MATRIZ DE LA MUESTRA

Capítulo 7
La palabra matriz (matrix, in English)
se usa para referirse a todo lo que
Efectos de matriz acompaña al analito en la muestra
La matriz puede tener un efecto considerable en la
manera como se realiza el análisis y en la calidad de
los resultados obtenidos; tales efectos se conocen
como efectos de matriz. Por ejemplo, la fuerza
iónica de la solución puede tener un efecto sobre los
coeficientes de actividad de los analitos
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“EFECTOS DE MATRIZ” “EFECTOS DE MATRIZ”

DISMINUCION O AUMENTO DE LA SEÑAL ANALITICA DEBIDO A Disminucion o aumento de la señal analitica debido a la
LA PRESENCIA DE OTROS COMPONENTES EN LA MUESTRA presencia de otros componentes en la muestra

Método “regular” de calibración: Ni que uno se

Método “regular” de calibración: dedicara a analizar
El instrumento se calibra con soluciones standard que contienen solo agua destilada…
el analito
El método es aceptable
El método es aceptable solamente si esta solución del analito solamente si esta solución
produce la misma señal instrumental que soluciones de la muestra del analito produce la misma
que contenga la misma concentración del analito señal instrumental que
soluciones de la muestra que
Cuando se utilizan soluciones “puras” del analito para establecer la
contenga la misma
grafica de calibración, se asume que no hay “efectos de matriz”
concentración del analito
Con frecuencia, tal asunción no es aceptable en muchas áreas de
análisis
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3 4

1
 EL PROBLEMA DEL “EFECTO DE MATRIZ”

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EL PROBLEMA DEL “EFECTO DE MATRIZ” METODO DE ADICION DE STANDARD

* IMPLEMENTACION *
Posibles soluciones:
➢ Se toman volúmenes iguales de solución problema
Preparar estándares de calibración que sean idénticos a la muestra ➢ Todas salvo una son “tratadas” (“dopadas”) por
problema en todo aspecto excepto en la concentración del analito separado mediante la adición de cantidades
(método de estándar con “ajuste de matriz” −matrix matching−) conocidas e incrementales del analito
Esta estrategia rara vez resulta practicable ➢ Todas se diluyen al mismo volumen
➢ Se mide la señal instrumental producida por
Preparar estándares de calibración que contengan la propia muestra cada una de estas soluciones
en una proporción fija y conocida
➢ Como de costumbre, la señal se presenta en el eje
(método de “adiciones (de) estándar”)
y, mientras que en el eje x se presenta la
cantidad de analito añadida
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7 8

2
 EXPERIMENTO DE ADICIÓN DE STANDARD
EXPERIMENTO DE
ADICIÓN DE
ESTÁNDAR

Suponga que la solución

stock del estándar es
0.200 M en analito. Al
final del procedimiento,
el matraz 1 no contiene
estándar añadido. El
matraz 2 contiene
0.0200 M (i.e., 5.00 mL
diluídos a 50.0 mL). Los
matraces 3, 4 y 5
contienen 0.0400,
0.0600 y 0.0800 M,
respectivamente

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9 10

METODO DE ADICION DE STANDARD

METODO DE ADICION DE STANDARD
* CURVA Y CALCULOS *
Cuando se
a implementa el método
xE = de adición de
b
standard, es
conveniente utilizar la
señal corregida o a
xE =
2 neta (la señal del b
sR 1 y analito después de
s xE = +
a b n b 2 S xx substraer la señal del
blanco)

El tamaño del error sistemático (en la concentración

determinada por extrapolación) depende del tamaño de
la señal del blanco.
11 12

11 12

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 Ejemplo.- La concentración de plata en una muestra de desechos fotográficos se determino por espectrometría de
absorción atómica (EAA) con el método de adiciones de estándar. Se obtuvieron los siguientes resultados: METODO DE ADICION DE STANDARD
Ag adicionada, mg por mL
de solucion original
Absorbancia
0 5 10 15 20 25 30
0.32 0.41 0.52 0.60 0.70 0.77 0.89
* DESVENTAJAS *
Determine la concentración de plata en la muestra y sus limites de confianza al 95%

xi yi xi-x (xi-x)2 yi-y (yi-y)2 (xi-x)(yi-y)

Requiere cantidades de muestra mas grandes
0 0.32 -15 225 -0.2814 7.919E-2 4.221
5
10
0.41
0.52
-10
-5
100
25
-0.1914
-0.0814
3.663E-2
6.626E-3
1.914
0.407
que el método “regular” de calibración
15 0.60 0 0 -0.0014 1.960E-6 0
20 0.70 5 25 0.0986 9.722E-3 0.493
25 0.77 10 100 0.1686 2.843E-2 1.686
30 0.89 15 225 0.2886 8.329E-2 4.329
105 4.21 0 700 0 0.2439 13.05
Estadísticamente, su principal desventaja
S xx = 700
x = 15 a = 0.3216
y = 0.601 b = 0.01864 sR = 0.01093 consiste en ser un método de extrapolación,
a 0.3216
xE = =
b 0.01864
= 17.259 por lo tanto menos preciso que las técnicas
t = 2.57(95%, f = 5)

sR 1 y
2
0.01093 1 0.6012
xE = 17.3  2.0 mg/mL
de interpolación
s xE = + = +
b n b 2 S xx 0.01864 7 0.018642 700
13 14

13 14

CALIBRACION (normal) vs ADICION DE

ESTANDAR EFECTO DE MATRIZ Y METODO DE ADICION DE STANDARD

Uno no debe “embarcarse” en el esfuerzo extra de las adiciones de

estándar a menos que se tenga evidencia solida de la presencia de
efectos de matriz
La ausencia de efectos de matriz conlleva a pendientes (sensibilidades
instrumentales) estadísticamente iguales por ambos métodos
Cualquier diferencia entre los dos métodos puede chequearse mediante
una prueba de significación:
Ho: Las pendientes de las dos líneas no son diferentes b1 NO  b2
H1: las pendientes de las dos líneas son diferentes b1  b2
b1 − b2 f 1 s R2 1 + f 2 s R2 2
tcalc = sR =
1 1 f1 + f 2 Adición de standard para dos muestras con la misma
sR +
S xx1 S xx 2 concentración del analito. La muestra con la pendiente
f1 = n1 − 2 f 2 = n2 − 2
mayor tiene una matriz que incrementa la señal.
tcrit para (f1+f2) grados de libertad 15 16

15 16

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 EJERCICIO DE TALLER.-
METODO DE ADICION DE ESTANDAR
Y QUE ES UN ESTANDAR INTERNO?
Un compuesto estructuralmente relacionado con el analito que se
Calcular la concentración de benceno (en mg por L de muestra), basándose en los
incorpora en una cantidad fija a la muestra y a los estándares de
trabajo
siguientes datos cromatográficos LC (corregidos por el método del estándar
interno):
La señal analitica es el cociente de la altura (o área) del pico sobre aquella
Volúmenes utilizados, ml del estándar interno
⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ ESTANDAR
Muestra 20.0 mM benceno fase móvil area del pico, QUE?
(diluyente) corregida
⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯
20.0 0.00 30.0 41.4
20.0 5.00 25.0 57.6
⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯
Peso molecular del benceno: 78.11 g/mol

Nota: obsérvese que en este caso solo se usa un “dopaje” de la muestra con
solución estándar de benceno. Que hay de malo en ello? Rpta.: 1.00 mg/L

Recordar que… A  C  A = kC 17 18

17 18

STANDARD INTERNO STANDARD INTERNO

La idea detrás de un estándar interno es que durante el

análisis las moléculas del estándar interno se Ejemplo: En MS, un análogo del analito que sea
comportan de manera similar a aquellas del analito estable e isotópicamente marcado

De esta manera, se El marcaje implica la preparación de analito en

reducen LAS
la que se incorpora uno o mas átomos de 2H, 13C
INCERTIDUMBRES
O 15N
relacionadas con la
preparación de la
muestra y su Se asume que durante el análisis MS las
introducción en el moléculas marcadas realizan el mismo recorrido
instrumento que las moléculas del analito
19 20

19 20

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 EJEMPLO: ADICION DE ESTANDAR
EJEMPLO: CALIBRACION “REGULAR”
DETERMINACION DE ACIDO ASCORBICO
DETERMINACION DE ACIDO ASCORBICO added conc., ppm abs., AU
0.0 0.373 X Variable 1 Line Fit Plot
conc., ppm abs., AU sample signal
5.0 0.452
10.0 0.145 0.610 X Variable 1 Line Fit Plot
10.0 0.513
20.0 0.435 0.7
15.0 0.571
30.0 0.814 1.6 0.6
20.0 0.622
40.0 1.152
1.4 0.5
50.0 1.419
1.2 0.4

