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    Este documento proporciona instrucciones para la determinación cuantitativa de urea en suero o plasma mediante un método cinético enzimático. La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea en amonio e iones carbónico, que son incorporados por la glutamato deshidrogenasa en la conversión de NADH a NAD+, cuya disminución es proporcional a la concentración de urea. El rango de medida es de 1-350 mg/dL con una precisión del 2,99-4,99% y una sensibilidad analí

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    UREA -LQ

    Urea
    Ureasa-GLDH. Cinético. Líquido

    Determinación cuantitativa de urea Blanco Patrón Muestra


    IVD RT (mL) 1,0 1,0 1,0
    (Nota2-3)
    Patrón (µL) -- 10 --
    Conservar a 2-8ºC Muestra (µL) -- -- 10

    PRINCIPIO DEL METODO 4. Mezclar. Leer las absorbancias a los 30 s (A1) y a los 90 s (A2).
    La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en 5. Calcular: ∆A= A1 – A2 .
    +
    amoniaco (NH4 ) y anhídrido carbónico (CO2).
    CALCULOS
    Los iones amonio formados se incorporan al α-cetoglutarato por
    acción de la glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidación ( ∆A ) Muestra
    x 50 (Conc. Patrón) = mg/dL de urea en la muestra
    paralela de NADH a NAD :
    +
    ( ∆A ) Calibrador
    + Ureasa + 10 mg/L urea BUN dividido por 0,466 = 21 mg/L de urea = 0,36 mmol/L urea1.
    Urea + H2O + 2 H  → (NH4 )2 + CO2
    + GLDH + Factor de conversión: mg/dL x 0,1665 = mmol/L.
    NH4 +α-Cetoglutarato+NADH → H2O + NAD + L-Glutamato
    CONTROL DE CALIDAD
    La disminución de la concentración de NADH en el medio es
    1 Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
    proporcional a la concentración de urea de la muestra ensayada . SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210)
    Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
    SIGNIFICADO CLINICO revisar los instrumentos, los reactivos y la calibración.
    La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
    forma en el hígado a partir de su destrucción. correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
    La concentración de urea en sangre (uremia) aumenta como
    consecuencia de dietas con exceso de proteínas, enfermedades VALORES DE REFERENCIA4,5
    renales, insuficiencia cardiaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y Suero o plasma:
    obstrucciones renales
    1,4,5
    . 15-45 mg/dL ≅ 2,5-7,5 mmol/L
    El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los Orina:
    datos clínicos y de laboratorio. 26 – 43 g/24 h ≅ 428-714 mmol/24 h
    Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
    REACTIVOS establezca sus propios valores de referencia.
    TRIS pH 7,8 80 mmol/L CARACTERISTICAS DEL METODO
    R1
    α-Cetoglutarato 6 mmol/L Rango de medida: Desde el limite de detección 1 mg/dL hasta el limite de
    Tampón
    Ureasa 75000 U/L linealidad 350 mg/dL.
    R2 GLDH 60000 U/L Si la concentración de la muestra es superior al limite de linealidad, diluir
    Enzimas NADH 0,32 mmol/L 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
    UREA CAL Patrón primario acuoso de Urea 50 mg/dL Precisión:
    Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
    PREPARACION
    Reactivo de trabajo (RT) Media (mg/dL) 40,6 141 42,5 141
    Mezclar: SD 1,22 1,03 2,12 1,15
    4 vol. de R1 Tampón + 1 vol. R2 Enzimas. CV (%) 2,99 0,73 4,99 0,81
    La estabilidad del (RT) es de 1 mes a 2-8ºC. Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,00087 A
    UREA CAL: Listo para su uso. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias
    sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos
    CONSERVACION Y ESTABILIDAD comerciales (x).
    Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
    caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los Coeficiente de regresión (r): 0,99.
    viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su Ecuación de la recta de regresión: y= 0,9993x + 0,0394.
    contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
    UREA CAL
    Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien INTERFERENCIAS
    cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. Como anticoagulante se recomienda la heparina. En ningún caso deben
    1
    Indicadores de deterioro de los reactivos: utilizarse sales de amonio o fluoruro .
    - Presencia de partículas y turbidez. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
    2,3
    - Absorbancia (A) del Blanco a 340 nm < 1,00. determinación de la urea

    MATERIAL ADICIONAL NOTAS


    - Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm. 1. El material empleado así como el agua destilada que se utilice deben estar
    libres de amoniaco y/o sus sales1.
    - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
    2. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos
    - Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 1). en métodos automáticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores
    séricos.
    MUESTRAS 3. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
    1
    - Suero o plasma heparinizado : No usar sales de amonio o fluoruro 4. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de
    como anticoagulantes. este reactivo en distintos analizadores.
    1
    - Orina : Diluir la muestra al 1/50 en agua destilada. Mezclar.
    Multiplicar el resultado obtenido por 50 (factor de dilución). Evitar el BIBLIOGRAFIA
    crecimiento bacteriano, manteniendo el pH < 4. 1. Kaplan A. Urea. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
    La urea es estable 5 días a 2-8ºC. Toronto. Princeton 1984; 1257-1260 and 437 and 418.
    2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
    3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
    PROCEDIMIENTO 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
    1. Condiciones del ensayo: 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
    Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm
    Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz PRESENTACION
    Temperatura. . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 37ºC / 15-25ºC Ref: 41040 R1 40 mL R2 10 mL
    2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. Ref: 41041 Cont. R1 240 mL R2 60 mL
    3. Pipetear en una cubeta: Ref: 41042 R1 100 mL R2 25 mL
    Ref: 41043 R1 480 mL R2 120 mL

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