GUIA DE LABORATORIO

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Versión: 001 Fecha: 30 DE NOV Manual de calidad
2010
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Laboratorio No 13
Tema:
RECUENTO DE RETICULOCITOS

Objetivo
• Identificar morfológicamente los reticulocitos mediante una coloración supravital y
realizar los respectivos cálculos aritméticos e interpretaciones, como ayuda diagnóstica
en diferentes identidades hematológicas.
• Realizar la determinación de reticulocitos, como medio para valorar la hematopoyesis en
un paciente.

Fundamento
Los reticulocitos o eritrocitos inmaduros son glóbulos rojos jóvenes que representa de 0.5 a
1.5% de los glóbulos rojos totales, se forma cuando se pierde el núcleo del normoblasto
ortocromático. Su tamaño varía de 10 a 15 micras de diámetro. Ellos tienen una vida media de
2 días en médula ósea, de allí salen a la circulación donde requieren de un día para
convertirse en células rojas maduras. Su nombre proviene de que contiene una red de material
basófilo: ácido ribonucleico (RNA) ribosomal y demás organelas citoplasmáticas que se
precipitan, observándose como gránulos amorfos intracelulares que se tiñen de azul profundo
con colorantes supravitales como el azul de cresil brillante, permitiendo su observación a
través del microscopio de luz. Con microscopía electrónica son fáciles de reconocer por su
superficie irregular, con invaginaciones y presencia de múltiples organelas como: mitocondrias,
pequeño número de ribosomas, remanentes del aparato de golgi y protoporfirina.

Su abundancia en la circulación periférica es un índice de la actividad eritropoyética. Así pues,

se encuentran cifras altas en los primeros días de vida, después de pérdida de sangre o
hemorragia y después de tratar la anemia carencial con sustancias específicas (vitamina B12
en la anemia perniciosa, ácido fólico con la anemia megaloblástica del sprue, o hierro en la
anemia ferropénica por la deficiencia de hierro). En general, la intensidad de la respuesta
reticulocitaria en estas condiciones es directamente proporcional a la gravedad de la anemia.

Coloreado con Wright, el reticulocito se identifica por su basofilia difusa llamada

policromatofilia y por poseer un tamaño ligeramente más grande que el eritrocito maduro.
Miale 1, reconoce cuatro estadios del reticulocito clasificados de acuerdo al grado de madurez;
a mayor cantidad de sustancias reticulofilamentosas menor madurez. La célula debe poseer al
menos dos gránulos de precipitado bien definidos y separados de la membrana para
considerarlo como reticulocito.
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Para calcular Reticulocitos relativo y absoluto los datos requeridos son:

Recuento de Reticulocitos relativo

1000 células 100%

# de reticulocitos x
contados

Reticulocitos en %

Recuento de Reticulocitos absoluto

1000 Glóbulos rojos % de reticulocitos

RBC/ml X
Ejemplo:

1. 2.700.000/ml
2. 8%
3. 1000 GR

1000 glóbulos rojos 8% de reticulocitos

2.700.000 RBC/ ml X

X: 21.600/ml

♦ Valores normales: 40.000 y 70.000 / ml

♦ Este valor es importante en las anemias hemolíticas y en pacientes con tratamiento de
anemias carenciales.

Porcentaje de reticulocitos corregido

Tiene por objeto establecer los reticulocitos reales teniendo en cuenta la concentración de
células rojas en sangre periférica, ya que la volemia del paciente afecta su número. En otras
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palabras esta corrección debe hacerse cuando se encuentra un hematocrito por debajo del
establecido como normal, aplicando la siguiente fórmula:

% de reticulocitos corregido = % de reticulocitos x hematocrito del paciente

-------------------------------------------------------------
Hematocrito normal

Se acoge un valor medio del hematocrito para hombres de 45% y para mujeres del 42%

Otra forma de corrección a partir del dato de Hb:

Se tiene en cuenta que solo se realiza si la Hemoglobina es menor de 11g/dl. Constituye un índice indirecto de
la eritropoyesis en médula ósea y son de gran valor para:

*Conocer la eficacia de la eritropoyesis

*Clasificar las anemias en regenerativas o arregenerativas
*Conocer lo antes posible, la eficacia de un tratamiento con Hierro, Vitamina B12 y Acido Fólico.
Para calcular los reticulocitos corregidos, se tienen valores ideales de Hb para:

Hombres: 15 g/dl
Mujeres: 14 g/dl
Niños: 12 g/dl

Fórmula:

1. Hb del paciente Hb del paciente x % de reticulocitos

2. Reticulocitos en % _____________________________
3. Hb ideal
Hb ideal

Ejemplo: (hombre)

1. Hb: 8 g/dl 8 g/dL x 8%

2. Ret: 8% ____________ = 4.26%
3. Hb ideal: 15 g/dl
15 g/dL

Tomando este valor se puede hallar el Indice de Reticulocitos, el cual indica el índice de eritropoyesis en
médula ósea. Con el valor de los reticulocitos corregidos los relacionamos con un factor de corrección, para
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saber si la respuesta medular compensa la destrucción:

Hemoglobina g/dl Factor de corrección

10-11 1.5
7-9 2.0
menor de 7 2.5

Hematocrito Tiempo de maduración en SP

45% 1 día
35% 1,5 días
25% 2 días
15% 2,5 días

% de Reticulocitos x Hto del paciente

Periodo de maduración en días x Hto normal

Valor de la eritropoyesis:
0-1 Hipoproliferativa
1-2 Normoproliferativa
3 o mayor Hiperproliferativa

Observaciones

• El recuento se puede efectuar en sangre capilar

• Se recomienda repetir el conteo cuando se obtienen valores por encima del 3%
• Los extendidos coloreados pueden guardarse por 24 horas sin afectar los resultados
• La relación sangre/colorante no tiene que ser exactamente igual. Para mejores resultados use una mayor
proporción de sangre cuando el paciente tenga un hematocrito bajo. Añada una menor cantidad de muestra
cuando el hematocrito sea inusualmente alto
• El tiempo de coloración de los reticulocitos no es crítico, pero no debe ser menor de 10 minutos
• La presencia de altos niveles de glucosa en sangre y el uso de heparina como anticoagulante pueden
producir, en los reticulocitos, una coloración pálida.
• Es extremadamente importante que la sangre y el colorante se mezclen bien antes de realizar los extendidos.

VALORES DE REFERENCIA
• Valor relativo:
Hombres: 1.6 + 0.5%
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Mujeres 1.4+ 0.5

Recién nacidos: 2.6 - 6.5%, (en 2 semanas es igual al adulto)

Interpretación

El conteo de reticulocitos es una herramienta diagnóstica importante puesto que es el reflejo de la cantidad de
células rojas efectivas viables que se producen en la médula ósea. Su utilidad real es conocer la capacidad de
respuesta de la médula en aquellos casos en los cuales hay disminución de las células en sangre periférica y
es necesario que la médula aumente su producción para así compensar el déficit de dichas células. Esta
información es de fundamental importancia en el diagnóstico de anemias por falla en la producción (anemia
aplásica) o por aumento en la destrucción (anemia hemolítica).

Cuando se altera la duración del estadio reticulocitario en médula ósea, específicamente en las anemias
severas, se emplean otras herramientas de laboratorio para evaluar la producción de eritrocitos a saber.

RECUENTO DE RETICULOCITOS POR CITOMETRIA DE FLUJO

A pesar de la gran utilidad clínica del recuento de reticulocitos, la prueba por el método manual ha venido
perdiendo vigencia debido a múltiples factores que incluyen variaciones en las coloraciones, error por
distribución en los extendidos, errores estadísticos en la muestra extendida y amplia variabilidad entre
observadores, aún experimentados.

El recuento de reticulocitos por citometría de flujo tiene un coeficiente de variación que oscila entre 1,3 y 6,4%
debido a que cuenta 30.000 eritrocitos mientras el método manual tiene un coeficiente de variación hasta de
un 50%, cuando se cuentan 1.000 eritrocitos. Además de su exactitud, la citometría de flujo permite identificar
las subpoblaciones de reticulocitos bajo un nuevo parámetro: el índice de maduración de los reticulocitos.

Limitaciones de la prueba

A parte del alto coeficiente de variación de los métodos manuales, el recuento con contadores de células
pueden dar resultados falsamente elevados en pacientes con leucemia linfoide aguda, pacientes con cuerpos
de Howell-Jolly, pacientes con parásitos y con plaquetas gigantes.

Aunque la tecnología automatizada para recuento de reticulocitos esta disponible en el mercado, el factor
costo hace prohibitiva la compra de este instrumento. Así el recuento manual de reticulocitos continua siendo
una práctica común en los laboratorios hematológicos

Materiales y Equipos
Item Tipo Descripción
01 MAT Tubos de ensayo
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02 MAT Pipeta Pasteur o gotero

03 MAT Portaobjetos limpios

04 MAT Sangre venosa con EDTA

05 EQU Baño María a 37° C o incubadora

06 EQU Microscopio

Reactivos
Ítem Descripción
01 Aceite de inmersión

02 Colorante azul de cresilo brillante

03 Solución limpiadora

04 Preparar el colorante de acuerdo a las siguientes indicaciones:

Se recomienda la siguiente técnica:

Azul de cresilo brillante (hidrosoluble) 1.0g

Citrato de sodio 0.4g
Cloruro de sodio al 0.85 por 100,
Solución acuosa. 100ml

05 Se disuelve el colorante en la solución salina, se añade el citrato de sodio, se

mezcla y se filtra antes del uso . En lugar del azul de cresilo brillante, puede
emplearse un gramo de azul de metileno fresco que quizá de resultado más
uniforme. Los distintos lotes de azul de cresilo brillante pueden variar respecto a su
poder de tinción de reticulocitos.

Procedimiento
Paso
1 Coloque en el tubo de ensayo dos gotas de sangre previamente mezclada.
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2. Agregue dos gotas de colorante azul de cresil brillante (filtrado) y mezcle

suavemente.
3. Incube en el baño de María a 37oC durante 10 a 15 minutos. Al finalizar este
tiempo mezcle bien el contenido del tubo.
4. Realice un extendido en lámina un poco más delgado y deje secar al ambiente
5. Coloque el extendido sobre la platina del microscopio y enfoque en bajo poder
(10x) para localizar el área donde los glóbulos rojos no estén superpuestos.

6. Pase al objetivo de 100x cuidadosamente y agregue una gota de aceite de

2 inmersión.
7. Inicie el conteo. Las células rojas toman una coloración grisácea verdosa. El RNA
presente en los reticulocitos se colorea de azul intenso. El retículo puede ser
abundante o escaso dependiendo del estado de desarrollo de la célula. El más joven
muestra mayor cantidad de RNA.
8. Busque el área más adecuado para realizar el recuento, donde los glóbulos rojos
estén separados y se tengan 100 hematies por campo, se cuentan los reticulocitos
encontrados en diez campos microscópicos observados.

3 CÁLCULOS

Reticulocitos en %: Número de reticulocitos contados

------------------------------------------------------- x 100
Número de Hematies contados 1000

Consulta

1. Defina y dibuje un campo microscópico con y sin reticulocitos

2. Porque debe realizarse de sangre total y a partir de un tiempo cortó después de la
extracción de la sangre.
3. Que se entiende por desviación reticulocitaria
4. Informe los resultados obtenidos en la clase, realice con este resultado una
corrección de reticulocitos para un paciente con un hematocrito de 30% y halle el
IPR
5. Es normal encontrar reticulocitos en sangre periférica, justifique su respuesta.
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6. Determine lo siguientes valores en los casos clínicos, clasifique la anemia, cuál

sería la fisiopatología de dichos casos, evalúe la medula ósea , corrija los GB:
a. Paciente de 4 años
RBC: 3,53x10/L, HB: 10.8g/l, Hto: 29,2%, VCM: 82,7 fL, HCM: 30,7 pg , CHCM:
37,1 g/dl, RDW: 14,8%, SP: policromatofilia: ++, Esferocitos: +++, Recuento de
reticulocitos: 7,5, Recuento absoluto: ?, % corregido: ?, IPR:?

b. Paciente de 12 años
RBW: 23.000 mm3, RBC: 2,26x10/L, HB: 7.2g/l, Hto: 21,2%, VCM: 93,8 fL, HCM:
31,8 pg , CHCM: 33,9 g/dl, RDW: 17,1%, SP: policromatofilia: ++, Drepanocitos: +
++, Dianocito., Eritroblastos: 11/100 leucocitos , Recuento de reticulocitos:
14,2%, Recuento absoluto: ? , % corregido: ?, IPR:?
Bibliografía
BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones. Editorial
Universidad de Antioquia. Medellín, Antioquia 2003.

VIVES J.L. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología. Editorial Salvat.

TURGEON, M. Hematología clínica. Teoría y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno. 2006
ANEXOS
No. Anexo Descripción
NO APLICA