Microbiología

Unidad: IV Las bacterias

1
Tabla de contenido
OBJETIVO......................................................................................................................................... 3
REVISIÓN DE CONCEPTOS PREVIOS A LA ACTIVIDAD EXPERIMENTAL .................... 4
Microscopio ................................................................................................................................. 4
Uso .............................................................................................................................................. 4
Sistema mecánico .................................................................................................................... 4
Sistema óptico........................................................................................................................... 5
Tipos de agrupación bacteriana y morfología colonial ................................................... 6
Agrupación bacteriana ............................................................................................................. 7
Tipos de esporulación bacteriana y como se realiza la tinción negativa ................... 8
FUNDAMENTO .............................................................................................................................. 10
DESARROLLO EXPERIMENTAL .............................................................................................. 12
Materiales, reactivos y equipos de laboratorios .............................................................. 12
Materiales ................................................................................................................................ 12
Reactivos ................................................................................................................................. 15
Equipo ...................................................................................................................................... 18
METODOLOGIA EN DIAGRAMA DE BLOQUES ................................................................... 19
Secuencia experimental ......................................................................................................... 19
Preparación de un frotis en seco. ........................................................................................ 19
Tinción GRAM ......................................................................................................................... 20
Tinción de esporas (Wirtz-Conklin)...................................................................................... 21
CUESTIONARIO ............................................................................................................................ 23
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS ........................................................................... 26
Bibliografía ....................................................................................................................................... 27

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OBJETIVO
Realizar las diferentes técnicas de tinción diferencial para bacterias y esporas, así como
identificar los pasos analizando la función de cada uno de los reactivos en la metodología
empleada.

3
REVISIÓN DE CONCEPTOS PREVIOS A LA ACTIVIDAD EXPERIMENTAL
Microscopio
Uso
El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a al ojo
humano. Esto se logra mediante un sistema óptico compuesto por lentes, que forman y
amplifican la imagen del objeto que se está observando.

Sistema mecánico
Dentro del sistema mecánico se incluyen todos los elementos estructurales que dan
estabilidad al microscopio y mantienen los elementos ópticos correctamente alineados.

1. Base o pie: Es la pieza que se encuentra en la parte inferior del microscopio y sobre
la cual se montan el resto de elementos. Acostumbra a ser la parte más pesante
para proporcionar suficiente equilibrio y estabilidad al microscopio. Es habitual que
incluya algunos topes de goma para evitar que el microscopio se deslice sobre la
superficie donde se encuentra.
2. Brazo: El brazo constituye el esqueleto del microscopio. Es la pieza intermedia del
microscopio que conecta todas sus partes. Principalmente conecta la superficie
donde se coloca la muestra con el ocular por donde ésta se puede observar. Tanto
las lentes del objetivo como del ocular se encuentran también conectadas al brazo
del microscopio.
3. Platina: Esta es la superficie donde se coloca la muestra que se quiere observar.
Su posición vertical con respecto a las lentes del objetivo se puede regular mediante
dos tornillos para generar una imagen enfocada. La platina tiene un agujero en el
centro a través del cual se ilumina la muestra. Generalmente hay dos pinzas unidas
a la platina que permiten mantener la muestra en posición fija.
4. Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez esta
se ha colocado sobre la platina.
5. Tornillo macrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un
enfoque más preciso de la muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta
y con gran precisión el desplazamiento vertical de la platina.
6. Revolver: El revólver es una pieza giratoria donde se montan los objetivos. Cada
objetivo tiene proporciona un aumento distinto, el revólver permite seleccionar el
más adecuado a cada aplicación. Habitualmente el revólver permite escoger entre
tres o cuatro objetivos distintos.

4
 7. Tubo: El tubo es una pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el
ocular con los objetivos. Es un elemento esencial para mantener una correcta
alineación entre los elementos ópticos.

Sistema óptico
El sistema óptico incluye todos los elementos necesarios para generar y desviar la luz en
las direcciones necesarias y así acabar generando una imagen aumentada de la muestra.

1. Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz
dirigido hacia la muestra. En algunos casos el haz de luz es primero dirigido hacia
un espejo que a su vez lo desvía hacia la muestra. La posición del foco en el
microscopio depende de si se trata de un microscopio de luz transmitida o de luz
reflejada.
2. Condensador: El condensador es el elemento encargado de concentrar los rayos
de luz provenientes del foco a la muestra. En general, los rayos de luz provenientes
del foco son divergentes. El condensador consiste en un seguido de lentes que
cambian la dirección de estos rayos de modo que pasen a ser paralelos o incluso
convergentes.
3. Diafragma: El diafragma es una pieza que permite regular la cantidad de luz
incidente a la muestra. Normalmente se encuentra situado justo debajo la platina.
Regulando la luz incidente es posible variar el contraste con el que se observa la
muestra. El punto óptimo del diafragma depende del tipo de muestra observada y
de su transparencia.
4. Objetivo: El objetivo es el conjunto de lentes que se encuentran más cerca de la
muestra y que producen la primera etapa de aumento. El objetivo suele tener una
distancia focal muy corta. En los microscopios modernos distintos objetivos están
montados en el revólver. Este permite seleccionar el objetivo adecuado para el
aumento deseado. El aumento del objetivo junto con su apertura numérica suele
estar escrito en su parte lateral.
5. Ocular: Este es el elemento óptico que proporciona la segunda etapa de ampliación
de imagen. El ocular amplio la imagen que ha sido previamente aumentada
mediante el objetivo. En general, el aumento aportado por el ocular es inferior al del
objetivo. Es a través del ocular que el usuario observa la muestra. En función del
número de oculares se puede distinguir entre microscopios monoculares,

5
 binoculares e incluso trinoculares. La combinación de objetivo y ocular determina el
aumento total del microscopio.
6. Prisma óptico: Algunos microscopios incluyen también prismas en su interior para
corregir la dirección de la luz. Por ejemplo, esto es imprescindible en el caso de los
microscopios binoculares, donde un prisma divide el haz de luz proveniente del
objetivo para dirigirlo hacia dos oculares distintos. (Microscopio, s.f.)

Tipos de agrupación bacteriana y morfología colonial

Morfología de las bacterias

La microscopía óptica permite reconocer bacterias de distintas formas.

 La bacterias esféricas o ligeramente ovoides se denominan cocos.

 Las bacterias con forma de bastón se denominan bacilos.
 Los bacilos de corto tamaño que pueden confundirse con un coco se denominan
cocobacilos. Algunos bacilos tienen extremos afinados y reciben el nombre de bacilos
fusiformes, mientras que otros poseen forma de clava o garrote.
 Los bacilos cortos curvos, con forma de coma reciben el nombre de vibrios.
 Las bacterias espiraladas se llaman comúnmente espirilos cuando son rígidas y
espiroquetas si son más flexibles y ondulantes.

6
Agrupación bacteriana
Algunos géneros bacterianos se agrupan de una manera característica. Esta agrupación se
debe a la tendencia de las células hijas a permanecer parcialmente adheridas después de
la división celular.

Los cocos pueden disponerse:

 De a pares y se los llama diplococos

 Si se disponen en cadena se llaman estreptococos
 Cuatro células esféricas conforman una tétrada
 En forma de racimo o irregular se llaman estafilococos
 En paquetes cúbicos se denominan sarcinas

Los bacilos pueden disponerse:

 Aislados
 Adosados a lo largo, de forma paralela formando una agrupación en empalizada
(Haemophilus)
 Pueden quedar adheridos por sus extremos y tomar apariencias de letras chinas
(Corynebacterium)

La morfología y agrupación bacteriana se ponen de manifiesto por la observación

microscópica de frotis teñidos. El método de coloración más utilizado en bacteriología es la
coloración de Gram

Las bacterias se clasifican en dos grandes grupos teniendo en cuenta el comportamiento

de las mismas frente al procedimiento de coloración de Gram: (Ramos, 2013)

 Gram positivas G (+), se tiñe de color violeta.

 Gram negativas G (-), se tiñe de color rojo o fucsia.

