UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

EA.P: Microbiología y Parasitología

CURSO: Laboratorio de análisis clínicos
TEMA: Perfil lipídico
DOCENTE: Llenque Diaz Luis
ESTUDIANTE: Bustamante Silva Omar Renato
CICLO: VII
TRUJILLO-PERÚ 2021
 Determinación de
amilasa

Fundamento Reactivos Calculo de los Valores de referencia

resultados

Condición clínica Suero Orina

Su fundamento consiste en que un tubo con almidón tamponado, • Sustrato: Solución de almidón (UA/dl) (UA/hora)
mezclado con la muestra de amilasa, produce una hidrólisis 500 mg/L, con buffer fosfato, pH Normal Pancreatitis < 120 < 260
aguda 300 a 12.000 más de 900
enzimática del almidón, que se detiene en un tiempo definido por 7. Pancreatitis crónica hasta 200 más de 300
Parotiditis 200 a 350 350 a 750
el agregado de reactivo de iodo que paraliza la reacción, que al • Reactivo de iodo: Solución 0.01 Parotiditis c/ complicación más de 350 más de 750
mismo tiempo produce un color azul intenso con el remanente de eq / L de iodo en HCI. pancreática
normal normal
Procesos abdominales
almidón no hidrolizado. agudos (sin pancreatitis)
En un tubo control que solo contiene almidón, se agregara el
reactivo de iodo que habrá una reacción dando una coloración. Procedimiento
Interpretación clínica
En dos tubos de fotocolorímetro
marcados C (Control) yD Una unidad Amilolítica (UA) es la
(Desconocido) colocar: cantidad de enzima contenida en 100 Si los resultados muestran un
mililitros de muestra, que puede nivel anormal de amilasa en la
La diferencia de absorbancia entre sangre o en la orina, podría ser
el tubo que contiene la muestra y el COMPONENTES C D hidrolizar 10 mg de almidón en 30
minutos, en las condiciones de la un trastorno del páncreas u otro
tubo control es la medida de la Sustrato, ml 1 1
reacción. problema médico
actividad enzimática, que se Dejar en baño maría a 37 º C por 3 minutos y agregar:
expresa en Unidades Amilolíticas/dl
(UA/dl). Muestra, ul --- 20 Un nivel alto de amilasa podría indicar: Pancreatitis
Incubar a 37 º C . después de 7.5 minutos, agregar: aguda, una inflamación repentina y grave del
Reactivo de yodo, ml 1 1 páncreas. Si se trata con rapidez, generalmente
Mezclar por agitación suave. Retirar los tubos del baño maría y agregar: mejora en pocos días

Agua destilada, ml 8 8

Mezclar por inversión. Leer en

espectrofotómetro a 640 nm, llevando
a cero el aparato con agua destilada.
 Determinación de
triglicéridos

Fundamento Reactivos Obtención del factor Valores de referencia

• Reactivo A: solución conteniendo buffer Good 200 g/l Deseable: < 1,50 g/l
Se fundamenta en que a medida que los triglicéridos van siendo
(pH 6,8), clorofenol, lipoprotein lipasa (LPL), TG (g/l) = D-B x factor factor = Moderadamente elevado a
transportados por los quilomicrones, la lipoproteína lipasa va
glicerol kinasa (GK), glicerol fosfato oxidasa S-B elevado: 1,50 - 1,99 g/l
rompiendo los enlaces liberando ácidos grasos y al glicerol, el
(GPO), peroxidasa (POD), adenosina trifosfato Elevado: 2,00 - 4,99 g/l
glicerol que se genero en la reacción se activa con el ATP por (ATP) y 4-aminofenazona (4-AF). S. Muy elevado:  5,00 g/l
medio de la glicerol kinasa, generando glicerol 1-fosfato que será
• Standard: solución de glicerol 2,26 mmol/l Conversión de unidades
oxidado por una enzima oxidasa, generando peróxido de Triglicéridos (g/l) = 0,01 x Triglicéridos
hidrogeno, que en presencia de la 4-Aminofenasona, del fenol y (equivale a 2 g/l de trioleína).
(mg/dl) Interpretación clínica
de la enzima peroxidasa forma un compuesto de color rojo. Triglicéridos (mg/dl) x 0,0113 =
Procedimiento Triglicéridos (mmol/l)
Las concentraciones elevadas
de TG se asocian a tener un
mayor riesgo de desarrollar una
En tres cubetas espectrofotométricas enfermedad cardíaca.
marcadas B (Blanco), S (Standard) y D
(Desconocido) colocar:

COMPONENTES B S D La hipertrigliceridemia puede

Standard, ul --- 10 --- obedecer a distintas causas como:
•Dieta hipercalórica o rica en grasas
Muestra, ul --- --- 10 saturadas, grasas trans y colesterol.
•Sedentarismo, sobrepeso,
Donde: Reactivo A 1 1 1 obesidad.
•Consumo de tabaco.
GPO: Glicerol fosfooxidasa
Mezclar, incubar 5 minutos a 37o C o 20 minutos a •Consumo excesivo de alcohol.
POD: Peroxidasa
temperatura ambiente (18-25o C). Enfriar y leer en
4-AF: 4-aminofenasona espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a
cero con agua destilada.
 Determinación de HDL

Fundamento Reactivos Calculo de los Valores de referencia

resultados

Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se separan precipitando • Reactivo A: solución de sulfato
Los valores esperados de HDL
selectivamente las lipoproteínas de baja y muy baja densidad de dextrán (PM 50.000) 0,032
colesterol son los siguientes: Varones:
(LDL y VLDL) mediante el agregado de sulfato de dextrán de PM mmol/l.
30 - 70 mg/dl Mujeres: 30 - 85 mg/d
50.000 en presencia de iones Mg++. • Reactivo B: solución de cloruro
En el sobrenadante separado por centrifugación, quedan las HDL de magnesio 1,5 M.
y se realiza la determinación del colesterol ligado a las mismas,
empleando el sistema enzimático Colesterol oxidasa/Peroxidasa Interpretación clínica
con colorimetría. Procedimiento Donde:
VFE = volumen final de extracto = 0,7 ml Niveles menos de 40 mg/dL de
VM = volumen de muestra procesada = HDL es uno de los principales
En un tubo de Kahn medir 200 ul de muestra, y 0,2 ml factores de riesgo de enfermedad
VRE = volumen de reacción con extracto
agregar 500 ul de reactivo precipitante. = 2,2 ml del corazón
Homogeneizar agitando durante 20 segundos y dejar VRS = volumen de reacción con Standard =
30- 40 minutos en refrigerador. En 3 tubos marcados 2,02 ml
B, S y D colocar: VS = volumen de Standard en la reacción =
0,020 ml VE = volumen de extracto en la
B S D reacción = 0,2 ml
Si se emplean volúmenes de Reactivo
Sobrenadante - - 200 ul diferentes de 2 ml el factor 0,762 varía y debe
ser calculado nuevamente, reemplazando en
Standard - 20 ul - la fórmula VRE y VRS.
Reactivo de Trabajo 2 ml 2 ml 2 ml

Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C si se usa el reactivo de

trabajo de Colestat enzimático AA/líquida o 15 minutos a
37°C cuando se usa el de Colestat enzimático.
Leer a 505 nm en espectrofotómetro o en colorímetro con
filtro verde (490-530 nm), llevando a cero con el Blanco
 Determinación de
proteínas totales

Fundamento Reactivos Obtención del factor Valores de referencia

A. Reactivo A: complejo EDTA/Cu 13

mmol/l en hidróxido de sodio 875 Se determinó el contenido de proteínas
Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico, en
mmol/l y alquil aril poliéter (AAP) totales en suero de personas sanas, de
medio alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de
B. S. Standard (Suero Patrón): solución de ambos sexos, con alimentación mixta
absorción a 540 nm, cuya intensidad es proporcional a la concentración
albúmina y globulinas de origen bovino, normal y edades entre 17 y 40 años;
de proteínas totales en la muestra.
con título conocido de proteínas y obteniéndose los siguientes rangos:
albúmina. Conversión de unidades al sistema SI Proteínas totales: 6,1 a 7,9 g/dl
Proteínas totales (g/dl) x 10 = Proteínas
totales (g/l)
Procedimiento Interpretación clínica

En tres tubos marcados B (Blanco), S

El nivel elevado de proteína en la
(Standard) y D (Desconocido),
sangre (hiperproteinemia) es un
colocar:
aumento de la concentración
de proteína en el torrente sanguíneo.
B S D Por lo que podría indicar que se padece
Agua destilada 50 ul - - alguna enfermedad
Standard - 50 ul -
Muesta - - 50 ul
Reactivo A 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml

Mezclar con varilla. Incubar 15 minutos a 37o

C. Leer en espectrofotómetro a 540 nm o en
fotocolorímetro con filtro verde (520-560 nm)
llevando a cero con el Blanco de Reactivo.
 DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO

FUNDAMENTO REACTIVOS VALORES DE REFERENCIA

OBTENCIÓN DEL FACTOR
▪ (S) Standard*: solución de ácido úrico 10 mg/dl. ▪ Suero o plasma:
▪ Reactivo A: solución conteniendo buffer Good pH Hombres: 3,5-7,2 mg/dl
Se fundamenta en medir la cantidad de 7,8 y la sal sódica de 3,5 diclorohidroxibenceno
ácido úrico en sangre o en orina. Mujeres: 2,6-6,0 mg/dl
sulfónico (DHS). ▪ Orina: 250 a 750 mg/24 horas
El ácido úrico es un producto de desecho ▪ Reactivo B: solución conteniendo buffer Good pH
normal que se produce cuando el cuerpo 7,8, 4-aminofenazona (4-AF), uricasa (UOD),
descompone sustancias químicas peroxidasa (POD), y ferrocianuro de potasio. INTERPRETACIÓN CLÍNICA
llamadas purinas, estas son sustancias ▪ Reactivo único: mezclando 4 partes de Reactivo A
que se encuentran en las células del + 1 parte de Reactivo B (ej. 4 ml Reactivo A + 1 ml
cuerpo y también en algunos alimentos. Reactivo B). Niveles más altos de lo normal: Indica
presencia de ácido úrico cristalizado en tejido
y articulaciones, siendo muy probable que
PROCEDIMIENTO existan enfermedades como la gota o cálculos
renales.
Niveles más bajos de lo normal: Podría indicar
TÉCNICA CON REACTIVOS TÉCNICA CON REACTIVO un mal funcionamiento de los riñones
TÉCNICA EN ORINA
SEPARADOS ÚNICO (elevada excreción de ácido úrico), dieta
vegetariana o con poco contenido de purinas.
La cantidad de ácido úrico se En tres tubos marcados B (Blanco), S Utilizar la misma técnica (I
Proceder como en la Técnica I o II) diluyendo la orina
determina midiendo la absorbancia (Standard o Calibrador) y D (Desconocido), pero utilizando 1 ml de Reactivo
de este pigmento. colocar: 1/10 con agua o solución
único preparado en proporción fisiológica.
Donde: 4+1.
▪ UOD: uricasa
▪ POD: peroxidasa Mezclar suavemente e incubar 5 minutos en
▪ 4-AF: 4-aminofenazona baño de agua a 37ºC o 20 minutos a
▪ 3,5-DHS: sal sódica de 3,5- temperatura ambiente (18-25ºC). Retirar,
diclorohidroxibenceno sulfónico enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm
o en fotocolorímetro con filtro verde (490-
530 nm), llevando el aparato a cero con el
Blanco.
 DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL

FUNDAMENTO PROCEDIMIENTO OBTENCIÓN DEL FACTOR VALORES DE REFERENCIA

Deseable: < 2,00 g/l

Este método se basa en el uso de En tres tubos de fotocolorímetro o Moderadamente alto: 2,00 - 2,39 g/l
enzimas: colesterol oxidasa (CHOD) y cubetas espectrofotométricas marcadas B Elevado: ≥ 2,40 g/l
peroxidasa (POD). En presencia de este (blanco), S (standard) y D (desconocido)
último la mezcla de fenol y 4-
INTERPRETACIÓN CLÍNICA
aminoantipirina (4-AF) se condensan por ▪ Conversión de unidades:
acción del peróxido de hidrógeno, Colesterol (g/l) = colesterol (mg/dl) x 0,01
formando una quinona coloreada colesterol (mmol/l) = colesterol (g/l) x Demasiado colesterol malo puede
proporcional a la concentración de 2,59 aumentar la probabilidad de padecer una
colesterol en la muestra que absorbe a Colesterol (g/l) = colesterol (mmol/l) x enfermedad cardíaca, accidente
505 nm. 0,39 cerebrovascular y otros problemas.

