INFORME DE LABORATORIO 1,2,3

MICROORGANISMOS

Montoya Posada Andrés Felipe, López Quintero Pamela, Echavarría González Esteban
Microbiología Sanitaria, Programa de Ingeniería Sanitaria, Universidad de Antioquia.
Docente: Jorge Mario Berrio Restrepo
09 de abril de 2023

Resumen: Los microorganismos son organismos dotados de individualidad que presentan, a

diferencia de las plantas y los animales, una organización biológica elemental. Los diferentes tipos de
microorganismos son bacterias, hongos, protozoos. El análisis de microrganismos se realiza a través
de medios de cultivo, con técnicas de inoculación o siembra que permita su desarrollo y
multiplicación. Para esto se tomaron muestras de aire, agua, suelo, superficies y flora corporal.
Después se hizo el proceso de incubación a temperatura adecuada y a un tiempo determinado. Luego
de una semana de cultivar las muestras se realizó la respectiva caracterización de las bacterias por
medio de la observación macroscópica y microscópica del crecimiento microbiano en un medio de
cultivo. A través de la tinción de Gram se observó la identificación de bacterias Gram-positivas y
Gram-negativas. También se observaron las características macroscópicas y microscópicas de las
colonias de hongos como algodonosas, pulverulentas, aterciopeladas, granular y rugosas en las
muestras de aire y de flora corporal. Los microorganismos participan en procesos ecológicos que
permiten el funcionamiento de los ecosistemas, que son esenciales para la industria farmacéutica,
alimenticia y médica, por ejemplo, los microorganismos son beneficiosos para producir oxígeno,
descomponer material orgánico, proporcionar nutrientes para las plantas y mantener la salud humana,
pero algunos pueden ser patógenos y causar enfermedades en plantas y humanos. Ellos son los
principales responsables de la descomposición de la materia orgánica y del ciclaje de los nutrientes
(carbono, nitrógeno, fósforo, azufre, etc.).
Palabras claves: Cultivo, crecimiento microbiano, colonias, tinción de Gram.

1. Introducción
La microbiología sanitaria es una rama esencial de la microbiología que se dedica al estudio de
microorganismos que pueden tener un impacto significativo en la salud pública y el bienestar humano.
Los microorganismos patógenos incluyen bacterias, virus, hongos y parásitos, y su identificación y
estudio es fundamental para prevenir y tratar enfermedades infecciosas. Para lograrlo, la
microbiología sanitaria utiliza una variedad de herramientas y técnicas para aislar y caracterizar
microorganismos. Entre las técnicas más importantes se encuentran el uso de medios de cultivo y los
métodos de identificación. Los medios de cultivo son sustancias o combinaciones de sustancias que
proporcionan los nutrientes necesarios para que los microorganismos crezcan y se multipliquen. Los
medios de cultivo se clasifican en base a su composición química, y pueden ser sólidos, semisólidos o
líquidos. La selección adecuada de un medio de cultivo es esencial para aislar y cultivar
microorganismos específicos. Además, los medios de cultivo son fundamentales en la identificación y
caracterización de microorganismos.
Los métodos de identificación utilizados en microbiología sanitaria incluyen tanto técnicas
convencionales como técnicas modernas. Los métodos convencionales incluyen pruebas bioquímicas,
serológicas, microscópicas y de tinción, mientras que los métodos modernos incluyen técnicas
moleculares, como la PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y la secuenciación de ADN. Cada
técnica tiene sus propias ventajas y desventajas, y la elección del método adecuado dependerá del
microorganismo que se esté identificando y de los recursos disponibles.
En este informe, se analizará en detalle la importancia de los medios de cultivo y los métodos de
aislamiento e identificación en microbiología sanitaria. Se describirán los diferentes tipos de medios
de cultivo y sus usos específicos, así como los principales métodos de identificación utilizados en la
actualidad. Además, se discutirá la importancia del control de calidad en la preparación y utilización
de medios de cultivo y en la interpretación de resultados de pruebas de identificación microbiana.

2. Metodología
Materiales

 Placas de petricon agar Plate County agar Sabouraud

 Tubos con Caldo Nutritivo
 Agua destilada estéril en tubos de ensayo
 Espátula de vidrio o espátula de Drigalski
 Muestras de agua y suelo
 Cinta de enmascarar marcador
 Aplicadores estériles
 Alcohol
 Mechero
 Guantes
 Frascos de vidrio estériles
 Pipetas graduadas pipeteadores
 Incubadora a 35 ±0.5ºC
 Balanza
 Laminas portaobjetos y cubre objetos
 Asas bacteriológicas de aro
 Cultivos de bacterias obtenidos en la práctica anterior
 Mechero
 Reactivos para coloración de Gram.
 Aceite de inmersión.
 Microscopio de campo claro.
 Azul de lactofenol
 Cinta pegante transparente
 Pinza
 Cultivos de hongos obtenidos en la práctica anterior.

