OPTIMIZATION OF STERILlZATION TIME FOR CARRIERS COMPOST

BASED FOR PRODUCCION OF LEGUME INOCULANTS

E. Ormeño-Orrillo y D. Zúñiga-Dávila*

RESUMEN
Se elaboraron tres soportes consistentes en una mezcla de suelo y compost, y se some
tres tratamientos de esterilización fraccionada en autoclave en dos días consecutivos. La e
de los tratamientos de esterilización se evaluó monitoreando la disminución en las poblaci
hongos y bacterias mediante recuentos estándar en placa. La esterilización de todos los sop
logró mediante un tratamiento por 45 minutos el primer día y 30 minutos el segundo día.

Palabras Clave : Inoculante, leguminosas, esterilización.

AB ST RACT
Three soil-compost based carrriers were elaborated and autoclaved by three different tre
01 Iractionated sterilization in two consecutive days. The efficiency 01 the sterilization treatme
evaluated monitonng the reduction in bacterial and fungi populations by standard plate count m
Sterilization 01 all carriers was possible by the treatment 01 45 minutes the first day and 30 min
second day.

Key words: Inoculants, legume, sterilization.

INTRODUCCiÓN Smith, 1992). La esterilización de esto

Los inocu lantes para leguminosas consti­ tes es importante, pues permite eliminar
tuyen una alte rnativa económica y no conta­ petencia y/o antagonismo de hongos
minante fren te a los fel1ilizantes nitrogenados, bacterias y así mantene r altos núm
ya que permiten utilizar racionalmente la sim­ rizobios por mayor tiempo (Smith, 19
bIosis que se estab lece entre esas plantas y mismo, la utilización de soportes estér
las bacterias fijad ras de nitróge no de los gé­ mina el peligro potencial de disemina
neros RhizobiLfIll y Brodyr/¡izobillll7, común­ llas de malezas y patóge nos de planta
mente conocidas como li zob ios (Hamdi, 1985). hombre (Olsen el al., 1994).

Actualmente los inoculantes más utilizados La esterilización en autoclave es u

co nsisten en culti vos de rizobios incor~orados do común y efecti vo que permite elabo
en un mate rial de sopo rte só lido que mantiene tivos absolutamente puros de rizobios (S
vivas a las bacterias durante su almacena­ y Jansen van Rensburg, 198 1; Williams
miento y di stribución , y fac ilita su aplicación S in embargo, como cua lquier metod
sobre las semillas o el suelo (Williams 1984; puede presentar desve ntajas. Por un
aumentaría los cos tos de producción d
consumo de electricidad o gas, y, por
L abo ra torio de Microbiología «Marino calentamiento excesivo del sopo rte pod
Tabusso », Uni ve rsidad Nacional Agraria La vocar a la formación de compuestos
Molina, Apartado Postal 456, Lima 1, Perú . para los rizobios (Roughley, 1970; Str
Email: [email protected].
Jansen van Re nsbu rg, 198 J) .