-Incubar 15 minutos en baño de agua a 37°C o 30 Algunos problemas que provocan un

minutos en baño de agua de 25°C (temperatura colesterol anormal:
ambiente). -Diabetes
-Leer en fotocolorímetro con filtro verde (490-530) o -Enfermedad renal
espectrofotómetro a 505 nm, llevando el aparato a -Síndrome ovárico poliquístico
cero con el Blanco. Leído dentro de las 2 h. -Embarazo y afecciones que
incrementan los niveles de hormonas
femeninas
-Glándula tiroides hipoactiva
 DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA

FUNDAMENTO REACTIVOS VALORES DE REFERENCIA E

OBTENCIÓN DEL FACTOR INTERPRETACIÓN CLÍNICA
▪ Reactivo A: solución conteniendo colesterol esterasa
´La determinación de ldl, es un ensayo 1000 U/l, colesterol oxidasa 1200 U/l, peroxidasa
1250 U/l, ascorbato oxidasa 3000 U/l, 4-
LDL colesterol (mmol/l) = LDL
homogéneo sin precipitación, en dos
pasos. aminoantipirina 1 g/l y tensioactivo 7 g/l en buffer colesterol (mg/dl) x 0,02586
MES 50 mM.
▪ Reactivo B: Solución conteniendo N,N-bis-(4- Valores de LDL colesterol en relación al
En el primero, se agrega un tensioactivo
sulfobutil)- m-toluidina disódica (DSBmT) 0,4 g/l y riesgo de contraer enfermedad cardíaca
(Reactivo A) que solubiliza las partículas
tensioactivo 10 g/l en buffer MES 50 mM. coronaria (ECC):
lipoproteicas no LDL. El colesterol
▪ Calibrador: Suero humano liofilizado conteniendo ▪ Riesgo bajo o nulo (sujetos normales):
liberado es consumido por la colesterol
lipoproteínas de diversos tipos incluyendo LDL. valores de LDL colesterol menores de 129
esterasa y la colesterol oxidasa en una
reacción sin desarrollo de color. mg/dl.
PROCEDIMIENTO ▪ Riesgo moderado a elevado (individuos
con probabilidad de contraer ECC):
Un segundo tensioactivo (Reactivo B) valores entre 130 y 189 mg/dl.
solubiliza las partículas de LDL Procedimiento general para LDL
▪ Riesgo muy elevado (individuos
formándose, por la presencia de enzimas Colesterol monofase AA
sospechosos de padecer ECC): valores de
y un Reactivo cromogénico, un color (AUTOMATIZADO)
LDL colesterol ≥ 190 mg/dl.
proporcional a la cantidad de LDL
colesterol presente en la muestra.

Calibración: El Calibrador se procesa junto con las muestras y en la

misma forma que éstas. Las concentraciones del Calibrador se
encuentran alrededor de los niveles de decisión médica y son
variables lote a lote.
 DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA

FUNDAMENTO REACTIVOS VALORES DE REFERENCIA

OBTENCIÓN DEL FACTOR
Reactivo B: solución de 3,3',5,5'-tetrabromo VALOR NORMAL: 3,5 a 4,8 g/dl
cresolsulfon ftaleína (en polioxietilén lauril éter).
La albúmina reacciona específicamente S. Standard (Suero Patrón): solución de f(g/dl)= concentración estándar de alb(g/dl) /
sin separación previa con la forma albúmina y globulinas de origen bovino, con
aniónica de la 3,3',5,5'-tetrabromo
densidad óptica S - densidad óptica B INTERPRETACIÓN CLÍNICA
título conocido de proteínas y albúmina. Albúmina(g/dl)= D-B X f
cresolsulfon ftaleína (BCF), en presencia Consultar los valores asignados en el rótulo,
de un exceso de colorante, debido a que los mismos son lote específico Un nivel de albúmina en la sangre por debajo
en medio tamponado a pH 3,8. de lo normal pueden ser un signo de:
El aumento de absorbancia a 625 nm ▪ Enfermedades renales o enfermedad
respecto del Blanco de reactivo, es
PROCEDIMIENTO
hepática
proporcional a la cantidad de albúmina ▪ El aumento de albúmina en la sangre
En tres tubos marcados B (Blanco), S
presente en la muestra. puede deberse a: Deshidratación
(Standard) y D (Desconocido), colocar: