UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN DE BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

BIOQUÍMICA ESTRUCTURAL
LICENCIATURA EN QUÍMICA

REPORTE DE LA PRÁCTICA No. __9___

“_CINETICA ENZIMATICA DE LA UREASA_ “

ASESORES:
Q. Karla Paola Hernández Pérez
QFB. Gabriela Escalante Reynoso
QFB. Nydia B. González Ángeles

No. EQUIPO: __5__

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

Amaya González Jonathan Manuel
González Nieto José Francisco
Guerrero Aguilar Luis Antonio
Vazquez Flores Luis Enrique

SEMESTRE: 2022-II GRUPO: _2601_

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: martes 26 de abril del 2022

 Reporte Experimental Bioquímica General y Estructural 2022-II
NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Cinética enzimática de la ureasa

OBJETIVO GENERAL

 Estudiar cuantitativamente la cinética enzimática de la Urea-Ureasa mientras se ve afectada por

distintos factores tales como el pH, la temperatura, concentración de sustrato y el tiempo,
determinando la Vmax y la Km de cada uno de los distintos factores que afectan la catálisis
enzimática.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Anote los resultados de acuerdo a las instrucciones de su asesor, todos los equipos deberán
tener los datos y gráficas correspondientes de una cinética completa.

Efecto del pH sobre la velocidad de la reacción. Equipo: _____1______

moles de
Volumen de
urea
Tubo pH titulación
hidrolizadas/
corregido
30 min
5
1 3 150
6
2 3.4 170
7.2
3 2.2 110
8.5
4 0.6 30
10 0.2
5 10
 Reporte Experimental Bioquímica General y Estructural 2022-II

Efecto del tiempo en la velocidad de reacción. Equipo: ______________

moles de
Volumen de
urea
Tubo Tiempo (min) titulación
hidrolizadas/X
corregido
min
10
1 4.8 240
20
2 1.7 85
30
3 1.8 90
40
4 0.9 45
50
5 1.7 85

7Efecto de la temperatura en la velocidad de la reacción: Equipo: _____7_______

moles de
Volumen de
urea
Tubo T (oC) titulación
hidrolizadas/30
corregido
min
1 0.2 20
0
Ambiente
2 0.3 45
50
3 2 110
70
4 1.4 70

90 0.3 0
5
 Reporte Experimental Bioquímica General y Estructural 2022-II
Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de la reacción: Equipo: ____5____

Concentración moles de
Volumen
inicial de urea urea
Tubo de titulación
en mmoles/mL hidrolizadas/30
del blanco
en el medio min
0.00357
1 0.2 10
0.0089
2 0.8 40
0.0125
3 0.9 45
0.01785
4 0.9 45
0.0268
5 1 50

0.0357 1.1 55
6

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

* Preguntas que deben contestar antes de realizar la práctica

°Explique qué tipo de enzima es la ureasa ¿De qué fuentes se puede extraer?
La ureasa (EC.3.5.1.5) es una enzima de suma importancia cuya funcionalmente pertenece a las familias
aminohidralasas y fosfotriesterasas.

Se puede encontrar principalmente:

 Invertebrados
 Microorganismos
 Semillas
 Se extrae principalmente a partir del frijol
 Dentro de las plantas se pueden encontrar en el citoplasma

* Escriba la reacción que cataliza la ureasa indicando sustrato, productos y condiciones de reacción.
 Reporte Experimental Bioquímica General y Estructural 2022-II
* Defina cinética enzimática e indique que factores se estudiarán en la práctica.
Dentro de la Bioquímica la cinética enzimática es el campo que se encarga de la medición cuantitativa de
los índices de reacciones catalizadas por enzimas, y del estudio sistemático de factores que afectan
dichos índices, es decir que es el análisis cinético que puede revelar el número y orden de los pasos
individuales mediante los cuales las enzimas transforman sustratos en productos ósea que se estudia la
velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.

En esta práctica se estudiaron los factores de:

pH
Concentración del sustrato
Concentración de la enzima
Tiempo
Temperatura

* Explique la función de cada reactivo o solución durante la práctica:

Alcohol al 30 % Disolvente para la desnaturalización de proteínas y extracción de la enzima Urea

Urea 0.25 M Enzima.

Buffer de fosfatos a Amortiguador de pH, controla el pH de la solución (pH óptimo de trabajo)

diferentes pH
Bicloruro de mercurio Inhibidor de la enzima
al 1 %

HCl 0.1 N Reactivo utilizado para valorar la solución

Solución de rojo de Indicador

metilo al 1 %, indique
rango de vire y color

Anote el orden de adición de los reactivos en los tubos blanco y problema

Urea Urea

+ +

Buffer de fosfatos pH 7.2 Buffer de fosfatos pH 7.2

+ +

Hg Cl 2 1% Ureasa

+ +

Ureasa Hg Cl 2 1%

Tubo blanco tubo problema

 Reporte Experimental Bioquímica General y Estructural 2022-II
Encierre en color rojo el bicloruro de mercurio. Explique porqué se adiciona en diferente orden en ambos tubos.
La razón del porqué se pone antes en el blanco y después en el problema es debido a que el Bicloruro de mercurio
actúa como inhibidor en la catálisis de la Urea siendo que en el blanco la obstaculiza uniendose primero a
la enzima para bloquear la union inmediata del sustrato (Ureasa) y en el problema permite la union del
sustrato a la enzima. Todo esto con el fin de tener distintas valoraciones al momento de titular y poder
hacer un correcto ajuste en volumen de titulación corregido.

