BACILOS GRAM POSITIVOS

Si bien dentro de los bacilos Gram positivos (BGP) se encuentran algunos de los
patógenos más agresivos para el ser humano, la gran mayoría de las especies bacterianas de
este grupo no son patógenos primarios. Muchos forman parte de la flora normal del cuerpo
humano (piel, tracto gastrointestinal, cavidad oral) y se encuentran ampliamente
distribuidos en el ambiente. Por este motivo, se debe ser cuidadoso en la interpretación del
hallazgo de un BGP en un estudio microbiológico, ya que frecuentemente se trata de
contaminantes.

De acuerdo a su comportamiento frente al oxigeno los BGP se dividen en:

a) aerobios: Bacillus spp, Listeria spp, Corynebacterium spp, Erysipelothrix spp, etc.
b) anaerobios: Clostridium spp, Eubacterium spp, Propionibacterium spp, Lactobacillus
spp,Bifidobacterium spp, Mobiluncus spp, etc.

En este capítulo nos referiremos únicamente a los BGP aerobios de importancia

médica.
Éstos pueden ser clasificados según su morfología en:
1. Esporulados: Bacillus spp
2. No esporulados:
2a. regulares: Listeria spp.; Erisipelothrix spp.
2b. irregulares: Corynebacterium spp.; Nocardia spp.

Esporulados

BACILLUS
Características generales

Este género es prototipo de la familia Bacillaceae. Son BGP grandes y esporulados,

no exigentes y en general móviles. Incluye bacterias aerobias y anaerobias facultativas.
Están ampliamente distribuidos en la naturaleza; algunos forman parte de la flora normal y
suelen ser contaminantes del laboratorio.

El manual Bergey’s de sistemática bacteriana describe 34 especies, pero Bacillus

anthracis es el más importante en microbiología médica y veterinaria. Existe una gran
diversidad de contenido G+C en su genoma, 32-62 mol % dentro del género, lo que refleja
su gran heterogeneidad. Ciertos miembros del género tienen implicancias médicas por la
producción de antibióticos como polimixina y bacitracina, además de uso industrial en la
producción de solventes, enzimas, vitaminas, etc.

Bacillus anthracis
El carbunco o ántrax (evitar la confusión con el término carbunclo) fue una de las primeras
infecciones bacterianas para las cuales se estableció definitivamente la causa. Dio lugar al
desarrollo de la primera vacuna bacteriana que fue desarrollada por Louis Pasteur. Es una
enfermedad que afecta sobretodo a animales herbívoros, en particular ovinos y bovinos. El
hombre la adquiere de forma accidental: en el contexto agrícola como una infección
cutánea local, en el contexto industrial (manipuladores de cuero y pelo de animal) como
una neumonía (poco frecuente). Es entonces, una zoonosis y una enfermedad laboral.

Morfología y fisiología de B. anthracis

Microscopía: bacilos rectos de extremos cuadrados de 3-5 µm de largo y 1-1.2 µm de
ancho, aislados o en pares. Es inmóvil a diferencia de la mayoría de las otras especies del
género. Cuando desarrolla in vivo presenta cápsula, pero para demostrarla in vitro debe
cultivarse en medios especiales (por ej. medios con bicarbonato e incubación a 6% de
CO2). La endospora es elíptica, ubicada centralmente, y no modifica el soma bacteriano; no
se produce en tejidos de animales vivos, pero si en cultivos de varios días, suelos o
animales muertos.
Macroscopía: luego de 24 horas de cultivo, las colonias son grandes (2-3 mm de diámetro),
sobreelevadas, blanco-grisáceas, opacas y de bordes irregulares, en aspecto de “cabeza de
medusa”. Tienen una consistencia membranosa con dificultad para emulsionarlas. No
producen hemólisis.

