El Dr. William C.

Boyd de Boston ha sido durante mucho tiempo uno

de los líderes reconocidos en la investigación de grupos sanguíneos y
las técnicas para determinar
ellos. Su principal interés, sin embargo, es la inmunología, y ahora se
vuelve a este campo y muestra cómo la ciencia puede contribuir
poderosamente a la identificación de sustancias biológicas y, por lo
tanto, ayudar a la solución de desconcertantes problemas médico-
legales. El Dr. Boyd es profesor asociado de Bioquímica, Facultad de
Medicina de la Universidad de Boston e Investigador Especial
Asociado, Universidad de Harvard, Cambridge, Mass.-EDITOR.
Histórico. Pruebas para identificar material como sangre, incluso
cuando secos, se conocen desde hace mucho tiempo, pero
generalmente dependía de propiedades comunes a toda la sangre de
los mamíferos. Por lo tanto, fue extremadamente difícil, antes de la
introducción. de métodos inmunológicos, para tomar una decisión con
respecto a lo que a menudo era el punto más vital de todos, a saber, si
el material sospechoso era de origen humano o animal, o, si era de
origen animal, de qué especie se deriva. Esta decisión es ahora
relativamente fácil, y dado que es así, y dado que Los métodos
inmunológicos se han utilizado de forma rutinaria para una buena
muchos años, tendemos a olvidar la gran diferencia que tienen
hecho. En el presente capítulo nos ocuparemos precisamente
con la aplicación de tales métodos a la medicina forense, y
las conclusiones que puedan extraerse.
General. El principio general es fácil de enunciar. Animales
poseen el poder de producir sustancias protectoras, llamadas
anticuerpos, que pueden reaccionar de diversas formas con agentes
patógenos o productos derivados de ellos. En 1897 Rudolf
Kraus descubrió que si a los animales se les inyectaba ciertas
bacterias, una respuesta corporal, particularmente después de
repetidas inyecciones, era la producción, que alcanzaba un pico una
semana después.
la última inyección, de anticuerpos que aparecieron en el animal
tranfusion de sangre. Si el suero, 'derivado de una muestra de la
sangre completa de estos animales se mezcló con un extracto de la
bacteria,
el extracto originalmente claro se volvió turbio y a menudo se produjo
un precipitado. Este fue el descubrimiento de la precipitina
reacción.
No son solo los agentes patógenos los que pueden estimular la
formación de anticuerpos, sin embargo, para muchas otras cosas, la
mayoría
las proteínas de una especie ajena al animal inyectada, en particular,
pueden hacerlo. Así, la inyección de albúmina de gallina
huevo (una sustancia en sí misma perfectamente inofensiva) en
conejos causa
para producir anticuerpos anti-albúmina de huevo. Los anticuerpos son
de varios tipos; todos ellos, incluido el
precipitinas que serán de especial interés para nosotros aquí, poseen
una característica distintiva que les da su
utilidad forense, es decir, su especificidad. Los anticuerpos producidos
en un animal se dirigen particularmente contra la proteína extraña
inyectada, por lo tanto, los anticuerpos producidos contra los
antígenos2
derivados de la especie A generalmente no reacciona positivamente
con
antígenos de la especie B, y viceversa, a menos que A y B sean más
o menos relacionado. Esto nos proporciona una forma de identificar el
especie origen de diversos materiales que pueden surgir para
examen médico-legal, y es la base de la inmunología forense.
Los anticuerpos han recibido varios nombres dependiendo de su
mecanismo de acción. (1) Si disuelven el antígeno en la prueba
suspensiones, se llaman lisinas; (2) Si precipitan el
antígeno, se llaman precipitinas; (3) Si hacen que las partículas de
antígeno se aglutinen (aglutinen o adhieran), son
llamados aglutinas, etc. Algunos de estos pueden ser diferentes de los
otros, pero es muy probable que en algunos casos uno y el mismo
El anticuerpo es capaz de actuar de varias formas, dependiendo de
circunstancias.
De paso, podemos mencionar que el compuesto se formó cuando
La reacción de anticuerpos y antígenos tiene afinidad por ciertos otros
componentes de la sangre que se denominan colectivamente
complemento.