7
Tipos de esporulación bacteriana y como se realiza la tinción negativa

Algunas especies de bacterias Gram positivas (principalmente de los géneros Bacillus,

Clostridium, Sporosarcina y Thermoactinomyces), disponen de una notable estrategia
adaptativa cuando se ven sometidas a privación de nutrientes en su medio ambiente: si los
niveles de fuentes de C, N, o P caen por debajo de un umbral, esto constituye una señal a
la célula de que se avecina un largo período de privación de nutrientes. Entonces, la célula
se implica en una serie de complejos cambios genéticos, metabólicos, estructurales, etc.
(proceso de esporulación o esporogénesis), que conducen a la diferenciación, en el
interior de la célula vegetativa original, de una célula durmiente (la endospora). La célula-
madre (o sea, la célula vegetativa original que generó la endospora) finalmente se autolisa,
liberando la espora, que es capaz de permanecer en estado criptobiótico, durmiente, varios
decenios, incluso siglos. Las esporas son fácilmente diseminadas por el aire; cuando caen
en medios ricos en nutrientes, se desencadena su germinación, se reinicia la actividad
metabólica, de modo que cada espora genera una nueva célula vegetativa, capaz de
división binaria, etc. (Marván, s.f.)

La técnica de una tinción negativas es:

1. Tomar una pequeña muestra del microorganismo sembrado en el medio de cultivo

(levadura) y colocarlo en el centro del portaobjetos.

8
2. Añadir al portaobjetos una gota de nigrosa o de tinta china.
3. Mezclar con el asa de siembra estéril y realizar una extensión
4. Dejar secar la extensión a temperatura ambiente.
5. Observar la preparación en el microscopio óptico. (Mélendez, Elizalde, Cortés, &
Orduña, 2020)

9
FUNDAMENTO

En general, la microscopía se utiliza en Microbiología con dos propósitos básicos: la

detección inicial de microorganismos y la identificación definitiva de los mismos. El examen
microscópico de muestras clínicas se utiliza para detectar células bacterianas, elementos
micóticos, parásitos (huevos, larvas o formas adultas) e inclusiones víricas presentes en las
células infectadas. Las propiedades morfológicas características se pueden utilizar para la
identificación preliminar de la mayoría de las bacterias y se utilizan para la identificación de
muchos hongos y parásitos. Para el examen microscópico de los microorganismos se
puede utilizar el microscopio óptico o el microscopio electrónico. Así mismo, para la
detección de los microorganismos es importante aplicar algún método de tinción para su
posterior observación en el microscopio, ya que esta es la base para después poder realizar
la inoculación de la bacteria u hongo en algún medio de cultivo. (Mélendez, Elizalde, Cortés,
& Orduña, 2020)

Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tiñe del mismo
color y se utiliza un solo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tinción diferencial,
cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante (Gram o Ziehl-
Neelsen); tinción específica, cuando se utilizan anticuerpos marcados con una molécula
fluorescente para identificar una estructura celular en particular (inmunocitoquímico)

Examen de muestras al microscopio: la tinción GRAM

La tinción Gram es uno de los métodos más importantes en el laboratorio bacteriológico y

con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad práctica es
indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina de laboratorio de microbiología las
referencias a la morfología celular bacteria (cocos, bacilos, positivos, negativos,etc) se
basan justamente en la tinción Gram.

La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicial de muestras para análisis

bacteriológico, mientras que tinciones como las de Wright son utilizadas para el diagnóstico
de enfermedades relacionadas con parasitos. Existen otras técnicas tintoriales específicas
de gran utilidad, como la tinción de Ziehl-Neelsen, que se utiliza para el diagnóstico de
bacilos ácido alcohol resistentes, o la tinción de azul de lactofenol, que conserva y tiñe los
componentes estructurales de los hongos. En general, las diferentes tinciones que se
utilizan en el laboratorio de microbiología, son técnicas sencillas, rápidas y que aportan

10
información fundamental para el diagnóstico y procedimiento terapéutico oportuno de
múltiples patologías de origen infeccioso (Castelletto & Manzo, 2018)

Las coloraciones o tinciones en microbiología se constituyen en el primer paso del proceso

del análisis en el laboratorio para la identificación presuntiva de agentes infecciosos. En el
análisis microbiológico, el microscopio es la principal herramienta que se utiliza de forma
rutinaria, por cuanto suministra información sobre la morfología, asociación y afinidad por
la o las coloraciones para la identificación presuntiva o definitiva de los microorganismos.
(Ramírez & Caycedo, 2019)

