06 Vazquez Herrera Carolina PDF

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS
MAESTRÍA EN CIENCIA Y TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS
Caracterización fitoquímica y evaluación de la actividad

antioxidante y antimicrobiana de productos derivados de
la hoja de Noni (Morinda citrifolia L.)
TESIS
Que presenta
Q.F.B. CAROLINA ISABEL VÁZQUEZ HERRERA
Para obtener el Grado de
MAESTRA EN CIENCIA
Y
TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS
Directores
DR. ARMANDO CARRILLO LÓPEZ
DR. ELHADI M. YAHIA
Culiacán, Sinaloa, México Febrero, 2019

Este trabajo fue realizado en el Laboratorio de Bioquímica Poscosecha de Frutas y
Hortalizas de la Maestría en Ciencia y Tecnología de Alimentos de la Facultad de
Ciencias Químico Biológicas de la Universidad Autónoma de Sinaloa y en el
Laboratorio de Fitoquímicos y Nutrición de la Facultad de Ciencias Naturales de la
Universidad Autónoma de Querétaro bajo la dirección del Dr. Armando Carrillo López
y del Dr. Elhadi M. Yahia, así como la asesoría de la MC. Claudia Barraza Elenes, la
Dra. Irma Leticia Camacho Hernández y el Dr. Héctor Samuel López Moreno. Contó
con financiamiento del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT), y del
Programa de Fortalecimiento y Apoyo a Proyectos de Investigación de la Universidad
Autónoma de Sinaloa (PROFAPI-UAS, Proyecto PROFAPI-2014/061). Carolina
Isabel Vázquez Herrera recibió beca del CONACYT.

AGRADECIMIENTOS
Primero que todo, agradezco a mis directores de tesis, el Dr. Armado Carrillo por su
apoyo y confianza en el desarrollo de este proyecto y por siempre dedicar tiempo
para asesorarme. Y al Dr. Elhadi Yahia por su apoyo, asesoría y hospitalidad al
recibirme en su laboratorio de Fitoquímicos y Nutrición en la Universidad Autónoma
de Querétaro.
A las instituciones que hicieron posible este proyecto, la Universidad Autónoma de

Sinaloa, el Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología y la Universidad
Autónoma de Querétaro.
A mis asesores, la M.C. Claudia Barraza por haber tenido siempre la mejor
disposición para apoyarme, acompañarme y orientarme, gracias infinitas. A la Dra.
Leticia Camacho por su orientación y atención para resolver dudas y por su enorme
apoyo en el desarrollo experimental. Al Dr. Samuel López Moreno por la confianza,
asesoría y apoyo en su laboratorio.
Al profesor Q.F.B. Israel Partida López por sus atenciones y apoyo técnico.
A mis compañeros de generación, Yesenia, Jordi, Cynthia, Fernanda, Yazmín,

Carlos, Julio, Demis, Martín, Maribel, Aliette, Yudith, Samuel y Santos, por hacer
tan amenos estos años de formación académica, profesional y sobre todo, personal.
Gracias a todos.
A mis compañeros de laboratorio en Querétaro, el Dr. Braulio Cervantes, Alex,

Rebeca, Alexis, Miguel y Omar, su apoyo y compañerismo hicieron de mi estancia
en Querétaro una experiencia inolvidable.
A la M.C. Alma Astorga, cuyo apoyo y disposición fue invaluable en el trabajo

experimental de microbiología. Gracias.
A todos y cada uno los profesores de la Maestría en Ciencia y Tecnología de

Alimentos, porque su experiencia y conocimientos son invaluables.
A Harry y a mi familia, que de no tenerlos siempre presentes, ningún esfuerzo

valdría la pena.
ÍNDICE
ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................... vi
ÍNDICE DE CUADROS ................................................................................................ vii
I. RESUMEN .............................................................................................................. 1
ABSTRACT ................................................................................................................... 3
II. INTRODUCCIÓN .................................................................................................... 5
III. REVISIÓN DE LITERATURA ................................................................................. 7
A. FITOQUÍMICOS ............................................................................................... 7
1. Compuestos fenólicos ...................................................................................... 7
a. Flavonoides .................................................................................................. 8
b. Compuestos fenólicos no flavonoides ........................................................ 10
2. Clorofilas y carotenoides ................................................................................ 10
3. Actividad biológica de los fitoquímicos........................................................... 13
a. Actividad antioxidante .................................................................................... 14
1) Ensayo de inhibición de radical DPPH ................................................... 16
2) Ensayo de inhibición de radicales •OH en la degradación de 2-desoxi-D-
ribosa ............................................................................................................. 17
3) Ensayo de inhibición de la oxidación de lipoproteínas de baja densidad
(LDL) inducida por cobre ............................................................................... 19
i
4) Ensayo de la inhibición de hemólisis eritrocitaria inducida por
dihidrocloruro de 2,2-azobis (2-metil-amidinopropano) ................................. 20
b. Actividad antimicrobiana ............................................................................. 21
B. EL NONI (Morinda citriflia L.) ......................................................................... 24
1. Descripción botánica, origen y distribución .................................................... 24
2. Importancia económica .................................................................................. 25
3. Productos derivados de noni .......................................................................... 27
4. La hoja de noni ............................................................................................... 28
C. DECOCCIONES ............................................................................................. 32
D. SUBPRODUCTOS ......................................................................................... 35
IV. JUSTIFICACIÓN ................................................................................................... 37
V. HIPÓTESIS ........................................................................................................... 38
VI. OBJETIVOS .......................................................................................................... 39
A. OBJETIVO GENERAL ................................................................................... 39
B. OBJETIVOS ESPECÍFICOS .......................................................................... 39
VII. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................ 40
A. MATERIALES ................................................................................................. 40
1. Elaboración de las decocciones y obtención de los residuos de decocción de
hoja de noni.............................................................................................................. 40
B. MÉTODOS.......................................................................................................... 41
ii
1. Análisis fisicoquímicos ..................................................................................... 41
a. Humedad .................................................................................................... 41
b. Cenizas ....................................................................................................... 42
c. Acidez titulable............................................................................................ 43
d. pH ............................................................................................................... 44
e. Sólidos solubles totales (°Brix) ................................................................... 44
2. Caracterización fitoquímica ............................................................................ 45
a. Compuestos fenólicos totales..................................................................... 45
1) Extracción de la muestra ......................................................................... 45
2) Curva de calibración................................................................................ 46
3) Determinación del contenido de compuestos fenólicos totales .............. 46
b. Carotenoides totales y clorofilas totales ..................................................... 47
2) Curva de calibración de β-caroteno ........................................................ 48
3) Cuantificación de carotenoides totales y clorofilas totales ..................... 48
c. Carotenoides individuales identificados y cuantificados por HPLC ........... 49
2) Identificación y cuantificación de los carotenoides por HPLC ................ 49
3. Evaluación de la capacidad antioxidante ....................................................... 50
a. Capacidad de inhibición del radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazilo (DPPH) ... 50
iii
2) Medición de la capacidad antioxidante ................................................... 50
b. Capacidad de inhibición de radicales •OH en el ensayo de degradación de
2-deoxi-D-ribosa ......................................................................................... 51
1) Preparación de los extractos ................................................................... 51
3) Medición de la inhibición de degradación de 2-desoxi-D-ribosa ............ 52
c. Capacidad de inhibición de la oxidación de lipoproteínas de baja densidad
(LDL) inducida por cobre............................................................................ 53
1) Obtención de las lipoproteínas de baja densidad ................................... 53
3) Medición de la capacidad de inhibición de oxidación de LDL ................ 54
d. Capacidad de inhibición de la hemólisis eritrocitaria inducida por
dihidrocloruro de 2,2-azobis (2-metil-amidinopropano) (AAPH) ................ 55
1) Obtención de los eritrocitos ..................................................................... 55
2) Medición de la capacidad de inhibición de hemólisis ............................. 55
4. Evaluación de la actividad antibacteriana ...................................................... 57
5. Análisis estadístico ......................................................................................... 58
VIII. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................. 59
A. ANÁLISIS FISICOQUÍMICOS .......................................................................... 59
iv
1. Humedad y cenizas ........................................................................................ 59
2. Acidez titulable, pH y sólidos solubles totales ............................................... 61
C. CARACTERIZACIÓN FITOQUÍMICA ............................................................ 63
1. Compuestos fenólicos totales ........................................................................ 63
2. Clorofilas a, b y totales ................................................................................... 68
2. Carotenoides totales ...................................................................................... 71
3. Carotenoides individuales .............................................................................. 74
D. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE ....................................................................... 83
1. Capacidad de inhibición del radical DPPH .................................................... 83
2. Capacidad de inhibición de radicales OH en el ensayo de degradación de 2-
desoxi-D-ribosa .............................................................................................. 87
3. Capacidad de inhibición de la oxidación de LDL inducida por cobre ............ 90
4. Capacidad de inhibición de la hemólisis eritrocitaria inducida por AAPH ..... 94
D. ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA ........................................................................ 98
IX. CONCLUSIONES ............................................................................................... 101
X. BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................... 103
ABREVIATURAS ....................................................................................................... 125
ANEXOS.................................................................................................................... 126
v
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura Descripción Página

1 Estructura básica de los flavonoides y algunas subclases 9
de estos.
2 Estructuras de clorofilas a y b, y algunos carotenoides 11
representativos.
3 Características de la planta de M. citrifolia L., fruto y hoja. 26
4 Compuestos fenólicos totales de productos derivados de 65

la hoja de noni.
5 El contenido de clorofilas en productos derivados de la 69
hoja de noni.
6 Cromatogramas obtenidos por HPLC de productos 75
derivados de la hoja de noni.
7 Capacidad de inhibición del radical DPPH de productos 84
8 Capacidad de inhibición de radicales OH• en el ensayo de 88
degradación de 2-desoxi-D-ribosa de productos
9 Capacidad de inhibición de la oxidación de lipoproteínas 91
de baja densidad (LDL) de productos derivados de la
hoja de noni.
vi
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro Descripción Página

