Biología Celular 2020 - II
Biología Celular 2020 - II
Biología Celular 2020 - II
2020 - II
Biología Celular
Prácticas de taller
Docente:
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/productos/termociclador-pcr-punto-final-veriti-de-96-pozos
SEMANA 11: EQUIPO DE DOCENTES BIOLOGÌA CELULAR 2020 II
Libros de consulta:
Diagnósticos moleculares
científica.
investigación científica.
Timina - - Adenina
Citocina - - - Guanina
Timina - - Adenina
Citocina - - - Guanina
• Objetivo: Desarrollar una técnica que permita obtener de ADN a partir de un molde.
• Árbol filogenético
obtenido a partir de
diferentes cepas de
sars-cov-2
• Área PCR
• Amplificación de la secuencia deseada mediante el uso del termociclador
• Área pos-PCR
• Análisis de los productos
• Electroforesis
¿ Qué es necesario para realizar la PCR?
1. Seleccionar la muestra a trabajar (suero, sangre, heces, orina, saliva, etc)
Tubos de PCR
Desinfectantes Guantes Micropipetas (0.6ml)
Tubos de 1.5ml
Agua
Primers
Termociclador
Programación del Termociclador
Pasos de la PCR
Tres pasos básicos
1. Desnaturalización:
Las doble cadena de ADN se separa
Aumento de T ≈ 95°C
Tiempo: 1¨
2. Alineamiento:
Los primers se unen específicamente a
cada hebra de ADN
Disminuye la T ≈ 55°C
3. Extensión:
La polimerasa sintetiza la nueva hebra,
fijando los dNTPs en dirección 5´a 3¨
Aumento de T ≈ 72°C
Desnaturación del ADN
T ≈95°C
5’ 3’
-T–A-C-G-T-A-C-G-T-A-C-G-* *
-A–T-G-C-A-T-G-C-A-T-G-C-* *
3’ 5’
Alineamiento de los primers
T ≈55°C
5’ 3’
-T- A-C-G
-A–T-G-C-A-T-G-C-A-T-G-C-*
3’ 5’
Primer o cebador: corta secuencia de nucleótidos que se van a finar a una de las hebras el ADN en sentido 5’ a 3’
Elongación de la hebra complementaria (sentido 5´a 3)
T ≈72°C 5’ 3’
-T–A-C-G-T-A-C-G-T-A-C-G-* *
-A- T-G-C Reverse
3’ 5’ primer
5’ 3’
Forward
primer -T- A-C-G
-A–T-G-C-A-T-G-C-A-T-G-C-* *
3’ 5’
• Pipeteo
• ¿Cuáles son los reactivos necesarios para llevar a cabo una PCR?
Aprendiste
• ¿Qué significa PCR?
• Es la Reacción en Cadena de la Polimerasa
• ¿Cuáles son los reactivos necesarios para llevar a cabo una PCR?
Aprendiste
Aprendiste
Aprendiste
Aprendiste
Aprendiste
Aprendiste
Aprendiste