La utilización de los colorantes en los procesos de identificación en microbiología se

fundamenta en las propiedades fisicoquímicas de estas sustancias. En el campo de la
física, la óptica explica cómo todos los objetos son observables dependiendo de las
longitudes de onda que se absorben y se transmiten dentro del denominado “espectro
visible”. Dichas transiciones se deben, a su vez, a los compuestos químicos y a los
movimientos electrónicos dentro de los átomos. Así mismo, cuando interacciona un
colorante con una célula o un tejido, ocurren reacciones que dependen de grupos químicos
funcionales denominados cromóforos y auxocromos. Dependiendo de los compuestos
químicos que los constituyen, los colorantes pueden ser ácidos, básicos o neutros y esta
connotación se debe a la parte activa del colorante y a la reacción que ocasiona sobre las
células microbianas. De otra parte, las tinciones en microbiología pueden ser simples o
diferenciales, dependiendo si toda la muestra se tiñe de uno o más colorantes. En el primer
caso se encuentra el ejemplo de la coloración con azul de lactofenol y en el segundo, la
coloración de Gram. (Ramírez & Caycedo, 2019)

Los colorantes son sustancias que tienen la capacidad de teñir células, estructuras o tejidos;
y de acuerdo con su origen, permiten hacer visibles los objetos microscópicos y
transparentes, conocer su forma y tamaño, así como sus estructuras internas y externas.
Los colorantes hacen parte de reacciones químicas específicas y de acuerdo con su origen,
se pueden clasificar en naturales, aquellos que son extraídos de plantas o animales, y
artificiales, los que se extraen de minerales y son procesados en el laboratorio. En cuanto
a su estructura química los colorantes están constituidos por un grupo funcional cromóforo
y un auxocromo. (Ramírez & Caycedo, 2019)

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 DESARROLLO EXPERIMENTAL
Materiales, reactivos y equipos de laboratorios
Materiales
Portaobjetos. Cubreobjetos. Es una
Los portaobjetos son placa en forma
finas láminas de vidrio cuadrada o rectangular
sobre las cuales se muy delgada que se
colocan las muestras o coloca sobre la
preparaciones que muestra y el
posteriormente se portaobjeto. Sirve
pretenden analizar y para fijar la muestra y
observar con un evitar que se mueva
microscopio. Sirve fuera del alcance de
para fijar la muestra y nuestra observación.
evitar que se mueva
fuera del alcance de
nuestra observación.
Mechero. Asas bacteriológicas.

Lens paper. Es papel Pipetas pasteur.

óptico para no rayar la
lente del microscopio

12
Piceta. Espátula.

Pinzas portaobjetos. Pinzas de disección.

Las pinzas de disección
o las pinzas para
portaobjetos son más
específicas de
los laboratorios de
biología o de medicina.
Sirven para coger o
sujetar objetos que se
emplean durante la
disección.
Perillas. La pera de Pepitas 5ml.
succión, perita
o perilla de goma es un
aparato que se utiliza en
los laboratorios con el
fin de succionar un
líquido. Se suele
utilizar para las pipetas
y para los cuentagotas.
Vasos pp 50ml. Probetas.

13
14
 Reactivos

Agua. Alcohol

Cristal violeta. Safranina. La colorante

El cristal safranina O es comúnmente
violeta forma parte utilizado para teñir tejidos
de los biológicos, y sirve como
componentes del herramienta en la detección
método de la de estructuras en células
coloración de eucariontes y pro- cariontes.
Gram. Este permite
clasificar las
bacterias como
bacterias Gram
positivas, o
bacterias Gram
negativas. Así, su
estructura celular
retiene el colorante,
tiñendo a la
bacteria de
morado. Este es el
caso de las
bacterias Gram
positivas.