1 Algunos de los compuestos identificados en la hoja de 31
noni.
2 Contenido de humedad y cenizas de productos derivados 60
de la hoja de noni.
3 Análisis fisicoquímico de productos derivados de la hoja 62
de noni.
4 Carotenoides totales de productos derivados de hoja de 72
noni.
5 Espectros de absorción de compuestos detectados e 76
identificados en la hoja cruda de noni (HC) mediante
cromatografía de líquidos de alta presión (HPLC).
6 Contenido de β-caroteno y luteína identificados por HPLC 78
en productos derivados de la hoja de noni.
7 Cantidad del consumo diario recomendado de 82
luteína y equivalentes de retinol en 10 gramos de
muestra fresca de productos derivados de la hoja de
noni.
8 Capacidad de inhibición de la hemólisis eritrocitaria de 95
productos derivados de hoja de noni.
vii
I. RESUMEN
La planta de Morinda citrifolia L. o noni, ha sido usada tradicionalmente para
tratar algunas enfermedades, pero en los últimos años han surgido investigaciones
sobre su composición y actividad biológica aumentando su valor comercial. Se ha
encontrado que la hoja de noni tiene potencial para ser usada como fuente de
compuestos fitoquímicos activos que ayuden en la prevención de algunas
enfermedades. Se ha documentado el uso de hojas de noni en infusiones o
decocciones, sin embargo este proceso podría dejar componentes residuales que
podrían ser aprovechados. El objetivo de este trabajo fue determinar la composición
fitoquímica y evaluar la actividad antioxidante y antimicrobiana de hoja de noni (HC),
decocción y hoja residuo de la decocción. Se realizaron decocciones de 5 y 10
minutos (D-5 y D-10, respectivamente) y se obtuvieron las hojas residuo de cada una
(R-5 y R-10, respectivamente). Para HC, R-5 y R-10 se obtuvieron extractos
metanólicos (EMeOH), lipofílicos (ELF), hidrofílicos (EHF) y con
metanol:hexano:acetona (EMHA). Se determinaron características fisicoquímicas (%
Humedad, % Cenizas, pH, % AT y SST) y se determinó el contenido de compuestos
fenólicos (CFT), clorofilas (ClfT) y carotenoides totales (CT) mediante técnicas
espectrofotométricas en diferentes extractos, complementariamente se identificaron y
cuantificaron carotenoides usando cromatografía de líquidos de alta presión (HPLC).
Se evaluó la capacidad antioxidante por las técnicas de inhibición del radical DPPH,
ensayo de degradación de 2-desoxi-D-ribosa, inhibición de la oxidación de LDL e
inhibición de la hemólisis eritrocitaria por espectrofotometría. La actividad
antimicrobiana se evaluó con las bacterias Salmonella Typhimurium y Listeria
1
monocytogenes por el método de difusión en disco. Los resultados de % AT fueron:
HC > R-5 > R-10 > D-10 > D-5, pH: R-10 > D-5 > R-5 > D-10 > HC y °Brix: HC > R-5
> R-10 > D-10 > D-5. Las cuentas de CFT (mgEAG/g bs) fueron mayores en HC que
en R-5 y R-10; además, D-10 fue mayor que D-5. El contenido de ClfT fue menor en
R-5 y R-10 con respecto a HC y no se detectó clorofila en D-5 y D-10. Se obtuvo un
alto contenido de CT en HC, y éste fue mayor en R-5 y R-10, pero no se detectaron
en las decocciones. Se identificó mediante HPLC que los carotenoides mayoritarios
presentes fueron β-caroteno y luteína, tanto en HC, como en R-5 y R-10. La
capacidad antioxidante varió entre las técnicas empleadas. El ensayo de DPPH
(μmolET/g bs) siguió la tendencia de la cantidad de CFT. Para las técnicas de
inhibición de degradación de 2-desoxi-D-ribosa e inhibición de oxidación de LDL, la
tendencia fue similar entre ambas técnicas, sin embargo, los extractos de HC
resultaron más efectivos para inhibir la oxidación de LDL que la de 2-desoxi-D-ribosa,
y para ambas técnicas, D-5 y D-10 mostraron mejores resultados que R-5 y R-10. En
el ensayo de inhibición de hemólisis las decocciones no tuvieron actividad, pero sí
HC, tuvo actividad en los dos tipos de extracto evaluados (EMeOH y EHF), mientras
que R-5 y R-10 tuvieron actividad sólo en el EMeOH. Ningún extracto tuvo actividad
antibacteriana contra Salmonella Typhimurium y Listeria monocytogenes en las
condiciones evaluadas. En conclusiones, la hoja de noni, así como las decocciones y
las hojas residuo de éstas podrían ser una buena fuente de compuestos bioactivos y
considerarse un buen suplemento alimenticio añadiendo valor agregado a los
productos subutilizados de la planta de Morinda citrifolia L.
2
ABSTRACT
The plant of Morinda citrifolia L. or noni, has been used traditionally to treat some
diseases, but in the last years there has been research about its composition and
biological, indicating important potential commercial value. It has been found that the
noni leaf has the potential to be used as a source of phytochemical compounds that
can prevent some diseases and help in the improvement of human health. The use of
noni leaves in infusions or decoctions has been documented, however, this process
could leave residual components that could be exploited. The objective of this work
was to determine the phytochemical composition and to evaluate the antioxidant and
antimicrobial activity of noni leaf (HC), decoction and leaf decoction residue.
Decoctions of 5 and 10 minutes were performed (D-5 and D-10, respectively) and the
residual leaves of each were obtained (R-5 and R-10, respectively). For HC, R-5 and
R-10, methanolic (EMeOH), lipophilic (ELF), hydrophilic (EHF) and methanol: hexane:
acetone (EMHA) extracts were obtained. Physicochemical characteristics were
determined and the content of total phenolics (CFT), total chlorophylls (ClfT) and total
carotenoids (CT) were determined by spectrophotometric techniques in different
extracts, in addition individual carotenoids were identified and quantified using high
pressure liquid chromatography (HPLC). The antioxidant capacity was evaluated by
different assays, including the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) scavenging, 2-
deoxy-D-ribose degradation, LDL oxidation inhibition and erythrocyte hemolysis
inhibition assays using spectrophotometry. The antimicrobial activity was evaluated
using the bacteria Salmonella Typhimurium and Listeria monocytogenes by the disc
diffusion method. The results of % AT were: HC > R-5 > R-10 > D-10 > D-5; pH: R-10
3
> D-5 > R-5 > D-10 > HC; and ° Brix: HC > R-5; D-10 > R-10 and D-5. The CFT
(mgEAG / g dw) were higher in HC than in R-5 and R-10; in addition, D-10 was
greater than D-5. The content of ClfT decreased in R-5 and R-10 with respect to HC,
and its content of D-5 and D-10 was not observed. A high content of CT was obtained
in HC that increased after the decoction process in R-5 and R-10, but were not
detected in the decoctions; it was confirmed by HPLC that the major carotenoids
present were β-carotene and lutein, both in HC, and in R-5 and R-10. Antioxidant
capacity varied according to the techniques used The DPPH assay (μmolET / g bs)
followed the trend of the amount of CFT. For the techniques of inhibition of
degradation of 2-deoxy-D-ribose and LDL oxidation inhibition, the trend was similar
between both techniques, resulting (in terms of dry weight basis), a greater
antioxidant capacity for decoctions, followed by HC and finally R-5 and R-10. In the
hemolysis inhibition, test the decoctions had no activity, but HC had activity in the two
types of extracts evaluated (EMeOH and EHF), and R-5 and R-10 had activity only in
the EMeOH. No extract had antibacterial activity under the conditions evaluated.
Therefore, it is concluded that the leaf of noni, as well as the decoctions and the
residual leaves of these are good source of bioactive compounds, and can be
considered as good nutritional supplement adding added value to the underutilized
products of the plant of Morinda citrifolia L.
4
II. INTRODUCCIÓN
En los últimos años ha ocurrido un auge en el aprovechamiento para el consumo
de productos naturales que contribuyan a la mejoría de la nutrición y a la salud
humana. Esto se debe a la preocupación mundial de contrarrestar la creciente
evolución a una alimentación rica en grasas (especialmente saturadas), azúcar y sal,
y deficiente en micronutrientes, fibra dietética y fitoquímicos, lo cual está relacionado
con un aumento de enfermedades crónicas relacionadas con la dieta (FAO 2009).
Por ello, la investigación científica ha llevado a buscar nuevas formas para la
obtención de compuestos naturales que proporcionen al organismo nuevas fuentes
de nutrición y a la vez, que cuenten con propiedades medicinales que ayuden a
prevenir o contrarrestar enfermedades. Tal es el caso de productos derivados de
plantas que, aunque se han usado por muchos años por diversas culturas, sus
propiedades medicinales no están comprobadas y es de suma importancia tener
bases científicas que proporcionen información acerca de su uso (Farzaneh y
Carvalho 2015).
Muchos estudios recientes se han enfocado al estudio de las propiedades
antioxidantes y antimicrobianas de plantas relacionadas con su contenido de
metabolitos secundarios (Barbieri y col 2017). La planta de Morinda citrifolia L.,
conocida como “noni” es una de ellas, de la cual se conocen algunas propiedades, y
ha sido usada por muchos años en la medicina polinesia tradicional (Chan-Blanco y
col 2006). No obstante, no existe mucha información que sustente la efectividad de
dichas propiedades. De esta planta, comercialmente se aprovecha mayormente el
fruto, con el cual se producen jugos y extractos, además se encuentran también en el
5
mercado en forma de polvos o cápsulas que se comercializan como suplemento
alimenticio o productos nutracéuticos (Motshakeri y col 2015).
Es por tanto, que resulta importante el estudio y cuantificación de los compuestos
fitoquímicos a los que se le atribuyen las propiedades medicinales. En el caso de la
hoja de noni, se ha encontrado información acerca de su uso en infusiones o
deoccciones y para la preparación de alimentos, y se han hecho estudios sobre la
composición de fitoquímicos y capacidad antioxidante en las infusiones (West y col
2007, 2009). Sin embargo no hay estudios relacionados con el uso de la hoja
resudual de los extractos acuosos como subproducto. Diferentes investigadores
señalan que los subproductos de la industria de alimentos pueden ser una importante
fuente de compuestos bioactivos, por ejemplo, existen estudios donde se ha
reportado que en el bagazo de algunas frutas, después de la extracción de jugo,
permanece una gran cantidad de fitoquímicos que muestran una alta capacidad
antioxidante (Sojka y col 2015).
Además se ha reportado que entre las propiedades medicinales de la planta de
noni, se encuentra la actividad para inhibir el crecimiento de algunos
microorganismos (Bushnell y col 1950; Jayaraman y col 2008; Selvam y col 2009)
Es por esto, que el objetivo de este trabajo consistió en determinar el contenido
algunos fitoquímicos importantes, así como evaluar la capacidad antioxidante y
antimicrobiana de infusiones y hoja residual de noni.
6
III. REVISIÓN DE LITERATURA
A. FITOQUÍMICOS
Diversidad de estudios mencionan que la actividad nutracéutica de las plantas es
debida a los fitoquímicos. Éstos, son compuestos químicos que se encuentran en las
plantas, y derivan de metabolismos secundarios. Se cree que la presencia de éstos,
así como sus concentraciones dependerán en gran medida de las condiciones
geográficas y culturales de crecimiento (suelo, luz, precipitación y aire), así como de
los factores poscosecha (cosecha, almacenamiento, transporte, procesamiento, etc.)
(Deng y col 2010; Farzaneh y col 2015). A grandes rasgos, los fitoquímicos se
pueden clasificar según su estructura química en alcaloides, fitoquímicos
organosulfurados, terpenoides, y compuestos fenólicos (Barberi y col 2016).
1. Compuestos fenólicos
Los compuestos fenólicos se han estudiado con mayor énfasis en años recientes
ya que se ha demostrado que pueden ser benéficos para la salud humana, entre
varias otras funciones. A diferencia de las vitaminas, que pueden generar beneficios
a corto plazo, la ingesta a largo plazo de los compuestos fenólicos puede traer
beneficios sobre algunas enfermedades crónicas, incluyendo enfermedades
cardiovasculares y diabetes Tipo II (Crozier y col 2006).
Los compuestos fenólicos se caracterizan por tener al menos un anillo aromático
con uno o más grupos hidroxilo unidos a él. Pueden ser clasificados de acuerdo con
el número y arreglo de sus átomos de carbono y se encuentran comúnmente
7
conjugados con azúcares y ácidos orgánicos. Los compuestos fenólicos se clasifican
en dos grandes grupos: los flavonoides y no flavonoides (Crozier y col 2006).
a. Flavonoides
Son compuestos fenólicos formados por una estructura general básica de quince
carbonos, con dos anillos aromáticos conectados por un puente de tres carbonos.
Son el grupo de fenólicos más numeroso. Los flavonoides están presentes
principalmente en la epidermis de algunas hojas, la cáscara de algunas frutas y en
muchas flores; tienen importantes funciones como metabolitos secundarios. Los
flavonoides en las plantas están involucrados en los procesos de protección contra la
luz UV y de pigmentación, la estimulación de nódulos fijadores de nitrógeno y la
resistencia a algunas enfermedades. El esqueleto básico de flavonoides puede tener
numerosos sustituyentes. Es común encontrar sustituyentes hidroxilo en las
posiciones 4’, 5 y 7. Las principales subclases son las flavonas, flavonoles, flavan-3-
oles, isoflavonas, flavanonas y antocianidinas (Figura 1). Los azúcares y los grupos
hidroxilo existentes en las moléculas de flavonoides aumentan su solubilidad en
agua, mientras que sustituyentes como grupos metilo e isopentilo, los hacen
lipofílicos (Crozier y col 2006). Los flavonoides unidos a azúcares se conocen como
flavonoides glicosilados y es más común encontrarlos en vacuolas, mientras que las
agliconas, los flanovoides que no están unidos a azúcares, están presentes en
regiones lipofílicas como glándulas de aceite o capas cerosas (Puppo 1992).
8
Figura 1. Estructura básica de los flavonoides y algunas subclases de estos.
Fuente: Crozier y col (2006).
9
b. Compuestos fenólicos no flavonoides
Los ácidos fenólicos son los compuestos no flavonoides más representativos en
la dieta (principalmente el ácido gálico, el cual es precursor de los taninos
hidrolizables), los hidroxicinamatos y sus derivados conjugados, y los estilbenos. Los
estilbenos son fitoalexinas, compuestos producidos por las plantas en respuesta al
ataque por hongos, bacterias y virus patógenos (Crozier y col 2006).
2. Clorofilas y carotenoides
Las clorofilas y los carotenoides son los pigmentos más abundantes en las
plantas, sin embargo no sólo son importantes debido a su función fisiológica y
coloración que le confieren, sino también por el papel que juegan en la salud humana
(Agostini-Costa y col 2014).
Las clorofilas son derivados de dihidroporfirinas quelatadas con un átomo de
magnesio en el centro de la molécula. Contienen un anillo isocíclico y son
hidrofóbicas debido al alcohol isoprenoico monoinsaturado C20, el fitol, que está
esterificado. Las principales clorofilas de importancia alimentaria son las clorofilas a y
b (Figura 2A), las cuales difieren sólo en los grupos -CH3 y -CHO, respectivamente,
del carbono 7, y son las únicas que se encuentran en plantas superiores con mayor
predominancia de la clorofila a, en una relación molar clorofila a/b de 2.56 a 3.45. En
el tejido vegetal, la clorofila es liberada de su complejo proteico seguido por la
eliminación del fitol y posiblemente feofitinización. Este proceso degradativo también
se observa en los alimentos por efecto del procesamiento y por la severidad del
tratamiento. La degradación procede por oxidación de la estructura del anillo a
10
A)
Clorofila a Clorofila b
B)
β-caroteno
Luteína
Figura 2. Estructuras de (A) clorofilas a y b y (B) carotenoides representativos.
Fuente: Krinsky y Johnson (2005); Pareek y col (2017).
11
clorinas y finalmente por formación de productos finales incoloros (Delgado-Vargas y
Paredes-López 2003; Pareek y col 2017).
Los carotenoides son los pigmentos responsables de la mayoría de colores
amarillos, anaranjados y rojos de frutos y hojas de las plantas, este color se debe a la
presencia de un cromóforo consistente total o parcialmente de una cadena de dobles
enlaces conjugados. Los carotenoides están presentes en todos los tejidos capaces
de realizar fotosíntesis, junto con las clorofilas, así como en tejidos no fotosintéticos
como componentes de cromoplastos. Químicamente los carotenoides son
terpenoides, formados básicamente por ocho unidades de isopreno, de tal forma que
la unión de cada unidad se invierte en el centro de la molécula. En los carotenoides
naturales sólo se encuentran tres elementos: C, H y O (Figura 2B). El oxígeno puede
estar presente como grupo hidroxilo, metoxilo, epoxi, carboxilo o carbonilo. Dentro de
los carotenoides se pueden distinguir dos grupos: los carotenos, que son
hidrocarburos, y las xantofilas, que poseen oxígeno en su molécula. Los dobles
enlaces conjugados presentes en los carotenoides son los responsables de la
intensa coloración de los alimentos que contienen estos pigmentos (Meléndez-
Martínez y col 2004).
Los carotenoides son estables en su ambiente natural, no así a procesos
térmicos, así que es probable que, durante procesos de cocción de alimentos, estos
pigmentos puedan degradarse. Sin embargo, otros tratamientos como altas
presiones parecen no afectar significativamente los niveles de carotenoides
(Meléndez-Martínez y col 2004). La mayoría de los carotenoides y clorofilas son poco
o completamente insolubles en agua, y su biodisponibilidad está influenciada por la
12
matriz alimentaria, los niveles de lípidos y los polimorfismos genéticos individuales
(Loranty y col 2010).
3. Actividad biológica de los fitoquímicos
El consumo de productos vegetales está asociado con el bajo riesgo de
incidencia de enfermedades, lo que se relaciona, entre otros efectos, con su
contenido de metabolitos secundarios tales como compuestos fenólicos, por ejemplo
los flavonoides. Estos compuestos muestran una gran capacidad de captar radicales
libres causantes del estrés oxidativo, además de poseer otras actividades como anti-
inflamatorias, antimicrobiana, antineoplásica, antialergénica, entre otras (Kuskoski y
col 2005).
Los carotenoides pueden actuar como pro-oxidantes o antioxidantes
dependiendo del potencial redox de la molécula y del entorno, entre otros factores.
La inestabilidad misma de los carotenoides en procesos oxidativos se corresponde
con una alta protección para otros compuestos frente a agentes oxidantes. Los
carotenoides que contienen 9 o más dobles enlaces conjugados pueden inactivar
algunas formas reactivas de oxígeno, como el oxígeno singulete. El -caroteno
posee una característica importante que lo diferencia del resto de antioxidantes
solubles en grasas, la de ser más efectivo a bajas presiones de oxígeno (Meléndez-
Martínez y col 2004).
Existen diversos estudios in vivo e in vitro que indican que los carotenoides son
importantes antioxidantes lipofílicos de la dieta, y su consumo regular puede reducir
el riesgo de enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo (Loranty y col 2010).
13
Los productos vegetales son la mejor fuente de carotenoides, sobre todo por su
papel como provitamina A (Saini y col 2015). Además, se ha demostrado que una
dieta rica en vegetales ricos en carotenoides disminuye el riesgo de cáncer,
enfermedades cardiovasculares, degeneración macular relacionada con la edad y
formación de cataratas (Saini y col 2015). Por otro lado, se han determinado los
perfiles de carotenoides de especies de bayas y frutas tropicales, lo que sugiere que
existe el potencial de altos niveles de estos pigmentos en extractos acuosos de frutas
y hierbas derivadas de éstos. Sin embargo, aunque puede haber cantidades
apreciables de carotenoides en hojas frescas, este valor puede reducirse
considerablemente durante el procesamiento, dando lugar a diversos productos de
degradación (Loranty y col 2010). Además, otros factores como parte de la planta,
especie, grado de madurez y prácticas de cultivo y manejo en post-cosecha tienen
efecto sobre los niveles de los carotenoides (Raju y col 2007; Yahia y col 2018).
También se han hecho investigaciones sobre el papel biológico de las clorofilas
sobre la salud humana, y se ha sugerido que ayudan en la interrupción de
enfermedades como cáncer, enfermedades cardiovasculares y otras enfermedades
crónicas (Sangeetha y col 2010).
a. Actividad antioxidante
El interés por los antioxidantes naturales en las plantas ha aumentado debido al
crecimiento a nivel mundial del uso de extractos de plantas para usarse como
aditivos en alimentos y cosméticos, sobre todo para asegurar la calidad y/o
estabilidad de los lípidos y productos que contienen lípidos (Loranty y col 2010). Un
antioxidante se define como “cualquier sustancia que, cuando está presente a baja
14
concentración en comparación con la de un sustrato oxidable, retrasa o evita
significativamente la oxidación de ese sustrato” (Frankel y Meyer 2000). Los
antioxidantes pueden actuar neutralizando la acción nociva de especies reactivas por
tres mecanismos principales: donación de átomos de hidrógeno, transferencia de
electrones individuales y quelación de metales de transición (Granato y col 2018).
Las especies reactivas de oxígeno (ERO) son especies potencialmente reactivas
derivadas de las reacciones de oxígeno que ocurren en el organismo. Aunque son
necesarios para las funciones celulares, por ejemplo la señalización y regulación
celular (Foyer 2018), el desequilibrio entre sustancias oxidantes y antioxidantes
puede generar estrés oxidativo (Shukla y col 2012). Estos radicales se producen por
procesos endógenos (enzimas oxidativas, cadena respiratoria) o exógenos (fumar,
toxinas, contaminación del aire, entre otros) y pueden dañar a los ácidos nucleicos y
las membranas, siendo uno de los factores que contribuyen a la ateroesclerosis,
cataratas, cáncer, isquemia (vasoconstricción, trombosis), gota, envejecimiento,
demencia, diabetes, fibrosis pulmonar y enfermedades de Alzheimer y Parkinson
(Loranty y col 2010).
Especialmente para la ateroesclerosis, se ha sugerido que las modificaciones
oxidativas de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) tienen un importante papel en
el inicio y desarrollo de esta enfermedad. Muchos estudios han demostrado que la
oxidación de las LDL puede retrasarse con sustancias antioxidantes tales como la
vitamina E, β-caroteno y ubiquinol contenidos en la lipoproteína, asimismo, extractos
de plantas medicinales con propiedades antioxidantes retardan este proceso en
sistemas in vitro, así como la aparición de la ateroesclerosis en modelos in vivo (Loy
15
y col 2002). Por otro lado, el organismo está expuesto a un exceso de radicales libres
y resulta improbable que un solo antioxidante sea capaz de proteger a las células de
la amplia gama de trastornos agudos y crónicos originados por el exceso de
radicales libres (Farzaneh y Carvalho 2015).
Hay muchos métodos para evaluar la actividad antioxidante, ya sea in vitro o in
vivo. La estrategia más utilizada es probar la actividad antioxidante total de
determinada sustancia frente a sustancias cromógenas de naturaleza radical en
sistemas in vitro. La pérdida de color ocurre proporcionalmente con la concentración.
Sin embargo, las determinaciones in vitro, nos dan tan sólo una idea aproximada de
lo que ocurre en situaciones complejas in vivo (Kuskoski y col 2005). A pesar de que
existen muchos métodos para la medición de actividad antioxidante, uno sólo no es
capaz de identificar todos los posibles mecanismos que están implicados en la
oxidación (Frank y Meyer 2000).
A continuación se describen algunos ensayos que se utilizan para la medición de
la capacidad antioxidante de extractos de plantas reportados en la literatura.
1) Ensayo de inhibición de radical DPPH
El método del radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH) evalúa la capacidad
antioxidante de sustancias o extractos que pueden reaccionar con un radical estable,
DPPH, en solución metanólica. El método está basado en la medición de la
absorbancia de los cambios en la concentración de DPPH después de la reacción
con un antioxidante. En la reacción, el electrón desapareado del radical DPPH es
reducido por la donación de un átomo de hidrógeno de la sustancia antioxidante (AH)
o una especie radical (R•), como se indica en la siguiente reacción:
16
DPPH• + AH  DPPH-H + A•
DPPH• + R•  DPPH-R
La reducción del radical DPPH se monitorea midiendo la absorbancia a 515 nm
durante la reacción, ya que en su forma radical, el DPPH• de color violeta absorbe a
esta longitud de onda, pero al ser reducido, la absorción disminuye cambiando a un
color amarillo (Brand-Williams y col 1995; Dawidowicz y col 2012).
El método de DPPH es fácil, rápido y más económico que otros métodos para
medir la capacidad antioxidante in vitro, y puede ser adaptado a extractos con
diferentes solventes como etanol, metanol, benceno, acetona acuosa y etanol
acuoso, entre otros (Cheng y col 2006).
2) Ensayo de inhibición de radicales •OH en la degradación de 2-desoxi-D-

ribosa
Los daños sobre el ADN se pueden generar a través de procesos metabólicos y/o
por diversos agentes químicos o físicos externos (Cadet y col 2016). Una de las
especies de oxígeno más reactivas en sistemas biológicos es el radical hidroxilo
(•HO), que puede formarse por la exposición a radiaciones ionizantes y al contacto de
ciertos metales de transición con H2O2, y están involucrados en muchas
enfermedades degenerativas, pudiendo atacar incluso a alcanos, que son
considerados moléculas estables a condiciones fisiológicas (Aruoma 1994; Chobot
2010).
La reacción de Fenton (ecuación 1) se desarrolla debido a la descomposición de
H2O2 con metales de transición (como Fe, Cu, Cr o Mn), que actúan como
17
catalizadores, y se acelera por la adición de agentes reductores, como el ácido
ascórbico, generando radicales hidroxilo (Chobot 2010), que están implicados en
rutas de degradación del ADN bajo condiciones fisiológicas (Cadet y col 2016). Los
catalizadores luego son regenerados en reacciones de Haber-Weiss (ecuación 2)
(Chobot 2010).
Fe2+ + H2O2  Fe3+ + OH- + •HO (1)
Fe3+ + O2•-  Fe2+ + O2 (2)
En el ensayo de la desoxirribosa, se produce la reacción de Fenton a partir de Fe
(III)-EDTA y H2O2 en presencia de ácido ascórbico para atacar a la molécula de 2-
desoxi-D-ribosa. Esta mezcla de reacción se calienta con ácido tiobarbitúrico (TBA),
a bajo pH. Los •OH que no sean atrapados por el EDTA, atacarán a la molécula de
desoxirribosa provocando su oxidación, generando un cromógeno color rosado, que
es un complejo del producto de descomposición de desoxirribosa, malondialdehído
(MDA) con TBA. Sin embargo, cuando en la reacción existan compuestos capaces
de competir por los radicales hidroxilo, tales como compuestos fenólicos, se inhibirá
la oxidación de la desoxirribosa y no se formará el cromógeno. El producto
cromógeno formado se monitorea espectrofotométricamente a 532 nm (Aruoma
1994).
Se ha sugerido que el daño ocasionado por el sistema Fe (III)-EDTA / H2O2 /
ácido ascórbico, se asemeja al daño ocasionado en el ADN por radiaciones
ionizantes (Aruoma 1994). Por lo que los resultados obtenidos con este ensayo
18
darían una idea de la protección sobre el ADN que confieren los compuestos
antioxidantes presentes en el material vegetal.
3) Ensayo de inhibición de la oxidación de lipoproteínas de baja densidad

(LDL) inducida por cobre
El desarrollo de aterosclerosis es consecuencia de la oxidación de las
lipoproteínas de baja densidad (LDL), en gran medida generada principalmente por
ERO y por la presencia de cantidades catalíticas de metales (Loy y col 2002; Milde y
col 2007). Esto es debido a que las LDL oxidadas al ser reconocidas por macrófagos,
originan células espumosas dando lugar a la formación de estrías grasas que, al
acumularse, constituyen la placa aterosclerótica (Pérez-Guerra 2007). Se ha
demostrado que el consumo de antioxidantes provenientes de frutas y vegetales
está asociado a la disminución del riesgo de padecer enfermedades
cardiovasculares. Sin embargo, se ha sugerido que la combinación de varios tipos
de antioxidantes naturales tiene un mayor beneficio a la salud, ya que puede haber
efectos sinérgicos sobre la inhibición de la peroxidación lipídica (Milde y col 2007).
Los productos de degradación de la peroxidación lipídica tales como malondialdehído
(MDA), 4-hidroxi-2-nonenal (HNE), 2-propenal (acroleína) e isopropanol se pueden
medir en plasma u orina como índice indirecto de estrés oxidativo. El ensayo que
más frecuentemente se utiliza para esta medida es la determinación de la oxidación
de LDL en plasma ex vivo, donde se miden las sustancias reactivas al ácido
tiobarbitúrico (TBARS) generadas por un oxidante, en el cual se forma un cromóforo
producto de la reacción de una molécula de malondialdehído (MDA) con dos
moléculas de ácido tiobarbitúrico (TBA). Se calienta una sustancia antioxidante con
19
TBA en condiciones ácidas y el complejo formado MDA/TBA se lee a 532 nm. El
ambiente ácido es generado por ácido tricloroacético (TCA), que precipita las
proteínas y se aumenta la sensibilidad del complejo MDA/TBA extrayendo con un
solvente orgánico como butanol (Calmarza-Calmarza 2008).
4) Ensayo de la inhibición de hemólisis eritrocitaria inducida por

