COPROCULTIVO (2) Imp
COPROCULTIVO (2) Imp
COPROCULTIVO (2) Imp
FACULTAD: CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA
1. DATOS GENERALES:
GRUPO No.: 3
2. OBJETIVO(S):
2.1. GENERAL
2.2. ESPECÍFÍCOS
3. MARCO TEÓRICO:
La porción inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal excesivamente
amplia. Los microorganismos con mayor prevalencia son los anaerobios (Bacteroides,
bácilos gram positivos, Estreptococos), microorganismos entéricos gran negativos
y Enterococcus faecalis. Cualquier intento por aislar bacterias patógenas de las heces
implica la separación de las especies patógenas, usualmente a través del empleo de
medios selectivos diferenciales y de cultivos enriquecidos. Las principales causas de
trastornos gastrointestinales agudos incluyen a los virus, las toxinas (de:
Estafilococos, Vibriones, Escherichia coli), bacilos entéricos gran negativos invasores,
los fermentadores lentos de la lactosa, la Shigella, la Salmonella y
la Campilobacterias. La importancia relativa de estos grupos tiene grandes
discrepancias en las distintas partes del mundo.
Las heces y los raspados rectales son los especímenes de que se dispone con mayor
facilidad. Debe anotarse, en el examen macroscópico la presencia de sangre, moco o
helmintos en la inspección inicial. Se suspenden los especímenes en un caldo
selectivo como el Caldo de Tetrationato y se cultivan sobre medios ordinarios así como
en medios selectivos diferenciales, por ejemplo Agar EMB, Agar McConkey, Agar S-S,
para permitir la separación de los bacilos gran negativos que no fermentan la lactosa
de otras bacterias entéricas comunes.
Las muestras de heces se procesarán para cultivo dentro de las 4-6 horas siguientes a
su emisión. Si esto no es posible, es conveniente su conservación en un medio de
transporte adecuado manteniéndose en refrigerador hasta su siembra.. Los
escobillones rectales son aceptables sólo para cultivos de muestras de niño con
diarrea aguda. Los escobillones deben mostrar heces. No se recomienda el cultivo
sistemático de meconio o heces de recién nacido para diagnóstico de infección
neonatal.
•Pesar la cantidad de medio de cultivo óptima y rehidratarlo con agua destilada en un matraz de
erlenmeyer.
.
•Autoclavar el matraz de erlenmeyer con un tapón de gasa sin cerrarlo totalmente durante 30 minutos
a una presión de 103kPa y una temperatura de 121°C.
.
•Mezclar con cuidado el agar con la concentración exacta de sangre evitando que se
formen grumos.
.
•Distribuir el medio en las placas de Petri estériles dentro de una campana de flujo laminar
o en las proximidades del mechero, flameando bien la boca del matraz de erlenmeyer
. para contaminaciones.
NOTA: Si preparó los medios con anterioridad guardarlos en una nevera a 4ºC.
4.2. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO, EMPLEADOS EN LAS
DIFERENTES PRUEBAS BIOQUÍMICAS DE IDENTIFICACIÓN BACTERIANA
Seguir las indicaciones expuestas en cada frasco de medios de cultivo para pruebas
bioquímicas y disponer en tubos de ensayo estériles la cantidad requerida para cada
prueba, cubrir los tubos con un tapón estéril e inclinarlos de modo que se obtenga la
forma de pico de flauta en la superficie del tubo (medio Urea, Citrato, Kigler), para el
agar MIO no es necesario obtener la disposición de pico de flauta.
4.4. TINCIÓN
Al día siguiente se
Una vez
medirán con una
reconocidas la o las Para la regla los halos de
bacterias, proceder colocación de los Incluir en su
inhibición por la
a realizar el discos de antibiograma, los
parte trasera de la
respectivo sensibilidad se discos de Posteriormente placa y se realizará
antibiograma, sensibilidad con
usarán pinzas se llevarán las la respectiva
incluyendo discos concentraciones
estériles y la placas a incubar interpretación con
de antibióticos que adecuadas que
distancia entre por 24 horas. ayuda de las tablas,
se emplean en permitan
disco y disco no donde se
especies diferenciar tipos
deberá ser determina si existe
bacterianas Gram bacterianos.
Sensibilidad (S) o
positivas y Gram menor a 1,5 cm. Resistencia (R) al
negativas.
antibiótico.
- Crecimiento bacteriano
- Cambio de pH y color
- Presencia de movilidad
- Presencia de fermentación
- Producción de gas
- Presencia de actividad enzimática
- Producción de ácido sulfhídrico, etc.
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:
OBSERVACIONES DESCRIPCION
EXAMEN EN FRESCO
TINCION GRAM
MUESTRA 11
AGAR SANGRE
Se pudo observar el crecimiento colonias
medianas blanquecinas y redondeadas,
algunas de estas cepas produciéndose
una beta hemolisis.
AGAR MACCONKEY
Se observa cepas de color rosado y el
ligero cambio de color.
UTI
Se pudo observar colonias de color fucsia
perteneciente a Escherichia coli y
colonias de color celeste perteneciente a
Enterococcus fecalis
MUESTRA DESPUES DE CALDO
BISMUTO
AGAR SANGRE
Se pudo observar el crecimiento colonias
medianas blanquecinas y redondeadas,
algunas de estas cepas produciéndose
una beta hemolisis.
AGAR MACCONKEY
Se observa cepas de color rosado y el
cambio de color a fucsia no se dio.
UTI
Se pudo observar colonias de color
celeste perteneciente a Enterococcus
fecalis y a Shigella
PRUEBAS BIOQUIMICAS
KLIGER. Crecimiento -
Gas sulfhídrico +
Ácido sulfhídrico –
Lactosa, glucosa +
CITRATO. Negativo
Sin crecimiento -
MIO.