Practica 1: Toma de muestras y técnicas de inoculación en medios de cultivo:

Las muestras que se obtuvieron fueron recolectadas en la Universidad de Antioquia, más
específicamente en la zona de la Fuente, las cuales fueron de aire, agua, y suelo.
Para la muestra de suelo se escogió un área aproximada de 10cm2 en el que la tierra estaba húmeda
para que fuera más fácil sacar a un metro de profundidad cerca de la fuente, y se procedió a sembrar
utilizando la técnica de siembra en caldo de cultivo, con 1 gr de tierra en un tubo de ensayo con 10 ml
de agua destilada , y se pesaron 10 gr de suelo para luego pasar a diluirlos en 90 ml de agua destilada,
cerca de la llama del mechero se pasó a inocular 1 ml en tubos con medio de cultivo líquido, para
llevar la muestra a la incubadora a 35±0.5 °C durante 48 horas aproximadamente.
Para tomar la muestra de aire se colocó la caja de Petri destapada con el agar expuesto durante 30
minutos directamente en el muro de la fuente. Pasado el tiempo de exposición, se pasó a incubar a 35
±0.5°C durante 24 a 48 horas. En la obtención de la muestra de agua, se llevó un frasco esterilizado y
se introdujo en la fuente y se tapó de inmediato de ser sumergido para evitar que se contamine la
muestra, luego cerca de la llama del mechero, se pasó a inocular 1 mililitro de la muestra en tubos con
un medio de cultivo líquido, y se llevó a la incubadora a 35±0.5 °C durante 24 a 48 horas.
Para la muestra de agua utilizando la técnica de siembra en superficie sobre agar con espátula de
Drigalski haciendo lo siguiente; se colocó la espátula de Drigalski en alcohol, se procedió a mezclar
el frasco con la muestra de agua y cerca de la llama del mechero, se depositó 0.01 mililitros sobre el
agar; después se pasó la espátula de Drigalski por la llama del mechero, se dejó enfriar para así
esparcir la gota de la muestra de agua cubriendo toda la superficie del agar, hasta que la muestra de
agua se haya absorbido completamente en el agar. se incubó a 35±0.5 °C durante 48 horas
aproximadamente.
En la toma de muestra de una superficie, se hizo la siembra sobre agar utilizando la técnica de
siembra por agotamiento, se seleccionó como objeto de estudio la cerradura de la puerta del
laboratorio de microbiología sanitaria, se procedió a humedecer un aplicador estéril en agua destilada,
se frotó la superficie seleccionada en sentido horizontal y luego en sentido vertical rotando el
aplicador, y cerca de la llama del mechero se pasó a sembrar en zig-zag sobre la superficie del agar
procurando no romperlo, y se llevaron las placas de Petri a la incubadora a 35±0.5 °C durante 24 a 48
horas.
En el procedimiento de la toma de muestra de flora corporal y siembra sobre agar se utilizó la
técnica de siembra por agotamiento tomando un aplicador estéril y rotándolo sobre la mucosa elegida,
que en este caso fue el mentón de uno de los integrantes del grupo de trabajo y dos muestras de saliva
de los otros integrantes, y cerca de la llama del mechero se pasó a sembrar en zigzag sobre la
superficie del agar procurando no romperlo y se llevaron las placas de Petri a la incubadora a 35±0.5
°C durante aproximadamente 24 a 48 horas.
Fue muy importante rotular las muestras y desinfectar el espacio de trabajo para evitar que las
muestras se contaminen con organismos externos.

Imagen 1. Lugar de muestra de suelo.

Imagen 2. Muestra de suelo.

Imagen 3. Muestra de agua.

Imagen 4. Muestra de agua y suelo en caldos.

Practica 2: Estudio macro y microscópico de bacterias:

A través de la figura 1 se muestra los procedimientos que se realizaron en el laboratorio para el
estudio de las bacterias mediante la tinción de Gram para identificar el tipo de bacterias presentes en
las muestras.
Para resaltar, en la tinción de Gram, se utilizó un esquema de tiempo para los reactivos de la siguiente
manera, esto respectivamente en orden según la figura 2: (1 minuto (violeta de genciana) – 1
minuto(Lugol) – 30 segundos (alcohol acetona) - 1 minuto (colorante de safranina)).

