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UNIVERSIDAD CATOLICA DE SANTA MARIA
Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y

Biotecnológicas
Programa Profesional de Ingeniería Biotecnológica
« EVALUACIÓN DEL CONTENIDO DE ÁCIDO ASCÓRBICO Y

POLIFENOLES TOTALES DEL SANCAYO (Corryocactus brevistylus)) Y
DETERMINACIÓN DE SU ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Y
GENOTOXICIDAD EN LINFOCITOS DE SANGRE PERIFERICA »
Tesis presentada por la Bachiller:

Soany Milagros Alanoca Coaquira
Para optar por el título profesional de:
INGENIERA BIOTECNOLOGA
Asesor:
Dr. José Villanueva Salas
AREQUIPA – PERÚ
2014
DEDICATORIA
En primer lugar quiero dar gracias a Dios por haberme dado la oportunidad de
cursar una carrera universitaria y terminarle de la mejor manera posible luego de 5
años de estudio; él me permitió de alguna manera u otra seguir adelante en todo
momento hasta llegar al punto en el que me encuentro ahora, gracias.
El presente trabajo de tesis esta dedicado principalmente a mis padres, María

Coaquira Huanacuni y Juan de Dios Alanoca Mamani, quienes siempre me dieron
fortaleza y ánimos para seguir adelante, además de que creyeron en mi en todo
momento incluso cuando yo no creía en mi misma. Es a ellos a quien quiero
honrar con este trabajo porque sin ellos ahora posiblemente no habría logrado lo
que soy.
También quiero dedicar este trabajo a mis dos hermanos José Luis y Juan Carlos
Alanoca quienes me ayudaron y apoyaron en muchas ocasiones, en especial mi
hermano Juan Carlos, el cual fue para mí algo más importante que un hermano o
un amigo, un mentor y ejemplo a seguir con el quien aprendí que a pesar de las
equivocaciones siempre se puede seguir adelante, gracias hermanos.
Quiero agradecer muy profundamente a mi asesor, el Dr. José Villanueva, el cual

me brindó toda la ayuda posible para la realización de mi proyecto de tesis, por su
tiempo, paciencia y tolerancia que tuvo conmigo durante toda esta etapa del
proyecto, muchas gracias Doctor.
Y por último pero no menos importante, quiero dar las gracias a todas las personas
que trabajan en el laboratorio del Dr. Villanueva, personas que además de
apoyarme y ayudarme en la realización de mi proyecto, se convirtieron en unos
grandes amigos, Elvis Gonzales, Celia Choquenaira, Jeaneth Medina y Julitza
Paredes, además de las muchas personas que conocí y que no dudaron en
ayudarme cuando se los pedí: Elizabeth Infa, Alejandro Rondón y Andrea Zea,
muchas gracias chicos.
Y a todas esas personas que de alguna manera u otra influyeron en la realización y

culminación de este trabajo, la Sra. Luisa, el Sr. Froilan, a la Srta Liliana y demás
personas que tal vez este olvidando, les estoy a todos muy agradecida.
“Lo que tú pienses que puedes hacer lo puedes lograr, por lo tanto hazlo. El
valor está compuesto de talento, poder y magia, solamente fija tus metas y
después la mente empezará a desarrollarlas. Empieza y el trabajo será
terminado.”
Mary Kay Ash (1918–2001)
i
INDICE
RESUMEN……………………………………………………………………... ix
ABSTRACT…………..………………………………………………………... xi
INTRODUCCION……………………………………………………………... xiii
OBJETIVOS………………………………………………………..…………... xv
HIPOTESIS…………………………………………………………………...... xvi
VARIABLES E INDICADORES………………………………….………..… xvii
CAPITULO I ………………………………………………………………...…. 1
MARCO TEORICO……………………………………………………………. 1
1.1. SANCAYO (Corryocactus brevistylus)….…………………………………. 1

1.1.1 CLASIFICACION Y NOMBRES COMUNES…………………….. . 1
1.1.2 CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS…………………………. . 2
1.1.3 ORIGEN Y DISTRIBUCION……………………………………….. 3
1.1.4 CARACTERISTICAS ECOLOGICAS DEL Corryocactus
brevistylus……….…………………..………………………………... 4
1.1.5 PROPIEDADES NUTRICIONALES……………………………….. 4
1.1.6 USOS…………………………………………………………….…… 6
1.2. RADICALES LIBRES Y ESTRÉS OXIDATIVO…………………….... 7

1.2.1 RADICALES LIBRES……..……………………………….……….. 7
1.2.2 ESTRÉS OXIDATIVO……..……………………………………….. 11
1.3. ANTIOXIDANTES……………………………………………………….. 12
1.3.1 CLASIFICACIÓN DE ANTIOXIDANTES………………….…….. 13
1.3.2 ANTIOXIDANTES NATURALES - ALIMENTOS
FUNCIONALES……………………………………………….......... 15
1.3.3 DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE…… 15
1.4. ÁCIDO ASCÓRBICO……………………………………………….….... 18

1.4.1 ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DEL ÁCIDO ASCÓRBICO….… 19
1.4.2 BENEFICIOS DEL ÁCIDO ASCÓRBICO……………...……….… 20
1.5. COMPUESTOS FENOLICOS…………………………………………... 21

1.5.1 CLASIFICACIÓN DE LOS COMPUESTOS FENÓLICOS………. 21
1.5.2 FUNCIONES DE LOS COMPUESTOS FENÓLICOS……………. 22
1.5.3 ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE COMPUESTOS
FENÓLICOS………………………………………………………… 23
1.5.3.1 MECANISMO DE ACCIÓN…………………...………....…… 23
i
1.6. GENOTOXICIDAD………………………………………………………. 24
1.7. LINFOCITOS DE SANGRE PERIFÉRICA…………………………… 25
1.8. ENSAYO COMETA……………………………………………………… 26

1.8.1 METODOLOGÍA Y CONSIDERACIONES TECNICAS……..…. 27
1.8.2 EVALUACIÓN……………………………………………………… 29
CAPITULO II….................................................................................................. 31
MATERIALES Y METODOS…...................................................................... 31
2.1. LUGAR DE EJECUCIÓN.......................................................................... 31
2.2. MATERIALES............................................................................................ 31
2.2.1 MATERIAL VEGETAL...................................................................... 31
2.2.2 MATERIAL DE LABORATORIO..................................................... 31
2.3. MÉTODOS.................................................................................................... 34
2.3.1 OBTENC IÓN Y ALMACENAMIENTO DEL MATER IAL
VEGETAL............................................................................................ 34
2.3.2 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA................................................. 35
2.4. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO....................................... 35

2.4.1 MÉTODO VOLTAMÉTRICO………………………………………. 35
2.4.2 DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO POR
VOLTAMETRIA…………………………………………………….. 36
2.4.3 CÁLCULOS…………………………………………….…………… 37
2.5. DETERMINACIÓN DE POLIFENOLES TOTALES............................. 37

2.5.1 MÉTODO DE FOLLIN-CIOCALTEU............................................... 37
2.5.2 DETERMINACIÓN DE POLIFENOLES TOTALES POR
ESPECTROFOTOMETRÍA................................................................ 37
2.5.3 CÁLCULOS........................................................................................ 39
2.6. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

DEL Corryocactus brevistylus...................................................................... 39
2.6.1 MÉTODO DPPH (2,2-DIFENIL-1-PICRILHIDRAZIL). BRAND-
WILLIAMS ET AL. 1995…................................................................ 39
2.6.2 CÁLCULOS......................................................................................... 42
ii
2.6.3 MÉTODO ABTS (ACIDO 2,2′-AZINO-BIS-3-
ETILBENZOTIAZOLIN-6-SULFONICO). MILLER Y RICE –
EVANS, 1997…................................................................................... 43
2.6.4 CÁLCULOS........................................................................................ 46
2.6.5 ENSAYO CUPRAC (CAPACIDAD ANTIOXIDANTE REDUCTOR
DE ION CÚPRICO). APAK ET. AL. 2004............................................ 47
2.6.6 CÁLCULOS....................................................................................... 49
2.7. DETERMINACIÓN DE LA GENOTOXICIDAD DEL Corryocactus

brevistylus POR EL ENSAYO COMETA................................................. 49
2.7.1. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO DE Corryocactus brevistylus
(SANCAYO)………………………………………………………... 49
2.7.2. DISEÑO EXPERIMENTAL………….……………………………. 49
2.8. FLUJOGRAMA DE ACTIVIDADES…………………………………. 60
2.9. ANÁLISIS ESTADÍSTICO………………………………………………. 61
CAPITULO III……………………………………………………………….... 62
RESULTADOS Y DISCUSIÓN…………………………………………..….. 62
3.1. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO…………….…………. 62
3.2. DETERMINACIÓN DE POLIFENOLES TOTALES………………… 64
3.3. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DEL

Corryocactus brevistylus…………………………………………………... 66
3.3.1 MÉTODO DPPH (2,2-DIFENIL-1-PICRILHIDRAZIL). ………….. 66
3.3.2. MÉTODO ABTS (ACIDO 2,2′-AZINO-BIS-3-ETILBENZOTIAZO
LIN-6-SULFONICO)……………………………………………..….. 68
DE ION CÚPRICO). …………………………………………………… 69
3.3.4 COMPARACIÓN DE LOS TRES METODOS QUE DETERMINAN
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DEL Corryocactus brevistylus... 71
3.3.5 INFLUENCIA DEL ÁCIDO ASCÓRBICO Y POLIFENOLES
TOTALES EN LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DEL
Corryocactus brevistylus........................................................................ 74

brevistylus POR EL ENSAYO COMETA………………………………... 75
3.4.1 VIABILIDAD CELULAR……………………………………………. 75
3.4.2 CUANTIFICACION DEL DAÑO DE DNA………………………... ... 75
iii
3.4.3 INFLUENCIA DEL ÁCIDO ASCÓRBICO Y POLIFENOLES
TOTALES EN LA GENOTOXICIDAD DEL Corryocactus
brevistylus………………….................................................................. 87
CAPITULO IV…………………………………………………………….…… 89
CONCLUSIONES……………………………………………………………... 89
RECOMENDACIONES…………………………………………………….… 90
REFERENCIAS ………………………………………………………………. 91
iv
INDICE DE FIGURAS
FIGURA Nº 1.: Fruto de Corryocactus brevistylus................................................ 2

FIGURA Nº 2.: Distribución del Corryocactus brevistylus en las laderas de la
Cordillera de los Andes................................................................ 3
FIGURA Nº 3.: Neutralización del radical libre por un antioxidante.................... 13
FIGURA Nº 4.: Mecanismos de reacción por transferencia de un solo electrón y
transferencia de átomos de hidrógeno........................................... 17
FIGURA Nº 5.: Estructura química del ácido ascórbico......................................... 19
FIGURA Nº 6.: Formas moleculares en equilibrio de la vitamina C..................... 19
FIGURA Nº 7.: Estructura de algunos compuestos fenólicos................................ 22
FIGURA Nº 8.: Esquema típico de un portaobjetos con las capas de agarosa
dispuestas tipo sándwich………………………………………... 28
FIGURA Nº 9.: Clasificación visual por análisis visual, observadas en el
microscopio luego de una tinción con nitrato de plata. (a) Grado
cero o sin daño, (b) Grado 1, (c) Grado 2, (d) Grado 3, (e) Grado
4, (APN) células apoptóticas………………………………….... 30
FIGURA Nº 10.: Liofilizado de la muestra y su almacenamiento……………….. 34
FIGURA Nº 11.: Voltámetro Metrohn, 757 VA Computrace…………………… 36
FIGURA Nº 12.: Espectrofotómetro CARY 60 UV – VIS, Agilent
Technologies…………………………………………………… 38
FIGURA Nº 13.: Estructura del DPPH antes y después de la reacción con el
antioxidante…………………………………………………... 40
FIGURA Nº 14.: Estándares para la curva de calibración del reactivo DPPH de
menor a mayor concentración de Trolox………………………. 42
FIGURA Nº 15.: Estructura del ABTS•+ antes y después de la reacción con el
antioxidante…………………………………………………… 43
FIGURA Nº 16.: Estructura de la vitamina E y Trolox………………………..… 44
FIGURA Nº 17.: Estándares para la curva de calibración del reactivo ABTS +
de menor a mayor concentración de Trolox…………………… 46
FIGURA Nº 18.: Reacción del reactivo CUPRAC con un agente antioxidante…. 47
FIGURA Nº 19.: Estándares para la curva de calibración del método CUPRAC
de una menor a mayor concentración de Trolox………….…… 49
FIGURA Nº 20.: Liofilizado de Corryocactus brevistylus (Sancayo)………..….. 62
FIGURA Nº 21.: Curva polarográfica de la muestra de Corryocactus brevistylus
para la determinación de ácido ascórbico………………….….. 63
FIGURA Nº 22.: Curva de calibración de ácido gálico………………………….. 65
FIGURA Nº 23.: Representación de la curva de calibración de Trolox
– DPPH……………………………………………………….. 67
– ABTS……………………………………………………….. 69
v
– CUPRAC……………………………………………………. 70
FIGURA Nº 26.: Gráfico de caja y bigotes de los métodos DPPH, ABTS y
CUPRAC……………………………………………………… 73
FIGURA Nº 27.: Unidades arbitrarias de genotoxicidad registrada en linfocitos
de sangre periférica para los diferentes tratamientos con
Corryocactus brevistylus……………………………………….. 76
FIGURA Nº 28.: Porcentaje de ADN en cola registrada en linfocitos de sangre
periférica expuesta a los tres tratamientos…………………..... 79
FIGURA Nº 29.: Gráfico de caja y bigotes para el porcentaje de ADN en cola
registrada en linfocitos de sangre periférica expuesta a los tres
tratamientos…………………………………………………… 80
FIGURA Nº 30.: Efecto genotóxico del extracto acuoso de Corryocactus
brevistylus al 0,02%, 0,2% y 2% en células mononucleares
mediante el momento de cola (TM) y momento de cola Olive
(OTM)…………………………………………………………. 82
FIGURA Nº 31.: Gráfico de caja y bigotes para las medias del momento de cola
(Tail Moment) obtenidos en el tratamientos al 0,02%, 0,2% y
2% además de los controles negativo y positivo………………. 83
FIGURA Nº 32.: Gráfico de caja y bigotes para las medias del momento de cola
Olive (Olive Tail Moment) obtenidos en el tratamientos al
0,02%, 0,2% y 2% además de los controles negativo y
positivo………………………………………………………… 85
FIGURA Nº 33.: Comparación del efecto genotóxico del extracto acuoso de
Corryocactus brevistylus (sancayo), donde: A: 0,02%, B: 0,2%,
C: 2%, D: Control positivo, E: Control negativo……………… 86
FIGURA Nº 34.: Preparación del Extracto………………………………………. 104
FIGURA Nº 35.: Extracción de sangre para el aislamiento de linfocitos………... 105
FIGURA Nº 36.: Aislamiento de linfocitos, prueba de viabilidad e incubación
con el extracto…………………………………………………. 105
FIGURA Nº 37.: Preparación de las láminas de agarosa………………………… 106
FIGURA Nº 38.: Lisis……………………………………………………………. 107
FIGURA Nº 39.: Electroforesis…………………………………………………… 107
FIGURA Nº 40.: Neutralización………………………………………………….. 107
FIGURA Nº 41.: Tinción…………………………………………………………. 108
FIGURA Nº 42.: Visualización en el microscopio……………………………….. 108
FIGURA Nº 43.: Análisis en el software CaspLab………………………………. 109
vi
INDICE DE TABLAS
TABLA Nº 1.: Contenido en vitamina C y polifenoles de distintos frutos……… 5

TABLA Nº 2.: Composición química de la pulpa y cáscara del Corryocactus
brevistylus……………………………………………..…………. 5
TABLA Nº 3.: Especies Reactivas y Radicales Libres.………………………….. 8
TABLA Nº 4.: Antioxidantes Enzimáticos y no Enzimáticos. ………………….. 14
TABLA Nº 5.: Clasificación de los modelos de ensayo in vitro según su modo
de reacción SET o HAT.…………………………………….…..… 16
TABLA Nº 6.: Preparación de la tabla de calibración. ………………….………. 38
TABLA Nº 7.: Preparación de la curva de calibración con DPPH………………. 41
TABLA Nº 8.: Preparación de la curva de calibración con ABTS+……………… 45
TABLA Nº 9.: Preparación de la curva de calibración para el ensayo
CUPRAC………………………………………………………… 48
TABLA Nº 10.: Grupos experimentales para el Ensayo Cometa……………….. 51
TABLA Nº 11.: Preparación de cada uno de los tratamientos para el Ensayo
Cometa………………………………………………….………. 51
TABLA Nº 12.: Interpretación de la cantidad de ADN en la cola…………….…. 59
TABLA Nº 13.: Contenido de ácido ascórbico en Corryocactus brevistylus………63
TABLA Nº 14.: Datos de la curva de calibración para polifenoles totales……… 64
TABLA Nº 15.: Contenido de polifenoles totales en Corryocactus brevistylus… 65
TABLA Nº 16.: Datos de la curva de calibración para Trolox – DPPH…………. 67
TABLA Nº 17.: Actividad antioxidante del sancayo por DPPH……………….. 68
TABLA Nº 18.: Datos de la curva de calibración para Trolox – ABTS…………. 68
TABLA Nº 19.: Actividad antioxidante del sancayo por ABTS……………….... 69
TABLA Nº 20.: Datos de la curva de calibración para Trolox – CUPRAC……... 70
TABLA Nº 21.: Actividad antioxidante del sancayo por CUPRAC……………. 71
TABLA Nº 22.: Resultados de la actividad antioxidante a través de los
métodos DPPH, ABTS y CUPRAC…………………………… 71
TABLA Nº 23.: ANOVA para la comparación de métodos sobre la actividad
antioxidante…………………………………………………..... 72
TABLA Nº 24.: Test de Tukey para la comparación de métodos sobre la
actividad antioxidante…………………………………………. 72
TABLA Nº 25.: Efecto del Corryocactus brevistylus en linfocitos de sangre
periférica………..……………………………………………… 76
TABLA Nº 26.: Porcentaje promedio de ADN en cola registrada en grupos de
linfocitos de sangre periférica tratadas con diferentes
concentraciones de Corryocactus brevistylus y su
correspondiente control negativo y positivo……………………. 78
TABLA Nº 27.: Porcentaje de ADN en cola y nivel de daño registrados en
linfocitos de sangre periférica de los tres tratamientos……….... 78
vii
TABLA Nº 28.: Tabla ANOVA para los porcentajes de DNA en cola hallados
en las concentración del 0,02%, 0,2% y 2%, y los controles
positivo y negativo...................................................................... 79
TABLA Nº 29.: Test de Tukey para la comparación de los tratamientos con
Corryocactus brevistylus y los controles negativo y positivo…. 80
TABLA Nº 30.: Promedios globales del Momento de Cola (TM) y Momento
de Cola Olive (OTM) registradas en los cometas analizados
por el software CaspLab……………………………….…….… 81
TABLA Nº 31.: Tabla ANOVA para los tratamientos al 0,02%, 0,2% y 2%, y
sus controles positivo y negativo usando el momento de cola
(TM) hallados con el software CaspLab………….………...… 82
TABLA Nº 32.: Test de Tukey para los tratamientos al 0,02%, 0,2% y 2%, y
sus controles positivo y negativo de acuerdo a las medias del
momento de cola (TM) hallados con el software CaspLab........ 83
sus controles positivo y negativo usando el momento de cola
Olive (OTM) hallados con el software CaspLab……………….. 84
sus controles positivo y negativo de acuerdo a las medias del
momento de cola olive (OTM) hallados con el software
CaspLab………………………………………………………… 84
viii
RESUMEN
En el presente trabajo se evaluó el contenido de ácido ascórbico y polifenoles totales

del Sancayo (Corryocactus brevistylus), además de su actividad antioxidante y su
efecto genotóxico en linfocitos de sangre periférica por el ensayo cometa
Se utilizaron frutos de Corryocactus brevistylus originarios de la provincia de

Caylloma, perteneciente al departamento de Arequipa, los cuales fueron liofilizados
en el laboratorio de Ingeniería Alimentarias de la Universidad Nacional de San
Agustín. Se analizó morfológicamente una muestra de ellos en el herbario de la
misma universidad y se confirmó su pertenencia a la especie Corryocactus
brevistylus.
Se determinó el contenido de ácido ascórbico por el método voltamétrico obteniendo

un valor de 1,42 mg A.A. /g de muestra liofilizada y el contenido de polifenoles
totales por el método colorimétrico de Follin – Ciocalteu hallando un valor promedio
de 6,41 mg GAE/g de muestra. Así mismo, se evaluó la actividad antioxidante del
Corryocactus brevistylus obteniendo valores promedio de 90,30 umol TE/ g para el
método DPPH, 154,20 umol TE/ g para el método ABTS y finalmente 76,74 umol
TE/ g para el ensayo CUPRAC.
La evaluación de la genotoxicidad del sancayo (Corryocactus brevistylus) se realizó

con linfocitos de sangre periférica extraídos por gradiente de densidad con Ficoll-
Paque Premium. Las células se expusieron con el extracto acuoso de sancayo a
concentraciones de 0,02 %, 0,2 % y 2 % a 37 ºC por 30 min para su posterior fijación
en portaobjetos embebidos previamente con agar. Se realizó el ensayo cometa con las
células ya tratadas por medio de un tratamiento de Lisis por espacio de 18 h,
incubación en una solución alcalina por 10 min, corrida electroforética a 30 V y 246
mA por 20 min, neutralización y finalmente teñido con nitrato de plata. Se contó y
clasificó 50 cometas al azar, para luego analizarlos en el software CaspLab y obtener
ix
sus resultados en base al % de DNA en cola (Tail DNA %), unidades arbitrarias
(UA), momento de cola (TM) y el momento de cola Olive (OTM).
En el estudio de genotoxicidad, se obtuvo un valor del 7,72 ± 0,85 de porcentaje de

DNA en cola para el tratamiento al 0,02 % y valores de momento de cola (TM) de
2,27 ± 0,24 y de momento de cola Olive (OTM) de 3,01 ± 0,47. Los extractos al 0,2
% y 2 % alcanzaron valores de porcentaje de DNA en cola de 15,32 ± 1,59 y 24,58 ±
2,3 respectivamente, además de valores en su TM de 7,53 ± 1,12 y 14,20 ± 3,80 y en
su OTM de 6,38 ± 0,76 y 10,45 ± 0,90.
Como resultados del estudio se concluyó que para la variedad de Caylloma, existe un
mayor contenido de polifenoles totales equivalentes en mg de ácido gálico (GAE)
por gramo de muestra (6,41 mg GAE/g) a comparación del contenido de ácido
ascórbico (1,42 mg AA/g) encontrados en los frutos de Corryocactus brevistylus por
lo que se puede presumir que su actividad antioxidante es atribuida en su mayoría a
la existencia de polifenoles totales en el sancayo con una poca influencia de ácido
ascórbico encontrado. De la misma forma, se observó que su extracto en las
concentraciones del 0,02 % y 0,2 % no muestran genotoxicidad en las células
mononucleares mientras que al 2 % es considerado ligeramente genotóxico con
valores cercanos a los obtenidos con el control positivo. Se puede presumir que la
genotoxicidad del sancayo es influenciada, en su mayoría, al poder prooxidante del
ácido ascórbico existente en el fruto.
Palabras clave: Corryocactus brevistylus, ácido ascórbico, polifenoles totales,

actividad antioxidante, genotoxicidad, ensayo cometa.
x
ABSTRACT
In this study the content of ascorbic acid and total polyphenols of Sancayo
(Corryocactus brevistylus) was evaluated, in addition to its antioxidant activity and
genotoxic effect in peripheral blood lymphocytes through the comet assay.
Corryocactus brevistylus fruits belonging to Caylloma province, from the department

of Arequipa, were freeze-dried in the laboratory of Food Engineering, National
University of San Agustin. Sancayo sample was analyzed morphologically in the
herbarium of the same university and its species Corryocactus brevistylus was
confirmed.
The ascorbic acid content was determined by the voltammetric method, obtaining a
value of 1,42 mg AA /g of lyophilized sample and the total polyphenols content by
the Follin – Ciocalteu method obtaining an average value of 6,41 mg GAE /g of
lyophilized sample. Also, the antioxidant activity of Corryocactus brevistylus was
evaluated, obtaining average values of 90,30 umol TE /g for DPPH method, 154,20
umol TE /g for the ABTS method and finally 76,75 umol TE /g for CUPRAC
method.
The genotoxicity of Corryocactus brevistylus was evaluated using peripheral blood

lymphocytes extracted by density gradient Ficoll-Paque Premium. Cells were
exposed to the aqueous extract of sancayo at concentrations of 0,02 %, 0,2 % and 2
% at 37 ° C for 30 min. for subsequently pin up with agar in previously embedded
glass slides. The comet assay was performed in treated cells, using a lysis treatment
for 18 h, incubation in an alkaline solution for 10 min., electrophoresis run at 30 V
and 246 mA for 20 min, neutralization and finally stained with Silver Nitrate. 50
comets were counted randomly and classified using the CaspLab software, and get
the results based on Tail DNA %, arbitrary units (AU), Tail Moment (TM) and Tail
Moment Olive (OTM).
xi
In the genotoxicity studies, was obtained for treatment 0,02 %, a value of 7,72 ± 0,85
Tail DNA %, in Tail Moment (TM) a value of 2,27 ± 0,24 and for Olive Tail
Moment (OTM) 3,01 ± 0,47. Extracts 0,2% and 2% reached values for Tail DNA %
of 15,32 ± 1,59 and 24,58 ± 2,3 respectively, values of 7,53 ± 1,12 and 14,20 ± 3,80
for TM and finally 6,38 ± 0,76 and 10,45 ± 0,90 for OTM.
As results of the study it was concluded that for the variety of Caylloma, there is a
higher content of total polyphenols in mg of gallic acid equivalent (GAE) per gram
of sample (6,41 ± 0,13 mg GAE / g) compared to the content ascorbic acid (AA 1,42
± 0,03 mg / g) found in the fruits of Corryocactus brevistylus so it can be assumed
that its antioxidant activity is attributed mostly to the presence of polyphenols in the
Sancayo with a little influence of ascorbic acid founded. Likewise, it was observed
that the extract at concentrations of 0,02 % and 0,2 % did not show genotoxicity
mononuclear cells while 2% is considered genotoxic slightly nearer to those obtained
with the positive control. It can be assumed that the genotoxicity of Sancayo is
influenced mostly at existing power prooxidant ascorbic acid in the fruit.
Keywords: Corryocactus brevistylus, ascorbic acid, total polyphenols, antioxidant

activity, genotoxicity, comet assay.
xii
INTRODUCCIÓN
Desde siempre la naturaleza ha proveído al hombre de una gran variedad de

productos naturales que poseen propiedades beneficiosas para el ser humano y las
células que conforman nuestro organismo. Estos productos naturales en su mayoría
contienen moléculas capaces de contrarrestar los agentes nocivos a los cuales
nuestro cuerpo y nuestras células están expuestos día a día, las que además dañan su
estructura y por ende la salud de las personas.
Las moléculas capaces de proteger a nuestro organismo de los efectos causados por
los radicales libres son conocidas como antioxidantes, los cuales son capaces de
retardar o prevenir la oxidación de las moléculas de nuestro organismo ayudándonos
a prevenir posibles enfermedades que afecten a futuro nuestra salud. 91
La oxidación es una reacción química de transferencia de electrones de una sustancia

a un agente oxidante en la cual se pueden producir radicales libres. Los radicales
libres al tener un electrón desapareado con capacidad de aparearse, buscan reaccionar
con moléculas estables con el fin de alcanzar una estabilidad electroquímica
conduciendo a nuestro organismo a diversas enfermedades, como: envejecimiento
precoz, problemas del sistema cardiovascular (arteriosclerosis), problemas en el
sistema nervioso, daño genético (mutaciones y cánceres), entre otras. Debido a que la
capacidad de nuestro organismo para contrarrestar los radicales libres es limitada, es
de mucho interés el consumo de alimentos naturales que proporcionen sustancias
beneficiosas a la salud.92
Entre toda esa gran variedad natural, encontramos a la especie Corryocactus

brevistylus o conocida como “sancayo”, el cual es una cactácea que tiene como fruto
a unas bayas globulares comestibles las cuales tienen un alto contenido en vitamina
C y polifenoles, llevándolos así a tener propiedades antioxidantes. 85,64
El hábitat de esta especie se sitúa en el Suroeste de América, desde el sur del Perú
abarcando los departamentos de Ayacucho, Arequipa, Moquegua y Tacna, hasta el
norte de Chile por las regiones de Arica y Parinacota.64,14 La mayor parte de la
producción silvestre del fruto es consumida por los lugareños de la zona los cuales
conocen de él, mientras que otra pequeña parte de este es vendido a la población la
cual en su mayoría no conoce del fruto y mucho menos de sus propiedades.85
Existen numerosos estudios relacionados con la medición de la actividad

antioxidante de diversas especies, como por ejemplo, la uva, limo, mango y tomate,
en los que se da a conocer sus componentes principales, otorgándoles así una mayor
importancia en las diferentes industrias. 74
xiii
Los productos naturales al poseer componentes y propiedades beneficiosas para la
salud de personas, han traído consigo la atención de la industria alimentaria y
farmacéutica por lo que es necesario evaluar la toxicidad de los mismos para su uso y
consumo seguro. El estudio genotóxico de diversos productos, suele ser evaluado en
modelos de estudio in vitro como in vivo a través de numerosas técnicas siendo una
de ellas el ensayo cometa. Este ensayo consiste en evaluar la formación de cometas
a partir de células tratadas previamente con el extracto a estudiar, usando diversos
modelos de estudio como el uso de linfocitos de sangre periférica el cual ha sido muy
empleado en el estudio de genotoxicidad. 103
Debido a la gran importancia atribuida al consumo del fruto de Corryocactus

brevistylus, es que se realizó el presente trabajo en el que evaluó el contenido de
ácido ascórbico por el método voltamétrico, el contenido de polifenoles totales por el
método de Follin Ciocalteu, la actividad antioxidante por los método DPPH, ABTS y
CUPRAC y la evaluación de su genotoxicidad en linfocitos de sangre periférica a
través del ensayo cometa. Se evaluó los resultados obtenidos con los métodos
propuestos para la determinación de la actividad antioxidante del Sancayo, además
del efecto de las diferentes concentraciones de Corryocactus brevistylus usadas para
su estudio genotóxico. Con el estudio de esta especie se espera conocer más acerca
de este fruto y fomentar su consumo en la ciudad de Arequipa.
xiv
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
Evaluar el contenido de ácido ascórbico y polifenoles totales del Sancayo

(Corryocactus brevistylus) y determinar su actividad antioxidante y genotoxicidad
en linfocitos de sangre periférica.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
• Determinar el contenido de ácido ascórbico existente en el fruto sancayo

(Corryocactus brevistylus)
• Determinar el contenido de polifenoles totales presentes en el fruto sancayo
(Corryocactus brevistylus)
• Evaluar la actividad antioxidante de los frutos sancayo (Corryocactus
brevistylus) con los métodos DPPH, ABTS y CUPRAC
• Evaluar el efecto genotóxico del fruto sancayo (Corryocactus brevistylus) en
linfocitos de sangre periférica a través del ensayo cometa.
xv
HIPÓTESIS
Debido a que el Sancayo (Corryocactus brevistylus) es una especie endémica con

antecedentes de poseer cantidades considerables de vitamina C y posiblemente
también de polifenoles totales, es que se evaluó la actividad antioxidante del Sancayo
y su poder genotóxicos en linfocitos de sangre periférica a través del ensayo cometa.
xvi
VARIABLES E INDICADORES
Las variables dependientes e independientes del proceso:
PRUEBA VARIABLES INDICADORES

Concentración de ácido
- Concentración obtenida
Variables ascórbico presente en la
de acuerdo al voltaje
Dependientes muestra de Corryocactus
Ácido emitido.
brevistylus.
Ascórbico
Variables
Concentración del sancayo - Extracto acuoso al 2%
Independientes
- Cambio de coloración a
Concentración de través del método de
Variables polifenoles totales Follin –Ciocalteu.
Polifenoles Dependientes presentes en la muestra de - Absorbancia obtenida
Totales Corryocactus brevistylus. por el método
espectrofotométrico.
Variables - Extracto metanólico al
Concentración del sancayo
Independientes 2%
- Cambio de coloración a
través del método
Presencia o ausencia de
DPPH, ABTS y
Variables polifenoles y/o vitamina C
CUPRAC
Actividad Dependientes en la muestra de
- Absorbancia obtenida
Antioxidante Corryocactus brevistylus
por el método
espectrofotométrico.
Variables - Extracto metanólico al
Independientes 2%
- Unidades arbitrarias
- % DNA en cola
Efecto genotóxico del
Variables
extracto de Corryocactus - Momento de cola (Tail
Dependientes
Ensayo brevistylus Moment- TM)
Cometa - Momento de cola olive
(Olive Tail Moment-
OTM)
Variables - Extracto acuoso al

Independientes 0,02%, 0,2% y 2%
xvii
CAPITULO I
MARCO TEORICO
1.1. SANCAYO (Corryocactus brevistylus)
1.1.1 CLASIFICACION Y NOMBRES COMUNES
El Sancayo es una especie endémica de las vertientes occidentales del sur del
Perú (Arequipa, Ayacucho, Moquegua y Tacna) 15 así también como de la
precordillera andina del norte de Chile (Arica, Parinacota y Tarapacá).40
El Corryocactus brevistylus es una especie de cactácea de ramificación libre de

