Universidad Nacional del Centro del Perú

Facultad de Ingeniería Química

Escuela Profesional Ingeniería Química

ANALISIS DEL DISEÑO SE EVALUACIÓN DE

PARÁMETROS CINÉTICOS PARA LA SACHAROMYCES
CEREVISIAE UTILIZANDO AGUA DE COCO COMO
SUSTRATO

CÁTEDRA:
MODELAMIENTO Y SIMULACION DE PROCESOS

CATEDRÁTICO:
GUEVARA YANQUI, PASCUAL VICTOR

Alumna:
HUAROC PEÑA Geraldine Yuliana

HUANCAYO 2021
 EVALUACIÓN DE PARÁMETROS CINÉTICOS PARA LA SACHAROMYCES
CEREVISIAE UTILIZANDO AGUA DE COCO COMO SUSTRATO
Se uso agua de coco, como sustrato para la reproducción de la Sacharomyces cerevisiae
ELEMENTOS :
- Coco o Cocus nucifera: es un fruto está compuesto por 35 % de cáscara, 60 % de pulpa
y un 8% de agua, es comercializado por su cascara y nuez, pero el agua que contiene no
es aprovechada y se usara como sustrato.
- El agua de coco está compuesta por azúcares, proteínas, minerales y vitaminas, lo que
lo hace un buen productor de biomasa.
- Sacharomyces cerevisiae: es un hongo unicelular que se reproduce por un proceso de
gemación, es una levadura usada industrialmente en la fabricación de pan, cerveza y
vino.
Según las condiciones del crecimiento de la levadura se usará el proceso batch para un sistema
continuo
EQUIPO EXPERIMENTAL:
- Biorreactor de 5 L: Para las pruebas cinéticas, con toma de muestras, sistemas de
enfriamiento y/o calentamiento, sensores de oxígeno y pH
- Erlenmeyer de 250 mL: Para pruebas en el efecto de cada una de las variables de diseño
controlando la temperatura mediante el uso de un baño con termostato (± 1 ºC) y se
esterilizaron durante 20 min a una presión de 103,4 kPa (15 psig).
- Cámara Neubauer: De un área de 0,0025 mm² y una profundidad de 0,1 mm, para
realizar el recuento de microorganismos
- Microscopio Southern Precision: Para el recuento de microorganismos
- Sustrato: El agua de coco fresca envasada y tapada en erlenmeyers de un litro
Nutrientes: El sustrato fue enriqueció con:

Nutrientes adicionados en la formulación del medio de cultivo

Compuesto Concentración Cn, (g/L)
Fosfato de amonio 0,15
Fosfato de potasio monobásico 0,15
Sulfato de magnesio 0,12
Sulfato de zinc 0,10
Extracto de levadura 0,10
Tiamina 0,005
- Levadura: Se uso Sacharomyces cerevisiae comercial deshidratada, rehidratada antes de
usarla a una temperatura de 28 °C.
- Azúcares totales: Determinadas con el método de la antrona, con un espectrofotómetro
Jenway 6105 de una longitud de onda de 665 nm, determinaciones por triplicado
- Determinación del DQO: Se determinó el DQO antes y después del proceso de
reproducción de la levadura con el método del dicromato de potasio para cuantificar el
efecto en la carga biológica
Condiciones para el crecimiento de la Sacharomyces cerevisiae
Se realiza un diseñó un experimento de tipo factorial bloqueado por cuatro variables con mayor
influencia en el crecimiento microbiano a dos niveles
Variables fijas:
 - Tipo de ácido
- HCl
- el nivel de agitación en 90 rpm
- Concentración inicial de levadura en cuarenta millones de células por mililitro
- Tiempo del experimento en 30 h
- Temperatura en 28 °C.

Variables de diseño:

- pH: 4 y 4,5
- Fuente de nitrógeno: urea 0,75 g/L y nitrato de amonio 1,25 g/L
- Flujo de aire: se utilizaron los valores de 35 mL/s y 65 mL/s.
- Variable de respuesta: el rendimiento (Y), expresado como la razón entre la producción
de biomasa y el consumo de sustrato o azúcares totales.
Procedimiento de experimentación
1. Se uso un baño con control de temperatura con agitación, con capacidad para 9
erlenmeyers de 250 mL sujetos por abrazaderas.
2. Se prepararon 20 mL de inóculo de una determinada concentración de levadura y se
agregaron a 180 mL de medio de cultivo, con una concentración conocida de azúcares.
Para cada una de las pruebas experimentales el procedimiento fue el siguiente:
3. El inóculo se preparó tomando en un erlenmeyer 400 L del medio de cultivo y se
agregaron 0,016 g de levadura, manteniendo a 30 °C por 30 min, con agitación.
4. El medio de cultivo se dividió en dos partes iguales y se reguló el pH a cada una de las
partes, de acuerdo con los niveles de estudio.
5. En cada erlenmeyer de 250 mL, se agregaron 180 mL del medio de cultivo de
composición conocida y se ajustaron las condiciones de la fuente de nitrógeno
6. Se coloca a cada erlenmeyer un tapón de algodón y se recubrieron con papel aluminio
7. Se autoclavaron los erlenmeyers para esterilizar los medios de cultivo, para luego
enfriarlos
8. se colocaron los erlenmeyers en el baño de temperatura controlada y se agregaron 20
mL de inóculo de concentración conocida de levadura.
Seguimiento cinético

