OBJETIVOS  
 
 Reconocer e
identificar la morfología, características y la clasificación de las
bacterias nombradas en el video de YouTube con el fin de adquirir
nuevos conocimientos para un mejor manejo en los experimentos.  
 Saber aplicar el proceso de tinción de Gram en las bacterias
utilizadas en la elaboración del yogurt y otras de importancia clínica, con
la finalidad de diferenciar la pared celular de cada una.  

MATERIALES Y REACTIVOS

 
Equipos   Función  
Mechero (En los dos videos) para calentar, esterilizar o proceder a la
  combustión de muestras o reactivos
  químicos 
 

Portaobjetos (En los dos videos) Sirve colocar las muestras o

preparaciones que posteriormente se
pretenden analizar y observar con un
microscopio. 

Caja de Petri (2° videos) Se utiliza para cultivar bacterios u otros

microorganismos y examinar su
comportamiento  

Asa bacteriológica (En los dos videos) Se emplea para transformar, arrastrar,

 traspasar inóculos (microorganismos) 

Frasco de lavado (En los dos videos) Se usa para enjuagar el material

  de laboratorio, ya sea para disolver o
lavar  

Fuente de tinción (en los dos videos) Sirve para colocar los portaobjetos con
las muestras 

Microscopio (en los dos videos) Permite observar objetos no perceptibles

al ojo humano  

 
 
 
 
 

 
 
 
Materiales y reactivos Función
Azul de metileno se utiliza como colorante en las
tinciones para la observación en el
microscopio, y para teñir resultados en
los laboratorios

Agua destilada agua destilada (Pura) donde

básicamente se separan los
componentes líquidos de una mezcla

Alcohol Se utiliza como disolvente,

anticongelante, fluido hidráulico,
intermedio de síntesis de explosivos,
plastificantes, resinas, fibras y ceras
sintéticas. Es tóxico por ingestión.

Solución Salina se utiliza de manera sistemática como

diluyente para ajustar la turbidez de las
suspensiones de células bacterianas y
así mantener la integridad y viabilidad
de las células

Cristal Violetta Sirve para como tinte el cual ayuda a

clasificar las bacteria gram + y gram -

Alcohol de acetonas empleados para aclarar, deshidrata las

paredes de los microorganismos gram
 positivos, tratados con mordiente, y
forma una barrera que la laca no
puede atravesar.

Safranina es un colorante biológico, de contraste

que se utiliza en la Tinción de Gram
para proporcionar un color violeta más
intenso a las bacterias Gram+ y tiñe de
rosa a las bacterias G- ; en histología y
en citología

Lugol se emplea frecuentemente como

desinfectante y antiséptico, para la
desinfección de agua en emergencias
y como un reactivo para la prueba del
yodo en análisis médicos y de
laboratorio.

Yogurt es una leche fermentada que se

obtiene a partir de la acción de
diferentes bacterias (streptococcus
termophilus y Lactobacillus bulgaricus)
que transforman una parte de la
lactosa en ácido láctico y se produce
un aumento de la consistencia por
coagulación de sus proteínas

MARCO TEORICO
Los organismos procariotas son organismos unicelulares cuyos principales
representantes son las bacterias y cianobacterias caracterizadas por la falta de
núcleo definido
Citoplasma: definido como todo lo contenido dentro de la membrana celular.

Ribosomas: son los únicos organelos que presenta las células procariotas,
se encargan de la síntesis de proteínas.

Membrana celular: permite el intercambio de sustancia desde el exterior al

interior de la célula. Si retiramos la membrana celular la célula dejaría de existir.

Nucleoide: se encuentra material genético de la célula procariota (ADN)

Flagelo y Fimbrias: Cada organismo tiene su propia forma de movimiento como

flagelos, fimbrias o filis y permiten a adherirse a otras células.

Capsula: Actúa como un escudo que protege a la bacteria de la fagocitosis y

adherirse a las superficies

Plásmidos: Son moléculas de ADN de doble cadena que se replican de manera

autónoma (su función no es vital para la bacteria)
Pared celular: se encuentran en la parte mas externa de la célula bacteriana. Y
su papel más importante es proteger a la bacteria.

Esta compuesta por peptidoglicano y se clasificación dependiendo a la cantidad

de esta, en gram positivas, y en gram negativas.

Las gram positivas, son las que tienen más cantidad de peptidoglucano y las gram
negativas mucho menos.

Tinción de gram:

Las gram positivas: tienen una pared mas gruesa de peptidoglucano por lo tanto
les permite retener el tinte primario (cristal violeta)

Las gram negativas: tienen una capa mas delgada de peptidoglicano a manera
de SANDWICH entre la membrana celular y la membrana externa de la bacteria.
Por esto no pueden tener el tinte primario (cristal violeta), por lo tanto, su color es
más claro como un rosado.

