Descripción del desarrollo embrionario de Bocachico

(Prochilodus magdalenae) en condiciones de laboratorio.

Description of the embryonic development of Bocachico (Prochilodus
magdalenae) under laboratory conditions.

Galván, H*; Gamarra, B; González, J; López, L.

Facultas de Ciencias Básicas, Programa de Biología, Universidad de Córdoba,
Montería, Córdoba.*[email protected]

ABSTRACT: There is a great interest in the development of fertilization methods for fish
reproduction. For the observation of the embryonic process of Prochilodus magdalenae. The
Bocachico fish were treated with Carpa Pituitary Extract (EPC) according to the degree of
sexual maturity. In this work we study the reproductive process and the embryonic development
of Prochilodus magdalenae, observing step by step the different stages of this event. The eggs
produced by this species are translucent and have a large perivitelline space, are of the telolecite
type, and have disc-shaped meroblastic segmentation. During the study, the periods of zygote,
blastula, gastrula, segmentation and hatching of the larvae were observed. The different stages
of development were recorded successfully. The time required to carry out this research from
the fertilization process to the time of egg hatching, where the larva breaks the membrane, was
12 and a half hours.

KEY WORDS: Carp pituitary extract, hatching, fertilization, segmentation, telolecito.

RESUMEN: Existe un gran interés en el desarrollo de métodos de fertilización para la

reproducción de peces. Para la observación del proceso embrionario de Prochilodus
magdalenae. Los peces de Bocachico se trataron con Extracto de Pituitaria de Carpa (EPC)
según el grado de madurez sexual. En este trabajo se estudia el proceso reproductivo y el
desarrollo embrionario de Prochilodus magdalenae, observando paso a paso las distintas etapas
de este suceso. Los huevos producidos por esta especie son translúcidos y tienen un gran espacio
perivitelino, son de tipo telolecito, y presentan segmentación meroblástica discoidal. Durante el
estudio se pudieron observar los periodos de cigoto, blástula, gástrula, segmentación y eclosión
de las larvas Las diferentes etapas de desarrollo se registraron con éxito. El tiempo requerido
para llevar a cabo esta investigación desde el proceso de fecundación hasta llegar al momento de
la eclosión del huevo, donde la larva rompe la membrana, fue de 12 horas y media.

PALABRAS CLAVE: Extracto pituitario de carpa, eclosión, fertilización, segmentación,