A menos que haya un exceso de complemento, la aparición de
una reacción anticuerpo-antígeno consume todo el complemento. Esto
se llama fijación completa. Mediante una prueba adecuada, se puede
demostrar que el complemento se ha "fijado" a partir de una mezcla, y
que ha tenido lugar una reacción anticuerpo-antígeno de otro modo
quizás indetectable. Si se supiera que cierto antígeno
presente en la mezcla, el hecho de que reaccione y por tanto se fije
complemento indica que el anticuerpo correspondiente fue
regalo. Este principio se utiliza en Wassermann
prueba de sífilis. De manera similar, si estuviera presente un
anticuerpo conocido,
el hecho de la fijación del complemento puede indicar indirectamente
la
presencia en material sospechoso de antígeno específico.
Aplicaciones. Una de las primeras aplicaciones de la reacción de
precipitina fue la diferenciación de la carne de caballo de la
carne de otras especies (Uhlenhuth y Jesz), y más tarde la prueba
se aplicó para diferenciar las sangres de varias especies. La
El tratado más completo sobre las reacciones de la sangre a la
precipitina es el
libro clásico de Nuttall.4 La prueba de precipitina también se puede
utilizar
para detectar la presencia de antígenos bacterianos y, por lo tanto, en
algunoscasos la presencia de una determinada enfermedad. Una
buena ilustración de
La aplicación forense de tales pruebas es el uso de la "prueba de
termoprecipitina" de Ascoli 5 para demostrar la presencia de un
antígeno 6 termoestable del bacilo del ántrax.
aspecto de salud pública del ántrax (infecciones resultantes de la piel,
pelo, etc. de animales enfermos), este procedimiento es de
considerable importancia, especialmente en el extranjero. Las posibles
aplicaciones de la inmunología a la medicina forense son numerosas.
Podemos dividir el material a tratar en el presente capítulo en dos
partes. En la primera parte consideraremos la técnica de la reacción
de precipitina, usando esto como un ejemplo típico de una reacción
inmunológica que tiene aplicación forense. Será prudente incluir
también un estudio de las dificultades y escollos que los inexpertos
pueden encontrar. En la segunda parte abordaremos la cuestión de
cómo el tribunal puede reconocer la competencia y competencia de un
experto que presenta datos inmunológicos como prueba o que afirma
estar calificado para llevar a cabo dichas pruebas.
PARTE I: MÉTODOS El principio básico de una buena técnica
inmunológica forense puede resumirse afirmando que el perito debe
en todos los casos asegurarse de la especificidad de todo antisera8
que emplea en un caso medicolegal. El suero de sangre de un conejo
que ha sido inyectado varias veces con sangre humana generalmente
dar un precipitado cuando se mezcla con sangre humana o un extracto
de material que ha sido manchado con sangre humana. Sin embargo,
cualquier estudiante de la evolución se dará cuenta de inmediato de
que tal suero podría dar un precipitado (menos en cantidad, por
supuesto) también con sangre de los simios antropoides, y de hecho,
este es generalmente el caso. En menor medida, ciertos sueros
pueden reaccionar también con la sangre de otros mamíferos. La
Tabla 2, tomada del libro de Nuttall, servirá como ilustración. A menos
que se tengan en cuenta estos hechos, un error el diagnóstico de la
sangre humana se podría hacer cuando de hecho la muestra de
sangre desconocida vino de un animal. El experto, sin embargo,
evitará el error a través de su conocimiento de varios hechos: (1) Un
buen antisuero prácticamente siempre reaccionará con el antígeno9
homólogo, incluso cuando este último está en una solución muy
diluida. Las reacciones cruzadas, es decir, las reacciones con material
de otras especies, en general, sólo se producirán con soluciones más
concentradas del antígeno desconocido que se está probando. Al
incluir controles adecuados en los ensayos, estas diferencias pueden
hacerse evidentes. (2) Generalmente es posible eliminar de un
antisuero los anticuerpos que son responsables de las reacciones
cruzadas, dejando un reactivo que es completamente específico o casi
tan. La técnica de esto se discute a continuación. Preliminar.
Naturalmente acción" sólo puede considerarse evidencia presuntiva.
