Universidad Laboratorio

del Atlántico Microbiología

Laboratorio 6. PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN

DE BACILOS GRAM NEGATIVOS
Laura Rincon1, Wilder Orozco1, Fernando Polo1, Johan Ramírez1, Yaritza
Barceló1, DayanLozano2.
1 Estudiantes Lic. Biología y Química, Grupo 17B semestre VII
2 docente de la asignatura.

Resumen
Las pruebas bioquímicas son ampliemanete utilizadas para la identificación de Bacterias
gram negativas como gran positivas, con ayuda de las pruebas bioquímicas conocemos
características propias de las bacterias que a su vez ocupan un papel fundamental en
clínica y en estudios microbiologicos.

Palabras claves: Identificación, pruebas bioquímicas, Gram negativos, Bacilos.

Abstrac
Biochemical tests are widely used to identify gram negative and highly positive bacteria.
With the help of biochemical tests, we know the characteristics of bacteria that, in turn,
play a fundamental role in clinical and microbiological studies
Keywords: Identificación, Biochemical tests, Gram negative, Bacillis.

Introducción
Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias.
“Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar
azúcares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de
compuestos coloreados, etc. Aún bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse
en dos especies diferentes en base a pruebas bioquímicas”1., las Gram positivas y Gram
negativas.
"Las bacterias entéricas Gram negativas forman un grupo muy grande y heterogéneo cuyo
hábitat natural es el tracto gastrointestinal de humanos y otros animales. Esta familia,
Enterobacteriaceae, incluye a varios patógenos que causan síndromes diarreicos"1.
"Las Enterobacterias son una familia heterogénea y amplia de bacilos gram negativos que
residen en el colon del hombre sin causar enfermedad aunque con frecuencia son
causantes de un número considerable de infecciones"2.

"La familia Enterobacteriaceae consta de varios géneros: Escherichia, Shigella, Klebsiella,

Enterobacter, Hafnia, Serratia, Proteus, Morganella, Providencia, Salmonella, Yersinia,
Edwardsiella, Citrobacter"2.
Se han desarrollado una gran de ensayos con el objeto de identificar rápidamente al
microorganismo patógeno, para que después el profesional médico, teniendo en cuenta al
informe, determine un tratamiento adecuado o para que los epidemiólogos puedan
localizar la fuente de la infección. 1.
Un microorganismo puede ser identificado por medio de diferentes combinaciones de
características y teniendo en cuenta las diferencias y similitudes 1. “Los ensayos
bioquímicos tradicionalmente usados, llamados pruebas bioquímicas convencionales son
pruebas simples que evidencian en forma rápida una determinada actividad enzimática,
grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento en presencia de inhibidores,
etc. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano.”1.
“A la identificación de la especie se puede llegar según diversos sistemas: sistemas
comerciales, manuales de identificación, etc. Los sistemas comerciales, usan
modificaciones de las pruebas bioquímicas convencionales, ya sea sustratos
deshidratados, tiras de papel de filtro impregnadas en reactivos o pequeños
compartimentos con medios prontos para sembrar.

Diagrama de proceso para identificar Bacilos Gram negativos.

Tabla: pruebas corrientes para la identificación de bacterias

PRUEBA PRINCIPIO USO MAS COMÚN

Bacillus(+); Clostridium,
Catalasa Descompone el H2O2 Streptococcus, Micrococcus y
Staphylococcus (−
Klebsiella, Enterobacter y
Citrato (única fuente de C) Alcalinización del medio Salmonella (+); Escherichia y
Edwardsiella (−)
Coagulación del plasma Staphylococcus aureus (+) S.
Coagulasa
sanguíneo epidermidis (−)
Descarboxilasas de lisina, Diferenciación de bacterias
Liberación de CO2 y amina
ornitina o arginina entéricas
Desaminación de fenil- Producción de ácido fenil- Identificación de Proteus y
alanina pirúvico Providencia
Fermentación de azúcares y Producción de ácido y/o Diferenciación de bacterias
polialcoholes gas entéricas
Hidrólisis de o-nitrofenil-β-
Citrobacter y Arizona (+);
β-galactosidasa galactosido dando
Salmonella (−)
nitrofenol amarillo
La solución I2 – I- da azul
Hidrólisis de almidón Bacillus spp.
con almidón
Identificación de Serratia,
Licuación del gel de
Hidrólisis de gelatina Pseudomonas,
gelatina al 12%
Flavobacterium, Clostridium
Klebsiella, Enterobacter y
Conversión del triptofano
Indol Salmonella (−); Escherichia y
en indol
Edwarsiella (+)
 Aerobiosis: Micrococcus,
Pseudomonas Anaerobiosis:
Oxidaciónfermentación Producción de ácido
bacterias entéricas,
Staphylococcus
Moraxella, Aeromonas y
Citrocromo c oxida
Pseudomonas (+);
Oxidasa aceptor artificial de
Acinetobacter y bacterias
electrones
entéricas (−)
Reducción de tiosulfato o
Producción de H2S (negro Identificación de Salmonella,
descomposición de
con Fe+++) Arizona, Edwarsiella, Proteus
aminoácidos azufrados
pH < 4,3 por fermentación Bacterias entéricas
Reducción de nitrato
ácida mixta (comúnmente +)
pH < 4,3 por fermentación Escherichia (+, rojo) Klebsiella
Rojo de metilo
ácida mixta y Enterobacter (−
Descomposición de urea Klebsiella y Proteus (+);
Ureasa
en 2 NH3 + CO2 Escherichia y Providencia (−)
Formación de acetoína por Klebsiella y Proteus (+);
Voges-Proskauer
fermentación de glucosa Escherichia y Providencia (−)