dihidrocloruro de 2,2-azobis (2-metil-amidinopropano)
El estrés oxidativo también puede afectar gravemente a nivel celular,
especialmente en la membrana, ya que es el primer sitio de contacto al ataque de
radicales libres (Bonarska-Kujawa y col 2011). El daño del estrés oxidativo en los
eritrocitos puede derivar en enfermedades tales como β-talasemia, anemia
falciforme, deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogeasa y otras hemoglobinopatías
(Zhao y col 2017).
La membrana de los eritrocitos está compuesta por 39.5 % de proteínas y 35.1 %
de lípidos (principalmente ácidos grasos poliinsaturados), lo que la hace altamente
susceptible a la peroxidación. Además, las células rojas de la sangre contienen
grandes cantidades de oxígeno y de hierro proveniente de la hemoglobina, por lo que
pueden ser iniciadores del proceso oxidativo (Meshkini 2015). Por esto, los eritrocitos
han sido considerados un excelente modelo experimental sobre el daño ocasionado
por el estrés oxidativo en las membranas celulares (Zhao y col 2017). Se sabe que el
H2O2 puede penetrar la membrana de los eritrocitos dañando a la célula desde
ambos sitios de la membrana (Meng y col 2015). Es por ello que la incorporación de
compuestos antioxidantes tiene un papel fundamental para la preservación de la
20
integridad estructural y funcional de la membrana celular, ayudando al equilibrio
iónico y la actividad de receptores y enzimas unidas a ella (Meshkini 2015).
Cuando se libera el hierro de la hemoglobina debido al estrés oxidativo, puede
unirse a metabolitos intracelulares y componentes de la membrana que pueden
generar radicales hidroxilo a partir de la reacción con O2 en reacciones tipo Fenton,
provocando la peroxidación lipídica de la membrana (Durán y col 2013). El
[dihidrocloruro de 2,2-azobis (2-metil-amidinopropano)], abreviado como AAPH, es
un iniciador de radicales libres por descomposición térmica sin la adición de
cofactores, que ha sido usado comúnmente para evaluación de antioxidantes
naturales (Lim y col 2002; Wang y col 2017). En este método ex vivo se evalúa el
porcentaje de inhibición de la hemólisis de eritrocitos de un extracto o compuesto
antioxidante cuando se incuba con la presencia del inductor de radicales AAPH a
partir de H2O2.
b. Actividad antimicrobiana
En febrero de 2017, la Organización Mundial de la Salud (OMS) dio a conocer
una lista de las bacterias patógenas para las que se necesitan nuevos antibióticos de
manera urgente, ya que presentan altos niveles de resistencia a los antibióticos
actualmente disponibles, y se ha dado prioridad como un problema de salud a nivel
mundial debido a la fácil propagación de enfermedades infecciosas ocasionadas por
estos microorganismos altamente resistentes (OMS 2017). Dentro de las
enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) las infecciones más recurrentes se
dan por bacterias como Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Listeria
monocytogenes y a los géneros Salmonella, Campylobacter y Shigella. Éstas
21
constituyen un problema sanitario y económico, ya que propagan fácilmente
provocando efectos nocivos agudos o crónicos (Ruiz y col 2017).
La resistencia antibiótica se define como “la resistencia de una bacteria al
tratamiento con drogas antibióticas que originalmente eran eficaces para el
tratamiento de la infección causada por ese microorganismo” (Barberi y col 2017).
Esto ha dado lugar a que se piense en nuevas fuentes de compuestos
antimicrobianos naturales en combinación con los antibióticos ya existentes, con el
fin de mejorar el efecto del antibiótico. El estudio en décadas pasadas de
compuestos fitoquímicos, ha figurado a la actividad antimicrobiana como una de sus
propiedades más estudiadas. Esto ha llevado a la investigación de nuevas formas de
aplicación de estos compuestos como potenciales antimicrobianos (Barbieri y col
2017). Anesini y col (1993), estudiaron 132 especies de plantas conocidas por sus
propiedades terapéuticas, y encontraron que la ebullición en agua de bulbos y hojas
produjo extractos muy activos contra bacterias resistentes a penicilina (Anesini y col
1993).
Este tipo de estudios ha dado lugar a la búsqueda de nuevas formas de combatir
infecciones, y dado que la síntesis de nuevos antibióticos conlleva muchos años para
la disponibilidad al mercado, estudios recientes han demostrado que el uso
combinado de antibióticos actualmente disponibles con compuestos fitoquímicos
provenientes de fuentes naturales, puede incrementar la actividad de estos
antibióticos y disminuir la dosis de los mismos; ya que la monoterapia con
fitoquímicos requeriría de altas dosis para obtener la concentración mínima inhibitoria
(CMI) comparada con la de un fármaco antibiótico (Barbieri y col 2017).
22
Dentro de las infecciones más recurrentes se encuentra la salmonelosis que es
causada por la bacteria Salmonella. El género Salmonella es representativo de la
familia Enterobacteriaceae, bacilos gram-negativos formadores de esporas. En este
tipo en particular presentan tres tipos de antígenos: somático O, flagelar H y capsular
Vi. Existen dos especies del género Salmonella: Salmonella bongori y Salmonella
entérica. La última se divide a la vez en seis subespecies: entericae, salamae,
arizonae, diarizonae, houtenae e indica. (Gutiérrez-Castillo y col 2008).
Existen alrededor de 2500 cepas diferentes (serotipos o variantes séricas) de
Salmonella spp., pero los dos serotipos de Salmonella más importantes son la
Salmonella Enteriditis y Salmonella Typhimurium, porque son las que provocan el
mayor problema de infecciones gastrointestinales a nivel mundial. Si bien estas
infecciones suelen ser un trastorno sin complicaciones y muchas veces no requerir
tratamiento, sí puede provocar síntomas graves que ponen en riesgo la vida en
niños, ancianos y pacientes inmunocomprometidos (OMS 2013). Desde principios de
la década de 1990 se han identificado cepas de Salmonella resistentes a una gama
de antimicrobianos, que en la actualidad representan un problema de salud pública
grave (OMS 2013). Por su parte, la listeriosis, la infección causada por Listeria
monocytogenes, puede causar infecciones invasivas durante el embarazo en
mujeres y provocar la pérdida del feto, nacimientos prematuros o infecciones en
neonatos; en pacientes inmunocomprometidos puede causar gastroenteritis febril
autolimitada y tiene una mortalidad superior al 30 % (OMS 2018).
23
B. EL NONI (Morinda citriflia L.)
1. Descripción botánica, origen y distribución
La planta de Morinda citrifolia L., llamada comúnmente “noni”, es un pequeño
árbol perenne, miembro de la familia Rubiaceae. El género Morinda contiene
aproximadamente 80 especies, incluyendo citrifolia. Su nombre científico proviene
originalmente de las palabras del latín “morus” atribuído a mora, e “indicus” que
proviene de su origen indio. El noni es originario del sureste de Asia y crece en
regiones tropicales y subtropicales (Carrillo-López y Yahia 2011; Assi y col 2015;
Motshakeri y col 2015).
Las flores perfectas del noni son pequeñas, blancas y tubulares, se agrupan
juntas y se insertan en el pedúnculo, con corola de color blanco verdoso (Chan-
Blanco y col 2006).
El fruto es de forma oval, de aproximadamente 4-10 cm de largo por 3-4 cm de
diámetro. Este fruto al madurar, tiene un olor a queso rancio, y debido a esto también
se le conoce como “fruto del queso” (Carrillo-López y Yahia 2011). Su superficie es
ligeramente arrugada y los rangos de color van de verde a amarillo, hasta un blanco
o gris traslúcido en el tiempo de cosecha, con pequeños brotes marrones rojizos que
contienen a las semillas. (Chan-Blanco y col 2006).
Las semillas son similares en tamaño y forma a las semillas de manzana, pero
tienen una capa más dura (Carrillo-López y Yahia 2011). Se encuentran en pequeños
pozos conteniendo cuatro semillas color marrón rojizo, de forma triangular, de
aproximandamente 3.5 mm (Chan-Blanco y col 2006).
24
La hoja exhibe un amplio rango de tamaño y forma, ha sido descrita como elíptica
y ovalada o redondeada, ancha y brillante, de hasta 25 cm de largo (Dittmar 1993;
Pawlus y col 2007). En la Figura 3 se describen las características físicas de M.
citrifolia L.
2. Importancia económica
El noni ha sido cultivado más allá de su área de origen, en Norte América, en
México y en algunos países del Centro y Sur de América. Los grandes mercados de
productos del noni son Norte América, Europa, Japón y México, Asia y Australia, lo
cual ha tenido crecimiento gracias a los beneficios a la salud que ofrece esta planta.
Se estima que el mercado de productos de noni es de un valor de alrededor de
US$400 millones de dólares (Carrillo-López y Yahia 2011). Los productos
comerciales del noni son derivados principalmente del fruto, en forma de jugo, puré o
cápsulas de polvo. Por el crecimiento económico que ha tenido en los últimos años,
la Comisión Europea, en 2003, aceptó el uso del jugo de noni pasteurizado como un
producto seguro para el consumo humano (European Commission 2003), y en 2008,
la Comisión Europea aceptó el uso seguro de las hojas de noni (European
Commission 2008).
En México en 2016, la SAGARPA reportó una superficie sembrada de 67.30 Ha
de noni, con un rendimiento promedio de 7.85 Ton/Ha, y un precio medio rural de
4799.56 $/Ton. Son pocos los estados que producen cantidades importantes de noni
en México, dentro de estos se encuentran Nayarit con una producción de 239.49
Ton, Guerrero con 224.64 Ton, Jalisco con 54.96 Ton, Veracruz con 16.5 Ton,
Michoacán
25
Figura 3. Características de la planta de M. citrifolia L., fruto y hoja.
Adaptado de Motshakeri y col (2015).
26
con 9.27 Ton y Tabasco con 7.5 Ton. El valor comercial de este cultivo se centra
principalmente en la elaboración de productos a base del fruto de noni,
principalmente jugo (SAGARPA 2016).
3. Productos derivados de noni
En la medicina polinesia tradicional, el noni ha sido usado por alrededor de 2000
años para tratar diversas enfermedades. Actualmente, el fruto de noni se
comercializa en forma de jugos o cápsulas de polvo como alimento funcional en Asia,
Europa y Norteamérica, ya que se le atribuyen propiedades como modulador del
sistema inmune, agente anticancerígeno, regulador del ciclo menstrual,
antiinflamatorio, antimutagénico, antioxidante, antimicrobiano, entre otras. En
estudios in vivo e in vitro, el noni y productos derivados han mostrado efectos
analgésico, anti-mutagénico y anti-carcinogénico, actividad antiinflamatoria y la
capacidad de eliminar los radicales libres, de inhibir la oxidación de las lipoproteínas
de baja densidad, de regular el colesterol, de estimular el sistema inmunológico y de
regular la función celular (Motshakeri y col 2015).
Además del jugo de noni, las propiedades terapéuticas de la fruta han resultado
en el uso generalizado de noni en otras formas de productos como suplementos
dietéticos, entre ellos cápsulas de gel, pastillas, jarabes, bebidas, polvos, purés,
extractos, entre otros (Motshakeri y col 2015).
No obstante, la industria de procesamiento del noni se ha centrado en el fruto,
siendo menos aprovechadas otras partes de la planta, como la hoja, que también
presenta potencial beneficioso para la salud por su contenido de fitoquímicos (Chan-
Blanco y col 2006). Actualmente, la hoja se comercializa seca para la preparación de
27
infusiones, ya que este método resulta una manera sencilla de extraer los
compuestos benéficos que se han encontrado en esta parte de la planta.
4. La hoja de noni
La hoja del noni ha sido usada para tratar diversas enfermedades en la medicina
Polinesia tradicional por más de 2000 años por sus diversas propiedades. Entre las
cuales se encuentran la actividad antioxidante y la antimicrobiana, lo que se ha
atribuido a las cantidades importantes de compuestos fenólicos y no fenólicos (Chan-
Blanco y col 2006). En la Polinesia francesa, se ha utilizado la hoja del noni para
cocinar pescado que se envuelve en las mismas y al final se consume. También
fueron tradicionalmente usadas en las Islas del Pacífico y el Caribe como infusión
para el cuidado y mantenimiento de la salud (West y col 2007). Además, resulta
conveniente que la planta sea de fácil cuidado, fuerte y que pueda crecer bajo
diferentes condiciones (West y col 2007).
Las hojas de noni se han usado tradicionalmente para tratar quemaduras de la
piel, dolores de cabeza, fiebre, fracturas óseas, calambres menstruales,
infestaciones de insectos, dolor reumático, úlceras, gota, hemorragia interna, tiña y
neuralgia (Nelson y Elevitch 2006; Nerurkar y col 2015). Y en estudios actuales se ha
probado su actividad para tratar infecciones helmínticas, tuberculosis, estrés
oxidativo, heridas abiertas, como antialérgico (Nerurkar y col 2015) e hiperlipidémico
(Mandukhail y col 2010). Se han realizado estudios in vitro donde extractos
etanólicos de hoja de noni podrían mejorar la pérdida de peso disminuyendo la
actividad de la enzima lipoprotein lipasa (LPL), la cual es un factor clave para el
almacenamiento de la grasa en los tejidos adiposos, y por lo tanto en el desarrollo de
28
obesidad (Pak-Dek y col 2008). En estudios in vivo, ha disminuido significativamente
la glucosa en plasma de ratas diabéticas (Nerurkar y col 2015).
Aunque su consumo como alimento está documentado, no hay muchos estudios
al respecto sobre la composición nutrimental de la hoja de noni. Sin embargo,
Sudjaroen (2012), realizó un estudio sobre la composición química de un grupo de
plantas y vegetales de la región de Songkram, Tailandia, en donde incluyó las hojas
de noni (Morinda citrifolia L.), se determinó la siguiente composición nutrimental:
76.56% agua, 4.71% proteína cruda, 1.42% grasa cruda, 1.97% ceniza, 4.34% fibra
dietaria total, de la cual 3.15% es insoluble y 1.19% es soluble, y 11% carbohidratos.
Además, se determinó el contenido de calcio, vitamina C y β-caroteno, obteniendo
469.71 mg/100 g, 3.48 μg/100 g y 45.78 mg/100 g, respectivamente. Entre los
flavonoides que se han identificado en la planta de noni se encuentran catequina,
epicatequina, kaempferol, quercetina y rutina (Montshakeri y col 2015).
Las hojas de noni también proveen una fuente de proteína para la dieta en áreas
tropicales donde otras fuentes de proteína no están siempre disponibles. Además, se
le ha considerado una excelente fuente de β-caroteno, ya que a esto se le atribuyó el
mejoramiento de la ceguera nocturna en niños de la isla de Kiribati (ubicada en el
Océano Pacífico, en el Noreste de Australia) que consumían la hoja de noni en su
alimentación. Las hojas de noni están incluidas en las tablas de composición de
alimentos para el Este de Asia y las Islas del Pacífico de la Organización Mundial de
la Salud y la Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la
Agricultura (FAO) (West y col 2007).
29
Debido a estos conocimientos tradicionales, y al creciente mercado de productos
de noni, en Japón, Europa y Estados Unidos se ha incrementado el consumo de
productos hechos a base de hoja de noni. West y col (2009), realizaron un estudio
sobre la toxicidad en ratas de infusiones de la hoja seca de noni, encontrando que su
consumo no presentó un riesgo potencial para la salud (West y col 2009). En 2008, el
Panel de Productos Dietéticos, Nutrición y Alergias de la Autoridad Europea de
Seguridad Alimentaria (EFSA, por sus siglas en inglés) concluyó que el uso de hojas
de noni secas y tostadas para la preparación de infusiones a los niveles previstos de
ingesta, es seguro (Zhang y col 2016).
Aalbersberg y col (1993), estudiaron el contenido de carotenoides en las hojas,
corteza y fruto de M. citrifolia y encontraron que las hojas fueron una fuente
sustancial de carotenoides y por lo tanto, tienen un gran potencial para tratar
deficiencia por vitamina A (Pawlus y col 2007). Otro estudio, pero en extractos
acuosos de la hoja de M. citrifolia en Brasil, mostró la presencia de alcaloides,
cumarinas, flavonoides, taninos, saponinas, esteroides y triterpenoides. En el
Cuadro 1 se presentan algunos de los compuestos encontrados en hoja de noni
(Abou-Assi y col 2017).
La identificación de estos compuestos en la hoja de noni ha llevado a la
investigación de su actividad biológica en diferentes extractos. Zin y col (2002)
encontraron propiedades antioxidantes en extractos metanólicos de hoja de noni
similares a la vitamina E y butilhidroxitolueno (BHT), que redujeron la oxidación de
lípidos que causan malos sabores en alimentos. La administración oral de extractos
metanólicos de hoja de noni en ratones con linfoma, lograron incrementar la actividad
30
Cuadro 1. Algunos de los compuestos identificados en la hoja de noni.
Compuesto Clasificación química Actividad

Americanina A Lignano Larvicida, antioxidante
Prolina Aminoácido Fuente de aminoácidos

Leucina esenciales y
Cisteína condicionales
Metionina
Glicina
Histidina
Isoleucina
Ácido glutámico
Fenilalanina
Serina
Treonina
Triptófano
Tirosina
Arginina
Valina
Quercetin-3-O-β-D- Flavonoides Antimicrobiano

glucopiranosa
Quercetin-3-a-L-
ramnopiranosil-(1-6)-β-D-
glucopiranósido
Ácido ursólico Triterpenoides Anticancerígeno
β-sitosterol Esteroles Disminuye el colesterol

en sangre y estimula
sistema inmune
Citrifolinosido B Iridoides Supresor de la inducción
a UVB
Activador de Protein-1
(AP-1)
Kaempferol 3-O-β-D- Derivados de clorofila Podría participar en la
glucopiranosil-(1-2)-a-L- reducción de los niveles
ramnopiranosil-(1-6)-β-D- de glucosa en sangre
galactopiranósido
Escopoletina Derivado de cumarina Efecto antiproliferativo