- Se obtuvo la cinética del crecimiento de la Sacharomyces cerevisiae a bajas condiciones

fijas, usando la urea como fuente de nitrógeno.
- Las pruebas se realizaron utilizando un biorreactor de 5 L tipo “batch”, adicionando 4 L
de medio de cultivo e inoculando con la levadura
- Se tomaron muestras de 5 mL cada hora para medir concentración de levaduras y
consumo de azúcares
- La temperatura se mantuvo constante a 28 °C.
- Se monitoreó el porcentaje de oxígeno disuelto, el pH y la temperatura.
- En la segunda repetición se aumentó la concentración inicial de levaduras de (50 a 70)
millones de células/mL para disminuir la duración de la fase de letargo, el seguimiento
se realizó cada hora hasta conseguir la fase estacionaria.
Cultivo continuo
Se adapto al quimiostato un tanque agitado con una suspensión de biomasa mezclada, la cual se
alimenta constantemente con un cultivo fresco
Determinación de la tasa de dilución
Al quimiostato con la variación del uso de un volumen de reacción de 2 L y un inóculo con una
concentración de 70 millones de células de levadura/mL. Se opera como un sistema “batch”,
hasta por 1 hora, después se determinan las concentraciones de biomasa y de sustrato, y se inicia
el proceso continuo.
Se toman las muestras en intervalos de 1 hora para monitorear las concentraciones de biomasa,
sustrato, oxígeno disuelto y pH, hasta alcanzar la operación en estado estacionario.
El proceso se repite nuevamente con diferentes flujos de alimentación, para tener la variación de
la concentración de biomasa y sustrato con el flujo de alimentación y relacionarse con la tasa de
dilución D.
Caracterización del agua de coco:

Composición del agua de coco: Valores por triplicado

Variable Valor
pH 6,69
Densidad, ρ (kg/m3) 1017
Azúcares totales, ST, (g/L) 4,673
Azúcares reductores, SR, (g/L) 1,50
Sólidos totales CST,(mg/mL) 54,10
Sólidos solubles, CSS, (mg/mL) 47,02
Sólidos insolubles, Cwww (mg/Ml) 3,18
Humedad, H, (%) 95,51

RESULTADOS EXPERIMENTALES
Evaluación de condiciones de operación
Los experimentos previos se realizaron usando como variables: pH, temperatura, fuente de
nitrógeno y flujo de aire a los niveles de 13,75 mL/s y 56,25 mL/s, se encontró que solo la
variable del flujo de aire es significativa y positiva.
Los experimentos en la segunda etapa experimental se realizaron a una temperatura de 28 °C y
el rendimiento promedio (X/So) obtenido fue de 0,896.

Niveles utilizados Inferior (-) Superior (+)

pH 4,0 4,5
Fuente de nitrógeno: FN2 Urea Nitrato de amonio
Concentración de nitrógeno: CN2 (g/L) 0,75 1,25
Flujo de aire: Faire (mL/s) 35 65

Distribución del Diseño:

RESULTADOS ESTADÍSTICOS:

Rendimiento promedio 0,896

Desviación estándar de los efectos e interacciones mayores 0,036
Valor de t-student para 5 g.l con un 95 % de confianza 2,571
Intervalo de no significancia para un 95 % de confianza [-0,092, +0,092]

Efectos de las interacciones.