2 a 5 m de altura, con unos tallos de color verde oscuro a verde claro amarillento
de 12 - 15 cm de diámetro ramificado principalmente desde la base. Forma parte
de la familia de las Cactáceas y es conocida principalmente por sus frutos, los
cuales son unas bayas de color verdoso de 7 – 10 cm de diámetro, redondos y
cubierto con abundante espinas, conocidas entre la población andina como
Sancayo o Sanky. 5
La posición taxonómica del Corryocactus brevistylus es la siguiente: 14
Reino: Plantae
Phyllum/División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Orden: Caryophyllales
Familia: Cactaceae
Género: Corryocactus
Especie: C. brevistylus
Subespecie: puquiensis
Nombres Comunes: Sancayo, sanky, suja, cure, chona, cardón, tacaysiña,

kontumela, guacalla, quiso de flores amarillas.
Se han reconocido dos subespecies de Corryocactus brevistylus: brevistylus y

puquiensis. La subespecie brevistylus suele ser de 2-3 m de alto y posee unas
flores de 10 cm de diámetro, esta subespecie suele producirse principalmente en
la parte sur de la cordillera. La subespecie puquiensis posee unos tallos de 5 m.
alto y por lo general unas flores de 6 cm de diámetro; se produce en la parte más
septentrional de la cordillera, sobre todo en Arequipa, Perú. 5
1
1.1.2 CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS
Es una planta de cuerpo arbustivo o a menudo arbóreo, de pocas costillas,

constituido por tallos carnosos ramificados libremente desde la base con una
coloración de verde oscuros a verde claro y conformado con espinas largas de
hasta 24 cm de largo.13
Las ramas son articuladas y frecuentemente de varios metros de largo y de 8 a 15

cm de grosor. Poseen una epidermis verde que puede tornarse más adelante
amarillenta por la insolación. 40
Las costillas son de 6 a 9 distribuidos en forma triangular en corte transversal,

con areolas redondeadas, separadas entre sí por 2 a 4 cm. Tiene un color café-
anaranjadas cuando son nuevas y que se vuelven grises con el paso del tiempo.
40
Las espinas son rectas y derechas de un color marrón que más adelante se hacen
ligeros. La longitud de los mismos es muy desigual de más de 1 – 3 cm de largo
las del borde y hasta 20 – 24 cm de largo las más céntricas.5,40
FIGURA Nº 1.: Fruto de Corryocactus brevistylus. Extraído de Ostolaza N.,

2011.
Las flores tienen una forma de embudo, son anchas y están ubicadas de forma
lateral. Tienen una constricción por encima del ovario, poseen una corola muy
abierta y un tubo floral densamente cubierto de escamas. El tamaño que posee
es de 9 cm de largo y 10 cm de ancho, no tienen aroma y son de un color
amarillo – doradas.64
2
Sus frutos se presentan de forma globular con un tamaño de 7 a 10 cm de
diámetro, espinoso (espinas que pierde al madurar) y de un color verde oliva
(Ver Figura Nº 1). Su carne es ácida y jugosa con numerosas semillas negras y
una cáscara con un interior mucilaginoso.64
1.1.3 ORIGEN Y DISTRIBUCION
El género Corryocactus es uno de los últimos géneros conocidos de cactáceas en

el Suroeste de América. Es nativo del sur del Perú, norte de Chile y oeste de
Bolivia, englobando alrededor de 30 especies la mayoría perteneciente al Perú
(Ver Figura Nº 2.), y el resto a Bolivia y Chile. 64
FIGURA Nº 2.: Distribución del Corryocactus brevistylus en las laderas de la

Cordillera de los Andes. Extraído de: http://www.cactusinhabitat.org
/index.php?p=specie&id=37&l=es
Las comunidades con Cactáceas de este tipo son propias de las vertientes
occidentales y valles profundos interiores de la Cordillera Andina (Ver figura Nº
2). Los biótopos sobre los que se asientan son muy característicos por su escasa
estabilidad, con ríos de fango, riadas de derrubios y desprendimientos. 87
El descubrimiento de la especie Corryocactus está relacionada con su nombre, el

cual honra al Ing. Thomas Avery Corry (1862-1942) quien ayudó al Dr. Joseph
3
Rose en su labor de campo y descubrimiento de las tres primeras especies del
género.14
1.1.4 CARACTERISTICAS ECOLOGICAS DEL Corryocactus brevistylus
Esta especie crece en laderas de cerros además de lugares pedregosos, arenosos

y rocosos con poca humedad, con una altitud de entre los 2,500 a 3,500 msnm y
con una tolerancia de temperatura mínima de hasta 10 ºC. Las condiciones de
crecimiento del Corryocactus brevistylus lo convierte en un fruto andino 100 %
ecológico y que se produce libre de fertilizantes o pesticidas químicos.28
Las plantas de esta especie poseen características especiales que les permiten
aprovechar y almacenar mejor el agua por mucho más tiempo, la más conocida
es la presencia de espinas que funcionan como un receptor y conservador de la
humedad. El Corryocactus brevistylus genera un ecosistema con un habitad
equilibrado en biodiversidad, genera microclimas favorables para otras especies,
captura el CO2 brindando a su vez O2 y además evita la erosión de los suelos en
las laderas con altas pendientes. 28
1.1.5 PROPIEDADES NUTRICIONALES
Los frutos de sancayo poseen una elevada cantidad de agua por lo que suele ser
más jugosa que carnosa. En el interior del jugo hay una gran cantidad de
sustancias entre las que se encuentran principalmente vitaminas, polifenoles y
minerales. La vitamina predominante en esta especie es la vitamina C la cual se
encuentra en mayor cantidad que la naranja (50 mg /100 g), el limón (45 – 50
mg/ 100 g) y otros frutos con propiedades antioxidantes. (Ver Tabla Nº 1) 28
Además del contenido de vitamina C, se ha encontrado que la especie

Corryocactus brevistylus perteneciente a la variedad de Ayacucho posee una
cantidad considerable de polifenoles totales de 10,12 mg GAE/g (1012 mg GAE/
100 g) que al ser comparada con otros frutos comestibles como: mandarina
(242,6 mg GAE/ 100 g), manzana (426,7 mg GAE/ 100 g) o ciruela (376,5 mg
GAE/ 100 g), se observa que sobrepasa en gran medida a estas otras especies.
(Ver Tabla Nº 1) 54
El tercer componente de importancia lo constituyen los minerales entre los

cuales podemos mencionar al calcio, fósforo y potasio, encontrándose que este
último se encuentra en una mayor cantidad que la existente en el plátano
(358 mg/100 g).85
4
TABLA Nº 1.: Contenido en vitamina C y polifenoles de distintos frutos.
Extraído de Geigy D., 1975.
Vitamina C: Polifenoles:
mg de ácido mg de ácido
Fruto (pulpa) Autor
ascórbico/100 g gálico/ 100 g
Albaricoque fresco 7 45,7 Tosun I., et all. 2003
Cereza fresca 10 70,7 - 241,4 Melicháčová S., et all. 2010
Ciruela fresca 6 376,5 Zapata S., et all. 2014
Fresa fresca 60 1638,4 Zapata S., et all. 2014
Limón fresco 50 30 - 35 Zapata P., et all. 2006
Limón 45 60 - 70 Zapata P., et all. 2006
Mandarina fresca 31 242,6 Zapata S., et all. 2014
Manzana fresca 5 426,7 Zapata S., et all. 2014
Melocotón fresco 7 15 - 25 Zapata P., et all. 2006
Melón fresco 33 20 - 30 Zapata P., et all. 2006
Sandía 7 10 - 20 Zapata P., et all. 2006
Naranja 50 40 - 50 Zapata P., et all. 2006
Pera fresca 4 124,7 Zapata S., et all. 2014
Camu camu 1385,549 -
1445 Salgado N., et all. 2012
(liofilizado) 1188,573
TABLA Nº 2.: Composición química de la pulpa y cáscara del Corryocactus

brevistylus. Extraído de: http://www.lamolina.edu.pe/gaceta/edicion2006
/notas/nota153.htm
Componente Pulpa Cáscara

Caloría (Kcal). 17,6 28
Humedad (g/100g). 95,2 91,6
Carbohidrato g/100g). 3,1 5,6
Ceniza (g/100g). 0,4 1,4
Grasa (g/100g). 0 0
Fibra (g/100g). 0,9 1,7
Proteína (g/100g) 1,3 1,4
Minerales
Calcio (ppm) 104,5 752
Potasio(ppm) 5566,4 1743,9
Fosforo (mg/100g) 12,8 6,7
Vitaminas
Vitamina C (mg/100g) 57,1 2,5
5
En la Tabla Nº 2 se puede observar la composición química de la pulpa y cáscara
del Corryocactus brevistylus
De acuerdo con Lobo V. et all, el daño de los radicales libres se puede controlar
con una defensa antioxidante adecuada y la ingesta de nutrientes antioxidantes
pudiendo contribuir así a la mejora de la calidad de vida.50 La vitamina C y
polifenoles totales existente en las verduras y vegetales, como la Myrciaria
dubia (camu – camu), son potentes antioxidante los cuales eliminan de manera
eficaz los radicales libres existentes en nuestro organismo,2 a la vez que ayudan
a prevenir la formación de especies nitrosantes las cuales pueden dañar
directamente el DNA de nuestras celulas.99
De acuerdo con un artículo de la Fundación del Consejo Internacional sobre

Información Alimentaria (International Food Information Council Foundation)
el potasio es un nutriente esencial para la salud en sus niveles más básicos, el
cual permite el buen funcionamiento de las células, que junto con el sodio y
otros compuestos trabaja como un electrolito que regula el balance de los fluidos
del cuerpo. Estas acciones afectan las señales nerviosas, contracciones
musculares y el tono de los vasos sanguíneos con un impacto de largo alcance en
el cuerpo y el sistema cardiovascular. 43
El consumo de sancayo es muy recomendado en la dieta de las personas que

deseen bajar de peso, debido a su bajo contenido en azúcar y su composición
rica en calcio, fósforo, vitamina C y polifenoles totales. 43, 54
1.1.6 USOS
Posee propiedades curativas para las afecciones hepáticas y renales debido a su

poder antioxidante. Se considera que el estrés oxidativo provoca un espectro de
enfermedades y desempeña una función patogenética en la hepatopatía
alcohólica, las hepatitis virales, la estetohepatitis no alcohólica, la enfermedad
hepática autoinmune, el cáncer hepático y la cirrosis hepática.69,79 Es por ello
que los antioxidantes parecieron alentadores en la prevención y el tratamiento
del daño hepático. 55
Además posee propiedades laxantes, de regulación del colesterol (debido a su

contenido en vitamina C), y contra la osteoporosis (por la presencia de calcio).
85
Desde el punto de vista cosmético, la cáscara del fruto es usado para tratar la
alopecia, caspa y seborrea; además, la mucosidad de la misma sirve como
6
cicatrizante de heridas leves. Además de ello, el tallo es utilizado de forma
triturada como analgésico y como tratamiento a los edemas y hematomas. 68
a. Uso Interno: 15
Debido a su contenido en vitamina C, polifenoles, calcio y potasio, es que se le

atribuyen propiedades preventivas al cáncer, osteoporosis y la inflamación
arterial, además de propiedades cicatrizantes.
b. Uso Externo: 68
El Corryocactus brevistylus es una especie muy interesante, que ofrece lo

siguiente:
• El fruto del Corryocactus brevistylus ha sido empleado como insumo para

la fabricación de mermeladas, jaleas, caramelos, cócteles y bebidas como es
el caso del "colca sour".
• Se ha utilizado el sancayo en la elaboración de bebidas natural y
energizantes con propiedades antioxidantes.
1.2. RADICALES LIBRES Y ESTRÉS OXIDATIVO
1.2.1 RADICALES LIBRES
Los radicales libres (RL) son átomos o grupos de átomos que tienen un electrón
desapareado por lo que son muy reactivos y tienden a captar un electrón de otros
átomos con el fin de alcanzar su estabilidad electroquímica. Esta reactividad es
la base de su toxicidad y de su corta vida media. 52
La función que desarrollan los radicales libres presenta dos caras opuestas, por
un lado actúan como mediadores y reguladores a concentraciones fisiológicas,
mientras que a concentraciones elevadas pueden actuar como potentes oxidantes
citotóxicos.92
En los sistemas vivos se generan muchos tipos de radicales libres, siendo los
más conocidos los radicales del oxígeno. Se utiliza el término “especies
reactivas del oxígeno” (reactive oxygen species, ROS) como nombre colectivo
para referirse a las especies derivadas del oxígeno, incluyendo tanto los
derivados radicales como los no radicales, que son agentes oxidantes y/o
fácilmente convertibles en radicales. De forma análoga existen especies
7
reactivas del nitrógeno (RNS), del cloro (RClS) y del bromo (RBrS) lo cuales se
pueden observar en la Tabla Nº 3. 35
Los radicales libres recorren nuestro organismo intentando robar un electrón de

las moléculas estables, con el fin de alcanzar su estabilidad electroquímica. Una
vez que el radical libre ha conseguido robar el electrón que necesita para aparear
su electrón libre, la molécula estable que se lo cede se convierte a su vez en un
radical libre por quedar con un electrón desapareado, iniciándose así una
reacción en cadena que puede destruir nuestras células. 31
TABLA Nº 3.: Especies Reactivas y Radicales Libres. Extraído de Halliwell B., et

all, 2004.
Radicales Libres No Radicales
Superóxido (O2- ), Peróxido de Hidrógeno (H2O2),

Hidroxilo (OH), Ác. hipocloroso (HOCl),
Hidroperoxilo (HO2), Ozono (O3),
Especies Reactivas
Peroxilo (R2), Singlete de oxígeno (ROOH),
de Oxigeno (ROS)
Alcoxilo (RO), Peróxidos orgánicos (ROOH),
Carbonato (CO3), Peroxinitrito (ONOO-)
Dióxido de carbono (CO2) Ác. Peroxinitroso (ONOOH)
Ác. nitroso (HNO2),

Catión nitrosilo (NO+)
Anion nitrosilo (NO-),
Tetraóxido de dinitrógeno (N2O4),
Especies Reactivas Óxido nitroso (NO), Trióxido de dinitrógeno (N2O3),
de Nitrógeno (RNS) Dióxido de nitrógeno (NO2) Peroxinitrito (ONOO-),
Ác. Peroxinitroso (ONOOH),
Catión nitrilo (NO2+),
Peroxinitrito de alquilo (ROONO),
Cloruro de nitrilo (NO2Cl)
Ác. hipocloroso (HOCl),

Especies Reactivas Cloruro de nitrilo (NO2Cl ),
Cloro atómico (Cl)
de Cloro (RClS) Cloraminas,
Gas de cloro (Cl2)
Especies Reactivas
Bromo atómico (Br) Ác. hipobromoso (HOBr)
de Bromo (RBrS)
8
Los radicales libres pueden generarse a partir de fuentes endógenas,
relacionadas con el metabolismo del oxígeno y con las diversas reacciones de
defensa de nuestro sistema inmunitario, o de fuentes exógenas, como el tabaco,
la contaminación del aire, la radiación UV, etc.31
Se pueden distinguir 4 fuentes endógenas que originan la mayoría de agentes

oxidantes producidos por las células, las cuales son:
a. La respiración mitocondrial, el cual es el principal proceso biológico que

además lleva a la generación de anión superóxido en la cadena de transporte
de electrones a nivel mitocondrial (respiración celular). Normalmente, la
reducción de oxígeno a agua en la cadena respiratoria requiere la
transferencia secuencial de electrones, y generalmente esto se acompaña por
la formación de radicales libres. Cuando la concentración de ADP es baja
los intermediarios de la cadena respiratoria están en estado reducido, y en
esa situación hay una gran producción de anión superóxido.18
b. Las células fagocíticas, leucocitos, neutrófilos, macrófagos y eosinófilos,

los cuales al activarse por medio de mediadores proinflamatorios
(prostaglandinas, óxido nítrico) o de productos bacterianos, destruyen las
células infectadas por medio de un ataque oxidativo en el que se producen
grandes cantidades de O2-, H2O2, OH, NO, OCl-. Las infecciones crónicas
llevan a una actividad fagocítica continua que provoca una inflamación
crónica siendo este el principal factor de riesgo del cáncer. 27,3
c. Los peroxisomas, los cuales son los encargados de la degradación de ácidos

grasos y otras moléculas, producen H2O2 como subproducto que es
degradado de forma natural por la enzima catalasa. Bajo ciertas condiciones,
alguno de los peróxidos escapa a la degradación y se libera a otros
compartimentos celulares provocando un incremento del daño por oxidación
en el ADN.44
d. Las enzimas del complejo Citocromo P450, las cuales son las principales
responsables del metabolismo oxidativo de los xenobióticos, producen
subproductos oxidantes que pueden dañar el ADN. 101
Como fuentes exógenas de producción de radicales libres tenemos:
a. Los óxidos de nitrógeno del humo del tabaco. 18
b. Las sales de hierro y cobre, los cuales promueven la generación de radicales

oxidantes a partir de peróxidos. 18
9
c. La irradiación con radiaciones electromagnéticas y particularmente la
radiación ionizante, la cual daña los tejidos causando fisión del enlace del
agua produciendo así átomos de hidrogeno, electrones hidratados y radicales
hidroxilo.16
d. Los alimentos que ingerimos a través de la dieta, especialmente los de

origen vegetal, que se oxidan en mayor o menor grado generando diferentes
tipos de oxidantes como peróxidos, aldehídos, ácidos grasos oxidados y
metales de transición. 4
El daño celular por los radicales libres se da en diferentes macromoléculas,

como son:
a. Lípidos: Los ácidos grasos poliinsaturados presentes en la membrana

celular, son una de las principales dianas de los procesos de oxidación
inducidos por radicales libres. El daño a los lípidos consta de tres etapas:
iniciación, propagación y terminación. Iniciación, en donde el ácido graso
diana pierde un átomo de hidrógeno convirtiéndose así en un radical
lipídico. Propagación, en el que este nuevo radical se reorganiza
molecularmente para incrementar su estabilidad y reaccionar con el oxígeno
dando lugar a un hidroperóxido lipídico y un nuevo radical lipídico, esto
conocido como peroxidación lipídica (LPO). Terminación, etapa en la que
pueden suceder tres cosas: se consume una de las moléculas reactivas ( los
ácidos grasos o el oxígeno ), se forma un radical relativamente poco reactivo
o se forma un par no radical por la reacción de dos radicales.86
b. Proteínas: Las proteínas pueden ser dañadas directa o indirectamente por el

contacto con los diversos radicales libres, principalmente ·OH, RO· y RNS.
El radical hidroxilo es muy reactivo con las proteínas y causa
particularmente modificaciones en la tirosina, fenilalanina, triptófano,
histidina, metionina y cisteína. Forma entrecruzamientos de tipo covalente e
induce la fragmentación de la cadena polipeptídica, lo que se traduce en una
pérdida de la función o en una mayor susceptibilidad a las enzimas
proteolíticas. Las proteínas oxidadas son fácilmente degradadas por enzimas
proteolíticas debido a la formación de grupos carbonilo, a la creación de
nuevos grupos N-terminales o a cambios conformacionales de la molécula.72
c. Ácido desoxirribonucleico (DNA): El daño provocado a nivel del ADN

por los radicales libres puede generar mutaciones somáticas provocando la
síntesis de proteínas defectuosas, y consecuentemente transformaciones
malignas. El daño provocado a nivel de DNA es causado mayormente por
los radicales hidroxilo (-OH) los cuales pueden llegar a oxidar a la
10
desoxirribosa e inducir el rompimiento del enlace entre este azúcar y el
grupo fosfato del siguiente nucleótido. Esto puede provocar rompimientos
de cadena sencilla los que pueden ser reparados por medio de las enzimas
correspondientes, pero que cuando una gran cantidad de radicales hidroxilo
atacan una parte restringida de la molécula de ADN, se forman numerosos
rompimientos de cadena sencilla, y con ello rompimientos de cadena doble
causando daño permanente al material genético. 95
1.2.2 ESTRÉS OXIDATIVO
Este estrés oxidativo puede darse tanto por un exceso de producción de

radicales libres (RL) y especies reactivas de oxígeno (ROS), así como por un
problema o alteración en el sistema de defensa antioxidante. En términos
químicos, el estrés oxidativo es un gran aumento en la reducción del potencial
celular o una gran disminución en la capacidad reductora de los pares redox
celulares como el glutatión.47
El estrés oxidativo en condiciones severas puede causar la muerte celular, en

condiciones moderadas desencadenar la apoptosis y en condiciones intensa
puede provocar la necrosis. Todas las formas de vida mantienen un entorno
reductor dentro de sus células, preservado por enzimas a través de un
constante aporte de energía metabólica, sin embargo desbalances en este
estado normal redox pueden causar efectos tóxicos a través de la producción
de peróxidos y radicales libres dañando los componentes de la célula,
incluyendo las proteínas, los lípidos y el ADN. 47
El estrés oxidativo puede generarse por 2 motivos: 35
a. La disminución de antioxidantes que puede ser ocasionada por la

malnutrición (ingesta dietética insuficiente de alfa-tocoferol, ácido
ascórbico o aminoácidos azufrados necesarios para la generación de
glutation.)
b. La producción excesiva de especies reactivas de oxigeno causadas por:

radiación, exposición a altas concentraciones de oxigeno, elevada
concentración de contaminantes o una excesiva activación de los sistemas
naturales productores de radicales (enfermedades crónicas inflamatorias
como artritis reumatoide o situaciones agudas en las que se desencadena una
respuesta inflamatoria sistémica como es la enfermedad grave).
El daño que produce el estrés oxidativo habitualmente se relaciona con el

proceso de envejecimiento (asociado a la acumulación de componentes celulares
11
oxidados como ácidos nucleicos, proteínas y lípidos). Son numerosas las
patologías que han sido asociadas con este desbalance entre oxidantes y
antioxidantes; la ateroesclerosis, el cáncer, la enfermedad de Alzheimer, la
diabetes mellitas, enfermedades autoinmunes, inflamatorias crónicas,
situaciones de injuria por isquemia y repercusión en los tejidos, el síndrome de
distrés respiratorio, etc. La cuantificación o valoración del estrés oxidativo al
que está sometida la población parece ser un posible indicador del peligro que
suponen ciertos factores de riesgo del ambiente.57
Existen otros factores que desencadenan el estrés oxidativo los cuales se debe
tener en cuenta, como el tipo de vida y la dieta los cuales pueden llegar a actuar
como prooxidantes. Como ejemplo tenemos el tabaco inhalado, cuyo exceso
puede incrementar un estrés oxidativo debido a la inflamación pulmonar causada
por el mismo. En cuanto a los factores alimenticios se conoce que las dietas
ricas en grasas pueden contribuir a un estrés oxidativo debido al incremento de
peroxidación lipídica. Las carnes rojas ricas en grasas se cree que intensifican el
estrés oxidativo a través de la ingesta del hierro heme, molécula que contiene
hierro y que es capaz de hacer ciclos redox en los que un solo electrón puede ser
aceptado o donado por el metal, esta acción cataliza reacciones que producen
radicales hidroxilo y especies reactivas del oxígeno.59
1.3. ANTIOXIDANTES
Los antioxidantes son un conjunto de compuestos químicos o productos biológicos

que contrarrestan de una manera directa o indirecta los efectos nocivos de los
radicales libres u oxidantes, tales como oxidación a lípidos, proteínas y ácidos
nucleicos.100 Son cualquier sustancia que cuando está presente a bajas
concentraciones respecto a las de un sustrato oxidable, retrasa o previene
significativamente la oxidación de este último.37
El antioxidante al reaccionar con el radical libre le cede un electrón oxidándose a su

vez y transformándose en un radical libre débil con escasos o nulos efectos tóxicos y
que en algunos casos, como la vitamina E, puede regenerarse a su forma primitiva
por la acción de otros antioxidantes (Ver Figura Nº 3). Los antioxidantes pueden
producirse en las células (antioxidante endógeno) y también pueden ser
suministrados externamente a través de los alimentos o suplementos, (antioxidantes
exógenos). 24
12
FIGURA Nº 3.: Neutralización del radical libre por un antioxidante.
Extraído de: http://blog.hsnstore.com/que-son-antioxidantes/
1.3.1 CLASIFICACIÓN DE ANTIOXIDANTES:
Los antioxidantes pueden ser de dos tipos:
a. Los Antioxidantes endógenos son las enzimas (proteínas) con capacidad

antioxidante que no se consumen al reaccionar con los radicales libres y son
dependientes de sus cofactores tales como el cobre, el hierro, el zinc,
el magnesio y selenio.
b. Los Antioxidantes exógenos son las moléculas que provienen de la dieta, y

se consumen al reaccionar con los radicales libres, por lo que deben ser
reemplazados regularmente.
Estos se clasifican, según su naturaleza, en dos grupos: antioxidantes

enzimáticos y no enzimáticos (Ver Tabla Nº 4).
a. Antioxidantes Enzimáticos: Los antioxidantes enzimáticos incluyen

enzimas capaces de eliminar o neutralizar especies reactivas de oxigeno,
especies reactivas de nitrógeno o sus intermediarios. En esta categoría se
encuentran: superóxido dismutasas, glutatión peroxidasa, catalasa,
tiorredoxinareductosa y glutatión reductasa. 58
b. Antioxidantes no Enzimáticos: Permiten la inhibición de la formación de
especies reactivas de oxigeno (ERO) y especies reactivas de nitrógeno
(ERN), la inhibición de la unión de iones metálicos necesarios para la
formación de ERO y la regulación de la actividad antioxidante llevándose a
cabo a través de múltiples cascadas. 58 Algunos ejemplos de estos
13
antioxidantes, son: las vitaminas E y C, los betacarotenos, los flavonoides y
los licopenos, fitoestrógenos polifenoles, ácido úrico, ubiquinol (Co-enzima
Q) y la melatonina. También tenemos como antioxidantes no enzimáticos
endógenos a: proteínas intraplasmaticas (lactoferrina, ferritina), proteínas
plasmáticas (transferrina, ceruloplasmina, albumina), complejos
organimetálicos (quelantes de hierro y cobre) y péptidos de bajo peso
molecular (glutation).
TABLA Nº 4.: Antioxidantes Enzimáticos y no Enzimáticos. Extraído de Powers

S., et all, 1999.
Antioxidantes
Ubicación Celular Propiedades
Enzimáticos
ENDÓGENOS
Mn Superóxido Dismuta radicales

Mitocondria
dismutasa peróxido
Cu-Zn Superóxido Dismuta radicales
Citosol
dismutasa Superóxido
Glutation (GHS) Remueve H2O2 y
Citosol y Mitocondria
peroxidasa hidroperóxidos orgánicos.
Catalasa Citosol y Mitocondria Remueve H2O2
Antioxidantes no
Enzimáticos
Compuesto fenólicos solubles Principal antioxidante que
Vitamina E en lípidos; localizada en disrumpe la cadena de
membranas. peroxidación lipídica.
Neutraliza una amplia
Vitamina C (ácido Soluble en agua; localizada en variedad de ROS en fase
EXÓGENOS
ascórbico) Citosol. acuosa; regenera la

vitamina E.
Tiol endógeno; localizado Interviene en el reciclado
Ácido lipoico tanto en la fase acuosa como de vitamina C; puede ser
en la lipídica buen sustituto de GSH
Derivados de quinona soluble
Las formas reducidas son
Ubiquinonas en lípidos; localizadas en
antioxidantes eficientes
membrana.
Soluble en lípidos; localizados Antioxidantes; reducen la
Carotenoides
principalmente en membranas peroxidación lipídica.
Además de las vitaminas, los oligoelementos como el cobre, el zinc, el

manganeso, el selenio y el hierro son necesarios incorporarlos al organismo
a través de la dieta, porque conforman la parte activa del núcleo de las
enzimas antioxidantes.11
14
1.3.2 ANTIOXIDANTES NATURALES – ALIMENTOS FUNCIONALES
Se considera que un alimento puede ser funcional si se ha demostrado de manera

satisfactoria que posee un efecto beneficioso sobre una o varias funciones
específicas en el organismo, más allá de los efectos nutricionales habituales,
siendo esto relevante para la mejoría de la salud y el bienestar y/o reducción del
riesgo de adquirir enfermedades. De acuerdo con esto, se puede decir que los
alimentos funcionales (Functional food) son aquellos que contienen
componentes biológicamente activos que ejercen efectos beneficiosos en una o
varias funciones del organismo y que se traducen en una mejoría de la salud o en
una disminución del riesgo de sufrir enfermedades. 94
Los principales aspectos de la definición operativa de los alimentos funcionales

son: 10
• La naturaleza alimentaria del alimento funcional se basa en que no es un

comprimido, ni una cápsula, ni ninguna otra forma de suplemento
alimenticio.
• La demostración de sus efectos debe satisfacer las exigencias de la
comunidad científica.
• Debe producir efectos beneficiosos sobre las funciones orgánicas,
apropiados para mejorar la salud y el bienestar reduciendo el riesgo de
enfermedad.
• Deben consumirse como parte de un régimen normal.
La vitamina C y otros componentes que aporta el Sancayo, como el potasio,

calcio, y demás minerales lo convierten en un alimento ideal para favorecer el
metabolismo energético volviéndolo en un alimento funcional recomendable
para el consumo humano. 10
1.3.3 DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Los métodos para la determinación de la actividad antioxidante se basan en

comprobar cómo un agente oxidante induce daño oxidativo a un sustrato
oxidable, daño que es inducido o reducido en presencia de un antioxidante. La
inhibición es proporcional a la actividad antioxidante del compuesto o la
muestra, sin embargo hay otros ensayos que se basan en la cuantificación de los
productos formados tras el proceso oxidativo.6 Además de los antioxidantes
dietéticos comunes (vitaminas C y E), los compuestos fenólicos son
considerados como potentes antioxidantes en los sistemas biológicos in vitro. 32
15
La actividad antioxidante no puede ser medida directamente, pero puede
determinarse por los efectos del compuesto antioxidante en un proceso de
oxidación controlado. En la medición de una muestra oxidante, pueden usarse
intermediarios o productos finales para valorar al antioxidante. En la práctica se
realizan muchos modelos de test in vitro (Ver Tabla Nº 5) para evaluar la
actividad antioxidante de la muestra de interés.
TABLA Nº 5.: Clasificación de los modelos de ensayo in vitro según su modo de

reacción SET o HAT. Extraído de Huang D., et all, 2005.
ENSAYO CATEGORIA
Ácido 2,2′-azino-bis-3-etilbenzotiazolin-6-sulfonico (ABTS●+)
2,2-difenil-1-picril-hidrazilo (DPPH●) Ensayos basados en
Poder de reducción antioxidante del hierro (FRAP) la transferencia de un solo
N,N- dimetil-p-fenilendiamina (DMPD) electrón (SET)
Capacidad de reducción antioxidante del cobre (CUPRAC)
Capacidad de absorción del radical oxígeno (ORAC) Ensayos basados en
Parámetro antioxidante de captura de radicales (TRAP) la transferencia de
Inhibición de la oxidación del ácido linoléico átomos de
Inhibición de la oxidación de los lípido de baja densidad (LDL) hidrógeno (HAT)
Con base a las reacciones químicas, la gran mayoría de los ensayos para
determinar de actividad antioxidante pueden ser divididos en dos categorías: 42
1. Ensayos basados en la reacción por transferencia de átomos de hidrógeno

(HAT). Los HAT aplican un esquema de reacción competitiva en la cual el
antioxidante y el sustrato compiten por un radical peroxilo. Como se
muestra en la Figura Nº 4, el antioxidante (AOX-H) reacciona con un
radical libre (R●) generando una especie no radicalaria (RH), y un nuevo
radical libre (AOX●). Por su parte en la segunda reacción, se muestra como
el antioxidante (AOX●) neutraliza al radical libre (R●) uniéndose a él y
formando un compuesto no reactivo (RA). 29
2. Ensayos basados en la reacción por transferencia de un solo electrón (SET).