de cáncer
Adaptado de Abou-Assi y col (2017).
31
de enzimas antioxidantes (catalasa, superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa) y
-
de glutatión y ácido ascórbico. Se sabe que el linfoma progresa por especies como
•
O2 y •OH (Anitha y Mohandass 2006).
Además, se ha evaluado la actividad antimicrobiana en diferentes extractos de
hoja de noni en diferentes estudios. Se ha demostrado que puede inhibir el
crecimiento de bacterias como Salmonella typhi y Staphylococcus aureus gracias a
compuestos fenólicos como acubina, l-asperulósido, alizarina y escopoletina (Abou-
Assi y col 2017). Sharma y Sharma (2010) demostraron la inhibición del crecimiento
con extractos de hoja de noni combinado con Eclipta alba con resultados positivos
sobre todas las bacterias Bacillus cereus, Micrococcus lutens, Staphylococcus
aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae y
Salmonella typhimurium; y en Candida albicans.
C. DECOCCIONES
Las preparaciones herbales son probablemente el método más común de la
medicina tradicional para tratar diversas afecciones. Se les conoce coloquialmente
como té, lo cual proviene en realidad de la infusión preparada con la planta del té
(Camelia sinensis) (Pamplona 2006). Estas preparaciones pueden ser infusiones o
decocciones, las primeras son aquellas en donde el material vegetal (hojas, flores,
raíces o tallos) se extrae con un solvente que puede ser agua, aceite comestible o
alcohol y se deja en reposo o suspendido en el solvente por un tiempo determinado.
En las decocciones, se deja hervir el material vegetal durante unos minutos
permitiendo la salida de más sustancias, aunque pueden perderse algunos
compuestos de aroma; suelen usarse cuando se buscan las propiedades medicinales
32
o la actividad biológica sobre las características organolépticas (Visht y Chaturvedi
2012).
El consumo de infusiones y decocciones ha sido muy popular alrededor del
mundo por muchas generaciones, pero en la última década su consumo se ha
incrementado hasta en un 30% debido principalmente a que hay estudios in vitro e in
vivo que demuestran su potencial para combatir enfermedades degenerativas (da
Silveira y col 2014). Los estudios han correlacionado los beneficios a la salud del
consumo de estas bebidas con la presencia de flavonoides y otros compuestos
fenólicos, los cuales han demostrado actividades antioxidantes (da Silveira y col
2014). Además, el uso de tratamientos con hierbas para combatir enfermedades
tiene efectos secundarios mínimos, o probablemente ninguno, si se compara con
tratamientos químicos, que presentan efectos secundarios (Farzaneh y Carvalho
2015). Por otro lado, el uso de la medicina tradicional y remedios naturales suele ser
a veces, la única fuente asequible para el tratamiento de enfermedades en las
comunidades de bajos recursos económicos (OMS 2002).
El consumo de tés proporciona un blindaje quimiopreventivo contra
enfermedades neurodegenerativas, cáncer y enfermedades cardiovasculares que
son de interés creciente en las investigaciones actuales; este blindaje es
probablemente el resultado de la capacidad de los extractos herbales sobre la
actividad citotóxica y la generación de citoquinas (Farzaneh y Carvalho 2015).
Da Silveira y col (2014), realizaron un estudio de optimización para encontrar las
mejores condiciones de preparación de infusiones y decocciones de té mate (Ilex
paraguariensis), una de las bebidas más consumidas en algunos países de Sud
33
América incluyendo Brasil y Argentina y que tiene alto contenido de rutina, un
flavonoide compuesto por una molécula de quercetina unido a un disacárido,
compuesto de ramnosa y glucosa, al que se le atribuyen propiedades antioxidantes,
antiinflamatorias y hepatoprotectoras; estos autores mencionan que el método y las
condiciones de preparación de las infusiones puede alterar la composición química
del té. Factores como la velocidad de transferencia de los compuestos, la cantidad
de hojas usadas, el tamaño de partícula, el volumen de agua, la temperatura, la
presencia o ausencia de agitación, la duración de la infusión y el uso de ingredientes
adicionales como azúcar o leche también puede alterar la composición química de la
bebida (da Silveira y col 2014).
Las hojas de noni han sido usadas tradicionalmente por los pobladores de islas
del Pacífico y el Caribe para elaborar infusiones que se consumen para promover y
mantener la salud (West y col 2009).
West y col (2009), realizaron un estudio para comparar las propiedades
antioxidantes de infusiones de hoja seca de noni en comparación con infusiones de
té verde. Estos autores concluyeron que la eliminación de radicales DPPH de la
infusión de hojas de noni fue mayor que la infusión de té verde (81.6% frente a
57.5%, P <0,001). Los contenidos medios de quercetina y kaempferol de la infusión
de hojas de noni secadas fueron 0.24 y 0.14 μg/mL, respectivamente. En la infusión
de té verde, estos valores fueron 0.16 y 0.06 μg/mL. Se observó que la infusión de
hoja de noni secada contenía 1.5 veces más quercetina y 2.3 veces más kaempferol
que la infusión de té verde. Esto puede explicar, en parte, la mayor actividad de
eliminación del radical DPPH de la infusión de hojas de noni. Sin embargo, los
34
autores mencionan que estos valores pueden variar debido a que los componentes
pueden diferir de acuerdo al origen y grado de secado de las hojas (West y col 2009).
Farzaneh y Carvalho (2015), también mencionaron que, aunque se correlaciona la
actividad antioxidante con la cantidad de compuestos fenólicos presentes en las
plantas, existe una gran cantidad de compuestos que también pueden ofrecer
actividad antioxidante. También se ha atribuido el efecto antioxidante en la inhibición
de la peroxidación lipídica y la inhibición de radicales •OH al contenido de rutina en
extractos acuosos de la hoja de noni (Serafini y col 2011).
Se han realizado estudios sobre el contenido de compuestos fenólicos en
infusiones de algunas plantas y los beneficios que éstos traen a la salud, sin
embargo, hay pocos estudios sobre el contenido de carotenoides y otros pigmentos,
como las clorofilas, ya que éstos al ser lipofílicos, no se extraen con el agua de
infusión, pero sí podría quedar una cantidad importante en las hojas residuo.
Estudios in vitro e in vivo han demostrado que los carotenoides son importantes
antioxidantes lipofílicos, y que su consumo regular disminuye el riesgo de padecer
enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo (Loranty y col 2010).
D. SUBPRODUCTOS
Como en muchos procesamientos de alimentos, después de la elaboración de
decocciones quedan residuos que bien podrían considerarse como subproductos. Se
ha demostrado en algunos subproductos un contenido importante de compuestos
bioactivos que podrían aprovecharse (Zhou y col 2009). En este sentido, Sáyago-
Ayerdi y col (2014), evaluaron el potencial nutricional, fitoquímico y antioxidante de
subproductos de decocciones de flor de jamaica (Hibiscus sabdariffa L.), y
35
consideraron al subproducto de la decocción de flor de jamaica como un material rico
en polifenoles y fibra dietaria, que podría usarse como fuente de antioxidantes
naturales.
En el caso de decocciones de plantas medicinales, no se encontraron muchos
estudios sobre el uso del subproducto. Sin embargo, como ya se ha mencionado, la
hoja de noni presenta un contenido importante de fibra dietaria y β-caroteno
(Sudjaroen 2012), los cuales son compuestos lipofílicos que no se extraerían con el
agua usada para la preparación herbal, pudiendo resultar en una fuente potencial de
estos compuestos. Se sabe que los procesos de cocción, como las decocciones,
podrían favorecer la extracción de compuestos en el material vegetal y facilitar su
disponibilidad para la absorción de los mismos (Misra y col 2013; Kao y col 2014).
Se han encontrado importantes cantidades de estos compuestos en la planta de
Morinda citrifolia (Chan-Blanco y col 2006; Motshakeri y col 2015), sin embargo, no
existen muchos reportes de las cantidades finales de estos compuestos en extractos
acuosos de la hoja, así como tampoco se han encontrado reportes de las cantidades
residuales en la hoja como subproducto del extracto.
36
IV. JUSTIFICACIÓN
La planta del noni (Morinda citrifolia L.) es poco conocida en México, sin
embargo, se ha reportado que posee diversas propiedades medicinales, entre las
que se encuentran actividades antioxidante y antimicrobiana. Actualmente el fruto se
consume en México principalmente procesado en forma de jugo, puré o como
suplemento alimenticio. Al ser un cultivo que requiere relativamente pocos cuidados
tiene un gran potencial de desarrollo en México debido a que algunos estados
cuentan con las condiciones climatológicas adecuadas para su crecimiento. Además,
se ha demostrado que las diversas condiciones ambientales promueven la
producción de diferentes metabolitos secundarios incluso dentro de una misma
variedad de planta, por lo que es importante caracterizar la planta de noni de la
región. Por sus propiedades medicinales y nutrimentales, el uso del fruto del noni va
en aumento, sin embargo, se ha restado importancia a otras partes estructurales de
la planta, como la hoja, de la cual se ha demostrado que posee cantidades
importantes de compuestos fitoquímicos que podrían proporcionarle propiedades
medicinales. Por otro lado, la elaboración de productos a partir del fruto o de la hoja,
dejan residuos de la planta que podrían contener aún considerables cantidades de
compuestos fitoquímicos o nutrimentales que son desaprovechados.
Debido a esto, la orientación de este trabajo estuvo encaminada a darle un uso a
la hoja del noni mediante la realización de decocciones de la misma, y determinar el
potencial de aprovechamiento del subproducto resultante con el fin de determinar sus
compuestos fitoquímicos y evaluar sus propiedades antimicrobianas y antioxidantes,
tanto de la decocción como de la hoja residuo.
37
V. HIPÓTESIS
La decocción de la hoja de noni, así como la hoja residuo de la decocción, presentan
cantidades importantes de fitoquímicos y propiedades antioxidante y antimicrobiana.
38
VI. OBJETIVOS
A. OBJETIVO GENERAL
Realizar la caracterización fitoquímica y evaluar la actividad antioxidante y
antimicrobiana de productos derivados de la hoja del noni (decocción y hoja residuo
de la decocción).
B. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
1. Realizar el análisis fisicoquímico (humedad, cenizas, pH, acidez titulable y
sólidos solubles totales) de hoja, decocción y residuo de decocción de hoja de
noni.
2. Determinar la composición de fitoquímicos importantes (fenólicos totales,
clorofilas totales y carotenoides totales) en hoja, decocción y residuo de
decocción de hoja de noni.
3. Identificar y cuantificar el contenido de carotenoides utilizando la técnica de
cromatografía de líquidos de alta presión (HPLC) en hoja, decocción y residuo
de decocción de hoja de noni.
4. Evaluar la capacidad antioxidante de hoja, decocción y residuo de decocción
de hoja de noni utilizando 4 ensayos, incluyendo “inhibición del radical DPPH”,
“inhibición de oxidación de LDL”, “inhibición de la degradación de 2-desoxi-D-
ribosa” e “inhibición de la hemólisis eritrocitaria”.
5. Evaluar la actividad antimicrobiana de hoja, decocción y hoja residuo de
decocción noni en cepas de bacteria.
39
VII. MATERIALES Y MÉTODOS
A. MATERIALES
Se utilizó como materia prima hojas de noni (Morinda citrifolia L.) recolectadas de
diferentes árboles en un huerto ubicado en Carretera Sanalona, Culiacán, Sinaloa,
en abril de 2017. Las hojas fueron seleccionadas por similitud de tamaño y color,
para obtener muestras homogéneas. Fueron trasladadas al laboratorio de Bioquímica
Poscosecha de Frutas y Hortalizas de la Facultad de Ciencias Químico-Biológicas de
la Universidad Autónoma de Sinaloa, donde se llevó a cabo su lavado con agua
corriente, sanitización y enjuague con agua destilada. Las muestras fueron secadas y
almacenadas a -20 °C para posteriormente ser liofilizadas. De esta etapa de
liofilización se obtuvo la muestra de hoja cruda (HC).
1. Elaboración de las decocciones y obtención de los residuos de
decocción de hoja de noni
Para la realización de las decocciones se utilizó el liofilizado de HC, siguiendo un
método de preparación de decocciones a partir de polvo de hierbas. Se usaron 2
gramos de hoja seca (liofilizada) por cada 250 mL (que es lo que se añade
típicamente a una infusión) de agua destilada a 100°C con calentamiento continuo. El
polvo de materia seca se colocó dentro de un filtro de papel para cafetera sobre una
canastilla de tela, y ésta se puso dentro del agua en ebullición, a fin de simular una
bolsa de té comercial. Se realizaron decocciones con dos tiempos de procesamiento,
5 y 10 minutos, denominadas como D-5 y D-10, respectivamente. Se prepararon
40
cada vez que se realizaron análisis dejando enfriar a temperatura ambiente antes de
efectuar el análisis.
Para cada una de las decocciones, se obtuvieron los residuos de decocción de
hoja, los cuales fueron removidos del exceso de humedad y congelados a -20 °C
hasta su liofilización. Las muestras de residuo de decocción de hoja de noni se
denominaron R-5 y R-10, para 5 y 10 minutos respectivamente.
B. MÉTODOS
1. Análisis fisicoquímicos
a. Humedad
Se determinó el contenido de humedad mediante el método termogravimétrico
972.2 descrito por la AOAC (2012) en las muestras de hoja cruda (HC),decocción de
5 min (D-5), decocción de 10 min (D-10), residuo de decocción de hoja de 5 min (R-
5) y residuo de decocción de hoja de 10 min (R-10). El método se basa en someter la
muestra a desecación en una estufa de aire forzado hasta obtener peso constante.
Mediante la cuantificación de la pérdida de peso, se determina el porcentaje de
humedad contenido en la muestra.
El análisis se llevó a cabo por triplicado. Se colocaron una serie de cápsulas de
porcelana en una estufa (marca Felisa, Modelo FE-292D, Serie 0511109) por 24
horas a 100 °C para conseguir el peso constante (PCc). Se pesaron 1.5 g de muestra
fresca (PMf) junto con la cápsula de porcelana utilizando una balanza analítica
(Marca Sartorius ED2245) y posteriormente se secaron en la estufa durante 24 horas
a 100 °C. Una vez pasado el tiempo de secado por convección se dejaron enfriar a
41
temperatura ambiente por 30 min en un desecador. Después se determinó el peso de
la muestra seca (PMs) calculando el contenido de humedad con la siguiente fórmula:
( )
( ) ( )
Donde:
PMf = Peso de la muestra fresca (g)
PCc = Peso constante de la cápsula (g)
PMs = Peso del recipiente con la muestra seca (g)
b. Cenizas
Se siguió la metodología 940.26 de la AOAC (2012) por triplicado. Esta
determinación se llevó a cabo colocando varios crisoles de porcelana en una estufa
con aire forzado para obtener peso constante (Thermolyne, Modelo FB1415M, Serie
1257050461027, México) por espacio de 24 h a una temperatura de 100 °C.
Enseguida fueron ambientados durante 30 min en un desecador y se registró el peso
(W2). Inmediatamente después a cada crisol se le adicionaron 2 g de muestra fresca
(PMf), los cuales fueron sometidos a carbonización en una placa de calentamiento
(Thermolyne, Modelo SP131015, Serie 130040705026). Los crisoles con la muestra
carbonizada fueron colocados en una mufla por espacio de 5 h a una temperatura de
550 °C. Pasado este tiempo, la temperatura de la mufla se bajó hasta los 100 °C,
para posteriormente colocar los crisoles con la muestra en el desecador en el cual se
mantuvieron por 30 minutos, finalizado esto, se registró su peso (W1). Los cálculos
fueron realizados de acuerdo con la siguiente fórmula:
42
( ) ( )
Donde:
W1 = Peso del crisol con cenizas (g)
W2 = Peso del crisol (g)
PMf = Peso de la muestra fresca (g)
c. Acidez titulable
Se llevó a cabo de acuerdo con el método oficial de la AOAC (2012), que
consistió en pesar 5 g de cada muestra, en fresco (HC, R-5 y R-10) a los cuales se
les adicionaron 50 mL de agua destilada neutra (pH=7), posteriormente se filtró y se
tomó una alícuota de 20 mL para proceder a titular con hidróxido de sodio 0.1 N
hasta alcanzar un pH de 8.1 + 0.2 (punto de vire de la fenolftaleína). En el caso de
las decocciones (D-5 y D-10), se usaron 50 mL de la misma como alícuota para las
mediciones. Los cambios de pH fueron observados en un potenciómetro (Orion 420-
A, USA) y el porcentaje de acidez titulable se expresó como el porcentaje de ácido
cítrico que fue calculado con la siguiente ecuación:
[( )( )( )( )]
( ) ( )
[( )( )]
Donde:
VG = mL de NaOH gastados en la titulación.
V = Volumen total de la disolución.
43
N = Normalidad del NaOH (0.1 N).
A = Alícuota de la muestra.
MEqA = Peso miliequivalente del ácido cítrico (0.064 g)
PM = Peso de la muestra.
Nota: En el caso del cálculo de las decocciones, se dividió solamente entre el
volumen de la alícuota (A), sin tomar en cuenta volumen total de la disolución (V) ni
peso de la muestra (PM).
d. pH
Para la medición del pH se siguió la metodología de la AOAC (2012), para la cual
se utilizó un potenciómetro digital (Orion 420-A, USA) previamente calibrado a pH 4,
7 y 10; en las mismas alícuotas obtenidas para el análisis de acidez. Las
determinaciones se realizaron por triplicado.
e. Sólidos solubles totales (°Brix)
El contenido de sólidos solubles totales se llevó a cabo mediante refractometría
de acuerdo al método 932.12 de la AOAC (2012), donde se colocaron unas gotas de
cada decocción en un refractómetro (marca ATAGO 1-877-USA), con ajuste
automático de temperatura. Para el caso de HC, R-5 y R-10, se realizaron las
mediciones en las soluciones obtenidas para el análisis de acidez titulable (5 g de
muestra en 50 mL de agua destilada), se pusieron unas gotas en el refractómetro
para tomar la lectura, reportándose los resultados como °Brix. Las cuantificaciones
se realizaron a temperatura ambiente, por triplicado.
44
2. Caracterización fitoquímica
a. Compuestos fenólicos totales
1) Extracción de la muestra
La extracción se llevó a cabo por triplicado mediante dos metodologías. La
primera fue siguiendo la metodología propuesta por Gómez-Romero y col (2010) con
algunas modificaciones, en HC, R-5 y R-10. Se pesaron 0.5 ± 0.05 g de muestra
liofilizada, se agregaron 5 mL de metanol, se homogenizó en vortex (Scientific
Industries, Modelo No. G560) durante 1 minuto, y se sonicó durante 20 minutos.
Posteriormente, se centrifugó a 4000 rpm (Eppendorf AG, 5811F No. 0030768) a 2
°C durante 15 minutos, se recuperó el sobrenadante en un matraz de fondo redondo
y se repitió el mismo procedimiento con el pellet adicionando otros 5 mL de metanol.
Se juntaron ambos sobrenadantes en el matraz bola y se evaporaron bajo presión
reducida a 40 °C en rotavapor (Heidolph, modelo LABOROTA4011, serie 100500495,
Alemania). El extracto seco resultante se resuspendió en 5 mL de metanol, se filtró
con membrana de nylon de 0.45 μm y se almacenó en viales ámbar a -20 °C hasta el
análisis y se denominó como extracto metanólico (EMeOH).
La segunda metodología, fue pesando por triplicado 0.5 g de muestra liofilizada
(HC, R-5 y R-10), el cual se homogenizó en vortex por espacio de 1 min con 25 mL
de una mezcla de hexano:diclorometano (1:1 v/v). Después, las muestras fueron
sometidas a ultrasonido por 20 min y a centrifugación a una velocidad de 4000 rpm
por 15 min a 4 °C. Los sobrenadantes fueron recuperados y los sedimentos fueron
sometidos al mismo proceso de extracción descrito con anterioridad. Terminada la
segunda extracción, los sobrenadantes fueron reunidos y concentrados por medio de
45
un rotavapor a 40 °C y presión reducida. El extracto seco y concentrado fue
resuspendido en 10 mL de acetona, y después se filtró con membrana de 0.45 μm,
éste se designó como extracto lipofílico (ELF). Los sedimentos residuales producto
de las centrifugaciones de los ELF se sometieron a una nueva extracción con 20 mL
de una mezcla de acetona:agua:ácido acético (70:29.5:0.5 v/v/v) mediante
homogenización, sonicación y centrifugación bajo las mismas condiciones
mencionadas en el apartado anterior, se juntaron los sobrenadantes sin concentrar
en rotavapor, y se obtuvo el extracto hidrofílico (EHF) (Wu y col 2004).
2) Curva de calibración
Para la curva de calibración se realizó una solución stock, por triplicado, de ácido
gálico 1 mg/ mL en agua destilada. Posteriormente se prepararon diluciones de 20,
40, 60, 80, 100 y 120 μg/mL, las cuales fueron utilizadas para llevar a cabo el ensayo
de Folin-Ciocalteu que se explica en el paso siguiente.
3) Determinación del contenido de compuestos fenólicos totales
Para efectuar el ensayo se siguió la metodología de Singleton y col (1999) se
adicionaron en tubos de vidrio, 500 μL de agua destilada, 125 µL del extracto
(decocción, EMeOH o EHF, y de cada dilución para el caso de la curva de
calibración), el cual se oxidó con 125 μL del reactivo Folin-Ciocalteu. Luego de 6 min
de reposo en oscuridad, se adicionaron 1250 μL de Na2CO3 al 7% como catalizador
y 1000 µL de agua destilada. Después de 90 min de incubación en oscuridad, se
midió la absorbancia a 760 nm utilizando un espectrofotómetro (Modelo GENESYS
10 UV, Serie 2H7G229001, USA). El contenido de fenólicos totales se reportó como
46
miligramos equivalentes de ácido gálico por gramo de muestra en base seca (mg
AG/100g bs) y por 100 gramos de muestra en base húmeda (mg AG/100g bh).
b. Carotenoides totales y clorofilas totales
La extracción de carotenoides y clorofilas se llevó a cabo mediante la
metodología de Ornelas-Paz y col (2013), con algunas modificaciones. Los extractos
se realizaron por triplicado. Para el caso de HC, R-5 y R-10 (liofilizadas) se pesó 1 g
de muestra y se pusieron en tubos tipo Falcon de 50 mL, y para el caso de D-5 y D-
10, se pesaron 200 g del líquido (que corresponden aproximadamente a 200 mL) y
se colocaron en matraces Erlenmeyer de 500 mL. A cada muestra se le adicionó 0.1
g de Ca2CO3 para neutralizar los ácidos presentes y 20 mL de metanol. Esta mezcla
se homogenizó en Ultraturrax durante 1 min y el homogenizado se filtró por vacío en
papel filtro Whatman No. 3. Se realizaron 2 lavados adicionales con metanol (20 mL
c/u) y luego 2 lavados (20 mL c/u) con una mezcla de hexano:acetona (1:1 v/v)
conteniendo 0.1% de butilhidroxitolueno (BHT) como antioxidante, hasta que el
residuo sólido quedó decolorado. El filtrado se vació a un embudo de separación de
500 mL, se agregaron 40 mL de Na2SO4 al 10% y se agitó vigorosamente durante 1
min; seguido de esto se hicieron 3 lavados con agua destilada (50 mL c/u) y se agitó
durante 30 seg en cada lavado. Se dejó reposar durante 15 min hasta la separación
de fases para después decantar y separar la fase orgánica, la cual se colocó en
matraces bola cuidando que no quedaran gotas de la fase acuosa (en cuyo caso se
retiraron cuidadosamente con pipeta Pasteur de vidrio). El solvente orgánico del
extracto se evaporó en rotavapor por 15 min a 40 °C. Una vez obtenido el extracto
47
concentrado, en el caso de hoja cruda y hoja residuo, se resuspendió en 2 mL de
acetona grado HPLC; y en el caso de decocción, se resuspendió en 2 mL de acetona
y adicionalmente, se evaporó el solvente con corriente de nitrógeno y finalmente se
resuspendió en 500 μL de acetona grado HPLC. Los extractos se filtraron con
membrana de nylon de 0.45 μm (Whatman International Ltd, Maidstrone, England) y
se pusieron en viales para las mediciones.
2) Curva de calibración de β-caroteno
Se pesaron 0.001 g de estándar de β-caroteno y se aforaron a 10 mL con
acetona generando una solución stock de 10 μg/mL (se realizó por triplicado). De ella
se tomaron 100, 200, 300, 400 y 500 μL y se completaron a 2 mL con acetona para
cada dilución. La curva de calibración fue generada con concentraciones de 5, 10,
15, 20 y 25 μg/mL, utilizando acetona como blanco.
3) Cuantificación de carotenoides totales y clorofilas totales
Una vez obtenidos los extractos, se hicieron diluciones adecuadas con acetona y
se determinó la absorbancia en un espectrofotómetro (Modelo GENESYS 10 UV,
Serie 2H7G229001, USA) a tres longitudes de onda: 450, 645 y 662 nm. La
determinación de clorofilas se calculó con las ecuaciones de Lichtenthaler y
Buschmann (2001):
( )
( )
48
Donde:
A662 = Absorbancia de la muestra a 662 nm
A645 = Absorbancia de la muestra a 645 nm
El resultado de clorofilas totales se expresó como mg/g bs y mg/100 g bh de
clorofilas totales.
El contenido de carotenoides totales se calculó con las mediciones de
absorbancia a 450 nm a partir de la curva de β-caroteno, y restando de este valor el
contenido de clorofila total de las ecuaciones anteriores. Se expresó en mgEβ-
caroteno/g bs y mgEβ-caroteno/100 g bh.
c. Carotenoides individuales identificados y cuantificados por HPLC
El análisis de carotenoides individuales se realizó con los mismos extractos
obtenidos para carotenoides totales. Las mediciones se realizaron el mismo día de
obtención de los extractos.
2) Identificación y cuantificación de los carotenoides por HPLC
Los extractos fueron inyectados en volúmenes de: HC, R-5 y R-10, 10 μL; y D-5 y
D-10, 15 μL; en un sistema HPLC (HP 1100, Agilent Technologies Co, Palo Alto,
USA) equipado con un detector de arreglo de diodos (DAD). Se utilizó una columna
YMC C30 de 3 μm, 4,6 x 150 mm en fase reversa a 15 °C. La fase móvil consistió en
agua (A), metanol (B) y metil ter-butil-éter (C) con una velocidad de flujo de 0.75
mL/min y el siguiente gradiente: 4% A / 94.5% B / 1.5% C al minuto 0; 4% A / 68% B /
28% C al minuto 31; y 4% A / 53% B / 43% C al minuto 52. Los espectros de
49
absorción fueron registrados a 441, 452, 447 y 665 nm. La identificación y
cuantificación de los picos se realizó comparando los tiempos de retención y los
espectros de absorción de estándares de β-caroteno y luteína (Cervantes-Paz,
2012).
3. Evaluación de la capacidad antioxidante
a. Capacidad de inhibición del radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazilo (DPPH)
Se siguió la metodología de Brand-Williams y col (1995) para la evaluación de la
capacidad antioxidante por el método de inhibición del radical DPPH. En el que se
determinaron los cambios de concentración del radical DPPH después de ser
reducido por la acción de donación de átomos de hidrógeno de una sustancia
antioxidante, produciéndose un cambio de color de violeta a amarillo que es medido
espectrofotométricamente.
Para la curva de calibración se preparó una solución stock de Trolox 1 mg/mL en
metanol (por triplicado) para realizar diluciones de 20, 40, 60, 80, 100, 120, 140 y 160
μg/mL.
2) Medición de la capacidad antioxidante
Se mezclaron 100 μL de cada extracto (ELF, EHF, EMeOH, decocción) o de cada
dilución de Trolox, con 2900 μL del radical DPPH en tubos de vidrio. De igual manera
se determinó la absorbancia de un control de 100 μL de metanol y 2900 μL de radical
DPPH. La mezcla se agitó por 10 s en vortex y se dejó reposar por 30 min en la
oscuridad. Después de este tiempo, se leyó la absorbancia a 515 nm y se calculó la
50
capacidad antioxidante como % de inhibición del radical DPPH mediante la siguiente
ecuación:
( )
Donde:
A0 = Absorbancia del control (metanol)
A = Absorbancia de la muestra
El valor de la capacidad de inhibición del radical DPPH se expresó como
micromoles equivalentes de Trolox por gramo de base seca y por 100 gramos de
base húmeda (μmoles ET/g bs y μmoles ET/100 g bh).
b. Capacidad de inhibición de radicales •OH en el ensayo de degradación

de 2-deoxi-D-ribosa
1) Preparación de los extractos
En este ensayo los solventes orgánicos pueden interferir debido a que los
radicales hidroxilo reaccionan con la mayor parte de los solventes orgánicos (Chobot
2010), por lo que los extractos metanólicos (EMeOH) se concentraron en rotavapor
para eliminar el solvente y fueron resuspendidos con buffer de fosfatos salino, PBS,
(KH2PO4 0.05 M, K2HPO4 0.05 M, NaCl 0.15 M) 50 mM, pH 7.4. Así también, los
extractos hidrofílicos (EHF) se prepararon con acetona al 70 % en agua y una vez
obtenido, se eliminó la acetona en rotavapor para dejar un extracto acuoso. Las
decocciones se evaluaron de manera directa.
51
Se realizó, por triplicado, una solución stock de catequina en PBS a 1 mg/mL,
y a partir de ésta se hicieron diluciones para obtener concentraciones de 10, 20, 50,
80 y 100 μg/mL.
3) Medición de la inhibición de degradación de 2-desoxi-D-ribosa
Se llevó a cabo la metodología utilizada por Dorman y col (2003) con algunas
modificaciones. El ensayo consistió en mezclar, en tubos de vidrio, 500 µL de
extracto (o dilución de catequina), 100 µL de 2-desoxi-D-ribosa 2.8 mM, 200 µL de
una solución premezclada de FeCl3 100 μM con EDTA 104 µM 1:1 (v/v), 100 µL de
H2O2 1mM y 100 µL de ácido ascórbico 100 µM. Para el blanco se adicionaron 500
µL de PBS 50 mM en lugar de muestra. La mezcla de reacción se agitó y se incubó a
37°C durante 1 hr en baño de agua con agitación constante. Transcurrido este
tiempo se le adicionó 1 mL de ácido tricloroacético (TCA) al 2.8 % (v / v en agua
destilada) y 1 mL de ácido tiobarbitúrico (TBA) al 1.0 % (v / v en NaOH 0.05 N) y se
sometió a calentamiento en baño de agua durante 20 min a temperatura de 95°C.
Para detener la reacción, después de los 20 min, se colocaron las muestras en baño
de hielo durante aproximadamente 5 min. Posteriormente, se le adicionaron 2 mL de
n-butanol, se agitó vigorosamente en vortex y se centrifugó a 4000 rpm durante 10
min a 21 °C para separar la fase orgánica de la acuosa. Finalmente la fase orgánica
fue leída en espectrofotómetro a 532 nm. El porcentaje de captación de radicales
hidroxilo (% CROH) se determinó con la siguiente ecuación:
( )
52
Donde:
A0 = Absorbancia del control (PBS)
Los resultados se reportaron como equivalentes de catequina por gramo de base
seca (mg EC/g bs) o por 100 g de base húmeda (mg EC/100 g bh).
c. Capacidad de inhibición de la oxidación de lipoproteínas de baja

