EVALUACION DE LA VACUNA ANTIRRABICA INACTIVADA CEPA PASTEUR RIV EN

BOVINOS, MEDIANTE DESAFIO CON LA CEPA PATOGENA DE

VIRUS RABICO CAS8-aa a b

Sandra Cueva. Romero C

Jose Morale. Ruiz C

DIOdoro Batalla Campero C

Ellseo Hernandez-Baumgarten C

German Colmenare. Viladomat C

RESUMEN

Con el proposito de evaluar en ganado bovino la inmunidad conlerida por una vacuna inactivada de virus rabico,
elaborada en cultivos celulares, cepa Pasteur-RIV, se seleccionaron 17 bovinos machos raza Holstein de entre,
1 y 2 alios de edad, sin antecedentes de vacuna antirrabica y serologicamente negativos arabia. Se inmunizaron
12 animales con 1 ml por via intramuscular y 5 quedaron como testigos no vacunados. Despues de la vacunacion
no se observaron lesiones en la zona de aplicacion de la vacuna, ni se manilestaron reacciones de hipersensi­
bilidad en los animales vacunados. Se coleclaron muestras de suero los dias, 7, 14,21,30,60,90, 180,270,365,
440,547 Y 560 despu6s de la vacunaclon; ya los 7, 14,21, 30 Y 45 dias despues del desaflo. La determinacion
del titulo de anticuerpos se realizo por la prueba de seroneutralizacion utilizando ratones de 21 dias de edad. A
partir del dia 30 posvacunacion, todos los animales vacunados ten ian niveles de anticuerpos neutralizantes,
mismos que se mantuvieron durante los slguientes 17 meses. Los ani males fueron desafiados a los 560 dias
de iniciado el experimento, con la cepa de virus rabico CASS-88 empleando una dosis de 50 x 106 DI.5Q para
raton. Todos los animales del grupo testigo murieron de rabla entre los 10 y 12 dias posdesaflo; de los 12
anlmales vacunados, 9 sobrevivieron al desafio (75%) y los otros tres murieron entre los dias 19 y 30 (25%). Los
resultados indicaron que la vacuna antirrabica inactivada cepa Pasteur-RIV protegio a175% del ganado expuesto.
Tee. Pee. Mex. Vol. 29 No.1 (1991)

INTRODUCCION noclonales, fue posible de manera convin­

cente comprobar la existencia de los dife­
En los ultimos anos con la introduccion de rentes serogrupos del virus rabico que se
la tecnologfa basad a en los anticuerpos mo­ presentan en los diversos aislamientos, so­
bre todo cuando se trata de cepas epizooti·
a Recibido para publicacion el 5 de junio de 1990. cas aisladas de diferente especie animal y
b Este trabajo lue parcialmente financiado por area geografica*. Actualmente la Organiza­
INTERVET Mexico, SA de C.V. cion Mundial de la Salud distribuye un "kit"
c Proyecto Rabia. Centro Nacional de Investigaciones
de anti cuerpos monoclonales para efectuar
Disciplinarias en Microblologia. Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales y Agropecuarias. Secretaria la serotipificacion de los virus de rabia, asf
de Agricultura y Recursos Hidraulicos. Km 15.5 como virus patron pertenecientes a los se­
Carretera Mexico-Toluca, 05110, Mexico, D.F. rogrupos hasta hoy identificados. En un
* Organisation Mondiale de la Sante. Report 01 WHO
examen retrospectivo resulta claro que la
Workshop on NIH. Potency test for rabies vaccines.
proteccion conferida por algunas vacunas,
Geneva, 4-6 November 1985.

es poco eficiente debido a que los virus que

Report of German Green Cross/WHO Workshop on

Monoclonal antibody in rabies diagnosis and research.

se encuentran en los vectores pertenecen a
Tonbach, Federal Republic 01 Germany, 27·28 May
un serogrupo diferente al de las vacunas 2.
1984.
Para evaluar la efectividad de los diferentes
tipos de vacunas antirrabicas, existen diver­ luar la eficacia de una nueva vacuna inacti­
sas tecnicas de laboratorio diseriadas por la vada, elaborada en cultivos celulares con la
OMS 9, 13. Las vacunas antirrabicas para cepa Pasteur-RIV del virus de rabia, median­
bovin~s, elaboradas en cultivos celulares, te el desafio experimental con la Cepa
se han acreditado mediante el desafio expe­ CASS-88 6 .
rimental uno 0 dos arios despues de la in­
munizacion de los bovin~s, con un virus MATERIALES Y METODOS
rabico patogeno 1,5,10,14,15. EI criterio de
evaluacion de vacunas antirrabicas, que se Cepas de virus rabico:
sigue actual mente en el Centro Nacional de a) Vacuna: La vacuna empleada fue ~re­
Investigaciones Disciplinarias en Microbio­ parada a partir de la cepa Pasteur-RIV 1 de
log fa (CENID-M) ha side desarrollado con virus rabico, adaptado para crecer en la
base en las experiencias previas, dentro del clona CT de la linea celular BHK-21. EI virus
proyecto de Rabia Paralitica Bovina 3, 10, 15 fue inactivado con /1-propiolactona y sus­
que consiste en vacunar un lote de 10 bovi­ pendido en amortiguador de glicina con
nos y dejar un grupo con igual numero de 0.3% de Fosfato de aluminio (AIP04) como
testigos sin vacunar. EI desafio se efectua adyuvante, con un valor de 5.0 unidades en
uno 0 dos arios despues de la vacunacion, la prueba de NIH. Esta vacuna fue recibida
con una dosis de virus patogeno capaz de directamente de los laboratorios INTERVET
matar al 80% de los ani males testigos. En la de Holanda, en su presentacion comercial,
evaluacion mediante el desafio experimen­ la vacuna se conservo en estricta refrigera­
tal, se establecio que para que la vacuna se cion hasta su empleo 4 C.
considere adecuada, esta debera proteger b) Desafio: Se empleola Cepa CASS-88 5
cuando menos al 80% de los ani males va­ proporcionada por el Proyecto de Rabia del
cunados 10. CENID-MICROBIOLOGIA INFAP-SARH,
La vacuna cepa "ERA" elaborada en cul­ con un titulo de 107 . 1 D150/ml. en raton de 21
tivos celulares,' se probo mediante desafio dias.
experimental por Abelseth 1, utilizando co­
mo cepa de desafio un virus rabico aislado Diserio Experimental:
de glandulas salivales de zorra. Asi mismo, a) Bovinos: Se seleccionaron 17 bovinos
Sureau et al. 15, realizaron en Mexico una machos, raza Holstein adquiridos en una
evaluacion en bovinos vacunados con la zona libre de murcielagos hematofagos; sin
cepa "ERA" desafiados con el virus rabico antecedentes de vacunacion y serologica­
"V.319 GS", obtenido de las glandulas sali­ mente negativos arabia. Todos los animales
vales de un vampiro (Desmodus rotundus). fueron adquiridos en el mismo rancho y se
Hernandez, et al. 10, evaluaron en bovinos mantuvieron en observacion durante dos
la vacuna Alurabiffa producida en una linea semanas. Los bovinos se alojaron en las
celular derivada de embrion completo de instalaciones del CENID-M. Los animales
hamster, empleando para el desafio la cepa tomaron agua ad libitum y se alimentaron
de vampiro 5562/6bc. con una dieta comercial, suplementada con
14
En 1987 Soria, et al. realizaron en Mal­ una mezcla de rastrojo de maiz, alfalfa des­
zeville, Francia, la evaluaci6n de una vacuna hidratada y avena.
inactivada elaborada con cepa Pasteur RIV, b) Ratones: Se utilizaron 6628 ratones
empleando para el desafio una cepa de albinos cepa CD-1 de 21 dias de edad para
virus de campo de glandulas salivales de las pruebas de seroneutralizacion, titulacion
zorros muertos de rabia natural, obteniendo y reaislamiento del virus.
un 100% de proteccion en los bovinos vacu­ c) Grupos experimentales: Se formaron
nados a partir de una sola aplicacion de la dos grupos de animales: EI Grupo A, de 5
vacuna. bovinos no vacunados; yel Grupo B, cons­
EI objetivo del presente estudio fue eva­ tituido por 12 bovinos vacunados al inicio

-~- --~----~-----­
del experimento, por via intramuscular, en el reaislamiento viral se efectuo mediante la
la region glutea con 1 ml/animal, siguiendo tecnica descrita por Koprowsky 12.
las indicaciones del laboratorio productor
de la vacuna. Los bovin~s vacunados fue­ RESULlADOS V DISCUSION
ron alojados en un solo corral hasta que
alcanzaron un promedio de media tonelada a) Vacunacior.l: En los animales inmuni­
de peso; posteriormente fueron separados zados con la vacuna preparada con la cepa
en seis corrales, conteniendo dos animales Pasteur-RIV, no se manifestaron reacciones
cada uno, y permanecieron as! hasta el ter­ de hipersensibilidad, ni se observaron alte­
mine del experimento. Los bovin~s del gru­ raciones macroscopicas en la zona de apli­
po testigo se alojaron en un corral hasta que cacion. La evoluci6n de la respuesta serolo­
presentaron los primeros signos cHnicos de gica de los 17 bovinos durante el curso del
rabia posteriores al desaflo, despues se les experimento, se muestra' en la Figura 1,
coloco en corrales individuales hasta su donde no se observan variaciones estadfs­
muerte. Todos los animales fueron observa­ ticamente significativas en los tftulos de an­
dos diariamente. ticuerpos entre los mClestreos. En todos los
d) Pruebas serologicas: A todos los bo­ animales vacunados, el nivel de anticuerpos
vinos se les sangro por la vena yugular, fue detectable a partir del septimo dra pos­
utilizando tubos vacutainer* sin anticoagu­ vacunacion; al dra catorce, 6 de los 12 ani­
lante, con el siguiente calendario: 7, 14, 21, males tenicln anticuerpos neutralizantes;
30,60,90, 180,270,365,440,547 Y560 dras siete dras despues 11 de los 12 bovin~s; y
despues de la vacunacion; y 7, 14, 21, 30 Y al mes todos los animales alcanzaron nive­
45 dfas despues del desaffo. EI experimento les de anticuerpos neutralizantes, mismo
se dio por terminado 45 dras despues de la que se mantuvieron con un titulo promedio
muertc del ultimo animal del grupo testigo. (expresado como el recfproco de la dilucion
La determinacion de los niveles de anticuer­ que protegio al 50% de los ratones), de
pos, se realizo por la prueba de Seroneutra­ 1/465, durante eI experimento. La respuesta
lizacion descrita por Atanasiu 4. serologica de los bovinos vacunados se
e) Desaffo: EI desatro se realizo a los 560 resume en el Cuadro 1. En los animales
d!as despues de la vacunacion con la Cepa testigos no se detectaron anticuerpos anti­
CASS-88 de virus rabico, se apUcaron 20 rrabicos durante el curso del experimento;
mlianimal, por vra intramuscular, con una excepto un bovin~ que 12 dras despues del
dosis total de 50 x 106 DLsoIml raton; se desaffo present6 un nivel detectable de an­
repartio la dosis en la region de los muscu­ ticuerpos (Cuadro 2).
los maseteros derecho e Izquierdo. Antes y b) Desaffo a los 18 meses: La cepa de
despues de la inoculacion se tomaron desaffo aplicada en los bovinos no presento
muestras del inoculo para determinar su diferencia logarftmica en el titulo viral antes
titulo viral 11 ,12. Los bovinos fueron·observa­ y despues de su aplicaci6n. Los primeros
dos durante 90 dras despues del desaflo. signos clfnicos de rabia aparecieron en los
f) Identificacion y aislamiento del virus. animales del grupo testigo al octavo dla
Lqs bovin~s con signologla de rabia, que posdesafio, caracterizados por: salivacion
murieron 0 fueron sacrificados en la fase excesiva (Figura 2). lagrimeo, paralisis de
agonica, se sometieron a la necropsia. En los musculos hioideos y mandibulares, in­
todos los casos se tomaron muestras del coordinacion, postraci6n y muerte. Todos
sistema nervioso central (trigono olfatorio, los animales del grupo testigo murieron de
Cuerno de Ammon, cerebelo y medula rabia (100% de mortalidad), entre los dras
oblonga). EI virus de rabia se identifico ~or 10 y 12 posdesaffo (Cuadro 2). Tres de los
la tecnica de anticuerpos fluorescentes ; y bovin~s vacunados que al momento del de­
sano presentaban titulos de anticuerpos de
... Maroa Registrada por Becton Dickison. 1163,1/141 y 1/275 respectivamente. murie­

3
 CUADRO 1. RESPU
CEPAF

Bovino
1 0
2 0
3 0
4 0
5 0
6 0
7 0
8 0
9 0
t5 10 0
11 0
12 0

7 30 60 10 180 270 ~ 440 !160 607

* Los datos represer
DIAS de seroneutralizac
ND: No determinadc
Figura 1. Evoluci6n de la respuesta serol6gica promedio, durante 607 dias, en los doce bovinos vacunados con
la cepa Pasteur-RIV y desafiados (fIecha) al dia 560. Los titulos se expresan como el reciproco de la
diluci6n que protegi6 al 50% de los ratones en la prueba de seroneutralizaci6n.
ron entre los dla
niendo un 75% (
dos se presental
Todaslasmu
central obtenida
vinos que murie
dos en la fase c
""\<
rabia por la tecn
centes, y de todl
pero el virus en
sinoculacion. Lc
primeros signos
d fa posinoculaci
la fase paralftica
En todos los
tecta ron niveles '
a partir del se~
mantuvieron dUl
desaffo, 10 que in
una respuesta hi
EI desaffo de 10
CASS-88 se reali;
cion, presentand
Figura 2. La salivaci6n excesiva fue el signo principal mente observado en los bovinos del grupo testigo (no
vacunados), expuestos experimentalmente con la cepa CASS-88 de virus rabico.
4
CUADRO 1. RESPUESTA SEROLOGICA CONTRA EL VIRUS DE RASIA EN 12 BOViNOS VACUNADOS CON LA
CEPA PASTEUR-RIV DURANTE 560 DIAS

7 14 21 30 60 90 180 270 365 440 547 560

Bovino
0 5* 9 25 457 302 186 398 >525 >525 309 625 525
2 0 5 5 82 525 525 525 501 >525 >625 398 >625 525
3 0 5 66 37 398 436 525 257 >525 501 251 309 275
4 0 5 56 32 525 489 625 288 >525 354 >625 >525 >525
5 0 5 9 13 537 57 625 >625 >525 >625 407 625 625
6 0 5 10 61 525 625 625 501 398 75 53 63 63
7 0 5 5 45 525 338 525 269 218 147 33 100 223
8 0 5 9 125 625 625 625 269 125 251 104 125 525
9 0 5 91 32 625 625 625 501 >525 >625 380 625 625
10 0 5 11 66 234 526 525 >625 >625 501 79 141 141
11 0 5 11 70 234 625 625 >525 398 >625 169 501 398
12 0 5 NO 338 625 363 625 >625 510 >625 501 >625 >625

* Los datos representan el recfprooo de la diluci6n de suero que protegi6 al 50% de los ratones par la prueba
de seroneutralizaci6n 1
NO: No determinado

ron entre los dias 19 y 30 posdesafio, obte­ EI desafio experimental de los bovinos
niendo un 75% de proteccion. Los resulta­ ocasiono en todos los animales vacunados
dos se presentan en el Cuadro 2. que el tftulo de anticuerpos se elevara con­
Todas las muestras del sistema nervioso siderablemente al 70. dfa posdesaffo. Este
central obtenidas a la necropsia de los bo­ fen6meno ya ha sido observado 10, 15, 10
vinos que murieron 0 que fueron sacrifiea­ que confirma que cuando un animal esta
dos en la fase agoniea, fueron positivas a bien inmunizado, la exposici6n a un virus
rabia por la t{~cniea de anticuerpos fluores­ rabico de campo, actua como refuerzo, au­
centes, y de todos estos encefalos se recu­ mentando la respuesta inmune contra el
perc el virus en ratones, al septimo dia po­ virus rabico. Uno de los bovinos del grupo
sinoculaci6n. Los ratones presentaron los testigo present6 niveles de antlcuerpos de­
primeros signos clinicos a partir del sexto tectables por seroneutralizacion en rat6n,
dia posinoculaci6n y fueron cosechados en los otros permanecieron serol6gicamente
la fase paral itiea. negativos, esto debido posiblemente a la
En todos los bovinos vacunados, se de­ sensibilidad de la prueba, y considerando
tectaron niveles de anticuerpos antirrabicos que no se esta evaluando la inmunidad ce­
a partir del septimo dra, mismos que se lular en los bovinos.
mantuvieron durante los 560 dias antes del
desaffo, 10 que indica que la vacuna ~onfiere CONCLUSION
una respuesta humoral duradera, 1, 0,14,15.
EI desafio de los 17 bovinos con la Cepa La respuesta serol6giea de los doce bovi­
CASS-88 se realizo a los 560 dfas posvacuna­ nos a partir de una sola aplieacion del bio­
cion, presentando una protecci6n del 75%. logico, suglere que es una vacuna con un

5
CUADRO 2. RESPUESTA SEROLOGICA POSTERIOR AL DESAFIO EXPERIMENTAL CON LA CEPA DE VIRUS raclon en el tral
RABICO CASS-88 EN 17 BOVINOS Abel Clprian Ca
en la revision d
agradece a los
co, SA de C.'
7 14 21 30 45 bovinos utilizad
Bovine
1 625-'- 21379 363078 389045 389045 389045 SUMMARY

2 625 389045 389045 389045 389045 389045 In order to evaluat,

3 61 389045 891258 elicited by inactivat
ducen in cen cultur
4 625 389045 36307 389045 389045 77624 steers were selecte
5 625 389045 389045 389045 389045 251188 history of antirrabie
table antibodies to
6 269 17182 22908 363078b immunized with 1 r
7 218 77624 389045 389045 389045 389045 ted control group c
or hypersensibility I
8 625 45708 389045 251188 181970 1 30902 cination site. Seru~
9 625 389045 389045 389045 389045 389045 14, :1, 30, 60, 90,
postir.oculation anc
10 138 251188 389045 389045 338844 c
nenge. The seronel
11 389 389045 389045 389045 389045 389045 to determine the a
12 625 389045 389045 389045 389045 389045 animals had prote(
postvaccination, wt
13* 0 Od of the experiment. !
14* 0 Oe postvaccination usi
(50 x 106 0150 in r
15* at
16* °
0 09
rabies between 10
as three from the v:
and 30. The remain
17* 0 100h
ved the challenge,
inactivated rabies \
ted 75% of cattle
* Los datos representan el reciproco de la diluci6n de suero que protegi6 al 50% de los ratones en la prueba rabies for at least 1
de seroneutralizaci6n 1.
+ EI desaffo se realiz6 560 dfas posvacunaci6n con la cepa CASS-88. LlTERATURA em
a Muri6 a los 19 dias posdesaffo.
b Muri6 a los 24 dias posdesaffo.
c Muri6 a los 30 dias posdesafio. 1, ABELSETH. MK
* Animal del grupo testigo no vacunado. ne for domestic ani
d Muri6 a los 10 dfas posdesaffo. Cal') Vet J, 5, 11: 2,
e, f Mueren a los 11 dfas posdesafio.
g, h Mueren a los 12 dias posdesaflo, 2. AGUILAR·SETIH
YKRETSCHMER, R
en Rabia. En: Avar
1985. Editado por:
buen potencial como vauna inactivada con­ na merece un estudio mas a fondo en con­ man, G., 48·53. Sec
tra cepas Americanas del virus rabico. Los diciones de campo, pues promete ser efec­
resultados indicaron que la vacuna antirra­ tiva para prevenir la rabia paresiante bovina. 3,· ARELLANO, S.C
biea inactivada, elaborada en cultivo celular 1971. Evahmci6n dl
con la Cepa Pasteur RIV, protegio e175% del cacepa "ERA"enb,
AGRADECIMIENTOS Max. 18: 12-15,
ganado contra el virus rabico de campo
(Cepa CASS-a8) a una dosis de exposicion Los autores expresan su agradecimiento al 4. ATANASIU, P., 1
de 50 x 106 0150 en raton. Es opinion de los Subdirector de Servicios Tecnicos Esteban teney test of antiral
aulares. que las concliciones de desaffo ab­ Labrandero Inigo y al porsonal a su cargo In: Laboratory Teel
ser'Jadas en este experimento sedan diflci­ par la ayuda prestad:l en 01 manejo de los by: Kaplan, M, M.
les tJe ()cun-ir en una exposici6n natural de 314·320 WHO, Gen,
semovientes durante 1;1 experimento; asf co­
Ct1r.jY.l por!o que conskiBramos que la vacu­ mo a Eulalia Sanche.' Valdez par su colabo­

---------- ...~~
....
raci6n en el trabajo de laboratorio y al Dr. 5. Code of federal regulations. The National Archives of
the United States. Parts 1 to 199. As of January. 1982.
Abel Cipriiln Carrasco por su valiosa ayuda
en la revisi6n del documento. Tambien se 6. CUEVAS, R.S., COLMENARES, V.G., BATALLA, C.D.
agradece a los Laboratorios Intervet Mexi­ y HERNANDEZ BAUMGARTEN, E., 1989. Selecci6n de
co, SA de C.V. par la donaci6n de los un virus rablco de origen vampiro para utilizarse como
bovinos utilizados en el experimento. cepa de desaflo en bovinos. Vet. Mex. 20.

SUMMARY 7. Departamento de Control de Productos Biol6gicos,

Farmaceuticos, Alimenticios y Equipo paraAnimales.,
In order to evaluate the immune response in oattle 1977. Requerimientos mlnimos de productos biol6gi­
elioited by inactivated vaccine strain Pasteur-RIV pro­ cos para bovinos, En: Requlsltos Mlnimos de Calidad
duoen in cell culture, 17 one of two year old Holstein que deberan lIenar los Productos Biol6gicos para Uso
steers were selected on the basis of their having no Veterinario, Seccl6n. III parte B-2. Editado por la Se­
history of antirrabies vaccination as well as no detec­ cretaria de Agricultura y Recursos Hidraulicos. Subse­
table antibodies to rabies virus. Twelve animals were cretarra de Ganaderra. Direcci6n General de Sanidad
immunized with 1 ml of vaccine I.M. The nonvaccina­ Animal. Mexico, D.F.
ted control group consisted of 5 animals. No lesions
or hypersensibility reaction were observed at the vac­ 8. GOLDWASSER, R.A. and KISSLING, R.E., 1958.
cination site. Serum samples were taken on days 7, Fluorescent antibody staining of street and fixed ra­
14. ~1, 30, 60, 90, 180, 270, 365, 440, 547 and 560 bies virus antigens. Proc. Soc. expo BioI. N.Y. 98:
postir.oculation and 7, 14, 21, 30 and 45 days postcha­ 219-223.
Ilenge. The seroneutralization test in mice was used
to determine the antibody titres. All the vaccinated
animals had proteotive antibody levels from day 30 9. HABEL, K., 1973. Habel test for potency. In: labo­
postvaccination, which were maintained until the end ratory Techniques in Rabies. 3rd. ed. Edited by: Ka­
of the experiment. Animals were challenged 560 days plan, M.M., and Koprowsky, H., Series No. 23. 276­
postvaccination using the vampire bat strain CASS-88 277. WHO, Geneva.
(50 x 106 01 50 in mice). All control animals died of
rabies between 10 to 12 days postchallenge, as well 10. HERNANDEZ, BE, MORALES, R.J., ARELLANO,
as three from the vaccinated group between days 19 S.C., CAMPOS, V.J., LOPEZ, B.B. y PEREZ, R.H.,
and 30. The remaining nine vaccinated animals survi­ 1976, Evaluaci6n de una vacunacomercial antirrabica
ved the challenge. These results indicate that the inactivada para bovinos, producida en cultivo de teji­
inactivated rabies vaccine strain Pasteur-RIV protec­ dos (Alurabiffa). Tec. Pee. Mex. 30: 57-63.
ted 75% of cattle against vampire bat transmitted
rabies for at least 18 months. 11. KOPROWSKY, H., 1973. The mouse inoculation
test. In:' Laboratory Techniques in Rabies. 3rd ed.
LlTERATURA CITADA Edited by: Kaplan, M.M., Koprowsky, H., Series No.
23285-93. WHO, Geneva.
1. ABELSETH, M.K., 1964. An attenuated rabies vacci­
ne for domestic animals produced in tissue cultures. 12. LORENZ,R.J. and BOGEL, K., 1973. Method of
Can Vet J, 5, 11: 279-286. Reed and Muench. In: Laboratory Techniques in Ra­
bies. Appendix 1. 3rd ed. Edited by: Kaplan, M.M.,
2. AGUILAR-SETIEN, A., PASTORET. P.P., OROS, C.D. Koprowsky, H., Series No. 23. 329-332. WHO, Geneva,
Y KRETSCHMER, R.. 1986. Anticuerpos monoclonales
en Rabia. En: Avances en el Uso de Vaounas 1885­ 13. SELIG MANN, E.B., 1973. The NIH test for potency.
1985. Editado por: Garza-Ramos, J. Franco de Guz­ In: Laboratory Techniques in Rabies. 3rd. ed. Edited
man, G., 48-53. Secretarfa de Salud, Mexico, D.F. by: Kaplan, M.M., Koprowsky, H., Series No. 23. 279­
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