Los SET se basan en la medida de la capacidad de un compuesto en reducir
un oxidante, que cambia de color cuando se reduce. Como se aprecia en la
Figura Nº 4, el antioxidante (AOX-H) reduce a un radical libre (R●), y lo
convierte en un oxidante reducido (R-) al donarle un electrón, dejando al
antioxidante en estado oxidado (AOX+).29
16
FIGURA Nº 4.: Mecanismos de reacción por transferencia de un solo electrón y
transferencia de átomos de hidrógeno. Extraído de Huang D., et all, 2005.
Los ensayos basados en HAT y SET fueron desarrollados para medir la

capacidad de atrapar radicales libres, en lugar de la capacidad preventiva
antioxidante de una muestra. En la Figura Nº 4 se muestran las reacciones
específicas para los ensayos basados en la transferencia de electrones y en la
transferencia de átomos de hidrógeno.
a. Ensayos que utilizan el mecanismo SET:
En general estos métodos utilizan radicales libre estables por lo que no es

necesario generarlos en el medio:
• Método ABTS (azinobis 3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfónico): mide la

capacidad de un compuesto de reducir el radical catiónico ABTS●+
evaluando la disminución en la absorbancia a 734 nm. El ABTS tiene que
ser generado tras una reacción que puede ser química (dióxido de
manganeso, persulfato potasio, ABAP), enzimática (peroxidasa,
mioglobulina), o también electroquímica. Es soluble tanto en medio
acuoso como orgánico y permite la evaluación de antioxidantes
hidrofílicos y lipofílicos. 51
• Método del radical DPPH (2,2-difenil-1-picril-hidraziloi): se basa en la

reacción del radical reducido (DPPH●) con un donador de hidrógenos y la
generación de su forma reducida (DPPH). Se cuantifica midiendo la
disminución de absorbancia a 515 nm. Se emplea sobre todo para
determinar la eficacia antiradicalaria de compuestos fenólicos. Es soluble
solamente en medio orgánico.51
• Ensayo CUPRAC (Cupric reducing antioxidant capacity,

Capacidad reductora antioxidante de cobre): se basa en la absorbancia
medida del quelato Cu(I)-neocuproína (Nc) [Cu(Nc)2+] formado como
resultado de la reacción redox de los antioxidantes rompe-cadenas con el
17
agente CUPRAC, Cu(II)-Nc, donde la absorbancia es medida a una
longitud de onda de 450. 7
b. Ensayos que utiliza el mecanismo HAT:
• Ensayo TRAP (total radical-trapping parameter): se desarrolló para medir

el estado antioxidante del plasma humano. Los radicales peroxilo oxidan
antioxidantes del plasma y la oxidación y su inhibición se miden por
absorción de oxigeno. Como antioxidante de referencia se usa el Trolox
(derivado sintético de la Vitamina E). 51
• Ensayo ORAC (oxygen radical absorbance capacity): mide la degradación

oxidativa de una molécula fluorescente, como la fluoresceína, sometida a
un flujo constante de radicales peroxilo generados por el AAPH (2,2 '-
azo-bis (2-amidino-propano) dihidrocloruro). La protección ejercida por
los antioxidantes se cuantifica a través de la fluorescencia. 51
1.4. ÁCIDO ASCÓRBICO
El ácido ascórbico, o también conocida como vitamina C, es un antioxidante

hidrosoluble sensible al calor que es un nutriente esencial requerido para un cierto
número de reacciones metabólicas en todos los animales y plantas y que es
sintetizada internamente por algunos organismos, a excepción de los humanos,
primates, cobayos, peces aves e insectos. Algunos animales la sintetizan a partir de la
glucosa mediante la vía del ácido glucorónico; los que no la pueden sintetizar es
porque carecen de la enzima que cataliza la etapa final de oxidación, lo que estos
deben ingerirla a través de la alimentación.73
Contiene varios elementos estructurales que contribuyen a su comportamiento

químico: la estructura de la lactona y dos grupos hidroxilos enólicos, así como un
grupo alcohol primario y secundario (Ver Figura Nº 5). Es termolábil y se oxida en el
aire con facilidad, además que actúa como cofactor en numerosas enzimas
implicadas en la biosíntesis de colágeno, carnitina y algunos neurotransmisores,
atrapando una gran variedad de especies reactivas del oxigeno y del nitrógeno en
medios acuosos. 73
18
FIGURA Nº 5.: Estructura química del ácido ascórbico. Extraído de Ramírez
T., et all, 2005.
1.4.1 ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DEL ÁCIDO ASCÓRBICO
El ácido ascórbico es un donante de electrones, convirtiéndolo en un potente

antioxidante soluble en agua. Su actividad antioxidante deriva del
desplazamiento de ácido L-ascórbico a su forma oxidada L-dehidroascórbico
(Ver Figura Nº 6) esto también habilita a la molécula para combatir radicales
oxidativos (●O2- y ●OH) y radicales acuosos como el oxigeno singulete.96
FIGURA Nº 6.: Formas moleculares en equilibrio de la vitamina C. Extraído

de Fennema O., 1976.
El ácido ascórbico es el antioxidante más eficaz para evitar la peroxidación

lipídica en cualquier tipo de membrana celular, pero este es muy sensible a la
presencia de hierro disuelto el cual puede degradarlo. El proceso de oxidación de
ácido ascórbico depende de la presencia de metales como el cobre o el hierro
que lo conducen a su degradación. Entre otros factores fisicoquímicos se incluye
la temperatura, la concentración de sales y los azucares. El pH es muy
importante en este caso, además de la presencia de oxigeno, enzimas,
19
catalizadores metálicos, aminoácidos, oxidantes y reductores inorgánicos que
influyen en su degradación. 12
A pesar del importante poder antioxidante de la vitamina C, a determinadas

dosis y en determinadas situaciones fisiológicas se ha encontrado un efecto
prooxidante. Dicha capacidad prooxidante se debe a la potente acción reductora
que presenta, capaz de reducir Fe3+ y Cu2+ a Fe2+ y Cu+, respectivamente. Estos
metales reducidos pueden generar, en presencia de oxigeno, un gran estrés
oxidativo. Es importante que se requiere de bajas concentraciones de ascorbato
(ácido ascórbico sin un hidrogeno) para actuar como prooxidante si la
concentración de metales en el medio es alta. 73
1.4.2 BENEFICIOS DEL ÁCIDO ASCÓRBICO
Es ácido ascórbico posee muchas propiedades benéficas tanto a celular, como a

nivel industrial, entre ellas podemos mencionar: 73
• Esencial para la formación de huesos, dientes y reforzamiento de paredes

capilares.
• Útil para inhibir la inflamación de las encías, anemia, deficiencia en la
cicatrización de heridas y susceptibilidad a las infecciones.
• Importante en el metabolismo de carbohidratos y en controlar procesos
infecciosos.
• Aumenta la absorción de hierro, porque lo convierte a una forma
absorbible para el cuerpo.
• Afecta al sistema inmune, haciendo los tejidos menos permeables a
bacterias u otras sustancias tóxicas. Ayuda a los leucocitos en su
funcionamiento.
• Regenerador de la vitamina E.
• Suele ser usado como aditivo antioxidante de los alimentos.
• Utilizado, junto con sus derivados, en productos cárnicos, conservas
vegetales, bebidas refrescantes, productos de repostería y en la
producción de cerveza. Este contribuye a evitar el oscurecimiento de la
futa cortada en trozos y la corrosión de los envases metálicos.
• En la fabricación de plásticos, para ensamblar cadenas moleculares más
rápidamente y con menos residuos que con los métodos de síntesis
tradicionales.
20
1.5. COMPUESTOS FENÓLICOS
Los compuestos fenólicos son sustancias orgánicas ampliamente distribuidas en el

reino vegetal. Se sintetizan como metabolitos secundarios con funciones de defensa y
son en gran medida responsables de las propiedades del color, la astringencia y el
flavor (sabor y aroma) de los vegetales. Se encuentran en las verduras y frutas. Su
estructura química es propicia para secuestrar radicales libres.10
Los fenoles son un grupo de compuestos orgánicos que presentan en su estructura un

grupo funcional hidroxilo unido a un radical arilo. Por lo tanto, la fórmula general
para un fenol se escribe como Ar – OH. Los fenoles se nombran, generalmente,
como derivados del miembro más sencillo de la familia que es el fenol o
hidroxibenceno. 10
Las características generales de los compuestos fenólicos son: 10

• Contienen un anillo aromático con un grupo -OH (fenol).
• Suelen ser ácidos, solubles en agua, y pueden formar puentes de hidrogeno.
• Pueden establecer interacciones con un grupo peptídico (taninos).
• Los fenoles con grupo catecol pueden quelar metales.
• Son muy susceptibles a oxidación (antioxidantes).
• La mayoría son derivados fenilpropanoides.
• Un grupo numeroso e importante entre ellos son los flavonoides.
• Sus estructuras pueden ser monoméricas, diméricas (lignanos) y poliméricas
(lignina y taninos).
1.5.1 CLASIFICACIÓN DE LOS COMPUESTOS FENÓLICOS
Los compuestos fenólicos comprenden una amplia variedad de moléculas que

tienen una estructura polifenol (es decir, varios grupos hidroxilo en el anillo
aromático), también moléculas con fenol en el anillo tales como ácidos
fenólicos. 77
Los polifenoles se dividen en varias clases de acuerdo a su diversidad estructural

(Ver Figura Nº 7). Según su estructura química tenemos 2 grandes grupos: 77
a. No Flavonoides
Entre ellos hay dos subgrupos: 77
• Fenoles no carboxílicos: C6, C6-C1, C6-C3.
• Ácidos fenoles: derivados del ácido benzoico C6-C1 y derivados del
ácido cinámico C6-C3.
21
b. Flavonoides
Formados por 2 grupos bencénicos unidos por un puente tricarbonado.
Subgrupos: 77
• Antocianos.
• Flaconas, flavononas, flavanoles y flavanonoles.
• Taninos condensados y lignanos.
FIGURA Nº 7.: Estructura de algunos compuestos fenólicos. Extraído de

http://www.jano.es/farma/ctl_servlet?_f=37&id=13063508
1.5.2 FUNCIONES DE LOS COMPUESTOS FENOLICOS
Desde el punto de vista de su actividad biológica muchos polifenoles tienen

propiedades captadoras de radicales libres, lo que les confiere actividad
antioxidante, que podría estar relacionada con la prevención de enfermedades
cardiovasculares y de algunos tipos de cáncer. 91
Los flavonoides, uno de los grupos pertenecientes a los compuestos fenólicos,

además de poseer una gran actividad antioxidante, presentan otras propiedades
a nivel celular que incluyen: la estimulación de la comunicación intercelular a
través de las uniones en hendidura, el impacto sobre la regulación del
crecimiento celular y la inducción de enzimas de destoxificación. 53
Existen también sustancias con actividad estrogénica (fitoestrógenos), como las

isoflavonas, los lignanos y el estilbeno resveratrol, mientras que otros, como los
22
taninos, son capaces de fijar metales y proteínas, lo que afecta a la
biodisponibilidad de éstos y puede estar en el origen de algunos efectos
inespecíficos (por ejemplo, antimicrobianos), o prevención de enfermedades
neurodegenerativas. 90
Muchos compuestos fenólicos son en parte responsables de las propiedades

organolépticas de los alimentos de origen vegetal y por tanto tienen importancia
en la calidad de los mismos. Así, entre éstos hay pigmentos como las
antocianinas, responsables de los tonos rojos, azules y violáceos característicos
de muchas frutas (fresas, ciruelas, uvas, etc.), hortalizas (berenjena, lombarda,
rábano, etc.) y del vino tinto, o los flavonoles, de tonalidad crema-amarillenta,
que están presentes principalmente en las partes externas de frutas y hortalizas
(3). Hay polifenoles que tienen sabor amargo, como determinadas flavanonas de
los cítricos (naringina de los pomelos, neohesperidina de las naranjas amargas) o
la oleuropeína presente en aceitunas. Las proantocianidinas (taninos
condensados) y los taninos hidrolizables confieren astringencia a los frutos y
algunos fenoles sencillos tienen importancia en el aroma de determinadas frutas
como el eugenol en los plátanos.91
Las principales funciones de los compuestos fenólicos se centra en los beneficios

que posee a nivel del área de la salud, otorgándole así sus propiedades
antioxidantes, antiinflamatorias, antimicrobianas, antitrombóticas, antialérgicas,
antitumorales, anticancerígenas y principalmente su función en el sistema
nervioso, pues se ha visto una relación de protección en enfermedades
neurodegenerativas. 26
1.5.3 ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE COMPUESTOS FENOLICOS
Además de los antioxidantes dietéticos comunes (vitaminas C y E), los

compuestos fenólicos son considerados como potentes antioxidantes en los
sistemas biológicos in vitro. La actividad antioxidante de los flavonoides es
mucho más fuertes que la de las vitaminas C y E. Los efectos protectores se han
atribuido a su capacidad de transferir electrones a los radicales libres, la
quelación de catalizadores metálicos, activar enzimas antioxidantes, inhibir
oxidasas, reducir los radicales de la α-tocoferol, mitigar el estrés oxidativo
causado por el óxido nítrico y aumentar los niveles de ácido úrico.
1.5.3.1 MECANISMO DE ACCION
Los polifenoles tienen la característica de ser fuertes antioxidantes por

mecanismo de captación de radicales libres, que puede neutralizar los radicales
libres donando átomos de hidrógeno y formando productos más estables ó
23
también a través de la quelación de metales de transición, reduciendo o
inhibiendo la formación de radicales libres.
a. Como captadores de radicales libres:

Cuando estos antioxidantes, por ejemplo flavonoides (FI-OH), están presentes
en cantidades traza, pueden retardar o inhibir el paso de iniciación al reaccionar
con un radical y como consecuencia reducir los radicales (R•) a un no-producto
radical (RH), convirtiéndose ellos mismo en un radical oxidado (FI-O•). 32
El radical formado debe tener baja reactividad y, por tanto, ser incapaz de
reaccionar con los componentes biológicos. De esta manera, los radicales libres
formados a partir del antioxidante (FI-O•) se puede conectar a otros radicales
más reactivos (R•), adquiriendo una estructura quinona estable, es decir, un
complejo estable no radical, FI-quinona, deteniendo así las reacciones en
cadena. Con más frecuencia actúan como atrapadores de radicales directos de
las reacciones en cadena de la peroxidación lipídica. 32
b. Como quelantes de metales:

Los polifenoles son conocidos como quelantes de metales. Los polifenoles
pueden actuar por un mecanismo secundario (prevención), al disminuir la
velocidad de oxidación de la etapa de iniciación. La quelación de metales de
transición tales como Fe2+ directamente puede reducir o inhibir las formaciones
de radicales libres a través de la reacción de Fenton, evitando su efecto
catalizador en la formación de EROs, así como la oxidación causada por
radicales hidroxilo altamente reactivos. 32
Se ha encontrado que los polifenoles en realidad pueden funcionar como un co-

antioxidante (sinergista), y estar implicados en la regeneración de las vitaminas
esenciales. Como un ejemplo, ácido cafeico y p-cumárico puede regenerar la
vitamina E mediante la reducción de los radicales α – tocoferilo. 32
La actividad antioxidante de los polifenoles está relacionada con su estructura

y una serie de importantes factores determinantes. En el caso de los ácidos
fenólicos la actividad antioxidante depende de los números y las posiciones de
los grupos hidroxilo en relación con el grupo carboxilo funcional.32
1.6. GENOTOXICIDAD
La genotoxicidad es descrita como la capacidad que tienen los agentes físicos o

químicos para dañar la información genética dentro de una célula, causando
mutaciones que pueden conducir al cáncer. La alteración puede tener efectos
24
directos, como al ADN provocando mutaciones, o indirectos, como la inducción de
mutaciones por activación de eventos a destiempo sobre el ADN. Los cambios
permanentes y hereditarios pueden afectar tanto a las células somáticas de las células
del organismo o germen, que se pasarán a las generaciones futuras. 34
La genotoxicidad es el resultado nocivo de la interacción de agentes químicos o

físicos con el aparato hereditario de la célula, y se manifiesta como alteraciones
genéticas y/o cambios en el número o estructura de los cromosomas causando
mutaciones. 17 La determinación genotóxica ya sea en agua, aire, alimentos,
contaminantes y compuestos naturales con fines terapéuticos, resultan una
herramienta útil para la identificación de riesgos a la salud humana y poder
desarrollar medidas de prevención y control. Las mutaciones que alteran la expresión
génica se consideran como un rasgo común de todos los cánceres por lo que los
estudios de genotoxicidad son de importancia. 22
Existen una gran variedad de bioensayos útiles para evaluar la genotoxicidad, entre
ellos se encuentra la electroforesis unicelular en gel, llamado comúnmente ensayo
cometa, el cual es un método microscópico rápido y sensible que permite examinar el
daño al ADN en células de forma individual. 39
1.7. LINFOCITOS DE SANGRE PERIFÉRICA
La utilización de muestras de sangre ha sido una herramienta muy eficaz en la

evaluación de la genotoxicidad de un sin número de agentes, empleando
principalmente linfocitos aislados, tanto frescos como congelados. Al estar estos en
circulación, se puede considerar que su estado celular, nuclear y metabólico
(incluyendo su DNA) refleja la exposición global del organismo. Los linfocitos
aislados, son considerados muy sensibles para el análisis del potencial genotóxico de
un agente y son por ello, utilizados en sistemas in vitro.25
Los linfocitos son parte de la línea linfoide del sistema inmune y se encuentran
principalmente en los órganos linfoides y, en menor cantidad (aproximadamente el
3%) se encuentra circulando por el torrente sanguíneo a través del cual llegan a todos
los órganos y tejidos del organismo. 103
Los linfocitos son células mononucleares las cuales se originan en la medula ósea o
el timo, los ganglios linfáticos, o el bazo. En todo momento alrededor del 70% de los
linfocitos transportados por la sangre son recirculantes, es decir, viajan hacia los
órganos linfoides o desde ellos; mientras que, el 30% restante esta constituidos por
linfocitos T inmaduros de vida corta que permanecen en el espacio intravascular o se
25
eliminan. La dotación de linfocitos circulantes está conformada por linfocitos T (60
al 70 %), linfocitos B (10 al 20 %) y el resto de linfocitos NK y nulos (null).97
En particular, los linfocitos de sangre periférica representan un sistema muy

favorable para realizar estudios de genotoxicidad, siendo sus principales ventajas las
siguientes: 103
• Son fáciles de obtener

• Son circulantes y están en contacto con las genotoxinas
• Constituyen una población celular sincrónica.
• Se encuentran en fase G0 por lo que no se dividen y la taza de reparación es
baja.
• Presentan un ciclo celular corto y bien establecido.
• Poseen un cariotipo estable y bien caracterizado.
• Se dispone de mucha información sobre los mismos, ya que son
biomarcadores muy utilizados desde hace varias décadas.
• Se dispone de técnicas estandarizadas y económicas para su manejo.
• Son un sistema sensible para la evaluación de una gran variedad de daño
genético a través de numerosas técnicas.
Sin embargo, también existen algunas desventajas, tales como: 103
• Presenta una capacidad metabólica limitada.

• Al no ser una población homogénea, la subpoblaciones de linfocitos no solo
difieren en sus funciones, sus características físicas, tamaño y permeabilidad
de membrana; sino también, en la sensibilidad frente a los determinados
agentes, tanto físicos como químicos.
• El establecimiento de cultivos supone la necesidad de ir obteniendo nuevas
muestras de sangre.
1.8. ENSAYO COMETA
El fundamento del ensayo cometa se basa en la detección de daños al ADN

producidos por un rompimiento simple o doble en la cadena, daño oxidativo inducido
y entrecruzamiento de ADN-ADN/ADN-proteína, por la fragilidad que poseen los
sitios dañados al ser sometidos a un pH superior a trece y su comportamiento en una
electroforesis. 39
Los fragmentos de ADN, producto de la acción de la sustancia a probar y afectados

por el pH alcalino, durante la electroforesis migran fuera del núcleo celular hacia el
26
ánodo y forman una cauda o cola que al ser observada con el microscopio de
Fluorescencia o con un microscopio de campo claro, tiene la apariencia de un
cometa. 39
Entre más larga sea esta porción de la cola, mayor será el daño ocasionado al ADN.
La magnitud del daño es evaluada de acuerdo al número de células afectadas y a la
longitud de la cola. 39
1.8.1 METODOLOGÍA Y CONSIDERACIONES TECNICAS
En la actualidad se están realizando numerosas versiones del ensayo cometa,

tomando mayormente en cuenta la versión alcalina (pH ≥ 13) debido a que es
superior en cuanto al espectro de lesiones que reconoce del ADN y en su mayor
sensibilidad para la detección de bajos niveles de daño, en comparación a la
neutra (pH = 9,5) o la medianamente alcalina (pH =12,3). 103
Después de la obtención de las células de interés, los pasos básicos en el ensayo

cometa incluyen la preparación de los portaobjetos pre cubiertos con las células
a evaluar embebidas en agarosa, la lisis de las membranas para liberar el DNA,
la electroforesis, la neutralización de la alcalinidad, la tinción y la visualización.
a. Preparación de los portaobjetos
Para la preparación de las capas de agarosa, se debe asegurar un soporte estable

para la manipulación de las células a evaluar durante todo el proceso.
Generalmente se preparan las capas de agarosa en forma de sándwich, en cuya
capa central se encuentra las células. (Ver Figura Nº 8). Las células suspendidas
en agarosa de bajo punto de fusión. (LMP), generalmente se preparan a 37 ºC y
se depositan sobre un primera capa de agarosa de punto de fusión normal (NMP)
que cubre el portaobjeto. 103
La primera capa es para asegurar una buena adherencia de la capa celular al

portaobjeto. Se observó además una notable mejoría en la preparación de los
portaobjetos al deshidratar la primera capa de agarosa y ser incubada entre 40 y
50 ºC. 82 La concentración de esta varía desde 0,75 y 1% hasta el 1,5 %. 60,1,76
La segunda capa contiene a las células que serán analizadas, para ello se
necesitan cerca de 10´000 y 50´000 células suspendidas en medio PBS o medio
de cultivo, las cuales son mezcladas con agarosa LMP, preparada previamente a
una concentración entre 0,5 y 1% en una proporción de 1:10
aproximadamente.103
27
La tercera capa cumple solo un papel protector, por lo cual muchos laboratorios
deciden prescindir de ella, ya que además que los resultados no se ven afectados,
la ausencia de la capa puede facilitar la neutralización del tratamiento alcalino.49
FIGURA Nº 8. Esquema típico de un portaobjetos con las capas de agarosa

dispuestas tipo sándwich. Extraído de Zúñiga V., 2009.
b. Lisis Celular
Se utilizan soluciones de lisis neutra y alcalina para la detección de roturas de

cadena doble (DSB) y roturas de cadena simple (SSB), respectivamente. La
selección del pH de la solución dependerá de los objetivos de estudio. La lisis
alcalina es mucho más utilizada en comparación de la lisis neutra, ya que la
anterior detecta un amplia gama de daños que son más comúnmente producidos
por los agentes genotóxicos; consiste en someter las células ya embebidas en
una solución con una alta concentración de sales y detergentes a un pH entre 10
y ˃12 durante al menos 1 hora, como mínimo y no mayor a 24 horas. La
solución de lisis debe estar refrigerada antes de su uso para lograr una máxima
estabilidad de los geles de agarosa. 39,60
c. Desnaturalización y Electroforesis
Antes de la electroforesis, las preparaciones son incubadas durante un tiempo en

la solución electroforesis alcalina (pH ˃ 13, baja concentración de sales y sin
detergentes), con lo que se consigue la separación de la doble cadena de DNA y
con esto, la producción de SSB y la expresión de sitios álcali-lábiles (ALS)
como SSB y SSB transitorias relativas al proceso de reparación. La solución de
28
electroforesis de acuerdo con Singh et al (1988) consiste en 1 mM de EDTA y
300 mM de hidróxido de sodio a un pH = 13,0. 84
La electroforesis en el ensayo cometa es diferente de una electroforesis

convencional, ya que el DNA necesita migrar solo una fracción de milímetros
para obtener una significativa movilización del DNA, y con ello la formación de
cometas. Esto se consigue con un tiempo de electroforesis de 30 min aprox. y
unas condiciones, según Singh, de 25 V y 300 mA.84
d. Neutralización
Después de la electroforesis se neutraliza la alcalinidad de las preparaciones

mediante lavados con un tampón a pH de 7,5. Comúnmente esta solución está
compuesta de Tris, pero además puede usarse en su lugar PBS 1X disuelto en
agua bidestilada, conservando el mismo pH neutro. 103
Luego de la neutralización, las preparaciones pueden ser teñidas para poder

visualizar los cometas. Alternativamente los geles pueden ser deshidratados al
ser sumergidos dos veces en etanol absoluto por 5 minutos cada vez y así las
preparaciones pueden ser almacenadas y evaluadas cuando se estime
conveniente. 84
e. Tinción
Las tinciones utilizadas para ensayo cometa son muchas, entre ellas podemos
mencionar al bromuro de etidio (EB), 4,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) y
yoduro de propidio (PI), las cuales son probablemente las más utilizadas, Otros
autores han presentado alternativas de tinción tales como YOYO-1, SybrGold, y
SybrGreen, así como de técnicas no fluorescentes para la visualización de los
cometas, basados en Nitrato de Plata. 103
1.8.2 EVALUACION
La evaluación del ensayo cometa, cuenta con una gran variedad de métodos para
la evaluación y cuantificación de los patrones de formación de los cometas. Una
aproximación de la evaluación de daño que ha marcado el desarrollo de los
parámetros en el ensayo cometa, fue descrita por Olive et al. (1999), quienes
utilizaron el concepto de momento de cola para describir la migración del DNA,
conocida hoy como momento de cola Olive. (OTM). Este parámetro se
considera útil para describir la heterogeneidad de la respuesta dentro de una
población celular, ya que su cálculo considera las variaciones de la distribución
del DNA dentro de la cola. 63
29
Otro sistema de evaluación más simple, fue el desarrollado por Collins et al.
(1995), los cual se basan en la clasificación visual de los cometas. Este método
resulta útil, en los laboratorios que no cuentan con experiencia previa en el
ensayo del cometa ya que no requiere, necesariamente, de sistemas o programas
sofisticados. El método consiste en clasificar el nivel de daño en 5 categorías
que van de 0 (DNA sin migración) a 4 (casi todo el DNA en la cola), mostrando
una muy buena resolución. (Ver Figura Nº 9). Una vez realizado el conteo, y su
posterior clasificación entre un rango entre 0 y 4, se hallará el conteo total de la
muestra (TCS) el cual estará expresado en unidades arbitrarias (UA) entre un
valor de 0 y 400.21
FIGURA Nº 9.: Clasificación visual por análisis visual, observadas en el

microscopio luego de una tinción con nitrato de plata. (a) Grado cero o
sin daño, (b) Grado 1, (c) Grado 2, (d) Grado 3, (e) Grado 4, (APN)
células apoptóticas. Extraído de Collins A., et all, 1997.
Este método, denominado conteo visual, se ha descrito como una aproximación

rápida, simple y no requiere de costosos sistemas de análisis, por lo que su uso
ha sido ampliamente recomendado y utilizado.
30
CAPITULO II
MATERIALES Y METODOS
2.1. LUGAR DE EJECUCIÓN
El presente trabajo de investigación fue realizado en el Laboratorio de Investigación

del Proyecto Mercurio Pabellón H-202, de la Universidad Católica de Santa María de
Arequipa.
2.2. MATERIALES
2.2.1 MATERIAL VEGETAL
El material vegetal utilizado fue adquirido en el Mercado “Andrés Avelino

Cáceres” ubicado en el departamento de Arequipa, distrito Arequipa. Dichas
muestras provinieron de la provincia de Caylloma, departamento de Arequipa.
Se adquirió 1,5 kg de Corryocactus brevistylus (sancayo), los cuales fueron
almacenados a 17 ºC hasta antes de su liofilización
2.2.2 MATERIAL DE LABORATORIO
A. REACTIVOS QUÍMICOS
• Reactivo Trolox P.A. (CALBIOCHEM)

• Reactivo DPPH P.A. (CALBIOCHEM)
• Alcohol metílico calidad P.A. (CH4O)(Merck)
• Reactivo de Follin –Ciocateau P.A. (Merck)
• Ácido gálico P.A. (C7H6O5) (Sigma)
• Carbonato de sodio P.A. (Na2CO3) (Merck)
• Reactivo ABTS P.A (Sigma)
• Persulfato de potasio P.A. (K2S2O8)(Merck)
• Neocuproína P.A. (Merck)
• Cloruro de cobre II P.A. (CuCl2) (Merck)
• Acetato de Amonio P.A. (CH3COONH4) (Merck)
• Agua Ultrapura (18.2 mΩ) / destilada
• Alcohol etílico 96º
• Agarosa de Bajo Punto de Fusión (Merck)
• Agarosa de Punto de Fusión Normal (Merck)
• Ficoll-Paque PREMIUM (GE Healthcare)
• Azul de Tripan (Sigma)
31
• Buffer Fosfato Salino (PBS libre de Ca+, Mg+) (Merck)
• Cloruro de sodio (NaCl) P.A. (Merck)
• Ácido etilendiaminotetracético (EDTA) P.A. (Merck)
• Tris base P.A. ((CH2OH)3 CNH2) (Merck)
• Hidróxido de Sodio (NaOH) (Merck)
• Tritón X-100 (Sigma)
• Dimetil sulfóxido (DMSO) (Sigma)
• Ácido tricloroacético (CCl3COOH) (J.T. Baker)
• Sulfato de zinc P.A. (ZnSO4) (Fisher)
• Glicerol 98% P.A. (Merck)
• Nitrato de Amonio P.A. (NH4NO3) (Fisher)
• Nitrato de Plata P.A. (AgNO3) (Fisher)
• Ácido Silícico Tungstico P.A. (Sigma)
• Formaldehido 40% (Fisher)
• Acetato de sodio (C2H3NaO2) (Merck)
• Ácido acético glacial (CH3CO2H) (Merck)
B. MATERIAL DE LABORATORIO
• Fiolas (5,10, 25, 100, 250 ml)

• Beakers (50, 100, 250, 1000 ml)
• Matraz (25 ml)
• Tubos de ensayo
• Pipeta Pasteur
• Micropipetas de 10 – 20, 40 – 200 ul, 100 – 1000 ul, 1 – 10 ml
• Tubos Eppendorf (1.5 ml)
• Tubos Falcon (15 ml)
• Probeta (50 ml)
• Celdas espectrofotométricas
• Placas Petri
• Laminas Portaobjetos
• Vasos de precipitado
• Pipetas graduadas (2, 5, 10 ml)
• Cubreobjetos
• Frascos Ámbar de 100, 250, 1000 ml
• Viales de vidrio
• Cámara de Neubauer
• Mortero
32
C. EQUIPOS:
• Balanza Analítica (Ohaus Pioneer PA 214)

• Sonicador (Branson 2510 – E)
• Centrifuga (Hettich zentrifugen EBA20)
• Microcentrifugadora (Thermo IEC – Centra CL2)
• Agitador Vortex (Analog mixer)
• Refrigerador
• pH metro (Metrohn 825pHlab)
• Agitador Magnético
• Espectrofotómetro (CARY60 UV – VIS, Agilent Technologies)
• Microscopio binocular (PrimoStar Zeiss)
• Cámara Digital Panasonic DMC – FS3
• Cámara de electroforesis
• Fuente de Poder
• Liofilizador (LABCONCO)
• Shaker (P Selecta® Rotaterm)
• Vortex (VWR Analog Vortex Mixer)
• Estufa (Memmert)
• Voltámetro (Metrohn, 757 VA Computrace)
D. OTROS:
• Algodón
• Porta láminas
• Gradilla para tubos de ensayo
• Jeringas
• Filtros anotop
• Tips para micropipetas
• Guates descartables
• Mascarilla
• Plumón marcador
• Papel de Filtro
• Cámara de Newbauer
• Hielo
• Papel Aluminio
33
2.3. MÉTODOS
2.3.1 OBTENCIÓN Y ALMACENAMIENTO DEL MATERIAL

VEGETAL
Se obtuvo aproximadamente 1,5 kg de Corryocactus brevistylus del mercado

“Andrés Avelino Cáceres” los cuales provinieron de la provincia de Caylloma,
departamento de Arequipa. Los frutos fueron lavados cuidadosamente y
conservados en el congelador. Posteriormente se procedió a pelar y picar los
frutos en trozos medianos para guardarlos en el congelador y luego realizar el
proceso de liofilización de la muestra en el liofilizador LABCONCO (de 2,5 L)
en el laboratorio de la Facultad de Ing. Alimentarias de la Universidad Nacional
San Agustín. Las muestras fueron liofilizadas a una temperatura de -42 ºC y una
presión de 0,250 mbar, para luego ser colocadas en bolsas herméticas y
almacenadas en un refrigerador a una temperatura de 17 ºC hasta su uso. La
muestra fue conservada en una bolsa de polipropileno debidamente sellada y
almacenada en un ambiente libre de humedad y protegido de la luz como se
muestra en la Figura Nº 10.
FIGURA Nº 10.: Liofilizado de la muestra y su almacenamiento.
Debido a que la especie Corryocactus brevistylus no es muy comercial, por su

producción limitada a ciertas temporadas del año, ni fácil de obtener, por el
habitad pedregoso en el que se suele encontrar, es que se consideró pertinente
almacenar la muestra en estado liofilizado, manteniendo así todas sus
propiedades activas y poder prescindir de una misma muestra para la realización
de todos los análisis establecidos.
34
La liofilización es un sistema de secado por vacío el cual ha resultado ser muy
eficiente a la hora de preservar las características de un fruto inicial, y en el que
el secado se produce por el cambio de estado de líquido - solido - gas
(sublimación). Es una forma de secar un producto químico a temperaturas
bajísimas sin el deterioro que produciría el recalentamiento.126, 127
2.3.2 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Se trituró la muestra liofilizada previamente antes de realizar el análisis,

posteriormente se homogenizó 100 mg de muestra liofilizada con 1 ml de
metanol calidad P.A. en un tubo eppendorf. Se procedió a su sonicación por 2
min y se centrifugó a 4000 rpm por 10 min, se separó el sobrenadante en otro
tubo de plástico y se repitió este proceso por 3 veces para juntar después los 3
sobrenadantes y enrasarlos finalmente en una fiola de 5 ml con metanol. Se
guardó la fiola a -4 ºC hasta el momento de su análisis.
2.4. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO
Para la determinación de ácido ascórbico se utilizó el método voltamétrico por

polarografía.
2.4.1 MÉTODO VOLTAMÉTRICO
La voltametría es una técnica electroquímica en la cual la corriente es medida

con un electrodo como una función del potencial aplicado a través de la celda
electrolítica. Mediante el control del voltaje aplicado a una celda electroquímica,
que contiene las trazas a analizar, se puede hacer que ocurran de manera
consecutiva varias oxidaciones y reducciones. La corriente que surge de estas
oxidaciones o reducciones es una medida de la concentración de la traza de
material presente.104, 105
Utilizando un electrodo de gota de mercurio, como electrodo de trabajo, se

puede trazar la curva intensidad-potencial cuya altura, después de ser medida y
comparada con una recta de calibrado por ser proporcional a la concentración de
la sustancia que la produce, es empleada para conocer su concentración en
solución. Esta técnica es conocida como voltametría de barrido lineal o también
denominada polarografía. 104
El voltámetro tiene 3 electrodos. El electrodo de trabajo de gota de mercurio, el

electrodo de referencia de plata/cloruro de plata (Ag/AgCl) y el electrodo
auxiliar de platino.
35
La polarografía se emplea en medios reductores, ya que la oxidabilidad del
mercurio impide la aplicación en medios oxidantes. El empleo de la polarografía
es posible gracias a un hecho fundamental: la sobretensión de reducción de los
iones H+ sobre el cátodo de mercurio, así es posible aplicarla sobre numerosos
oxidantes inorgánicos como cetonas, quinonas, aldehídos, etc.104
Como el oxígeno se puede reducir en el electrodo de mercurio, enmascarando la

señal de interés, es de vital importancia burbujear la solución con un gas inerte,
antes de realizar cada corrida para remover el oxigeno presente.
2.4.2 DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO POR