densidad (LDL) inducida por cobre
El ensayo se basó en el método descrito por Loy y col (2002) con modificaciones
de Jacobo-Valenzuela (2011), el cual evalúa el efecto antioxidante sobre la oxidación
de las lipoproteínas de baja densidad (LDL). La preparación de los extractos fue
similar a la del ensayo de inhibición de la oxidación de 2-deoxi-D-ribosa.
1) Obtención de las lipoproteínas de baja densidad
Se utilizó suero obtenido de voluntarios sanos mediante punción venosa,
recolectado en tubos de plástico sin anticoagulante del sistema Vacutainer. Para la
separación de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) se utilizó el reactivo
precipitante de HDL colesterol (marca SPINREACT, Ref: 1001095) y se siguió la
metodología de separación de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Para lo
cual, se adicionaron 100 μL de reactivo precipitante por cada mL de suero, se dejó
reposar 10 min y se centrifugó a 3000 g durante 10 min para obtener la pastilla de
LDL. La cual, después de eliminar el sobrenadante, se solubilizó con buffer de
fosfatos (PBS) a pH de 7.4, agregando 1 mL de buffer por cada 100 mg de pastilla de
LDL (para una concentración de 0.1 μg/mL).
53
Se realizó por triplicado, una solución stock de Trolox de 1 mg/mL, a partir de la
cual se obtuvieron diluciones para concentraciones de 10, 15, 20, 30, 50 y 80 μg/mL.
3) Medición de la capacidad de inhibición de oxidación de LDL
En tubos de vidrio, se adicionaron 200 μL de la solución de LDL en buffer de
fosfatos salino (para una concentración de 0.2 μg/mL en la mezcla de reacción),
seguido de 100 μL de muestra (extracto o dilución de Trolox) y 100 μL de CuSO4 0.5
mM, se completó el volumen a 1 mL con PBS. Para el blanco se usó PBS en vez de
muestra. La mezcla se agitó en vortex por algunos segundos y se llevó a incubación
a 37 °C durante 3 horas con agitación constante. Después de este periodo, se
adicionó 1 mL de TCA al 15 % (v / v en agua destilada) y 1 mL de TBA al 0.37 % (v /
v en NaOH 0.05 N). Se agitó y se llevó a incubación en baño de agua a 95 °C
durante 20 min para la formación del complejo TBA-MDA. Una vez pasada la
incubación, se llevó a baño de hielo durante aproximadamente 5 min para detener la
reacción. Se adicionaron 2 mL de n-butanol y se agitó vigorosamente en vortex. Se
centrifugó a 4000 rpm durante 10 min a 24 °C para separación completa de las fases.
Una vez obtenida la fase superior, se leyó su absorbancia a 532 nm en un
espectrofotómetro (Modelo GENESYS 10 UV, Serie 2H7G229001, USA).
Para la determinación del porcentaje de inhibición se calculó de acuerdo a la
siguiente ecuación:
( )
A0 = Absorbancia del control (PBS)
54
Los resultados se reportaron como equivalentes de Trolox por gramo de base
seca (μmoles ET/g bs) o por 100 g de base húmeda (μmoles ET/100 g bh).
d. Capacidad de inhibición de la hemólisis eritrocitaria inducida por

dihidrocloruro de 2,2-azobis (2-metil-amidinopropano) (AAPH)
La determinación de la actividad anti-hemolítica de los extractos se realizó según
la metodología de Aman y col (2013) con algunas modificaciones. Los extractos
fueron los mismos que se utilizaron para el ensayo de la degradación de 2-desoxi-D-
ribosa.
1) Obtención de los eritrocitos
El ensayo de la inhibición de hemólisis eritrocitaria se llevó a cabo usando
muestras de sangre de voluntarios sanos. Las muestras de sangre se recolectaron
mediante punción venosa en tubos con EDTA. Se centrifugaron a 2500 xg durante 15
min y se descartó el plasma cuidadosamente con pipeta pasteur de vidrio eliminando
además la porción leucocitaria. Una vez que se obtuvo la porción eritrocitaria se
llevaron a cabo de 3 a 4 lavados de los eritrocitos con 5 volúmenes de buffer de
fosfatos salino, PBS 1X, (Na2HPO4, KH2PO4, KCl, NaCl, ajustado a pH de 7.4),
descartando cada vez el sobrenadante y la capa leucocitaria sobrante. Finalmente,
se preparó una suspensión de eritrocitos al 5 % con PBS para el ensayo.
2) Medición de la capacidad de inhibición de hemólisis
En tubos Eppendorf de 1.5 mL, se agregaron 0.25 mL de suspensión de
eritrocitos al 5 %, 0.25 mL de extracto a diferentes concentraciones y 0.25 mL de
AAPH [dihidrocloruro de 2,2-azobis (2-metil-amidinopropano)] 200 mM. La mezcla se

55
incubó durante 3 horas a 37 °C con agitación constante. Después de la incubación, la
mezcla se transfirió a tubos tipo Falcon de 15 mL y se diluyó con 8 volúmenes de
PBS. Se centrifugó a 2500 g durante 5 min y se midió la absorbancia del
sobrenadante en un espectrofotómetro a 540 nm.
Se realizaron los siguientes controles:
 Control de estabilidad de eritrocitos: 0.25 mL de suspensión de eritrocitos con
0.5 mL de PBS.
 Control de estabilidad de los eritrocitos frente a la muestra (negativo): 0.25 mL
de suspensión de eritrocitos, 0.25 mL de muestra y 0.25 mL de PBS.
 Control de hemólisis con AAPH: 0.25 mL de suspensión de eritrocitos, 0.25
mL de AAPH y 0.25 mL de PBS.
 Control de hemólisis total (positivo): 0.25 mL de suspensión de eritrocitos y
0.5 mL de agua destilada.
 Antioxidantes de referencia: 0.25 mL de suspensión de eritrocitos, 0.25 mL de
antioxidante de referencia (ácido ascórbico o Trolox) y 0.25 mL de AAPH.
El porcentaje de inhibición se calculó con la siguiente ecuación:
( )
A0 = Absorbancia del control de hemólisis con AAPH
El resultado se reportó como % de inhibición de hemólisis.
56
4. Evaluación de la actividad antibacteriana
La actividad antibacteriana se evaluó mediante la técnica de Kirby-Bauer
(difusión en disco) de acuerdo con la metodología indicada en el Clinical and
Laboratory Standards Institute (CLSI 2012) y la utilizada por Sharma y Sharma
(2010) y Nofouzi y col (2016). Las cepas bacterianas (Salmonella enterica serovar
Typhimurium ATCC 14028 y Listeria monocytogenes ATCC 7644) fueron sembradas
hasta su fase logarítimica (37°C / 18-20 h), en medio infusión cerebro corazón (BHI,
por sus siglas en inglés). Se llevó a cabo la preparación de una suspensión del
inóculo en PBS 1X ajustando su turbidez a 0.5 del estándar de McFarland (1 - 2 x 108
UFC / mL; %A = 0.08 ± 0.1 a una longitud de onda de 625 nm). Se realizó la
inoculación del agar Mueller-Hinton mediante un hisopo estéril previamente
humedecido con la solución de bacterias, eliminando el exceso, y se estrió sobre la
base del agar abarcando toda la superficie. Se dejó secar por 3-5 min antes de
colocar las soluciones a evaluar.
Los extractos a evaluar (EMeOH de HC, R-5 y R-10; y D-5 y D-10) fueron
evaporados a sequedad en el caso de los EMeOH, y liofilizados en el caso de las
decocciones, y suspendidos en una solución de dimetilsulfóxido (DMSO) al 10 % en
agua estéril. Las soluciones fueron colocadas en discos de papel filtro Whatman No.
3, con un diámetro de 6 mm, previamente esterilizados en autoclave (a 121 °C por 15
min) usando un volumen de 10 µL en cada disco. Se usó como control positivo
gentamicina 10 μg/mL y como control negativo DMSO al 10%.
Las cajas inoculadas se dejaron durante algunos minutos después de colocar los
discos para permitir que los extractos fueran bien difundidos en el agar, se invirtieron
57
las cajas Petri y se incubaron a 37°C durante 18 a 20 h. Una vez terminado el
periodo de incubación se midieron los halos de inhibición visualmente con ayuda de
un vernier. Se consideró zona de inhibición halos mayores a 6 mm.
5. Análisis estadístico
Se empleó estadística inferencial con un diseño completamente al azar a través
del análisis de varianza (ANOVA), con un diseño unifactorial. Los resultados se
expresaron como promedios de 3 repeticiones ± desviación estándar. La
comparación de medias se determinó mediante la prueba de Fisher (LSD), con un
nivel de significancia de 0.05, utilizando el paquete estadístico STATGRAPHIC
Centurion XVI.
58
VIII. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
A. ANÁLISIS FISICOQUÍMICOS
1. Humedad y cenizas
El contenido de humedad entre la hoja cruda de noni (HC) y los residuos de
decocciones de hoja de noni (R-5 y R-10) no tuvieron diferencia estadística
significativa. Los resultados se muestran en el Cuadro 2. Este valor concuerda con lo
reportado por Sudjaroen (2012) para hoja fresca de noni de una región de Tailandia,
en donde se reportó un contenido de humedad de 76.56 %; y el de Andarwulan y col
(2012) de 85.46 %. Sin embargo, para las decocciones de hoja de noni, D-5 y D-10,
el contenido de humedad fue mucho más elevado que las muestras de HC, R-5 y R-
10, ya que su composición es mayormente agua. En el caso de R-5 y R-10, no
tuvieron diferencia significativa con respecto a HC, lo cual podría indicar que el
proceso de decocción no alteró significativamente la estructura / composición de la
hoja que le permite retener la humedad. Jabeen y col (2015), reportaron que la
humedad de las hojas de té (Camellia sinensis), con la que se elabora la bebida de té
verde y té negro, cuando son frescas, oscilan entre 70 y 83 %, sin embargo debido a
los procesos que anteceden a la elaboración del té, el contenido de humedad puede
ser de 60 a 72 %.
El porcentaje de cenizas en R-5 y R-10 fue significativamente menor con
respecto a HC, y presentaron diferencia entre ambas, siendo menor a los 10 minutos.
Esta diferencia no se observó en las decocciones, ya que no hubo diferencia entre D-
5 y D-10. Sudjaroen en 2012, reportó un contendido de cenizas de 1.97 % en hoja
59
Cuadro 2. Contenido de humedad y cenizas de los productos derivados de la hoja de
noni.
% Humedad % Cenizas
HC 80.6643 ± 1.2563b 2.5395 ± 0.2111a
D-5 99.7964 ± 0.0094a 0.0299 ± 0.0031d
D-10 99.7171 ± 0.0040a 0.0491 ± 0.0047d
R-5 81.6125 ± 0.9479b 1.6257 ± 0.0385b
R-10 81.4414 ± 0.8842b 1.2841 ± 0.0859c
HC: Hoja cruda, D-5: Decocción de 5 min, D-10: Decocción de 10 min, R-5: Residuo
decocción de hoja de 5 min y R-10: Residuo de decocción de hoja de 10 min.
Letras diferentes en la misma columna indican diferencia estadística significativa
(Fisher, α=0.05). Media de 3 repeticiones ± desviación estándar.
60
fresca de noni, menor al resultado obtenido en el presente trabajo para HC (2.5395 ±
0.2111 %). Algunos autores reportan los diferentes factores climáticos, ecológicos o
genéticos pueden generar variabilidad en la composición de diferentes cultivares
(Sáyago-Ayerdi y col 2014).
Sáyago-Ayerdi y col (2014) realizaron un estudio en cuatro cultivares de flor
(cáliz) de jamaica (Hibiscus sabdariffa L.), y determinaron que alrededor de 53 - 57 %
de las cenizas permanecieron en el residuo de cáliz después de una decocción de 5
minutos. En los residuos de las decocciones de hoja, tanto de 5 como de 10 min (R-5
y R-10), se observó una retención de cenizas de 64.02 % en R-5 y 50.56 % en R-10
con respecto a HC. Esto debido, probablemente, a que un tiempo de decocción más
prolongado facilita la salida de componentes minerales al agua de decocción. Estos
minerales podrían contener, entre otros, compuestos como CaCO3, KCl y pequeñas
cantidades de SiO2, según el estudio de caracterización por difracción de rayos X de
cenizas en diferentes partes estructurales de noni, realizado por Garay y col (2011).
El contenido de cenizas en hojas para elaboración de té es un parámetro
importante de calidad, como mencionaron Jabeen y col (2015), ya que da indicios de
malas prácticas en los procesos y en la adulteración de las hojas con material
mineral a fin de mejorar los rendimientos. Estos autores reportaron un contenido de
3.7 % de cenizas en hojas frescas de Camellia sinensis, mayor a nuestros resultados
para hoja fresca de noni (HC).
2. Acidez titulable, pH y sólidos solubles totales
Los resultados del análisis fisicoquímico se muestran en el Cuadro 3. Los datos
mostraron un decremento en el porcentaje de acidez titulable (%AT) y de sólidos
61
Cuadro 3. Análisis fisicoquímico de productos derivados de la hoja de noni.
AT (%) pH SST (°Brix)
HC 0.226 ± 0.011a 4.95 ± 0.06c 6.0 ± 0.0a

D-5 0.001 ± 0.0004d 5.41 ± 0.06b 0.1 ± 0.0e
D-10 0.002 ± 0.0001d 5.31 ± 0.03b 0.2 ± 0.0d
R-5 0.126 ± 0.011b 5.34 ± 0.04b 2.0 ± 0.0b
R-10 0.111 ± 0.005c 5.63 ± 0.10a 1.0 ± 0.0c
de decocción de hoja de 5 min y R-10: Residuo de decocción de hoja de 10 min, AT:
acidez titulable.
(Fisher, α=0.05). Media de 3 repeticiones ± desviación estándar.
62
solubles totales (SST) en las decocciones y en los residuos con respecto a la hoja
cruda. Asimismo, el pH tuvo un aumento significativo en las decocciones y las hojas
residuo con respecto a la hoja cruda.
Los valores de SST de las decocciones resultaron similares a los reportados por
Gamboa-Gómez y col (2017) en infusiones de hojas de roble (Quercus convallata y
Quercus arizonica), 0.1 °Brix. Resultados similares a los obtenidos para las
decocciones de hoja de noni, 0.1 ± 0.0 y 0.2 ± 0.0 °Brix para D-5 y D-10,
respectivamente. Entre los dos tiempos de decocción se obtuvieron diferencias
significativas, lo cual sugiere que un mayor tiempo de contacto con el agua, los
sólidos solubles aumentan en la decocción. En cuanto a R-5 y R-10, se observó un
menor nivel de los SST con respecto a la HC, teniéndose un mayor contenido en R-5
que en R-10, lo que corresponde a lo determinado para sus respectivas decocciones.
Por otro lado, en el mismo estudio de Gamboa-Gómez y col (2017), se reportó un pH
de 6.02 y 5.42 para las infusiones de diferentes hojas de roble, con un % AT de 3.0 y
2.7, respectivamente. Resultados similares de pH se obtuvieron en D-5 y D-10, sin
embargo para % AT, los resultados fueron más bajos, reflejando un bajo contenido
de ácidos en las decocciones. Los valores de pH aumentaron después del proceso
de decocción, obteniéndose aumento significativo en decocciones y hojas residuo
con respecto a la hoja cruda.
C. CARACTERIZACIÓN FITOQUÍMICA
1. Compuestos fenólicos totales
Se determinó la composición de compuestos fenólicos totales (CFT) de los
extractos metanólicos e hidrofílicos de HC, R-5 y R-10, así como de las decocciones
63
D-5 y D-10 y los resultados se muestran en la Figura 4. En base seca, el contenido
más alto se presentó en el EHF de HC, presentándose el contenido en el siguiente
orden descendente HC EHF > HC EMeOH > R-5 EMeOH = R-10 EMeOH > R-5 EHF
> R-10 EHF = D-10 > D-5. Teniendo en cuenta que los solventes usados para los
diferentes extractos de HC, R-5 y R-10 tienen distinta polaridad, puede notarse que,
para HC, el EHF tuvo mayor contenido de CFT (6.82 ± 0.21 mgEAG/g bs) que su
EMeOH (5.24 ± 0.15 mgEAG/ g bs) correspondiente. Sin embargo, además de la
polaridad, la obtención de los EHF fue el segundo proceso después de una
extracción lipofílica (con una mezcla de hexano:diclorometano 1:1 v/v), por lo que
puede suponerse que ya no existen compuestos hidrofóbicos que podrían interferir
en la medición de CFT (los cuales son mayormente hidrofílicos), como en el caso de
EMeOH donde puede haber una mezcla de compuestos hidrofóbicos e hidrofílicos.
En R-5 y R-10, los EHF (2.49 ± 0.18 y 1.90 ± 0.09 mgEAG/g bs, respectivamente)
tuvieron menor contenido que sus correspondientes EMeOH (4.42 ± 0.21 y 4.35 ±
0.37 mgEAG/g bs, respectivamente). D-10 presentó un contenido de CFT de 1.58 ±
0.12 mgEAG por gramo de liofilizado usado para la elaboración de la decocción
(recordando que se usaron 2 g de HC liofilizada por cada 250 mL de agua, o bien,
0.8 g por 100 mL), correspondiéndose el contenido del EHF de R-10, que resultó
menor que R-5. Caso similar ocurrió en D-5 (1.12 ± 0.09 mgEAG por gramo de
liofilizado), que fue menor que D-10, correspondiendo a un mayor contenido residual
de compuestos fenólicos en R-5.
Las bebidas herbales son populares por los efectos beneficiosos sobre la salud,
lo cual se ha asociado a los compuestos fenólicos (Rocha-Guzmán y col 2012). Sin
64
8
a
7 Decocciones*
Concentración (mgEAG/gbs)
EMeOH
6 b EHF
5 c c
3 d
e
2 e
f
1
0
D-5 D-10 HC R-5 R-10 HC R-5 R-10
Producto derivado de la hoja de noni
Figura 4. Compuestos fenólicos totales de productos derivados de la hoja de noni.
de decocción de hoja de 5 min y R-10: Residuo de decocción de hoja de 10 min.
EMeOH: Extracto metanólico, EHF: Extracto hidrofílico. *Representa el contenido por
gramo de muestra de HC liofilizada utilizada para elaborar la decocción.
Letras diferentes indican diferencia estadística significativa entre las medias. Media
de 3 repeticiones ± desviación estándar (Fisher, α=0.05).
65
embargo, la forma de preparación puede influir en gran medida en la composición
final del extracto (Fotakis y col 2016). La decocción de la hoja de noni tuvo un mayor
contenido de CFT a los 10 minutos que a los 5 minutos, lo cual podría ser debido al
mayor tiempo de contacto con el agua, mejorando la migración de los CFT.
Fotakis y col (2016), estudiaron las diferencias entre infusiones (15 min) y
decocciones a diferentes tiempos (2 y 15 min), de diez hojas de plantas;
determinaron que la mayoría de las hojas tuvo un mayor contenido de CFT en las
infusiones, sólo dos de ellas tuvieron el mayor contenido en las decocciones de 15
minutos; sin embargo, entre las dos decocciones, la mayoría de las de 15 min,
resultaron con un mayor contenido de CFT, lo cual atribuyeron a que el tratamiento
térmico más prolongado pudo liberar una mayor cantidad de estructuras aglicona.
Esto también explicaría un mayor contenido en D-10 con respecto a D-5. Los CFT en
D-5 y D-10 (que para fines comparativos en términos de base seca serían 4.40 ±
0.33 y 6.23 ± 0.47 mgEAG/g bs, respectivamente) fueron menores a infusiones de
hojas de roble (Quercus), estudiadas por Sánchez-Burgos y col (2013), en donde
obtuvieron un rango de 6.98 a 17.26 mgEAG/g bs, y a infusiones de té verde
(Camellia sinensis) de 33.00 a 90.27 mgEAG/gbs (Erturk y col 2010). Además,
ambas decocciones también resultaron en menor contenido de CFT que en el
estudio de Serafini y col (2011) en decocciones de hoja de noni durante 15 minutos,
donde se cuantificaron 196.8 mgEAG/g bs, y se identificaron rutina, derivados de
quercetina y kaempferol por HPLC.
Los compuestos fenólicos totales en HC, en ambos extractos (EMeOH y EHF),
resultaron mayores a lo reportado en hoja de noni por Andarwulan y col (2012)
66
(72.72 mg/100 g bh), donde además determinaron ácidos fenólicos y flavonoides,
entre los que encontraron ácidos clorogénico y ferúlico, quercetina y kaempferol.
También Zin y col (2006), determinaron los CFT en hojas de noni, obteniendo 0.81
mg equivalentes de catequina por gramo de muestra seca en extractos etanólicos,
mucho menor al obtenido en el presente trabajo en ambos extractos de HC.
Se sabe que la mayoría de los compuestos fenólicos son solubles en agua, pero
pueden degradarse con procesos térmicos muy severos (Chrpova y col 2010; da
Silveira y col 2014). En este estudio, EMeOH y EHF de R-5 y R-10 tuvieron un
decremento después de las decocciones, ya que una parte de los CFT son lixiviados
hacia el agua de decocción. Esto fue más claro en los EHF, ya que ambos fueron
más bajos que HC y aparentemente ocurrió mayor lixiviación con un proceso de
decocción más prolongado. En EMeOH, estas diferencias no resultaron tan claras, ya
que aunque fueron menores que HC, no presentaron diferencia significativa entre
ambos (R-5 y R-10) y tuvieron mayor contenido que los EHF. Esto puede deberse a
que el solvente de extracción (MeOH puro) de estos extractos, podría extraer más
tipos de compuestos no fenólicos y, como señalan algunos autores, la prueba para
medir compuestos fenólicos totales con el reactivo de Folin-Ciocalteu no es una
prueba específica y puede detectar otros compuestos que no son fenólicos (Zin y col
2006). Además, es probable que la afectación del metanol rompa la membrana de
las células y esto mejore la extracción (Garrido y col 2013). Kao y col (2014)
observaron el efecto de diferentes tiempos de ebullición sobre 4 vegetales de hoja,
en dos de los cuales observaron un decremento continuo de los CFT. Sin embargo,
en los otros dos hubo un aumento en los primeros minutos, pero decrementaron a
67
medida que se aumentó el tiempo en ebullición. Caso similar ocurrió en EHF de R-5
y R-10, el tiempo más prolongado provocó disminución del contenido de CFT.
Ferracane y col (2008) señalan que en fases iniciales del tratamiento térmico pueden
liberarse los compuestos fenólicos por modificaciones en la matriz vegetal e
inactivarse la polifenoloxidasa, pero después ocurre degradación de tales
compuestos.
2. Clorofilas a, b y totales
No se detectó la presencia de clorofilas en las decocciones, esto pudo ser debido
a que las clorofilas son altamente sensibles a procesos térmicos y a su naturaleza en
parte lipofílica, por la presencia en su estructura de una cadena esterificada de fitol
(Taiz y Zeiger 2002; Kang 2018), por lo que no se solubilizan fácilmente en agua. La
Figura 5 contiene los resultados de clorofilas medidas espectrofotométricamente. En
el caso de HC, se determinó un valor de clorofilas totales de 5.53 ± 0.36 mg/g bs que
resultó de la suma del contenido de clorofila a (3.97 ± 0.25 mg/g bs) y clorofila b
(1.57 ± 0.11 mg/g bs). Sin embargo, en la literatura comúnmente pigmentos como
clorofilas y carotenoides se reportan en peso fresco (en 100 gramos de muestra
fresca), para HC los valores anteriores corresponden a 107.02 ± 6.93, 76.72 ± 4.77 y
30.29 ± 2.17 mg/100 g de base húmeda (bh), respectivamente para cada uno de los
parámetros anteriores.
El contenido de clorofilas totales de HC fue menor al reportado por Znidarcic y col
(2011) para cinco diferentes vegetales de hoja que son consumidos comúnmente en
68
7
6 Clorofila a a
Concentración (mg/g bs)
Clorofila b
5
Clorofilas totales
a
4 b
3
b c
2 c a
b
1 c
0
HC R-5 R-10 HC R-5 R-10 HC R-5 R-10
Producto derivado de hoja de noni
Figura 5. El contenido de clorofilas en productos derivados de la hoja de noni. HC:
Hoja cruda, D-5: Decocción de 5 min, D-10: Decocción de 10 min, R-5: Residuo
decocción de hoja de 5 min y R-10: Residuo de decocción de hoja de 10 min. ND: No
detectado. El valor de clorofilas totales representa la suma de las clorofilas (a y b)
individuales. Letras diferentes en la misma columna indican diferencia estadística
significativa entre las medias. Media de 3 repeticiones ± desviación estándar (Fisher,
α=0.05).
69
los países mediterráneos, los cuales variaron dentro de un rango de 200.44 a 359.62
mg/100 g de peso fresco y con una relación clorofila a /b de 2.57. Se presentó
similitud con los valores de la relación clorofila a/b, que en HC fue de 2.53. Sin
embargo, para otros vegetales las concentraciones de clorofilas pueden variar. Mou
(2005) reportó valores desde 4.69 a 109.28 mg/100 g bh para ocho diferentes
variedades de lechuga.
En extractos de R-5 y R-10, fue evidente una pérdida significativa de clorofilas a,
b y totales. Los procesos térmicos extremos, como el proceso de decocción a 100
°C, da lugar a la degradación de clorofilas resultando en derivados libres de Mg 2+,
tales como las feofitinas, que provocan una decoloración del verde brillante de las
hojas a tonos marrón-olivo (Kang y col 2018). Además, según los resultados, hubo
mayor degradación de clorofilas a los 10 minutos de decocción, ya que R-10 fue
significativamente menor que R-5 para clorofilas totales, clorofila a y clorofila b;
dando lugar a pérdida de clorofilas totales del 37 y el 60 % en R-5 y R-10,
respectivamente.
Las clorofilas son los pigmentos más abundantes en los vegetales, y pueden
traer beneficios a la salud debido a que son moléculas con gran potencial
antioxidante. Aunque se ha reportado su efecto pro-oxidante debido a la
transferencia de energía del oxígeno singulete para formar especies reactivas de
oxígeno (Lanfer-Marquez y col 2005). Asimismo, se ha reportado que las clorofilas,
así como sus derivados feofitinas pueden brindar un efecto protector a aceites
vegetales comestibles almacenados en oscuridad evitando sus auto-oxidación
70
(Lanfer-Marquez y col 2005). Esto sugiere que la actividad antioxidante de vegetales
verdes podría atribuirse también a las clorofilas presentes.
2. Carotenoides totales
Los resultados de carotenoides totales se pueden observar en el Cuadro 4. El
contenido de CT en HC, de 83.98 ± 2.82 mgEβ-car/100 g bh, resultó mayor que el
obtenido para hoja de noni por Aalbersberg y col (1993), quienes cuantificaron 12.40
mg de carotenoides/100 g bh, así como los resultados obtenidos por Tee y Lim
(1991) quines cuantificaron CT espectrofotométricamente y por HPLC en hoja de
noni, obteniendo valores de 7.05 y 12.27 mg/100 g bh, para cada uno de los métodos
respectivamente.
Por otro lado, el contenido de carotenoides totales en base seca fue de 4.34 ±
0.15, 7.96 ± 0.09 y 6.91 ± 0.18 mgEβ-car/g de muestra de HC, R-5 y R-10,
respectivamente, con diferencia significativa entre las tres muestras.
En vegetales verdes y de hoja, los carotenoides se localizan en las membranas
tilacoides de los cloroplastos incorporados en complejos con proteínas, lo cual
dificulta la extractabilidad de los carotenos de la matriz vegetal (Bernhardt y Schilch
2006). Sin embargo, algunos estudios indican que el procesamiento de alimentos
puede ayudar a liberar los carotenoides de la matriz alimentaria, ya que se puede
romper la pared celular y ocurrir desnaturalización de aquellas proteínas que se
encuentran formando complejos con los carotenoides (Inácio-Alves y col 2013).
Con este argumento, suponemos que el proceso térmico que ocurrió durante la
decocción de la hoja, pudo aumentar la extractabilidad de los carotenoides en los
71
Cuadro 4. El contenido de carotenoides totales de productos derivados de la hoja de
noni.
Carotenoides totales
(mgEβ-car/g bs) (mgEβ-car/100 g bh)
HC 4.34 ± 0.15c 83.98 ± 2.82