telolecito.
INTRODUCCIÓN siendo el ambiente uno de los factores
influyentes en el proceso de fecundación, de
El desarrollo embrionario en peces es un manera que posiblemente el tardío de la
proceso complejo que permite estudiar la eclosión donde la larva, sale de la membrana
ontogenia de esta. Puede ser utilizado como plasmática se debe a estas condiciones.
objeto de experimentación en procesos
biotecnológicos, como bioindicadores de la Como en los otros vertebrados, el ciclo
calidad del ambiente. La producción como reproductivo de los peces puede ser dividido
técnica practicada en explotaciones acuícolas en dos grandes fases: la primera fase la
pretende mejorar el nivel de producción, de componen la proliferación, crecimiento y
manera tal que éste sea más competitivo y el diferenciación de los gametos (espermato-
producto final sea agradable al consumidor. génesis y vitelogénesis); mientras que la
(Dunham, 1995) maduración y preparación del ovocito y
espermatozoide para la liberación y fecun-
Prochilodus magdalenae es la principal dación constituyen la segunda fase
especie de la pesca continental colombiana; (espermiación y maduración final del
aunque se estima que su captura ha ovocito) (Mynolas, 2010). En la mayoría de
disminuido en 90% en los últimos 40 años; los peces la espermatogénesis y la
por lo que ha sido declarada en peligro vitelogénesis se presenta en cautiverio,
crítico de extinción, debido a la sobrepesca y cuando las condiciones ambientales y el
deterioro de su hábitat (Mojica, 2002). Su manejo del cultivo son adecuados (Okumara,
cultivo se ha expandido rápidamente, siendo 2003). La disfunción reproductiva más
la cuarta especie más cultivada del país común ocasionada por el cautiverio en los
El bocachico, al igual que las otras especies reproductores machos es la reducción del
reofílicas de la cuenca del río Sinú, ha sido volumen y disminución de la calidad
afectado por la construcción de la Hidro- seminal; mientras que en las hembras se
eléctrica URRA (Atencio-Garcia, 2000). El interrumpe la maduración final y, por tanto,
repoblamiento ha sido una de las acciones no se presenta ovulación y desove (Mynolas,
impulsadas para atenuar estos impactos; lo 2001); por lo que las inducciones
cual ha incrementado la demanda de alevi- hormonales se utilizan para incrementar el
nos de esta especie. volumen seminal en machos y completar la
maduración final y lograr la ovulación en
Como es sabido el desarrollo embrionario en hembras (Mynolas, 2010). El objetivo de
peces en cautiverio para tener éxito necesita este estudio fue contemplar el desarrollo
de la participación humana, mediante embrionario en peces observando cada cierto
reproducción inducida, la siguiente investí- tiempo, diferenciando y analizando los
gación se desarrolló para evidenciar todo procesos que ocurren hasta el momento de la
este proceso, desde su inducción pasando eclosión de la larva.
por todos sus estadios hasta la eclosión, El
proceso embriológico de estas especies se
puede ver afectado por distintos factores,
que pueden influir de manera positiva o
negativamente en el desarrollo del embrión,
MATERIALES Y MÉTODO leve presión de la región abdominal. Para
confirmar el estado de madurez de la especié
ÁREA DE ESTUDIO
La primera inyección se aplicó a las 4:00 pm
La investigación de desarrollo embrionario inyectando 6 ml/g al 20% lo que representa
en Prochilodus magdalenae fue desarrollada
un (20% de la dosis) y la segunda inyección
el día 2 y 3 de mayo en el Centro de
Investigación Piscícola (CINPIC) y en el se aplicó después de 12 horas, a las 4.30 am
laboratorio de Botánica de la Universidad de (80% de la dosis)
Córdoba con coordenadas geográficas
8°47´30.87¨ N, 75°51´45.91¨en el casco
urbano de Montería-Córdoba. En la zona se
presenta un clima cálido tropical, a pesar de
ellos durante la investigación se presentaron
precipitaciones durante el día.

Figura 2: Inyección de EPC, tomada por Galván,

H

La fertilización en seco consistió en extraer a

la hembra los huevos antes que ocurriera el
desove natural. Con una ligera presión
abdominal, los huevos se fueron depositando
en una vasija, evitando el contacto con el
Figura 1: Ubicación geográfica del laboratorio de agua. El semen recolectado por medio de un
Botánica, Universidad de Córdoba. [Mapa de masaje abdominal se mezcló con los huevos.
Montería Colombia en Google maps]. Recuperado A continuación se agregó agua para que el
el 16 de mayo de 2018
ovocito iniciara su proceso de hidratación y
el esperma se activará. Posteriormente se
FASE DE CAMPO lavó el exceso de espermatozoides y los
huevos se depositaron en incubadoras
Los gametos de bocachico (Prochilodus
verticales de 200 L a 25 ºC, (Fig.3)
magdalenae) fueron obtenidos por reprodu-
conectadas a un sistema cerrado de agua.
cción hormonal inducida en el (CINPIC) de
Para la observación del desarrollo
la Universidad de Córdoba. Las hembras de
embrionario las muestras fueron recolectadas
bocachico no presentaron dimorfismo sexual
primero en intervalos de 15min y luego de
presentando un peso corporal de 300gr al
30min, tiempos en HPF, hasta la eclosión de
encontrarse potencialmente fértiles, se
los huevos y observadas con un
reconocieron por sus abdomen abultado,
estereoscopio.
papila urogenital enrojecida y levemente
protruida. Por otra parte la de los machos se
reconoció por la emisión de semen ante la
 una disminución del tamaño de las mismas
(Gilbert, 2005). En donde se presentan varias
divisiones consecutivas del polo animal,
observándose la discoblástula con 4
segmentaciones y ocho blastómeras,
presentando dos planos verticales y paralelos
al plano del primer ciclo de división (Fig.4b)

