Cuantificación de Compuestos Po GC y HPLC
Cuantificación de Compuestos Po GC y HPLC
Cuantificación de Compuestos Po GC y HPLC
Contenido
RESUMEN ..................................................................................................................................... 2
MÉTODO DE PATRÓN INTERNO .............................................................................................. 3
PREPARACIÓN DE PATRONES Y OBTENCIÓN DE LOS CROMATOGRAMAS ............................... 3
CASO 1:...................................................................................................................................... 4
CUANTIFICACIÓN DEL ANALITO ................................................................................................ 7
CASO 2:...................................................................................................................................... 9
CASO 3: Toxicología ......................................................................................................... 11
METODO DE PATRON EXTERNO ........................................................................................... 13
PREPARACIÓN DE PATRONES Y OBTENCIÓN DE LOS CROMATOGRAMAS .......................... 13
CASO 4:.................................................................................................................................... 13
INTERPRETACIÓN DEL CROMATOGRAMA Y CUANTIFICACIÓN DEL ANALITO ........................ 13
¿CÓMO SE PUEDE CUANTIFICAR EL ANALITO EN LA MUESTRA CON LOS DATOS
DEL CROMATOGRAMA? ................................................................................................... 14
NORMALIZACIÓN DE ÁREAS ............................................................................................ 16
PROBLEMAS RESUELTOS ..................................................................................................... 17
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................................... 22
R.PORTALES 1
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
RESUMEN
• La cromatografía de gases y la cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC) son dos técnicas de separación de analitos que
permiten identificar y cuantificar un gran número de compuestos.
R.PORTALES 2
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
1 7,053 0,04217
2 14,892 0,01623
3 21,452 0,01053
R.PORTALES 3
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
CASO 1:
Si se quiere determinar un analito cuya concentración en el extracto de
la muestra, se espera que esté comprendida en un margen de 350 a 550
mg/L, se podrían preparar e inyectar en el cromatógrafo 4 disoluciones
patrón que además contuvieran una misma concentración de patrón
interno (p.i.), con las siguientes concentraciones:
Patrón 1: 300 mg/L analito + 350 mg/L p.i.
Patrón 2: 400 mg/L analito + 350 mg/L p.i.
Patrón 3: 500 mg/L analito + 350 mg/L p.i.
Patrón 4: 600 mg/L analito + 350 mg/L p.i.
A la muestra se le adicionaría patrón interno, de forma que la
concentración de patrón interno en el extracto de la muestra fuera la
misma que en las disoluciones patrón y se inyectaría en el cromatógrafo.
Así, la muestra tendría una concentración desconocida de analito y 350
mg/L de patrón interno:
R.PORTALES 4
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
Tal y como se muestra en las Figuras 1-5, el tR del pico del analito será el
mismo en todos los cromatogramas el tR del pico del patrón interno será
distinto del tR del analito y se mantendrá constante en todos los
cromatogramas. El área de los picos será diferente dependiendo de la
concentración de analito; por tanto, el área del pico de analito irá
aumentando conforme aumenta la concentración en los patrones (área
R.PORTALES 5
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
del patrón 1 < área patrón 2< área patrón 3 < área patrón 4). Dado que
la concentración de patrón interno se mantiene constante en todas las
disoluciones y en la muestra, el área del p.i. debería ser similar en todos
los cromatogramas.
R.PORTALES 6
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
En primer lugar hay que hacer una tabla que contenga los siguientes
datos: concentración de analito concentración de patrón interno, área
del pico del analito y área del pico del patrón interno. Se calculará la
concentración de analito/concentración de p.i. y el área del
analito/área del p.i., incluyéndose estos valores en la tabla.
R.PORTALES 7
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
Tabla 1. Concentraciones y áreas de los picos del analito y del patrón interno (p.i.)