Los tipos de tinción son simples (frotis directo, azul metileno) o compuestos
(tinción de gram)
La pared celular también ayuda a mantener la forma de la bacterias las cuales
son:

Cocos: Forma redondeada

Bacilos: Forma cilíndrica
Espirilos: Forma espiral
Pleomórficos: tienen diferentes formas.

Procedimiento
En este laboratorio aprenderemos a distinguir bacterias Gram-positivas y Gram-
negativas El grupo conformado por tres estudiantes, se reúne de manera virtual
donde observamos unos videos sugeridos por la docente sobre la tinción de Gram.
Por medio de YouTube, observamos los videos ´´Tinción para la observación de
las bacterias del yogurt´´ y ´´Laboratorio virtual No 5: observación de células
procariotas´´
 1.  A partir de una muestra yogurt con prebióticos (tinción simple) 

Realizar un frotis con las

Esterilizar el asa bacterias: Colocar una gota de Clocar el porta
bacteriológica con agua destilada en el porta objetos sobre el
ayuda del mechero. objetos y sobre esta aplicar puente de tinción
una extensión del yogurt

Dejar secar la muestra y fijar las

bacterias con calor utilizando el
mechero, pasando el porta objetos
por encima de la llama con la
muestra hacia arriba

Añadir azul de metileno al 1%, dejar

actuar al colorante durante 5 minutos y
lavar la muestra con agua.

Añadir alcohol, dejar actuar por 2 Dejar secar la muestra y fijar

minutos para desgrasar la muestra y nuevamente las bacterias con
lavar con agua nuevamente. ayuda del mechero.

Agregar a la muestra una

Observar la tinción con el microscopio
gota de aceite de
óptico con el objetivo al 100 aumento
inmersión
 TINCIÓN SIMPLE
(CULTIVO
BACTERIANO)

Tomar una gota de solución

salina y colocarla sobre el
portaobjetos limpio

Esterilizar el asa bacterióloga

al rojo vivo con ayuda del Permitir al asa enfriarse
mechero, haciendo un ángulo a temperatura ambiente
cerca de 90° para esterilizar
también el mango

Tomar una muestra de las

Mezclar la muestra tomada con el asa bacterias Klebsiella de la Después de usar el asa
con la gota de solución salina de la placa de Petri deslizando el esterilizarla en el
lamina del portaobjeto asa entre las colonias-. mechero

Añadir azul metileno con

Lavar con agua usando el
una pipeta y esperar 2
frasco lavador.
minutos

Dejar secar a
temperatura Observar en un enfoque de
ambiente. 100x a las bacterias.
DIAGRAMA DE FLUJO:
Tomar una gota de solución
TINCIÓN COMPUESTA salina y colocarla sobre el
O DE GRAM portaobjetos limpio.

Esterilizar el asa bacterióloga al

rojo vivo con ayuda del Permitir al asa
mechero, haciendo un ángulo enfriarse a
cerca de 90° para esterilizar temperatura
también el mango ambiente

Mezclar la muestra Tomar una muestra de las

tomada con el asa con bacterias Klebsiella sp de la Después de usar el
la gota de solución placa de Petri deslizando el asa asa esterilizarla en el
salina de la lamina del entre las colonias-. mechero
portaobjeto

Dejar secar el frotis

Fija la preparación con calor,
bacteriano a
pasándola varias veces por el
temperatura
mechero
ambiente

Sobre un puente de soporte

Se espera durante un
colocar la muestra y agregas en
minuto de dejándola
“cristal violeta”
actuar, y se lava

Se cubre la placa con Se deja actuar por 1

Lugol minuto y se lava

Se lava con abundante Se agrega alcohol acetona

agua y se deja escurrir durante 30 minutos para
decolorar

Una vez seco, se observa la Se deja actuar por 1

Se cubre la muestra con
muestra en el microscopio minuto y se lava
safranina
usando 100x
RESULTADOS

1. Tinción simple de muestra yogurt con prebióticos y de cultivo bacteriano 

Tinción simple de muestra yogurt con prebióticos

Se observa en el microscopio óptico las

bacterias termófilas y Estreptococos termófilas y las Lactobacillus bulgaricus
teñidas de azul gracias al colorante orgánico, azul de metileno. A su vez
observamos sus formas en cocos y bacilos: Estreptococos y Estreptobacilus.