15
Lugol. Este Verde malaquita. Se
producto se emplea emplea para tinciones de
frecuentemente rutina en bacteriología,
como desinfectante como p. ej. la tinción de
y esporas según Rakette
antiséptico, para la (tinción diferenciada de
desinfección de esporas
agua en con verde de malaquita en
emergencias y muestras bacteriológicas).
como un El colorante se une a las
reactivo para la estructuras objetivo en una
prueba del yodo en tinción en caliente.
análisis médicos y
de laboratorio.
Aceite de Cultivos líquidos de
inmersión. bacillus.
El aceite de
inmersión es un
líquido viscoso y
transparente que
tiene un alto índice
refractivo. Por este
motivo es muy
utilizado en las
observaciones
microscópicas, ya
que brinda la
propiedad de
concentrar la luz
cuando esta pasa a
través del objetivo
de 100X del
microscopio,
aumentando su

16
poder de
resolución.
Cultivos puros de
Gram + y Gram-

17
Equipo
Microscopio. El microscopio nos permite
observar especímenes invisibles al ojo
humano, en el laboratorio de Biología se
utiliza el microscopio compuesto u óptico.

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METODOLOGIA EN DIAGRAMA DE BLOQUES
Secuencia experimental
Preparación de un frotis en seco.

Preparación de un frotis en seco

Sobre un portaobjetos previamente lavado y

enjuagado con agua destilada, colocar una
gota de agua, tomar una azada del cultivo
bacteriano y homogenizarlo sobre la gota de
agua, pasarlo sobre la flama del mechero
hasta que a la muestra se le evapore toda el
agua. Cubrir la muestra con una gota de
colorante y ponerle un cubreobjetos.

19
Tinción GRAM

Tinción Gram

Cubrir con cristal violeta durante 1 minuto.

Lavar con agua.

Cubrir con lugol durante un minuto. Lavar

con agua

Decolorar con acetona alcohol durante 20 a

30 segundos. Añadir inmediatamente agua
para evitar el arrastre completo de todo el
colorante.

Tratar durante 20 segundos con safranina.

Lavar con agua abundante, secar al aire y

observar en objetivo de 10 X 40 X y de
inmersión (100x).

Las bacterias Gram negativas adquirirán

color rojo de la safranina mientras que las
Gram positivas continuarán con el color
azul o morado del cristal violeta.
20
Tinción de esporas (Wirtz-Conklin)

Tinción de esporas (Wirtz-Conklin)

Se emplearán cultivos en fase estacionaria para dar

lugar a que las bacterias produzcan las esporas. Esta
tinción es delicada en su realización y para poder
obtener unos resultados satisfactorios hay que seguir
cuidadosamente las instrucciones.

Preparar los frotis bacterianos indicados.

Teñir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera

colocar la muestra encima de la llama del mechero de
forma que el colorante humee durante 5 min.

Nota: evitar que la muestra hierva.

Añadir más colorante si éste se
evapora; es importante que la muestra
no se seque.

21
Lavar con abundante agua el exceso de
colorante.

Teñir con safranina 1 min.

Lavar con abundante agua el exceso de

colorante.

Secar la preparación.

Observar la preparación al microscopio.

Anotar la disposición y la morfología de las
tres especies del género Bacillus.

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CUESTIONARIO
1. ¿Por qué las bacterias Gram positivo de cultivos viejos, algunas veces cambian a
Gram negativo?

Stearn (1923) basó la suya en una combinación química entre el colorante y las proteínas
de las bacterias, las proteínas y aminoácidos son cuerpos anfóteros, esto es, tienen la
facultad de reaccionar con ácidos y con bases, gracias a sus grupos amino y carboxilo; en
soluciones ácidas, reaccionan con los ácidos, y en soluciones alcalinas lo hacen con las
bases. De igual manera, comprobaron que la reacción de tinción de las bacterias obedece
en gran parte a su contenido proteínico; estos microorganismos se conducen como cuerpos
anfóteros, al combinarse con colorantes ácidos en soluciones ácidas y con los básicos en
medio alcalino. La combinación con ambos tipos de colorante no se produce en el punto
isoeléctrico. Como los microorganismos contienen más de una proteína, ese punto no
tiene un valor preciso y definido, sino que constituye más bien una gama o escala que
comprende dos o tres unidades de pH.