VOLTAMETRÍA
Se preparó un buffer acetato de sodio 0.1 N de pH 4,7. Así mismo se hizo una
solución estándar de acido ascórbico pesando 0,01 g y diluyéndolo con agua
ultrapura y enrasándola en una fiola de 10 ml.
La muestra a medir se preparó de acuerdo al ítem 2.3.2 solo en que en lugar de

utilizar metanol se utilizó agua destilada y se midió en el voltámetro Metrohn
(Ver Figura Nº 11)
FIGURA Nº 11.: Voltámetro Metrohn, 757 VA Computrace
Se colocó en la celda polarográfica 10 ml de la solución blanco (Buffer acetato

de sodio pH 4,7) y 0,5 ml de la muestra previamente preparada, para luego
registrarla en el voltámetro usando la ventana de trabajo del software para el
voltámetro Metrohn 757 VA Computance. Luego de darse la fase de purga, en la
cual se burbujea gas inerte para la eliminación de oxigeno existente en la celda,
y la medición de la muestra, se coloca 0,2 ml de la solución estándar de ácido
36
ascórbico en la celda y se registra en el voltámetro para volver a agregar
nuevamente el estándar.
Se realizó un polarograma de la muestra de acido ascórbico y de los estándares

de acido ascórbico con el fin de localizar el potencial de pico de oxidación. Se
hizo el análisis por triplicado siguiendo el mismo procedimiento.
2.4.3 CÁLCULOS
El contenido del ácido ascórbico obtenido por el software fue expresado como
mg A. A./L de muestra y se cambio a mg A. A./g de liofilizado de sancayo.
2.5. DETERMINACIÓN DE POLIFENOLES TOTALES
Para la determinación de polifenoles totales, se utilizó el ensayo Follin-

Ciocalteau.
2.5.1 MÉTODO DE FOLLIN-CIOCALTEU
El método que se utiliza actualmente es una modificación realizada por

Singleton y Rossi (1965). Se basa en que los compuestos polifenólicos de la
muestra tienden a oxidarse por el reactivo Folin-Ciocalteu (unión de ácido
fosfotúngstico y ácido fosfomolibdico) y que posteriormente se reducen por
acción de los polifenoles. Posteriormente se llega a formar un cromóforo azul
constituido por un complejo fosfotúngstico-fosfomolibdico, donde la máxima
absorción del cromóforo depende de la solución alcalina la cual presenta una
máxima absorción a 714 nm, y que se puede llegar a cuantificar por
espectrofotometría utilizando como base una curva de calibración de ácido
gálico o catequinas.75,12
2.5.2 DETERMINACIÓN DE POLIFENOLES TOTALES POR

ESPECTROFOTOMETRÍA
Se preparó una solución madre de ácido gálico de 1000 ppm. Para ello se pesó
0,005 g de ácido gálico y se transfirió a una fiola de 5 ml, se disolvió y diluyó
con agua ultrapura hasta su disolución completa para su enrase posterior. A
partir de la solución madre, se preparó 5 diluciones de diferentes
concentraciones en un rango entre 4 - 8 ppm siguiendo la ecuación de dilución,
como se observa a continuación:
= C`xV`
37
mg
1000 =4
x 0.01L
L
= 0.00004 = 0.04 = 40
TABLA Nº 6.: Preparación de la tabla de calibración.
Concentración Sol. Patrón de Reactivo Carbonato

Nº Agua
de Ac. Gálico Ácido Gálico Follin- de Sodio (al
patrón destilada
(mg/L) 1000 ppm (uL) Ciocalteu 20%)
Blanco 0 0
4 4 40
5 5 50
6 6 60 4 mL 0.25 mL 2 mL
7 7 70
8 8 80
Muestra 0.2 ml muestra
En la Tabla Nº 6 se muestran los volúmenes a utilizar para la preparación de la

curva de calibración, todos fueron enrasados en una fiola de 10 ml con agua
ultrapura. Esta mezcla se homogenizó y se dejó reaccionar por 2 horas en la
oscuridad. Se preparó un blanco el cual sirvió para ajustar la absorbancia a cero.
Carbonato de sodio al 20%: Se pesó 5 g de carbonato de sodio anhidro, se

disolvió en agua ultrapura y se enraso en una fiola de 25 ml.
FIGURA Nº 12.: Espectrofotómetro CARY 60 UV – VIS,

Agilent Technologies
38
Las absorbancias se midieron a 714 nm en el espectrofotómetro de UV como se
muestra en la Figura Nº 12. Para la obtención de la curva estándar se trazó la
absorbancia vs la concentración.
Para la determinación de la concentración de polifenoles en la muestra, se

procedió de la misma manera que los estándares utilizando para ello 0,5 ml del
extracto previamente preparado como se describe en el punto 2.3.2.
2.5.3 CÁLCULOS
El contenido de los polifenoles totales fueron expresados como mg GAE/g de

liofilizado de sancayo, utilizando los datos de la curva estándar obtenida y la
siguiente ecuación:
−
/!"""# × % × &'
= =
( )
Donde:
b = intercepto
m = pendiente
Abs= Absorbancia de la muestra
Fd = Factor de dilución
V= volumen del extracto de la muestra (5 ml)
Wma= peso de muestra de sancayo (g)
GAE = Equivalente a ácido gálico

Corryocactus brevistylus
Para la determinación de la actividad antioxidante del Corryocactus brevistylus,

se utilizaron 3 métodos colorimétricos: DPPH, ABTS y CUPRAC.
2.6.1 MÉTODO DPPH (2,2-DIFENIL-1-PICRILHIDRAZIL). BRAND-

WILLIAMS ET AL. 1995.
Este método, desarrollado por Brand-Williams et al. 1995, se basa en la

reducción de la absorbancia medida a 515 nm del radical DPPH• (2,2-difenil-1-
picrylhydrazyl), compuesto por moléculas de radicales libres estables, y los
antioxidantes en un medio metanólico. En este método se utiliza el radical libre
DPPH• (2,2-difenil-1-picrilhidracilo) en cual se reduce en DPPH (2,2-difenil-1-
39
picrilhidracina) por la acción antioxidante de los compuestos que contienen
grupos –OH que decoloran el reactivo DPPH de un color violeta intenso a un
amarillo tenue. (Ver Figura Nº 13) El cambio de color es monitoreado
espectrofotométricamente y es utilizado para la determinación de los parámetros
para las propiedades antioxidantes. 23
2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (radical libre) –Violeta Intenso
2,2-difenil-1-picrilhidracina (radical reducido) – Amarillo Tenue
FIGURA Nº 13.: Estructura del DPPH antes y después de la reacción

con el antioxidante. Extraído de Nur A., et all, 2012.
El radical A puede contribuir de este modo a la formación de moléculas estables

a través de la interacción radical-radical (Figura Nº 13). Entre las ventajas de
usar este método es que es sensible, simple y rápido. Este método no es
específico a un antioxidante en particular por lo tanto aplica para evaluar una
actividad antioxidante total.56
La concentración de DPPH• en el medio de reacción se calcula a partir de una

curva de calibrado obtenida por regresión lineal. Los resultados se suelen
expresar mayormente en % de inhibición, pero también pueden expresarse en
TEAC, o sea, actividad equivalente a Trolox (µmol TE/g de muestra peso).
40
• Determinación de actividad antioxidante por espectrofotometría
a. Preparación del radical DPPH•

Se preparó una solución madre de DPPH• a una concentración 2,1 mmol en
metanol p.a., para ello se necesitó 4,14 mg del reactivo y 5 ml de metanol.
El reactivo preparado se conservó en refrigeración protegido de la luz,
debido a que es altamente inestable, hasta su uso en el día.
b. Preparación de la solución Stock de Trolox

Se elaboró una curva de calibración, utilizando una solución madre de
Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid) de
concentración 1 mmol/L en 10 ml de metanol, a partir de la cual se preparó
otra de 0,2 mmol/L.
c. Preparación de la curva de calibración

A partir de la solución de Trolox 0,2 mmol/L, se realizaron diferentes
concentraciones entre un rango de 0,02 – 0,04 mmol/L. Se utilizaron fiolas
de 5 ml en las cuales se agregó 250 ul de DPPH 2,1 mmol/L y también
distintos volúmenes de la solución de Trolox 0,2 mmol/L ajustando
finalmente con metanol al 80% hasta la medida indicada dándonos distintas
concentraciones finales de Trolox como se observa en la Tabla Nº 7.
Las mezclas homogenizadas son dejadas reaccionando en oscuridad por

espacio de 10 min, pasado dicho tiempo estas reaccionan y cambian de color
como se muestra en la Figura Nº 14. Se preparó un blanco el cual sirvió
para ajustar la absorbancia a cero y también una solución sin el reactivo
Trolox para posteriores cálculos.
TABLA Nº 7.: Preparación de la curva de calibración con DPPH
Nº Patrón Blanco Blanco 2 ST1 ST2 ST3 ST4 ST5

DPPH 2.1
− 250 250 250 250 250 250
mmol/L (ul)
MetOH 80%
5000 4750 4250 4125 4000 3875 3750
(ul)
Trolox 0.2
− − 500 625 750 875 1000
mmol/L (ul)
Concentración
− − 0,02 0,025 0,03 0,035 0,04
mmol/L
41
Las absorbancias se midieron a 515 nm en el espectrofotómetro de UV-VIS.
Para la obtención de la curva estándar se graficó la concentración de Trolox
en mmol/L vs el % de inhibición de cada patrón. Se determinó la actividad
antioxidante de la muestra, utilizando 0,08 ml del extracto previamente
preparado como se describe en el punto 2.3.2.
FIGURA Nº 14.: Estándares para la curva de calibración del reactivo

DPPH de menor a mayor concentración de Trolox.
2.6.2 CÁLCULOS
La actividad antioxidante se expresa como µmol TE/g de muestra seca, para lo

cual se tuvo que determinar primero el porcentaje de inhibición, o porcentaje de
captación de radical libre correspondiente a la cantidad de DPPH neutralizado
por el extracto a una determinada concentración, utilizando la siguiente
ecuación:
1 23),/0 − 456 78) 9 × !""

% +,-. ./.0, =
23),/0
Donde:
Abs Blanco = Absorbancia del Blanco 2
Abs Muestra = Absorbancia de la Muestra
De acuerdo a la ecuación lineal obtenida en la curva de calibración, y los datos

de la muestra, se obtuvo los µmol TE/g de muestra seca utilizando la siguiente
ecuación:
: 03 ; < %.,-. ./.ó, −

= => ? × % × &'@ ÷ ( )
42
Donde:
b = intercepto
m = pendiente
Wma= Peso de la muestra de sancayo (g)
TE = Equivalente a Trolox
2.6.3 MÉTODO ABTS (ÁCIDO 2,2′-AZINO-BIS-3-ETILBENZO

TIAZOLIN -6-SULFONICO). MILLER Y RICE –EVANS, 1997.
Es un método desarrollado por Miller y Rice - Evans, 1997, cuyo fundamento

explica que el radical catiónico ABTS (ABTS●+), el cual posee una coloración
verde-azulada y una absorción espectrofotométrica a 734 nm, es decolorado al
reaccionar con un antioxidante.
FIGURA Nº 15.: Estructura del ABTS•+ antes y después de la reacción con

el antioxidante. Extraído de Re R., et all, 1999.
La técnica para la generación del radical catión ABTS●+, implica la producción

directa del cromóforo ABTS●+ verde-azul a través de la oxidación del ABTS por
el persulfato de potasio (K2S2O8). Este presenta tres máximos de absorción a las
longitudes de onda de 645 nm, 734 nm y 815 nm. La adición de los
antioxidantes al radical pre-formado lo reduce a ABTS, como se observa en la
43
Figura Nº 15, de esta manera el grado de decoloración del radical catión
ABTS●+ está determinado en función de la concentración, el tiempo, y del valor
correspondiente del Trolox como estándar.102
El patrón que suele utilizarse es el ácido-6-hidroxi-2, 5, 7, 8 tetrametilcromano-

2-carboxílico o conocido como Trolox, el cual es un análogo sintético
hidrosoluble de la vitamina E como se observa en la Figura Nº 16, por ello los
resultados se suelen expresar en TEAC, o actividad equivalente a Trolox
(µmolTE/g de muestra peso seco).
FIGURA Nº 16.: Estructura de la vitamina E y Trolox. Extraído de

Debbie J. M., et all, 2010.
Entre las propiedades que presenta usar el ABTS, es que es soluble en solventes
acuoso y orgánico, lo cual lo hace que el método sea capaz de determinar la
actividad antioxidante hidrofílica y lipofílica de extractos y fluidos biológicos.
La concentración de ABTS en el medio de reacción se calcula usando la curva

de calibración obtenida por regresión lineal. Los resultados suelen ser
mayormente expresados en TEAC o actividad equivalente a Trolox (µmol TE/g
de muestra peso).
a. Preparación de la solución madre ABTS●+

Se preparó una solución de ABTS, al que llamaremos reactivos A, pesando
78,4 mg de ABTS y llevándolo a un volumen de 10 ml con agua destilada.
Así mismo se preparó una solución de persulfato de potasio, el que recibirá
el nombre de reactivo B, por pesó 13,2 mg de persulfato de potasio y se
44
diluyó en una fiola con 10 ml de agua destilada. Ambas soluciones se
almacenaron en frascos ámbar bajo condiciones de refrigeración y
oscuridad.
La solución madre de ABTS●+ se preparó mesclando volúmenes iguales de

los reactivos A y B (relación 1:1) mezcla que se dejo reaccionar a
temperatura ambiente y en oscuridad por 18 horas antes de ser usada.
A partir de la solución madre de ABTS●+ se preparó una solución diluida de

ABTS●+, para ello se colocó en un frasco de color ámbar 1 ml de la
solución madre de ABTS●+ y 62 ml de metanol aproximadamente, hasta
obtener una absorbancia de 1.1 +/- 0,02 a 734 nm, corrigiendo la lectura con
metanol o solución madre de ABTS+ según sea el caso.

Se preparó una curva estándar a partir de una solución madre de Trolox (6-
hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid) 1 mmol/L. Para eso
se pesó 2,5 mg de Trolox y se diluyo con 10 ml de metanol.

A partir de la solución de Trolox 1 mmol/L, se prepararon diferentes
concentraciones del reactivo en un rango de 0,02 a 0,2 mmol/L en fiolas de
5 ml con metanol (Ver Tabla Nº 8.). A partir de dichas concentraciones, se
tomo 250 ul de cada solución de Trolox y se le adicionó 4750 ul de la
solución madre de ABTS●+. Se homogenizó cada mezcla, y se dejó
reaccionar por 7 minutos en oscuridad.
TABLA Nº 8.: Preparación de la curva de calibración con ABTS●+.
Nº Patrón Blanco ST1 ST2 ST3 ST4 ST5

Trolox 1 mmol/L
− 100 250 500 750 1000
(ul)
MetOH (ul) 5000 4900 4750 4500 4250 4000
Concentración
0 0,02 0,05 0,1 0,15 0,2
mmol/L
HOMOGENIZAR
Tomar (ul) 5000 250 250 250 250 250
ABTS sol. Madre
− 4750 4750 4750 4750 4750
(ul)
45
Pasados los 7 minutos, cada estándar es leído en el espectrofotómetro a 734
nm. Se puede apreciar la reacción del radical ABTS●+ con el Trolox, por la
atenuación del color verde azulado, como se ve en la Figura Nº 17.
Para la obtención de la curva de calibración, se graficó la concentración de

Trolox en mmol/L vs la absorbancia de cada patrón. Se determinó la
concentración de la actividad antioxidante en la muestra, empleando 0,15
ml del extracto previamente preparado en el punto 2.3.2.
FIGURA Nº 17.: Estándares para la curva de calibración del reactivo

ABTS●+ de menor a mayor concentración de Trolox.
2.6.4 CÁLCULOS
La actividad antioxidante se expresó como µmol TE/g de muestra seca, de

acuerdo a las curvas obtenidas y la siguiente ecuación:
: 03 ; < ∆ −
= => ? × % × &'@ ÷ ( )
Donde:
b = intercepto
m = pendiente
∆ Abs = Absorbancia del Blanco – Absorbancia de la muestra (a 734 nm)
Wma= Peso de la muestra de sancayo (g)
TE = Equivalente a Trolox
46
DE ION CÚPRICO). APAK ET. AL. 2004.
El método espectrofotométrico CUPRAC fue desarrollado por Apak para

determinar la capacidad total de antioxidantes en alimentos. Se basa en la
medida de la absorbancia del quelato Cobre(I)-Neucuproína [Cu(Nc)2+]
formado como resultado de la reacción redox de los antioxidantes con cadenas
rotas junto con el reactivo Cobre(II)-Neocuproína (CUPRAC), donde la
absorbancia se mide a una longitud de onda de 450 nm.8
El método comprende en mezclar la solución antioxidante con cloruro de cobre

(II), neocuproína diluida en metanol y acetato de amonio acuoso a un pH 7, y
medir subsecuentemente la absorbancia a 450 nm después de 30 min de
reacción.
La reacción que tiene lugar se encuentra en la Figura Nº 18.
FIGURA Nº 18.: Reacción del reactivo CUPRAC con un agente

antioxidante. Extraído de Apak R., et all, 2011.
Los protones liberados pueden neutralizarse con la solución acetato amónico. En

la reacción de la Figura Nº 18, los polifenoles (-OH) se oxidan a las
correspondientes formas quinónicas (= O) y el Cu(II)-Nc es reducido a Cu(I)-Nc
que corresponde a una coloración amarillo intenso cuando la concentración del
agente antioxidante es mayor.
La actividad antioxidante de la muestra se calcula con la ecuación lineal

obtenida de la curva de calibración. Los resultados normalmente se expresan en
TEAC o actividad equivalente a Trolox (µmol TE/g de muestra peso).
47
a. Preparación de las soluciones reaccionantes

Se preparó una solución metanólica de cloruro de cobre (II) 12 mM en una
fiola de 10 ml y una solución de neocuproína 75 mM también con un
solvente metanólico a un volumen final de 10 ml. Además, se preparó una
solución buffer de acetato de amonio 1 M ajustado a un pH 7. Cada solución
se preparó el mismo día de realizar la lectura espectrofotométrica.

Se hizo una curva estándar utilizando como agente antioxidante una
solución de Trolox 1 mmol/L en un solvente metanólico. Para ello se pesó
2,5 mg de Trolox y se diluyo con 10 ml de metanol.
TABLA Nº 9.: Preparación de la curva de calibración para el ensayo

CUPRAC
Nº de Patrón Blanco ST 1 ST 2 ST 3 ST 4 ST 5
Cloruro de cobre (II) 12
1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
mmol, ml
Neocuproína 75 mmol, ml 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
Acetato de Amonio 1mol
1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
pH 7, ml
Trolox 1mmol , ul − 50 100 150 200 250
Agua destilada 2,0 1,95 1,9 1,85 1,8 1,75
Concentración Final,
− 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05
mmol/L

Se elaboró diferentes concentraciones del reactivo Trolox 1 mmol/L en un
rango de 0,01 a 0,05 mmol/L en fiolas de 5 ml, a las cuales se agregó 1 ml
de cada solvente preparado y se enrasó con agua destilada como se muestra
en la Tabla Nº 9. Se homogenizó cada mezcla, y se dejó reaccionar por 30
minutos en oscuridad, para finalmente leer su absorbancia a 450 nm en el
espectrofotómetro.
48
FIGURA Nº 19.: Estándares para la curva de calibración del Método
CUPRAC de una menor a mayor concentración de Trolox.
Se puede apreciar y medir la formación del complejo Cobre(I)-Neocuproína

[Cu(Nc)2+] por la formación de un color amarillo intenso a una mayor
concentración de agente antioxidante como se aprecia en la Figura Nº 19.
Para la obtención de la curva de calibración se graficó la concentración de

Trolox en mmol/L vs la absorbancia de cada patrón. Se determinó la
concentración de la actividad antioxidante en la muestra, utilizando 0,1 ml
del extracto previamente preparado en el punto 2.3.2.
2.6.6 CÁLCULOS
La actividad antioxidante se expresó en umol TE/ g muestra seca, y la ecuación

utilizada fue la misma que la del punto 2.5.4.
2.7 DETERMINACION DE LA GENOTOXICIDAD DEL Corryocactus

brevistylus POR EL ENSAYO COMETA
Para la determinación de la genotoxicidad del sancayo, se realizo el ensayo

cometa utilizando células mononucleares de sangre periférica.
2.7.1 PREPARACIÓN DEL EXTRACTO DE Corryocactus brevistylus

(SANCAYO)
Se prepararon extractos acuosos de sancayo a partir del la pulpa previamente

liofilizada de acuerdo al punto 2.3.1 antes mencionado. Para la preparación de
dichas concentraciones, se pesó 0,2 g de sancayo liofilizado y se colocó en un
tubo eppendorf al cual se le agregó 1 ml de agua destilada. Se procedió a sonicar
49
por 2 min, se centrifugó a 4000 rpm por 5 min y luego se separó el
sobrenadante en otro tubo eppendorf. El sobrenadante recuperado fue filtrado,
primero en papel filtro delgado y luego en filtros anotop en una fiola de 5 ml. Se
realizó el proceso de extracción tres veces por muestra y luego el extracto fue
enrasado con solución PBS 1X. La concentración obtenida fue del 4% a partir
del cual se preparó una concentración del 2% y de 0,1%. (ANEXO 1, Figura Nº
34. a-g)
2.7.2 DISEÑO EXPERIMENTAL
Se realizó la extracción de células mononucleares a partir de sangre periférica, y

luego se evaluó la genotoxicidad del extracto del fruto de Corryocactus
brevistylus utilizando el ensayo cometa según el método desarrollado por Singh
et al. (1988) con ciertas variaciones.
a. Extracción de células mononucleares a partir de sangre humana
• Se extrajo cerca de 10 ml de sangre periférica por punción venosa en un

frasco limpio con anticoagulante y se diluyo con suero fisiológico en una
proporción 1:1. (ANEXO 1, Figura Nº 35. a)
• Se procedió a separar las células usando Ficoll-Paque Premium de la

siguiente manera:
Se colocó en la base del tubo Falcon, 4 ml de Ficoll y encima 7,5 ml de
sangre diluida. (ANEXO 1, Figura Nº 36. a)
• Se llevó a centrifugar a 2000 rpm por 30 min. hasta recuperar las células
mononucleares las cuales fueron trasvasadas a otro tubo Falcon y se
completó con medio RPMI hasta 3 ml. Esto fue centrifugado a 4000 rpm
por 10 min. Se repitió el lavado dos veces con medio RPMI (ANEXO 1,
Figura Nº 36. b)
• Se procedió a hacer la prueba de viabilidad utilizando la técnica de

exclusión con azul de Tripan 0,4%, utilizando una cámara de Newbauer
considerando las células con un % de viabilidad mayor al 90%. Las células
viables eran aquellas que tenían una coloración transparente y las no viables
aquellas que tenían una coloración azul. (ANEXO 1, Figura Nº 36. c)
b. Grupos experimentales
Se establecieron 5 grupos experimentales de aproximadamente 2 x105 células

para cada tratamiento como se muestra en la Tabla Nº 10.
50
TABLA Nº 10. : Grupos experimentales para el Ensayo Cometa.
Grupos Experimentales Concentración

Grupo I: Extracto acuoso de fruto
2%
Grupo II: Extracto acuoso de fruto
0,2%
Grupo III: Extracto acuoso de
0,02%
fruto Corryocactus brevistylus
Grupo Control positivo: Peróxido
150 umol
de hidrógeno
Grupo Control negativo: medio
−
RPMI 1640
c. Preparación de los tratamientos
Los tratamientos se llevaron a cabo en tubos eppendorf de 1,5 ml de volumen.

Cada tubo eppendorf contenían la cantidad de células mononucleares
suspendidas en un volumen de 250 ul de medio RPMI 1640 a los cuales se
agregó las diferentes cantidades del extracto de sancayo, preparado el mismo
día del ensayo, necesarias para llegar a las concentraciones establecidas en
cada tratamiento, como se aprecia en la Tabla Nº 11.
TABLA Nº 11. : Preparación de cada uno de los tratamientos para el

Ensayo Cometa.
Grupos Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo

Experimentales I II III C. Negat. C. Posit.
2 x 105 Células
mononucleares
250 ul 250 ul 250 ul 250 ul 250 ul
suspendidas en medio
RPMI 1640, ul
H2O2, 2000 umol − − − − 37,5 ul
Extracto de Sancayo
250 ul − − − −
4 %, ul
Extracto de Sancayo
− 50 ul − − −
2%, ul
Extracto de Sancayo
− − 100 ul − −
0,1 %, ul
PBS 1X − 200 ul 150 ul 250 ul 212,5
CONCENTRACION
2% 0,2% 0,02% − 150 umol
FINAL
51
Una vez preparados los tratamientos, estos fueron llevados a 37ºC en
oscuridad por espacio de 30 min. (ANEXO 1, Figura Nº 36. d) Pasado el
tiempo de incubación, los tubos eppendorf fueron llevados a la centrifugadora
a una velocidad de 4000 rpm por 10 min., se mantuvo solo el precipitado y
este fue lavado con PBS 1X. Se realizó un segundo lavado y se obtuvieron los
linfocitos como precipitado.
Las células tratadas fueron resuspendidas en 50 ul de PBS 1X hasta el

momento de su fijación.
d. Preparación de soluciones:
• Lavado del Material: Mezcla sulfocrómica
Para el lavado del material se preparó una mezcla sulfocrómica utilizando

los siguientes reactivos:
Reactivo Volumen de 50 ml
Dicromato de potasio,
1,5 g
K2Cr2O7
Ácido sulfúrico, 96% 50 ml
Se pesó y disolvió el dicromato de potasio en 50 ml de acido sulfúrico al

96%, en un frasco de vidrio de color ámbar. Para asegurar una mejor
disolución se dejó la mezcla sulfocrómica por unos minutos en el sonicador
y se agitó manualmente hasta que la mezcla se encuentre completamente
disuelta. Los portaobjetos, previamente esmerilados, y cubreobjetos, se
sumergieron en la mezcla sulfocrómica por al menos 12 h. antes de su uso.
• Viabilidad Celular: Azul de Tripan al 0,4%
Se disolvió 0,004 g del reactivo Azul de Tripan en 1 ml de PBS 1X.
• Solución de PBS 1X: pH 7.4

NaCl 2g
KCl 0,05 g
Na2HPO4 0,36 g
KH2PO4 0,06 g
52
Se mezcló todos los reactivos con 200 ml de agua destilada con agitación
constante hasta su disolución. Se ajusto el pH con HCl o NaOH hasta un pH
de 7,4. Se enrasó con agua destilada en una fiola de 250 ml.
• Solución de Agarosa de Punto de Fusión Normal al 1,5 %
Se preparó 4 ml de agarosa, pesando 0,06 g y diluyéndolo con 4 ml de PBS

1X.
• Solución de Agarosa de Punto Fusión Bajo al 0,75 %
Se preparó la solución utilizando 0,0263 g de agarosa en 3,5 ml de PBS 1X.
• Solución madre de Lisis: pH 10.0

NaCl, 2,5 M 14,61 g
Tris, 10 mM 0,3 g
EDTA, 100 mM 9,3 g
NaOH 2g
Se disolvió todos los reactivos en 200 ml de agua destilada con ayuda de un

agitador magnético. Se ajustó el pH a 10.0 con HCl o NaOH concentrado y
luego se enrasó con agua destilada hasta 250 ml. La solución lisis madre
tiene una duración máxima de hasta 2 semanas.
• Solución de Lisis Final
Solución madre de lisis
44,5 ml
pH 10.0
DMSO 10% = 5 ml
Tritón X-100 1% = 500 ul
Se mezcló todos los reactivos con cuidado y se enrasó en una fiola de 50 ml.
Se llevó a refrigeración por lo menos 20 min. antes de su uso verificando de
53
antemano que el pH sea de 10. La preparación se hizo inmediatamente antes
de su uso.
• Solución Alcalina: Desenrollamiento y Electroforesis

NaOH, 10 N 7,5 ml
EDTA, 200mM (pH 10) 1,25 ml
Se midió los reactivos (7,5 ml de NaOH 10 N y 1,25 ml EDTA) y se

aforaron con agua destilada fría hasta un volumen de 250 ml. Los reactivos
por separado tienen una duración de hasta 2 semanas, mientras que la
solución alcalina se preparó inmediatamente antes de su uso.
• Solución de Tinción con Nitrato de Plata
Solución A:
Reactivo Concentración
Carbonato de Sodio 5%
Solución B:
Nitrato de amonio 0.2 %
Nitrato de plata 0.2 %
Ácido silícico túngstico 0.5 %
Formaldehído 0.15 %
Las soluciones A y B luego de ser preparadas, el mismo día del ensayo, se

almacenaron en envases por separado. Se mezcló 66% de la solución A
junto con 34 % de la solución B en un frasco justo antes de ser utilizado.
• Solución de Neutralización: pH 7.5

Tris – base, 0,4 M 12,125 g
54
Se disolvió el reactivo en 200 ml de agua destilada, ajustando el pH a 7,5
con HCl concentrado y luego se aforó en una fiola de 250 ml. La solución se
almacenó a temperatura ambiente en frasco en frasco ámbar hasta por
espacio máximo de 2 semanas.
• Solución de Fijación
Ácido tricloroacético 15%
Sulfato de zinc 5%
Glicerol 5%
Se disolvió los reactivos en agua destilada, y una vez disueltos se enrazó en

una fiola de 25 ml con agua destilada. La solución se preparó
inmediatamente antes de ser usado.
e. Preparación de los portaobjetos:
Se recubrió los portaobjetos con agarosa de punto de fusión normal al 1,5%

utilizando 500 ul de agarosa NMP con ayuda de otro portaobjeto. Los
portaobjetos ya preparados fueron llevados a una estufa a 37ºC y se los dejó
disecar por 15 min para su deshidratación, posteriormente se los almacenó a
4ºC hasta el momento de su uso. (ANEXO 1, Figura Nº 37. a y b)
Otros autores como Nandhakumar S. et al. y Alok D. et al. reportan en sus

trabajos una concentración del 0,75 % y 1 %, respectivamente, para la
preparación de la agarosa de punto de fusión normal, sin embargo, se ha visto
que al preparar concentraciones menores al 1% para la primera capa de
agarosa, el gel tiende a separarse del portaobjeto e incluso romperse luego de
la etapa de neutralización. Al aumentar la concentración de la agarosa NMP a
1,5 % se observó que existe una mejor resistencia y fijación de esta en el
portaobjeto; esta concentración también fue considerada por Rigonato J. et al.
al realizar el ensayo cometa en su trabajo de genotoxicidad con moluscos. 60, 1,
76
Así mismo Nandhakumar S. et al. sugiere deshidratar la primera capa a 37 ºC

antes de ser utilizada. El tiempo de almacenamiento de los cubreobjetos a
4ºC, se recomienda que no sea mayor que 12 horas, incluso si es posible es
preferible prepararlos el mismo día de su uso. 60
Las células mononucleares, una vez aisladas y expuestas a los tratamientos

previamente establecidos, se mezclaron con la agarosa de bajo punto de
55
fusión (LMP) 0,75% a 37 °C en una proporción de 1:10. Se tomó 75 ul de la
mezcla anterior y se la colocó encima de la primera capa del portaobjeto con
agarosa NMP extendiéndola con ayuda de un cubreobjetos. Los portaobjetos
preparados con las muestras se llevaron a 4ºC por 5 min para su gelificación y
posterior retiro del cubreobjeto. (ANEXO 1, Figura Nº 37. c) La
concentración de la agarosa LMP va desde 0,05 %, según el protocolo de
trabajo de Nandhakumar S. et al, hasta 0,75 % el cual es una de las
concentraciones también utilizadas. 60
f. Lisis:
Después de la solidificación del gel de agarosa, se incubó las láminas en

solución de lisis, pH 10,0 a una temperatura de 4 °C por 18 h en oscuridad.
(ANEXO 1, Figura Nº 38. a).
La solución de lisis utilizada en el ensayo de cometa, consiste en una solución

acuosa altamente concentrada, que permite romper la membrana celular de las
células. La sal acuosa de proteínas, altera los patrones de unión dentro de la
célula, he irrumpe en el contenido de ARN. El detergente contenido en la
solución de lisis, disuelve las membranas celulares haciendo que las células
se destruyen y que todo todas las proteínas, ARN, membranas y componentes
citoplasmáticos y nucleoplasmicos se interrumpen y se difunden en la matriz
de agarosa. Sólo el ADN de la célula se mantiene, y se desenreda para llenar
la cavidad en la agarosa que toda la célula anteriormente llena, esta nueva
estructura se denomina nucleoide.122
El tiempo empleado para la solución varía entre 1 h., como los trabajos
reportados por Urbina C. et al, y Noroozi M. et al., 2 h., como el trabajo de
Alok D. et al., y hasta menos de 24 h. como lo reporta Nandhakumar S. et al.
123, 61, 1, 60
Luego de haber realizado pruebas usando diferentes tiempos de lisis, se

encontró que luego de las 18 h. de reacción las células mostraron mejores
resultados, tanto en su control negativo como positivo, que cuando se las
sometía a 1 h de lisis.
g. Exposición Alcalina:
Terminada la lisis, se incubaron las láminas en solución alcalina por espacio

de 10 min, a un pH ≥ 13. (ANEXO 1, Figura Nº 39. a)
56
En la exposición alcalina, se logra la separación de la doble cadena de DNA,
la producción de roturas de cadena simple (SSB) y la expresión de sitios
álcali-lábiles (ALS) relativas al proceso de reparación. El tiempo empleado
según Singh et al. es de 20 min, pero otros investigadores se sugieren
emplear un menor tiempo en esta etapa, y se consideró emplear 10 min. como
el trabajo de Sotil G., et al. 84, 124
h. Corrida electroforética:
Se realizó la corrida electroforética en una cubeta de electroforesis horizontal

durante 20 minutos a 4 °C bajo condiciones alcalinas y oscuridad para
producir cometas. Las condiciones electroforéticas fueron de 30 v y 246 mA.
(ANEXO 1, Figura Nº 39. b)
En la corrida electroforética, el tiempo empleado fue el mismo indicado por

Singh et al. el cual además de él se ha indicado que 20 min es el tiempo
idóneo para que los fragmentos de DNA se desplace lo suficiente en el gel de
agarosa para que pueda luego ser contabilizado y medido. 84
i. Neutralización:
Se lavó las láminas con agua destilada y se cubrieron con solución buffer de
neutralización (pH 7,5) por 10 min. previamente almacenada a 4 ºC. Luego de
la neutralización se lavó las placas con agua destilada, y se las dejó secar por
al menos 1 h. (ANEXO 1, Figura Nº 40. a)
El lavado con una solución de neutralización nos permitirá neutralizar la

alcalinidad de las muestras previamente incubadas con solución
electroforéticas de pH ≥ 13. Posterior a ello, se dejó secar las muestras por 1
h. a temperatura de ambiente, procedimiento realizado por Nadin S., et al.,
para tener las muestras lo suficientemente secas para realizar el teñido con
nitrato de plata de forma adecuada. 125
j. Tinción:
La tinción se realizó con una solución de nitrato de plata, preparado al

momento de la tinción, previo lavado de las muestras con solución de
fijación.
Fijación: Se lavó los portaobjetos con las muestras con solución de fijación
por 10 minutos a 4ºC y en oscuridad. Luego se enjuagó las láminas con agua
destilada. (ANEXO 1, Figura Nº 41. a)
57
Tinción propiamente dicha:
• Se colocó las láminas en placas petri y se le agregó la solución de teñido,

dejándolo en movimiento con ayuda de un shaker. (ANEXO 1, Figura Nº
41. b)
• Para garantizar un buen teñido, se dejó las muestras en tinción por
espacio de 30 min. y en oscuridad con ayuda de papel aluminio.
• Se detuvo el teñido con una solución STOP por 5 min. y se lavó las
placas seguidamente con agua destilada.
• Se procede a ver los cometas en un microscopio de campo claro, una vez
estos hayan secado. (ANEXO 1, Figura Nº 41. c)
El procedimiento para la fijación y tinción con nitrato de plata fue realizado

de acuerdo al trabajo realizado por Nadin S., et al. quien posee un artículo con
datos detallados a cerca de la tinción con nitrato de plata y con los cuales se
obtuvo buenos resultados luego de ponerlos en práctica. La única corrección
realizada en base al trabajo de Nadin S., fue el de no agregar el 5% de
carbonato de sodio para la solución B, según indican en el artículo, ya que al
agregarle esta cantidad extra no se pueden observar los cometas como se
muestra en las imágenes del paper. 125
k. Análisis:
Se realizó un análisis visual utilizando un microscopio óptico con un aumento

de 40 X, en el cual se evaluaron y cuantificaron 50 cometas en el centro de
cada gel por muestra. (ANEXO 1, Figura Nº 42, a y Figura Nº 43, a y b)
• Análisis por Unidades Arbitrarias
Cada cometa fue clasificado de acorde a la categoría o grado de daño

correspondiente en el ADN entre 0 y 4 (Ver Figura Nº 9). La magnitud del
daño al DNA fue expresado en Unidades Arbitrarias (UA). 19
El procedimiento para el cálculo de (UA) se resume en la siguiente ecuación:

19
CD = 1" × EFG"9 + 1! × EFG!9 + 1I × EFGI9 + 1J × EFGJ9 + 1K × EFGK9
Donde:
− TCG0 = Total de células grado 0 (células no dañadas)

− TCG1 = Total de células grado 1(mínima frecuencia de lesiones en el ADN)
58
− TCG2 = Total de células grado 2 (daño bajo, baja lesiones en el DNA)
− TCG3 = Total de células grado 3 (daño alto, alta de lesiones en el DNA)
− TCG4 = Total de células grado 4 (células totalmente dañadas)
• Análisis de acuerdo al porcentaje de ADN en la cola.
Las células analizadas por unidades arbitrarias fueron utilizadas por el

programa CaspLab y se clasificaron empleando una escala arbitraria de cinco
categorías según la cantidad de ADN en la cola, en porcentaje, determinando
el nivel de daño. (Ver Tabla Nº 12)
TABLA Nº 12. : Interpretación de la cantidad de ADN en la cola.

