Determinacion de Acetaminofen en Tabletas Por HPLC

Objetivos Práctica #4.
Determinación de
acetaminofén en tabletas por
 Llevar a cabo la identificación del principio activo HPLC
Paracetamol en una forma farmacéutica sólida,
mediante el tiempo de retención obtenido en HPLC 6/Abril/2016
 Determinar la concentración del principio activo presente

en la forma farmacéutica proporcionada para lo cual se
utilizarán las áreas bajo la curva obtenidas con la
sustancia de referencia y muestra.
Resultados
Réplica tʀ Área bajo la curva

Estándar a) 3.833 2259670 X= 2247404
b) 3.793 2245061 DER= 0.5018
c) 3.773 2237481
Muestra 1 a) 3.760 2063932 X=
2060635.5
b) 3.747 2057339 DER= 0.2262
Muestra 2 a) 3.733 2047132 X= 2043034
b) 3.720 2038936 DER= 0.28
Paracetam
PARACETAMOL
ol
Calculo de la concentración práctica
Ast [] St
AM1 ⌈⌉ M 1
mg
(1657791.500)( 0.0101796 )
mL mg
⌊ ⌋ M 1= =0.009503
1775692.333 mL
Ast ⌊ ⌋ St
AM2 ⌊⌋ M 2
mg
(1675157.500)(0.0101796 )
mL mg
⌊ ⌋ M 2= =0.009603
1775692.333 mL
Calculo del %
Teorica 100%
mg
(100 )(0.009503 )
mL
Practica
⌊⌋ M 1 = =95.03
mg
0.0100
mL
Teorica 100%
mg
(100 )( 0.009603 )
mL
Practica
⌊⌋ M 2 = =96.03
mg
0.0100
mL
Calculo de mg de paracetamol
Mg de paracetamol=DC(Am/Aref)
Factor de dilución (D) = 2500
C= 0.0101796 mg/mL
Am1=1657791.5
Am2=1675157.5
Aref=1775692.333
mg de paracetamol=( 2500 ) ( 0.0101796 ) ( 1657791.500

1775692.333 )
=23.7592mg
mg de paracetamol=( 2500 ) ( 0.0101796 ) ( 1675157.500

1775692.333 )
=24.0081mg
Discusión
El acetaminofén, compuesto polar, con electrones libres en el átomo de nitrógeno y oxígeno, contiene
diferentes especies que acompañan a la muestra como excipientes, saborizantes, colorantes,
conservantes, los cuales pasarán en un tiempo de retención diferente al del analito lo que posteriormente
favorecerá la exactitud de la cuantificación, ya que quedan adheridos a la fase de la columna.
Particularmente se esperaría que el analito pase primero que los excipientes, pues estos poseen en su
mayoría anillos y heteroátomos que le disminuyen polaridad.
En la tabla de los resultados se puede observar que las concentraciones obtenidas en las muestras 1 y 2
estan por debajo de la concentración que mostro el estándar, sin embargo las desviaciones estándar que
dieron las muestras quedaron dentro del rango de las condiciones cromatográficas señaladas, Se calculó
también la concentración utilizada de estándar y de muestra problema en cada una de las diluciones
llevadas a cabo Por lo que se llevó una buena separación del acetaminofén, y además con esta técnica se
pudo calcular la concentración práctica del producto gracias al área bajo la curva obtenida por el detector.
Conclusiones
 El método cromatográfico de HPLC tiene una alta reproducibilidad en tiempos de retención y área
bajo la curva para la determinación de la concentración practica del paracetamol
 Una tableta de 500mg de Quitadol tiene entre un 95 % a 96% de Acetaminofen siendo un contenido
de 475 mg por cada una aproximándose a la especificación del productor de 500 mg netos
contenidos de paracetamol
CUESTIONARIO
1. Defina los siguientes términos:

 Volumen de elusión. Es el volumen de eluyente requerido para causar la elusión. Bajo
condiciones normales de una mezcla conocida de los solutos en una cierta técnica, el
volumen de elución puede ser suficiente información para identificar los solutos.
 Volumen de columna. Volumen cero o muerto (V0 o Vm). Es el volumen de eluyente

que se consume sin que se detecte ningún componente. Se define igual que el
volumen de retención pero el tiempo utilizado es el tiempo muerto:
El volumen extra en columna representa el volumen total de todos los
componentes del sistema y conducciones capilares que no están directamente
involucrados en el proceso de separación, desde el punto de inyección de la
muestra hasta la detección.
Este volumen extra debe ser minimizado a fin de evitar la formación de picos anchos y una
disminución en la eficacia de la columna además de perder resolución cromatográfica.
 Tiempo muerto (t0 o tm). Es el tiempo de retención del componente inerte o gas portador.
 Tiempo de retención (tr). Es el tiempo transcurrido entre el instante en que se introduce la
mezcla y el instante en que se detecta la señal propia del componente en su máxima
intensidad. Los tiempos de retención no son reproducibles, ni siquiera en una misma
columna cromatográfica.
 Tiempo de retención relativo. Es la razón entre los tiempos de retención corregidos del
componente considerado, i, y de otro, p, que se toma como patrón de referencia:

 Línea base. Es la porción del cromatograma que registra la respuesta del detector cuando
solo sale de la columna el gas portador.
 Resolución. Es el parámetro que expresa el grado de separación que se puede obtener en

un sistema cromatográfico para dos componentes dados. Relaciona la capacidad
separadora de un sistema cromatográfico para dos componentes. Se define como:
Donde Rs es la resolución, tRA y tRB son los tiempos de retención de los

componentesA y B, y aA y aB son las anchuras de los picos del cromatograma de los
anteriores componentes.
La resolución puede observarse directamente sobre el cromatograma de picos. Se tendrá
una buena resolución si los picos no se solapan, y está perfectamente delimitado cada pico,
sin que coincida el final de uno con el principio del siguiente.
Si el valor de la resolución está próximo a 0,7 se obtendrá una mala resolución quedando
los picos solapados, de forma que se distinguen las crestas, pero no la base, y si el valor de
la resolución está próximo a 1,5 se obtendrán unos picos bien delimitados por lo que se
obtendrá una buena resolución.
Una pobre resolución es debida principalmente a:
 Hay demasiada muestra en la columna.
 La columna o placa es corta.
 La fase móvil no discrimina entre los componentes.
 La columna es demasiado gruesa.