Transcurridos 00:48 HPF, se presentó ocho

Figura 3: Incubadoras verticales, tomada por segmentaciones y 16 blastómeras (Fig.4c).
Galván, H
La división se dio en cuatro planos verticales
RESULTADOS Y DISCUSION y paralelo al plano de la segunda división.
Por último y para terminar este periodo de
Una vez realizado el proceso de inducción clivaje y darle inicio al periodo de
en la incubadora se observaron los óvulos blastulación transcurridos 01:00 HPF se
fertilizados presentaron un color traslúcido identificó el blastodisco dado que no es
los cual es una característica favorable para posible enumerar el número de blastómeras
el estudio en el desarrollo embrionario en porque una cubre a la otra, pueden ser de 32
peces. Tienen un periodo de crecimiento de a 64 células que presentan. Además de
24 horas para el caso del pez cebra (Danio observar una pequeña “invaginación” en el
rerio) uno de las especies más utilizados polo animal, dándose en un plano horizontal
para identificar las capas embrionarias (Botta, 2010) (Fig.4d).
dentro de la biología del desarrollo (Gilbert,
2005).Pero en este caso al utilizar los Los cigotos de los peces tienen solo un
gametos de los bocachico normalmente se pequeña área del cigoto que está libre de
presenta un tiempo 12 horas, esto depende vitelo es por esto que fue observado el
de las condiciones ambientales que se pequeño espacio perivitelino y por lo tanto
pueden presentar a la hora de realizar el las divisiones celulares se producen
desove del pez. En este caso el tiempo que se solamente en un pequeño disco del
demoró en eclosionar los embriones fue de citoplasma dando origen a un patrón de
12 horas y media. segmentación discoidal (Gilbert, 2005). Por
lo tanto la primera y segunda segmentación
Durante el desarrollo de Prochilodus fueron de tipo longitudinal la cuarta
magdalenae se presentan diferentes presento un segmentación meridional y la
periodos, el primero denominado periodo de ultima de tipo ecuatorial.
cigoto en donde se presentó a los 00:08 HPF,
se comenzó a distinguir el polo animal y el Se identificó lo inicios del desarrollo y
vegetal, además de otras partes observadas desenlace de la blastulación (Fig.4e)
(Fig. 4a). Posteriormente pasados entendiéndose esto como la fase que le sigue
00:28 HPF. Se presentó el periodo de a la segmentación y antecede a la gástrula,
segmentación o clivaje que se caracteriza por dando inicio a dicho proceso, cuando el
una serie de divisiones rápidas que llevan a número de divisiones de los blastómeros
un aumento en el número de blastómeras y a supera las 64 segmentaciones.(Gilbert,
2005). Partiendo de esto, se evidencia el organismo (Fig.5i) Para la (Fig.5j) se logra
comienzo del proceso mencionado, para observar las somitas, características que lo
analizarlo, se observó la muestra luego de las definen como vertebrado: notocorda,
somitas, cola post natal o zona caudal
01:28 HPF casos similares fueron las
(Botero, 2004)
siguientes imágenes, se percibió la blástula
por primera vez luego de las segmentaciones Transcurridos 11 horas HPF del huevo, se
anteriores. pudo observar que la mayoría de las larvas
presentan movimiento fuerte y rectilíneo
La imagen observada a las 02:30 HPF, (Fig.5k) a las 12 horas se observaron larvas