Extraído de Noroozi M., et all, 1998.
Grado Grupos Experimentales Porcentaje

0 Sin daño ≤5 %
1 Bajo Nivel de Daño 5 – 25 %
2 Daño Moderado 25 – 45 %
3 Daño Elevado 45 – 70 %
4 Daño Extremo ≥ 70 %
• Análisis de acuerdo al valor obtenido en el momento de cola (TM) y

momento de cola Olive (OTM)
Se determinó y analizó el momento de cola (TM) y el momento de cola

Olive (OTM), utilizando para ello los datos del cometa otorgados por el
software CaspLab.
LMNOPQR% × LMNO ST Uℎ
;4 =
100
TM = Momento de cola (Tail Moment).

Tail DNA % = Porcentaje de DNA en cola, pixeles.
Tail Length = Longitud de la cola, pixeles.
LMNOPQR% × 1LMNOXSMTY − ZSM[XSMTY9

W;4 =
100
59
OTM = Momento de cola Olive (Olive Tail Moment).
Tail DNA % = Porcentaje de DNA en cola, pixeles.
Tail MeanX = Centro de gravedad del DNA en la cola, pixeles.
Head MeanX = Centro de gravedad del DNA en la cabeza, pixeles.
2.8. FLUJOGRAMA DE ACTIVIDADES
60
Obtención y almacenamiento del Corryocactus brevistilus (Sancayo)
Pelado, picado y liofilizado de la pulpa
Determinación del contenido de ácido ascórbico Evaluación de la capacidad antioxidante del Determinación de la genotoxicidad del Corryocactus
del Corryocactus brevistilus (Sancayo) Corryocactus brevistilus (Sancayo) brevistilus por el Ensayo Cometa (Sancayo)
Preparación del extracto acuoso de Sancayo Preparación del extracto metanólico de Sancayo Preparación del extracto acuoso de Sancayo
Determinación Voltamétrica
Método DPPH Extracción de celulas mononucleares
Buffer acetato de sodio pH 4,7, 10 mL
Curva de Calibración: 0,02 - 0,04 mmol/L Preparación de los grupos experimentales y tratamientos
MUESTRA: Extracto de Sancayo, 0,5 mL
Preparación radical DPPH • 2,1 mmol/L GRUPO I: Extracto acuoso de Sancayo al 2 %
Solución estándar de ácido ascórbico, 0,2 mL
Solución Stock Trolox 0,2 mmol/L GRUPO II: Extracto acuoso de Sancayo al 0,2 %
MUESTRA: Extracto de Sancayo, 0,08 mL GRUPO III: Extracto acuoso de Sancayo al 0,02 %
GRUPO IV: Control positivo, H2O2, 150 umol

Determinación del contenido de polifenoles totales Método ABTS
del Corryocactus brevistilus (Sancayo) GRUPO V: Control negativo, medio RPMI 1640
Curva de Calibración: 0,02 - 0,2 mmol/L
Preparación del extracto metanólico de Sancayo Preparación de la solución madre: ABTS •+: Ensayo Cometa
ABTS y Persulfato de potasio (1:1)
Solución Stock Trolox 1 mmol/L Preparación de soluciones
Método Follin - Ciocalteu
Portaobjetos con agarosa NMP 1,5 %
Curva de Calibración: 4 - 8 mg/L
Muestras con agarosa LMP 0,75 %
Ácido Gálico 1000 ppm Método CUPRAC
Lisis: pH 10,0 x 18 h
Reactivo Follin - Ciocalteu, 0,25 mL
Curva de Calibración: 0,01 - 0,05 mmol/L Exposición Alcalina: pH mayor a13, 10 min
Carbonato de sodio 20 %, 2 mL
Cloruro de cobre (II) 12 mmol/L Corrida electroforética: 30 v, 246 mA, 20 min
MUESTRA: Extracto de Sancayo, 0,5 mL Neocuproína 75 mmol/L Neutralización: pH 7,5, 10 min
Acetato de amonio 1mol, pH 7 Fijación,10 min y Tinción 30 min

Solución Stock Trolox 1 mmol/L Vista en el microscopio

Análisis e interpretación de resultados
2.9. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Para los ensayos de determinación de ácido ascórbico y polifenoles totales se realizó

el promedio de las mediciones realizadas, desviación estándar, mediana, coeficiente
de variabilidad y valor mínimo y máximo de los resultados. A los ensayos de
actividad antioxidante y ensayo cometa, se realizó también cálculos de promedio y
desviación estándar, además de un Análisis de Varianza (ANOVA) con un nivel de
significancia del 95% (p<0.05) para evaluar si existe variabilidad en al menos uno de
los grupos analizados. Se hizo un Test de Tukey, para medir la variabilidad existente
entre los métodos o tratamientos realizados y un diagrama de Caja de Bigotes para la
comparación gráfica entre las medias de los métodos y/o tratamientos usados en el
desarrollo de Actividad Antioxidante y Ensayo Cometa.
61
CAPITULO III
RESULTADOS Y DISCUSION
En el presente estudio se evaluó el contenido de ácido ascórbico, polifenoles totales,

la actividad antioxidante con el método DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidracilo), ABTS
(Acido 2,2′-azino-bis-3-etilbenzotiazolin-6-sulfonic) y CUPRAC (Capacidad
antioxidante reductor de ion cúprico), además del efecto genotóxico del
Corryocactus brevistylus (sancayo) en linfocitos de sangre periférica.
Los frutos de Corryocactus brevistylus (sancayo) fueron recolectadas en el mercado

Andrés Avelino Cáceres y se almacenaron en refrigeración hasta el momento de su
uso. Se pelaron y cortaron en trozos medianos para luego liofilizarlos en el
Laboratorio de Ingeniería Alimentaria de la Universidad Nacional de San Agustín.
Para la identificación de la especie Corryocactus, se envió una muestra del fruto al
Herbarium Areqvipense (HUNSA) perteneciente al departamento de académico de
Biología de la Universidad Nacional de San Agustín, donde se identificó que la
especie corresponde al género Corryocactus brevistylus. En el ANEXO 7 se puede
observar la constancia expedida por el herbario en el que se indica el género y la
especie a la que corresponde el fruto estudiado.
Luego de liofilizar las muestras se almacenaron en bolsas de polipropileno con cierre

hermético en un ambiente en un ambiente libre de humedad y protegidas del calor
excesivo (Ver Figura Nº 20).
FIGURA Nº 20.: Liofilizado de Corryocactus brevistylus (Sancayo).
3.1. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO
De acuerdo al método voltamétrico se determinó la cantidad de ácido ascórbico

existente en la muestra de Corryocactus brevistylus liofilizada. Para ello se utilizó
62
un voltámetro con electrodo de gota de mercurio (DME) conocido también como
polarógrafo.
FIGURA Nº 21.: Curva polarográfica de la muestra de Corryocactus

brevistylus para la determinación de ácido ascórbico.
En el gráfico de la Figura Nº 21 se aprecia la curva polarográfica para la muestra

de Corryocactus brevistylus analizada por voltametría en la que se observan las
curvas de intensidad obtenida para la muestra de sancayo y el estándar de ácido
ascórbico.
En la Tabla Nº 13 se puede ver la concentración de ácido ascórbico (A.A.)

expresada como mg de ácido ascórbico/g de muestra liofilizada, además de su
desviación estándar (D. E.) y coeficiente de variabilidad (C. V.).
TABLA Nº 13.: Contenido de ácido ascórbico en Corryocactus brevistylus.
Muestra Peso (g) mg A.A./L mg A.A./g D. E. C. V.

1 0,1003 28,376 1,4188 − −
2 0,1005 28,902 1,4451 − −
3 0,1004 27,844 1,3922 − −
PROMEDIO 1,4187 0,0265 1,86%
63
La cantidad hallada de ácido ascórbico es comparada con la cantidad de ácido
ascórbico reportada en la bibliografía el cual corresponde a 37,58 mg A.A./100 g. de
muestra para la variedad de C. brevistylus brevistylus y 57,1 mg A.A./100 g. de
muestra para la variedad de C. brevistylus puquiensis. 106
La proporción de ácido ascórbico obtenida en la variedad de Caylloma mostró ser

mayor que lo reportado en la bibliografía, 141,87 mg A.A./100 g., para una muestra
liofilizada a comparación de las reportadas. Comparando además esta cantidad con el
contenido de ácido ascórbico de otros frutos, como la naranja (50 mg A.A./100 g), el
limón (45 – 50 mg A.A./ 100 g), la manzana ( 5 mg A.A./ 100 g) y la cereza (10 mg
A.A./100 g) se puede ver que el sancayo presenta una mayor cantidad de vitamina C
a excepción del camu camu, el cual posee una cantidad de 1445 mg A.A./ 100 g. 113
3.2. DETERMINACIÓN DE POLIFENOLES TOTALES.
Para la determinación de polifenoles totales en las muestras de sancayo, se empleo

el ensayo Follin-Ciocalteau. Este método es uno de los más usados actualmente para
la determinación de polifenoles totales por medio del espectrofotómetro.
En la Tabla Nº 14 se presentan los valores de absorbancia de la curva de calibración

de ácido gálico a 714 nm realizadas por triplicado.
Los datos de la Tabla Nº 14 fueron sometidos a un análisis de regresión lineal con el

fin de obtener una curva de calibración del método y la ecuación que vincule la
variable dependiente “y” (Absorbancia) con la variable independiente “x”
(concentración de ácido gálico mg/L). El valor de R2 nos indica cuanta es la
variabilidad en que la variable “y” puede ser explicada por la variable independiente
“x”.
TABLA Nº 14.: Datos de la curva de calibración para polifenoles totales
Concentración Absorbancia a 714 nm Absorbancia Desviación

Nº
(mg/L) 1 2 3 Promedio estándar
1 4 0,4125 0,4715 0,3924 0,4255 0,0411
2 5 0,5126 0,5726 0,5256 0,5369 0,0316
3 6 0,6322 0,6895 0,6229 0,6482 0,0361
4 7 0,7178 0,7957 0,6911 0,7349 0,0543
5 8 0,7941 0,9073 0,7674 0,8229 0,0743
64
0,9
0,8
0,7
0,6
Absorbancia
0,5
0,4
y = 0,0993x + 0,038
0,3 R² = 0,9960
0,2
0,1
0,0
0 2 4 6 8 10
mg de ácido gálico equivalente/L
FIGURA Nº 22.: Curva de calibración de ácido gálico.
En el gráfico de la Figura Nº 22 se presenta la recta promedio de regresión lineal

obtenida de las diferentes concentraciones de ácido gálico y el valor promedio de las
absorbancias medidas. Se obtuvo un coeficiente de determinación (r2) igual a 0,996;
una pendiente (m) de 0,0993 y un intercepto (b) de 0,038.
\ = 0,0993 + 0,038
Se puede observar que la ecuación obtenida es de orden lineal, ya que se obtiene un

coeficiente de determinación cercano a la unidad, indicando que existe una relación
directa entre la concentración de compuestos fenólicos en Corryocactus brevistylus y
su absorbancia.
La cantidad de polifenoles totales encontrados en la muestra se expresaron como mg

GAE/g de liofilizado de Corryocactus brevistylus. En la Tabla Nº 15 se muestran
los resultados obtenidos de absorbancia y concentración de la muestra de sancayo
por triplicado, el promedio de las mismas de 6,4083 mg GAE/g, una desviación
estándar de 0,1318 y un coeficiente de variabilidad de 2,06 %.
TABLA Nº 15.: Contenido de polifenoles totales en Corryocactus brevistylus.
Muestra Peso (g) Absorbancias mg GAE/g D. E. C. V.

1 0,1006 0,6656 6,2825 − −
2 0,1008 0,6783 6,3970 − −
3 0,1011 0,6951 6,5453 − −
PROMEDIO 6,4083 0,1318 2,06%
65
La cantidad obtenida de polifenoles totales es comparada con el estudio realizado en
la variedad de Corryocactus brevistylus de Ayacucho, la cual para una muestra con
solvente etanólico en proporción p/v 1:10, se obtuvo un valor de 10,12 mg GAE/g,
que comparado con el valor obtenido en este trabajo (6,4083 mg GAE/ g) se encontró
que la variedad de Caylloma, posee una menor cantidad de polifenoles totales que la
variedad de Ayacucho. Esto puede ser debido a múltiples factores, desde el
tratamiento de la muestra y condiciones de trabajo en el laboratorio, hasta las
condiciones climáticas de la zona de origen. 54
El uso del metanol como solvente de extracción para la determinación de fenoles

totales en frutos con antecedentes de contener vitamina C y polifenoles, ha
demostrado ser efectivos en productos tales como: guayaba, tomate, tuna,
aguaymanto, papaya, etc. en los cuales usaban mezclas con etanol, como es el caso
de la guayaba, o usaban simplemente el metanol para la preparación de extractos,
como es el caso de las otras especies. 74,78
Si comparamos el contenido de polifenoles totales encontrados en el fruto Sancayo,

podemos ver que es mucho mayor (640,83 mg GAE/ 100 g) que otros frutos con
antecedentes de poseer cantidades importantes de polifenoles totales como son: la
mandarina (242,6 mg GAE/ 100 g), manzana (426,7 mg GAE/ 100 g) e incluso la
ciruela (376,5 mg GAE/ 100 g), pero que al igual que el contenido en ácido
ascórbico, el fruto camu camu posee una cantidad mucho mayor rondando un valor
entre los 1188,573 y 1385,549 mg GAE/ 100 g. 113

Para la determinación de la actividad antioxidante del Corryocactus brevistylus,

utilizando muestras del fruto de sancayo liofilizadas, se utilizaron los métodos
colorimétricos DPPH, ABTS y CUPRAC.
3.3.1 MÉTODO DPPH (2,2-DIFENIL-1-PICRILHIDRAZIL).
De acuerdo al método desarrollado por DPPH (2.5.1), se obtuvieron los valores de

las absorbancias para la curva estándar de Trolox a una longitud de onda de 515 nm
que pueden ser apreciados en la Tabla Nº 16.
66
TABLA Nº 16.: Datos de la curva de calibración para Trolox - DPPH
Absorbancia a 515 nm Absorbancia Blanco: 1,0814

Absorbancia %INHIBICION Desviación
mmol/L PROMEDIO
1 2 3 1 2 3 estándar
0,020 0,7016 0,6987 0,6806 35,1211 35,3893 37,0631 35,8578 1,0523
0,025 0,5686 0,5700 0,5753 47,4200 47,2905 46,8004 47,1703 0,3268
0,030 0,4075 0,4127 0,4139 62,3174 61,8365 61,7255 61,9598 0,3146
0,035 0,3105 0,3016 0,2999 71,2872 72,1102 72,2674 71,8883 0,5264
0,040 0,1798 0,1559 0,1607 83,3734 85,5835 85,1396 84,6988 1,1691
Con los datos obtenidos se obtuvo el gráfico de la Figura Nº 23 el cual corresponde a

la curva de calibración de la concentración de Trolox expresada en mmol TE/L vs %
de inhibición hallado de acuerdo a la ecuación existente en los cálculos del punto
2.5.2.
90,00
80,00
70,00
60,00
% Inhibición
50,00
y = 2448x - 13,125
40,00
R² = 0,9974
30,00
20,00
10,00
0,00
0,000 0,010 0,020 0,030 0,040 0,050
mmol Trolox equivalente /L
FIGURA Nº 23.: Representación de la curva de calibración de Trolox – DPPH.
La Tabla Nº 17 muestra el resumen de los resultados obtenidos de la actividad

antioxidante por el método DPPH de la muestra liofilizada de Corryocactus
brevistylus tratada previamente según el punto 2.3.2.
67
TABLA Nº 17.: Actividad antioxidante del sancayo por DPPH.
Muestra Peso (g) Absorbancia % Inhibición umol TE/ g D. E. C. V.

1 0,1007 0,4628 57,2036 89,1541 − −
2 0,1012 0,4541 58,0081 89,7284 − −
3 0,1005 0,4400 59,3120 92,0096 − −
PROMEDIO 58,1746 90,2974 1,5104 1,67%
3.3.2 MÉTODO ABTS (ACIDO 2,2′-AZINO-BIS-3-ETILBENZOTIAZOLIN-6-

SULFONICO).
Utilizando el método desarrollado por ABTS (2.5.3), se obtuvieron los datos que se
pueden apreciar en la Tabla Nº 18, en los cuales se observan las absorbancias de la
curva estándar de Trolox medida a una longitud de onda de 734 nm.
TABLA Nº 18.: Datos de la curva de calibración para Trolox – ABTS.
Absorbancia a 734 nm Absorbancia Blanco : 1,1032

Desviación
mmol/L 1 2 3 1 2 3 PROMEDIO
estándar
0,02 0,9424 0,9399 0,9413 0,1608 0,1633 0,1619 0,1620 0,001
0,05 0,9131 0,9139 0,9131 0,1901 0,1893 0,1901 0,1898 0,000
0,10 0,8529 0,8527 0,8609 0,2503 0,2505 0,2423 0,2477 0,005
0,15 0,7889 0,7957 0,8016 0,3143 0,3075 0,3016 0,3078 0,006
0,20 0,7330 0,7301 0,7408 0,3702 0,3731 0,3624 0,3686 0,006
Con los valores de absorbancia y concentración de cada patrón de Trolox, se armó

una curva de calibración como se muestra en el gráfico de la Figura Nº 24. La figura
muestra una curva correspondiente a las concentraciones de Trolox expresada como
mmol TE/L vs la absorbancia de cada una.
68
0,4000
0,3500
0,3000
Absorbancia 0,2500
0,2000
0,1500 y = 1,1581x + 0,1347

R² = 0,9987
0,1000
0,0500
0,0000
0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25
FIGURA Nº 24.: Representación de la curva de calibración de Trolox – ABTS.
En la Tabla Nº 19 se observan los resultados obtenidos de actividad antioxidante por

el método ABTS para la muestra de Corryocactus brevistylus.
TABLA Nº 19.: Actividad antioxidante del sancayo por ABTS
Muestra Peso (g) Absorbancia Absorbancia 2 umol TE/ g D. E. C. V.

1 0,1005 0,8620 0,2412 152,5058 − −
2 0,1010 0,8597 0,2435 155,0280 − −
3 0,1006 0,8601 0,2431 155,0722 − −
PROMEDIO 0,2426 154,2020 1,4692 0,95%
3.3.3 ENSAYO CUPRAC (CAPACIDAD ANTIOXIDANTE REDUCTOR DE ION

CÚPRICO).
Luego de haberse realizado el ensayo CUPRAC (2.5.5) se obtuvieron los resultados

que se muestran en la Tabla Nº 20, correspondientes a las concentraciones en
umol/L, y las absorbancias de cada uno de los patrones que forman la curva estándar
de Trolox, medida a una longitud de onda de 450 nm.
69
TABLA Nº 20.: Datos de la curva de calibración para Trolox – CUPRAC.
Absorbancia a 450 nm Absorbancia del Blanco: 0,1357

Desviación
mmol/L 1 2 3 Promedio
estándar
0,01 0,1429 0,1478 0,1389 0,1432 0,004
0,02 0,2753 0,3001 0,324 0,2998 0,024
0,03 0,4518 0,4774 0,5431 0,4908 0,047
0,04 0,5637 0,6406 0,6728 0,6257 0,056
0,05 0,7476 0,794 0,8396 0,7937 0,046
Se armó una curva de calibración de Trolox, con los datos de la Tabla anterior como
se muestra en el gráfico de la Figura Nº 25, donde se aprecia la curva en relación a
mmol TE/L vs absorbancia de cada patrón.
0,9000
0,8000
0,7000
0,6000
Absorbancia
0,5000
0,4000
0,3000 y = 16,27x - 0,0175
R² = 0,9980
0,2000
0,1000
0,0000
0 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06
FIGURA Nº 25.: Representación de la curva de calibración de Trolox –

CUPRAC.
En la Tabla Nº 21 se pueden ver los resultados obtenidos de la actividad antioxidante

por el ensayo CUPRAC a partir de la muestra de sancayo.
70
TABLA Nº 21.: Actividad antioxidante del sancayo por CUPRAC.
Muestra Peso (g) Absorbancia umol TE/ g D. E. C. V.

1 0,1008 0,4707 74,4200 − −
2 0,1009 0,4975 78,4275 − −
3 0,1010 0,4912 77,3914 − −
PROMEDIO 76,7463 2,0802 2,71%
3.3.4 COMPARACIÓN DE LOS TRES METODOS QUE DETERMINAN LA

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DEL Corryocactus brevistylus.
La actividad antioxidante es determinada por la medición en moles equivalentes, de

determinados radicales libres atrapados por un antioxidante existente en una muestra.
Debido a que la capacidad antioxidante total de una muestra es determinada por la
interacción sinérgica entre diferentes compuestos, así como por el modo de acción
concreto de cada uno de ellos, es necesario combinar más de un método para evaluar
de manera correcta la actividad antioxidante de una muestra. 66
En la Tabla Nº 22 se muestran los resultados de la actividad antioxidante del

Corryocactus brevistylus a través de los métodos DPPH, ABTS y CUPRAC.
TABLA Nº 22.: Resultados de la actividad antioxidante a través de los métodos

DPPH, ABTS y CUPRAC.
METODOS
ESTADISTICOS
DPPH ABTS CUPRAC
Número de Muestras 3 3 3
Promedio +/- DS 90,2974 154,202 76,7463
Desviación Estándar 1,5104 1,4692 2,0802
Coeficiente Variabilidad 1,67% 0,95% 2,71%
T-Student 0,6545 0,3420 0,4666
Distribución T 0,5800 0,7650 0,6867
Se puede apreciar que con el método DPPH se obtuvo un promedio de 90,2974 umol
TE/gr, con una desviación estándar de 1,5104 y una variabilidad del 1,67%,
indicándonos una alta homogeneidad entre sus valores calculados. El método ABTS
mostró un valor promedio de actividad antioxidante más alto que el anterior método,
con un valor de 154,202 umol TE/gr, una desviación estándar de 1,4692 y un
coeficiente de variabilidad determinado de 0,95% mostrando de igual manera la alta
homogeneidad en sus valores encontrados. Finalmente, se observa que con el ensayo
71
CUPRAC se obtuvo el promedio más bajo en comparación con los otros métodos
con un valor promedio de 76,7463 umol TE/gr, una desviación estándar de 2,0802 y
un coeficiente de variabilidad del 2,71%.
Además, en la Tabla Nº 22 se puede apreciar el valor del Test T– Student para cada
uno de los grupos estudiados, encontrándose que para los tres métodos el valor de la
distribución es mucho mayor que el valor 0,05, por lo que podemos decir que entre
los valores del mismo grupo no existe diferencia estadísticamente significativa entre
la media de la población (el promedio de las tres muestras para cada método) y el
valor tomado como la mediana de la muestra (el mayor valor de las tres muestras de
cada grupo)
Haciendo un test de ANOVA (Tabla Nº 23), se observa que los métodos muestran
diferencias altamente significativas (p<0,05) entre los valores de la actividad
antioxidante obtenida con los tres métodos.
TABLA Nº 23.: ANOVA para la comparación de métodos sobre la actividad

antioxidante.
Fuentes de Suma de Grados de Cuadrado F

F P
Variabilidad Cuadrados Libertad Medio Teórico
Métodos 10266,8155 2 5133,4078 1756,6515 0,0000 5,1433
Error 17,5336 6 2,9223 − − −
Total 10284,3491 8 − − − −
Se comparó las medias obtenidas usando el test de Tukey, cuyos resultados se

muestran en la Tabla Nº 24. Al respecto se demostró que las medias de los tres
métodos muestran diferencia significativa entre sí. El método de ABTS, obtuvo los
valores más elevados en umol TE/gr con un valor promedio de 154,202 umol TE/g,
seguido por el método de DPPH cuyo promedio para la actividad antioxidante es
90,297 umol TE/gr y por último el ensayo CUPRAC con el cual se obtuvo el
promedio más bajo de actividad antioxidante, 76.746 umol TE/gr.
TABLA Nº 24.: Test de Tukey para la comparación de métodos sobre la

actividad antioxidante.
Métodos Casos Media Grupos Homogéneos

CUPRAC 3 76,746 A
DPPH 3 90,297 B
ABTS 3 154,202 C
72
174
154
u m o lT E /g
134
114
94
74
DPPH ABTS CUPRAC
Metodos
FIGURA Nº 26.: Gráfico de caja y bigotes de los métodos DPPH, ABTS y

CUPRAC
Estos resultados pueden ser evidenciados en grafico de la Figura Nº 26 a través de un

grafico de Caja y Bigotes, elaborado con el software Statgraphics en donde se
aprecian los promedios y la mediana de cada valor obtenido por cada método.
De acuerdo al trabajo realizado por Matos C. et al., en la variedad de Ayacucho de

Corryocactus brevistylus se encontró valores de actividad antioxidante entre 266,32
y 439, 11 ug Trolox/g muestra a través del método DPPH. 54
Diversos trabajos han demostrado la variabilidad entre los resultados obtenidos por
los diversos métodos para la determinación de la actividad antioxidante, siendo
diferente el comportamiento del método de acuerdo a la muestra medida. Repo et al.,
2008, en su trabajo para la determinación de la actividad antioxidante de frutas
nativas, trabajó con los métodos DPPH y ABTS usando diversos frutos como el
aguaymanto, el cual mostró un valor de 1060,0 g TE/g utilizando el método ABTS,
mientras que a través del método DPPH, obtuvo un valor de 729,0 g TE/g.74
De la misma forma, Kuskoski et al., 2005, demostró que la actividad antioxidante

medida con el método DPPH, 53,2 umol TE/g para la acerola, en diferentes muestras
de pulpa de frutas, era ligeramente menor que la medida a través del método ABTS,
66,5 umol TE/g de acerola. Así mismo, en el trabajo realizado por Li et al., 2008, se
observó que los valores obtenidos para el ensayo CUPRAC, 1328,3 umol TE/g,
fueron considerablemente mayores a comparación que los obtenidos por el método
ABTS, 664,2 umol TE/g, para un estudio comparativo de actividad antioxidante de
las semilla de Vitis vinífera (uva).48, 46
73
El mecanismo de acción antioxidante de los extractos fue por transferencia de
electrones para los tres métodos, ya sea por reacción directa con radicales orgánicos
o por reducción de iones (como en el ensayo CUPRAC que reduce el Cu (II) a Cu (I)
por los oxidantes presentes). 71 El uso múltiple del ensayo ABTS, confiere múltiples
ventajas como, el presentar varios máximos de absorción y una buena solubilidad,
además de permitir el estudio de compuestos de naturaleza lipofílica e hidrofílica. 46
3.3.5 INFLUENCIA DEL ÁCIDO ASCÓRBICO Y POLIFENOLES TOTALES

EN LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DEL Corryocactus brevistylus.
Varios componentes de los alimentos como carotenoides, vitamina C, vitamina E,

compuestos fenólicos y sus interacciones, contribuyen en diferente medida en la
actividad antioxidante de los alimentos por lo que es difícil medir su poder
antioxidante total por componentes activos individuales.108 Debido a ello es que solo
se puede ver la influencia de los diferentes componentes antioxidantes de un
producto natural, a través de las características que este presenta en relación a su
poder antioxidante.
Al comparar la cantidad de ácido ascórbico obtenida en la muestra liofilizada de

Corryocactus brevistylus con la cantidad de polifenoles totales hallada, se encontró
que existe una mayor cantidad de polifenoles totales, 6,4083 mg equivalentes de
ácido gálico (GAE)/g de muestra, a comparación de la cantidad de ácido ascórbico
hallada, 1,4187 mg ácido ascórbico/g de muestra. Esto nos puede dar a entender que,
habiendo una mayor cantidad de polifenoles totales puede existir a su vez una mayor
influencia de éste en la actividad antioxidante del Sancayo.
Para poder dar un mayor soporte a la actividad antioxidante del ácido ascórbico y los
polifenoles totales, se reviso otros trabajos de investigación en los cuales se afirma
de igual manera la influencia de los polifenoles totales en la actividad antioxidante.
De acuerdo con el trabajo realizado por Deighton et al.,se ha reportado que hay una
relación lineal entre la actividad antioxidante por el método FRAP y la cantidad de
fenoles totales donde el contenido de ácido ascórbico contribuye mínimamente en el
potencial antioxidante del género Rubus perteneciente a la zarzamora. De la misma
manera, en el trabajo realizado por Rekha et al., se demostró la actividad
antioxidante de diferentes zumos de fruta, los cuales contenían un alto contenido en
polifenoles totales a los que se les atribuyó su influencia, ya que a una mayor
cantidad de polifenoles totales, había una mayor capacidad antioxidante. El estudio
realizado por Ghafar et al., 2010 demostró que existe una relación directa entre la
actividad antioxidante de especies cítricas y contenidos fenólicos. 107,109, 110
A pesar de todos estos trabajo que relacionan el contenido de polifenoles en la

actividad antioxidante, el investigador Rekha et al. recomienda considerar de igual
74
manera la presencia del ácido ascórbico como contribuyente a los compuestos
polifenólicos cuando se lo relaciona con la actividad antioxidante. 109

brevistylus POR EL ENSAYO COMETA
3.4.1 VIABILIDAD CELULAR
Luego de haber extraído las células mononucleares de la sangre periférica, se

evaluó la viabilidad de las células por la técnica de exclusión con azul de Tripan
0,4% antes de someterlas al tratamiento con el extracto. De la prueba se obtuvo un
valor promedio de 94,17 % con una desviación estándar de 2,0294, mostrándonos
que las células se encuentran en su mayoría viables para el ensayo.
3.4.2 CUANTIFICACION DEL DAÑO DE DNA
Una vez realizado el ensayo cometa, se examinó las muestras preparadas por el
ensayo cometa usando un microscopio óptico con un aumento de 40 X. Se
analizaron 50 cometas al azar por cada muestra, en donde se les asigno un grado
de daño de una escala de 0 a 4 de acuerdo al % de DNA existente en la cola de los
cometas. Para validar este sistema, las medidas del DNA fueron analizadas con el
software CaspLab.
• Análisis por Unidades Arbitrarias
La Tabla Nº 25 y la Figura Nº 27 nos muestran los resultados en unidades

arbitrarias, de las pruebas realizadas con diferentes concentraciones de
Corryocactus brevistylus (sancayo), control negativo y control positivo (peróxido
de hidrogeno, 100 umol).
En los ANEXOS 2, 3, 4, 5 y 6 se pueden apreciar los porcentajes de daño en el