Indol +
Ornitina -
Motilidad +/- Variable
Urea. Negativo
sin crecimiento
ANTIBIOGRAMA
Nos permite ver la sensibilidad i
resistencia a algunos medicamentos.
CIP sensible
CN intermedia
SIT resistente
AM sensible
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:
7.1. CONCLUSIONES
8. BIBLIOGRAFÍA:
Becton Dickinson, 2013, BD Salmonella Shigella Agar, Revista BD, 47(6). Recuperado
en: http://www.bd.com/resource.aspx?idx=8779
Cuestionario de evaluación
1. Preparar un inoculo:
. Si son heces líquidas se procesan directamente.
. Si son heces sólidas se realiza una suspensión densa, tomando
una porción de heces del tamaño de un guisante y agitando hasta
su homogeneización.
Pruebas bioquimicas
UREA, MIO, CITRATO, KLIGER
Consulte el fundamento científico, composición y utilidad de los
diferentes medios de cultivo empleadas en su práctica y adicione a su
estudio dos agares específicos para siembras de heces.
AGAR MACCONKEY
BD MacConkey II Agar es un medio de diferenciación selectivo para el aislamiento y la
diferenciación de Enterobacteriaceae y diversos otros bacilos gram negativos
FUNDAMENTO
El agar MacConkey es sólo ligeramente selectivo, dado que la concentración de sales
biliares, que inhiben los microorganismos gram positivos, es baja en comparación con
otros medios en placa entéricos. Las peptonas proporcionan los nutrientes.
Cristal violeta inhibe las bacterias gram positivas, en especial los enterococos y
estafilococos. La diferenciación de los microorganismos entéricos se logra mediante la
combinación de lactosa y el indicador de pH rojo neutro. Se producen colonias
incoloras o de color de rosa a rojo según la capacidad del aislado para fermentar
carbohidratos.
COMPOSICION
UTILIDAD
Se recomienda el uso de este medio en muestras clínicas con posible flora microbiana
mixta, tal como procedentes de la orina, del sistema respiratorio, de heridas y otras,
porque permite la agrupación preliminar de bacterias entéricas y otras bacterias gram
negativas en organismos fermentadores y no fermentadores de lactosa. También se
utiliza en el examen microbiológico de alimentos
UTI
El CHROMagar peptonas seleccionadas especialmente suministran los nutrientes. La
mezcla de cromógenos está formada por sustratos artificiales (cromógenos) que
liberan compuestos de colores diferentes al ser degradados por enzimas microbianas
específicas, por lo que se asegura la diferenciación directa de determinadas especies
o la detección de ciertos grupos de organismos, con sólo un mínimo de pruebas de
confirmación.
COMPOSICION
UTILIDAD
Se utiliza para el aislamiento de bacterias comúnmente presentes en infecciones de
las vías urinarias, para el aislamiento, la identificación o la diferenciación de patógenos
urinarios, o para el aislamiento de bacterias gram positivas.
AGAR SANGRE
FUNDAMENTO
Las propiedades superiores del BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood para
propiciar el crecimiento se derivan de la combinación de dos peptonas y del extracto
de levadura como fuente de vitaminas del complejo B. Se incluye almidón de maíz
para absorber los derivados tóxicos contenidos en la muestra y sirve como fuente de
energía para los microorganismos que poseen alfa-amilasas.
La sangre de carnero permite detectar las reacciones hemolíticas y aporta el factor X
(hemo) necesario para el crecimiento de numerosas especies patogénicas.
COMPOSICION
UTILIDAD
AGAR SS
Es un medio selectivo y de diferenciación para el aislamiento de bacilos entéricos
patógenos, en especial los pertenecientes al género Salmonella.
FUNDAMENTO
En BD Salmonella Shigella Agar, la diferenciación de los organismos entéricos se
logra mediante la incorporación de lactosa en el medio. Los organismos que fermentan
lactosa producen ácido que, en presencia del indicador rojo neutro, propicia la
formación de colonias de color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa
forman colonias incoloras. Este último grupo incluye la mayoría de los patógenos
intestinales, incluidos Salmonella y Shigella. El tiosulfato sódico y el citrato férrico
permiten la detección de producción de ácido sulfhídrico, como lo demuestran las
colonias con centros de color negro
COMPOSICION
UTILIDAD
Un medio moderadamente selectivo según el nivel de inhibición de los
microorganismos gram positivos y Enterobacteriaceae diferentes de Salmonella y
Shigella, que inhibe por contenido de sales biliares, verde brillante y citratos.
AGAR XLD
Agar de xilosa, lisina, desoxicolato) es un medio moderadamente selectivo y de
diferenciación para el aislamiento y la diferenciación de patógenos entéricos gram
negativos.
FUNDAMENTO
Contiene extracto de levadura como fuente de nutrientes y vitaminas. Utiliza el
desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los
microorganismos gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la
fermentan prácticamente todos los entéricos, excepto Shigella, y esta propiedad hace
posible la diferenciación de dicha especie. La lisina se incluye para permitir la
diferenciación del grupo Salmonella de los organismos no patógenos, dado que, sin
lisina, Salmonella fermentaría rápidamente la xilosa y no se distinguiría de las
especies no patógenas. Cuando la Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina
es atacada por la enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH
alcalino que imita la reacción de Shigella. Para evitar el cambio similar en los
organismos coliformes positivos a la lisina, se añaden lactosa y sacarosa para producir
ácido en exceso.
COMPOSICION
UTILIDAD
Tiene una gran eficacia relativamente alta de XLD Agar en el aislamiento primario de
Shigella y Salmonella. XLD Agar es uno de los medios utilizados en las pruebas de
límites microbianos en USP y EP.