Calibración de Recipientes

volumétricos de vidrio y pipetas

de pistón

Q. en A. Sonia Trujillo Juárez

San Salvador, Noviembre de 2015

Contenido del Curso

1. Introducción
1.1 Clasificación de los recipientes volumétricos
1.2 Normatividad

2. Recipientes volumétricos de vidrio para laboratorio

2.1 Clasificación de los recipientes volumétricos
2.2 Requisitos metrológicos de calibración
2.3 Clases de exactitud
2.4 Trazabilidad
2.5 Certificados de calibración

3. Condiciones de Calibración
3.1 Temperatura y condiciones ambientales
3.2 Equipo de medición
3.3 Limpieza del material
3.4 Lectura y ajuste del menisco
3.5 Métodos de calibración
4. Calibración
4.1 Calibración de pipetas volumétricas
4.2 Calibración de buretas
4.3 Calibración de matraces y probetas para contener
4.4 Calibración de matraces y probetas para entregar

5.Micropipetas y pipetas de pistón

5.1 Tipos de pipetas, alcance y funcionalidad
5.2 Diseño, puntas de pipeta y ajuste
5.3 Procedimiento para pipetear
5.4 Requisitos metrológicos
5.6 Procedimiento de calibración
5.7 Errores máximos permisibles
5.8 Aseguramiento de calidad en las mediciones con pipetas de pistón
5.9 Informe de resultados
 Objetivos

Objetivos del curso:

a) Que el participante conozca los fundamentos para

la calibración de recipientes volumétricos de vidrio
y micropipetas.

b) Mostrar mediante un ejemplo la metodología para la

estimación de incertidumbres en la calibración de
pequeños volúmenes.
 Introducción

Clasificación de recipientes volumétricos

1. Por su capacidad:
a) Microvolúmenes
b) Pequeños Volúmenes
c) Grandes volúmenes

2. En base a su exactitud o clase

a) clase A
b) clase B

3. Por su forma de operación

a) tradicionales (de vidrio, metal, plástico)
b) de Pistón

4. De acuerdo a su función o a la forma de calibración

a) contener
b) entregar
 Por su capacidad
Clasificación
1. Por su capacidad:

a) Microvolúmenes: 1 µL a 1 mL

b) Pequeños Volúmenes: 1 mL a 2 000 mL

c) Grandes volúmenes:  2 000 mL

 En base a su exactitud
Clasificación

Clase A.- Se consideran los recipientes volumétricos de mayor exactitud. Se

fabrican con un vidrio borosilicato que tiene bajo coeficiente de expansión.

Clase B.- Se consideran recipientes volumétricos de menor exactitud. La

tolerancia permitida para los artículos de clase B, es el doble con respecto a
los de clase A. Se fabrican con vidrio de aluminio de borosilicato, presentando
un coeficiente de expansión relativamente grande
 Tolerancias según la clase
Matraz Pipetas Pipetas
Probetas Buretas
Recipiente Volumétrico Volumétricas Graduadas
(ISO 478) (ISO 365)
(ISO 1042) (ISO 648) (ISO 835)
Clasificación
CLASE A B A B A B A B A B

Volumen TOLERANCIAS ± (ml)

1 ml 0,008 0,015 0,006 0,01 0,01 0,02

2 ml 0,01 0,02 0,01 0,02 0,01 0,02

5 ml 0,025 0,05 0,015 0,03 0,03 0,05 0,1 0,01 0,02

10 ml 0,025 0,05 0,02 0,04 0,05 0,1 0,2 0,02 0,05

20 ml 0,03 0,06

25 ml 0,04 0,08 0,03 0,06 0,1 0,2 0,5 0,03 0,05

50 ml 0,06 0,12 0,05 0,1 1 0,05 0,1

100 ml 0,10 0,20 0,08 0,15 1 0,1 0,2

200 ml 0,15 0,30 0,1 0,2

250 ml 0,15 0,50 2

500 ml 0,25 0,80 5

1 000 ml 0,40 1,20 10

2 000 ml 0,60 20
Tolerancias de acuerdo con las normas ISO 385, ISO 648, ISO 835, ISO 1042 e ISO 4788
 Dependiendo de la función:
Clasificación

Para entregar: Para contener:

Entregan un volumen específico. Se Contienen un volumen asignado
considera el líquido que queda en el hasta la marca de aforo.
fondo, el adherido a las paredes y el
sobrante de la punta.
Influye: Temperatura
Influye: Temperatura, Tensión
superficial, viscosidad y tiempo de
vaciado Ejemplo: matraces volumétricos,

Ejemplo: Pipetas, buretas, picnómetros

probetas. Excepción: pipetas para soplar
 Por su forma de operación
Clasificación

Operación manual Operan con pistón

Son todos los recipientes de vidrio El pistón puede ser operado manual,
tradicionales. eléctrica, neumática o hidráulicamente.
El volumen se ajusta a una marca El volumen puede ser indicado
graduada inamovible. mecánicamente o por medios
Se calibran de acuerdo a ISO 4787 electrónicos.
Ejemplo: Pipetas, buretas, matraces Se calibran de acuerdo a ISO 8655-6
Ejemplo: Buretas, dosificadores, pipetas
de pistón
 Normatividad
Aparatos volumétricos de vidrio
Número Documento Emisor

ISO 384 Laboratory glassware –principles of design and construction of volumetric glassware ISO

ISO 385/1 Laboratory glassware –burettes part 1: general requirements ISO

ISO 385/2 Laboratory glassware –burettes part 2: burettes for which no waiting time is specified ISO
Laboratory glassware –burettes part 3: burettes for which no waiting time of 30 s is
ISO 385/3 ISO
specified
ISO 648 Laboratory glassware –one mark pipettes ISO

ISO 835/1 Laboratory glassware –graduated pipettes- part 1: general requirements ISO

Laboratory glassware –graduated pipettes- part 2: pipettes for which no waiting time
ISO 835/2 ISO
is specified
Laboratory glassware –graduated pipettes- part 3: pipettes for which no waiting time
ISO 835/3 ISO
of 15 s is specified
ISO 835/4 Laboratory glassware –graduated pipettes- part 4: blow-out pipettes ISO
ISO 1042 Laboratory glassware –one mark volumetric flasks ISO
ISO 3507 Pyknometers ISO

ISO 4787 Laboratory glassware –volumetric glassware- methods for use and testing of capacity ISO

ISO 4788 Laboratory glassware- graduated measuring cylinders ISO

 Normatividad
Aparatos volumétricos de pistón

Aparatos volumétricos de pistón

Terminología, requisitos generales y recomendaciones para el

ISO 8655-1
usuario.
ISO 8655-2 Pipetas de Pistón
ISO 8655-3 Buretas de pistón
ISO 8655-4 Dilusores
ISO 8655-5 Dosificadores
Método gravimétrico para la determinación del error de
ISO 8655-6
medición

ISO 8655-7 Métodos no gravimétricos para determinar el error de medición

Determinación de la incertidumbre para mediciones de

ISO/TR 20461
volumen por el método gravimétrico.
Recipientes volumétricos de vidrio

Marcas e inscripciones

Marca del fabricante

No. de modelo
Para entregar
(EX, TD ,PE)

Unidad de volumen

Para contener
(IN, TC, PC)
Clase de exactitud
Volumen
nominal

Temperatura de referencia
Tiempo de descarga
Marcas e inscripciones
 Marcas e inscripciones

Clase A

Temperatura de ajuste Ajuste + tiempo de espera

Ex + 15

Clase A/AS

Las tolerancias quedan dentro Tiempo de espera

de los límites de la clase A
fijados por ISO y DIN
¿Cuáles utilizo como patrones
volumétricos?
¤ Pipetas
volumétricas

¤ Pipetas
graduadas

¤ matraces
volumétricos

¤ buretas
¤ picnómetros
¿Exactitud Clase A...
asegura la calidad de las mediciones?
 Calibración...
¿Cómo?
En base a normas, método gravimétrico con
trazabilidad a patrones nacionales

¿Cuándo?

Dependiendo del uso y la aplicación ( 5 años)

¿Dónde?
Laboratorio primario, laboratorio acreditado (secundario
o empresa )
 Trazabilidad

Patrón Nacional de masa

Laboratorio
Patrón de masa
Clase de exactitud E1, E2,
Primario
Incertidumbre: ±0,5 mg a ±1,0 mg

Patrón de masa
Clase de exactitud E2, F1, F2 Temperatura Laboratorio
Incertidumbre: ± 1 mg a ±1,5 mg
Densidad Secundario
Patrón de del agua
referencia de masa
Balanzas analíticas
Incertidumbre ± 2 mg

Patrón de Trabajo de Empresa

volumen
Pipetas, buretas, matraces
Incertidumbre ± 0,01% - 2%

Medición de volumen
Usuario del equipo Mediciones
Incertidumbre: ± 0,1 % - 3%
¿Para que Calibrar?