Determinantes de patogenicidad de B. anthracis

No todas las cepas de B. anthracis son capaces de producir carbunco. Los principales
atributos de virulencia de las cepas que producen enfermedad están codificados en dos
plásmidos y son:
• Toxinas: Produce dos toxinas modelo A-B, que poseen idéntica subunidad B. La
subunidad B se conoce como antígeno protector. Es la porción de la toxina que se fija al
sitio blanco y permite el ingreso a la célula.
– Toxina edema: su subunidad A es el componente enzimáticamente activo; se denomina
factor edema. Es una adenilato-ciclasa calmodulina-dependiente. Es responsable del
importante edema en los sitios de infección, la inhibición de la función de los neutrófilos y
obstaculiza la producción de factor de necrosis tumoral (TNF) e interleuquina 6 (IL-6) por
parte de los monocitos.
– Toxina letal: su porción A, llamada factor letal, es una metaloproteasa que inhibe la
señalización transduccional intracelular. Estimula la liberación de TNF e IL-1 por parte de
los macrófagos; este mecanismo parece contribuir a la muerte por bacteriemia.

• Cápsula
Al igual que sucede con otras bacterias la cápsula es un importante factor de virulencia al
inhibir la fagocitosis.

Infección clínica de B. anthracis

Epidemiología
La infección veterinaria tiene una alta tasa de mortalidad por sepsis. En los humanos es una
enfermedad actualmente poco frecuente. Dependiendo de la vía de transmisión, produce
dos clases de infecciones principales: una cutánea relativamente benigna y una respiratoria
que compromete la vida del paciente. La infección cutánea se produce por contacto directo
con animales infectados. La infección respiratoria requiere la vía inhalatoria, la cual, para
ser efectiva, requiere que los ésporos bacterianos sean aerosolizados.
Patogenia
El carbunco cutáneo se produce por contacto de la piel con material infectado. Los ésporos
ingresan a través de una lesión de la piel. Al ser ingeridos por los macrófagos en el sitio de
entrada, los ésporos germinan y las células se multiplican produciendo cápsula y toxinas.
El carbunco pulmonar ocurre cuando las esporas ingresan a la vía aérea y se depositan en
los espacios alveolares, donde son fagocitadas por los macrófagos alveolares. En el interior
de los mismos germinan y producen las toxinas, para ser luego transportadas por la
circulación linfática a los ganglios mediastinales. Alcanzan el torrente sanguíneo pudiendo
causar shock séptico. La germinación puede ocurrir hasta 60 días después del ingreso de las
esporas a la vía respiratoria; de ahí la importancia de que la profilaxis antibiótica en casos
de exposición se prolongue por 60 días. Se estima que la dosis inhalatoria letal para los
seres humanos es de 2500 a 55000 esporas.
Manifestaciones clínicas
La infección cutánea, que comprende el 95% de los casos humanos, se manifiesta por una
pápula indolora de centro color negro-azulado con un gran borde edematoso. Sin
tratamiento tiene un 20% de mortalidad. La infección pulmonar es una severa infección
respiratoria que evoluciona a la insuficiencia respiratoria aguda y tiene una muy alta tasa de
mortalidad (100% sin tratamiento).

Sensibilidad antibiótica
Es sensible a penicilina (aunque existen informes de unos pocos casos resistentes),
eritromicina, tetraciclina, gentamicina, cloranfenicol y quinolonas.

Prevención
El control del carbunco humano depende fundamentalmente del control del carbunco
animal. Así, deben tomarse medidas como la vacunación del ganado y manejo adecuado del
ganado muerto, ropa y material de trabajo, etc.
No esporulados regulares
LISTERIA
Género de cocobacilos cortos ubicuos en la naturaleza. El más importante en
microbiología médica es L. monocytogenes, ya que es el principal patógeno humano.
Excepcionalmente se han reportado infecciones por L. ivanovii (en animales es responsable
de abortos). Las mujeres embarazadas son especialmente susceptibles a las infecciones por
Listeria, también afecta a otros individuos con alteraciones del sistema inmune, en especial
de la inmunidad celular: personas añosas, recién nacidos, cirróticos, trasplantados, personas
afectas de cáncer, las que reciben terapia inmunosupresora, etc.