..
clas de suelo y compost. Estandarizado de Thornton 's incubado a 30
por 5 días (UNSCH, 1980) y para hon
MATERIALES Y MÉTODOS Agar Extracto de Malta suplementado
100 mg/L de oxitetraciclina e incubad
Elaboración de los soportes
22 oC por 5 días (Merck, 1994). Los datos
Se utilizaron tres compost adquiridos en di­ población bacteriana se expresan como Lo
ferentes viveros de la ciudad de Lima y una UFC/g (Sokal y Rohlf, 1979) .
muestra de suelo recolectado en el campus
de la Universidad Nacional Agraria La RESULTADOS Y DISCUSiÓN
Molina . Los materiales fueron secados a
Se ha demostrado que los soportes ba
60 oC por 24 h, tamizados a través de una
dos en suelo y/o compost constituyen una
malla de 0,25 mm y su humedad se ajustó a
ternativa razonable para elaborar inoculan
5% (Roughley, 1970; Williams, 1984) con agua
para leguminosas en lugares donde la turba
destilada estéril. Las muestras de compost
material de soporte ideal, no está disponi
fueron mezclados por separado con el suelo
(Chao y Alexander, 1984; Abd El Maksou
en la proporción de 2:3 (p:p) (Matos, 1994) y
al., 1988; Matos, 1994; Ormeño y Zúñi
los soportes resultantes fueron empaquetados
1999). Sin embargo, los materiales mencio
en bolsas de polietiJeno de alta densidad
dos contienen una flora bacteriana que inc
(50 g) . La abertura se cerró mediante un do­
ye bacterias esporuladas termolTesistente
blez asegurado con tres clips de metal (Abd
por lo tanto se requiere de mayor tiempo
El Maksoud el aL., 1988).
exposición al calor para esterilizarlos (Pflu
Holcomb, 1977; Molin, 1982). Las tres mu
Esterilización y evaluaciones
tras de compost utilizadas en este estudio p
Se evaluaron tres tratamientos de esterili­
sentaron una humedad y recuentos inicia
zación en autoclave a 121°C y 15 Iibras/pul­
de bacterias y hongos mayores que la mu
gada2 en dos días consecutivos (minutos, mi­
tra de suelo (Tabla 1). Luego de secar es
nutos): 30-30,45-30 Y 45-45. Los soportes se
materiales la humedad disminuyó 'a menos
incubaron a 30 oC entre ambas esterilizacio­

Tabla 1, Humedad y población microbiana inicial de los materiales utilizados para elaborar
los soportes que se van a utillizar como inoculantes para leguminosas.

Humedad Población inicial

Material Inicial (Log UFC/g)

(%) Bacterias Hongos

Suelo 15,1 5,6 3,6
Compost 1 90,6 7,1 5,2
Compost 2 84,7 7,3 5,9
Compost 3 95,5 8,2 5,3

182

...
taron bacilos esporulados mediante observa­ tes. Pramakik e Iswaran (1973),
ción microscópica entre los microorganismos Alexander ( 1984) Y Beck el al. (1993
sobrevivientes. tan 3 horas de exposición para esteri
portes basados en suelo, suelo-turba
En las Figuras 1 y 2 se muestra el efecto
carbón o suelo-compost. El menor tie
de los tratamientos de esterilización en la po­
querido aquí para esterilizar tres sopo
blación de bacterias y hongos, respectivamen­
sados en suelo y compost demuestra
te. El primer tratamiento (30',30') sólo logró

-él 5
Ü
u.
;:)
4
en
o
¿
e 3
:2
o
~ 2
..c
o
a.

30',30' 45',30' 45',45'

Tiempo de esterilización (min)

Figura 1. Efecto de los tratamientos de esterilización en autoclave en la poblac

bacteriana de los soportes que se van a utilizar como inoculantes para leguminosa

3
Ci
Ü
u.
:::>
C1
o
¿ 2
e
'o
'C:;
ro
:ñ
o
a.

30',30' 45',30' 45',45' Soporte

Tiempo de esterilización (min)

Figura 2. Efecto de los tratamientos de esterilización en autoclave en la población

hongos de los soportes a ser utilizados como inoculantes para leguminosas.