Un hemocromógeno positivo 2 o Teichmann' 3 prueba mostrará
definitivamente que la sangre está predefinida.. Una vez confirmado
este hecho, el investigador calificado está listo para realizar la prueba
de precipitina para determinar si la sangre es humana o de origen
animal, y si la pregunta es material, de qué animal. Técnica de la
prueba de precipitina. Un suero precipitante, si se mezcla con el
antígeno homólogo en las proporciones adecuadas, producirá una
nubosidad de los fluidos originalmente claros, por lo general seguido
de la formación de un precipitado floculante. La reacción es más fácil
de ver, y tiene lugar en un rango más amplio de concentraciones, si se
lleva a cabo colocando un líquido (el antígeno) sobre el otro (el
antisuero) en un tubo de ensayo adecuado. Por esta técnica interfacial
la reacción es visible como la formación de una zona blanca o plano
en la unión de los dos fluidos claros. Esto se denomina a menudo la
prueba del "anillo". Véanse las notas 14. 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21
Reactivos. Los reactivos implicados plasma, 25 o suero.26 El suero es
más fácil de obtener, y parece en general tan satisfactorio como
cualquier otra cosa. Antes de inyectar el suero, a veces se diluye (con
una solución de cloruro de soduim al 0,9%) hasta un contenido de
proteínas de aproximadamente un 1% (es decir, se diluye 1:6 o 1:7).
Son necesarias varias inyecciones; el presente escritor inyecta a cada
animal 3 veces a la semana durante 3 o 4 semanas antes de tomar un
sangrado. Aparato. Es conveniente hacer las diluciones del antígeno
(para diluir el líquido se utiliza una solución de cloruro de sodio al 0,9
%) en tubos de ensayo como el de 13 x 100 mm. , "Tubos de
Wassermann", utilizando pipetas serológicas ordinarias.27 La reacción
puede llevarse a cabo en tubos de ensayo de aproximadamente 9 x
110 mm. , poniendo 0,9 cc. de dilución del antígeno, y 0.1 cc. de
antisuero (Uhlenhuth28' 29). Mucho material puede Más fácil de leer,
utilizando tubos "micro" de tubo semicapilar, de unos 35 mm. de largo
y 2,5 mm. de diámetro interior. En ellos se coloca alrededor de 0,4
mm. de antisuero y encima de esto alrededor de 0,04 cc. de dilución
del antígeno.3 0 Para los tubos de Uhlenhuth, se pueden utilizar
estantes especiales en los que los tubos cuelgan del labio y el fondo,
en el que tiene lugar la reacción, está libre. Los tubos "micro" pueden
apoyarse pegando sus extremos inferiores en plasticeno en un
pequeño recipiente poco profundo, como la cubierta metálica de una
caja de pastillas. O Se pueden construir pequeños estantes especiales
de madera o alambre, que tienen la ventaja de dejar el fondo del tubo
abierto a la inspección, y de no ensuciar el exterior del tubo. Para su
uso con los tubos pequeños, se necesitarán pipetas capilares finas,
fabricadas dibujando tubos de vidrio ordinario de laboratorio hasta un
punto en una llama, y pequeñas bombillas de goma (2 cc. de
capacidad). Con un poco de práctica, es fácil transferir con estos la
cantidad deseada de líquido en los tubos de precipitina poco y obtener
la línea afilada deseada de la unión. Determinación del título del
antisuero. Con el fin de poder medir la importancia de una reacción
positiva, por supuesto, es necesario tener una idea justa de la potencia
del antisuero o antisera que se utiliza. Parece suficiente para estimar
la fuerza del antisuero por que aparece a los pocos minutos de haber
añadido el antígeno y se vuelve más pesado. En una reacción muy
fuerte, las partículas de precipitado pueden comenzar a caer a través
del antisuero. El disco de precipitado debe permanecer horizontal si el
tubo está inclinado, mostrando que no es suciedad u otra
contaminación unida a las paredes del tubo. Todas las precauciones,
naturalmente, se toman de antemano para asegurar la limpieza de los
tubos. Las reacciones deben leerse con una buena luz, con un fondo
oscuro detrás de los tubos. Una ventana bien iluminada que tiene una
barra transversal que se puede utilizar para el fondo es muy
satisfactoria. La iluminación fluorescente con un fondo negro muerto
es buena. Las pruebas se llevan a cabo como se describe
inmediatamente arriba. Las reacciones deben ser juzgadas positivas
cuando cumplen el