DNA de las células para cada uno de los tratamientos, siendo las pruebas
realizadas por triplicado.
Se evidencia un incremento lineal en el promedio de las unidades arbitrarias en

función a la concentración de Corryocactus brevistylus utilizada. (Tabla Nº 25 y
Figura Nº 27). El efecto genotóxico de los dos primeros tratamientos es casi el
doble (25,00 ± 12,92) y el triple (38,33 ± 10,60) con respecto al control negativo
(12,67 ± 18,48). Sin embargo, con el tratamiento que contenía la concentración
más alta, se observa que el efecto genotóxico es casi similar al control positivo con
peróxido de hidrógeno 150 umol, (70,30 ± 7,55 vs 78,33 ± 9,70).
75
TABLA Nº 25.: Efecto del Corryocactus brevistylus en linfocitos de sangre
periférica.
Porcentaje del daño en el DNA
Tratamiento No dañadas Nivel Bajo Nivel Medio Nivel Alto Nivel Muy
Daño Daño Daño Alto Daño Total (UA)
(≤ 5%)
(5-25%) (25-45%) (45-70%) (≥70%)
0,02% 28,33 ± 0,58 19,00 ± 1,00 2,00 ± 1,00 0,67 ± 0,58 0,00 ± 0,00 25,00 ± 12,92
0,20% 21,67 ± 2,08 21,33 ± 1,53 4,67 ± 1,53 1,67 ± 0,58 0,67 ± 0,58 38,33 ± 10,60
2% 9,30 ± 1,15 18,00 ± 2,00 17,30 ± 2,08 3,70 ± 2,08 1,70 ± 1,15 70,30 ± 7,55
150 umol
4,33 ± 3,21 19,00 ± 4,36 22,00 ± 1,00 3,33 ± 1,53 1,33 ± 0,58 78,33 ± 9,70
H2O2
Control
43,00 ± 1,73 3,33 ±0,57 2,00 ± 1,00 1,33 ± 0,58 0,33 ± 0,58 12,67 ± 18,48
Negativo
80,00
70,00
Unidades Arbitrarias
60,00
50,00 0,02%
40,00 0,20%
30,00
2%
20,00
10,00 H2O2
0,00 Control Negativo
FIGURA Nº 27.: Unidades arbitrarias de genotoxicidad registrada en linfocitos

de sangre periférica para los diferentes tratamientos con Corryocactus
brevistylus.
Para el control negativo, los leucocitos aislados fueron colocados en medio RPMI
y luego fueron incubados con PBS 1X a 37ºC. Noroozi M., et al., 1998, utilizó
linfocitos de sangre periférica, los cuales fueron aislados e incubados con PBS 1X
por 30 min a 37 ºC, obteniendo como resultado valores entre 16,0 ± 2,5 y 7,5 ± 1,2
unidades arbitrarias. 61
76
El grupo de células que recibió el mayor daño genotóxico, fue el grupo tratado con
peróxido de hidrógeno (UA = 78,33 ± 9,70), sin embargo, comparando dicho
resultado con el obtenido por Noroozi et al., el cual también utilizó peróxido de
hidrógeno 100 umol, se vio que este último obtuvo un daño genotóxico 3 veces
mayor (243,6 ± 12,7), para un conteo de 100 células por tratamiento. En las pruebas
realizadas en el presente trabajo se realizó un conteo de 50 células por muestra, razón
a la que se le puede atribuir la diferencia entre los resultados obtenidos. El conteo de
50 células por muestra también fue realizado en el trabajo de Wiklund et al., 2002, en
el cual utiliza 5 animales por grupo de estudio, además de que es mencionado por
Gupta C. R. en su libro titulado Veterinary Toxicology en el cual lo sitúa como la
mínima cantidad a ser considerada para realizar un conteo por muestra, ya sea de
forma manual o a través de un software.98,33
A pesar de que existen diferentes genotoxinas para las estudios del ensayo cometa in
vitro, como es el caso del benzopireno, la metil-nitro-nitro-nitroso-guanidina
(MNNG) y los rayos X, los cuales otorgan buenos resultados en cuanto a controles
positivos se refiere, el uso de peróxido de hidrógeno es uno de los más utilizados y
citados, por diversos investigadores en el área como Kaur et al., 2009, Holz et al.,
1995, Singh et al., 1988, entre otros, en los estudios de genotoxicidad con
linfocitos.38,45,41,83
• Análisis de acuerdo al porcentaje de ADN en la cola.
Para la medición del porcentaje del DNA en cola se utilizaron las mismas
imágenes observadas para las unidades arbitrarias. En la Tabla Nº 26 se detallan
los resultados obtenidos mediante el programa CaspLab, para los tratamientos con
el extracto acuoso de Corryocactus brevistylus, y su correspondiente control
negativo y positivo.
De acuerdo a los datos, se presentó una diferencia significativa entre los

porcentajes de ADN en cola del control negativo y los tratamientos al 0,02%, 0,2%
y al 2%. Además, se encontró que el tratamiento al 2%, posee un porcentaje
promedio de ADN en cola que ronda entre 27,1752 y 22,7929 los cuales son muy
cercanos a los valores obtenidos con el control positivo (entre 26,0933 y 25,7807).
(Ver Tabla Nº 26).
77
TABLA Nº 26. Porcentaje promedio de ADN en cola registrada en grupos de linfocitos de
sangre periférica tratadas con diferentes concentraciones de Corryocactus brevistylus y su
correspondiente control negativo y positivo.
GRUPOS TailDNA% HeadDNA% CometLength TailLength

Nº de ensayo
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
por tratamiento
0,02% 8,16 8,26 6,75 91,84 91,74 93,25 66,00 65,00 64,00 14,00 14,00 12,00
0,20% 17,06 13,95 14,97 82,94 86,05 85,03 77,00 74,00 75,00 30,00 25,00 26,00
2% 27,18 23,77 22,79 72,82 76,23 77,21 89,00 85,00 83,00 47,00 41,00 39,00
Control
5,08 5,15 4,17 94,92 94,85 95,83 63,00 60,00 62,00 10,00 7,00 7,00
Negativo
Control
26,03 26,09 25,78 73,97 73,91 74,22 88,00 89,00 89,00 46,00 47,00 46,00
Positivo
El efecto genotóxico de los tres tratamientos empleados muestra diferencias

notables. El grupo control negativo, como se esperaba, no presenta efecto
genotóxico (4,80 ± 0,54 y un nivel de daño = 0), mientras que el grupo tratado con
peróxido de hidrogeno, control positivo, manifestó la mayor genotoxicidad (25,97
± 0,17 y un nivel de daño = 2). Los tres grupos restantes, tratados con extractos
acuosos crecientes de Corryocactus brevistylus, revelaron una dependencia directa
del daño genético con el tratamiento administrado; sin embargo, a pesar del daño
genético existe, este es considerado leve para las dos primeras dosis (7,72 ± 0,85 y
15,32 ± 1,59 ambas con un nivel de daño = 1), siendo considerada únicamente el
tercer tratamiento (24,58± 2,30 nivel de daño = 1) como genotóxico, igual que el
control positivo (25,97± 0,17 nivel de daño = 2). En la Tabla Nº 27 y la Figura Nº
28 se muestra el porcentaje promedio global de los tres tratamientos con
Corryocactus brevistylus y su correspondiente control negativo y positivo.
TABLA Nº 27.: Porcentaje de ADN en cola y nivel de daño registrados en

linfocitos de sangre periférica de los tres tratamientos.
Desviación
Tratamiento Promedio Nivel de Daño
Estándar
0,02% 7,72 0,85 1
0,20% 15,32 1,59 1
2% 24,58 2,30 1
150 umol H2O2 25,97 0,17 2
Control Negativo 4,80 0,54 0
78
30,00
25,00
Porcentaje de ADN
20,00
0,02%
15,00
0,20%
10,00 2%
5,00 H2O2
0,00 Control Negativo
FIGURA Nº 28.: Porcentaje de ADN en cola registrada en linfocitos de sangre

periférica expuesta a los tres tratamientos.
La Tabla Nº 28 muestra el análisis de varianza realizado en los promedio de DNA de

cola para los tres tratamientos con Corryocactus brevistylus y los controles positivo y
negativo. Se determinó que existen diferencia estadísticamente significativa entre las
medias de los 5 grupos, de acuerdo al valor F obtenido, 155,3919, y de acuerdo al
valor de P, el cual fue mucho menor que el límite de 0,05, a un nivel de confianza del
95 %.
TABLA Nº 28.: Tabla ANOVA para los porcentajes de DNA en cola hallados
en las concentración del 0,02%, 0,2% y 2%, y los controles positivo y
negativo.
Fuente de Suma de Grados de Cuadrado F

F P
Variabilidad cuadrados libertad Medio Teórico
Entre grupos 1100,6375 4 275,1594 155,3919 0,0000 3,4780
Dentro de los
17,7074 10 1,7707 − − −
grupos
Total 1118,3450 14 − − − −
De acuerdo al resultado obtenido en el ANOVA (Tabla Nº 28), se realizó un Test de

Tukey en el cual se comparó las medias de cada tratamiento y se determinó cuales de
ellas eran significativamente diferentes entre sí. En la Tabla Nº 29 se observa que se
han identificado tres grupos homogéneos para este test, en las cuales se muestra que
79
no existe diferencia estadísticamente significativa entre aquellos niveles que
compartan un mismo grupo, como es el caso del control negativo y el tratamiento al
0,02%, además del tratamiento al 2% y el control positivo.
TABLA Nº 29.: Test de Tukey para la comparación de los tratamientos con

Corryocactus brevistylus y los controles negativo y positivo.
Tratamiento Casos Media Grupos Homogéneos

C. Negativo 3 4,7986 A
0,02% 3 7,7227 A
0,20% 3 15,3239 B
2,00% 3 24,5788 C
C. Positivo 3 25,9678 C
Los resultados obtenidos pueden ser evidenciados la Figura Nº 29 a través de un

grafico de caja y bigotes elaborado con el software Statgraphics, en donde se
aprecian los promedios y la mediana de los porcentajes de DNA en cola (Tail DNA
%) de cada tratamiento.
30
25
20
T a il D N A %
15
10
0
0,02% 0,20% 2,00% C. Negativo C. Positivo
Tratamientos
FIGURA Nº 29.: Gráfico de caja y bigotes para el porcentaje de ADN en cola

registrada en linfocitos de sangre periférica expuesta a los tres tratamientos.
Existen números trabajos en los cuales se representa los resultados obtenidos en el

ensayo cometa a través del porcentaje de DNA entre los cuales podemos
mencionar al trabajo de Vela R., en el que se determina el potencial genotóxico de
las nanopartículas de plata por diversos estudios incluido el ensayo cometa, en el
cual se expresa sus resultados de acuerdo al % de DNA presente en la cola de los
80
cometas analizados para las diversas concentraciones de su muestra y los controles
positivo y negativo.93
• Análisis de acuerdo al valor obtenido en el momento de cola (TM) y momento

de cola Olive (OTM)
Se realizó la medición del momento de cola (TM) y el momento de cola Olive

(OTM) para los cometas de cada tratamiento con el software CaspLab y se analizó
la relación existente entre ellos con respecto a cada tratamiento. (Ver Tabla Nº 30).
Se realizó la comparación del efecto genotóxico del extracto acuoso de

Corryocactus brevistylus al 0,02%, 0,2% y 2% y su correspondiente control
positivo y negativo. En el gráfico de la Figura Nº 30 se puede apreciar la relación
existente entre los resultados obtenidos en el momento de cola (Tail Moment -
TM) y el momento de cola Olive (Olive Tail Moment - OTM) para los tres
tratamientos con sancayo.
TABLA Nº 30.: Promedios globales del momento de cola (TM) y momento de

cola Olive (OTM) registradas en los cometas analizados por el software
CaspLab.
GRUPOS Tail Moment - TM Olive Tail Moment - OTM

Nº de ensayo por
1 2 3 Promedio 1 2 3 Promedio
tratamiento
0,02% 2,13 2,55 2,14 2,27 ± 0,24 3,02 3,47 2,53 3,01 ± 0,47
0,20% 8,82 6,98 6,80 7,53 ± 1,12 7,18 5,65 6,32 6,38 ± 0,76
2% 18,52 12,64 11,43 14,20 ± 3,80 11,44 10,20 9,71 10,45 ± 0,89
Control Negativo 2,40 1,14 1,40 1,65 ± 0,66 2,12 1,88 1,55 1,85 ± 0,29
H2O2, 150 umol 15,74 13,61 13,78 14,37 ± 1,18 11,30 11,23 11,13 11,22 ± 0,08
81
16,0000
14,0000
12,0000
10,0000
Pixeles
8,0000 TM
6,0000 OTM
4,0000
2,0000
0,0000
FIGURA Nº 30.: Efecto genotóxico del extracto acuoso de Corryocactus

brevistylus al 0,02%, 0,2% y 2% en células mononucleares mediante el momento
de cola (TM) y momento de cola Olive (OTM).
Los valores de TM son mayores que los valores obtenidos en OTM para los grupos
que obtuvieron los valores más altos en los tratamientos, como al 0,2%, 2% y el
control positivo, mientras que para los que obtuvieron valores bajos, como 0,02%
y el control negativo, poseen valores de OTM ligeramente mayores que los valores
de TM.
sus controles positivo y negativo usando el momento de cola (TM) hallados
con el software CaspLab.

F P
Entre grupos 457,2343 4 114,3086 32,5444 0,0000 3,4780
Dentro de los
35,1239 10 3,5124 − − −
grupos
Total 492,3582 14 − − − −
En la Tabla Nº 31, se observa el análisis de varianza (ANOVA) entre los

promedios de momento de cola (TM) de los tres tratamientos y los controles
negativo y positivo. En dicha tabla se puede ver que existe diferencia significativa
en por lo menos una de la media de los cinco
cinco grupos, de acuerdo al análisis del
valor F, el cual es menor que el F teórico y el valor de P que es menor que el limite
0,05, a un nivel de confianza del 95%.
82
Se realizó una comparación múltiple para determinar cuáles medias son
significativamente diferentes de otras a través del Test Tukey. Se identificaron tres
grupos homogéneos, entre los tratamientos que la componen, pero con diferencias
estadísticamente significativas entre ellos, como se aprecia en la Tabla Nº 32. Estos
están formados por: el control negativo y el tratamiento al 0,02% perteneciente al
grupo A, el tratamiento al 2% y el control positivo (peróxido de hidrogeno a 100
umol) perteneciente al grupo C, y por último el tratamiento al 0,2%, perteneciente al
grupo B.
sus controles positivo y negativo de acuerdo a las medias del momento de cola
(TM) hallados con el software CaspLab.
Tratamiento Casos Media Grupos Homogéneos

0,02% 3 2,2717 A
0,20% 3 7,5346 B
2,00% 3 14,195 C
En el gráfico de la Figura Nº 31 se muestra la distribución de las medias de los

valores obtenidos para el momento de cola (TM) entre el tratamiento al 0,02%, 0,2%
y al 2% y los controles positivo y negativo, a través de un gráfico de caja y bigotes
elaborado con el software Statgraphics.
20
16
Tail Moment
12
0
Tratamiento
FIGURA Nº 31.: Gráfico de caja y bigotes para las medias del momento de
cola (Tail Moment) obtenidos en el tratamientos al 0,02%, 0,2% y 2% además
de los controles negativo y positivo.
83
Así mismo se hizo un análisis de varianza para los valores de OTM de los cometas
analizados con el software CaspLab para los 5 tratamientos (Ver Tabla Nº 33). Se
demuestra que hay diferencia estadísticamente significativa entre al menos una de
las medias de los 5 tratamientos analizados de acuerdo al valor-P hallado, el cual
es menor al 0,05, y al valor de F, el cual muestra ser mayor que el F teórico con
un nivel de confianza del 95%.
TABLA Nº 33: Tabla ANOVA para los tratamientos al 0,02%, 0,2% y 2%, y
sus controles positivo y negativo usando el momento de cola olive (OTM)
hallados con el software CaspLab.

F P
Entre grupos 215,0351 4 53,7588 159,5011 0,0000 3,4780
Dentro de los
3,3704 10 0,3370 − − −
grupos
Total 218,4055 14 − − − −
En la Tabla Nº 34 se observa el Test de Tukey realizado con las medias de los

valores obtenidos para el momento de cola olive (OTM) de los 5 tratamientos. Al
igual que las medias correspondientes al momento de cola (TM) de los mismos
tratamientos, se identificó tres grupos homogéneos los cuales no muestran diferencia
estadísticamente significativa entre los que la componen, pero sí entre otros grupos.
sus controles positivo y negativo de acuerdo a las medias del momento de cola
Olive (OTM) hallados con el software CaspLab.
Tratamientos Casos Media Grupos Homogéneos

0,02% 3 3,0066 A
0,20% 3 6,3838 B
2,00% 3 10,4487 C
En el gráfico de la Figura Nº 32 se muestra la distribución de las medias de los

valores obtenidos para el momento de cola olive (OTM) entre el tratamiento al
0,02%, 0,2% y al 2% y los controles positivo y negativo, a través de un gráfico de
caja y bigotes elaborado con el software Statgraphics.
84
12
10
O live Tail M om ent
0
Tratamiento
FIGURA Nº 32.: Gráfico de caja y bigotes para las medias del momento de
cola Olive (Olive Tail Moment) obtenidos en el tratamientos al 0,02%, 0,2% y
2% además de los controles negativo y positivo.
Al igual que el gráfico de la Figura Nº 31, se observa en la Figura Nº 32 que a un

mayor valor del momento de cola Olive (OTM), y por ende también un mayor valor
de momento de cola (TM), existirá una mayor genotoxicidad por parte del extracto
de Corryocactus brevistylus sobre los grupos de linfocitos a las cuales fueron
expuestas. En el gráfico también se observa que se necesita de una concentración del
2% de extracto acuosos de sancayo para producir un daño genotóxico similar al del
peróxido de hidrógeno 100 umol, al contrario del extracto al 0,02% el cual no
produce daño genotóxico y muestra una gran aproximación al control negativo, el
cual está formado por el medio RPMI y PBS 1X.
En el presente trabajo, se mostró que existe una relación entre los resultados
obtenidos con los tres tipos de análisis efectuados para el ensayo cometa. Los
resultados obtenidos mostraron ser proporcionales entre sí, algo muy parecido al
trabajo realizado por Arif et al., 2008, en el cual luego de un estudio de
genotoxicidad del plomo en glóbulos blancos de ratas, se observó proporcionalidad
entre sus resultados expresados por medio de los valores obtenidos en el momento
de cola Olive (Olive Tail Moment), el porcentaje de DNA en cola, longitud del
cometa, y longitud de la cola de los cometas medidas por grupo tratado. El autor
expresa que ante un mayor valor en el OTM de las muestras, existe una mayor
genotoxicidad por parte de la muestra utilizada.9
85
El ensayo cometa es un método simple, sensible y rápido que puede ser utilizado
para estimar el daño en el DNA en células individuales a través de la ruptura de
hebras, sitios de reparación abierta, enlaces cruzados y sitios álcali lábiles
causados por el estrés oxidativo.89
FIGURA Nº 33.: Comparación del efecto genotóxico del extracto acuoso de

Corryocactus brevistylus (sancayo), donde: A: 0,02%, B: 0,2%, C: 2%, D:
Control positivo, E: Control negativo.
En este estudio se encontró que los linfocitos de sangre periférica del grupo control
negativo, tenían fuertemente comprimido el DNA y mantuvieron la forma circular
del núcleo normal con poca o ninguna evidencia de formación de cometas (Figura
Nº 33 E). En contraste, las células tratadas con las diferentes concentraciones de
Corryocactus brevistylus, en especial la concentración al 2% y el control positivo
con peróxido de hidrógeno, aparecen alterados en apariencia (Figura Nº 33 B-D).
La base de esta apariencia alterada se debe a que durante el desenrollamiento
alcalino (a pH 13.0) el ADN bicatenario superenrollado es desenrollado y
86
desnaturalizado. Como resultado, la doble cadena de ADN se convierte en una
cadena simple y relajada donde los fragmentos de DNA (con carga negativa) la
hacen migrar hacia el ánodo dejando el DNA intacto en la región de la cabeza. Si
el núcleo contiene ADN más dañado, una gran cantidad de los trozos de DNA (que
son pequeñas en comparación a la molécula intacta de ADN) migraran a la región
de la cola. De esa manera los cometas se formaran como es evidente en la Figura
Nº 33, en donde la intensidad de la cola del cometa respecto a la cabeza, refleja el
número de rupturas en el ADN. Las células que contienen un mayor nivel de
roturas de ADN generan cometas con mayor intensidad en las “colas”. 9
3.4.3 INFLUENCIA DEL ÁCIDO ASCÓRBICO Y POLIFENOLES TOTALES

EN LA GENOTOXICIDAD DEL Corryocactus brevistylus.
Los resultados obtenidos en genotoxicidad sugieren que los tratamientos con

Corryocactus brevistylus, en especial los tratamientos al 0,2% y 2%, están
asociados con el efecto pro oxidante del ácido ascórbico presente en las muestras.
Como ejemplo tenemos el trabajo realizado por Szeto et al., 2006, en cuyo estudio
sobre el efecto de diferentes frutas y vegetales en el DNA de linfocitos humanos,
no encontró protección conferida por las frutas y vegetales utilizadas en el estudio,
entre los cuales se encontraba el limón, brócoli, naranja, fresa entre otros, por lo
que se le consideró perjudicial para el estudio a los que consideraron como un
efecto pro oxidante debido a que las altas concentraciones contrapesan a su poder
protector.88
Se puede aludir entonces que las altas concentraciones del extracto con
Corryocactus brevistylus, 2%, otorgan genotoxicidad en el grupo de células
mononucleares con las que se trató, como se aprecia en los diversos gráficos de
caja y bigotes de los análisis visuales efectuados. En otros trabajos, como los
citado por Green et al., 1994, y Shi M. et al., 2005, se encontró un efecto pro
oxidante en ensayos in vitro con linfocitos y acido ascórbico, usando como método
el ensayo cometa, y también en pruebas realizadas con Prevotella melaninogenica,
bacteria gram negativa anaerobia, en la que se encontró un efecto pro oxidante y
antioxidante de la vitamina C. 30,80
La formación de compuestos prooxidantes en frutos ha sido vista también en la

especie Myrciaria dubia (camu camu), cuando es administrada en altas dosis,
especialmente cuando está en presencia de elevadas cantidades de metales de
transición, generando radicales hidroxilo.31 De la misma forma en la especie
Psidium guajava L. (guayaba) se observo que este fruto posee propiedades pro
oxidantes en las variedades verde y amarilla en las que se sugiere que
probablemente el ascorbato, constituyente importante de la guayaba, participe
87
directamente en las reacciones que generan radicales hidroxilo, lo que se ha
evidenciado por los resultados obtenidos en su estudio. 65
Otros trabajos como el de Péres T., han demostrado que, además que el ácido
ascórbico, los flavonoides también confieren propiedades prooxidantes causando
mutagenicidad y genotoxicidad en sistemas experimentales bacterianos como
mamíferos, esto debido a algunos mecanismos a través de los cuales los
flavonoides ejercen sus acciones prooxidantes como la reducción de Cu (II) a Cu
(I), la generación de especies reactivas de oxigeno (EROs), etc.67
88
CAPITULO IV
CONCLUSIONES
Primera: Se concluyó que el contenido de ácido ascórbico encontrado en el fruto de

Corryocactus brevistylus “Sancayo”, por el método voltamétrico, es de una cantidad
considerable a comparación de otros frutos con antecedentes de poseer ácido
ascórbico, como la naranja y el limón, a excepción del camu camu.
Segunda: Luego de la cuantificación de polifenoles totales, utilizando el método de

Follin- Ciocalteu, se determinó que la muestra de Corryocactus brevistylus posee una
cantidad importante de polifenoles, pero que comparada con la misma especie
originaria de Ayacucho, esta última posee una mayor cantidad de polifenoles que la
perteneciente a la localidad de Caylloma, Arequipa. Comparando la cantidad
existente con otras especies, como: la mandarina, manzana o ciruela, se encontró que
el sancayo posee mayores niveles de polifenoles totales, pero menores que el fruto
camu camu.
Tercera: Al evaluar la actividad antioxidante de los frutos de Corryocactus

brevistylus se concluye que se obtiene un mayor valor por equivalente de Trolox
(TEAC) y un menor coeficiente de variabilidad utilizando el método ABTS,
considerándosele como el método más recomendado para la determinación de
actividad antioxidante. La influencia a la actividad antioxidante del sancayo se le
atribuye en su mayoría al contenido de polifenoles totales presentes en la muestra por
la influencia del mismo como antioxidante y por su cantidad encontrada en el fruto.
Cuarta: Se evaluó el efecto genotóxico del extracto acuoso de sancayo por medio
del ensayo cometa en linfocitos de sangre periférica, concluyéndose que los extractos
al 0,02% y 0,2% no causan lesión al DNA en linfocitos, en comparación del extracto
al 2% considerándosele medianamente genotóxico. La influencia de la
genotoxicidad del Corryocactus brevistylus, se infiera que puede ser atribuida al
ácido ascórbico presente en la muestra, el cual tiene efectos prooxidantes a ciertas
condiciones.
89
RECOMENDACIONES
− Realizar más pruebas para la determinación de la actividad antioxidante del

Corryocactus brevistylus utilizando otras variedades del fruto las cuales aun no
ha sido estudiadas.
− Realizar las pruebas de ácido ascórbico, polifenoles totales y actividad

antioxidante con extractos de sancayo preparados y almacenados en un mismo
lapso de tiempo para los diferentes métodos, de esa manera se tendrán resultados
más verídicos con un proceso sistemático de medición.
− Preparar los reactivos de DPPH, ABTS, Neocuproína (CUPRAC) y Trolox el

mismo día del ensayo y seguir usándolos por un período máximo de 2 días.
Pasado dicho lapso los reactivos tienden a degradarse y dar resultados no fiables.
− Se recomienda preparar los extractos de Corryocactus brevistylus para las

pruebas de genotoxicidad el mismo día de realizarse la prueba, para evitar la
degradación de los componentes de la muestra.
− Es importante considerar el uso de otras técnicas de coloración, para el teñido de

los cometas. El teñido con otras tinciones, como DAPI, yoduro de propidio (PI),
y tinciones fluorescentes como SybrGold, y SybrGreen, permiten obtener
cometas los cuales pueden ser fácilmente analizados por los diversos software de
libre acceso por internet, aunque su viabilidad visual es de un tiempo más corto.
− Se recomienda estandarizar la técnica del ensayo cometa antes de desarrollar el

análisis de una muestra o un estudio relacionado con genotoxicidad. Uno de los
mayores problemas a tener en cuenta es, mantener los geles de agarosa fijos en
el portaobjetos para evitar dañar el gel y con él la muestra a analizar.
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117. TOSUN I., SULE N. “An investigation about antioxidant capacity of fruit
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118. ZAPATA P., VALVERDE J.M., GUILLÉN F., BAILÉN G.,

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121. RE R., PELLEGRIN N., PROTEGGENTE A., PANNALA A., ANG M.,
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102
123. URBINA C. P., BOBADILLA M. L., RAMIREZ H. M., CORONA R.
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126. BRENNAN J., GRANDISON A. Food Processing Handbook. Second

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127. QUIROGA O. Estudio teórico experimental en secado de frutas por

liofilización. Universidad de Chile 1978.
103
ANEXO 1
FIGURAS: ENSAYO COMETA
FIGURA Nº 34.: Preparación del Extracto
a. La pulpa es molida en un b. Se pesa la muestra y se la

mortero. coloca en un tubo eppendorf
c. Se le agrega 1 ml de H2O d. Se lleva la muestra de

destilada, y se lo agita en el sancayo al sonicador por 2
vortex por 2 min. min.
e. Se centrifuga los tubos con f. Se toma el sobrenadante de

la muestra a 4000 rpm x 10 la muestra en un tubo
min aparte.
104
g. Se filtra el sobrenadante, con papel filtro y tubos anotop para finalmente
enrasar el extracto en una fiola de 5 ml, para un extracto al 4%
FIGURA Nº 35.: Extracción de sangre para el aislamiento de linfocitos
a. Extracción vía intravenosa
FIGURA Nº 36.: Aislamiento de linfocitos, prueba de viabilidad e incubación

con el extracto
a. Tubo Falcon con Ficoll- b. Tubo Falcon luego de

Paque y sangre diluida. la centrifugación.
105
c. Prueba de viabilidad en d. Incubación de las células
cámara de Neubauer (Foto a mononucleares a 37ºc por 30
40X) min luego de su preparación.
FIGURA Nº 37.: Preparación de las láminas de agarosa
a. Preparación de la agarosa b. Laminas embebidas con la

de punto de fusión normal agarosa (punto de fusión normal)
c. Agregando la muestra embebida en

la agarosa de bajo punto de fusión.
106
FIGURA Nº 38.: Lisis
a. Portaobjetos embebidos en solución

de lisis y llevados al refrigerador.
FIGURA Nº 39.: Electroforesis
a. Cámara electroforética donde se b. Electroforesis en solución alcalina

realizará la exposición alcalina 30 v por 20 min.
FIGURA Nº 40.: Neutralización
a. Solución de neutralización por 10

min
107
FIGURA Nº 41.: Tinción
a. Solución de fijación por 10 min. b. Shaker con las láminas y la

solución de tinción
c. Geles teñidos
FIGURA Nº 42.: Visualización en el microscopio
a. Visualización de cometas a través del

microscopio binocular.
108
FIGURA Nº 43.: Análisis en el software CaspLab
a. Visualización de los cometas a través

