta por mnimos cuadrados.
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Reportar el etanol en la muestra a partir del sx0*t para un
95 % de confianza.