L. monocytogenes
Morfología y fisiología
Microscopía: cocobacilos, Gram positivos, de 0,5 - 2 µm por 0,5 µm, que se presentan
aislados o agrupados en cadenas cortas; móviles por presentar de 1 a 5 flagelos a 28ºC.
Macroscopía: colonias pequeñas (0,5 – 1,5 cm.), translúcidas. En agar sangre produce
colonias similares a Streptococcus spp. Las cepas patógenas producen un halo muy
estrecho de β-hemólisis; frecuentemente es necesario remover las colonias para visualizar
la hemólisis.
Fisiología y características bioquímicas: son aerobios facultativos, pero su crecimiento es
estimulado con la disminución en la tensión de O2 y CO2 al 5-10%. Su crecimiento óptimo
es a 30-37ºC pero puede proliferar a 4ºC en unos días; esta característica fisiológica es útil
para su aislamiento selectivo, ya que otras bacterias de interés médico no son capaces de
desarrollar a tan bajas temperaturas (técnica de enriquecimiento en frío). Por otra parte, le
confiere a la bacteria una ventaja ya que es capaz de desarrollar en alimentos refrigerados y
así dar origen a infecciones a partir del consumo de los mismos. No son exigentes
nutricionalmente. Son catalasa positivos (a diferencia de los Streptococcus spp), fermentan
azúcares como la glucosa, manosa y ramnosa, pero no el manitol (a diferencia de otras
especies no patógenas); también hidrolizan la esculina. Tienen cuatro flagelos, los que se
pierden cuando ingresan al ser humano. Cuando se siembran en medios semisólidos en tubo
y se incuban a 25ºC, muestran una movilidad característica en aspecto de “sombrilla”, la
cual no se observa cuando se incuba a 37ºC.
Determinantes de patogenicidad
Explicarían en parte la capacidad de L. monocytogenes de proliferar dentro de las células ya
que es un microorganismo intracelular facultativo (principalmente en macrófagos y células
epiteliales).
• Productos solubles excretados: listerolisina O (LLO), es una hemolisina. Su prototipo es
la estreptolisina O y la pneumolisina, de los estreptococos. Rompe la membrana del
fagosoma y permite la reproducción de la bacteria en un medio menos hostil, el citoplasma
de la célula huésped. Además, inhibe el procesamiento del antígeno mediado por
macrófagos.
Recientemente se ha demostrado que genera un influjo de calcio extracelular que estimula
el ingreso de la bacteria en las células epiteliales. Codificada por el gen hly.
• Internalinas: se conocen dos proteínas, A y B, que están involucradas en el ingreso a las
células.
• Sideróforos: componentes bacterianos que captan hierro, mineral indispensable para la
supervivencia bacteriana.
• Otros: fosfolipasas, etc.
Infección clínica
Epidemiología
De distribución mundial, ubicuo en la naturaleza se encuentra en diferentes animales,
suelos, plantas y agua. Al parecer su hábitat primario es el suelo y la materia vegetal en
descomposición. Además se halla en el intestino del 5 al 10% del hombre, sin causar
enfermedad. Es un importante patógeno veterinario y se transmite al hombre por el
consumo de alimentos contaminados de origen animal.
Patogenia
Es importante recordar que la inmunidad del huésped es en general efectiva contra Listeria
y que se desarrolla enfermedad dependiendo de la dosis infectante (se requiere altas dosis,
mayor a 109), de los determinantes de virulencia, y de la inmunidad celular del huésped.
Ingresan por vía digestiva e inducen la fagocitosis por parte del enterocito, siendo incluidas
en un fagosoma (antes de formarse el fagolisosoma), del cual escapan rápidamente para
multiplicarse en el citoplasma de la célula huésped. Una de las proteínas responsables de
esto es la LLO. En el interior del citoplasma celular son capaces de polimerizar los
filamentos de actina en uno de los polos bacterianos. De esta forma es impulsada hacia la
periferia, a la membrana citoplamática, formando allí protrusiones o pseudópodos lo que le
permite luego penetrar en otra célula adyacente. Así, es capaz de moverse célula a célula
sin estar expuesta a los anticuerpos, el complemento o los polimorfonucleares. Por ello es
más importante la inmunidad celular que la humoral. Finalmente alcanzan el torrente
circulatorio y de allí alcanzan otros órganos, teniendo predilección por el sistema nervioso
central y la placenta. La infección connatal se trasmite de diferente manera. Las mujeres
embarazadas infectadas pueden transmitir la infección al feto por vía transplacentaria. No
se ha demostrado claramente la transmisión en el canal de parto.
Manifestaciones clínicas
En cambio la infección en el feto es grave y puede dar lugar a óbito o al parto prematuro de
un recién nacido infectado. El espectro de manifestaciones clínicas en el recién nacido es
similar al producido por Streptococcus agalactiae, son: un cuadro de instalación precoz de
sepsis, y un cuadro de instalación tardía que se manifiesta en general por meningitis. Es
discutido si este último ocurre cuando la transmisión se produce en el canal de parto, ya que
esta vía de infección no se ha demostrado claramente. La principal forma de presentación
de la listeriosis no materno-fetal es la bacteriemia sin foco evidente. Le sigue en frecuencia
la meningitis. En los últimos años, varias investigaciones han sugerido que Listeria puede
causar gastroenteritis, incluso en adultos inmunocompetentes. Debido a que por lo menos
un 5% de personas sanas son portadoras intestinales de Listeria, es difícil determinar si son
agentes etiológicos de diarrea.
Sensibilidad antibiótica
Es sensible a penicilina, ampicilina, eritromicina, tetraciclina, cloranfenicol y rifampicina.
Es moderadamente sensible a las quinolonas y las cefalosporinas de tercera generación
carecen de efectividad in vitro. Recientemente aparecieron cepas resistentes a cloranfenicol,
macrólidos y rifampicina. Para el tratamiento es necesario que estos antibióticos penetren
las células, y en casos de meningitis que atraviesen la barrera hematoencefálica; para esto
se utiliza ampicilina con un aminoglucósido como gentamicina.
Prevención
No se dispone de vacunas. La profilaxis depende de las medidas de control que se aplican
para cualquier enfermedad de transmisión alimentaria, con especial cuidado en las mujeres
embarazadas y personas inmunocomprometidas.
No esporulados irregulares
CORYNEBACTERIUM
Es un género con numerosas especies (más de 46), algunas de ellas forman parte de
la flora normal de mucosas y piel del ser humano; excepcionalmente algunas de ellas
causan enfermedad en pacientes inmunodeprimidos. La especie patógena por excelencia es
C. diphtheriae, responsable de una grave enfermedad: la difteria. Son bacilos pleomórficos,
no esporulados y no ácido-alcohol resistente. La mayoría fermentan la glucosa y son
catalasa positivos.