del software.
b. Análisis de los cometas por el

software CaspLab.
109
ANEXO Nº 2.: En el presente anexo se muestran los porcentajes de DNA distribuidos para cada uno de
los cometas medidos en el tratamiento de 0,02% de Corryocactus brevistilus por el Ensayo Cometa.
Head Tail Head Head Tail Comet Head Tail Tail Olive Tail
Nº
DNA % DNA % Radius Length Length Length Mean X Mean X Moment Moment
1 95,6382 4,3618 27 53 8 62 25,8788 55,0189 0,3357 1,2710
2 95,3586 4,6414 26 53 8 62 25,9547 55,2985 0,3802 1,3620
3 96,3585 3,6415 27 54 6 61 25,6853 54,2986 0,2340 1,0419
4 94,5662 5,4338 26 53 2 56 26,1721 56,0909 0,1087 1,6257
5 82,1031 17,8969 23 46 32 78 30,1450 68,5540 5,6523 6,8740
6 84,0102 15,9898 23 47 28 76 29,4607 66,6469 4,5119 5,9460
7 83,4895 16,5105 23 46 29 77 29,6445 67,1676 4,8105 6,1953
8 84,3651 15,6349 23 47 28 75 29,3368 66,2920 4,3138 5,7779
9 83,2234 16,7766 23 46 30 77 29,7392 67,4337 4,9669 6,3239
10 84,4784 15,5216 23 47 27 75 29,2974 66,1787 4,2515 5,7246
11 81,1492 18,8508 23 45 33 79 30,4994 69,5079 6,2709 7,3534
12 99,9986 0,0014 28 56 1 58 24,7503 50,6585 0,00001 0,0004
13 74,7391 25,2609 21 42 36 79 33,1152 85,9180 9,0939 13,3385
14 99,9875 0,0125 28 56 2 59 24,7531 50,6696 0,0003 0,0032
15 81,9232 18,0768 23 46 32 78 30,2112 68,7339 5,7665 6,9637
16 83,3317 16,6684 23 46 29 77 29,7006 67,3255 4,9030 6,2714
17 99,8564 0,1436 28 55 2 58 24,7856 50,8007 0,0029 0,0373
18 81,3180 18,6820 23 45 33 79 30,4361 69,3391 6,1591 7,2679
19 99,4680 0,5320 28 55 1 57 24,8824 51,1891 0,0050 0,1400
20 80,9906 19,0094 22 45 34 80 30,5591 69,6665 6,3769 7,4341
21 81,9569 18,0431 23 46 32 78 30,1988 68,7002 5,7451 6,9468
22 95,2322 4,7678 26 53 8 62 25,9891 55,4249 0,4012 1,4034
23 96,1229 3,8772 27 53 7 61 25,7483 54,5343 0,2653 1,1161
24 96,9982 3,0018 27 54 1 56 25,5159 53,6589 0,03002 0,8448
25 95,9068 4,0932 27 53 7 62 25,8063 54,7503 0,2957 1,1847
26 99,7290 0,2710 28 55 2 58 24,8173 50,9281 0,0054 0,0708
27 99,9124 0,0876 28 56 1 58 24,7717 50,7447 0,0009 0,0228
28 73,1716 26,8284 20 41 47 89 33,8246 77,4855 12,7017 11,7135
29 75,7545 24,2455 21 42 43 86 32,6713 74,9026 10,3737 10,2392
30 98,9974 1,0026 27 55 2 58 25,0006 51,6597 0,0177 0,2673
31 95,1767 4,8233 26 53 9 62 26,0043 55,4804 0,4106 1,4217
32 95,6197 4,3803 27 53 8 62 25,8838 55,0374 0,3386 1,2770
33 93,8895 6,1105 26 52 11 64 26,3608 56,7676 0,6589 1,8580
34 95,8222 4,1778 27 53 7 62 25,8291 54,8349 0,3080 1,2118
35 96,6872 3,3128 27 54 6 61 25,5980 53,9699 0,1937 0,9399
36 90,5476 9,4524 25 50 17 68 27,3337 60,1095 1,5767 3,0981
37 96,2358 3,7642 27 53 7 61 25,7181 54,4213 0,2500 1,0804
38 93,3942 6,6058 26 52 12 65 26,5006 57,2629 0,7701 2,0321
39 95,3091 4,6909 26 53 8 62 25,9681 55,3480 0,3883 1,3782
40 95,2429 4,7571 26 53 8 62 25,9862 55,4142 0,3994 1,3999
41 94,8908 5,1092 26 53 9 63 26,0826 55,7663 0,4607 1,5166
42 93,1375 6,8625 26 52 12 65 26,5736 57,5196 0,8311 2,1237
43 95,1655 4,8345 26 53 9 62 26,0073 55,4916 0,4125 1,4254
44 95,7878 4,2122 27 53 7 62 25,8384 54,8693 0,3131 1,2228
45 96,0284 3,9717 27 53 7 61 25,7736 54,6288 0,2784 1,1460
46 99,7599 0,2401 28 55 2 58 24,8096 50,8972 0,0048 0,0626
47 97,4551 2,5449 27 54 4 60 25,3963 53,2020 0,1143 0,7076
48 99,8577 0,1423 28 55 1 57 24,7853 50,7994 0,0014 0,0370
49 95,6824 4,3176 27 53 8 62 25,8668 54,9747 0,3290 1,2567
50 96,1968 3,8032 27 53 7 61 25,7285 54,4603 0,2553 1,0927
1 94,4567 5,5433 26 52 10 63 26,2025 56,2004 0,5423 1,6629
2 99,1183 0,8817 28 55 2 58 24,9702 51,5388 0,0137 0,2343
3 99,9113 0,0887 28 56 3 60 24,7720 50,7458 0,0027 0,0230
4 99,1594 0,84056 28 55 1 58 24,9598 51,4977 0,0125 0,2231
5 88,2506 11,7494 25 49 21 71 28,0451 62,4065 2,4361 4,0373
6 84,9867 15,0133 24 47 26 75 29,1222 65,6704 3,9776 5,4871
7 87,9533 12,0468 24 49 21 71 28,1399 62,7039 2,5610 4,1638
8 86,5164 13,4836 24 48 24 73 28,6073 64,1407 3,2084 4,7912
9 96,6753 3,3248 27 54 6 61 25,6012 53,9819 0,1951 0,9436
10 97,9198 2,0802 27 54 4 59 25,2758 52,7373 0,0764 0,5713
11 99,9166 0,0834 28 56 1 58 24,7706 50,7405 0,0008 0,0216
12 99,9974 0,0026 28 56 2 59 24,7506 50,6597 0,0001 0,0007
13 99,8113 0,1887 28 55 3 59 24,7968 50,8458 0,0057 0,0492
14 99,4367 0,5633 28 55 4 60 24,8902 51,2204 0,0225 0,1483
15 79,0395 20,9605 22 44 37 82 31,3135 71,6176 7,7531 8,4479
16 98,5248 1,4752 27 55 3 58 25,1206 52,1323 0,0384 0,3985
17 99,9978 0,0022 28 56 3 60 24,7505 50,6593 0,0001 0,0006
18 69,0735 30,9265 19 38 45 84 35,8314 96,5836 13,9169 18,7885
19 73,9968 26,0032 21 41 2 44 33,4474 76,6603 0,5201 11,2367
20 96,6360 3,3640 27 54 6 61 25,6116 54,0211 0,1997 0,9557
21 93,0269 6,9731 26 52 12 65 26,6052 57,6302 0,8581 2,1634
22 98,5375 1,4625 27 55 3 58 25,1173 52,1196 0,0377 0,3949
23 77,2987 22,7013 21 43 37 81 32,0186 85,3584 8,3995 12,1088
24 99,6008 0,3992 28 55 2 58 24,8492 51,0563 0,0080 0,1046
25 99,8865 0,1135 28 55 1 57 24,7781 50,7706 0,0011 0,0295
26 95,1648 4,8352 26 53 9 62 26,0075 55,4923 0,4126 1,4257
27 54,6902 45,3098 15 30 65 96 45,2549 104,9669 29,4514 27,0554
28 82,3498 17,6502 23 46 31 78 30,0547 68,3073 5,4976 6,7517
29 76,0462 23,9538 21 42 42 86 32,5460 74,6109 10,1256 10,0761
30 99,9556 0,0444 28 56 2 59 24,7610 50,7015 0,0009 0,0115
31 99,0624 0,93755 28 55 2 58 24,9842 51,5947 0,0155 0,2495
32 99,1673 0,83274 28 55 1 58 24,9578 51,4898 0,0122 0,2209
33 99,3841 0,61594 28 55 1 57 24,9034 51,2730 0,0067 0,1624
34 96,6879 3,31215 27 54 6 61 25,5978 53,9693 0,1936 0,9397
35 98,3718 1,6282 27 55 3 59 25,1597 52,2853 0,0468 0,4417
36 99,2460 0,7540 28 55 1 57 24,9380 51,4111 0,0100 0,1996
37 97,0235 2,9765 27 54 5 60 25,5093 53,6336 0,1563 0,8371
38 96,6491 3,3509 27 54 6 61 25,6081 54,0080 0,1981 0,9516
39 95,2364 4,7636 26 53 8 62 25,9880 55,4207 0,4004 1,4021
40 99,7469 0,2531 28 55 1 57 24,8128 50,9102 0,0025 0,0661
41 95,7297 4,2703 27 53 8 62 25,8541 54,9274 0,3218 1,2415
42 89,3459 10,6541 25 50 19 69 27,7013 61,3112 2,0031 3,5808
43 93,3933 6,6067 26 52 12 65 26,5008 57,2638 0,7703 2,0324
44 89,3950 10,6050 25 50 19 69 27,6861 61,2621 1,9847 3,5607
45 80,8000 19,2000 22 45 34 80 30,6312 69,8571 6,5054 7,5314
46 80,3684 19,6316 22 45 35 80 30,7957 70,2887 6,8012 7,7531
47 92,5005 7,4995 26 51 13 66 26,7566 58,1566 0,9925 2,3549
48 91,4273 8,5727 25 51 15 67 27,0707 59,2298 1,2969 2,7569
49 94,4615 5,5386 26 52 10 63 26,2012 56,1957 0,5413 1,6613
50 70,9137 29,0863 20 39 51 92 34,9016 79,7434 14,9296 13,0428
1 94,5031 5,4969 26 53 10 63 26,1896 56,1540 0,5332 1,6471
2 93,9931 6,0069 26 52 11 64 26,3317 56,6640 0,6368 1,8220
3 93,7423 6,2577 26 52 11 64 26,4022 56,9148 0,6910 1,9094
4 95,1340 4,8660 26 53 9 62 26,0159 55,5231 0,4178 1,4358
5 96,0221 3,9779 27 53 7 61 25,7753 54,6350 0,2792 1,1480
6 99,9973 0,0027 28 56 1 58 24,7507 50,6598 0,00003 0,0007
7 93,7504 6,2496 26 52 11 64 26,3999 56,9067 0,6893 1,9066
8 87,9262 12,0738 24 49 21 71 28,1486 62,7309 2,5725 4,1754
9 82,3041 17,6959 23 46 31 78 30,0714 68,3530 5,5261 6,7743
10 95,8101 4,1899 27 53 7 62 25,8324 54,8470 0,3098 1,2157
11 98,0279 1,9721 27 54 3 59 25,2479 52,6292 0,0686 0,5400
12 95,2669 4,7331 26 53 8 62 25,9796 55,3902 0,3953 1,3920
13 97,8856 2,1145 27 54 4 59 25,2846 52,7716 0,0789 0,5812
14 98,8571 1,1429 27 55 2 58 25,0361 51,8000 0,0231 0,3059
15 93,3569 6,6431 26 52 12 65 26,5112 57,3002 0,7788 2,0454
16 96,9769 3,0231 27 54 5 60 25,5215 53,6802 0,1613 0,8513
17 98,6981 1,3020 27 55 3 59 25,0765 51,9591 0,0391 0,3500
18 96,9234 3,0766 27 54 5 60 25,5356 53,7337 0,1670 0,8675
19 86,5928 13,4072 24 48 24 73 28,5821 64,0643 3,1721 4,7572
20 78,8048 21,1952 22 44 37 82 31,4067 71,8523 7,9277 8,5725
21 76,5553 23,4447 21 43 41 85 32,3296 74,1018 9,6998 9,7934
22 88,8104 11,1896 25 49 20 70 27,8684 61,8467 2,2095 3,8020
23 95,9690 4,0310 27 53 7 61 25,7896 54,6881 0,2867 1,1649
24 99,7961 0,2039 28 55 1 57 24,8006 50,8610 0,0020 0,0531
25 74,3555 25,6445 21 41 40 82 33,2860 86,3016 10,2578 13,5956
26 89,1826 10,8174 25 50 19 70 27,7521 61,4745 2,0650 3,6479
27 41,5795 58,4205 12 23 87 111 59,5245 109,0776 50,8258 28,9492
28 94,3678 5,6322 26 52 10 63 26,2272 56,2893 0,5598 1,6932
29 99,9820 0,0180 28 56 3 60 24,7545 50,6751 0,0005 0,0047
30 92,6245 7,3755 26 51 13 65 26,7208 58,0326 0,9600 2,3094
31 93,1421 6,8579 26 52 12 65 26,5723 57,5150 0,8300 2,1220
32 95,9342 4,0658 27 53 7 61 25,7989 54,7229 0,2917 1,1760
33 95,6382 4,3618 27 53 8 62 25,8788 55,0189 0,3357 1,2710
34 92,9959 7,0041 26 52 12 65 26,6141 57,6612 0,8657 2,1746
35 99,9870 0,0130 28 56 2 59 24,7532 50,6701 0,0003 0,0034
36 99,9959 0,0041 28 56 3 60 24,7510 50,6612 0,0001 0,0011
37 98,2452 1,7548 27 55 3 59 25,1921 52,4119 0,0543 0,4777
38 94,0342 5,9658 26 52 11 64 26,3202 56,6229 0,6281 1,8078
39 93,6492 6,3508 26 52 11 64 26,4284 57,0079 0,7118 1,9420
40 93,5025 6,4975 26 52 11 64 26,4699 57,1546 0,7450 1,9937
41 94,8728 5,1272 26 53 4 58 26,0876 55,7843 0,2051 1,5226
42 95,3325 4,6675 26 53 8 62 25,9618 55,3246 0,3845 1,3705
43 98,6350 1,3650 27 55 2 58 25,0925 52,0221 0,0329 0,3676
44 96,4727 3,5274 27 54 6 61 25,6549 54,1845 0,2196 1,0063
45 96,3419 3,6581 27 54 6 61 25,6898 54,3152 0,2361 1,0471
46 99,6727 0,3273 28 55 1 57 24,8313 50,9844 0,0019 0,0856
47 99,5970 0,4030 28 55 1 57 24,8501 51,0601 0,0029 0,1056
48 99,8301 0,1699 28 55 1 57 24,7921 50,8270 0,0017 0,0442
49 97,3428 2,6572 27 54 5 60 25,4256 53,3143 0,1246 0,7411
50 99,7071 0,2929 28 55 1 57 24,8227 50,9500 0,0015 0,0765
ANEXO Nº 3.: En el presente anexo se muestran los porcentajes de DNA distribuidos para cada uno
de los cometas medidos en el tratamiento de 0,2% de Corryocactus brevistilus por el Ensayo Cometa.
Nº
1 73,5121 26,4879 20 41 47 89 33,6679 77,1450 12,3813 11,5162
2 95,5069 4,4931 27 53 8 62 25,9144 55,1502 0,3563 1,3136
3 75,6834 24,3166 21 42 43 86 32,7020 74,9737 10,4347 10,2790
4 76,0398 23,9602 21 42 42 86 32,5487 74,6173 10,1310 10,0797
5 96,4324 3,5676 27 54 6 61 25,6656 54,2247 0,2246 1,0189
6 53,1645 46,8355 15 30 83 113 46,5536 97,4926 38,7100 23,8575
7 95,9938 4,0062 27 53 7 61 25,7829 54,6633 0,2832 1,1570
8 72,2178 27,7822 20 40 49 90 34,2713 78,4393 13,6209 12,2708
9 95,3459 4,6541 26 53 8 62 25,9581 55,3112 0,3822 1,3661
10 95,8796 4,1204 27 53 7 62 25,8136 54,7775 0,2996 1,1934
11 96,9676 3,0324 27 54 5 60 25,5240 53,6895 0,1623 0,8541
12 95,5870 4,4130 27 53 8 62 25,8926 55,0701 0,3437 1,2876
13 54,5121 45,4879 15 30 80 112 45,4028 96,1450 36,5144 23,0816
14 75,7572 24,2428 21 42 43 86 32,6702 74,8999 10,3714 10,2377
15 76,2696 23,7304 21 42 42 85 32,4507 74,3875 9,9376 9,9518
16 75,2433 24,7567 21 42 44 86 32,8933 75,4138 10,8158 10,5267
17 99,2483 0,7517 28 55 2 58 24,9374 51,4088 0,0150 0,1990
18 99,9865 0,0135 28 56 1 58 24,7533 50,6706 0,0001 0,0035
19 72,0078 27,9922 20 40 49 90 34,3713 78,6493 13,8276 12,3944
20 73,6149 26,3851 20 41 47 88 33,6209 77,0422 12,2854 11,4568
21 73,8355 26,1645 21 41 46 88 33,5205 76,8216 12,0808 11,3295
22 97,9970 2,0030 27 54 4 59 25,2559 52,6601 0,07080 0,5489
23 76,8273 23,1727 21 43 41 85 32,2151 73,8298 9,4760 9,6432
24 99,9963 0,0037 28 56 1 58 24,7509 50,6608 0,00004 0,0010
25 75,8263 24,1737 21 42 43 86 32,6404 74,8308 10,3124 10,1990
26 77,3658 22,6342 21 43 40 84 31,9909 73,2913 9,0407 9,3480
27 29,9001 70,0999 8 17 124 141 82,7756 120,7570 86,7176 26,6249
28 95,9875 4,0125 27 53 7 61 25,7846 54,6696 0,2841 1,1590
29 95,9979 4,0021 27 53 7 61 25,7818 54,6592 0,28265 1,1557
30 99,4928 0,5072 28 55 2 58 24,8762 51,1643 0,0101 0,1333
31 99,8492 0,1508 28 55 1 57 24,7874 50,8079 0,0015 0,0392
32 78,8669 21,1331 22 44 37 82 31,3820 71,7902 7,8813 8,5395
33 98,8655 1,1345 27 55 2 58 25,0340 51,7916 0,0227 0,3036
34 97,8597 2,1403 27 54 4 59 25,2913 52,7974 0,0808 0,5887
35 99,7997 0,2003 28 55 1 57 24,7997 50,8574 0,0020 0,0522
36 96,8410 3,1590 27 54 6 60 25,5574 53,8161 0,1761 0,8927
37 76,8825 23,1175 21 43 41 85 32,1920 73,7746 9,4309 9,6129
38 75,4147 24,5853 21 42 43 86 32,8185 75,2424 10,6665 10,4300
39 76,2965 23,7035 21 42 42 85 32,4392 74,3606 9,9151 9,9368
40 78,2996 21,7004 22 43 38 83 31,6094 72,3575 8,3101 8,8425
41 75,3923 24,6077 21 42 43 86 32,8283 75,2648 10,6860 10,4426
42 72,0129 27,9871 20 40 49 90 34,3688 78,6442 13,8225 12,3914
43 76,6365 23,3635 21 43 41 85 32,2953 74,0206 9,6327 9,7485
44 75,2150 24,7850 21 42 44 87 32,9057 75,4421 10,8405 10,5426
45 76,0138 23,9862 21 42 42 86 32,5599 74,6433 10,1530 10,0942
46 76,1568 23,8432 21 42 42 85 32,4987 74,5003 10,0323 10,0145
47 77,7671 22,2329 22 43 39 83 31,8258 72,8900 8,7230 9,1298
48 95,9234 4,0766 27 53 7 61 25,8018 54,7337 0,2933 1,1794
49 75,2088 24,7912 21 42 44 87 32,9084 75,4483 10,8459 10,5462
50 95,5496 4,4504 27 53 8 62 25,9028 55,1075 0,3495 1,2997
1 95,4989 4,5011 27 53 8 62 25,9165 55,1582 0,3575 1,3162
2 96,9972 3,0028 27 54 5 60 25,5162 53,6599 0,1591 0,8451
3 78,9742 21,0258 22 44 37 82 31,3393 71,6829 7,8015 8,4825
4 77,1420 22,8580 21 43 40 84 32,0837 73,5151 9,2204 9,4704
5 99,9978 0,0022 28 56 1 58 24,7506 50,6593 0,0000 0,0006
6 99,2625 0,7375 28 55 2 58 24,9339 51,3946 0,0148 0,1952
7 98,5714 1,4286 27 55 3 58 25,1087 52,0857 0,0360 0,3854
8 99,8936 0,1064 28 55 1 57 24,7764 50,7635 0,0011 0,0276
9 99,4634 0,5366 28 55 1 57 24,8835 51,1937 0,0051 0,1412
10 76,2537 23,7463 21 42 42 85 32,4574 74,4034 9,9509 9,9606
11 77,4812 22,5188 22 43 40 84 31,9432 73,1759 8,9488 9,2851
12 78,4724 21,5277 22 44 38 83 31,5398 72,1848 8,1783 8,7499
13 99,9292 0,0708 28 56 1 58 24,7675 50,7279 0,0007 0,0184
14 98,6021 1,3979 27 55 2 58 25,1009 52,0550 0,0345 0,3768
15 97,4161 2,5839 27 54 5 60 25,4065 53,2410 0,1178 0,7192
16 94,0947 5,9053 26 52 10 64 26,3033 56,5624 0,6154 1,7869
17 95,7946 4,2054 27 53 7 62 25,8365 54,8625 0,3121 1,2206
18 73,2631 26,7369 20 41 47 89 33,7824 77,3940 12,6152 11,6604
19 96,6112 3,3888 27 54 6 61 25,6182 54,0459 0,2027 0,9634
20 28,0357 71,9643 8 16 127 144 88,2803 122,6214 91,3917 24,7133
21 72,0940 27,9060 20 40 49 90 34,3302 78,5631 13,7426 12,3436
22 73,4082 26,5918 20 41 47 89 33,7156 77,2489 12,4787 11,5763
23 79,1506 20,8494 22 44 37 82 31,2695 71,5065 7,6711 8,3892
24 99,9979 0,0021 28 56 1 58 24,7505 50,6592 0,00002 0,0005
25 75,6208 24,3792 21 42 43 86 32,7291 75,0363 10,4884 10,3142
26 76,2941 23,7059 21 42 42 85 32,4402 74,3630 9,9171 9,9382
27 99,6411 0,35890 28 55 1 57 24,8391 51,0160 0,0023 0,0939
28 98,3484 1,65156 27 55 3 59 25,1656 52,3087 0,0481 0,4483
29 98,0508 1,94925 27 54 3 59 25,2420 52,6064 0,0671 0,5334
30 75,9395 24,0606 21 42 42 86 32,5918 74,7177 10,2161 10,1357
31 76,7336 23,2664 21 43 41 85 32,2544 73,9235 9,5528 9,6949
32 77,7484 22,2516 22 43 39 83 31,8335 72,9087 8,7377 9,1399
33 79,4295 20,5705 22 44 36 81 31,1597 71,2276 7,4673 8,2422
34 78,6916 21,3085 22 44 38 82 31,4519 71,9656 8,0126 8,6328
35 77,4730 22,5270 22 43 40 84 31,9466 73,1841 8,9553 9,2896
36 79,0932 20,9068 22 44 37 82 31,2922 71,5639 7,7134 8,4195
37 78,4997 21,5003 22 44 38 83 31,5288 72,1574 8,1576 8,7353
38 77,5965 22,4035 22 43 40 84 31,8958 73,0606 8,8574 9,2224
39 76,6980 23,3020 21 43 41 85 32,2694 73,9591 9,5821 9,7145
40 95,1284 4,8716 26 53 9 62 26,0175 55,5287 0,4188 1,4377
41 95,7927 4,2073 27 53 7 62 25,8370 54,8644 0,3124 1,2213
42 99,9631 0,0369 28 56 1 58 24,7591 50,6940 0,0004 0,0096
43 97,0759 2,9241 27 54 5 60 25,4955 53,5812 0,1509 0,8212
44 53,2328 46,7672 15 30 83 113 46,4939 97,4243 38,5971 23,8187
45 76,9019 23,0981 21 43 41 84 32,1839 73,7552 9,4151 9,6022
46 95,3045 4,6955 26 53 8 62 25,9694 55,3526 0,3891 1,3797
47 99,5992 0,4008 28 55 1 57 24,8496 51,0579 0,0028 0,1050
48 78,5994 21,4006 22 44 38 82 31,4888 72,0577 8,0821 8,6820
49 99,0165 0,9835 28 55 2 58 24,9958 51,6406 0,0171 0,2621
50 99,8035 0,1965 28 55 1 57 24,7987 50,8536 0,0020 0,0512
1 99,6926 0,3074 28 55 1 57 24,8263 50,9645 0,0017 0,0803
2 81,7200 18,2800 23 45 32 79 30,2863 68,9371 5,8969 7,0654
3 96,9559 3,0441 27 54 5 60 25,5271 53,7012 0,1635 0,8577
4 54,4520 45,5480 15 30 80 112 45,4529 96,2051 36,6109 23,1166
5 55,4226 44,5774 15 31 79 110 44,6569 95,2345 35,0673 22,5462
6 99,3328 0,6672 28 55 2 58 24,9162 51,3243 0,0133 0,1762
7 98,5788 1,4212 27 55 3 58 25,1068 52,0783 0,0356 0,3833
8 98,2164 1,7836 27 55 3 59 25,1995 52,4407 0,0561 0,4859
9 99,9992 0,0008 28 56 1 58 24,7502 50,6579 0,00001 0,0002
10 97,3841 2,6159 27 54 5 60 25,4148 53,2730 0,1208 0,7287
11 53,3734 46,6266 15 30 82 113 46,3714 97,2837 38,3654 23,7387
12 75,8465 24,1535 21 42 43 86 32,6317 74,8106 10,2952 10,1877
13 98,7108 1,2892 27 55 2 58 25,0733 51,9463 0,0293 0,3465
14 77,4488 22,5512 22 43 40 84 31,9566 73,2083 8,9745 9,3028
15 76,2421 23,7579 21 42 42 85 32,4624 74,4150 9,9607 9,9671
16 75,0010 24,9990 21 42 44 87 32,9996 75,6561 11,0285 10,6637
17 79,2746 20,7254 22 44 37 82 31,2206 71,3825 7,5802 8,3237
18 78,6112 21,3888 22 44 38 82 31,4841 72,0459 8,0732 8,6757
19 95,1844 4,8156 26 53 8 62 26,0022 55,4727 0,4092 1,4192
20 83,8612 16,1388 23 47 28 76 29,5130 66,7959 4,5964 6,0170
21 82,4696 17,5304 23 46 31 78 30,0111 68,1875 5,4232 6,6925
22 98,8146 1,1854 27 55 2 58 25,0469 51,8425 0,0248 0,3176
23 99,8076 0,1924 28 55 1 57 24,7977 50,8495 0,0019 0,0501
24 99,5515 0,4485 28 55 1 57 24,8615 51,1056 0,0035 0,1177
25 77,3645 22,6355 21 43 40 84 31,9914 73,2926 9,0418 9,3487
26 99,4126 0,5874 28 55 1 57 24,8962 51,2445 0,0061 0,1548
27 82,5055 17,4946 23 46 31 78 29,9980 68,1517 5,4010 6,6748
28 99,6849 0,3151 28 55 1 57 24,8282 50,9722 0,0018 0,0824
29 73,3657 26,6343 20 41 47 89 33,7351 77,2914 12,5186 11,6009
30 71,1184 28,8816 20 40 51 91 34,8011 79,5387 14,7202 12,9209
31 96,6832 3,3168 27 54 6 61 25,5991 53,9739 0,1941 0,9411
32 81,2997 18,7003 23 45 33 79 30,4429 69,3574 6,1712 7,2771
33 97,5406 2,4594 27 54 4 60 25,3740 53,1165 0,1067 0,6823
34 69,6245 30,3755 19 39 54 93 35,5478 81,0326 16,2824 13,8162
35 99,8203 0,1797 28 55 1 57 24,7946 50,8368 0,0018 0,0468
36 81,7325 18,2675 23 45 32 79 30,2817 68,9246 5,8888 7,0591
37 95,6468 4,3532 27 53 8 62 25,8765 55,0103 0,3344 1,2683
38 80,5907 19,4093 22 45 34 80 30,7107 70,0664 6,6480 7,6387
39 75,2568 24,7432 21 42 44 86 32,8874 75,4003 10,8040 10,5191
40 78,8411 21,1589 22 44 37 82 31,3923 71,8160 7,9006 8,5532
41 79,2993 20,7007 22 44 37 82 31,2109 71,3578 7,5621 8,3107
42 81,4120 18,5880 23 45 33 79 30,4009 69,2451 6,0973 7,2204
43 80,2393 19,7607 22 45 35 80 30,8452 70,4178 6,8909 7,8198
44 71,5953 28,4047 20 40 50 91 34,5693 79,0618 14,2381 12,6380
45 99,0195 0,9805 28 55 2 58 24,9951 51,6376 0,0170 0,2612
46 76,7652 23,2348 21 43 41 85 32,2412 73,8919 9,5269 9,6775
47 80,0557 19,9443 22 44 35 81 30,9160 70,6014 7,0196 7,9150
48 81,4356 18,5644 23 45 33 79 30,3921 69,2215 6,0818 7,2084
49 85,4279 14,5721 24 47 26 74 28,9718 65,2292 3,7473 5,2835
50 99,9961 0,0039 28 56 1 58 24,7510 50,6610 0,0000 0,0010
de los cometas medidos en el tratamiento de 2% de Corryocactus brevistilus por el Ensayo Cometa.
Nº
1 75,1271 24,8729 21 42 44 87 32,9442 75,5300 10,9175 10,5923
2 75,9808 24,0192 21 42 42 86 32,5740 74,6763 10,1810 10,1126
3 74,7954 25,2046 21 42 39 82 33,0903 75,8617 9,8298 10,7804
4 74,1471 25,8529 21 41 42 84 33,3796 76,5100 10,8582 11,1505
5 73,1745 26,8255 20 41 47 89 33,8233 77,4826 12,6990 11,7118
6 74,0756 25,9244 21 41 46 88 33,4118 76,5815 11,8601 11,1915
7 75,5613 24,4387 21 42 38 81 32,7549 75,0958 9,2867 10,3476
8 76,0019 23,9981 21 42 39 82 32,5650 74,6552 9,3593 10,1009
9 74,1077 25,8923 21 41 46 88 33,3973 76,5494 11,8308 11,1731
10 75,8946 24,1054 21 42 43 86 32,6110 74,7625 10,2542 10,1608
11 75,7542 24,2458 21 42 43 86 32,6715 74,9029 10,3740 10,2394
12 73,0136 26,9864 20 41 48 89 33,8978 77,6435 12,8517 11,8054
13 75,2809 24,7191 21 42 44 86 32,8769 75,3762 10,7830 10,5055
14 76,4633 23,5367 21 42 42 85 32,3685 74,1938 9,7761 9,8443
15 75,8085 24,1915 21 42 43 86 32,6481 74,8486 10,3276 10,2089
16 95,4019 4,5981 27 53 8 62 25,9429 55,2552 0,3731 1,3478
17 95,1795 4,8205 26 53 9 62 26,0035 55,4776 0,4101 1,4208
18 54,3966 45,6034 15 30 80 112 45,4992 96,2605 36,7001 23,1489
19 53,6558 46,3442 15 30 82 113 46,1274 97,0013 37,9021 23,5771
20 29,1405 70,8595 8 16 125 142 84,9333 121,5166 88,6071 25,9227
21 73,0519 26,9481 20 41 48 89 33,8800 77,6052 12,8153 11,7831
22 75,3421 24,6579 21 42 41 84 32,8502 75,3150 10,1097 10,4709
23 74,6926 25,3074 21 41 40 82 33,1358 75,9645 10,1230 10,8388
24 75,5671 24,4329 21 42 43 86 32,7523 75,0900 10,5347 10,3443
25 74,8232 25,1768 21 42 44 87 33,0780 75,8339 11,1860 10,7646
26 53,9571 46,0429 15 30 71 102 45,8698 96,7000 32,6905 23,4037
27 96,9997 3,0003 27 54 5 60 25,5155 53,6574 0,1589 0,8443
28 72,2669 27,7331 20 40 49 90 34,2480 78,3902 13,5728 12,2420
29 71,0377 28,9623 20 39 51 92 34,8407 79,6194 14,8026 12,9690
30 76,2689 23,7311 21 42 42 85 32,4510 74,3882 9,9382 9,9522
31 95,3115 4,6885 26 53 8 62 25,9675 55,3456 0,3879 1,3774
32 95,9952 4,0048 27 53 7 61 25,7825 54,6619 0,2830 1,1566
33 74,7751 25,2249 21 42 45 87 33,0993 75,8820 11,2287 10,7919
34 73,0659 26,9341 20 41 48 89 33,8735 77,5912 12,8020 11,7750
35 95,0284 4,9716 26 53 9 63 26,0448 55,6287 0,4362 1,4708
36 74,3281 25,6719 21 41 45 88 33,2983 76,3290 11,6302 11,0468
37 95,7483 4,2517 27 53 8 62 25,8490 54,9088 0,3190 1,2355
38 76,3945 23,6055 21 42 42 85 32,3976 74,2626 9,8333 9,8824
39 75,0178 24,9822 21 42 44 87 32,9922 75,6393 11,0137 10,6542
40 95,2845 4,7155 26 53 8 62 25,9748 55,3726 0,3924 1,3863
41 96,0188 3,9812 27 53 7 61 25,7762 54,6383 0,2797 1,1491
42 29,5601 70,4399 8 16 124 142 83,7276 121,0970 87,5607 26,3229
43 79,9120 20,0880 22 44 35 81 30,9716 70,7451 7,1211 7,9897
44 76,6201 23,3799 21 43 41 85 32,3022 74,0370 9,6462 9,7575
45 30,3078 69,6922 8 17 123 141 81,6621 120,3493 85,7118 26,9619
46 28,9058 71,0942 8 16 125 143 85,6230 121,7513 89,1950 25,6852
47 30,5623 69,4377 8 17 123 141 80,9821 120,0948 85,0870 27,1589
48 73,2114 26,7886 20 41 47 89 33,8062 77,4457 12,6640 11,6904
49 52,9839 47,0161 15 29 83 113 46,7123 97,6732 39,0091 23,9598
50 95,2384 4,7616 26 53 8 62 25,9874 55,4187 0,4001 1,4014
1 81,9974 18,0026 23 46 32 78 30,1839 68,6597 5,7193 6,9266
2 80,5365 19,4635 22 45 34 80 30,7314 70,1206 6,6852 7,6665
3 72,8124 27,1876 20 40 48 89 33,9915 77,8447 13,0441 11,9226
4 79,6294 20,3706 22 44 36 81 31,0815 71,0277 7,3228 8,1373
5 80,1866 19,8134 22 45 30 76 30,8655 70,4705 5,9440 7,8471
6 79,6646 20,3354 22 44 36 81 31,0678 70,9925 7,2976 8,1189
7 75,6489 24,3511 21 42 43 86 32,7169 75,0082 10,4643 10,2984
8 73,8146 26,1854 21 41 46 88 33,5300 76,8425 12,1002 11,3416
9 74,2813 25,7187 21 41 45 88 33,3193 76,3758 11,6727 11,0736
10 78,2419 21,7581 22 43 38 83 31,6327 72,4152 8,3544 8,8735
11 79,6194 20,3806 22 44 36 81 31,0854 71,0377 7,3300 8,1425
12 72,5262 27,4738 20 40 48 90 34,1256 78,1309 13,3202 12,0899
13 76,7908 23,2092 21 43 41 85 32,2304 73,8663 9,5059 9,6634
14 73,3710 26,6290 20 41 47 89 33,7327 77,2861 12,5136 11,5978
15 63,7223 36,2777 18 35 64 100 38,8404 86,9348 23,2248 17,4475
16 72,2519 27,7481 20 40 49 90 34,2552 78,4052 13,5875 12,2508
17 28,0321 71,9679 8 16 127 144 88,2916 122,6250 91,4008 24,7090
18 74,2915 25,7085 21 41 45 88 33,3147 76,3656 11,6634 11,0677
19 73,7689 26,2311 20 41 46 88 33,5507 76,8882 12,1424 11,3679
20 75,6478 24,3522 21 42 43 86 32,7174 75,0093 10,4652 10,2990
21 76,5692 23,4308 21 43 41 85 32,3237 74,0879 9,6882 9,7857
22 76,8658 23,1342 21 43 41 85 32,1990 73,7913 9,4446 9,6221
23 75,8310 24,1690 21 42 43 86 32,6384 74,8261 10,3084 10,1964
24 74,7354 25,2646 21 42 45 87 33,1168 75,9217 11,2641 10,8145
25 76,1807 23,8193 21 42 39 82 32,4885 74,4764 9,2895 10,0012
26 75,9718 24,0282 21 42 38 81 32,5779 74,6853 9,1307 10,1177
27 47,9921 52,0079 13 27 92 119 51,5710 102,6650 47,7321 26,5729
28 75,1000 24,9000 21 42 44 87 32,9560 75,5571 10,9413 10,6076
29 95,4767 4,5233 27 53 8 62 25,9226 55,1804 0,3611 1,3234
30 95,9332 4,0668 27 53 7 61 25,7992 54,7239 0,2919 1,1763
31 72,4984 27,5016 20 40 44 85 34,1387 78,1587 12,1007 12,1062
32 97,8928 2,1072 27 54 4 59 25,2828 52,7643 0,0784 0,5791
33 96,6826 3,3174 27 54 6 61 25,5992 53,9745 0,1942 0,9413
34 96,8729 3,1271 27 54 6 60 25,5489 53,7842 0,1726 0,8829
35 97,7078 2,2922 27 54 4 59 25,3306 52,9493 0,0927 0,6331
36 54,4276 45,5724 15 30 80 112 45,4733 96,2295 36,6502 23,1308
37 73,0125 26,9875 20 41 48 89 33,8983 77,6446 12,8528 11,8060
38 71,4664 28,5336 20 40 50 91 34,6317 79,1907 14,3676 12,7143
39 72,2114 27,7886 20 40 49 90 34,2744 78,4457 13,6272 12,2746
40 71,5327 28,4673 20 40 50 91 34,5996 79,1244 14,3010 12,6750
41 73,5777 26,4223 20 41 47 89 33,6379 77,0794 12,3201 11,4782
42 51,9218 48,0782 14 29 85 115 47,6678 98,7353 40,7914 24,5523
43 76,4748 23,5252 21 42 39 82 32,3636 74,1823 9,1748 9,8379
44 75,9787 24,0213 21 42 40 83 32,5749 74,6784 9,6085 10,1138
45 76,8597 23,1403 21 43 40 84 32,2015 73,7974 9,2561 9,6254
46 73,5543 26,4457 20 41 37 79 33,6486 77,1028 9,7849 11,4918
47 96,3533 3,6467 27 54 6 61 25,6867 54,3038 0,2347 1,0436
48 96,9579 3,0421 27 54 5 60 25,5265 53,6992 0,1633 0,8570
49 73,0891 26,9109 20 41 47 89 33,8628 77,5680 12,7799 11,7615
50 75,0147 24,9853 21 42 44 87 32,9935 75,6424 11,0164 10,6559
1 75,9977 24,0023 21 42 42 86 32,5668 74,6594 10,1667 10,1032
2 76,4355 23,5645 21 42 42 85 32,3802 74,2216 9,7992 9,8597
3 75,8419 24,1581 21 42 43 86 32,6337 74,8152 10,2991 10,1903
4 75,3629 24,6371 21 42 43 86 32,8411 75,2942 10,7115 10,4592
5 76,2312 23,7689 21 42 42 85 32,4670 74,4260 9,9699 9,9731
6 74,4935 25,5065 21 41 53 95 33,2244 76,1636 13,5184 10,9523
7 75,9326 24,0674 21 42 42 86 32,5947 74,7245 10,2219 10,1395
8 76,2342 23,7658 21 42 42 85 32,4657 74,4229 9,9673 9,9715
9 76,6926 23,3074 21 43 41 85 32,2717 73,9645 9,5865 9,7175
10 72,6577 27,3423 20 40 48 90 34,0638 77,9994 13,1930 12,0130
11 74,4986 25,5014 21 41 35 77 33,2221 76,1585 8,9255 10,9494
12 78,2036 21,7964 22 43 38 83 31,6482 72,4535 8,3838 8,8941
13 73,6022 26,3978 20 41 47 88 33,6267 77,0549 12,2972 11,4641
14 72,7829 27,2171 20 40 48 89 34,0052 77,8742 13,0724 11,9398
15 71,4630 28,5370 20 40 50 91 34,6333 79,1941 14,3711 12,7163
16 76,1397 23,8603 21 42 36 79 32,5060 74,5174 8,5897 10,0240
17 75,9873 24,0127 21 42 37 80 32,5712 74,6698 8,8847 10,1090
18 95,4072 4,5928 27 53 8 62 25,9414 55,2499 0,3722 1,3461
19 73,8470 26,1530 21 41 46 88 33,5152 76,8101 12,0702 11,3229
20 74,2530 25,7470 21 41 45 88 33,3320 76,4041 11,6984 11,0898
21 28,8019 71,1981 8 16 126 143 85,9318 121,8552 89,4559 25,5768
22 95,4984 4,5016 27 53 8 62 25,9167 55,1587 0,3576 1,3164
23 71,7825 28,2175 20 40 50 91 34,4792 78,8746 14,0511 12,5273
24 75,3492 24,6508 21 42 44 86 32,8471 75,3079 10,7234 10,4669
25 73,1616 26,8384 20 41 47 89 33,8292 77,4955 12,7112 11,7193
26 74,9424 25,0576 21 42 44 87 33,0254 75,7147 11,0803 10,6969
27 95,8066 4,1934 27 53 7 62 25,8333 54,8505 0,3103 1,2168
28 72,9624 27,0376 20 41 48 89 33,9216 77,6947 12,9006 11,8352
29 71,1473 28,8527 20 40 51 91 34,7870 79,5098 14,6908 12,9037
30 74,2961 25,7039 21 41 35 77 33,3127 76,3610 8,9964 11,0651
31 70,3748 29,6252 20 39 52 92 35,1688 80,2823 15,4880 13,3650
32 96,0441 3,9559 27 53 7 61 25,7694 54,6130 0,2762 1,1410
33 54,8197 45,1803 15 30 75 106 45,1480 95,8374 33,8852 22,9016
34 95,7891 4,2109 27 53 7 62 25,8380 54,8680 0,3129 1,2224
35 53,7817 46,2183 15 30 82 112 46,0194 96,8754 37,6964 23,5048
36 96,9231 3,0769 27 54 5 60 25,5357 53,7340 0,1671 0,8676
37 75,6027 24,3973 21 42 43 86 32,7369 75,0544 10,5040 10,3243
38 73,2085 26,7915 20 41 42 84 33,8075 77,4486 11,2524 11,6921
39 76,3943 23,6057 21 42 42 85 32,3977 74,2628 9,8335 9,8825
40 74,7827 25,2173 21 42 45 87 33,0959 75,8744 11,2220 10,7876
41 76,8880 23,1120 21 43 41 85 32,1897 73,7691 9,4264 9,6098
42 75,6486 24,3514 21 42 43 86 32,7171 75,0085 10,4646 10,2986
43 75,0751 24,9249 21 42 39 82 32,9670 75,5820 9,7207 10,6217
44 96,7876 3,2124 27 54 4 59 25,5715 53,8695 0,1285 0,9090
45 76,5031 23,4969 21 43 41 85 32,3516 74,1540 9,7430 9,8223
46 95,7172 4,2828 27 53 8 62 25,8574 54,9399 0,3237 1,2455
47 96,3438 3,6562 27 54 6 61 25,6893 54,3133 0,2359 1,0466
48 74,6629 25,3371 21 41 38 80 33,1490 75,9942 9,6281 10,8557
49 74,1577 25,8423 21 41 36 78 33,3748 76,4994 9,3032 11,1444
50 95,0377 4,9623 26 53 9 63 26,0423 55,6194 0,4346 1,4677
ANEXO Nº5.: En el presente anexo se muestran los porcentajes de DNA distribuidos para cada uno de
los cometas medidos en el control negativo con PBS por el Ensayo Cometa.
Nº
1 98,6826 1,3174 27 55 5 61 25,0804 51,9745 0,0659 0,3543
2 99,0277 0,9723 28 55 4 60 24,9930 51,6294 0,0389 0,2590
3 99,1209 0,8791 28 55 3 59 24,9695 51,5362 0,0264 0,2335
4 99,5283 0,4717 28 55 5 61 24,8673 51,1288 0,0236 0,1239
5 99,0629 0,9371 28 55 5 61 24,9841 51,5942 0,0469 0,2494
6 99,3831 0,6169 28 55 2 58 24,9036 51,2740 0,0123 0,1627
7 99,1636 0,8364 28 55 2 58 24,9587 51,4935 0,0167 0,2219
8 98,2914 1,7086 27 55 4 60 25,1802 52,3657 0,0683 0,4645
9 98,2229 1,7771 27 55 2 58 25,1978 52,4342 0,0355 0,4840
10 99,9036 0,0964 28 56 2 59 24,7739 50,7535 0,0019 0,0250
11 99,1380 0,8620 28 55 3 59 24,9652 51,5191 0,0259 0,2289
12 98,9966 1,0034 27 55 4 60 25,0009 51,6605 0,0401 0,2675
13 98,4540 1,5460 27 55 4 60 25,1386 52,2031 0,0618 0,4184
14 99,7743 0,2257 28 55 1 57 24,8060 50,8828 0,0023 0,0589
15 99,3297 0,6703 28 55 2 58 24,9170 51,3274 0,0134 0,1770
16 87,2756 12,7244 24 48 22 72 28,3584 63,3815 2,8572 4,4565
17 97,1877 2,8123 27 54 6 61 25,4662 53,4694 0,16874 0,7875
18 99,6385 0,3615 28 55 2 58 24,8398 51,0186 0,0072 0,0946
19 99,2356 0,7644 28 55 3 59 24,9406 51,4215 0,0229 0,2024
20 99,3407 0,6594 28 55 4 60 24,9143 51,3165 0,0264 0,1741
21 98,9978 1,0022 27 55 5 61 25,0006 51,6593 0,05011 0,2672
22 73,4013 26,5987 20 41 47 89 33,7188 77,2558 12,4852 11,5803
23 97,6613 2,3387 27 54 4 59 25,3427 52,9958 0,0935 0,6467
24 89,7632 10,2368 25 50 18 69 27,5725 60,8939 1,8493 3,4110
25 53,8119 46,1881 15 30 82 112 45,9936 96,8452 37,6472 23,4874
26 99,3026 0,6974 28 55 1 57 24,9238 51,3545 0,0086 0,1843
27 54,8023 45,1977 15 30 80 111 45,1623 95,8548 36,0499 22,9118
28 97,9177 2,0823 27 54 4 59 25,2763 52,7394 0,0833 0,5719
29 98,5357 1,4643 27 55 3 58 25,1178 52,1214 0,0378 0,3954
30 99,5330 0,4671 28 55 1 57 24,8661 51,1242 0,0038 0,1226
31 99,2162 0,7838 28 55 1 58 24,9455 51,4409 0,0108 0,2077
32 98,2237 1,7763 27 55 2 58 25,1976 52,4334 0,0355 0,4838
33 94,8078 5,1922 26 53 9 63 26,1054 55,8493 0,4757 1,5444
34 71,9974 28,0026 20 40 49 90 34,3762 78,6597 13,8379 12,4005
35 93,4698 6,5302 26 52 12 64 26,4791 57,1873 0,7525 2,0053
36 99,5476 0,4524 28 55 1 57 24,8625 51,1095 0,0036 0,1187
37 99,1860 0,8140 28 55 2 58 24,9531 51,4711 0,0163 0,2159
38 98,7227 1,2773 27 55 3 59 25,0702 51,9344 0,0383 0,3431
39 73,3030 26,6970 20 41 47 89 33,7640 77,3541 12,5776 11,6372
40 99,2467 0,7533 28 55 2 58 24,9379 51,4104 0,0151 0,1994
41 98,0894 1,9106 27 54 3 59 25,2321 52,5677 0,0644 0,5223
42 98,1782 1,8218 27 55 3 59 25,2093 52,4789 0,0586 0,4968
43 98,1302 1,8698 27 55 3 59 25,2216 52,5269 0,0617 0,5106
44 99,3018 0,6982 28 55 1 57 24,9240 51,3553 0,0086 0,1845
45 99,7728 0,2272 28 55 1 57 24,8064 50,8843 0,0023 0,0593
46 98,5044 1,4956 27 55 3 58 25,1258 52,1527 0,0395 0,4042
47 98,4663 1,5337 27 55 2 58 25,1355 52,1908 0,0307 0,4150
48 97,9877 2,0123 27 54 4 59 25,2583 52,6694 0,0805 0,5516
49 99,1495 0,8505 28 55 2 58 24,9623 51,5076 0,0128 0,2258
50 98,3760 1,6240 27 55 3 59 25,1586 52,2811 0,0465 0,4405
1 95,2646 4,7354 26 53 8 62 25,9803 55,3925 0,3957 1,3928
2 96,5602 3,4398 27 54 6 61 25,6317 54,0969 0,2088 0,9791
3 97,3354 2,6646 27 54 5 60 25,4275 53,3217 0,1253 0,7433
4 99,8270 0,1730 28 55 1 57 24,7929 50,8301 0,0017 0,0450
5 97,9404 2,0596 27 54 4 59 25,2705 52,7167 0,0749 0,5653
6 99,4388 0,5612 28 55 1 57 24,8897 51,2183 0,0056 0,1478
7 99,8010 0,1990 28 55 1 57 24,7993 50,8561 0,0020 0,0519
8 98,1866 1,8135 27 55 3 59 25,2071 52,4706 0,0580 0,4944
9 96,0438 3,9562 27 53 7 61 25,7695 54,6133 0,2762 1,1411
10 95,9495 4,0505 27 53 7 61 25,7948 54,7076 0,28953 1,1711
11 96,6676 3,3324 27 54 6 61 25,6032 53,9895 0,1960 0,9459
12 96,7810 3,2190 27 54 6 60 25,5732 53,8761 0,1829 0,9111
13 96,4042 3,5958 27 54 6 61 25,6731 54,2529 0,2282 1,0277
14 95,9992 4,0008 27 53 7 61 25,7815 54,6579 0,28247 1,1553
15 95,7384 4,2616 27 53 8 62 25,8517 54,9187 0,3205 1,2387
16 99,8749 0,1251 28 55 1 57 24,7810 50,7822 0,0013 0,0325
17 99,7738 0,2262 28 55 1 57 24,8061 50,8833 0,0023 0,0590
18 99,0221 0,9779 28 55 2 58 24,9944 51,6350 0,0169 0,2605
19 97,8430 2,1570 27 54 4 59 25,2956 52,8141 0,0821 0,5936
20 97,7807 2,2193 27 54 4 59 25,3117 52,8764 0,0869 0,6117
21 96,7572 3,2428 27 54 6 60 25,5795 53,8999 0,1856 0,9184
22 74,7678 25,2322 21 42 45 87 33,1025 75,8893 11,2352 10,7961
23 96,6071 3,3929 27 54 6 61 25,6192 54,0500 0,2031 0,9646
24 54,2145 45,7855 15 30 81 112 45,6520 96,4426 36,9937 23,2547
25 99,3717 0,6283 28 55 1 57 24,9065 51,2854 0,0063 0,1657
26 99,5282 0,4718 28 55 1 57 24,8673 51,1289 0,0039 0,1239
27 29,7626 70,2374 8 17 1 19 83,1580 120,8945 0,7024 26,5051
28 99,8411 0,1589 28 55 1 57 24,7894 50,8160 0,0016 0,0414
29 99,2559 0,7441 28 55 1 57 24,9356 51,4012 0,0098 0,1969
30 96,1867 3,8133 27 53 7 61 25,7312 54,4704 0,2566 1,0959
31 99,7891 0,2109 28 55 1 57 24,8023 50,8680 0,0021 0,0550
32 93,5989 6,4011 26 52 11 64 26,4426 57,0582 0,7231 1,9597
33 99,4838 0,5163 28 55 1 57 24,8784 51,1734 0,0047 0,1357
34 92,5875 7,4125 26 51 13 66 26,7315 58,0696 0,9696 2,3229
35 95,4576 4,5424 27 53 8 62 25,9277 55,1995 0,3641 1,3296
36 94,8631 5,1369 26 53 9 63 26,0902 55,7940 0,4657 1,5259
37 95,0388 4,9612 26 53 9 63 26,0420 55,6183 0,4344 1,4673
38 97,0970 2,9030 27 54 5 60 25,4900 53,5601 0,1487 0,8149
39 96,8020 3,1980 27 54 6 60 25,5677 53,8551 0,1805 0,9046
40 96,6849 3,3151 27 54 6 61 25,5986 53,9722 0,1939 0,9406
41 97,4338 2,5662 27 54 5 60 25,4019 53,2233 0,1162 0,7140
42 95,2973 4,7027 26 53 8 62 25,9714 55,3598 0,3903 1,3821
43 95,9124 4,0876 27 53 7 61 25,8048 54,7447 0,2949 1,1829
44 99,9100 0,0900 28 56 1 58 24,7723 50,7471 0,0009 0,0234
45 98,9979 1,0021 27 55 2 58 25,0005 51,6592 0,01772 0,2671
46 97,2451 2,7549 27 54 5 60 25,4512 53,4120 0,1339 0,7703
47 99,3014 0,6986 28 55 1 57 24,9241 51,3557 0,0086 0,1846
48 99,0043 0,9957 28 55 2 58 24,9989 51,6528 0,0175 0,2654
49 99,7723 0,2277 28 55 1 57 24,8065 50,8848 0,0023 0,0594
50 99,8504 0,1496 28 55 1 57 24,7871 50,8067 0,0015 0,0389
1 98,5765 1,4236 27 55 3 58 25,1074 52,0807 0,0358 0,3840
2 97,4277 2,5723 27 54 5 60 25,4034 53,2294 0,1168 0,7158
3 97,0639 2,9361 27 54 5 60 25,4987 53,5932 0,1521 0,8249
4 96,2888 3,7112 27 53 7 61 25,7039 54,3683 0,2431 1,0638
5 96,6058 3,3942 27 54 6 61 25,6196 54,0513 0,2033 0,9650
6 96,9375 3,0625 27 54 5 60 25,5319 53,7196 0,1655 0,8633
7 96,7193 3,2807 27 54 6 61 25,5895 53,9378 0,1899 0,9300
8 96,9430 3,0570 27 54 5 60 25,5305 53,7141 0,1649 0,8616
9 95,7271 4,2729 27 53 8 62 25,8548 54,9300 0,3222 1,2424
10 95,2330 4,7670 26 53 8 62 25,9889 55,4241 0,4010 1,4032
11 98,7401 1,2599 27 55 2 58 25,0658 51,9170 0,0280 0,3383
12 98,8928 1,1072 27 55 2 58 25,0271 51,7643 0,0216 0,2960
13 99,0099 0,9902 28 55 2 58 24,9975 51,6473 0,0173 0,2639
14 99,3996 0,6004 28 55 1 57 24,8995 51,2575 0,0064 0,1582
15 98,2720 1,7280 27 55 3 59 25,1852 52,3851 0,0527 0,4700
16 98,7083 1,2917 27 55 2 58 25,0739 51,9488 0,0294 0,3471
17 97,9995 2,0005 27 54 4 59 25,2552 52,6576 0,0706 0,5482
18 96,4180 3,5820 27 54 6 61 25,6695 54,2391 0,2264 1,0234
19 96,8785 3,1215 27 54 6 60 25,5475 53,7786 0,1720 0,8812
20 94,0178 5,9822 26 52 11 64 26,3248 56,6393 0,6315 1,8135
21 95,8768 4,1232 27 53 7 62 25,8144 54,7803 0,3000 1,1943
22 99,6189 0,3811 28 55 1 57 24,8447 51,0382 0,0026 0,0998
23 99,7869 0,2131 28 55 1 57 24,8029 50,8702 0,0021 0,0555
24 98,2838 1,7162 27 55 3 59 25,1822 52,3733 0,0520 0,4667
25 98,0129 1,9871 27 54 4 59 25,2518 52,6442 0,0697 0,5443
26 98,1289 1,8711 27 55 3 59 25,2219 52,5282 0,0618 0,5109
27 99,2188 0,7812 28 55 1 58 24,9449 51,4383 0,0108 0,2070
28 99,0877 0,9123 28 55 2 58 24,9779 51,5694 0,0147 0,2426
29 99,8119 0,1881 28 55 1 57 24,7966 50,8452 0,0019 0,0490
30 98,6859 1,3141 27 55 2 58 25,0796 51,9712 0,0305 0,3534
31 94,4358 5,5642 26 52 10 63 26,2083 56,2213 0,5464 1,6700
32 93,0197 6,9803 26 52 12 65 26,6073 57,6374 0,8598 2,1660
33 99,2736 0,7264 28 55 1 57 24,9311 51,3835 0,0093 0,1922
34 73,3765 26,6235 20 41 47 89 33,7301 77,2806 12,5084 11,5947
35 99,9754 0,0246 28 56 1 58 24,7561 50,6817 0,0002 0,0064
36 95,4756 4,5244 27 53 8 62 25,9229 55,1815 0,3612 1,3238
37 95,8769 4,1231 27 53 1 55 25,8144 54,7802 0,0412 1,1943
38 96,0879 3,9121 27 53 7 61 25,7577 54,5692 0,2701 1,1271
39 96,1601 3,8399 27 53 7 61 25,7383 54,4970 0,2602 1,1043
40 99,2179 0,7821 28 55 1 58 24,9451 51,4392 0,0108 0,2072
41 98,9237 1,0763 27 55 2 58 25,0193 51,7334 0,0204 0,2875
42 74,8210 25,1790 21 42 44 87 33,0789 75,8361 11,1879 10,7658
43 54,2239 45,7761 15 30 81 112 45,6441 96,4332 36,9786 23,2493
44 95,0877 4,9123 26 53 9 62 26,0286 55,5694 0,4258 1,4511
45 99,7293 0,2707 28 55 1 57 24,8172 50,9278 0,0027 0,0707
46 99,2314 0,7686 28 55 1 57 24,9417 51,4257 0,0104 0,2036
47 99,1089 0,8911 28 55 2 58 24,9725 51,5482 0,0140 0,2368
48 98,3820 1,6180 27 55 3 59 25,1570 52,2751 0,0462 0,4388
49 98,2882 1,7118 27 55 3 59 25,1810 52,3689 0,0517 0,4654
50 98,3327 1,6673 27 55 3 59 25,1697 52,3244 0,0491 0,4527
de los cometas medidos en el control positivo con H2O2 150 umol por el Ensayo Cometa.
Nº
1 73,8660 26,1340 21 41 46 88 33,5066 76,7911 12,0527 11,3120
2 73,4673 26,5327 20 41 47 89 33,6885 77,1898 12,4233 11,5421
3 72,6836 27,3164 20 40 48 90 34,0517 77,9735 13,1680 11,9979
4 72,6121 27,3879 20 40 48 90 34,0852 78,0450 13,2370 12,0396
5 73,2864 26,7136 20 41 47 89 33,7716 77,3707 12,5932 11,6469
6 72,6509 27,3491 20 40 48 90 34,0670 78,0062 13,1995 12,0170
7 71,0129 28,9871 20 39 51 92 34,8528 79,6442 14,8280 12,9837
8 73,0108 26,9892 20 41 48 89 33,8991 77,6463 12,8544 11,8070
9 72,8658 27,1342 20 40 48 89 33,9666 77,7913 12,9929 11,8915
10 75,5057 24,4943 21 42 43 86 32,7790 75,1514 10,5877 10,3788
11 73,5351 26,4649 20 41 47 89 33,6574 77,1220 12,3598 11,5029
12 75,6089 24,3911 21 42 43 86 32,7342 75,0482 10,4987 10,3208
13 75,5663 24,4337 21 42 43 86 32,7527 75,0908 10,5354 10,3448
14 75,0735 24,9265 21 42 44 87 32,9677 75,5836 10,9647 10,6227
15 75,5807 24,4193 21 42 43 86 32,7465 75,0764 10,5230 10,3367
16 76,6132 23,3868 21 43 41 85 32,3051 74,0439 9,6519 9,7614
17 95,4278 4,5722 27 53 8 62 25,9358 55,2293 0,3689 1,3394
18 73,9770 26,0230 21 41 46 88 33,4563 76,6801 11,9505 11,2481
19 72,3875 27,6125 20 40 49 90 34,1910 78,2696 13,4550 12,1712
20 73,8846 26,1154 21 41 46 88 33,4982 76,7725 12,0355 11,3013
21 75,6993 24,3007 21 42 43 86 32,6952 74,9578 10,4210 10,2701
22 74,9172 25,0828 21 42 44 87 33,0365 75,7399 11,1026 10,7112
23 95,0143 4,9857 26 53 9 63 26,0487 55,6428 0,4387 1,4755
24 74,4740 25,5260 21 41 45 87 33,2331 76,1831 11,4984 10,9634
25 75,5935 24,4065 21 42 43 86 32,7409 75,0636 10,5120 10,3295
26 75,5538 24,4462 21 42 43 86 32,7581 75,1033 10,5462 10,3518
27 29,2124 70,7876 8 16 125 142 84,7243 121,4447 88,4274 25,9935
28 97,9961 2,0039 27 54 4 59 25,2561 52,6610 0,0709 0,5492
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30 96,0452 3,9548 27 53 7 61 25,7691 54,6119 0,2760 1,1407
31 75,9503 24,0497 21 42 42 86 32,5871 74,7068 10,2068 10,1297
32 73,7578 26,2422 20 41 46 88 33,5558 76,8993 12,1527 11,3743
33 73,7659 26,2341 20 41 46 88 33,5521 76,8912 12,1452 11,3696
34 54,1701 45,8299 15 30 81 112 45,6894 96,4870 37,0655 23,2805
35 75,1147 24,8853 21 42 44 87 32,9496 75,5424 10,9284 10,5993
36 74,7282 25,2718 21 42 55 98 33,1200 75,9289 13,8995 10,8186
37 73,2030 26,7970 20 41 47 89 33,8101 77,4541 12,6720 11,6953
38 54,9969 45,0031 15 31 84 116 45,0025 95,6602 37,8026 22,7975
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47 75,0864 24,9136 21 42 44 87 32,9620 75,5707 10,9533 10,6154
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49 97,9999 2,0001 27 54 4 59 25,2551 52,6572 0,0706 0,5481
50 98,3454 1,6546 27 55 3 59 25,1664 52,3117 0,0483 0,4491
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12 76,4760 23,5240 21 42 52 95 32,3631 74,1811 12,2325 9,8373
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16 76,7862 23,2138 21 43 41 85 32,2323 73,8709 9,5096 9,6659
17 72,9424 27,0576 20 41 48 89 33,9309 77,7147 12,9197 11,8469
18 73,9741 26,0259 21 41 46 88 33,4577 76,6830 11,9532 11,2498
19 29,6129 70,3871 8 16 124 142 83,5784 121,0442 87,4296 26,3711
20 73,1078 26,8922 20 41 47 89 33,8541 77,5493 12,7622 11,7506
21 73,9988 26,0012 21 41 46 88 33,4465 76,6583 11,9305 11,2356
22 72,1322 27,8678 20 40 49 90 34,3120 78,5249 13,7050 12,3212
23 74,7919 25,2081 21 42 44 87 33,0918 75,8652 11,2138 10,7824
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5 73,8535 26,1465 21 41 46 88 33,5123 76,8036 12,0642 11,3192
6 75,8888 24,1112 21 42 43 86 32,6135 74,7683 10,2591 10,1640
7 73,9652 26,0348 21 41 46 88 33,4617 76,6919 11,9614 11,2549
8 73,1190 26,8810 20 41 47 89 33,8489 77,5381 12,7516 11,7441
9 74,6068 25,3932 21 41 45 87 33,1739 76,0503 11,3791 10,8877
10 76,2811 23,7190 21 42 42 85 32,4458 74,3761 9,9280 9,9454
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13 73,2062 26,7938 20 41 47 89 33,8086 77,4509 12,6690 11,6934
14 76,3477 23,6523 21 42 42 85 32,4175 74,3094 9,8724 9,9084
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19 76,8603 23,1397 21 43 41 85 32,2013 73,7968 9,4490 9,6251
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22 74,0178 25,9822 21 41 51 93 33,4379 76,6393 13,2509 11,2247
23 74,7625 25,2375 21 42 45 87 33,1048 75,8946 11,2399 10,7991
24 75,6950 24,3050 21 42 43 86 32,6970 74,9621 10,4247 10,2725
25 76,7227 23,2773 21 43 41 85 32,2590 73,9344 9,5617 9,7009
26 75,4970 24,5030 21 42 43 86 32,7828 75,1601 10,5953 10,3837
27 76,8856 23,1144 21 43 41 85 32,1907 73,7715 9,4284 9,6112
28 73,7247 26,2753 20 41 49 91 33,5708 76,9324 12,8749 11,3934
29 74,7601 25,2399 21 42 48 91 33,1059 75,8970 12,1152 10,8004
30 74,0967 25,9033 21 41 46 88 33,4023 76,5604 11,8408 11,1794
31 99,9980 0,0020 28 56 1 58 24,7505 50,6591 0,0000 0,0005
32 99,2075 0,7925 28 55 3 59 24,9477 51,4496 0,0238 0,2100
33 97,0177 2,9823 27 54 5 60 25,5108 53,6394 0,1570 0,8389
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35 54,7689 45,2311 15 30 80 111 45,1899 95,8882 36,1033 22,9314
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37 76,0107 23,9893 21 42 42 86 32,5612 74,6464 10,1556 10,0959
38 73,7305 26,2695 20 41 50 92 33,5682 76,9266 13,1348 11,3900
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42 76,3541 23,6459 21 42 45 88 32,4148 74,3030 10,6407 9,9049
43 75,7686 24,2314 21 42 43 86 32,6652 74,8885 10,3617 10,2313
44 73,0178 26,9822 20 41 50 92 33,8958 77,6393 13,4911 11,8029
45 74,0769 25,9231 21 41 46 88 33,4112 76,5802 11,8589 11,1907
46 75,7690 24,2310 21 42 43 86 32,6651 74,8881 10,3613 10,2311
47 76,2668 23,7332 21 42 42 85 32,4519 74,3903 9,9400 9,9533
48 75,1761 24,8239 21 42 44 87 32,9227 75,4810 10,8746 10,5646
49 78,3481 21,6519 22 44 38 83 31,5898 72,3090 8,2730 8,8165
50 74,0718 25,9282 21 41 46 88 33,4135 76,5853 11,8636 11,1937

