Metodos de Laboratorio

Graham
FUNDAMENTO: Consiste en tomar una muestra de la región perianal con ayuda de una
cinta adhesiva transparente para poder observar los huevos de este parásito y, de esta
manera, hacer el diagnóstico.
UTILIDAD: El test de Graham es una prueba muy sencilla que permite diagnosticar la
parasitación por nematodos.
METODOLOGIA:
1. Separar los glúteos del paciente para que quede expuesta la región perianal,
donde se localizan los huevos del nematodo.
2. Aplicar la superficie adhesiva a la región anal y perianal.
3. Retirar la cinta adhesiva y pegarla a lo largo del portaobjetos.
VENTAJAS/DESVENTAJAS:
VENTAJAS: DEVENTAJAS:
 No invasiva  Son necesarias 3 muestras

 Bajo costo  Tiempo prolongado hasta
 Especifidad y sensibilidad diagnostico
adecuada  Posibilidad de falsos negativos
 Permite diagnosticar otras por eliminación intermitente de
parasitosis parásitos o mala técnica de
recogida
Ritchie
FUNDAMENTO: Se basa en el uso de la fuerza centrífuga que obligara a los parásitos a
ir al fondo del tubo, del éter que elimina los detritus orgánicos, mientras que el formol
ayuda a mantener la integridad de las formas parasitarias que se concentran.
UTILIDAD: Es de utilidad para la búsqueda de huevos quistes y larvas. Es empleada
cuando no se observan parásitos en el método directo y para aumentar la probabilidad
de observar parásitos en las muestras estudiadas.
METODOLOGIA:
1. En un frasco de boca ancha, tenemos que mezclar aproximadamente 1 gramo
de heces (o una porción de muestra de 1 cm de diámetro) con 9 volúmenes de
solución fisiológica. Se disgregan con una varilla de vidrio hasta obtener una
suspensión homogénea.
2. Filtrar la suspensión a través de una doble gasa colocada en embudo, la
suspensión se recoge en un tubo cónico (15 ml).
3. Centrifugar la suspensión contenida en el tubo por 2 minuto a 1500 rpm.
4. Descartar el sobrenadante, luego agregar 5 ml de solución fisiológica para re
suspender el sedimento. Agregar solución fisiológica hasta enrasar el tubo
(aprox 12 ml).
5. Agregar 10 ml de formol al 10%, re suspender el sobrenadante agitando y dejar
reposar durante 10 minutos.
6. Añadir 2 ml de solución de éter y agitar vigorosamente durante un 1 minuto
7. Centrifugar el tubo a 1500 rpm durante 2 minutos.
8. Decantar el sobrenadante y con un hisopo limpiar el interior de las paredes
para evitar que los restos fecales contaminen el sedimento. Proceder a la
visualización microscópica.
VENTAJAS/DESVENTAJAS: Tiene la ventaja de remover materias líquidas, y disolver
grasas y coloidales para obtener un sedimento más claro. Y su desventaja es que es
una técnica laboriosa ya que requiere mayor tiempo de trabajo.
Seather
FUNDAMENTO: Se basa en la flotación de quistes, ooquistes y huevos de parásitos en
una solución de azúcar que posee mayor densidad que ellos.
UTILIDAD: Esta técnica es útil para la concentración de quistes y ooquistes de
protozoos y huevos de helmintos y se usa como método preferencial en el diagnóstico
de los coccidios: Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora, etc.
METODOLOGIA:
1. Homogeneizar 1 a 2 g de materia fecal en suero fisiológico.
2. Colocar un embudo de vidrio con una gasa doblada en la abertura del tubo de
ensayo y filtrar el material homogeneizado.
3. Centrifugar el tubo con el material homogeneizado a 1 500 r.p.m. durante 2 a 5
minutos.
4. Eliminar el sobrenadante, y agregar la solución de azúcar hasta 1 cm del borde
del tubo, agitar hasta disolver el sedimento, centrifugar como en el paso
anterior, completar con la solución de azúcar hasta el borde y esperar de 2 a 5
minutos la formación de un menisco.
5. Con la ayuda del asa de platino, tomar una muestra de la superficie del menisco
y colocarla en una lámina portaobjeto, agregar lugol, cubrir con una laminilla y
observar al microscopio.
VENTAJAS/DESVENTAJAS: Su ventaja es que es un procedimiento rápido, Y su
desventaja es que los parásitos de mayor peso que la solución empleada no flotaran.
Kato – Katz
FUNDAMENTO: Utilización de glicerina como aclarante y el verde de malaquita como
colorante de contraste, además de un cubreobjeto de celofán humedecible, que es el
vehículo para la solución de Kato.
UTILIDAD: La técnica de Kato-Katz es la utilizada habitualmente para diagnosticar la
infestación por Schistosoma mansoni.
METODOLOGIA:
1. Con un aplicador (baja lengua) transferir la muestra fecal (0,5-1g) sobre el papel
absorbente.
2. Colocar una malla o nylon de 2 x 3 cm. sobre la muestra.
3. Con el aplicador del kit comprimir la malla para tamizar la muestra.
4. Colocar el molde de plástico sobre la lámina portaobjeto y rellenar la
perforación con la muestra tamizada.
5. Levantar el molde dejando el “cilindro” de la muestra en la lámina portaobjeto.
6. Colocar la laminilla glicerinada con verde de malaquita sobre la muestra y
presionar sobre la laminilla, buscando extender la muestra.
7. Dejar para la diafanización a temperatura ambiente de 30 a 45 minutos.
VENTAJAS/DESVENTAJAS: Su ventaja es que permiten la recolección de quistes,
ooquistes, huevos y larvas del sedimento de una muestra preservada de heces,
mostrando una capacidad de identificación de helmintos del 99 y 100%
respectivamente. Tiene como desventaja que se debe realizar el análisis microscópico,
en un periodo de tiempo no máximo a 48 horas, debido a que los huevos contenidos
en la muestra tienden a degradarse después de este lapso de tiempo.
Directo
FUNDAMENTO: Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas
evolutivas móviles de parásitos de tamaño microscópico.
UTILIDAD: Considerado como un diagnóstico de certeza que permite determinar o
precisar el agente causal por hallazgo del parásito o de sus elementos morfológicos.
METODOLOGIA:
1. Colocar en un extremo de la lámina portaobjeto una gota de suero fisiológico y,
con ayuda de un aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia fecal, emulsionarla y
cubrirla con una laminilla cubreobjetos.
2. Colocar en el otro extremo de la lámina portaobjeto, una gota de lugol y
proceder a la aplicación de la muestra fecal como en el párrafo anterior.
3. Con el suero fisiológico, los trofozoítos y quistes de los protozoarios se
observan en forma natural, y con lugol, las estructuras internas, núcleos y
vacuolas.
VENTAJAS/DESVENTAJAS: Su ventaja es que permite ver el parasito vivo, así como
células intestinales, inflamatorias y productos de una mala digestión o absorción de los
alimentos. Su desventaja es que ya que usa escaso material a veces es necesario
utilizar métodos de concentración.
Baerman
FUNDAMENTO: Se basa en los tropismos positivos: geotropismo, termotropismo e
hidrotropismo de los trofozoítos de protozoos y larvas de helmintos.
UTILIDAD: Es útil principalmente para Balantidium coli y larvas de Strongyloides
stercoralis.
METODOLOGIA:
1. Colocar la coladera o rejilla metálica con la gasa doblada (2 a 3 capas) dentro de
la copa.
2. Colocar sobre la gasa, 4 a 6 g de la muestra de heces en fresco.
3. Verter solución salina a 37ºC en cantidad suficiente por el borde de la copa.
4. Dejar a temperatura ambiente o en estufa a 28ºC - 37°C de 30 a 50 minutos.
5. Sacar la coladera o rejilla y con ayuda de una pipeta Pasteur obtener 1 mL de
sedimento.
6. Colocar el sedimento en una luna de reloj o lámina cavada y observar al
microscopio.
VENTAJAS/DESVENTAJAS: Una de sus ventajas es que el material empleado es sencillo
y se pueden usar muestras relativamente grandes (no necesitas estar cuidando las
cantidades). Y su desventaja es que es una técnica de larga ejecución que requiere
muchas manipulaciones.

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