-
del tratamiento térmico, ya que la esteriliza­
Hamdi, YA. 1985. La fijación del nitrógeno en la e
ción en autoclave se basa en la exposición a tación de los suelos. Boletín de suelos de la
vapor saturado. A este respecto, Beck el al. N° 49 . Roma. FAO.
(1993) recomiendan humedecer los soportes Matos, G. 1994. Aislamiento de Rhizobium de dif
tes variedades de paliar (Phaseolus lunGl
antes de la esterilización y Abd El Maksoud estudio de su eficiencia en la productividad
el al. (1988) reportan que bastaron 45 minu­ leguminosa. Tesis para optar el título de B
tos de exposición para esterilizar compost en go . UNALM. Lima.
Merck. 1994. Manual de Medios de Cultivo. M
condiciones de libre acceso del vapor al ma­ Darmstad.
terial. Otro factor importante pudo haber sido Molin, G. 1982. "Destruction of bacterial spore
la esterilización fraccionada. Stroetmann el al. thermal methods" . pp. 454-468. En: Princ
and Practice of Disinfection, Preservation
(1994) señalan que el calentamiento fraccio­
Sterilization. A. D. Russell , W.B. Hugo y
nado produce una reducción significativa en J. Ayliffe (Eds.) . Oxford, Blackwell Scie
la carga microbiana de suelos. Alder y Simpson Publications.
(1982) explican este fenómeno indicando que Olsen, P. E., W. A. Rice y M. M. Collins. 1
"Biological contaminants in North Am
el primer calentamiento mata las formas can legume inoculants". Soil Biol. Bioc
vegetativas y cualquier espora sobreviviente 27: 699-701.
germinará produciendo nuevas formas Ormeño, E. y D. Zúñiga. 1999. "Supervivencia y c
terísticas simbi óticas deBradyrhizobium sp
vegetativas, que morirán en los calentamientos
culado en una mezcla de suelo y comp
sucesIvos . Biota. 17(99): 41-49.
Pf1ug, 1 .1. Y R. G . Holcomb. 1977." Principies ofthe
CONCLUSiÓN destruction of microorganisms". pp. 933-
En: Disinfection, Sterilization and Preserva
Se concluye que la esterilización fraccio­ S.S. Block (Ed.). Lea y Febiger. Filadelfia.
nada en autoclave a 121°C y 15 libras/pulga­ Pramanik, M. y V. Iswaran. 1973. "Survival ofRhizo
da 2 en dos días consecutivos, por 45 y 30 mi­ japonicum in various carriers" . Zb!. Bakt.
11. 128: 232-239.
nutos, es suficiente para esterilizar mezclas de Roughley, R. J. 1970. "The preparation and u
suelo y compost. Estas pueden ser así utiliza­ legume seed inoculants". Plant Soil. 32: 675
das como soporte en la producción de Smith, R. S. 1992. "Legume inoculant formulation
application". Can. J. Microbiol. 38: 485-4
inoculantes para leguminosas de alta calidad Sokal, R. R. Y F. J . Rohlf. 1979. "Biometría. Princ
y bajo costo. y métodos estadísticos en la investigación
lógica". H. Blume Ediciones. Madrid
Strijdom, B. W. y H. Jansen van Rensburg, 1981. "E
of steam sterilization and gamma irradiati
LITERATURA CITADA peat on quality of Rhizobium inoculants". A
Environ. Microbiol. 41: 1344-1347.
Abd El Maksoud, H.K., M.S.M . Saber y P. Somasegaran.
Stroetmann, l. , P. Kampfer y W. Dott. 1
1988. "Evaluatíon of the com!=-.,sting sheat of "The etliciency of steriJization method
peanut pods as a local carrier for Rhizobium different soils" . Zentralbl. Hyg. Unwelt
inoculants produ ction". Egypt. J. Microbio!. 23: 195: 111-120.
473-483. UNSCH (Universidad Nacional San Cr is tóba
Alder, v.G. y R.A. Simpson. 1982. "Sterilization and Huamanga ). 1980. Manual de Microbiolog
Suelos. UNSCH. Huamanga.
disinfection by heat methods". pp. 433-453. En:
Williams, P. M. 1984. "Current use of legume inoc
Principie s and Practice of Disinfection,
technology". pp. 173-200. En: Biolog
Preservar ion and Sterilization . A . D. Russell,
Nitrogen Fixation: Ecology, Technology
W. B. Hugo y G. A. J. Ayliffe (Eds.).Oxford. Physiology. Alexander M. (Ed.). Plenum
BlackwelJ Scientific Publications. Corporation. New York .
Beck, D. P., L. A. Materon y F. Afandi. 1993 . Practical
Rhizobium-Legume Technology Manual.

184