Trace las gráficas teóricas de pH, temperatura y [sustrato] de la cinética de la ureasa, indicando los valores óptimos
explicando brevemente el comportamiento en cada una de ellas.
 Gráfica teórica de pH de la cinética de la Ureasa.

Comportamiento tipo campana de Gauss en el que su punto máximo son los valores óptimos de pH en la
velocidad de reacción.

 Gráfica teórica de temperatura de la cinética de la Ureasa.

Comportamiento similar al de pH tipo campana de Gauss

 Gráfica teórica de la concentración de sustrato de la cinética de la Ureasa.

Comportamiento tipo logarítmica hasta alcanzar el punto óptimo en el que empezamos a notar un
comportamiento lineal en declive.
 Reporte Experimental Bioquímica General y Estructural 2022-II
Complete la siguiente tabla de acuerdo a su trabajo experimental.

Parámetro Variable Variable Parámetros

dependiente independiente constantes
Temperatura Distintas Velocidad de [Urea], cantidad de
temperaturas en °C reacción buffer, cantidad de
inhibidor (gotas)
Tiempo Minutos Velocidad de [Urea], cantidad de
reaccion buffer, cantidad de
inhibidor (gotas)
pH Buffer Velocidad de [Urea], cantidad de
reacción buffer en Ml,
cantidad de
inhibidor (gotas)
[Urea] Diferentes Velocidad de Cantidad de buffer,
volúmenes de reaccion cantidad de
sustrato. inhibidor (gotas)

Trace los gráficos de velocidad de reacción contra cada uno de los factores que se trabajaron experimentalmente.
Tome en cuenta que la velocidad de reacción se expresa en micromoles/30 min (micromoles de urea hidrolizadas
durante 30 minutos).

Valor óptimo:
 Efecto de pH sobre la velocidad de la reacción

Efecto del pH Gráfica experimental 1.0: Resutados expe-

rimentales en función del pH
pH Vrxn 180
160
5 150 140
120
V rxn

6 170 100
80
7.2 110 60
40
8.5 30 20
0
4 5 6 7 8 9 10 11
10 10
pH

 Efecto del tiempo sobre la velocidad de la reacción

Efecto del tiempo Gráfica experimental 1.1: Resutados

experimentales en función del tiempo
T (Min) VTC
300
10 20
250
20 45 200
V (rxn)

30 110 150
40 70 100
50 0 50
0
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
Tiempo (min)
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 Efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reacción.

Efecto de la temperatura Gráfica 1.0: Resutados experimentales en función de la

T (°C) V rxn temperatura
0 20 120
25 45 100
50 110 80

V rxn
70 70 60
40
90 0
20
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Temperatura °C

 Efecto de la concentración sobre la velocidad de la reacción.

Efecto de la concentración
C0 V rxn Gráfica 1.3: Resultados experimentales en función de
0.00357 10 la concentración de sustrato
60
0.0089 40
50
0.0125 45 40
V rxn

0.01785 45 30
0.0268 50 20
0.0357 55 10
0
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04
[Urea]

¿Los gráficos obtenidos con sus datos experimentales, cumplen con el comportamiento teórico? Justifique su
respuesta
Al momento de comparar los datos experimentales (en este caso, gráficas), con las teóricas podemos
observar una ligera similitud entre ellas, aunque claro, con ciertas diferencias de tendencia. Sin embargo
en el comportamiento resultan ser “iguales” ya que muestran las mismas formas las teóricas como las
experimentales pero con grandes variaciones las cuales se les pueden atribuir a errores experimentales.

Enliste las condiciones óptimas de trabajo de la enzima que determinaron experimentalmente:

pH= 5.8
Tiempo= Complicado de determinar, pero parece que fueron 30 minutos
Temperatura= 52° C
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Calcule el valor de Km del gráfico: Velocidad de reacción vs [urea] KM = 0.02
¿Cuál es la interpretación de este valor?

Es la mitad de la velocidad máxima de reacción.

CONCLUSIONES:

Se lograron los objetivos de la práctica, demostrando como es que la cinética de una reacción se
ve afectada si alteramos las condiciones de reacción, tales como la temperatura, el pH, el tiempo
y la concentración del sustrato. Se pudo apreciar como en la mayoría de casos hubo un cambio
real en la velocidad inicial de reacción a pesar de que en la parte del tiempo no se pudo obtener
un resultado concreto. Aunque si se pudieron obtener las gráficas donde podemos observar las
diferentes condiciones óptimas de reacción, algunas de ellas no concuerdan con la teoría, sin
embargo, se aproximan y se puede decir que fue una experimentación exitosa.

También se logró comprender como la teoría de Michaelis-Menten tiene utilidad en la cinética

enzimática y como es que podemos obtener la Km a partir de nuestros datos experimentales.
 Reporte Experimental Bioquímica General y Estructural 2022-II
REFERENCIAS:

 Enzimas. Cinética enzimática. (2022). Recuperado el 2 de mayo de 2022 de Ehu.eus website:

https://bit.ly/3kBZVlO

 Anónimo. (n.d). Tema 7 cinética enzimática 2. cinética enzimática 3. inhibiciones en reacciones

enzimáticas ¿cómo actúan los enzimas? modelo de michaelis-menten inhibición competitiva y no
competitiva 4. modulación alostérica de la actividad enzimática representaciones. Recuperado de
https://bit.ly/3FqKzuh

 Khan Academy. (2022). Recuperado el 2 de mayo de Khanacademy.org website:

https://bit.ly/3LW4bZH