Trazabilidad
Incertidumbre
Valor verdadero

Confiabilidad

Certificado de calibración
Requisitos metrológicos de medición y
calibración
1. Condiciones ambientales

2. Equipo de medición
3. Limpieza del material volumétrico

4. Lectura y ajuste del menisco

5. Método de calibración y uso

 Condiciones Ambientales
1. Cond ambientales
2. Instrumentos de medición
3. Limpieza

4. Lectura y ajuste del menisco

5. Método de calibración y uso

INSTALACIONES ISO 4787 IS0 8655 Guía DKD-R 8-1

Temperatura del
(15-30) °C (15-30) °C (20-25) °C
laboratorio
Estabilidad de Local ± 1 °C
± 0.5 °C  0.5 K
temperatura Temporal ± 0.5 °C
Humedad (35-85)%  50 % (45-60) %

Aclimatización del
líquido de prueba*
1ha2h ≥1h ≥2h
e instrumento a
calibrar ()

*Líquido de prueba: Agua destilada o desionizada grado 3 (ISO 3696)

 ISO 3696:1987
Esta norma establece 3 niveles de calidad del agua
Grado 1 Grado 2 Grado 3
Características Libre de contaminantes Muy bajo contenido de Adecuado para trabajo
disueltos o coloidales contaminantes inorgánicos, general de laboratorio
inorgánicos y orgánicos . orgánicos o coloidales. analítico y preparación de
Adecuado para los Adecuado para propósitos soluciones (producido por:
Parámetros requisitos analíticos más analíticos sensibles (EAA). destilación o desionización
estrictos (cromatografía). u osmosis inversa )
Valor de pH a 25 °C No aplica No aplica 5.0 a 7.5

Conductividad µs/cm a 0.1 1 5

25 °C, max
Materia oxidable No aplica 0.08 0.4
Contenido de oxígeno
max en mg/L
Absorbancia a 254 nm y 0.001 0.01 No especificado
1 cm de longitud óptica
Residuos dde por No aplica 1 2
calentamiento a 110 °C
mg/kg max
Sílice mg/L max 0.01 0.02 No especificado
Coeficiente cúbico de expansión térmica, ,
de diferentes materiales

Material Coeficiente cúbico de

expansión térmico ()a en °C-1
Sílica (cuarzo) 1.6 X 10-6
Vidrio 3.3 boro silicato (Clase A) 9.9 x 10-6

Vidrio 5.0 boro silicato (Clase B) 15 x 10-6

Vidrio suave soda-lime 27 x 10-6
Plástico polipropileno 2.4 x 10-4

Plástico poli carbonato 4.5 x 10-4

Plástico poli estireno 2.1 x 10-4

Coeficiente cúbico de expansión () de materiales comunes en la fabricación de

recipientes de vidrio para laboratorio y en puntas de pipeta (ASTM E288-94). En
los plásticos, este coeficiente puede variar de un lote a otro. Los valores de la
tabla son valores promedio típicos.
 1. Temperatura

2. Instrumentos de medición

Equipo de medición
3. Limpieza del material volumétrico

4. Lectura y ajuste del menisco

5. Método de calibración y uso

INSTRUMENTOS
ISO 4787 IS0 8655 Guía DKD-R 8-1
DE MEDICIÓN
Capacidad y Capacidad y Capacidad y
Balanza analítica dimensiones dimensiones dimensiones
adecuadas adecuadas adecuadas
V< 1 000 ml: error de
medición ≤ 0.2 °C.
Incertidumbre
Termómetro V≥ 1 000 ml: error de --
típica ≤ 0. 2 °C
medición ≤ 0.1 °C.

error de medición ≤ Incertidumbre

Higrómetro --
5% de HR típica ≤ 10 %
error de medición ≤ 1 Incertidumbre Resolución:
Barómetro
kPa típica ≤ 0.5 kPa 1 hPa
 Equipo de medición
Requisitos mínimos para balanzas

ISO 8655-6:2002, ISO 4787:2010

Incertidumbre típica
Volumen seleccionado del Resolución de la
de medida de la
instrumento que se calibra, V balanza
balanza
1 µL  V  10 µL 0.001 mg 0.002 mg
10 µL  V  100 µL 0.01 mg 0.02 mg
100 µL  V  1 000 µL 0.1 mg 0.2 mg
1 mL  V  10 mL 0.1 mg 0.2 mg
10 mL  V  1 000 mL 1 mg 2 mg
1 000 ml  V  2 000 mL 10 mg 20 mg
V  2 000 mL 100 mg 200 mg
 1. Temperatura
2. Instrumentos de medición
3. Limpieza del material volumétrico

4. Lectura y ajuste del menisco

5. Método de calibración y uso

Limpieza del material

Limpieza Resultado
Limpieza adecuada Humedecimiento Consistencia en la
perfecto capacidad de la
medida -repetibilidad
Limpieza deficiente -Humedecimiento Diferencias en el
incompleto de la sup volumen contenido
-Distorsión ( forma y o entregado
curvatura del menisco)
-Reducción de la tensión
superficial
-Menisco plano
 La contaminación de la superficie del líquido - reduce la tensión
superficial

Fotografía cortesía de
LACOMET

Resultado: Humedecimiento incompleto en la superficie

del vidrio, pliegues en las orillas, diámetro deformado.
Procedimiento de limpieza
1. Temperatura
2. Instrumentos de medición
3. Limpieza del material volumétrico
ISO 4787
4. Lectura y ajuste del menisco

5. Método de calibración y uso

Recomendaciones:
•Los recipientes de vidrio se pueden limpiar manualmente, en un baño de
inmersión o en una lavadora mecánica.
•Para reducir cambios en el volumen del vidrio por erosión y destrucción de la
línea de graduación, la limpieza se debe realizar con detergentes de baja
alcalinidad a temperaturas menores de 70 °C

Procedimiento :
1. Sumergir el recipiente una solución acuosa con detergente por algún tiempo
(ver instrucciones de uso del detergente).
2. Enjuagar repetidamente con agua corriente, hasta que se elimine el detergente
totalmente. Por último se enjuaga con agua destilada por lo menos 3 veces.
3. Comprobar la limpieza, dejando escurrir el material. La formación de gotas en
las paredes del material indican contaminación.
4. Hacer un último enjuague con acetona o alcohol y secar con aire o en la estufa a
50-60 °C.
Procedimiento de limpieza
1. Temperatura
2. Instrumentos de medición
3. Limpieza del material volumétrico ISO 4787
4. Lectura y ajuste del menisco

5. Método de calibración y uso

Recomendaciones:
1. Como una medida de seguridad, se recomienda que los recipientes
volumétricos no se calienten arriba de 180 °C. Esto debido a que aún cuando el
punto de tensión de los vidrios usados para propósitos volumétricos se encuentra
en el intervalo de 500 °C , pueden ocurrir alteraciones de volumen a temperaturas
considerablemente más abajo del punto de tensión.

Si las paredes internas del recipiente no están suficientemente limpias después del
procedimiento de limpieza general, realizar limpieza con (KMnO4) + (NaOH) de
acuerdo a lo que se describe en el Anexo A de ISO 4787
 Lectura y ajuste del menisco
1. Temperatura
2. Instrumentos de medición
3. Limpieza del material volumétrico

4. Lectura y ajuste del menisco

5. Método de calibración y uso La mayor fuente de error experimental

asociada con la determinación del
volumen es el ajuste del menisco.
Al hacer el ajuste del menisco, la
iluminación debe arreglarse para que
el menisco se vea oscuro y nítido en el
contorno. Esto puede lograrse, si se
coloca un material oscuro detrás del
recipiente, directamente debajo de la
línea de graduación

1 Menisco de agua
2. Línea de graduación o línea de aforo
3 Material oscuro colocado atrás del recipiente
 1. Temperatura
2. Instrumentos de medición
3. Limpieza del material volumétrico
Lectura y ajuste del menisco
4. Lectura y ajuste del menisco
5. Método de calibración y uso
 1. Temperatura
Errores relacionados con el
2. Instrumentos de medición
ISO 4787
3. Limpieza del material volumétrico
4. Lectura y ajuste del menisco
ajuste del menisco
5. Método de calibración y uso

Error en el Diámetro del  d2 h  2d 2 h

V u (Cres ) 
ajuste, cuello, 4 4 12
h/mm d/mm V/µL u(Cres)/cm3
±
0.05 13 7 0.004
0.1 13 13 0.008
0.2 13 27 0.015
0.25 13 33 0.019
0.05 10 4 0.002
0.1 10 8 0.005
0.2 10 16 0.009
0.25 10 20 0.011

Instrumento Diámetro (mm)

Ejemplo:
Matraz volumétrico 100 ml 10

Matraz volumétrico 250 ml 15

 Método gravimétrico de calibración

Limpieza

Llenado del recipiente con agua

Secado o escurrido
Ajuste del menisco
Peso del recipiente vacío
Peso del recipiente + agua

Calibración con agua Registro de condiciones

ambientales (T, P, %H)

Cálculo de la densidad
Cálculo del volumen del del aire
recipiente a 20 °C
Cálculo de la densidad
del agua
CALIBRACIÓN DE PIPETAS • Montar la pipeta en
posición vertical
•Llenar el líquido por la
punta hasta unos
milímetros arriba de la línea
de graduación.
•Pesar el matraz de recibo
con tapón
•Ajustar el menisco
• En la entrega de líquido la
punta de la pipeta está en
contacto con la superficie
esmerilada del matraz que
se sostiene inclinado en un
ángulo de 30°.
•Esperar 3 segundos
después de la descarga
•Se retira el matraz
haciendo contacto con la
punta aprox 10 mm.
CALIBRACIÓN DE BURETAS

• Alineación vertical de la
bureta
• Uso de guantes
• Pesar el matraz con
tapón
• El matraz de recibo NO
toca la punta de la
bureta
• Ajustar el menisco
con lupa
• después de la entrega
se toca la punta con el
matraz
• tapar el matraz
después de la entrega
CALIBRACIÓN DE MATRACES
(PARA CONTENER)
• Alineación horizontal del
matraz (planicidad)
• Uso de guantes
• Pesar el matraz SECO
con tapón
•Llenar el matraz hasta
unos cuantos mm arriba
de la línea de graduación
•Eliminar burbujas de
aire
•Secar el cuello si fuera
necesario
•El movimiento del
menisco cuando se ajusta
deberá ser hacia abajo
CALIBRACIÓN DE MATRACES (PARA
ENTREGAR)

• Humedecer el matraz
antes de la calibración
•Alineación horizontal del
matraz (planicidad)
• Uso de guantes
• Eliminar burbujas de
aire
• Ajustar el menisco
con lupa
•Vaciar el agua. Tiempo
de escurrimiento.
Calibración y uso de las pipetas de
pistón
 Tipos, designación
Volumen fijo
Existe una Un solo
cámara o canal Volumen variable
TIPO A colchón de
Desplazamien ISO 8655-A-10-
aire entre el
to de aire pistón y el
100
líquido. Volumen fijo
Multicana ISO 8655-A-200x8
l
Volumen variable
ISO 8655-A-20-
200x12
TIPO D Existe contacto Volumen fijo
directo entre el ISO 8655-D1-100
Desplazamien
pistón
to directo o (émbolo) y la Un solo Volumen variable
positivo superficie del canal
ISO 8655-D2-20-
líquido que se 200 D1- pistón reutilizable
entrega. D2- Pistón/capilar
desechable
 Pipetas de pistón
características

Tipo de pipeta de Aplicación Ventajas Limitaciones

pistón
Desplazamiento líquidos de alta Se pueden pipetear No se recomienda usarse
directo viscosidad y alta líquidos de alta con medios infecciosos,
densidad (aceites, viscosidad, alta densidad radioactivos o donde no
resinas y grasas), y y alta presión de vapor. se tolera un arrastre, ya
líquidos con alta presión Las puntas-capilares y el que queda una
de vapor (alcoholes, éter émbolo se pueden humectación residual en
e hidrocarburos). utilizar varias veces. la punta-capilar.