D-5 ND ND
D-10 ND ND
R-5 7.96 ± 0.09a 146.44 ± 1.69
R-10 6.91 ± 0.18b 128.26 ± 3.38
ND: No detectado.
72
residuos de decocciones de hoja obteniéndose una mayor concentración de los
mismos. Sin embargo, también podría ocurrir cierto grado de degradación a tiempos
más prolongados de ebullición (Lu y col 2018), obteniéndose menor contenido de CT,
como se observó en R-10. A pesar de ello, ambas hojas residuo, R-5 y R-10 tuvieron
un contenido significativamente mayor de carotenoides totales con respecto a HC.
Aunque el tratamiento con calor puede ayudar la liberación de carotenoides
(Sanchez y col 2014), no se logró observar presencia de carotenoides totales en las
decocciones medidas espectrofotométricamente. Esto debido a la naturaleza
mayormente lipofílica de estos compuestos.
Algunos estudios han demostrado que diferentes tratamientos térmicos pueden
ayudar a mejorar el contenido de carotenoides en productos vegetales, además de
lograr mayor biodisponibilidad. Kao y col (2014) concluyeron que en vegetales de
hoja verde, sometidos a ebullición en agua a diferentes tiempos de cocción, se
obtuvo un mayor contenido de carotenoides en hojas de cilantro, de camote y de
albahaca tailandesa con respecto a muestras frescas. Sin embargo, dependiendo de
la matriz vegetal, a mayores tiempos de ebullición, la concentración de carotenoides
fue menor. En hojas de camote, a los 5 minutos de ebullición, la concentración de
carotenoides totales fue mayor que a 10 minutos. En el presente trabajo, en R-10 se
observó una menor cantidad de CT con respecto a R-5. Además, se ha demostrado
que en otros vegetales ricos en carotenoides, como la zanahoria, la cocción puede
aumentar la respuesta plasmática de β-caroteno y la biodisponibilidad in vitro
(Hedren y col 2002).
73
Cabe señalar que los extractos para la determinación tanto de carotenoides
totales como individuales del presente trabajo no fueron saponificados. A pesar de
que la literatura reporta que el paso de saponificación es importante para remover los
lípidos y clorofilas, así como para hidrolizar ésteres de carotenoides, algunos autores
han indicado que este paso extiende el tiempo del análisis y puede provocar
formación de artefactos y degradación de carotenoides y que la saponificación
debería incluirse en la metodología de extracción sólo cuando sea necesario, ya que
algunas muestras, como los vegetales de hoja, tienen un bajo contenido de lípidos y
de ésteres de carotenoides; asimismo, las clorofilas pueden ser identificadas durante
los análisis cromatográficos (Rodriguez-Amaya y col 2008). Debido a que en análisis
preliminares de este estudio no se observó diferencia considerable entre extractos
saponificados y no saponificados, se decidió no saponificar.
3. Carotenoides individuales
En la Figura 6 se muestran los cromatogramas obtenidos por HPLC para la
identificación y cuantificación de carotenoides en las muestras de HC, D-5, D-10, R-5
y R-10. En HC, se identificaron 23 compuestos con espectros de absorción
característicos de estructuras de carotenoides y 12 con espectros de absorción
característicos de clorofilas (Cuadro 5). Sin embargo, sólo se cuantificaron β-
caroteno y luteína ya que se contó con sus estándares y los cuales fueron los
carotenoides encontrados en mayor cantidad en las muestras.
74
3 1
4
2
1 A
Absorbancia (mUA)
B
1
1 C
2
75
D
1
3 2
E
Tiempo de retención (min)
Figura 6. Cromatogramas obtenidos por HPLC de productos derivados de hoja de noni. (A) HC: Hoja cruda, (B) D-5: Decocción de 5
min, (C) D-10: Decocción de 10 min, (D) R-5: Residuo de decocción de hoja de 5 min y (E) R-10: Residuo de decocción de hoja de
10 min. (1) Luteína, (2) β-caroteno, (3) clorofila b y (4) clorofila a.
Se muestran los cromatogramas detectados con longitud de onda de 452 nm para HC, R-5 y R-10; y de 447 nm para D-5 y D-10.
75
Cuadro 5. Espectros de absorción de compuestos detectados e identificados en la
hoja cruda de noni (HC) mediante cromatografía de líquidos de alta presión.
No. de tR λmax
Tipo de compuesto
pico (min) (nm)
1 8.096 472, 654 D-Clrf
2 8.596 420, 435, 666 D-Clrf
3 9.549 427, 657 D-Clrf
4 10.199 410, 410, 459, 666 D-Clrf
5 11.260 410, 430, 459, 666 D-Clrf
6 12.547 415, 439, 470 D-Cart
7 13.606 419, 442, 471 D-Cart
8 15.218 410, 434, 461 D-Cart
9 15.675 415, 439, 467 D-Cart
10 16.312 402, 424, 451 D-Cart
11 18.634 334*, 427, 444, 471 D-Cart
12 19.051 424, 447, 474 D-Cart
13 19.435 423, 446, 475 D-Cart
14 20.772 418, 441, 469 D-Cart
15 21.519 470, 651 Clorofila b
16 22.819 423, 447, 476 Luteína
17 26.171 428, 454, 481 D-Cart
18 26.972 417, 444, 471 D-Cart
19 28.474 435, 665 Clorofila a
20 30.234 385, 417, 435, 666 D-Clrf
21 31.070 439, 665 D-Clrf
22 31.988 421, 440, 476 D-Cart
23 32.484 443, 655 D-Clrf
24 34.303 416, 440, 477 D-Cart
25 35.114 421, 441, 471 D-Cart
26 35.637 420, 445, 470 D-Cart
27 37.239 421, 441, 471 D-Cart
28 37.935 417, 665 D-Clrf
29 39.893 425, 449, 477 D-Cart
30 41.486 422, 442, 471 D-Cart
31 43.268 375, 416, 438 D-Cart
32 44.082 430, 454, 481 D-Cart
33 45.941 424, 449, 477 β-caroteno
34 46.028 412, 666 D-Clrf
35 49.076 426, 449, 475 D-Cart
D-Clrf: Derivado de clorofila, D-Cart: Derivado de carotenoide, *pico cis.
76
El contenido de β-caroteno en nuestras muestras de HC fue de 46.47 ± 2.66
mg/100 g bh, y fue comparable con el obtenido por Sodjaroen (2012) dentro de un
estudio realizado sobre diferentes plantas locales de Tailandia, en donde se
obtuvieron 45.78 mg de β-caroteno/100 g bh en hoja de noni. Por otro lado, resultó
mayor al reportado por Tee y Lim (1991), de 3.108 mg/100 g bh. Las diferencia en el
contenido de carotenoides en hojas de noni puede deberse a varios factores, como
las diferentes condiciones en que se realizó la cosecha, edad de las hojas, estación
del año, factores ambientales o condiciones de extracción y cuantificación (Raju y col
2007). El contenido de luteína en HC (32.79 ± 2.55 mg/100 g bh), fue hasta 3.6 veces
mayor que el reportado por Tee y Lim (1991) en hoja de noni (8.84 mg/100 g bh).
El contenido de β-caroteno y luteína en hoja de noni (HC), resultó mayor que
otras fuentes vegetales conocidas como fuentes ricas de estos carotenoides
reportadas en literatura, tales como zanahoria (6.15 mg de β-caroteno/100 g bh; 0.51
mg de luteína/100 g bh) y espinaca (5.79 mg de β-caroteno/100 bf; 4.42 mg
luteína/100 g bh) (Vargas-Murga y col 2016).
Así como ocurrió con el contenido de carotenoides totales, el contenido de luteína
y de β-caroteno, fue mayor en los residuos de decocciones de hoja, en R-5 y R-10
respecto a HC, pero sin diferencia significativa entre ambos residuos (Cuadro 6).
El hecho de que haya ocurrido un aumento en el contenido de carotenoides en R-
5 y R-10 podría deberse también a que durante el proceso de decocción, los sólidos
hidrosolubles son lixiviados hacia el agua de decocción, presentándose un fenómeno
77
Cuadro 6. El contenido de β-caroteno y luteína identificados por cromatografía de
líquidos de alta presión (HPLC) en productos derivados de la hoja de noni.
β-caroteno Luteína
(mg/g bs) (mg/100 g bh) (mg/g bs) (mg/100 g bh)
HC 2.40 ± 0.14b 46.47 ± 2.66 1.70 ± 0.13b 32.79 ± 2.55

D-5 ND ND NC NC
D-10 ND ND NC NC
R-5 3.53 ± 0.37a 64.88 ± 6.83 2.02 ± 0.03a 37.13 ± 0.58
R-10 3.57 ± 0.21a 66.22 ± 3.80 1.91 ± 0.09a 35.46 ± 1.68
de decocción de 5 min y R-10: Residuo de decocción de 10 min. ND: No detectado,
NC: No cuantificable. Las longitudes de onda de cuantificación fueron 452 y 447 nm
para β-caroteno y luteína, respectivamente.
entre las medias. Media de 3 repeticiones ± desviación estándar (Fisher, α=0.05).
78
de concentración de los compuestos liposolubles en los residuos de hoja. Es por ello,
que la concentración aumentada tanto de β-caroteno como de luteína, reafirman los
resultados espectrofotométricos para carotenoides totales, en donde se sugirió que el
sometimiento a un tratamiento térmico podría mejorar la extractabilidad de algunos
carotenoides. Estos resultados pueden ser debido a que el tratamiento térmico
provoca la degradación de paredes celulares y de compartimentos intracelulares,
liberando así las sustancias antioxidantes (Lutz y col 2011), siendo tal vez la matriz
estructural de la pared celular un importante factor en el control de la capacidad de
las células para mantener la integridad de los fitoquímicos (Burns y col 2003). Por lo
que se podría atribuir el mayor contenido de β-caroteno y luteína en R-5 y R-10 al
proceso de decocción.
Aunque los carotenoides de hortalizas de hoja tienen bajo grado de absorción, en
comparación con los de frutos o más aún, con carotenoides sintéticos, son los de
mayor contribución de carotenoides en la dieta humana (Saini y col 2015). A pesar
de ello, se ha indicado que diferentes procesamientos, entre ellos el proceso de
decocción en agua, pueden ayudar a liberar los carotenoides de la matriz alimenticia
y hacerlos más accesibles para su absorción en el sistema digestivo (Hedrén y
Svanberg 2002). Un aumento de 27 % en la accesibilidad de β-caroteno de pulpa de
zanahoria en un método de digestión in vitro, después de un proceso de ebullición en
agua fue reportado por Hedrén y Svanberg (2002). Tras el proceso de decocción, R-
5 y R-10 no tuvieron diferencia significativa entre ambos en el contenido de β-
caroteno y luteína, pero sí se presentó un aumento de aproximadamente 1.4 y 1.2
veces de β-caroteno y luteína, respectivamente, en comparación con la hoja cruda.
79
La luteína tiene un papel importante en el organismo, principalmente debido a
que previene el daño ocasionado por la luz azul que ingresa en el ojo, la
degeneración macular relacionada con la edad y la formación de cataratas (Krinsky y
Johnson 2005). Al igual que el β-caroteno, el contenido de luteína fue alto en HC
respecto a otras fuentes vegetales. A pesar de que los carotenoides no son
compuestos que presentan alta solubilidad en agua, las xantofilas presentan
solubilidad parcial debido a los átomos de oxígeno en su estructura, por lo que se
podría esperar la migración de xantofilas, como la luteína, hacia el agua de las
decocciones (Loranty y col 2010). En el caso de las decocciones de hoja de noni,
tanto en las de 5 min como en las de 10 min, se pudo observar la presencia de
luteína en los resultados obtenidos por HPLC. Sin embargo, las concentraciones en
ambos casos estuvieron por debajo del límite de cuantificación. Loranty col (2010)
determinaron, en un estudio de pigmentos lipofílicos, que en infusiones de 25
plantas probadas, sólo la luteína pudo solubilizarse en el agua en un rango del 0 al
10.5 %, atribuyendo este resultado a la baja solubilidad de la luteína, tanto en agua
fría o caliente, a las diferencias estructurales de la matriz del material de cada
muestra y a otros fitoquímicos que pueden aumentar o disminuir la solubilización de
la luteína.
Así como el β-caroteno, la luteína también fue significativamente mayor en su
contenido en R-5 y R-10. Otros autores han reportado mayor cantidad en el
contenido de luteína en vegetales de hoja después de ebullición en agua. Pasaporte
y col (2014) determinaron un aumento de más de 200 % en el contenido de luteína
en hojas de moringa (Moringa oleífera) después del sometimiento en ebullición
80
durante 15 min. Atribuyendo estos resultados a la degradación de enzimas
oxidantes de carotenoides que se produce durante el proceso térmico, a la liberación
de carotenoides de los complejos proteínicos o a la estabilidad de la luteína al calor.
Liu y col (2007) reportaron que el contenido de luteína en hojas de Sauropus
androgynus (consumida popularmente en el Sureste de Asia) aumentó 28 %
después de ebullición durante 20 min, mientras que no se detectó luteína en el agua
de cocción.
El β-caroteno es el precursor principal de la vitamina A, necesaria para el
funcionamiento normal del sistema visual, la función inmune, la integridad de las
células epiteliales y el crecimiento, desarrollo y reproducción (FAO 2004). Ya que la
molécula de la vitamina A (retinol) es la mitad de la molécula de β-caroteno, pero con
una molécula de agua añadida al final de la cadena (De Carvalho y col 2013), su
actividad se expresa como equivalentes de retinol (ER), considerándose que 1 μg de
retinol es equivalente a 6 μg de β-caroteno. En el Cuadro 7 se muestran los ER para
las muestras de HC, R-5 y R-10, así como la contribución al consumo diario
recomendado por la Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la
Agricultura (en el cuadro se muestra el consumo de referencia de 600 μg ER por día,
que corresponde al requerimiento de un hombre adulto), y la contribución al consumo
diario recomendado de luteína por la Asociación Americana de Optometría (American
Optometric Association) de 10 mg/día (Pasaporte y col 2014).
Además de β-caroteno y luteína, se identificaron las clorofilas a y b (Figura 6)
utilizando sus espectros de absorción, siendo las longitudes de onda máximas para
81
Cuadro 7. Cantidad del consumo diario recomendado de luteína y equivalentes de
retinol en 10 gramos de muestra fresca de productos derivados de la hoja de noni.
10 g de muestra bh proporcionan
% del nivel diario % del nivel diario