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UNIVERSIDAD CATOLICA DE SANTA MARIA

Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y

« EVALUACIÓN DEL CONTENIDO DE ÁCIDO ASCÓRBICO Y

Tesis presentada por la Bachiller:

El presente trabajo de tesis esta dedicado principalmente a mis padres, María

Quiero agradecer muy profundamente a mi asesor, el Dr. José Villanueva, el cual

Y a todas esas personas que de alguna manera u otra influyeron en la realización y

1.1. SANCAYO (Corryocactus brevistylus)….…………………………………. 1

1.2. RADICALES LIBRES Y ESTRÉS OXIDATIVO…………………….... 7

1.4. ÁCIDO ASCÓRBICO……………………………………………….….... 18

1.5. COMPUESTOS FENOLICOS…………………………………………... 21

1.7. LINFOCITOS DE SANGRE PERIFÉRICA…………………………… 25

1.8. ENSAYO COMETA……………………………………………………… 26

2.1. LUGAR DE EJECUCIÓN.......................................................................... 31

2.4. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO....................................... 35

2.5. DETERMINACIÓN DE POLIFENOLES TOTALES............................. 37

2.6. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

2.7. DETERMINACIÓN DE LA GENOTOXICIDAD DEL Corryocactus

2.8. FLUJOGRAMA DE ACTIVIDADES…………………………………. 60

2.9. ANÁLISIS ESTADÍSTICO………………………………………………. 61

3.1. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO…………….…………. 62

3.2. DETERMINACIÓN DE POLIFENOLES TOTALES………………… 64

3.3. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DEL

3.4. DETERMINACIÓN DE LA GENOTOXICIDAD DEL Corryocactus

FIGURA Nº 1.: Fruto de Corryocactus brevistylus................................................ 2

TABLA Nº 1.: Contenido en vitamina C y polifenoles de distintos frutos……… 5

En el presente trabajo se evaluó el contenido de ácido ascórbico y polifenoles totales

Se utilizaron frutos de Corryocactus brevistylus originarios de la provincia de

Se determinó el contenido de ácido ascórbico por el método voltamétrico obteniendo

La evaluación de la genotoxicidad del sancayo (Corryocactus brevistylus) se realizó

En el estudio de genotoxicidad, se obtuvo un valor del 7,72 ± 0,85 de porcentaje de

Palabras clave: Corryocactus brevistylus, ácido ascórbico, polifenoles totales,

Corryocactus brevistylus fruits belonging to Caylloma province, from the department

The genotoxicity of Corryocactus brevistylus was evaluated using peripheral blood

Keywords: Corryocactus brevistylus, ascorbic acid, total polyphenols, antioxidant

Desde siempre la naturaleza ha proveído al hombre de una gran variedad de

La oxidación es una reacción química de transferencia de electrones de una sustancia

Entre toda esa gran variedad natural, encontramos a la especie Corryocactus

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Debido a la gran importancia atribuida al consumo del fruto de Corryocactus

Evaluar el contenido de ácido ascórbico y polifenoles totales del Sancayo

• Determinar el contenido de ácido ascórbico existente en el fruto sancayo

Debido a que el Sancayo (Corryocactus brevistylus) es una especie endémica con

Las variables dependientes e independientes del proceso:

PRUEBA VARIABLES INDICADORES

Variables - Extracto acuoso al

1.1. SANCAYO (Corryocactus brevistylus)

1.1.1 CLASIFICACION Y NOMBRES COMUNES

El Corryocactus brevistylus es una especie de cactácea de ramificación libre de

La posición taxonómica del Corryocactus brevistylus es la siguiente: 14

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Las costillas son de 6 a 9 distribuidos en forma triangular en corte transversal,

FIGURA Nº 1.: Fruto de Corryocactus brevistylus. Extraído de Ostolaza N.,

1.1.3 ORIGEN Y DISTRIBUCION

El género Corryocactus es uno de los últimos géneros conocidos de cactáceas en

FIGURA Nº 2.: Distribución del Corryocactus brevistylus en las laderas de la