C analito Área C p.i. Área C analito/C Área
(mg/L) analito (mg/L) p.i p.i. analito/Área
p.i
Patrón 1 300 450.7 350 905.7 0.857 0.49762615
Patrón 2 400 804.9 350 901.3 1.143 0.89304338
Patrón 3 500 1150.2 350 890.1 1.429 1.29221436
Patrón 4 600 1405.6 350 897.8 1.714 1.56560481
Muestra ¿? 1286.4 350 903.6 ¿?/350 1.42363878
1.200
1.000
0.800
0.600
0.400
0.200
0.000
0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80
Área analito/Área p.i
Pendiente 0.78743285
Intercepto 0.44936439
C analito/C p.i=pendiente*(1.42364)*intercepto
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ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
CASO 2:
En la determinación de benceno (C6H6) por cromatografía usando
como detector la espectroscopia de masa, se utilizo el benceno
deuterado (C6D6) como patrón interno, ambos salen casi al mismo
tiempo y se obtuvieron los resultados siguientes:
Solución:
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ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
1.2
0.6
0.4
0.2
0
0 2 4 6 8 10 12
(C6H6), ppm
Señal (C6H6),
(C6H6), (C6D6), Señal Señal
Solución C6H6/Señal ppm/(C6D6),
ppm ppm C6H6 C6D6
C6D6 ppm
Muestra 0.51
1.2
1
Señal C6H6/Señal C6D6
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
(C6H6), ppm/(C6D6), ppm
1
R.PORTALES
0
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
Pendiente 1.07617859
Intercepto 0.00853918
Si Y= 0.51
y=pendiente*X+ Intercepto
X= 0.46596432 ppm
1
R.PORTALES
1
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
CASO 3: Toxicología
Cuando se detiene a un conductor por sospecha de conducir bajo la
influencia del alcohol se determina el contenido de éste en sangre para
ver si rebasa el límite legal permitido. La medición del aliento alcohólico
se suele hacer en los arrestos rutinarios de conductores por ser no invasivo,
y se aplica un factor para convertir la concentración de alcohol en la
sangre, aunque éste a su vez está sujeto a variaciones biológicas en los
individuos. En los casos en que hay un accidente, lesión o muerte, el
alcohol en la sangre se suele determinar directamente analizando una
muestra de sangre por cromatografía de gases.
1
R.PORTALES
2
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
3.0000
1.5000
1.0000
0.5000
0.0000
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
%EtOH (peso/vol)
CASO 4:
Si se quiere determinar un analito cuya concentración en el extracto
de la muestra, se espera que esté comprendida en un margen de
120 a 180 mg/L, se podrían preparar e inyectar en el cromatógrafo 5
disoluciones patrón con las siguientes concentraciones:
Patrón 1: 100 mg/L
Patrón 2: 125 mg/L
Patrón 3: 150 mg/L
Patrón 4: 175 mg/L
Patrón 5: 200 mg/L
1
R.PORTALES
3
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
1
R.PORTALES
4
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
600
300
200
100
0
90 110 130 150 170 190 210
Concentración (mg/L)
Pendiente 2.542
Intercepto -0.22
1
R.PORTALES
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ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
NORMALIZACIÓN DE ÁREAS
El método de normalización de areas se aplicó para la determinación de
los alcoholes butílicos normales, secundarios, isobutilico y ter-butilico. Con
la finalidad de obtener el factor de respuesta relativa de los alcoholes se
preparó una solución patrón de los alcoholes y se observó el
cromatograma de gases. Los resultados fueron los siguientes:
n-butílico 1.731
i-isobutílico 3.753
s-secbitílico 2.845
t-terbutílico 1.117
1
R.PORTALES
6
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
Tabla N°2:
Muestra Área del pico, cm2 gr %en peso de alcohol
PROBLEMAS RESUELTOS
P-1)Mediante cromatografía HPLC se estudiaron varias disoluciones de
ibuprofeno diferente concentración, obteniéndose los siguientes
resultados:
Concentración Area
ibuprofeno (ug/mL) relativa
0.5 5
1 10.1
2 17.2
3 19.8
6 39.7
8 57.3
10 66.9
15 95.3
1
R.PORTALES
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ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
120
60
40
20
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Concentración ibuprofeno (ug/mL)
Pendiente= 6.26690909
Intercepto= 3.26945455
A=pendiente*Cibuprofeno+Intercepto
1
R.PORTALES
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ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
𝑆𝑒ñ𝑎𝑙 𝑆 𝐶𝑠
=𝑓∗
𝑆𝑒ñ𝑎𝑙 𝐸𝐼 𝐶𝐸𝐼
Suponiendo que existe relación lineal y que esta pasa por el origen (b=0),
donde:
Cs=0 , No hay analito 𝐶𝐸𝐼 =10.1 ppm 𝐶𝐶𝑠 = 0
𝐸𝐼
Cs=304 ppm𝐶 𝐶𝑠
=
304
10.1
= 30.09901
𝐸𝐼
Tenemos 2 puntos
Cs, ppm IS (Internal Caffeine 𝑆𝑒ñ𝑎𝑙 𝑆
pattern) (analito) 𝑆𝑒ñ𝑎𝑙 𝐸𝐼
0 0
1
http://wilstar.com/caffeine.htm
1
R.PORTALES
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ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
Pendiente= 0.008941988
Para la muestra:
𝑆𝑒ñ𝑎𝑙 𝑆
= 𝑓 ∗ 𝐶𝑠
𝑆𝑒ñ𝑎𝑙 𝐸𝐼
𝑆𝑒ñ𝑎𝑙 𝑆
= 2.28067 ∗ 𝐶𝑠
𝑆𝑒ñ𝑎𝑙 𝐸𝐼
2.28067=0.008941988*Cs
Cs=255.051 ppm
También se puede usar la siguiente ecuación: Ax/Cx = F (As/Cs)
P-3) El aldehído cinámico es el compuesto del que depende el sabor de
la canela. También es un antimicrobiano potente, que forma parte de
ciertos aceites esenciales. La respuesta de la cromatografía de gases
(CG) con una muestra artificial que contiene seis componentes de
aceites esenciales y metilbenzoato como patrón interno se muestra en la
siguiente figura:
2
R.PORTALES
0
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
Calcula:
a) el número de platos teóricos para el compuesto de estudio.
b) La columna de sílice fundida tiene 0.25 mm x 30 cm de diámetro y
longitud de columna respectivamente, y con un tamaño de partícula de
0.25 μm. Determina la altura de plato teórico.
c) Se obtienen datos cuantitativos empleando metilbenzoato como
patrón interno para los
compuestos aldehído cinámico y timol tal y como se muestra en la
siguiente tabla. Sabiendo que los valores de área relativas para cada
compuesto se calculan dividiendo el área del pico del
componente/área del patrón interno, calcula: el área relativa para los
dos compuestos anteriormente mencionados, determine las ecuaciones
de la curva de calibrado para cada componente y a partir de los datos
del apartado anterior determina qué componente tiene mayor
sensibilidad.
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ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
2
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ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
Determinar:
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ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Skoog. “Principios de Análisis Instrumental”. Cengage Learning.
Sexta edición. 2007.
2. CHRISTIAN, GARY. “Química Analítica”. Mc Graw Hill. Washington.
2009.
3. Recuperado de:
http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/LIApregrado/archivos/Gu
ia%20para%20cromatografia.pdf
4. Recuperado de:
http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/angelisa/Downloads/tecnicascali
bracio_vr1.pdf
5. Recuperado de:
https://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cromagraf.pdf
6. Recuperado de:
https://lidiaconlaquimica.wordpress.com/cromatografia/
7. Recuperado de:
https://lidiaconlaquimica.wordpress.com/2015/08/05/ejercicios-de-
introduccion-a-la-cromatografia/
8. Recuperado de:
http://www4.ujaen.es/~mjayora/docencia_archivos/Quimica%20
analitica%20ambiental/Tema6.pdf
9. Recuperado de:
https://chem.libretexts.org/Textbook_Maps/Analytical_Chemistry_T
extbook_Maps/Map%3A_Analytical_Chemistry_2.0_(Harvey)/12_C
hromatographic_and_Electrophoretic_Methods/12.5%3A_High-
Performance_Liquid_Chromatography
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