Luteína (mg) recomendado de *ER (μg) recomendado de
luteínaa ERb
HC 3.28 32.79 774.50 129.08
D-5 NC - ND -
D-10 NC - ND -
R-5 3.713 37.13 1081.33 180.22
R-10 3.546 35.46 1103.67 183.95
a
10 mg / día para luteína y b600 μg ER / día.
NC: No cuantificable
ND: No detectado
*ER: Equivalentes de retinol
82
clorofila a de 435 y 665 nm, y las de clorofila b de 470 y 651 nm. Ambas clorofilas se
identificaron en HC, sin embargo, en R-5 y R-10 el pico de clorofila b fue menor con
respecto a HC, y el pico de clorofila a no se identificó. Esto se debe a que, como ya
se mencionó, la clorofila es altamente sensible a altas temperaturas y se degrada
fácilmente (Kang y col 2018). En D-5 y D-10 no se identificaron clorofilas.
D. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
1. Capacidad de inhibición del radical DPPH
En la Figura 7 se presentan los resultados obtenidos para el ensayo de inhibición
del radical DPPH de decocciones de hoja de noni y de tres tipos de extractos
(EMeOH, ELF y EHF) de HC, R-5 y R-10. Se puede observar que el extracto que
tuvo la mayor inhibición del radical fue el EHF de HC seguido por el EMeOH de HC.
En cuanto a los residuos de decocciones de hoja, R-5 y R-10 de los EMeOH no
tuvieron diferencia significativa entre ellos, y tuvieron menor capacidad antioxidante
que HC del mismo tipo de extracto. Asimismo, R-5 y R-10 de EHF resultaron en
menor capacidad antioxidante que HC del mismo tipo de extracto. Por el contrario, en
los ELF, la muestra que tuvo la menor capacidad de inhibición del radical fue la HC,
mientras que R-5 y R-10 no tuvieron diferencia significativa.
La capacidad de inhibición del radical DPPH de decocciones, EMeOH y EHF, se
relacionó con el contenido de CFT. En ambos ensayos, se observó una tendencia
entre su contenido de CFT y su capacidad de inhibición del radical. El EHF de HC,
que tuvo el mayor contenido de CFT, también fue el mayor inhibidor de DPPH. El
EMeOH de HC tuvo menor capacidad antioxidante que el EHF pero se observó una
83
18
Capacidad antioxidante (μmolET/g bs)
16 Decocciones* a
EMeOH
14 ELF
12 EHF
10 b
c c cd
8
de de e
6 f
4 g g
2
0
D-5 D-10 HC R-5 R-10 HC R-5 R-10 HC R-5 R-10
Producto derivado de la hoja de noni
Figura 7. Capacidad de inhibición del radical DPPH de productos derivados de la
hoja de noni. HC: Hoja cruda, D-5: Decocción de 5 min, D-10: Decocción de 10 min,
R-5: Residuo de decocción de hoja de 5 min y R-10: Residuo de decocción de hoja
de 10 min. EMeOH: Extracto metanólico, ELF: Extracto lipofílico, EHF: Extracto
hidrofílico. *Representa la capacidad antioxidante por gramo de muestra de HC
liofilizada utilizada para elaborar la decocción.
84
tendencia similar en cuanto a CFT con las otras muestras. R-5 y R-10 de EMeOH no
tuvieron diferencia significativa, similar a su contenido de CFT. Además, resultaron
menores que HC del mismo extracto. En cuanto los EHF de R-5 y R-10 presentaron
diferencias significativas, pero no con la misma tendencia que su contenido de CFT,
ya que R-10, el cual tuvo menor contenido de CFT, resultó en mayor capacidad
antioxidante que R-5.
A pesar de que no se midió el contenido de CFT de los ELF (ya que se considera
a los compuestos fenólicos de naturaleza hidrofílica), su capacidad de inhibición de
radical DPPH podría estar relacionada con su contenido de carotenoides. Puede
notarse que R-5 y R-10 de este tipo de extractos resultó en mayor capacidad
antioxidante que HC. Esto coincide con su contenido de β-caroteno y luteína, que
resultaron más elevados en los residuos de decocciones hoja que en la hoja cruda
de noni. El β-caroteno presenta capacidad de eliminación de radicales libres, tales
como el DPPH a bajas concentraciones (Sen-Gupta y Gosh 2013); así como la
luteína, lo cual puede atribuirse a su estructura no sólo de dobles enlaces
conjugados, sino a los grupos hidroxilo terminales que le proporcionan un alto efecto
antioxidante (Sindhu y col 2010).
Por otro lado, aunque D-10 presentó mayor contenido de CFT que D-5, no hubo
diferencia significativa en su capacidad de inhibición de DPPH. West y col (2009)
evaluaron la capacidad de inhibición de DPPH en infusiones de hoja seca de noni,
obteniendo un 81.6 % de inhibición del radical, esto fue mucho más alto que lo
determinado en el presente trabajo para D-5 y D-10, que fue de 24.9 y 23.1 % de
inhibición, respectivamente (lo que corresponde a 10.81 ± 1.01 y 10.12 ± 0.86
85
μmolET/g en base seca, respectivamente). Esta diferencia puede deberse al método
de preparación en ambos casos, ya que en el estudio de los autores mencionados,
se llevó a cabo un proceso de infusión (sin ebullición continua) y un secado previo de
la hoja, lo cual podría haber elevado la cantidad de flavonoles agliconas,
aumentando la capacidad antioxidante en las infusiones. Deng y col (2011),
sugirieron que después de un proceso térmico de secado en las hojas de noni, se
pueden degradar glucósidos de flavonoles por termohidrólisis a sus
correspondientes agliconas, lo cual podría aumentar su bioactividad.
Pese a que existen coincidencias entre el contenido de CFT y la capacidad de
inhibición del radical DPPH, los compuestos individuales pueden presentar distinta
capacidad antioxidante, ya que esta depende de factores como la estructura del
compuesto antioxidante y de los mecanismos de acción involucrados (Zin y col
2006). Se ha demostrado que distintas fracciones cromatográficas de extractos de
diferentes partes de la planta de M. citrifolia, presentan capacidad antioxidante
diferente a su contenido de compuestos fenólicos (Zin y col 2006). Lo que explicaría,
algunas de las discrepancias que se presentaron en la capacidad antioxidante de los
diferentes extractos analizados.
Por otro lado, tales diferencias también pueden deberse al tipo de solvente
utilizado para cada extracto. Como destacaron Dawidowicz y col (2012), la reacción
de estabilización del radical DPPH se ve influenciada por este factor, sin embargo no
mencionan cómo el tipo de solvente afecta dicha reacción; pero con diferentes
solventes utilizados (con la misma cantidad del antioxidante BHT), la acetona
permitió una menor concentración de DPPH remanente que el metanol y que el
86
hexano. Además, estos autores determinaron que un mayor contenido de agua en el
solvente aumentó la capacidad antioxidante. Esto podría coincidir con los solventes
utilizados en el EHF de HC (donde se utilizó acetona acuosa), que proporcionó la
mayor capacidad antioxidante en este ensayo.
2. Capacidad de inhibición de radicales OH en el ensayo de degradación de
2-desoxi-D-ribosa
El ensayo de inhibición de la 2-desoxi-D-ribosa resultó significativamente mayor
en las decocciones de 5 y 10 minutos, sin diferencia entre ambas, por encima del
valor obtenido para los extractos de HC, R-5 y R-10. La capacidad de inhibición de la
oxidación de 2-desoxi-D-ribosa de las muestras, fue expresada como equivalentes
de catequina (EC), para la homogenización de los resultados con un compuesto
antioxidante conocido que no dependa de la concentración del extracto. Los valores
de la Figura 8 corresponden a porcentajes de inhibición de 67.78 %, D-5; 67.35 %,
D-10; 41.91 %, HC EMeOH; 15.49 %, R-5 EMeOH; 24.80 %, R-10 EMeOH; 21.55 %,
HC EHF; 26.02 %, R-5 EHF; y 22.80 %, R-10 EHF.
Aunque la capacidad de inhibición de radicales sintéticos como el DPPH es un
indicativo del poder reductor de radicales libres de las sustancias antioxidantes
(principalmente de compuestos fenólicos), éste no es un radical biológicamente
relevante. Los radicales hidroxilo (OH•) por otro lado, son los radicales más
importantes en sistemas biológicos, debido a que son altamente reactivos y
degradan fácilmente azúcares, proteínas y ácidos grasos poliinsaturados, entre otras
moléculas (Dorman y col 2003). En este caso, D-5 y D-10 resultaron los extractos
más antioxidantes comparados con todas las demás muestras. Esto puede deberse
87
4
3.5 a a
Decocción*
Inhibición (mgEC/g bs)
3 EMeOH
b EHF
2.5
2 c
1.5 d d d
1
e
0.5
0
D-5 D-10 HC R-5 R-10 HC R-5 R-10
Figura 8. Capacidad de inhibición de radicales OH• en el ensayo de degradación de
2-desoxi-D-ribosa de productos derivados de la hoja de noni. HC: Hoja cruda, D-5:
Decocción de 5 min, D-10: Decocción de 10 min, R-5: Residuo de decocción de hoja
de 5 min y R-10: Residuo de decocción de hoja de 10 min. EMeOH: Extracto
metanólico, EHF: Extracto hidrofílico. *Representa la capacidad antioxidante por
gramo de muestra de HC liofilizada utilizada para elaborar la decocción.
88
a su contenido de CFT, que actúan como estabilizadores de radicales. Dorman y col
(2003) determinaron la capacidad inhibidora de radicales OH• en el ensayo de 2-
desoxi-D-ribosa de extractos acuosos de cuatro plantas de la familia Lamiaceae, y
determinaron valores de IC50 de 2.16 a 3.4 mg/mL. Aunque no se determinaron
valores de IC50 en el presente trabajo, las decocciones, a concentraciones de 8
mg/mL, exhibieron más del 50 % de inhibición de la oxidación de desoxirribosa.
La capacidad de evitar la degradación de desoxirribosa por OH• en extractos
acuosos de hoja de noni, fue evaluada por Serafini y col (2011) a distintas
concentraciones. Estos autores obtuvieron resultados inhibitorios en todas las
concentraciones probadas (1 a 1000 μg/mL), que resultaron similares al Trolox; lo
que relacionaron con su contenido de CFT (196.8 mg/mL). Esto resulta comparable
con el resultado de D-5 y D-10, ya que a pesar de que su contenido de CFT no fue
tan alto como en el estudio de Serafini y col (2011), fue suficiente para inhibir la
degradación de la desoxirribosa.
La capacidad de inhibición de radicales de los compuestos fenólicos no sólo
depende de la cantidad de ellos presente en un extracto, sino de varios factores,
como la cantidad y posición de grupos hidroxilo en los anillos, la capacidad de
donación de electrones e hidrógeno y de la estabilidad de productos de oxidación de
los fenólicos (Cheng 2003). Puede ser debido a estos factores que la capacidad de
inhibición de OH• resultó más baja para los extractos de HC, R-5 y R-10, aunque su
contenido de fenólicos no fuera más bajo que las decocciones para todos los casos,
por lo que la capacidad antioxidante no parece depender solamente de la cantidad
de CFT. Los extractos de HC resultaron más activos que los extractos de R-5 y R-10
89
en el caso de los EMeOH, ya que como se ha mencionado antes, en las hojas
residuo de la decocción se supone que queda muy poca cantidad de fenólicos
remanentes que son lixiviados en la decocción. Sin embargo, para los EHF no
ocurrió lo mismo, presentándose mayor capacidad antioxidante en R-5 (HC y R-10
sin diferencia significativa).
3. Capacidad de inhibición de la oxidación de LDL inducida por cobre
Los resultados obtenidos de inhibición de la oxidación de LDL se muestran en la
Figura 9 y fueron expresados como micromoles equivalentes de Trolox por gramo de
base seca (µmolET/g bs) y por 100 gramos de base húmeda (µmolET/100 g bh). A
diferencia del ensayo de la desoxirribosa, en la inhibición de oxidación de LDL sí se
presentaron diferencias significativas entre las decocciones, teniendo mayor
inhibición D-10. Por otro lado, la HC, tanto de EMeOH como de EHF, resultó mayor
que R-5 y R-10. Mostrando tendencia similar a la observada en el ensayo de DPPH
para estos extractos, así como con su contenido fenólico, el cual fue menor en los
residuos de decocciones de hoja que en HC.
De la Figura 9, los porcentajes de inhibición correspondientes a las muestras
fueron de 82.25 %, D-5; 89.06 %, D-10; 73.30 %, HC EMeOH; 55.68 %, R-5 EMeOH;
37.48 %, R-10 EMeOH; 64.88 %, HC EHF; 12.38 %, R-5 EHF; y 13.57 %, R-10 EHF.
La oxidación de las LDL que ocurre por un exceso de radicales libres, tiene como
su consecuencia más importante el desarrollo de aterosclerosis, pero también puede
intervenir en el desarrollo de otras enfermedades crónicas de importancia mundial
como la diabetes mellitus y la enfermedad renal crónica (Carvajal-Carvajal 2015).
90
12
a
10 a Decocciones*
Inhibición (µmolET/g bs)
b b
EMeOH
8 c EHF
6
d
4
2 e e
0
D-5 D-10 HC R-5 R-10 HC R-5 R-10
Figura 9. Capacidad de inhibición de la oxidación de lipoproteínas de baja densidad
(LDL) de productos derivados de la hoja de noni. HC: Hoja cruda, D-5: Decocción de
5 min, D-10: Decocción de 10 min, R-5: Residuo de decocción de hoja de 5 min y R-
10: Residuo de decocción de hoja de 10 min. EMeOH: Extracto metanólico, EHF:
Extracto hidrofílico. *Representa la capacidad antioxidante por gramo de muestra de
HC liofilizada utilizada para elaborar la decocción.
91
Este ensayo, a pesar de no ser un método bien estandarizado para la
comparación entre distintos laboratorios (Ghani y col 2017), utiliza un sustrato de alta
importancia biológica, las lipoproteínas de baja densidad (LDL), y puede ser
indicativo del potencial antioxidante de un extracto o sustancia antioxidante sobre
estas moléculas.
La capacidad de inhibición de la oxidación de LDL en los extractos se le atribuye
principalmente a los compuestos fenólicos, ya que pueden actuar como eliminadores
de radicales, o como agentes quelantes de los iones de cobre (Chandrasekara y col
2018).
El porcentaje de inhibición que presentó HC en ambos extractos, resultó mayor
que el obtenido por Salleh y col (2002) en extractos metanol acuosos de hoja de noni
que fue de 5 % de inhibición de la oxidación de LDL inducida por cobre, para un
extracto de concentración 12.5 μg/mL. La HC en ambos extractos, en nuestro estudio
tuvo mayor inhibición, 73.30 % el EMeOH y 64.88 % el EHF, a concentraciones de
25 mg/mL. Esta diferencia con el estudio de Salleh y col (2002), puede deberse a las
diferencias en la concentración del extracto, de solvente de extracción, de la
composición de fitoquímicos o a la muestra de LDL usada. Sin embargo, estos
autores aunque no midieron el contenido de fenólicos, realizaron una comparación
con los reportes en literatura y no establecieron una asociación directa entre la
inhibición de la oxidación de LDL y el contenido de fenólicos reportado, atribuyendo
la capacidad de inhibición a otros compuestos antioxidantes como carotenos y ácido
ascórbico. Cirico y Omaye (2006) sugirieron que la mezcla de compuestos fenólicos
puede ejercer efectos sinérgicos en la protección de la oxidación de LDL, pudiendo
92
resultar mayor que el efecto de los compuestos individuales. Esto podría explicar las
diferencias en las capacidades de inhibición de extractos con diferente solvente, ya
que no se conoce qué compuestos individuales existen en cada extracto y qué efecto
podría ejercer cada uno sobre la peroxidación lipídica.
Serafini y col (2011), determinaron la actividad inhibitoria de especies reactivas
de ácido tiobarbitúrico (TBARS) inducida por AAPH, en decocciones de hoja de noni
a diferentes concentraciones (1 a 1000 μg/mL) y observaron inhibición en todas las
concentraciones probadas. Aunque, si bien Serafini y col (2011) no utilizaron LDL
sino yema de huevo como sustrato lipídico, en ambos casos las decocciones de hoja
de noni lograron inhibir la formación de TBARS.
En el presente estudio, todos los extractos analizados lograron cierto nivel de
inhibición de TBARS, pero las decocciones tuvieron efecto similar a los extractos de
HC (D-5 y HC EHF; y D-10 y HC EMeOH sin diferencias significativas entre ellos). De
estos resultados podría considerarse que los compuestos que dieron la actividad
inhibitoria en decocciones y en hoja cruda podrían ser mayormente de naturaleza
hidrofílica, mientras que en los residuos de decocciones de hoja (R-5 y R-10) la
proporcionarían compuestos más lipofílicos.
Como mencionaron Chaniad y col (2018), un mayor efecto antioxidante en la
peroxidación de lípidos podría deberse a que la estructura de la molécula
antioxidante sea menos lipofílica y pueda disociarse en el medio acuoso donde se
generaron los radicales. Aunque no se conoce con exactitud qué estructuras están
presentes en D-5 y D-10, se supone su naturaleza hidrofílica, por lo que podría ser
esta la razón de una mayor inhibición en las decocciones que en los extractos de
93
residuos de decocciones de la hoja. Existen reportes de los componentes aislados en
hoja de noni, dentro de los que se encuentra el lignano americanina A (Assi y col
2015), este mismo compuesto, igual que otros de este tipo, se identificó en fruto de
noni por Kamiya y col (2004), y se determinó que inhibió la oxidación de LDL
inducida por cobre con un IC50 de 3.70 μΜ. Además, estos autores relacionaron un
mayor número de grupos OH en las estructuras de los lignanos aislados con un
mayor efecto antioxidante.
4. Capacidad de inhibición de la hemólisis eritrocitaria inducida por AAPH
En el Cuadro 8 se muestran los resultados de la capacidad de inhibición de la
hemólisis eritrocitaria de los extractos a diferentes concentraciones. Se usaron Trolox
y ácido ascórbico como antioxidantes control, los cuales produjeron un alto
porcentaje de inhibición de la hemólisis a concentraciones bajas (400 μg/mL),
comparado con las concentraciones de inhibición de los extractos.
Para ambos tipos de extracto (EMeOH y EHF) en HC, se observó inhibición a las
concentraciones usadas. Tanto para EMeOH como para EHF, se determinó un
mayor porcentaje de inhibición a una concentración más alta de extracto. Para los
EMeOH, a una concentración de 100 mg/mL, HC y R-5 no presentaron diferencia
significativa, pero R-10 sí presentó diferencia con las dos anteriores. Sin embargo, en
R-5 y R-10 no ocurrió inhibición a la concentración más baja del EMeOH (25 mg/mL).
Para EHF, sólo en HC ocurrió inhibición de la hemólisis a ambas
concentraciones analizadas, 42 y 21 mg/mL, pero los residuos de decocciones de
94
Cuadro 8. Capacidad de inhibición de la hemólisis eritrocitaria inducida por
dihidrocloruro de 2,2-azobis (2-metil- amidinopropano) de productos derivados de la
hoja de noni.
Concentración
% Inhibición de hemólisis
de extracto
eritrocitaria
(mg/mL)
Trolox 0.4 92.37 ± 4.87a
Ácido ascórbico 0.4 91.16 ± 8.20a
D-5* 8 NI
D-10* 8 NI
100 82.91 ± 2.25b
HC EMeOH
25 22.12 ± 1.92e
100 86.98 ± 3.97ab
R-5 EMeOH
25 NI
100 41.19 ± 3.93d
R-10 EMeOH
25 NI
42 85.83 ± 4.69ab
HC EHF
21 66.67 ± 3.38c
42 NI
R-5 EHF
21 NI
42 NI
R-10 EHF
21 NI
HC: Hoja cruda, D-5: Decocción de 5 min, D-10: Decocción de 10 min, R-5: Residuo de
decocción de hoja de 5 min y R-10: Residuo de decocción de hoja de 10 min. EMeOH:
Extracto metanólico, EHF: Extracto hidrofílico. NI: No inhibición. *Representa la capacidad
antioxidante por gramo de muestra de HC liofilizada utilizada para elaborar la decocción.
Letras diferentes indican diferencia estadística significativa entre las medias. Media de 3
repeticiones ± desviación estándar (Fisher, α=0.05).
95
Hoja no lograron inhibir la hemólisis en este tipo de extracto. D-5 y D-10 tampoco
inhibieron la hemólisis de eritrocitos. Para todos los extractos se comprobó que no
indujeron por sí mismos la hemólisis cuando fueron incubados con la suspensión de
eritrocitos sin contener AAPH.
Los eritrocitos son muy susceptibles al daño oxidativo debido a que contienen
ácidos grasos poliinsaturados en su membrana y altas concentraciones de oxígeno y
hemoglobina (Pannangpetch y col 2007). Aunado a esto, el exceso de radicales
libres puede aumentar esta susceptibilidad. El dihidrocloruro de 2,2-azobis (2-metil-
amidinopropano), AAPH, es un iniciador in vitro de radicales peroxilo y otros
radicales que inician reacciones de oxidación sobre las proteínas y lípidos de la
membrana de los eritrocitos conllevando a la lisis de la misma (Lim y col 2002).
Según los resultados observados, las decocciones probablemente no lograron
proteger a la membrana de eritrocitos del daño del H2O2 inducido por AAPH en las
condiciones experimentales, pero probablemente inhibieron la peroxidación de LDL.
Lim y col (2002) realizaron estudios de inhibición de hemólisis, así como la inhibición
de la peroxidación lipídica en cerebro de rata con extractos de Sargassum
siliquastrum extraídos con solventes de diferente polaridad. Los extractos acuosos no
lograron inhibir la hemólisis y fueron los más débiles en inhibir la peroxidación
lipídica. Lin y col (2018) también obtuvieron mejores resultados en la inhibición de
hemólisis eritrocitaria en extractos de etanol que en extractos con agua caliente de
hojas de Cyclea gracillima, probablemente atribuyendo estos resultados al mayor
contenido de ácidos fenólicos y flavonoides presentes en los extractos etanólicos.
96
A pesar de que Lim y col (2002), encontraron relación entre la inhibición de la
hemólisis y la peroxidación lipídica de diferentes extractos, no encontraron
correlación positiva de la actividad antioxidante con el contenido de compuestos
fenólicos, sin embargo, la mayor actividad fue en el extracto del solvente de baja
polaridad diclorometano, por lo que sugirieron que la actividad antioxidante se puede
deber no sólo a compuestos fenólicos, sino a otros antioxidantes como derivados de
clorofilas. Se ha demostrado que los compuestos fenólicos se pueden incorporar en
la parte externa (hidrofílica) de la membrana de los eritrocitos, por lo que podría
ejercer su acción antioxidante en esta región, pero no ejercerían influencia en la
región de cadenas de hidrocarburo (parte hidrofóbica) (Bonarska-Kujawa y col 2011).
Por su parte, Meshkini (2015) sugiere que los compuestos fenólicos preservan la
membrana celular a través de su inserción en ella, protegiéndola de condiciones de
estrés químico y fisiológico.
Se determinó un alto contenido de compuestos no polares en HC, R-5 y R-10,
clorofilas y carotenoides, que podrían ser los responsables de la actividad
antioxidante en este ensayo, a diferencia de D-5 y D-10 donde se detectó la
presencia de una baja cantidad de luteína.
La estructura única de la luteína que es parcialmente hidrofílica, de dobles
enlaces conjugados y dos grupos hidroxilo la hacen un potente antioxidante, por lo
que podría limitar el grado en que el oxígeno penetra en las membranas y evitar el
estrés oxidativo (Subczynski y col 1991). Sindhu y col (2010), demostraron la
capacidad de la luteína para inhibir la peroxidación lipídica y la inhibición de radicales
OH• in vitro, la cual resultó mayor que la del ácido ascórbico.
97
El mayor contenido de compuestos fenólicos se obtuvo para el EHF de HC, que
fue mayor a su EMeOH, así como a R-5 y R-10; lo cual coincide con las tendencias
de la actividad de inhibición de hemólisis observada para estos extractos. Esto que
sugiere que la actividad anti-hemólisis en este caso puede deberse a la mezcla de
compuestos, tanto hidrofílicos como parcialmente hidrofílicos que ejercen el efecto
antioxidante total. Incluso podría atribuirse parte de la actividad de los extractos de
HC al contenido de ácido ascórbico, aunque es bajo de acuerdo a reportes de
Sudjaroen (2012), el cual determinó un valor de 3.48 μg/100 g de la hoja fresca de
noni.
La actividad de inhibición de hemólisis por antioxidantes de plantas puede
deberse a diferentes mecanismos. Pannangpetch y col (2007) evaluaron la actividad
anti-hemolítica de extractos alcohólicos de Clinacanthus nutans por diferentes
métodos, observando que en la inhibición del radical DPPH (68 % de inhibición) no
tuvieron tan buenos resultados como en la inhibición de hemólisis de eritrocitos de
rata (98 % de inhibición), sugiriendo una mejor actividad como eliminadores de
radicales libres. D-5 y D-10 mostraron buenos resultados en la actividad donadora de
protones ante el radical DPPH, sin embargo no pudieron inhibir la hemólisis por
radicales peroxílicos.
D. ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Los extractos MeOH de HC, R-5 y R-10, y las decocciones, D-5 y D-10, no
presentaron inhibición del crecimiento de las bacterias Salmonella Typhimurium y
Listeria monocytogenes.
98
El metanol es uno de los solventes de extracción más efectivos para compuestos
bioactivos de plantas, y resulta mejor que otros como etanol, hexano o agua por
tener una mayor constante dieléctrica (Nofouzi y col 2016). Debido a esto se eligió
este tipo de extractos para probar la actividad antibacteriana de hoja cruda y residuo
de hoja de decocciones. Las concentraciones usadas en los extractos para probar la
actividad antibacteriana se realizaron de acuerdo a la literatura para extractos
similares. Se usaron concentraciones de 40 mg/mL para los extractos metanólicos de
HC, R-5 y R-10 y de 90 mg/mL para D-5 y D-10.
Existen reportes en la literatura que indican que extractos de hoja de noni con
diferentes solventes presentan actividad antibacteriana contra algunas bacterias
patógenas (Abou-Assi y col 2017). Sin embargo, los resultados obtenidos en este
trabajo para los extractos metanólicos no presentaron signos de actividad
antibacteriana contra las bacterias Salmonella Typhimurium y Listeria
monocytogenes, las cuales tienen gran relevancia en la salud ya que son bacterias
comúnmente transmitidas por alimentos y provocan problemas de salud a nivel
mundial y una creciente resistencia antibiótica (OMS 2017).
Varios autores han reportado actividad antimicrobiana de extractos de hoja de
noni. Zhang y col (2016) reportaron actividad en extractos etanólicos contra Bacillus
subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Proteus vulgaris, además
atribuyeron esta actividad principalmente a seis compuestos fenólicos identificados,
5,15-dimetilmorindol, ácido ferúlico, ácido p-hidroxicinámico, metil 4-hidroxibenzoato,
metil ferulato y metil 4-hidroxicinamato. Sunder y col (2011) reportaron actividad
contra diferentes cepas bacterianas, entre ellas Salmonella spp., de extractos de
99
hoja, fruto y semilla de noni siendo en general mayor para extractos de semilla. Por
su parte, Serafini y col 2011 reportaron actividad antibacteriana leve en infusiones de
hoja seca de noni, teniendo actividad solo en la bacteria gram-negativa Aeromonas
hydrophila (de nueve estudiadas) con una concentración mínima inhibitoria de 0.625
mg/mL.
Sin embargo, los resultados son variables, ya que como en este estudio, Locher y
col (1995) reportaron que diferentes extractos de hoja de noni no tuvieron actividad
antimicrobiana contra diferentes cepas de bacterias y hongos.
Algunos autores mencionan que si bien, hay reportes de actividad antibacteriana
en extractos de plantas, los resultados negativos no necesariamente deben ser un
signo para descartar su actividad antimicrobiana, ya que algunos compuestos poco
polares podrían difundir en el agar a una tasa muy baja, impidiendo su actividad,
además los resultados podrían variar entre los diferentes autores debido a que las
condiciones usadas no siempre son las mismas, pudiendo influir muchos factores
como tipo de cepa usada, tamaño del inóculo, tamaño del disco, volumen de
extracto, periodo de incubación, entre otros (Cushnie y Lamb 2005); por lo que no
podría descartarse totalmente la actividad de los extractos de hoja de noni o los
productos derivados de ésta para futuros estudios.
100
IX. CONCLUSIONES
En los análisis fisicoquímicos de la hoja de noni y de sus productos derivados, se
observó la afectación del proceso de decocción sobre los parámetros estudiados. Se
observó que el tiempo más prolongado de decocción provocó mayor contenido de
cenizas en las decocciones, y a su vez, menor en las hojas residuo. Asimismo, se
obtuvo un mayor grado de los sólidos solubles totales, medidos como °Brix, en el
agua de decocción a mayor tiempo de proceso.
Hubo un mayor contendido de los compuestos fenólicos totales en el agua de las
decocciones con un mayor tiempo de proceso, mientras que en las hojas residuo los
compuestos fenólicos fueron significativamente menores con respecto a la hoja
fresca. Por el contrario, con el proceso de decocción sólo se solubilizaron trazas de
luteína en el agua, pero se propició un mayor contenido de carotenoides totales, de
luteína y de β-caroteno en los residuos de decocciones de hojas con respecto a la
hoja cruda de noni. Además, el proceso térmico de decocción degradó
significativamente el contenido de clorofilas en las hojas residuo de decocciones.
Los principales carotenoides encontrados en hoja cruda de noni y en los residuos
de decocciones de hoja analizadas fueron β-caroteno y luteína. Con base en la
cuantificación obtenida para estos carotenoides se estimó que 0.4 g de hoja cruda y
0.3 g de hoja residuo de decocción (para ambos tiempos) en base húmeda,
satisfacen el requerimiento diario recomendado de equivalentes de retinol. Asimismo,
30.5 g de hoja cruda y 27.5 g de hoja residuo de decocción, ambos en base húmeda,
satisfacen el requerimiento diario de luteína. Por lo que podrían ser consideradas
como excelentes fuentes de suplementación en la alimentación.
101
Se asoció la capacidad antioxidante de la hoja de noni y sus productos derivados
principalmente con el contenido de fenólicos totales, sin embargo esta capacidad
varió según la técnica utilizada. En el ensayo de DPPH se observó una tendencia
similar con el contenido de CFT. Los ensayos de degradación de 2-desoxi-D-ribosa y
de oxidación de LDL tuvieron resultados con tendencias similares, pero resultando
mejor para el segundo, y mostraron evidencia de que la hoja de noni y sus productos
derivados lograron inhibir en algún grado la oxidación de estas moléculas ante el
ataque de radicales libres. En el ensayo de inhibición de hemólisis de eritrocitos, la
hoja fresca de noni fue la mejor inhibidora de la hemólisis, mientras que los residuos
de decocciones de hoja sólo inhibieron cuando fueron empleadas como extractos
metanólicos. Por su parte, las decocciones no tuvieron actividad anti-hemólisis a las
concentraciones analizadas.
No se observó inhibición del crecimiento de las bacterias Salmonella
Typhimurium y Listeria monocytogenes de los extractos de hoja de noni y productos
derivados a las condiciones analizadas.
Como perspectivas de investigación se recomienda determinar el perfil de
compuestos fenólicos que permita relacionar de una manera más específica los
resultados obtenidos en los diferentes ensayos de capacidad antioxidante. Asimismo,
se recomienda continuar el estudio de actividad antimicrobiana con diferentes
condiciones de los extractos.
102
X. BIBLIOGRAFÍA
Aalbersberg WGL, Hussein S, Sotheeswaran S, Parkinson S. 1993. Carotenoids in
the leaves of Morinda citrifolia. Journal of Herbs, Spices & Medicinal Plants
1(2):51-54.
Abou-Assi R, Darwis Y, Abdulbaqi IM, Khan A, Vuanghao L, Laghari MH. 2017.
Morinda citrifolia (Noni): A comprehensive review on its industrial uses,
pharmacological activities, and clinical trials. Arabian Journal of Chemistry
10:691-707.
Agostini-Costa TS, Pêssoa GKA, Silva DB, Gomes IS, Silva JP. 2014. Carotenoid
composition of berries and leaves from a Cactaceae-Pereskia sp. Journal of
Functional Foods II:178-184.
Aman A, Moin S, Owais M, Sissiqui MU. 2013. Antioxidant activity of thymol:
protective role in AAPH-induced hemolysis in diabetic erythrocytes.
International Journal of Pharmaceutical Science Invention 2:55-60.
Andarwulan N, Kurniasih D, Apriady RA, Rahman H, Roto AV, Bolling BW. 2012.
Polyphenols, carotenoids, and ascorbic acid in underutilized medicinal
vegetables. Journal of Functional Foods 4:339-347.
Anesini C, Perez C. 1993. Screening of plants used in Argentine folk medicine for
antimicrobial activity. Journal of Ethnopharmacology 39:119-128.
Anitha T, Mohandass S. 2006. Anti-oxidant activity of Morinda citrifolia on lymphoma-
bearing mice. Ancient Science of Life 26:85-88.
103
AOAC. 2012. Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL. 18a ed.
United States of America: Association of Official Analytical Chemists.
AOAC. 1990. Official Methods of Analysis. 15th ed. Washington, D.C.:Association of
Official Analytical Chemist.
Aruoma OI. 1994. Deoxyribose assay for detecting hydroxyl radicals. Methods in
Enzymology 233:57-66.
Barbieri R, Coppo E, Marchese A, Daglia M, Sobarzo-Sánchez E, Nabavi SF, Nabavi
SM. 2017. Phytochemicals for human disease: An update on plant-derived
compounds antibacterial activity. Microbiological Research 196:44-68.
Bernhardt S, Schilch E. 2006. Impact of different cooking methods on food quality:
retention of lipophilic vitamins in fresh and frozen vegetables. Journal of Food
Engineering 77:327-333.
Bonarska-Kujawa D, Pruchnik H, Oszmianski J, Sarapuk J, Kleszczynska H. 2011.
Changes caused by fruit extracts in the lipid phase of biological and model
membranes. Food Biophysics 6:58-67.
Brand-Williams W, Cuvelier M, Berset C. 1995. Use of free radical method to evaluate
antioxidant activity. Food Science and Technology 22:25-30.
Burns J, Fraser PD, Bramley PM. 2003. Identification and quantification of
carotenoids, tocopherols and chlorophylls in commonly consumed fruits and
vegetables. Phytochemistry 62:939-947.
104
Bushnell OA, Fukuda M, Makinodan T. 1950. The antibacterial properties of some
plants found in Hawaii. Pacific Science 1:167-183.
Cadet J, Davies KJA, Medeiros MHG, Di-Mascio P. 2017. Formation and repair of
oxidatively generated damage in cellular DNA. Free Radical Biology and
Medicine 107:13-34.
Calmarza-Calmarza P. 2008. Lipoproteínas de baja densidad (LDL) oxidadas.
Revista Electrónica de Biomedicina 3:52-60.
Carrillo-López A, Yahia EM. 2014. Changes in color-related compouds in tomato fruit
exocarp and mesocarp during ripening using HPLC-APcI+-mass Spectrometry.
Journal of Food Science and Technology 51(10):2720-2726.
Carrillo-López A, Yahia EM. 2011. Noni (Morinda citrifolia L.). En: Yahia EM, editor.
Postharvest biology and technology of tropical and subtropical fruits.
Cambridge, UK: Woodhead Publishing. p 51-62.
Carvajal-Carvajal C. 2015. LDL oxidada y la aterosclerosis. Medicina Legal de Costa
Rica 32(1):161-169.
Cervantes-Paz B, Yahia EM, Ornelas-Paz JJ, Gardea-Béjar AA, Ibarra-Junquera V,
Pérez-Martínez JD. 2012. Effect of heat processing on the profile of pigments
and antioxidant capacity of green and red jalapeño peppers. Journal of
Agricultural and Food Chemistry 60:10822-10833.
Chan-Blanco Y, Vaillant F, Perez AM, Reynes M, Brillouet JM, Brat P. 2006. The noni
fruit (Morinda citrifolia L.): A review of agricultural research, nutritional and
therapeutic propieties. Journal of Food Composition and Analysis 19:645-654.