Tabla: resultados de cada una de las pruebas bioquímicas para la identificación de

bacilos gran negativos

Pruebas resultado
pone en evidencia la enzima indofenol-oxidasa, mediante la oxidación de
un colorante previamente reducido que cambia de color en su presencia.
permite diferenciar entre bacilos gram negativos no fermentadores, de
aquellos pertenecientes a la familia enterobacteriaceae.
● reacción positiva: aparición de un color rojo violáceo entre los 10 y
Oxidasa
60 segundos.

tsi (triple este medio determina la habilidad de un microorganismo de atacar un

 carbohidrato específico incorporado a un medio basal de crecimiento con
o sin la producción de gas y la producción de sulfídrico. sirve de guía como
primera aproximación al estudio de bacilos gram negativos no
azúcar fermentadores.
hierro)
● se lee el cambio de ph (viraje del indicador) desde la superficie al
fondo, la producción de gas y de sulfídrico; registrándolo del modo
siguiente por ej. a/a gas (+) h2s (-).
puede ser explorado estudiando los procesos de desaminación y
decarboxilación de varios aminoácidos, como por ejemplo, la prueba de la
desaminación de la fenilalanina que determina la capacidad de un
el microorganismo de desaminar la fenilalanina a ácido fenil pirúvico por
metabolito actividad enzimática.
proteico
● la reacción es positiva si se observa un color verde en la superficie.
es negativa si no hay cambios, observándose un color amarillo
característico del cloruro férrico.
determina la capacidad de un germen de utilizar el citrato y sales
inorgánicas de amonio como única fuente de carbono y nitrógeno
Citrato ● reacción positiva: se observa un intenso color azul. reacción
negativa: no hay desarrollo ni cambio de color.

determina la habilidad de un microorganismo de hidrolizar la urea

formando dos moléculas de amoniáco por acción de la enzima ureasa. la
alcalinización del medio por el hidróxido de amonio hace virar el indicador
Ureasa de ph (rojo fenol).
● reacción positiva: cuando hay viraje del indicador al rosa intenso.
reacción negativa: el color permanece incambiado.
se genera el indol por una desaminación reductiva del triptófano via la
molécula intermediaria ácido indolpirúvico. las triptofanasas catalizan la
reacción de desaminación, durante el cual se remueve el grupo amino (nh2)
de la molécula de triptófano
Idol ● un anillo rosa-rojizo en la superficie indica que se ha formado un
complejo coloreado entre el indol y el p-dimetilamino
benzaldehído.el alcohol amílico concentra el complejo coloreado en
la superficie
 detecta la fermentación ácido-mixta. se acumulan ácidos (acético, fórmico,
etc.), relativamente fuertes y bajan el ph del medio hasta 4-5. dicho
cambio de ph se detecta añadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo
rojo de ● a la izquierda un cultivo de e. coli y a la derecha otro de serratia
metilo (m)

detecta la fermentación butanodiólica. en esta  fermentación se producen

menor cantidad de ácidos que en la fermentación ácido-mixta, y una gran
cantidad de butanodiol.
● la acetoína en contacto con el oxígeno y la potasa origina diacetilo.
el alfa naftol incrementa la sensibilidad de la reacción. el diacetilo
origina un compuesto de color rosado.la prueba será positiva si en
voges- 20 minutos aparece una coloración roja. los cultivos negativos se
proskauer incuban 1-2 horas a 37 oc en posición inclinada efectuándose de
(v) nuevo la lectura. (el contacto con el oxígeno y la elevada
temperatura favorecen la reacción). a la izquierda cultivo
de serratia spp. y a la derecha de e. coli

consumo de se determina la utilización del citrato como única fuente de carbono y

citratos (c) energía. la prueba emplea un medio definido (koser) con citrato como
única fuente carbonada (se detecta turbidez)
● detectar el crecimiento en el medio de koser por turbidez. en el
medio de simmons por alcalinización del cultivo (el indicador toma
color azul)  a la izquierda cultivo de salmonella  spp. y a la derecha
de e. coli.
 Sacado de sitio web : https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-v/pb-v-3-imvic.htm

Conclusión
Al desarrollar esta investigación se pudo conocer la diversidad de las pruebas bioquímicas
que permiten identificar a los bacilos gram negativos, los diferentes géneros, especies y
como se pueden aplicar las pruebas bioquímicas con relación a cada una de las
características fisiológicas y metabólicas específicas de sustratos que esté desarrolle, y se
logró comprender como realiza dichos procesos metabólicos para degradar los sustrato,
permitiendo establecer la importancia de analizar cada uno de los factos que presentan
los bacilos gram negativos para que se pueda seleccionar la prueba que sea más idónea
para la identificación correspondiente, se obtuvo la capacidad de predecir las reacciones
químicas y cambios físicos que se den el transcurrir del desarrollo de la aplicación de una
prueba bioquímica.
Bibliografía
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4. Marcelo Arizandy, Isaías Reyes, María Monje, Regina Pérez, Víctor Magallon. Enterobacterias: E.
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5. Tema 6. Epidemiologia y control de las infecciones por Bacilos Gram negativos no

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6. Karen C. Carroll, Jeffery A. Hobden, Steve Miller, Stephen A. Morse, Timothy A. Mietzner,
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