Agar CCDA Campy PDF

Base de Agar Campylobacter Exento de Sangre (CCDA) ISO Cat.
1129
Medio selectivo para el aislamiento de Campylobacter spp.
Información práctica
Aplicaciones Categorias
Recuento selectivo Campylobacter
Aislamiento selectivo Campylobacter
Industria: Aguas de consumo / Alimentación
Regulaciones: ISO 10272 / ISO 11133

Principios y usos
La Base de Agar Campylobacter Exento de Sangre (CCDA) sigue la fórmula modificada descrita por Bolton et al., que reemplaza la sangre por carbón,
piruvato sódico y sulfato ferroso. Este medio apoya el crecimiento de la mayoría de los Campylobacter entéricos y se recomienda para el aislamiento
selectivo de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli y Campylobacter termófilas, en alimentos y en muestras clínicas y no clínicas. Está recomendado
por la norma ISO 10272.
Campylobacter se considera la principal causa de enfermedades entéricas. Campylobacter spp. puede causar diarrea de leve a grave, con deposiciones
sueltas y acuosas seguidas frecuentemente por diarrea con sangre. Estos patógenos son muy infecciosos y se transmiten por alimentos o agua
contaminados.
El medio contiene sulfato ferroso, piruvato de sodio y carbón para promover el crecimiento de especies de Campylobacter, ya que atrapan las formas
tóxicas de oxígeno (peróxido de hidrógeno) aumentando la aerotolerancia y permitiendo aislar fácilmente las cepas sensibles al oxígeno. El desoxicolato
de sodio inhibe parcial o completamente organismos Gram positivos, coliformes y Proteus. El digerido enzimático del tejido animal, el digerido
enzimático de caseína, y el extracto de carne, proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. El agar
bacteriológico es el agente solidificante. La cefoperazona aumenta la selectividad e inhibe el crecimiento de bacilos entéricos Gram negativos y algunas
especies Gram positivas, mientras que la anfoterizina B suprime levaduras y hongos. El incremento de la temperatura ha mostrado un aumento en la
selectividad.

Fórmula en g/L
Digerido enzimático de caseína 3 Carbón activado 4
Agar bacteriológico 12 Sulfato ferroso 0,25
Extracto de carne 10 Cloruro sódico 5
Desoxicolato de sodio 1 Piruvato sódico 0,25
Digerido enzimático de tejido animal 10

Preparación
Suspender 22,75 gramos del medio en 500 ml de agua destilada. Mezclar bien y disolver con calor y agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta
la disolución completa. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 44-47ºC y agregar asépticamente un vial de Suplemento CCDA
(Campylobacter Exento de Sangre) (Cat. 6053), previamente reconstituido en 5 ml de agua destilada estéril. Homogenizar suavemente y dispensar en
placas de Petri.

Instrucciones de uso
Para la detección y enumeración de Campylobacter spp. de acuerdo a la norma ISO 10272:
Para muestras con bajo número de campylobacters y bajo nivel de microflora acompañante y/o campylobacters estresados:
- Inocular 10 g o 10 ml de la porción de muestra en 90 ml del medio de enriquecimiento Caldo Bolton (Cat. 1441), para obtener una dilución de 1 en 10.
- Incubar en una atmósfera microaerobia a 37 ºC durante 4 a 6 horas, luego a 41,5 ºC durante 44 ± 4 horas.
- Usando el cultivo obtenido del caldo de enriquecimiento (Caldo Bolton), inocular el medio CCDA y otro medio selectivo de Campylobacter con un asa
estéril.
- Incubar las placas CCDA a 41,5 ºC en atmósfera microaerobia durante 44±4 horas.
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- Confirmar las colonias sospechosas.
Para muestras con bajo número de campylobacters y alto nivel de microflora acompañante:
- Inocular 10 g o 10 ml de la porción de muestra en 90 ml del medio de enriquecimiento Caldo Preston (Cat. 2166), para obtener una dilución de 1 en
10.
- Incubar en una atmósfera microaerobia a 41,5 ºC durante 14 ± 2 horas.
- Usando el cultivo obtenido del caldo de enriquecimiento (Caldo Preston), inocular el medio CCDA con un asa estéril.
- Incubar las placas CCDA a 41,5 ºC en atmósfera microaerobia durante 44 ± 4 horas.
Para muestras con un alto número de campylobacters:

- Inocular la porción de muestra si el producto es líquido o la suspensión inicial en caso de otros productos (plaqueo directo) en placas CCDA.
- Incubar las placas a 41,5 ºC en atmósfera microaerobia durante 44 ± 4 horas.
- El método de plaqueo directo es el procedimiento adecuado para contar las colonias de Campylobacter.
Si hay poca información disponible sobre las muestras de prueba, usar uno de los dos métodos de enriquecimiento en paralelo con el método de
plaqueo directo.
Las colonias típicas son grisáceas, a menudo con un brillo metálico, y son planas y húmedas, con tendencia a extenderse.
Para confirmar las colonias sospechosas examinar las colonias de Campylobacter para determinar su morfología y movilidad con un microscopio,
subcultivadas en un agar sangre no selectivo. Confirmar mediante la detección de la actividad oxidasa y una prueba de crecimiento aeróbico a 25 ºC.

Control de calidad
Solubilidad Apariencia Color del medio deshidratado Color del medio preparado Final pH (25ºC)
Sin restos Polvo fino Negro Negro 7,4±0,2

Test microbiológico
De acuerdo a ISO 10273:
Condiciones de incubación: (41,5±1 ºC, atmósfera microaeróbica /44±4 h).
Condiciones de inoculación: Productividad cuantitativa (100±20. Min.50 CFU) / Productividad cualitativa (10^3-10^4 CFU) / Selectividad (10^4-10^6
CFU).
Medio de referencia: Blood Agar.
Microrganismos Especificación Reacción característica

Escherichia coli ATCC 25922 Inhibición total o parcial (0-1)
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibición total (0)
Campylobacter jejuni ATCC 29428 Buen crecimiento (2) >50% Grisáceas, planas y húmedas, a veces con brillo metálico
Campylobacter coli ATCC 43478 Buen crecimiento (2) >50% Grisáceas, planas y húmedas, a veces con brillo metálico

Almacenamiento
Temp. Min.:2 ºC
Temp. Max.:25 ºC

Bibliografía
Bolton F.J. Hutchinson D.N. y Cioste D. (1984) clin. Microbiol. 19,169-171 Bolton E.J., Roberstson L. (1982) J. Clin Parth 35, 462-67
ISO 10272-1:2017. Microbiology of the food chain -- Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. -- Part 1: Detection method
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Para muestras con un alto número de campylobacters:

Microrganismos Especificación Reacción característica

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