Y
SUMMARY OUTPUT 0.3
1
SUMMARY OUTPUT 0.2
0.8
Y

Regression Statistics 0.1

0.6 Multiple R 0.996525837
Regression Statistics 0
Multiple R 0.998482153 0.4 R Square 0.993063744
0.0 10.0 20.0 30.0
R Square 0.996966611 0.2 Adjusted R Square 0.990751658
Standard Error 0.009414528 X Variable 1
Adjusted R Square 0.995955481 0
Standard Error 0.032881099 Observations 5
0.0 20.0 40.0 60.0
Observations 5
X Variable 1 ANOVA
ANOVA df SS MS F Significance F
df SS MS F Significance F Regression 1 0.0380689 0.0380689 429.5099662 0.000245687
Regression 1 1.0660225 1.0660225 985.9927547 7.09703E-05 Residual 3 0.0002659 8.86333E-05
Residual 3 0.0032435 0.001081167 Total 4 0.0383348
Total 4 1.069266
Coefficients Standard Error t Stat P-value Lower 95% Upper 95%
Coefficients Standard Error t Stat P-value Lower 95% Upper 95% Intercept 0.3828 0.007292462 52.49256112 1.52269E-05 0.35959211 0.40600789
Intercept -0.1865 0.034485987 -5.40799361 0.012397364 -0.296249906 -0.076750094 X Variable 1 0.01234 0.000595427 20.72462222 0.000245687 0.010445084 0.014234916
X Variable 1 0.03265 0.001039792 31.40052157 7.09703E-05 0.029340916 0.035959084

X Variable 1 Residual Plot

X Variable 1 Residual Plot
RESIDUAL OUTPUT
RESIDUAL OUTPUT 0.01

Residuals
0.05
Observation Predicted Y Residuals 0
Residuals

Observation Predicted Y Residuals 1 0.3828 -0.0098 -0.01 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0
0
1 0.14 0.005 2 0.4445 0.0075
0.0 20.0 40.0 60.0 -0.02
2 0.4665 -0.0315 3 0.5062 0.0068
-0.05 4 0.5679 0.0031 X Variable 1
3 0.793 0.021
4 1.1195 0.0325 X Variable 1 5 0.6296 -0.0076
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5 1.446 -0.027

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EJERCICIO DE TALLER
CALIBRACION vs ADICION DE STANDARD
0.3054 g (s=0.9 mg) de una muestra de mineral ferroso se somete a digestión ácida, con lo cual la muestra
SUMMARY STATISTICS se disuelve completamente. La solución resultante se transfiere cuantitativamente a un matraz volumétrico
REG-CAL STD ADTN de 100 mL (s = 0. 5 mL) y se enrasa con agua desionizada. Se utilizó un método de absorción atómica para
n 5 5 llevar a cabo la cuantificación. Se tomaron varias muestras de 10 mL (%RSD = 0.35%) de esta solución y a
cada una se le añadió un volumen de solución estándar de aluminio de 10.00 ppm (mg/mL). Se usó entonces
r 0.998482 0.9965258
agua desionizada para llevar el volumen total de cada solución a 50 mL (%RSD = 0.25%). Estas soluciones
sR 0.032881 0.0094145
produjeron lecturas de absorbancia (unidades para la señal analítica en la técnica de absorción atómica)
mean x 30 10 como se describe a continuación.
mean y 0.793 0.5062
x = 6.00 y = 0.0823
S xx 1000 250 Matraz No.
Aluminio añadido, mg
por mL de solución de Absorbancia

S yy 1.069266 0.0383348
trabajo
S yy = 0.00282
S xx = 112
a -0.1865 0.3828
S xy = 0.5618
1 0 0.0524

sa 0.034486 0.0072925
2 2 0.0618
b 0.03265 0.01234
3 4 0.0728
sb 0.00104 0.0005954 Determinar la concentración de aluminio como
4 6 0.0822
x 0 or x E 24.4 31.0 porcentaje de Al2O3 en la muestra, así como su
5 8 0.0922 desviación estándar. Redondee sus respuestas con
s x0 or s xE 1.1 2.0
el número apropiado de cifras significativas.
%RSD 4.6 6.5 23
6 10 0.1027
24
7 12 0.1123

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