Efect Valor de Interacción Valor de Interacción Valor de interacción

o efecto interacción superior superior
1 -0,076 1-2 0,052 1-2-3 0,040
2 0,060 1-3 -0,028 1-2-4 0,023
3 -0,010 1-4 -0,059 1-3-4 0,052
4 0,4587 2-3 0,018 2-3-4 0,033
2-4 0,082 1-2-3-4 0,020
3-4 0,012
- Para el intervalo [-0,092, +0,092] con un nivel de significancia del 95 %, solo el flujo
de aire fue significativo y positivo, entonces se usa el nivel superior.
- El valor de pH se fija en el nivel inferior para ayudar a inhibir el crecimiento de las
bacterias
- En la fuente de nitrógeno se prefiere usar urea a una concentración de 0,75 g/ mL, por
un menor costo y además que el sustrato contribuye con nitrógeno
Proceso discontinuo
Con las condiciones de operación ya fijadas, se estudiar el comportamiento cinético de la
Sacharomyces cerevisiae, para obtener parámetros cinéticos, como la velocidad específica
máxima de crecimiento, (μmáx h¯¹) y la constante de saturación Ks (g/L).
Las curvas de crecimiento para la Sacharomyces cerevisae:

- Corrida experimental del seguimiento cinético de la Sacharomyces cerevisiae a una

concentración inicial de 50 millones por mililitro.
Se observo que la fase de letargo o ajuste del microorganismo al medio de cultivo, tuvo una
duración aproximada de 4 h y la fase de crecimiento exponencial unas 21 h, la concentración de
biomasa se mantuvo constante después de las 21 h, entonces la producción de biomasa puede
suspenderse antes. Para de reducir la fase de letargo, con el crecimiento de la levadura en el
mismo medio o aumentando la concentración inicial de células, con un aumento del 40 % en la
concentración inicial de levadura en el medio de cultivo.
Los resultados muestran que la cantidad de sustrato residual (azúcares) que no fueron
metabolizados, por la disminución del sustrato provoca una reducción sustancial del DQO o
DBO, que reducen la contaminación y la facilidad de tratar residuos.

- Corrida experimental del seguimiento cinético de la S. cerevisiae a una concentración

inicial de 70 millones por mililitro

Tras alcanzar el estado estacionario, la concentración de la curva de crecimiento de levadura fue

de 4,5 g/L.
En la segunda corrida experimental hubo una disminución de 1 hora en la fase de letargo del
microorganismo con respecto al comportamiento, las curvas para la concentración de biomasa y
sustrato, se encontró que a las 16 h de operación se inició la fase estacionaria, la concentración
de azúcares totales en esta fase fue de aproximadamente de 1,13 (g/L).

- Variación de pH y porcentaje de oxígeno disuelto la corrida experimental del

seguimiento cinético con 70 millones de células S. cerevisiae por mililitro.
Se representa los valores promedios para el seguimiento del pH y el porcentaje de oxígeno
disuelto en el medio de cultivo, el pH con un valor de 4 y el porcentaje de oxígeno disuelto en el
medio de cultivo se mantuvo constante durante las primeras horas del experimento.
concordando con la fase de letargo, la demanda de oxígeno es baja por ser un proceso de
reproducción no empezó, el porcentaje de oxígeno disuelto en el medio de cultivo esta entre 65
% a 70 %, por la poca demanda del microorganismo
Parámetros cinéticos a partir de la curva de crecimiento microbiano obtenida en la segunda
corrida experimental: una temperatura de 28 °C, un tiempo de 18 h y una concentración inicial
de 70 millones de células por mililitro en el biorreactor.

Parámetro Valor
Velocidad específica máxima de crecimiento μmax (h¯¹) 0,38
Constante de saturación, Ks (g/L) 1,35
Rendimiento, Y (gramos de levadura /gramos de azúcar) 1,68
Velocidad específica ca del producto, Q (g/gh) 0,23
- El DQO inicial es de 10 032 mg/L
- El DQO final es de 5928 mg/L
- Disminución de un 41 % en la DQO

Producción de biomasa en un proceso continuo

La disminución en la concentración de biomasa según aumenta el valor de la tasa de dilución,

pasando de un valor inicial de 3,3 g/L para una tasa de dilución de cero, que corresponde a una
operación del sistema en forma “batch”, hasta una concentración de 0,2 g/L para una tasa de
dilución igual a 0,5 h¯¹
 CONCLUSIONES
1. El flujo de aire el único que presenta un efecto significativo sobre el rendimiento de
producción de biomasa.
2. Los valores del seguimiento cinético se obtuvieron un μmax de 0,38 h¯¹, Ks de 1,35
g/L, rendimiento (Y) de 1,68 g de levadura/g de azúcar y una velocidad específica de
producto (Q) de 0,23 g/g.h.
3. La producción de biomasa es practica para los procesos industriales y una alternativa
para la reducción de la contaminación, con una disminución de 41 % en el valor de la
DQO.
4. El proceso de producción de biomasa en un continuo, con una tasa de dilución mayor a
0,30 h¯¹
5. La tasa de dilución máxima debe estar entre los valores de 0,17 h¯¹ y 0,19 h¯¹ para una
buena productividad.