Figura 1. Diagrama de flujo practica 2.

Practica 3: Estudio macro y microscopico de hongos:

A través de la figura 2, se muestra los procedimientos que se realizaron en el laboratorio para el
estudio de los hongos, mediante la observación macroscópica y microscópica.
Para resaltar, en la observación microscópica se utilizó colorante azul de lactofenol.
Figura 2. Diagrama de flujo practica 3.

3. Resultados
Una vez ya ejecutado todo el procedimiento descrito en la metodología y tras inocular las muestras, se
presentaron los siguientes resultados:
Siembra de agua de la fluente.
Luego de haber recolectado agua del cuerpo de agua presente en la fuente principal de la universidad
de Antioquia se hizo un cultivo triple en un caldo de cultivo Fluorocult mx, como se puede apreciar en
la imagen 5. Luego de haber pasado por un periodo de incubación de 15 días presento como primera
instancia, turbidez, espuma y un olor característico que se puede encontrar en lixiviados, dando
entender el crecimiento microbiano de la muestra, pero no se encontró cambio de color azul o
fluorescencia, lo que descarto la presencia de coliformes.
Imagen 5. Muestras de agua inoculadas en Fluorocult mx.

Siembra de suelo de jardín.

Al recolectar material del suelo de jardín, presente en la biblioteca de la universidad de Antioquia, se
hizo una incubación por 15 días en un medio de caldo nutritivo, donde se evidencio la presencia de
turbidez y olor, como se puede observar en la imagen 6. como análisis se da a entender la presencia de
crecimiento microbiano durante el cultivo.

Imagen 6. Muestras de agua inoculadas en caldos nutritivos.

Siembra de muestras de flora corporal de la pared bucal.

Se obtuvo muestra de flora corporal bucal de dos compañeros, luego de inocular por 15, en un medio
de cultivo agar semisólido plate count días se evidencio la presencia de colonias, más abundante en el
compañero andres. En las colonias presentes, como se observan en la imagen 7, se observaron 2 tipos
principales, la primera, colonias con una forma circular bien definida, pigmentación blanca y una
textura aparente rugosa. El segundo tipo observado fueron colonias parecidas a las características de
la primera, pero con la diferencia fue en tamaño, mucho más pequeña y la forma de agrupación con
sus semejantes, evidenciando gran cantidad de colonias en forma semejantes a una lámina.
Imagen 7. Cultivo de las muestras de flora corporal en medio semisólido de plate count; pared bucal

Para la observación microscópica, se realizó la tinción de gram para una muestra del primer tipo de
colonia, luego de esto se pasó a su observación de 100x, donde evidencio principalmente
Staphylococcus grampositivos, como se puede observar en la imagen 8.

Imagen 8. Imagen a 100x teñidas con tincion de gram de las muestras de flora corporal; pared bucal.

Siembra de muestras de aire ubicado en la fuente.

Al recolectar las muestras de aire en la fuente principal de la universidad de Antioquia y luego por su
inoculación en dos tipos de medios de cultivo, saboraud y agar plate count , donde se cultivaron
durante 22 días se encontraron los siguientes resultados:
Para la muestra recolectada en el agar plate count se encontraron se observaron aproximadamente 14
colonias, con texturas lisas otros algodonosos y algunas pulverulentos, esto se puede observar en la
imagen 9.
Imagen 9. Imagen de muestra de hongos cultivada en agar plate count.

Luego, se hizo el análisis microscópico con objetivo en 40x y la ayuda de colorante azul de lactofenol,
se logró observar estructuras como hifas, reconocidas por sus ramas y tinte azul y algunas esporas
presentes en conidióforos.

Imagen 10. Colonia azul de lactofenol.

Para este tipo de agar se encontraron 16 colonias, para destacar, este agar presento una estructura de
micelio filamentoso en todo el agar. 4 colonias con una estructura desarrollada de micelio
presentaron pigmentación de color amarillo, el resto de las colonias de color negro presentaron una
textura esponjosa aterciopelada, esto se puede observar en la imagen 11.

Imagen 11. Muestra de hongos cultivada en agar Sabouraud.

 Para la observación microscópica, en un objetivo a 40x y con la ayuda del colorante de azul de
lactofenol se observó la estructura de una de las colonias negra, se evidencio en gran cantidad hifas y
gran presencia de esporas en conidióforos, diferente que el otro medio de cultivo expuesto
anteriormente.

Imagen 12. Colonia negra, observacion a 40x con azul de lactofenol.

Cultivo de levadura
Para el cultivo de levadura se observaron presencias solamente levaduriformes, como principal
característica su forma ovalada definida y coloración blanca, esta información puede observarse en la
imagen 13.

Imagen 13. colonia de levadura observada a 40x

 4. Discusión
El crecimiento de los microorganismos en los laboratorios, dependen de las condiciones físicas y
químicas que esté presente, estas deben ser óptimas para su crecimiento. En cuanto a las condiciones
físicas la humedad y la temperatura juegan un papel fundamental a la hora de realizar el cultivo, en
este caso los microorganismos de interés sanitario están en un rango entre 20 y 40°C. El pH juega otro
papel fundamental donde al conocer las características fisicoquímicas de los microorganismos a
diferenciar, puede jugar un papel fundamental para utilizarlo como diferenciador, en este caso
utilizándose en medios selectivos como el agar Sabouraud donde solo crecen hongos. Para la correcta
identificación también de los microorganismos es necesario tener condiciones asépticas en el área de
siembra, estas son necesarias para evitar la contaminación del medio de cultivo con microorganismos
no deseados1. Para ello, se debe trabajar en un área de condiciones asépticas y cerca de la llama del
mechero a un entorno de 20 cm. Los tubos de ensayo han de flamearse cada vez que se abren o cierran
y el asa de siembra ha de esterilizarse cada vez que se utiliza.
En esta práctica es de resaltar dos tipos de montaje, en fresco y coloración. la diferencia radica en que
un montaje en fresco y una coloración es que el montaje en fresco permite la observación directa de
las células y estructuras microscópicas en su forma natural, mientras que la coloración se utiliza para
teñir y resaltar ciertas estructuras o componentes celulares para su mejor visualización.

Para las bacterias encontradas, se utilizó la tinción de Gram, esta es una técnica de tinción que se
utiliza para ver las propiedades de tinción de todo tipo de bacterias, diferenciándolas en dos grandes
grupos, grampositivas (color violeta) y gramnegativas (color rojo) a la vez que permite distinguir su
morfología y forma de agruparse. Esta tinción se basa en las diferencias estructurales de la pared
celular bacteriana y en la interacción con los reactivos utilizados durante la coloración.
En la muestra de flora corporal (bucal) analizadas se presentaron formas de Staphylococcus. La
presencia de bacterias sarcinas gram positivas en forma de cocos en racimos en una muestra de flora
bucal es un hallazgo común en la mayoría de las personas. Estas bacterias son parte del microbiota
normal de la boca y pueden desempeñar un papel importante en la salud oral. Las bacterias Sarcina
son anaerobias y se encuentran principalmente en la superficie de la lengua y en los espacios
interdentales. Pueden producir ácido láctico y otros productos metabólicos que contribuyen a la
formación de placa dental y caries dentales.
Para la muestra de agua (Fuente Universidad de Antioquia), se utilizó el medio de cultivo caldo de
Fluorocult, que es un medio diferencial para coliformes totales y fecales, el cual presentó crecimiento
microbiano, observado por medio de la turbidez del medio de cultivo, espuma y olor característico.
Sin embargo, la ausencia de cambio de color azul o fluorescencia en el caldo de cultivo Fluorocult,
descarta la presencia de coliformes totales y fecales en la muestra de agua. Es importante tener en
cuenta que la ausencia de coliformes no significa ausencia total de bacterias en la muestra, ya que esta
puede contener otras especies bacterianas.
La muestra de suelo del Jardín ubicado al frente del Museo de la Universidad de Antioquia, se
obtuvieron resultados similares a la muestra de agua, el cual se analizó por medio de cultivo
enriquezido líquido, s, después de la incubación presentaron turbiedad y un olor. La presencia de
turbidez y olor en el caldo de cultivo indica la presencia de microorganismos en la muestra de suelo.
Sin embargo, debido a la naturaleza no selectiva del medio de cultivo utilizado, no es posible
identificar la especie de microorganismos presentes en la muestra. Para determinar la identidad de los
microorganismos, se necesitaría realizar pruebas de identificación adicionales utilizando medios de
cultivo selectivos y diferentes técnicas de análisis, como la observación microscópica y las pruebas
bioquímicas. Además, es importante tener en cuenta que la presencia de microorganismos en el suelo
es común y no necesariamente indica una condición patógena o peligrosa.
Se llevaron a cabo cultivos de hongos en dos medios semisólidos de agar, el primero en Sabouraud y
el segundo en Plate Count. Se observó un mayor crecimiento en el agar Sabouraud, el cual es
conocido por ser un medio de cultivo selectivo para hongos debido a su medio enriquecido que
favorece su crecimiento en lugar de bacterias. En la práctica de laboratorio, se identificó un hongo
negro con hifas aéreas de gran magnitud y de forma esponjosa que llamó la atención debido a su
mayor cantidad y a su estructura inusual, puesto que en las hifas aéreas contrastaba un residuo negro
polvoriento. La observación de colonias en el medio de cultivo agar Plate Count, junto con las
diferentes texturas y la presencia de hifas y esporas, evidencian la presencia de una colonia mixta de
hongos.
Para la muestra de levaduras, se observó la presencia exclusiva de levaduras, lo que sugiere que el
medio de cultivo utilizado fue eficaz en la selección de este tipo de microorganismos. La forma
ovalada definida y la coloración blanca son características comunes de las levaduras y son útiles para
su identificación.

5. Conclusiones.

El crecimiento de los microorganismos en los laboratorios depende de las condiciones físicas y

químicas presentes, que deben ser óptimas para su crecimiento. La humedad y la temperatura son
fundamentales para el cultivo, y el rango óptimo para los microorganismos de interés sanitario es de
20 a 40°C.
El pH juega un papel fundamental en la identificación de microorganismos utilizando medios
selectivos como el agar Sabouraud, donde solo crecen hongos. Además, Es necesario tener
condiciones asépticas en el área de siembra para evitar la contaminación del medio de cultivo con
microorganismos no deseados.
La técnica de tinción de Gram permite ver las propiedades de tinción de todo tipo de bacterias y
diferenciarlas en grampositivas y gramnegativas, lo que permite distinguir su morfología y forma de
agruparse.
La presencia de bacterias Sarcina en forma de cocos en racimos en una muestra de flora bucal es un
hallazgo común en la mayoría de las personas y son parte del microbiota normal de la boca. Estas
bacterias pueden desempeñar un papel importante en la salud oral.
La presencia de microorganismos en el suelo es común y no necesariamente indica una condición
patógena o peligrosa, y para determinar la identidad de los microorganismos presentes se necesitan
realizar pruebas de identificación adicionales utilizando medios de cultivo selectivos y diferentes
técnicas de análisis.
La ausencia de coliformes totales y fecales en una muestra de agua no significa ausencia total de
bacterias en la muestra, ya que puede contener otras especies bacterianas, además se evidencio mayor
presencia microbiana en el caldo de cultivo de suelo , que en el de agua, donde las posibles causas
seria la gran diversidad de flora que debe tener un suelo además de que el agua de la fuente presente
concentraciones de cloro que inhiben el crecimiento de microorganismos
También, Se encontró conidióforos, lo que indica la presencia de reproducción sexual en las colonias ,
tanto en el medio plate count y el medio Sabouraud
Y por ultimo se observaron importantes diferencias entre los cultivos de hongos y bacterias durante
su análisis en el laboratorio. En cuanto a su aspecto macroscópico, se encontró que las colonias de
hongos eran significativamente más grandes, coloridas y diversas en texturas en comparación con las
colonias de bacterias, que eran más pequeñas, blancas y viscosas. Además, se comprobó que las
bacterias podían crecer en medios de cultivo líquidos y semisólidos, mientras que los hongos solo se
cultivaron en un medio semisólido, aunque es posible que también puedan crecer en medios líquidos
dependiendo del objetivo del análisis. Por último, se evidenció que en los hongos es posible
identificar estructuras específicas en el microscopio que no son fáciles de observar a simple vista
como lo son los conidióforos, mientras que en las bacterias solo se podía diferenciar su forma y
clasificación de carga mediante tinción de Gram.

6. Referencias
1. Junco Díaz, Raquel & Pérez, Carlos. (2001). Cultivo y crecimiento de los microorganismos.
Recuperado el 7 de abril de 2023, de
https://www.researchgate.net/publication/288670374_Cultivo_y_crecimiento_de_los_microor
ganismos
2. Madigan, M.T., Martinko, J.M., Bender, K.S., Buckley, D.H., & Stahl, D.A. (2019). Brock
Biology of Microorganisms (15th ed.). Pearson Education.
3. https://d1wqtxts1xzle7.cloudfront.net/87169255/
INFORME_02_Cultivo_y_aislamiento_de_microorganismos_de_interes_biotecnologico-
libre.pdf?1654649691=&response-content-disposition=inline%3B+filename
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