demuestra los inicios de la epibólia, a las tratando de eclosionar(Fig.5k), solo el 80 a
(Fig.4f) con un aumento estimado del 10% 90% logra romper la membrana externa a las
aproximadamente de la movilidad de la 12:30 HPF, dado a que ya las larvas
epibólia, a partir de la examinación de la presentan estructuras más desarrolladas y
fuertes (Fig.6m, 6n)
muestra, se afirmó que el porcentaje de
desplazamiento de la epibólia era del 20% El 80% de larvas habían eclosionado. Esta
este fue en crecimiento y finalmente hasta diferencia en el momento de inicio y
llegar a un 50% aproximadamente demos- duración de la eclosión, puede explicar la
trando la finalización de la etapa de mayor asincronía en el desarrollo larvario
blastulación, para da pie a la gastrulación. observada (Baras & Jobling, 2002;
Kestemont, 2003).
Terminado el proceso de blastulación se
inició a una nueva etapa llamada gastru- Debido a que P. magdalenae presenta
lación, donde los blastómeros se organizan
huevos pequeños, la reserva energética hace
para formar la epibólia que recubre la célula
huevo. Al haber trascurrido 4 horas desde la que la eclosión sea rápida y el individuo que
fecundación se puede observar como la emerge esté poco desarrollado, pues no tiene
epibólia lleva un 80% recubierto del huevo desarrollados la boca ni el intestino, y
indicando que muy pronto se formara el además carece de pigmentación en el cuerpo
tapón vitelino y algunos rasgos de la zona y en los ojos. El tiempo de incubación hasta
cefálica y caudal, siendo esta la última fase
la eclosión es similar a otro buen número de
de este proceso y dando origen a la
organogénesis. Donde observaron cuatro especies de Characiformes como por
etapas una inicial cuando se dio el ejemplo a Salminus sp (Nakatani et al. 2001)
movimiento progresivo de células hacia el excepto Hoplias sp. La cual tiene mayores
polo vegetal (epibólia), la siguiente cuando períodos de incubación y puede ser debido a
la epibólia llegó al 50%, luego cuando el que tiene una estrategia reproductiva
porcentaje de epibólia llegó al 80-95% (se diferente como no efectuar migraciones y
observa el tapón vitelino) (Fig.5h) y en la
cuidar a la prole (Nakatani et al. 2001). En la
última etapa se observó el cierre del
blastoporo, haciéndose más evidente la (Fig.4e), se pudo observar hay una asimetría
diferenciación del eje cráneocaudal. (Díaz et en el embrión. Está asimetría también puede
al, 2010). ser observada en el desarrollo de Danio
Se pudo notar que se evidencio una etapa rerio, esto sucede luego de la formación del
muy fundamental para el embrión en anillo germinal (Kimmel y col 1995).
formación llamada organogénesis, donde se
comenzarán a diferencias más detallada-
mente las características específicas del
Figura 4: (ep): espacio perivitelino, (pv): polo vegetal, (pa): polo animal, (b): blastómeras, (v): vitelo,
(db): disco blástula, (me): movimiento epibólia Fuente: H, Galván fotos tomadas en estereoscopio con
objetivo de 35x
Fig. 5: (bp): borde periblasto. (v): vitelo, (tv): tapón vitelino, (vot): vesícula otica, (vo): vesicula óptica,
(zc): zona cefálica, (sm): somitas. Fuente: H, Galván fotos tomadas en estereoscopio con objetivo de 35x
Fig.6: (lc): larva eclosionada. Fotos tomadas en estereoscopio con aumento de 35x por Galván, H