Corynebacterium diphtheriae
Es por excelencia la especie más importante del género. Se describen cuatro biotipos:
gravis, mitis, belfanti e intermedius; su importancia es epidemiológica.
Morfología y fisiología de C. diphteriae
Microscopía: bacilo delgado en forma de clava, mide 1,5-5 µm de ancho y 0,5-1 µm de
largo; es Gram positivo, no esporulado e inmóvil. Aparecen agrupados formando
estructuras que semejan letras chinas. Con azul de metileno se observan gránulos
metacrómaticos característicos que los diferencian de otras especies de Corynebacterium.
Macroscopía: las colonias típicas son pequeñas, blanco grisáceas brillantes. En medios
selectivos con telurito se ven grisáceas a negras. La presencia y el tipo de hemólisis es
variable. Es un microorganismo anaerobio facultativo, pero crece mejor en medios
aerobios. Es exigente desde el punto de vista nutricional. Su pared celular está compuesta
por ácido mesodiaminopimélicos (no L-lisina), polímeros de arabino galactano y ácidos
micólicos de cadena corta (por ello su posición taxonómica y su relacionamiento con
Nocardia, Mycobacterium y Rhodococcus).
Resistencia: dentro de las bacilos no esporulados C. diphtheriae es uno de los más
resistentes a la luz, desecación y congelamiento. Pero son susceptibles a los desinfectantes
de uso habitual.
Determinantes de patogenicidad
Los más importantes son:
• Factor de cordón: contiene los ácidos micólicos propios de C. diphtheriae, tiene actividad
similar al de Mycobacterium spp; en las células del ratón provoca rotura de las
mitocondrias, disminución de la respiración y la muerte.
• Antígeno K: antes mencionado, responsable de inmunidad antibacteriana,
hipersensibilidad e inmunidad antitóxica. Provee invasividad junto al factor de cordón.
• Neuraminidasa y N-acetilneuraminato liasa.
• Exotoxina: es el principal determinante de patogenicidad y explica casi todos los síntomas
sistémicos de la enfermedad. Dicha toxina es producida por las cepas de C. diphtheriae
infectadas por un bacteriófago

La toxina sólo se produce a niveles máximos cuando declina el crecimiento bacteriano,

cuando las concentraciones de hierro en el medio disminuyen. Esto parece estar regulado de
forma que cuando hay hierro en el medio se forma un complejo represor-hierro que se une
específicamente al operador tox del fago β. La toxina se sintetiza a nivel de los polisomas
de la membrana de C. diphtheriae y es secretada co-traduccionalmente como una cadena
polipeptídica no tóxica. Adquiere su toxicidad al actuar la tripsina que pone al descubierto
sus sitios enzimáticos activos.

Acción: la toxina ingresa a la célula y al llegar al citoplasma altera la síntesis proteica.

Además, esta toxina es la responsable de los efectos sistémicos de la enfermedad ya que
produce toxicidad cardíaca, del sistema nervioso central y periférico, y daño renal.
Infección clínica de C. diphteriae
Epidemiología
La difteria es una enfermedad de distribución mundial, pero con una incidencia
notablemente variable según el grado de inmunización en la región. En nuestro país, la
vacunación se incluyó en el PAI (programa ampliado de inmunización) por lo que todos los
niños están vacunados; lo que disminuye la frecuencia y la severidad de la enfermedad.
Patogenia
La infección respiratoria se trasmite principalmente por las gotitas de Pflügge y las lesiones
cutáneas altamente infectantes son fuente de enfermedad faríngea y cutánea. Dicha
transmisión se ve favorecida por el hacinamiento y el frío. Los microorganismos se
establecen en la orofaringe y amígdalas y se reproducen con rapidez. Luego comienzan a
secretar la exotoxina que produce necrosis local y gran respuesta inflamatoria con la
producción de exudados fibrinosos, que se van organizando y forman una seudomembrana
gruesa y muy adherente. Dicha pseudomembrana junto con el edema y las importantes
adenomegalias locales producen obstrucción respiratoria alta (crup). Las manifestaciones
sistémicas de la enfermedad se deben a la toxicidad cardíaca y del sistema nervioso
periférico que produce la toxina.
Manifestaciones clínicas
• Enfermedad respiratoria: es una amigdalitis con fiebre y malestar general. Puede ser leve
o muy grave cuando compromete nasofaringe y tráquea; las seudomembranas,
características de esta faringoamigdalitis, y el edema que se forman pueden llevar a la
asfixia y a la muerte del paciente.
• Cutánea: se produce más frecuentemente en zonas cálidas del mundo.
• Complicaciones: disfunción miocárdica, afección de los pares craneanos y polineuritis
periférica; todas lesiones reversibles.
Sensibilidad antibiótica
Es sensible a penicilina y eritromicina, como alternativa para pacientes alérgicos. Debe ser
administrada tempranamente junto con la antitoxina.
Prevención
Inmunización activa
En nuestro país se realiza mediante la vacunación con la vacuna pentavalente en el 1er año
de vida que contiene toxoide diftérico, tetánico y gérmenes muertos de B. pertussis, además
de polisacárido capsular de H. influenzae y antígenos del virus de la hepatitis B. Luego se
hace refuerzo administrada solamente junto al toxoide tetánico. El toxoide diftérico se
prepara a partir de la toxina diftérica tratada con formalina al 0,3% a 37ºC.
NOCARDIA
Pertenece a la familia Nocardiaceae, suborden Corynebacterineae, perteneciente a los
Actinomycetes. En el suborden se encuentran además otras familias como
Mycobacteriaceae y Corynebacteriaceae. Comparte con estas dos familias los
componentes de su pared: ácidos micólicos, galactosa, arabinosa, ácido
mesodiaminopimélico, etc. Comprende numerosas especies, pero las especies que infectan
al hombre son: complejo N. asteroides y N. brasiliensis. Las infecciones producidas por
este microorganismo son infrecuentes, pero está aumentando el número de casos
reportados. Causa infecciones localizadas tanto como diseminadas en humanos,
frecuentemente inmunodeprimidos, y en animales.
Morfología y fisiología
Son aerobios y moderadamente exigentes desde el punto de vista nutricional. Son de
crecimiento lento, los cultivos en agar infusión, en Sabouraud, en Lowenstein-Jensen o en
agar sangre pueden ser examinados al cabo de algunos días. Se pueden utilizar medios
selectivos con antibióticos.
Infección clínica
La nocardiosis es una infección mundialmente distribuida. Afecta fundamentalmente a
pacientes inmunodeprimidos, pero no en forma exclusiva.

La infección se manifiesta clínicamente por:

• Nocardiosis pulmonar: es una neumonía de evolución aguda o subaguda con formación de
abscesos y cavitación. Habitualmente provocada por N. asteroides
• Nocardiosis cutánea y subcutánea: puede producir el clásico micetoma (enfermedad
crónica de la piel y el tejido celular subcutáneo que destruye progresivamente la piel, el
celular subcutáneo, las fascias, el músculo, llegando al hueso) además de celulitis, pústulas,
etc. En general causada por N. brasiliensis.
• Nocardiosis sistémica: a partir de las dos formas anteriores pueden producirse
bacteriemias y afectar el sistema nervioso central, la piel y tejido subcutáneo, los riñones,
articulaciones, huesos, corazón y ojos. Tanto la infección pulmonar como la sistémica no
son infecciones autolimitadas por lo que requieren de correcto tratamiento antibiótico y
muchas veces cirugía.
Sensibilidad antibiótica
Son sensibles a las sulfonamidas, trimetoprim-sulfametoxazol y dapsona con sulfato de
estreptomicina. Son sensibles además a amicacina, que muestra actividad sinérgica con
imipenem, con cefalosporinas de tercera generación y con trimetoprim-sulfametoxazol. Se
tratan habitualmente con sulfas o con cotrimoxazol.
Identificación de bacilos Gram positivos (BGP)
 Frotis con tinción de Gram.
 Un cultivo en medios agar simple, agar sangre y las diferentes pruebas bioquímicas.
CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE
Prueba de Elek modificada: consiste en cultivar la cepa a estudiar en una placa de Petri con
un medio especializado, junto con un disco impregnado en antitoxina; si la bacteria
presenta la toxina, se visualiza luego de la incubación una zona de precipitación.
• Pruebas de biología molecular como PCR del gen tox; tiene la ventaja de poderse realizar
directamente a partir de la muestra clínica. Otras pruebas como electroforesis en campos
pulsados, análisis del polimorfismo de los fragmentos de restricción, ribotipificación, etc.
son realizados para estudios epidemiológicos.
• ELISA: fue desarrollada recientemente para la detección de la toxina. La cromatografía
para la búsqueda de ácidos micólicos y otros componentes de la pared también es utilizada
en laboratorios de referencia para la identificación de cepas de C.
diphteriae.