Laboratorio de Bioquímica.

Grupo H2

INFORME PRÁCTICA 5:
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA Y COLESTEROL EN SANGRE

Silvia Juliana Becerra Anaya. Código: 2080117

Andrea Katherine González. Código: 2080139

Universidad Industrial de Santander

Facultad de Ciencias Básicas
Escuela de Química

Recibido: Luis Oveimar Barbosa Jaimes. Aceptado: Octubre 3, 2012

RESUMEN
En la práctica se llevó a cabo la determinación de glucosa y colesterol en una muestra de sangre. Para
cual, se utilizaron los reactivos de Biosystems para uso in vitro en el laboratorio clínico. Los compuestos
de interés se cuantificaron por espectrofotometría a 505 nm.

INTRODUCCIÓN:
 Analizar los resultados obtenidos de las
La glucosa es la principal fuente de energía para el concentraciones de glucosa y colesterol,
metabolismo celular, esta se almacena en el hígado por comparación con los niveles promedio
el cual tiene un papel importante en el de estos.
mantenimiento de la glucosa en sangre, su
determinación es útil para el diagnóstico de MARCO TEÓRICO
numerosas enfermedades metabólicas
principalmente la diabetes mellitus. La glucosa es un azúcar que es utilizada como
fuente de energía para el organismo, esta se
Al igual que la glucosa, es necesario la incrementa en la sangre al ingerir alimentos
determinación del colesterol en sangre para la diferentes al agua, lo que se consume desaparece
prevención cardiovascular ya que se ha visto que de la sangre mediante el empleo de una hormona
este contribuye a la formación de ateromas, lo cual reguladora producida por el páncreas conocida
es debido a que es una sustancia cerosa que se como insulina, cuando ocurre lo contrario se
puede encontrar en todo nuestro cuerpo (tejidos secreta otra hormona llamada glucagón que
corporales y plasma sanguíneo). [1] permite mantener los niveles de glucosa en sangre.
En la presente práctica se determina la El análisis de la glucosa permite medir la
concentración de glucosa y colesterol en sangre concentración de esta presente en la sangre para la
mediante complejos coloreados que se cuantifican prevención o diagnóstico de una diabetes mellitus
por espectrofotometría a una longitud de onda de o sacarina, esta enfermedad se caracteriza por
específica. presentar valores superiores a 140 mg/dL, entre 70
y 110 mg/dL se consideran valores normales, pero
OBJETIVOS GENERALES: inferiores a 60 mg/dL desencadena una
hipoglicemia.
 Determinación de glucosa y colesterol en
sangre mediante la formación de Su determinación se realiza después de la
complejos coloreados para su posterior oxidación enzimática en presencia de glucosa
cuantificación por espectrofotometría a oxidasa. El peróxido de hidrogeno formado
una longitud de onda especifica. reacciona bajo la catálisis de peroxidasa con fenol

1
 Determinación de glucosa y colesterol en sangre

y 4-aminofenazona formando un complejo rojo- 1. Determinación de Glucosa

violeta usando la quinoneimina como indicador, el
cual es posible cuantificarlo por Las soluciones mostradas en la Tabla 1 se
espectrofotometría, a continuación se muestran las colocaron en tubos de ensayo, estos se incubaron
reacciones sucedidas: a 37 °C durante 5 minutos. Finalmente, se leyó su
absorbancia a =505 nm.
1
𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 𝑂2 + 𝐻2 𝑂 → 𝐺𝑙𝑢𝑐ó𝑛𝑖𝑐𝑜 + 𝐻2 𝑂2 (1)
2
Tabla 1. Parte experimental para la determinación
2 𝐻2 𝑂2 + 4 − 𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑎𝑛𝑡𝑖𝑝𝑖𝑟𝑖𝑛𝑎 + 𝐹𝑒𝑛𝑜𝑙 de glucosa.
→ 𝑄𝑢𝑖𝑛𝑜𝑛𝑎𝑖𝑚𝑖𝑛𝑎 + 4 𝐻2 𝑂 (2) Blanco Patrón Muestra
Patrón (S1) - 10 L -
Muestra - - 10 L
La reacción 1 se realiza en presencia de glucosa
oxidasa y la 2 en peroxidasa. Reactivo A1 1 mL 1 mL 1 mL

El colesterol es una sustancia que se encuentra en A1. Reactivo: Fosfatos 100 mmol/L, fenol 5
todos los tejidos normalmente en la sangre, el mmol/L, glucosa oxidasa > 10 U/mL,
organismo necesita colesterol para la síntesis de peroxidasa>1 U/mL, 4-aminoantipirina 0,4
hormonas y sales biliares que desempeñan una mmol/L, pH 7,5
fuente importante en la absorción de las grasas
procedentes de los alimentos, si la cantidad de este S1. Patrón de Glucosa/Urea/Creatinina. Glucosa
es grande puede contribuye a la formación de 100 mg/dL (5,55 mmol/L), urea 50 mg/dL,
ateromas. creatinina 2 mg/dL. Patrón primario acuoso. [3]

Este es posible medirlo mediante un examen de 2. Determinación de Colesterol

triglicéridos en sangre, el cual se determina
después de la hidrólisis enzimática y la oxidación. Las soluciones de Tabla 2 se colocaron en tubos de
El indicador es la quinoneimina formada por el ensayo, estos se incubaron a 37 °C durante 15
peróxido de hidrogeno y 4-aminoantipirina en minutos. Posteriormente, se leyó su absorbancia a
presencia de fenol y peroxidasa, el principio de la =505 nm.
reacción se encuentra a continuación. [2]
Tabla 2. Parte experimental para la determinación
𝐸𝑠𝑡𝑒𝑟𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝐻2 𝑂 de colesterol.
→ 𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜𝑠 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑜𝑠 (3) Blanco Patrón Muestra
Patrón (S2) - 10 L -
𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝑂2 Muestra - - 10 L
→ 𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑛𝑒 − 3 − 𝑜𝑛𝑎 + 𝐻2 𝑂2 (4)
Reactivo A2 1 mL 1 mL 1 mL
2 𝐻2 𝑂2 + 4 − 𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑎𝑛𝑡𝑖𝑝𝑖𝑟𝑖𝑛𝑎 + 𝑓𝑒𝑛𝑜𝑙
→ 𝑞𝑢𝑖𝑛𝑜𝑛𝑒𝑖𝑚𝑖𝑛𝑎 + 4 𝐻2 𝑂 (5) A2. Reactivo. Pipes 35 mmol/L, colato sódico 0,5
mmol/L, fenol 28 mmol/L, colesterol esterasa
La reacción 3 se realiza en presencia de lipasa, 4
> 0,2 U/mL, colesterol oxidasa > 0,1 U/mL,
en colesterol oxidasa (CHO) y la 5 en peroxidasa
peroxidasa > 0,8 U/mL, 4-aminoantipirina 0,5
(POD).
mmol/L, pH 7,0.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
S2. Patrón de Colesterol. Colesterol 200 mg/dL
(5,18 mmol/L). Patrón primario acuoso. [4]
Se extrajo el suero de una muestra de sangre para
realizar las respectivas determinaciones.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tabla 3. Datos experimentales Glucosa

2
 Determinación de glucosa y colesterol en sangre

Solución Absorbancia
Reactivo A1 + Patrón S1 0,325 Pese a los valores reportados en la tabla anterior se
Reactivo A1 + Muestra 0,272 procedió a calcular la concentración de colesterol
en la muestra.
Teniendo en cuenta los valores reportados en la
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
tabla anterior, se calcula la concentración de 𝑥 [𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛] = [𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎]
glucosa en la muestra a partir de la siguiente 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛
ecuación:
1 200𝑚𝑔
[𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎] = 𝑥 = 8333,33 𝑚𝑔/𝑑𝐿
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 0,024 𝑑𝐿
𝑥 [𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛] = [𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎]
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛
La concentración de colesterol obtenida no es un
0,272 100𝑚𝑔 valor válido, por tanto, se concluye que la
[𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎] = 𝑥 = 83,69 𝑚𝑔/𝑑𝐿 determinación no se pudo llevar a cabo. Esto se
0,325 𝑑𝐿
observa en las absorbancias reportadas para el
La concentración obtenida se encuentra dentro del patrón y la muestra; ya que para el primero se
rango normal (70-110 mg/ dL) de glucosa, lo cual obtuvo un valor prácticamente despreciable,
quiere decir que el paciente no presenta síntomas debido posiblemente a que durante el
de hiperglicemia ni hipoglicemia, a pesar de que se procedimiento se utilizaron solamente 10 L,
realizó un análisis al azar en donde se mide la cantidad que no fue suficiente para ser detectada.
concentración de glucosa en una muestra de sangre
en cualquier horario habitual, otros análisis que se Cabe mencionar que la muestra de sangre fue
pueden determinar para analizar los niveles de tomada luego de que la persona ingiriera
glucosa en sangre corresponden a: alimentos, lo que pudo causar un alto contenido
lipídico en la misma; interfiriendo en la
determinación de colesterol.
- Análisis de glucosa en ayunas: Este mide la
glucosa en una muestra de sangre obtenida cuando
El perfil lipídico lo constituye la cuantificación
la persona no ha comido ni tomado nada (excepto
analítica de una serie de lípidos que son
agua) por al menos 8 horas.
transportados en la sangre por los diferentes tipos
de lipoproteínas plasmáticas. La determinación de
-Análisis de tolerancia a la glucosa: Este comienza estos parámetros es un procedimiento analítico
con un análisis en ayunas de la glucosa. Luego el básico para el diagnóstico y seguimiento de
paciente toma una bebida dulce con una cantidad
enfermedades metabólicas, primarias o
medida de glucosa. Los niveles de glucosa son
secundarias. Entre estos parámetros analíticos que
medidos en varias muestras de sangre obtenidas a se pueden determinar están: el colesterol total, el
intervalos específicos de tiempo. [5] colesterol transportado por las LDL, el colesterol
transportado por las HDL, los triglicéridos totales,
Es importante destacar que para la determinación ciertas apoproteínas particulares etc.
de glucosa la muestra de sangre tomada del
paciente se realizó cuando este se encontraba Condiciones para una determinación eficaz de
sentado, sin fumar ni ingerir alcohol durante las colesterol en sangre:
anteriores 12 horas, además de resaltarse que este
análisis a diferencia de otros se puede medir en -El paciente debe encontrarse en un estado
cualquier momento del día. fisiológico regular (sin ejercicio vigoroso) y bajo
su dieta ordinaria del día anterior a la prueba.
Tabla 4. Datos experimentales Colesterol
Solución Absorbancia -La muestra debe recolectarse en ayuno total
Reactivo A2 + Patrón S2 0,024 excepto agua, durante un lapso de 12 a 14 horas
Reactivo A2 + Muestra 1 antes de la prueba.

3
 Determinación de glucosa y colesterol en sangre

-La muestra debe recolectarse en tubo recolector al http://books.google.com.co/books?id=p3DCb9lTL

vacío de tapón rojo el cual no contiene x8C&pg=PA1129&lpg=PA1129&dq=glucosa+y+
anticoagulante. colesterol+bioquimica&source=bl&ots=Y_ZNSW
MjTQ&sig=jqN_12yt3uz2zqcA5hQfYHqX1UM&
-La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm para hl=es&sa=X&ei=E2xsUJaoFrOH0QGVk4HIAg&
separar el suero, si este se obtiene turbio, la ved=0CDkQ6AEwAg <Septiembre 30 de 2012>.
muestra es inaceptable. [6]
[2]BRICEÑO VERONICA; OGOÑO CRISTIAN;
Debido a que no se tuvieron en cuenta varias de las CHUQUIMARCA LENIN. Escuela de Bioquímica
condiciones mencionadas anteriormente, no se y Farmacia, Laboratorio de Bioquímica Clínica.
pudo determinar de manera efectiva la Ecuador. Disponible en:
concentración de colesterol en la muestra de http://es.scribd.com/doc/45351469/bioquimica
sangre. <Septiembre 30 de 2012>.

CONCLUSIONES
[3] GLUCOSA. GLUCOSA OXIDASA/
PEROXIDASA. BioSystems S.A. Costa Brava 30,
 El colesterol es una sustancia lipídica
Barcelona (Spain). Disponible en:
presente en todas las células del
http://www.biolinker.com.ar/productos/PDF_BIO/
organismo. Puede ser cuantificado por
11538%20Glucosa.pdf <Septiembre 30 de 2012>.
métodos espectrofotométricos, ya que
según reacciones acopladas, forma un
complejo coloreado, el cual es detectado a
una longitud de onda específica. [4] COLESTEROL. COLESTEROL OXIDASA/
PEROXIDASA. BioSystems, S.A. Costa Brava 30,
 Para la determinación de colesterol total Barcelona (Spain). Disponible en:
http://www.biolinker.com.ar/productos/PDF_BIO/
se utilizan reactivos comerciales que
11506-11539%20Colesterol.pdf <Septiembre 30
incluyen las enzimas y sustratos necesarios
para la cuantificación de todas las formas de 2012>.
de colesterol presentes en el suero.
[5] ÁVILA LUIS. Grupo de Diabetes de la
Sociedad Andaluza de Medicina Familiar y
 La glucosa es un azúcar que es utilizada
como fuente de energía para el organismo, Comunitaria.2010. Disponible en:
http://www.grupodiabetessamfyc.cica.es/index.php
está puede ser cuantificada mediante la
formación de complejos coloreados por /guia-clinica/guia-clinica/diagnostico.html
métodos espectrofotométricos a una <Septiembre 30 de 2012>.
longitud de onda determinada.
[6] MORÁN, V. Obtención de muestras
sanguíneas de Calidad analítica; 1ª ed; ed. Médica
 El análisis de glucosa en sangre es posible
determinarlo en cualquier horario habitual Panamericana S.A. de C.V; México D.F. 2001.pp
como no sucede con el colesterol, debido 65.
a las posibles interferencias del material
lipídico generado por ingerir alimentos en
los momentos previos al análisis.

BIBLIOGRAFÍA
[1] THOMAS M. DEVLIN. Bioquímica. Cuarta
edición; ed. Reverté S. A., España.2004. pp: 1128-
1132.Disponible en: