Protocolo Ada
Protocolo Ada
Protocolo Ada
PROTOCOLO ADA
FUNDAMENTO DEL METODO:
50U--------------------150 mmol.
MUESTRA
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NO congelar el líquido sin centrifugar, ya que los leucocitos poseen ADA, que una vez
liberada en el líquido por congelación y descongelación pueden producir resultados
falsamente altos.
MATERIALES
tubos de 15 ml
tubos de 50 ml
balanza de precisión
espectrofotómetro digital
pipeta automática 25 ul
3 pipetas de 1, 2 y 10 ml
matraces
probetas
buffer fosfato 1x
standard de reacción
adenosina
pescadera
marcador
reloj o timer
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PREPARACION DE REACTIVOS
SOLUCIÓN DE ADENOSINA
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Nro. De muestras 1 2 3 4 5
ADENOSINA mg 11.2 16.8 22.4 28.0 33.6
Buffer fosfato ml 2 3 4 5 6
PROCEDIMIENTO
Rotular los tubos blanco de reactivo (BR), standard (STD), blanco de adenosina
(BA), muestra 1 (M1), muestra 1 duplicado (M1d), blanco de muestra 1 (BM1), M2,
M2d, BM2, etc.
Standard 0.5 ml
Muestra 25 ul 25 ul
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Prepare la solución A y B del reactivo colorimétrico de urea (método ureasa)
diluídos al 1/5, 1 parte de reactivo A de “Urea color 2 R” concentrado + 4 partes de
agua destilada y 1 parte de reactivo B de “Urea color 2 R” + 4 partes de agua
destilada.
Retire los tubos del baño y agregue para Interrumpir la reacción a cada tubo 500 ul
de la solución de reactivo A y 500 ul de la solución de reactivo B.
CÁLCULOS
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En el caso que la absorbancia de alguna muestra exceda el rango de linealidad al
cuantificarla con el espectrofotómetro, repetir la determinación diluyendo la
muestra 1:2 en buffer.
RESULTADOS ESPERADOS
CONTROLES DE LA TÉCNICA
CONTROL NEGATIVO: usar un líquido que haya dado menor a 20 U/l de ADA
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Identificarlos como control CP y CN, es conveniente también agregar el valor en
unidades de ADA de cada control para saber si el coeficiente de variación está
dentro del rango aceptable.
CALIBRACIÓN DE LA TÉCNICA
Tubo 2 75 UI/l
Rotular los tubos, colocar en el tubo 1: 10 ml de buffer fosfato + 150 ul sol madre.
Homogeneizar bien.
De cada tubo extraer 500ul , poner en un tubo rotulado 1,2 .......6 y poner en baño de
agua a 37ºC durante 1 hora.
Agregar a cada tubo 500 ul de reactivo A y 500 ul de reactivo B (diluídos al 1/5 con
agua destilada, preparado en el momento)