Letra HPF Etapa del desarrollo PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

Se diferencia clarame-
¿Qué función cumple el EPC en la práctica
nte el polo animal y el
A 00:08 polo vegetal. (Fig.4a) desarrollada?

El extracto pituitario de carpa (EPC) es una

B 00:28 Clivaje, originando 4 dosis que se le aplica al pez en estado de
células (Fig.4b)
maduración, se aplica según el peso del
Cuarto plano de
C 00:48 segmentación, esta-do animal. Tiene como función la reproducción
de 16 células (Fig.4c) inducida, hormonas liberadoras de hormonas
D 01:00 16blastómeras(Fig.4d) luteinizante (HLHL), gonadotropina
desarrollo y desenlace responsable de la liberación de hormona
E de la blastulación (Fig. estimulante del folículo (FSH) y de hormona
01:28 4e) (lH) de la pituitaria anterior. Intervienen en
F 02:30 Epibólia al 40%(Fig.4f) la función de las gónadas (testículos y
G 04.00 Epibólia en ovarios).
80%(Fig.5g)
H Se observa el tapón ¿Explique la influencia de las variables
05:30 vitelino (Fig.5h) ambientales sobre el proceso de maduración
I 08:30 Embrión temprano gonadal en peces?
Se formar la cola y la
J 09:00 cabeza (Fig.5j) La menor sobrevivencia en las etapas de
las larvas presentan eclosión y larval se presentan
K movimiento fuerte y principalmente por la deficiente calidad
11:00 rectilíneo (Fig.5k) físico-química del agua o específicamente
Se observaron larvas las fluctuaciones de temperatura y el nivel de
l 12:00 tratando de eclosionar
turbidez alto que afecta el proceso de
(Fig.5l)
Las larvas logran fertilización y eclosión.
M,N romper la membrana
¿Detalle el proceso de formación de las
12:30 (Fig.6m)
capas embrionarias en peces?
Luego que las células del blastodermo han migratorios del río Sinú. Rev Temas
cubierto cerca de la mitad de la célula Agrarios 2000; 9:29-40.
vitelínica del pez (y más temprano en huevos
Atencio-García V. Producción de alevinos
de pez con vitelos más grandes), se produce
de especies nativas. Rev MVZ Córdoba
un engrosamiento a lo largo del margen del
2001; 6(1):9-14.
blastodermo en epibolización. Este
engrosamiento es denominado anillo Bottaa P., Sciaraa A., Arranza S., Murgasb
germinal, y está compuesto de una capa LDS., Pereirab JMG.,Oberlender G.,
superficial, el epiblasto, y de una capa 2010.Estudio del desarrollo embrionario del
interna, el hipoblasto. No se comprende sábalo (Prochilodus lineatus).Arch Med Vet
cómo se produce el hipoblasto. Algunos 42, 109-114. Recuperado de:
http://mingaonline.uach.cl/pdf/amv/v42n2/ar
grupos de investigadores afirman que el
t14.pdf
hipoblasto se forma por la involución de las
células superficiales a partir del blastodermo Botero, M.; Fresnada, A.; Montoya, A. &
bajo la margen seguida por su migración Olivera, M. Descripción del desarrollo
hacia el polo animal. embrionario de zigotos híbridos obtenidos
por el cruce de machos de Cachama Blanca
Una vez que se ha formado el hipoblasto, las (Piaractus brachypomus) y hembras de
células del epiblasto y del hipoblasto se Cachama Negra (Colossoma macropomum).
intercalan sobre el futuro lado dorsal del Rev. Col. Cienc. Pec., 17:38-45, 2004.
embrión para formar el engrosamiento
Díaz Olarte, John, Marciales- Caro, Lili J,
localizado, el escudo embrionario. Como se
Cristancho Vásquez, Freddy, & Cruz-
verá, este escudo embrionario es Casallas, Pablo E. (2010). Comparación del
funcionalmente equivalente al labio dorsal Desarrollo Embrionario de Piaractus
del blastoporo de anfibios, debido a que brachypomus (Serrasalmidae) y
puede organizar un eje embrionario Pseudoplatystoma sp. (Pimelodidae).
secundario cuando es trasplantado al International Journal of Morphology, 28(4),
embrión huésped.(Gilbert, 2005). 1193-1204.
https://dx.doi.org/10.4067/S0717-
AGRADECIMIENTOS 95022010000400033

Dunham, R. A. The contribution of

Los autores agradecen al profesor de
genetically improved aquatic organisms to
Biología del Desarrollo Carlos Nisperuza global food security. Thematic paper
cuando se llevó a cabo este estudio, a presented at the Japan/FAO International
Argemiro Cordero por su ayuda técnica y a Conference on Sustainable Contribution of
todo el equipo del (CINPIC) y a la Fisheries to Food Security, 4 – 9 December
Universidad de Córdoba por su apoyo en 1995, Kyoto, Japan.
esta investigación. Gilbert,F.S. (2005).Biología del desarrollo.
Buenos Aires. Médica Panamericana.
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