Por consiguiente, se concluye que:

 Los microorganismos gran positivos pueden hacerse gram negativos al aumentar la

acidez
 Los microorganismos gran negativos pueden hacerse gram positivos al aumentar su
alcalinidad

Por ende, dependiendo que tan ácido sea el medio de cultivo, al envejecer se hace básico
y viceversa, por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias grampositivas pierden la
propiedad de retener el cristal violeta y, en consecuencia, se tiñen por la safranina
apareciendo como gramnegativas. Análogo efecto se produce en ocasiones por cambio en
el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en la ejecución de la técnica. Por este
motivo, es preciso atenerse, en la práctica, al procedimiento establecido. (Jácome, y otros,
2013)

2. ¿Por qué son más difíciles de colorear las esporas que las células vegetativas?

Son más difíciles de colorear porque las esporas poseen una capa gruesa de proteína
alrededor de la membrana exterior; que es impermeable resistente a muchos productos
químicos agresivos

23
3. ¿En qué difiere la formación de esporas entre las bacterias y la esporulación en
los hongos y levaduras?

Una espora bacteriana es la cubierta dura y está rodeada de membranas que rodean al
material genético. Luego, en torno a esta célula más pequeña, se forma una cubierta de
dos capas. Finalmente, la espora es liberada en un estado protegido e inactivo.

Los hongos por su parte también producen esporas, pero éstas, a diferencia de las
bacterias, son una forma de reproducción y se parece más a una semilla que a una
estructura de protección. (UNAM, s.f.)

4. ¿Es la esporulación un proceso para aumentar el número bacteriano?

No, porque, aunque la esporulación es un proceso de reproducción asexual en diversos

tipos de géneros de bacterias y microorganismos, dentro de un cultivo no puede aumentar
el número de bacterias presentes.

5. ¿Qué razones han sido propuestas para explicar por qué las esporas son más
resistentes a las condiciones adversas del medio ambiente que las mismas
bacterias que les han dado origen?

La resistencia de una endospora se puede explicar en parte por su estructura celular

particular. La capa proteica externa que rodea la espora proporciona mucha de la
resistencia química y enzimática. (CALS, s.f.)

 Debajo de la capa reside una capa muy gruesa de peptidoglicano especializada

llamada la corteza. La formación apropiada de la corteza es necesaria para la
deshidratación de la base de la espora, que ayuda en resistencia contra temperaturas
altas.
 La pared celular de germen reside debajo de la corteza. Esta capa de peptidoglicano
será convertida en la pared de célula de la bacteria después de que la endospora
germine.
 La membrana interna, debajo de la pared de célula de germen, es una barrera
importante de permeabilidad contra varios productos químicos potencialmente
perjudiciales.
 El centro de la endospora, la corteza, existe en un estado muy deshidratado y contiene
la ADN de la célula, los ribosomas y las cantidades grandes de ácido dipicolinico. Este

24
 producto químico puede abarcar hasta 10% del peso seco de la espora y aparece
desempeñar un papel en inactividad de la espora que mantiene.
 Las proteínas solubles en el ácido pequeñas (SASPs) también se encuentran
solamente en endosporas. Estas proteínas atan y condensan la ADN, y están
firmemente responsable por resistencia contra la luz UV y a los productos químicos
ADN dañinos.
 Otras estructuras y productos químicos se asociaron a las endosporas incluyen tallos,
toxinas de cristal, o una capa externa adicional de la glicoproteína llamada el exosporo.

25
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
La posición y la morfología de la endospora en el interior de la bacteria constituyen un
carácter taxonómico útil para diferenciar especies dentro de un mismo género. Las tres
bacterias empleadas en esta práctica difieren en la disposición y morfología de las
endosporas. B. sphaericus posee una endospora esférica con localización terminal y
deformante de la célula vegetativa, por lo que suele ser denominada "en palillo de
tambor". B. thuringiensis tiene localizada la endospora elipsoidal en el centro de la célula
vegetativa, lo que provoca un abombamiento característico denominado "en huso". B.
subtilis forma una espora cilíndrica subterminal no deformante.

26
Bibliografía
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Sciences, Departament of Microbiology:
https://micro.cornell.edu/research/epulopiscium/espanol/endospora-de-bacterias/

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Mélendez, R. C., E. C., C. C., & O. S. (2020). Las tintaciones básicas en el laboratorio de
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UNAM. (s.f.). Estructuras de Resistencia de Algunos Microbios. Microbios resistentes.

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28