MediosPotenciadores&Otros 1 PDF
MediosPotenciadores&Otros 1 PDF
MediosPotenciadores&Otros 1 PDF
utilizados en Inmunohematología
.
14 nm 35 nm
24 nm
Anticuerpos según Origen
Naturales: Aparecen sin estimulación
detectable. La mayoría son IgM, o bien mezclas
de IgM + IgG
Regulares: Aparecen siempre que se carece del
Ag correspondiente (ABO)
Irregulares: No siempre aparecen cuando no se
posee el Ag (P1, Le, E)
Inmunes: Se detectan después de un estímulo
antigénico: transfusión, embarazo
Siempre son IgG
Son Irregulares
Anticuerpos Según Importancia
Importancia
Centrifugación:
Albúmina:
Enzimas
Test de antiglobulina humana
1. CENTRIFUGACIÓN
Al aplicar fuerza
centrifuga, se
acercan los glóbulos
rojos y algunos ac.
Pueden unirse al gl
rojo.
2. ALBUMINA
Reduce las cargas
negativas, dispersa los
cationes alrededor del
+ + GR
+ + +
Ξ
Ξ Ξ
Ξ Ξ Ξ
+
Alterando la tensión
superficial inter-celular
Reduce el potencial Zeta
+
Ξ
+
Ξ
Se dispone de albúmina
sérica bovina en solución
al 30% , 22%, 6% o 3% y
polimerizada
+
+
3. LISS
Reduce la fuerza iónica del
+ medio, Baja el Potencial Z y
+
aumenta de la absorción de
+
anticuerpos en las células
+ + rojas
+
+
Solución LISS 0,03 M,
+
+ Para prevenir la lisis del GR se
incorpora glicina
Ficina, Bromelina,
Papaína y Tripsina
++ 5. POLYBRENE, PROTAMINE
++
Suministra cationes, dispersa
las cargas negativas del GR
++ ++ y causa agregación
++ ++
++ ++ ++ ++ ++
++ ++ ++ ++ ++
++ ++ Sensibilidad disminuída en
++ ++ la detección de
anti-K
++ ++
++ ++
En la actualidad
poco uso
6. Polietilenglicol PEG
Polímero lineal
hidrosoluble, su
acción es eliminar el
+ + + agua intercelular,
Ξ
Ξ Ξ Ξ
+
favoreciendo el
acercamiento de los
GR
+
+
Ξ
Test de Anti Globulina Humana
4. Complement +
Anti- C3, C4
Test de Anti Globulina Humana
Tubo……………..……. 3 %
Microplaca………….. 1 a 2 %
Gel………………..….. 0,8 %
Técnicas en microplacas
Microplaca: Puede considerarse como una gradilla de
96 microtubos dispuestos en 8 filas horizontales y 12
filas verticales
Manual
Procedimiento Semiautomático
Automático
Consideraciones técnicas
1. Micrométodo: baja concentración proteica de
viscosidad y de anticuerpos
-Dilución con albúmina al 3%
2. Estandarizar volúmenes
“ centrifugación
3. Para evitar fibrina: preferentemente usar
suero
4. Tapar la microplaca en técnicas que deben
incubarse a 37ºC para evitar evaporación
5. Son reutilizables (salvo las que tienen Ag o
Ac prefijado)
Microcolumnas de Gel
¿Qué es el gel?
Fase Sensibilización
Se añaden hematíes y
suero/plasma en la parte
superior del microtubo.
CÁMARA DE
INCUBACIÓN o
SENSIBILIZACIÓN
Fases de la reacción en gel
(2)
Fase depositivizaciónde la
lectura.
La centrifugación favorece el
paso de los hematíes a través
del gel.
Si hay reacción de Ag-Ac, se
producen aglutinados que no
pasan a través del gel,
quedando atrapados en él.
GEL-CENTRIFUGACIÓN
Fases de la reacción en gel (3)
Fase de Antiglobulina
El suero de Coombs o antiglobulina humana (AGH)
no es preciso añadirla, está incluida en la matriz
de gel.
REACCIÓN POSITIVA.
Las células aglutinadas forman en
la superficie del gel una línea roja
o bien se dispersan a lo largo del
microtubo de gel.
REACCIÓN NEGATIVA
Las células se sedimentan en el
fondo del microtubo formando un
botón compacto.
Reacción positiva (+4) en Gel.
Reacción negativa en Gel
Reacción positiva (+2 /+3).
Doble población
(DP) en Gel.
Determinación de una PAI (coombs
indirecto) en ID-Gel
Determinación de una Prueba Cruzada
(Coombs Indirecto) en ID-Gel
GRUPO ABO-RH
ID Tarjeta de
identificación de grupo
Clasificación inversa
Salino Temperatura
Ambiente
Salino a 37 C
Salino 4 C
Detección de anticuerpos
con enzima.
Identificación de anticuerpos
con enzima.
Reacción cruzada con
enzima.