Tinción simple cultivo bacteriano (Klabsiella)

Se observa en el microscopio a 100x la bacteria Klebsiella con una forma de

bacilos rectos; de color azul, debido al colorante azul de metileno. Clasificándola
como Gram negativa

2. Tinción compuesta o de gram.

 Se observa en el microscopio a 100x de aumento de objetivo que las bacterias
Klebsiella sp tiene forma de bacilo, y su color después de la tinción es rosado, por
lo tanto, son gram negativa.

Morfología de las bacterias observadas:

Klebsiella SP

Morfología: bacilos pequeños gram negativos, no móviles, anaerobios

facultativos, se encuentran como células individuales no agrupadas, tienen
cápsula y forman colonias mucosas.
Lactobacillus bulgaricus
Morfologia: presentan tres formas estructurales
diferentes: laminar, enrollada y convoluta, La
forma laminar presenta dos superficies, una lisa,
colonizada por lactobacilos cortos y una rugosa,
La forma de convoluta presenta tres capas: la
externa, con predominancia de lactobacilos
cortos, la media con lactobacilos largos rectos.
Son gram +

Streptococcus thermophilus
Morfología: Posee una forma de cocos; es Gram
positiva, formada en pares o cadenas de longitud
variable; una pared celular compuesta por N-
acetilglucosamina (NAG) y ácido N-acetilmurano
(NAM), unidos por enlaces de éter
6. ANALISIS DE RESULTADOS
1. Observa el video del enfoque de las
bacterias teñidas con azul de metileno a 100x
y dibuja lo que observas en el cuadro
dispuesto para ello en tu guía de laboratorio.
Asegúrate de mantener las dimensiones en el
dibujo.

- ¿Qué forma bacteriana observas?

R/ son bacterias con forma de cocos,
es decir, redondas.

- ¿Cuál es el aumento de la preparación?

R/ El aumento del objetivo es 100x de objetivo en el microscopio
- ¿Cuál es la importancia clínica de la Klebsiella?

R/ Es la causal de infecciones del tracto urinario, neumonías, sepsis, infecciones

de tejidos blandos, e infecciones de herida quirúrgica.

2. Observa el video del enfoque de las

bacterias teñidas con azul de
metileno a 100x y dibuja lo que
observas en el cuadro dispuesto
para ellos en tu guía en el
laboratorio. Asegúrate de mantener
las dimensiones del dibujo.
- ¿Qué forma bacteriana observas?
R/ Tiene forma de cocos y están
unidos en racimos.
- ¿Cuál es el aumento de la preparación?

R/ el aumento de la preparación es de 100x de objetivo en el microscopio.

- Menciona dos ejemplos de COCOS con importancia clínica e industrial

R/

- Estafilococus aureous: causante de enfermedades de piel, también es

causante de neumonía, infecciones de las válvulas cardiacas e infecciones Oseas.

- Streptococcus pyogenes: Este ubicuo organismo es la causa bacteriana más

frecuente de faringitis aguda y también da lugar a una gran variedad de
infecciones cutáneas y sistémicas

3. Observa el video de enfoque de la tinción de

GRAM de las bacterias a 100x y dibuja lo que
observas en el cuadro dispuesto para ello en tu
guía de laboratorio. Asegúrate de mantener las
dimensiones en el dibujo.

- ¿Qué forma de bacterias observas?

R/ La forma bacteriana observada es en
bacilos.
- ¿La bacteria del enfoque es GRAM + O GRAM -?

R/ La bacteria del enfoque es GRAM – puesto que su color es un rosado claro.

- ¿Para qué es útil saber si este organismo es gram + o gram - ?

R/ Además de saber clasificar las bacterias, distinguir un organismo entre

GRAM+ o GRAM- es útil para saber cuál de estas es más peligrosa y a su vez,
conocer las maneras de cómo tratarlas. Por ejemplo, gracias a esta
clasificación, podemos observar que las GRAM- causan más enfermedades
que las GRAM+, puesto que su membrana externa es en gran parte
responsable de lo patógeno del microorganismo. Está membrana exterior está
compuesta por un complejo lipopolisacárido que actúan como endotoxinas. Las
endotoxinas son componentes estructurales exclusivamente de las bacterias
GRAM-.
 4. Se observa el video de enfoque de la
tinción de gram de dos bacterias a 100x y
dibuja lo que observas en tu guía de
laboratorio (usando colores). Identifica
según las características de cada una.
- ¿Qué formas morfológicas bacterianas
observas?
R/ la forma bacteriana que presentan son
en bacilos, tanto la salmonella sp como el lactobacillus sp.
- ¿El genero salmonella sp es GRAM + O GRAM –?

La bacteria Salmonella sp es GRAM – y su color en la imagen son las azules.

- ¿El género lactobacillus es GRAM + o GRAM -?

R/ El genero Lactobacillus es GRAM +y su color en la imagen es la rosada

claro.

- ¿Cuáles son las principales características de salmonella sp?

Características

- Son bacilos gram negativos

- Miden de 0,7 – 1,5 µm de ancho x 2,5 µm de largo.
- Móviles (flagelos peritricos). Excepto S. Garllinarum y S. Pullorum que son
inmóviles
- No forman esporas
- La pared celular posee el antígeno (Ag) somático “O”
- Los flagelos representan el Ag flagelar “H”
- Algunas salmonellas poseen capsulas. Ag capsular “K” (llamado Ag Vi
salmonella) (acción anti fagocítica). Se encuentra en S. Typhi, S, Paratyphi
C y en algunas cepas de S. dublin.

5. Observa el video del enfoque de la tinción de

GRAM de dos bacterias a 100x y dibuja lo que
observas en tu guía de laboratorio (usando colores). Identifica según las
características de cada una.

- ¿Qué formas morfológicas bacterianas observas?

Se observa forman morfológicas de cocos y bacilos.
- Clasifica las bacterias observadas según forma morfológica y clasificación
GRAM

R/ Las bacterias observadas, se clasifican en Estafilococos y Gram + las de color

azul. Y en bacilos y Gram- los de color rosado.

CUESTIONARIO

1. Según la tinción de gram, las bacterias se clasifican en dos tipos, GRAM

positivas y GRAM negativas, esta tinción diferencial se debe a las
características de sus paredes celulares. Dibuja estas paredes donde
corresponda en la guía y coloca el color que tomaría en la tinción de GRAM

GRAM POSITIVOS

Color en Gram: Azul oscuro,

morado oscuro son los colores
mas comunes.
Dibujo de la pared celular GRAM POSITIVA

GRAM
NEGATIVAS:

Color en
GRAM: los
mas comunes
son los
morados
claro, y los
rosados o
fucsias.
Dibujo de la pared celular GRAM NEGATIVA

2. Teniendo en cuenta la clasificación de las células procariotas según su

forma, dibuja en la tabla de tu guía como se observan estas células al
microscopio.

FORMA DIBUJO EJEMPLO ENFERMEDADES

RELACIONADAS
COCO Streptococcus amigdalitis
pyogenes

diplococo Neisseria Gonorrea

gonorrhoeae
estreptococo Streptococcus meningitis
agalactiae

Bacilo Bacilo de Tétano

Nicolaier

Estreptobacilos Streptobacillus neumonía

felis

Espirilos Treponema sífilis

pallidum

Vibrio Vibrio cholerae cólera

 Clase de Célula Tipo de tinción Resultados

Estreptococus termófila Microorganismo en forma

de cocos y es Gram+
Tinción simple

Lactobacilos bulgarico Microorganismos en

forma de bacilos y es
Tinción simple y Gram+
compuesta

Klebsiella sp. Microorganismos en

forma de cocos y es
Tinción simple Gram-

Salmonella Microorganismos en
forma de bacilos y Gram-
Tinción compuesta
 Conclusiones

- En el primer video se evidencio que las bacterias Lactobacillus bulcaricus y

Estreptococos termófilas al someterlas al proceso de tinción simple se tiñen
de color azul, por lo tanto, son gram positivas y al observarlas en el
microscopio con objetivo de 100x tiene forma bacilos y cocos
respectivamente.
- En el segundo video se muestra que el cultivo de bacterias Klebsiella sp al
someterlas a tinción de gram o compuesta se observa en el microscopio a
100x de aumento de objetivo que son de color rosado claro y con forma de
bacilos, por lo tanto, son gram negativas.
- Las células procariotas en especifico las bacterias no tiene núcleo definido,
y tiene muy pocos organelos entre esos los ribosomas, los cuales se
encargan se la síntesis de las proteínas. Tienen un nucleoide que contiene
en ADN, también flagelos los cuales les permite realizar movimientos,
además de los pilis que permiten a la célula entrelazarse con otras, y la
pared celular la cual esta compuesta por peptidoglucano que permite que
las bacterias se pueden clasificar según la cantidad de esta.
- La tinción de Gram nos permite clasificar a las bacterias en Gram+ y Gram-,
donde observamos que la pared celular de las Gram+ es más gruesa que
de las Gram-, lo que hace que estas últimas produzcan más endotoxinas,
siendo productoras de muchas enfermedades.

Bibliografías

https://youtu.be/IDGEoUU7ngo

https://youtu.be/64M6aQ6xExM

https://www.consumer.es/seguridad-alimentaria/infecciones-por-vibrio.html

https://www.lifeder.com/estreptobacilos/

https://cunicultura.com/2013/04/bacterias-gram-y-gram