Desplazamiento Para soluciones acuosas El uso de puntas No se pueden utilizar

de aire de viscosidad, densidad desechables permite líquidos que atacan al
y presión de vapor utilizarse con líquidos polipropileno. No se
similares al agua. donde no se tolera un recomienda usarse con
Para pipetear líquidos arrastre o residuo. líquidos de alta presión
infecciosos o radiactivos. de vapor, alta densidad o
alta viscosidad
Pipetas de Pistón.
Principio funcional

muerto
Volumen de aire
 Procedimientos
Pipetas de Pistón
Direct pipetting Aplicación: soluciones
acuosas y soluciones
diluidas

a) Press button to 1st stop, b) Release button c) Dispense liquid by pressing

inmerse tip few milimeters smoothly, tip is filled to 1st stop, blow out by
pressing to 2nd stop

Reverse Pipetting
Aplicación: soluciones
viscosas y soluciones con
presión de vapor alta

a) Press button to 2nd stop, b) Release button c) Dispense liquid by

inmerse tip few milimeters smoothly, tip is filled pressing to 1st stop, rest
remains in the tip
 Pipetas de pistón
diseño

Ajuste:
para entregar (Ex) su volumen nominal o volumen seleccionado
A la temperatura de referencia de 20 °C,
Humedad relativa del aire de 50 % y
presión barométrica de 101 kPa
Usando agua tipo 3 conforme a ISO 3696 2

Si el usuario reajusta la pipeta de pistón, debe quedar evidencia

clara y visible que el ajuste inicial ha sido modificado

Transferencia del calor de la mano.

No debe haber
Puntas de pipeta
Diseñadas para usarse una vez. No se aseguran características metrológicas en reutilización.
Orificio de forma que asegure la entrega consistente del líquido
Verticalidad
Remanente consistente
Puntas para esterilizar con forma, sello y humedecimiento seguros y permanentes
 Condiciones de calibración
ISO 8655-6:2002

 Laboratorio libre de corrientes

 Temperatura del laboratorio estable ± 0.5 °C (entre 15 °C y 30 °C)

 Temperatura del agua atemperar  2 h

 Laboratorio HR  50 %

 Evaporación trampa de evaporación *

 Recipiente de recibo adecuado* relación altura-diámetro de

3:1 ó con tapa

 Ciclo de prueba uniforme, < 60 s por ciclo

 Error por evaporación aplicar compensación (m10-m11)/10*

* Aplica para volúmenes  50 µl

 Calibración

¿ QUÉ VOLUMEN CALIBRO ?

 Volumen nominal
 50% del volumen nominal
 10 % del volumen nominal

¿ CUÁNTAS MEDICIONES ?

10 mediciones (en cada punto)

 procedimiento ISO 8655-6:2002

Condiciones:
1. La medición debe ser continua y en el mismo recipiente
2. Antes de empezar a medir, se colocan 3 mm de agua en el recipiente de pesado
3. Al inicio y al final de la calibración se registran las condiciones ambientales y la temperatura del líquido de
prueba

1 2 3 4
Humedecer la Registrar Cambiar la Humedecer
punta de la
tA, ta, P y HR punta de la la punta
pipeta 5
pipeta una vez
veces

7 8
5 6 Determinar Repetir desde
Tarar el Pipetear el peso del 2 hasta
recipiente el volumen volumen de completar 10
de recibo de prueba prueba mediciones

Activar el cronómetro en m1 Parar el cronómetro en m10 m11

 Procedimiento para pipetear
ISO 8655-6:2002

Para tomar el
líquido

La punta de la pipeta se Tocar la pared del

sumerge 2-3 mm dentro recipiente con la
del recipiente con agua, punta de la pipeta
en posición vertical para escurrir

Para El líquido se descarga

descargar La punta de la pipeta dentro del recipiente, y se
45°
se apoya en la pared limpia la punta de la
el líquido del recipiente formando pipeta arrastrándola 8 a
un ángulo de 30 ° - 45 ° 10 mm a lo largo de la
pared del recipiente.
 Ciclo de prueba
Soltar
y esperar 2
segundos

Retirar la punta
y tocar la pared

2-3 mm
Colocar la punta

apoyar la punta Presionar

arrastrar la punta
en la pared Soltar
Retirar la el pistón
punta
 Errores máximos permisibles para
Tabla 1 pipetas tipos A y D1 ISO 8655-2:2002

Volumen Errores sistemáticos Errores aleatorios máximos

nominal máximos permisibles permisibles _
µl ±% ± µl a ±% b ± µl c es  V  Vnominal
1 5.0 0.05 5.0 0.05
2 4.0 0.08 2.0 0.04
5 2.5 0.125 1.5 0.075
10 1.2 0.12 0.8 0.08
n _

 (V
20 1.0 0.2 0.5 0.1
50 1.0 0.5 0.4 0.2 i  V )2
100 0.8 0.8 0.3 d 0.3 d s i 1

200 0.8 1.6 0.3 d 0.6 d n 1

500 0.8 4.0 0.3 1.5
1 000 0.8 8.0 0.3 3.0
2 000 0.8 16 0.3 6.0
5 000 0.8 40 0.3 15.0
10 000 0.6 60 0.3 30.0
aExpresado como la desviación de la media de una medición décuplo del volumen nominal o del volumen
seleccionado, ver ISO 8655-6:2002, 8.4
b Expresado como el coeficiente de variación de una medición décuplo, ver ISO 8655-6:2002, 8.5
c Expresado como la desviación estándar de la repetibilidad de una medición décuplo,ISO 8655-6:2002, 8.5
d Los errores máximos permisibles para pipetas de pistón tipo D1, pueden ser ± 0,4 %
Errores máximos permisibles para
pipetas tipo D2
ISO 8655-2:2002
Tabla 2

Volumen Errores sistemáticos Errores aleatorios

nominal máximos permisibles máximos permisibles
µl ±% ± µl a ±%b ± µl c
5 2.5 0.13 1.5 0.08
10 2.0 0.2 1.0 0.1
20 2.0 0.4 0.8 0.16
50 1.4 0.7 0.6 0.3
100 1.5 1.5 0.6 0.6
200 1.5 3.0 0.4 0.8
500 1.2 6.0 0.4 2.0
1 000 1.2 12.0 0.4 4.0
a, b, c, ver notas de la tabla 1
Aseguramiento de calidad
en las mediciones con
Pipetas de Pistón

Operadores entrenados Desempeño de 53 pipetas en servicio

con una pipeta calibrada

operadores: 3 técnicos bien entrenados ………………....... 1 técnico bien entrenado

instrumento: 1 pipeta calibrada, con mantenimiento………. pipetas en servicio (rutina de uso diario)
Medición: en 5 µl……………………………………………… en 5 µl
resultado: la mayoría de los resultados están dentro de algunos resultados están fuera de
..especificaciones especificaciones
 Aseguramiento de calidad
operadores

Habilidades de pipeteo de estudiantes

antes de entrenamiento después de entrenamiento
40.00 40.00

Error Sistemático a (%)

Error Sistemático (%)

30.00 30.00

b
b

(Error Promedio)
(Error Promedio)
a

20.00 20.00

10.00
10.00
0.00
0.00
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 -10.00
-10.00
-20.00
-20.00
Error Aleatorio a (%)
Error Aleatorio a (%) (Repetibilidad)b
(Repetibilidad)b
operadores:
resultado: 10 estudiantes de inmunología resultado:
algunos resultados instrumento: Los resultados muestran
están dentro de 1 pipeta con mantenimiento, evidente mejoría en
especificaciones. La calibrada comparación con los
mayoría cae fuera. medición: resultados previos.
en 5 µl

La calibración no necesariamente asegura la calidad de entrega del líquido

 Aseguramiento de calidad
programa

Mantenimiento mecánico

pipeta Calibración

Verificación periódica Calidad en

= la entrega
 del líquido
Operador entrenado
operador
Procedimiento de uso
 Aseguramiento de calidad

Tiempo promedio antes de que ocurra una falla en

pipetas de pistón

Servicio Uso continuo, descuidado, con 1 año o menos de

rudo materiales corrosivos, pegajosos, TPAF
que forman cristales, solventes (MTBF)

Servicio Uso general, materiales 2 años TPAF

medio ligeramente destructivos o
corrosivos
Servicio Uso ocasional y cuidadoso, 4 años TPAF
ligero materiales no destructivos
 Aseguramiento de calidad
nivel de confianza…

…de que una pipeta seleccionada al azar está funcionando correctamente

100
Nivel de Confianza %

95

MTBF 4 años
90

MTBF 2 años
85
MTBF 1 año

80
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Intervalo de Verificación
meses
Verificación de pipetas, basada en el nivel de confianza requerido y la medición del
tiempo promedio antes de que fallen (MTBF).
 Cálculo del volumen entregado
Método gravimétrico

   a 
V20  (M 2  M 1 )     1   (t r  20 )  Crep  Cres
1
  1 
 A  a   B 

M1 Es la indicación de la balanza cuando se coloca sobre ella el recipiente vacío