Pruebas de compatibilidad
completa
A-B-D y confirmación.
Enfrenta las células
ABD grupo de
confirmación para el
paciente y donante.
Enzima, prueba cruzada
AHG
Auto-control.
Todo en una sola
tarjeta
RH-Fenotipos +Kell
Detección de
antígenos Rh: C,
c, E, e.
Detección de
antígeno kell.
LISS/COOMBS
Se puede utilizar en diferentes combinaciones
TAD
TAI
“6” pruebas de compatibilidad
Screening de anticuerpos
Identificación de anticuerpos
Confirmación de “D” débil.
Valoracion de anticuerpos
Auto Control
Errores en las técnicas
Inmunohematológicas
Controles de calidad:
Externos
Internos
Calidad en Medicina Transfusional
Legislación y Recomendaciones.
Mejora de las prácticas.
Controles a lo largo de toda la cadena transfusional.
Protocolos de actuación.
Control de Calidad.
Garantía de Calidad
Garantía de Calidad
Control de
Calidad
Gestión de la calidad en Transfusión
Reactivos utilizados.
Precisión de instrumentos y equipos.
Técnica utilizada protocolizada
Formación y destreza del personal.
Organización que impida o minimice el error:
Identificación de las muestras
Protocolos
Transcripción de resultados.
Asignación de tareas y responsabilidades.
•Controles de Calidad internos
•Controles de Calidad externos
Mecanismos para eliminar errores
Barreras al error
Organización.
Métodos de trabajo.
Recogida y estudio de los errores
cometidos y de los “casi error”.
Errores de origen organizativo
Déficit formativo.
Errores de identificación.
Errores de no coincidencia del tubo piloto
con la bolsa del mismo número.
Errores por falta de identificación del
tubo para estudios pretransfusionales.
Errores en la transcripción de resultados
a los registros.
Cómo evitar errores de tipo
organizativo
Formación del personal al ingreso y de
forma continuada.
Errores de identificación:
Procedimientos.
Errores de transcripción:
Manual:
Firma del técnico.
Control entre 2 personas.
Informatizado:
Conexión on-line.
Errores de origen técnico
Reactivos
Caducidad.
Incorrecto almacenamiento.
Calidad de las muestras
Mala técnica de extracción.
Incorrecta conservación.
Equipos
Defectos.
Falta de calibración, verificación y mantenimiento.
Métodos
Práctica inadecuada.
No seguir las instrucciones del fabricante.
Control de Calidad en
Inmunohematología
1. Elaboración de un Manual de calidad
2. POES escritas y validadas en uso por todo el
personal técnico
3. Esquematización de Técnicas para un mejor
seguimiento = Flujogramas
4. Seguimiento estricto de POES
5. Sanción al no seguimiento de POES
6. Control de Reactivos
Control de lote de todos
Estandarización de reactivos de casa
Uso de controles diarios Internos
Participación en programa de control de calidad externo
Uso de Células control de Coombs a todos los TAGH
Negativos
Control de Calidad en
Inmunohematología
6. Control de Técnicas
Seguimiento de POES
Incorporaciòn de cambios para todo el personal
Uso de controles diarios de reactividad
Validación de las técnicas nuevas
Revisión Periódica de los manuales
7. Control de RRHH
Validación y firma de seguimiento de técnicas
Test de proeficiencia semestral = Nota
Control con muestras ciegas
Control de Calidad en
Inmunohematología
8. Control de Equipos
Control diario de tº
Hoja de vida de reparaciones
Programa de mantención
Centrífugas calibradas
Programa de emergencias
Red eléctrica de emergencia
Técnica en tubo
Ventajas Desventajas
Técnica Estándar Aglutinación inestable
Se pueden añadir con acs débiles
aditivos Se deben lavar tubos
Permite la o eliminarlos y gastar
manipulación mucho $
Se pueden incorporar Requiere experiencia
cambios en la manipulación
La hemólisis es visible Requiere lectura
cuidadosa
Requiere mucho
espacio
Técnica en Microplaca
Ventajas Desventajas
Bajo Costo
Requiere equipamiento
Igual o mejor especial
sensibilidad que el Se deben tratar las placas
tubo para evitar la estática del
Requiere poco plástico
espscio Las microplacas
Se puede procesar predispensadas tienen un
una gran cantidad de alto valor
muestras en poco
espacio
Técnica en microcolumnas de gel
Ventajas Desventajas
Técnica muy sensible
Permite corroborar los resultados se
puede sacar fotocopias Requiere equipamiento
especial
Los test de AGH NO se lavan, por
lo que son más rápidos además de Precio muy alto
sensibles Permite trabajar con un nº
Utilizan aditivos de LISS por lo que restringido de muestras.
las incubaciones son más cortas Algunos pueden dar
La técnica no permite cambios por lo resultados falsos positivos
que hay sólo una manera de trabajar por crioaglutinias y por
Existe equipamiento que permite la muestras sin anticoagulante
automatización