 Eficiencia. Para definir la eficacia se utiliza el concepto de piso teórico, y se define éste
como la sección teórico-transversal en la cual se realiza el equilibrio de partición durante el
flujo de fase móvil. Cuanto mayor se el número de platos teórico (N) mayor será la eficiencia
de la columna.
El número de platos teóricos mide la capacidad de la columna para separar los

componentes, no la retención de los mismos. La eficiencia o el número de platos se puede
observa directamente a partir del cromatograma, observando la agudeza de los picos.
Donde N es el número de platos

teóricos, L es la longitud de la columna, H es la altura de cada plato, t'R es el tiempo
corregido de retención de un componente y ai es la anchura del pico cromatográfico. Y:
Si H tiene un valor pequeño, la distancia entre platos es menor y por tanto la eficiencia será
mayor. Por el contrario, si H es grande la columna es poco eficiente para separar ese
componente ya que sus moléculas estarán muy difundidas.
La velocidad de la fase móvil influye en la eficiencia del sistema cromatográfico, ya que si la

velocidad es pequeña los componentes tendrán más tiempo parta que se pueda realizar el
equilibrio de reparto, por lo que el número de platos será mayor y la altura de los platos
menor.
2. Proporcione ejemplos de otros 3 fármacos que puedan determinarse por HPLC.

 Carbamacepina
 Etosuximida
 Fenobarbital
3. ¿Qué sensibilidad de detección puede alcanzar este método?

99.9%
4. ¿Qué contaminante puede encontrarse presente en Paracetamol (acetaminofén) materia prima

como producto de degradación?
Además de paracetamol, los demás componentes (excipientes) son celulosa polvo, celulosa
microcristalina, estearato magnésico, almidón de maíz y dióxido de silicio, estos pueden ser
contaminantes en la muestra. Los excipientes son los componentes del medicamento diferentes del
principio activo (sustancia responsable de la actividad farmacológica). Éstos se utilizan para
conseguir la forma farmacéutica deseada (cápsulas, comprimidos, soluciones, etc.) y facilitan la
preparación, conservación y administración de los medicamentos. Es el único componente que
puede diferir cuando comparamos un medicamento genérico y su equivalente de marca.
5. ¿Por qué se requieren disolventes de alta pureza grado HPLC, en cromatografía de líquidos de alta
resolución?
Porque es un método muy sensible y para obtener buenos cromatogramas y para que sea
compatible con el detector, el grado de pureza en el disolvente es importante para que este no
modifique su sensibilidad ni contamine la muestra ya que si está contaminada puede producir picos
indeseables
6. ¿Qué se entiende por un sistema isocrático y uno en gradiente?
 Isocrático, el solvente conserva la misma concentración durante todo el tiempo de corrida
(muestreo o análisis), sea que se trate de un solvente puro o de mezclas de solventes.
Gradiente, lo cual significa que la concentración del solvente utilizado varía durante la corrida. Esto
depende del tipo de muestra, de columna y de la necesidad del análisis de mejorar alguna separación
(depende del analista o investigador). La idea es que la fuerza de arrastre de la fase móvil aumente
gradualmente durante la corrida, de modo que pueda desplazar a los compuestos que se encuentren más
fuertemente retenidos en la fase estacionaria
Bibliografía
 Douglas A.Skoog, Introducción a la Química Analítica Ed Reverté S.A. 1986 España
 Harris (1992) Analisis Quimico Cuantitativo Ed. Iberoamericana, México
 Willard, L Merritt, Jr Dean, J.A. y Settle, F.A. Jr. (1991) Metodos instrumentales de
Análisis. Ed Iberoamericana, México

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Objetivos Práctica #4.

 Determinar la concentración del principio activo presente

Réplica tʀ Área bajo la curva

Factor de dilución (D) = 2500

mg de paracetamol=( 2500 ) ( 0.0101796 ) ( 1657791.500

mg de paracetamol=( 2500 ) ( 0.0101796 ) ( 1675157.500

1. Defina los siguientes términos:

 Volumen de columna. Volumen cero o muerto (V0 o Vm). Es el volumen de eluyente

componente considerado, i, y de otro, p, que se toma como patrón de referencia:

 Resolución. Es el parámetro que expresa el grado de separación que se puede obtener en

Donde Rs es la resolución, tRA y tRB son los tiempos de retención de los

 La fase móvil no discrimina entre los componentes.

 La columna es demasiado gruesa.

El número de platos teóricos mide la capacidad de la columna para separar los

Donde N es el número de platos

La velocidad de la fase móvil influye en la eficiencia del sistema cromatográfico, ya que si la

2. Proporcione ejemplos de otros 3 fármacos que puedan determinarse por HPLC.

3. ¿Qué sensibilidad de detección puede alcanzar este método?

4. ¿Qué contaminante puede encontrarse presente en Paracetamol (acetaminofén) materia prima

 Douglas A.Skoog, Introducción a la Química Analítica Ed Reverté S.A. 1986 España

 Harris (1992) Analisis Quimico Cuantitativo Ed. Iberoamericana, México

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