M2 es la indicación de la balanza cuando se coloca sobre ella el recipiente lleno

1 Factor de corrección por el efecto del empuje del aire sobre el agua.
 A  a

a Factor de corrección por el efecto de empuje causado por el volumen

1
B ocupado por la pesa de calibración de la balanza.
Factor de corrección por temperatura, relacionado con el coeficiente de
1    (tr  20) dilatación cúbica del recipiente y de la diferencia entre la temperatura de
trabajo y la de referencia (20 °C).
Cálculo del volumen entregado
Método gravimétrico

    
V20  (M 2  M 1 )     1  a   1   (t r  20 )  Crep  Cres
1
 A  a   B 

V20/cm3: Volumen del recipiente a la temperatura de referencia de 20 °C.

a/(g/cm3): Densidad del aire.
A/(g/cm3): Densidad del agua a la temperatura de medición.
B/(g/cm3): Densidad de las pesas con las cuales se calibró la balanza.
/°C1: Coeficiente de dilatación cúbica del recipiente.
tr/°C: Temperatura del recipiente.
Corrección (contribución o cantidad auxiliar) por repetibilidad del
Crep/cm3:
proceso de calibración
Corrección (contribución o cantidad auxiliar) por resolución en el
Cres/cm3:
ajuste del menisco
*Cmanejo/µL: Corrección por calibración y manejo de la pipeta de pistón (0.1 %) %
 Resultados
ejemplo

Error sistemático
_
es  V  Vnominal
= 49.888 – 50.000
0.112 µl

n _

 (mi  m) 2
Error aleatorio s i 1
·Z
n 1


n

 (V i
_
 V )2 0.08 µl
s i 1
= 0.078
n 1
 Informe de Resultados
ejemplo
Resultados declarados en un informe de medición

Volumen nominal en µl 25 100 200

Volumen promedio obtenido en µl 25.055 99.887 200.672

Error sistemático en µl 0.06 0.11 0.7

Error sistemático máximo permitido* ± µl 1.6 1.6 1.6

Error Aleatorio en µl 0.1 0.16 0.18

Error aleatorio máximo permitido * ± µl 0.6 0.6 0.6

Incertidumbre Expandida en ± µl 0.23 0.43 1.0

k=2

Error sistemático máximo permitido* y error aleatorio máximo permitido*, de pipetas de pistón de
conformidad con la norma ISO 8655-2:2002.
 Informe de Resultados
ejemplo

Volumen nominal en μl 100 500 1 000

Volumen promedio obtenido en μl 101.52 500.24 1 000.73

Error sistemático en μl
- 1.52 - 0.24 - 0.73
Error sistemático máximo permitido*
± 8.0 ± 8.0 ± 8.0
en μl

Error aleatorio en μl
+ 0.47 + 0.70 + 0.21
Error aleatorio máximo permitido* en
± 3.0 ± 3.0 ± 3.0
μl

Incertidumbre expandida en μl
± 0.37 ± 0.67 ± 0.16
k=2

Resultados de calibración de la pipeta de pistón de desplazamiento de

aire, con volumen variable de 100 μl a 1 000 μl, marca zxx, No. Serie
11Z7235.
 Informe de Resultados
ejemplo

Notas:
• La pipeta calibrada cumple con los requisitos metrológicos especificados en
ISO/8655-2:2002 en los volúmenes de 500 μl y 1 000 μl. Se recomienda no
utilizarla para los volúmenes de 100 μl.

• Los valores de volumen reportados en la tabla 1 están referidos a condiciones

normalizadas (temperatura 20°C)

• Los resultados mostrados en la tabla 1, representan el promedio de 10

mediciones realizadas por el método gravimétrico.

• Error sistemático máximo permitido* y error aleatorio máximo permitido*

(tolerancias) en pipetas de pistón de conformidad ISO/DIS 8655-2:2002.

• La Incertidumbre mostrada en la tabla se expresa con un factor de cobertura

k=2 y se basa en la Guide to the Expresión of Uncertanty in Measurement,
BIPM, IEC, IFCC, ISO, IUPAC, IUPAP, OIML 1995.
¡Muchas gracias por su atención!

El Salvador, noviembre de 2015