Actividad de La Formiato Deshidrogenasa y Nitrato Reductasa
Actividad de La Formiato Deshidrogenasa y Nitrato Reductasa
Actividad de La Formiato Deshidrogenasa y Nitrato Reductasa
0.8
0.6
Absorbancia a 520nm
0.2
0
0 10 20 30 40 50 60
NANOMOLES DE NITRITO
0.7
0.6
0.5
Absorbancia a 600nm
0.4
Linear (Absorbancia a 600nm)
0.3
0.2
0.1
0
0 100 200 300 400 500 600
Ug de albumina
Determinación de proteína.
Extractos de Alícuota de la Absorbancia a Absorbancia a Ug proteína/mL
cultivos dilución 600nm para 0.2 600nm para 0.4 promedio
1 0.2 0.4 0.284 0.463 36.95
2 0.2 0.4 0.268 0.467 32.83
3 0.2 0.4 0.260 0.442 31.33
4 0.2 0.4 0.308 0.556 38.85
MANEJO DE DATOS.
-Cuantificación de nitritos.
Se calculan los nanomoles de nitritos interpolándolos en la ecuación de la recta.
Ecuación de la curva tipo de nitritos.
𝑦 = 0.0742 + 0.0208𝑥
Despejando x obtenemos que
𝑦 − 0.0742
𝑥=
0.0208
PASO 1-Para cada uno de los extractos determinamos los nanomoles de nitrito.
0.906 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 39.99𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠𝑁𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜
0.353 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 13.40𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠𝑁𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜
0.460 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 18.54𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠𝑁𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜
0.729 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 31.48𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠𝑁𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜
PASO 2-Calcular los nanomoles por mililitro de nitrito para cada extracto.
1
nMolesnitrito/mL = nMoles(𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎)(𝐹. 𝐷)(𝐹. 𝐷 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎)
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = (39.99)( )(200)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 79980𝑛𝑀𝑜𝑙𝑛𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = (13.40)( )(200)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 26800𝑛𝑀𝑜𝑙𝑛𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = (18.54)( )(200)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 37080𝑛𝑀𝑜𝑙𝑛𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = (31.48) ( ) (200)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 251840𝑛𝑀𝑜𝑙𝑛𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜/𝑚𝐿
PASO 3-Calcular los nmoles de nitrito/mL/min
79980
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 7998nMolnitrito/mL/min
26800
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 2680nMolnitrito/mL/min
37080
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 3708nMolnitrito/mL/min
251840
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 25184nMolnitrito/mL/min
PASO 4-Calcular la actividad específica para nitrito.
7998
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
36.95
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 216.45nMolnitrito/mg/min
2680
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
32.83
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 81.63nMolnitrito/mg/min
3708
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
31.33
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 118.35nMolnitrito/mg/min
25184
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
38.85
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 648.23nMolnitrito/mg/min
-Determinación de la actividad del complejo formiato deshidrogenasa-nitrato reductasa.
Se calculan los nanomoles del complejo interpolándolos en la ecuación de la recta.
Ecuación de la curva tipo de nitritos.
𝑦 = 0.0742 + 0.0208𝑥
Despejando x obtenemos que
𝑦 − 0.0742
𝑥=
0.0208
PASO 1-Para cada uno de los extractos determinamos los nanomoles del complejo.
0.650 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 27.68𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠
0.096 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 1.098𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠
0.069 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = −0.25𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠
0.687 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 29.46𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠
PASO 2-Calcular los nanomoles por mililitro de complejo para cada extracto.
1
nMolesnitrito/mL = nMoles(𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎)(𝐹. 𝐷)(𝐹. 𝐷 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎)
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = (27.68)( )(100)(2)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 55360𝑛𝑀𝑜𝑙/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = (1.048)( )(100)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 1048𝑛𝑀𝑜𝑙/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = (−0.25)( )(100)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 0𝑛𝑀𝑜𝑙/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = (29.46) ( ) (100)(2)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 58920𝑛𝑀𝑜𝑙/𝑚𝐿
PASO 3-Calcular los nmoles de complejo/mL/min
55360
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 5536nMol/mL/min
1048
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 104.8nMol/mL/min
58920
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 5892nMol/mL/min
PASO 4-Calcular la actividad específica para el complejo.
5536
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
36.95
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 149.82nMol/mg/min
104.8
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
32.83
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 3.19nMol/mg/min
5892
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
38.85
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 151.66nMol/mg/min
-Determinación de actividad de formiato deshidrogenasa.
PASO 1-Se resta el valor de la absorbancia inicial a la absorbancia inicial para cada extracto.
∆𝐴600𝑛𝑚 = 𝑇𝑜 − 𝑇𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙.
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 1.291 − 0.112 = 1.179∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 1.412 − 1.308 = 0.104∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 1.499 − 1.407 = 0.092∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 1.343 − 0.079 = 1.264∆𝐴600𝑛𝑚
𝑇𝑒𝑠𝑡𝑖𝑔𝑜 = 1.436 − 1.338 = 0.098∆𝐴600𝑛𝑚
∆𝐴600𝑛𝑚
PASO 2-Calcular los 𝑑𝑒 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑖𝑎𝑡𝑜 𝑑𝑒𝑠ℎ𝑖𝑑𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑎𝑠𝑎.
𝑚𝐿
∆𝐴600𝑛𝑚 1
= ∆𝐴600𝑛𝑚 ( ) (𝐹. 𝐷)
𝑚𝐿 𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎
1 ∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 1.179(0.1) (20) = 235.8 𝑚𝐿
1 ∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 0.104 ( ) (20) = 20.8
0.1 𝑚𝐿
1 ∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 0.092 ( ) (20) = 18.4
0.1 𝑚𝐿
1 ∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 1.262 ( ) (20) = 252.8
0.1 𝑚𝐿
∆𝐴600𝑛𝑚
PASO 3- calcular los de la formiato deshidrogenasa.
𝑚𝐿/𝑚𝑖𝑛
235.8
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
6
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 39.3∆𝐴600𝑛𝑚 /mL/min
20.8
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 2.08∆𝐴600𝑛𝑚/mL/min
18.4
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 1.84∆𝐴600𝑛𝑚/mL/min
252.8
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
4
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 63.2∆𝐴600𝑛𝑚/mL/min
PASO 4-Calcular la actividad específica para la formiato deshidrogenasa.
39.3
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
36.95
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 1.063∆𝐴600𝑛𝑚 /mg/min
2.08
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
32.83
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 0.0633∆𝐴600𝑛𝑚 /mg/min
1.84
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
38.85
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 0.05872∆𝐴600𝑛𝑚/mg/min
63.2
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
38.85
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 1.6267∆𝐴600𝑛𝑚 /mg/min
-Determinación de proteína.