105
Chandrasekara A, Daugelaite J, Shahidi F. 2018. DNA scission and LDL cholesterol
oxidation inhibition and antioxidant activities of Bael (Aegle marmelos) flower
extracts. Journal of Traditional and Complementary Medicine 8(3):428-435.
Chaniad P, Morales NP, Rojsitthisak P, Luechapudiporn R. 2018. Effects of turmeric
extract on hemin-induced low-density lipoprotein oxidation. Food Biochemistry
42(3):1-9.
Cheng Z, Moore J, Yu L. 2006. High-throughput relative DPPH radical scavenging
capacity assay. Journal of Agricultural and Food Chemistry 54:7429-7436.
Cheng Z, Li Y, Chang W. 2003. Kinetic deoxyribose degradation assay and its
application in assessing the antioxidant activities of phenolic compounds in a
Fenton-type reaction system. Analytica Chimica Acta 478:129-137.
Chobot V. 2010. Simultaneous detection of pro- and antioxidative effects in the
variants of the deoxyribose degradation assay. Journal of Agricultural and
Food Chemistry 58:2088-2094.
Chrpova D, Kourimska L, Gordon MH, Hermanova V, Roubicrova I, Panek J. 2010.
Antioxidant activity of selected phenols and herbs used in diets for medical
conditions. Czech Journal of Food Sciences 28(4):317-325.
Cirico TL, Omaye ST. 2006. Additive or synergetic effects of phenolics compounds on
human low density lipoprotein oxidation. Food Chemical Toxicology 44:510-
516.
106
[CLSI] Clinical and Laboratory Standards Institute. 2012. Performance Standards for
Antimicrobial Disk Susceptibility Tests; Approved Standard. 11th Edition. CLSI
document M02-A11. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute.
Crozier A, Jaganath IB, Clifford MN. 2006. Phenols, Polyphenols and Tanins: An
Overview. En: Crozier A, Clifford MN y Ashihara H. Plant Secondary
Metabolites: Occurrence, Structure and Role in the Human Diet. Blackwell
Publishing Ltd. p 1-24.
Cushnie TPT, Lamb AJ. 2005. Antimicrobial activity of flavonoids. International
Journal of Antimicrobial Agents 26:343-356.
Da Silveira TFF, Dillenburg-Meinhart A, Augusto-Ballus C, Texeira-Godoy H. 2014.
The effect of the duration of infusion, temperature, and water volume on the
rutin content in the preparation of mate tea beverages: An optimization study.
Food Research International 60:241-245.
Dawidowicz AL, Wianowska D, Olszowy M. 2012. On practical problems in estimation
of antioxidant activity of compounds by method (Problems in estimation of
antioxidant activity. Food Chemistry 131:1037-1043.
De Carvalho LMJ, Sarmet-Moreira Smiderle LA, Gomes-Ribeiro EM, Dellamora-Ortiz
G, Barros-Gomes P, De Carvalho JLV. 2013. Food sources: Production and
health benefits of carotenoids. En Yamaguchi M, editor. Carotenoids. Food
sources, production and health benefits. Nueva York. Nova Science Publihers.
p 35-48.
107
Delgado-Vargas F, Paredes-López O. 2003. Natural colorants for food and
nutraceutical uses. United States of America: CRC Press. p 221-223.
Deng S, West BJ, Jensen J. 2011. Thermal degradation of flavonol glycosides in noni
leaves during roasting. Advanced Journal of Food Science and Technology
3(2):155-159.
Deng S, West BJ, Jensen CJ. 2010. A quantitative comparison of phytochemical
components in global noni fruits and their commercial products. Food
Chemistry 122:267-270.
Diop Ndiaye N, Dhuique-Mayer C, Cisse M, Dornier M. 2011. Identification and
thermal degradation kinetics of chlorophyll pigments and ascorbic acid from
Ditax nectar (Ditarium senegalense J.F. Gmel). Journal of Agricultural and
Dittmar A. 1993. Morinda citrifolia L. Use in Indigenous Samoan Medicine. Journal of
Herbs, Spices & Medicinal Plants 1:77-92.
Dorman HJD, Peltoketo A, Hiltunen R y Tikkanen MJ. 2003. Characterization of the
antioxidants properties of de-odourised aqueous extracts from selected
Lamiaceae herbs. Food Chemistry 83:255-262.
Durán M, Montero P, Marrugo Y. 2013. Extractos metanólicos de corteza de guayaba
(Psidium guajava L.) y mango (Manguifera indica L.): efecto citotóxico,
antihemolítico y en la morfología de membrana de eritrocitos. Revista
U.D.C.A. Actualidad & Divulgación Científica 16(2):327-334.
108
Ebrahimzadeh MA, Hosseinimehr SJ, Hamidinia A, Jafari M. 2008. Antioxidant and
free radical scavenging activity of feijoa Sellowiana fruits peel and leaves.
Pharmacologyonline 1:7-14.
Erturk Y, Ercisli S, Sengul M, Eser Z, Haznedar A, Turan M. 2010. Seasonal variation
of total phenolic, antioxidant activity and minerals in fresh tea shoots (Camellia
sinensis var. sinensis). Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences 23(1):69-
74.
European Commission. 2008. Commision decision of 15 December 2008 authorizing
the placing in the market of leaves of Morinda citrifolia as a novel food
ingredient under regulation (EC) No 258/97 of the European Parliament and of
the council. In Official Journal of the European Union, 2008.
European Commission. 2003. Commission decision of 5 June 2003 authorizing the
placing in the market of noni juice (juice of the fruit of Morinda citrifolia) as a
novel food ingredient under regulation (EC) No 258/97 of the European
Parliament and of the council. In Official Journal of the European Union, 2003:
001.
[FAO] Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación.
2009. La agricultura mundial en la perspectiva del año 2050. Foro de expertos
de alto nivel - Cómo alimentar al mundo en 2050. Roma, Italia. Disponible de:
http://www.fao.org/fileadmin/templates/wsfs/docs/Issues_papers/Issues_paper
s_SP/La_agricultura_mundial.pdf. Consultado el 1 de marzo de 2017.
109
[FAO] Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación.
2004. Vitamin and mineral requeriments in human nutrition. Second edition.
Bangkok, Thailand. 341 p.
Farzaneh V, Carvalho IS. 2015. A review of the health benefit potentials of herbal
plant infusions and their mechanism of actions. Industrial Crops and Products
65:247-258.
Ferracane R, Pellegrini N, Visconti A, Graziani G, Chiavaro E, Miglio C, Fogliano V.
2008. Effects of different cooking methods on antioxidant profile, antioxidant
capacity, and physical characteristics of artichoke. Journal of Agricultural and
Fotakis C, Tsigrimani D, Tsiaka T, Lantzouraki DZ, Strati IF, Makris C, Tagkouli D,
Proestos C, Sinanoglou V, Zoumpoulakis P. 2016. Metabolic and antioxidant
profiles of herbal infusions and decoctions. Food Chemistry 211:963-971.
Foyer CH. 2018. Reactive oxygen species, oxidative signaling and regulation of
photosynthesis. Enviromental and Experimental Botany 154:134-142.
Frankel EN, Meyer AS. 2000. The problems of using one-dimensional methods to
evaluate multifactorial food and biological antioxidants. Journal of the Science
of Food and Agriculture 80:1925-1941.
Gamboa-Gómez CI, Simental-Mendía LE, González-Laredo RF, Alcantar-Orozco EJ,
Monserrat-Juarez VH, Ramírez-España JC, Gallegos-Infante JA, Moreno-
Jiménez MR, Rocha-Guzmán NE. 2017. In vitro and in vivo assessmentof
anti-hyperglycemic and antioxidant effects of Oak leaves (Quercus convallata
110
and Quercus arizonica) infusions and fermented beverages. Food Research
International 102:690-699.
Garay Z, López A, Acha De la Cruz O, Souza A, Collantes I, Olivera P, Santiago J.
2011. Caracterización microestructural de cenizas de Morinda citrifolia Linneo
NONI. Revista de la Sociedad Química del Perú 77(2):109-116.
Garrido G, Ortiz M, Pozo P. 2013. Fenoles y flavonoides totales y actividad
antioxidante de extractos de hojas de Lampaya medicinalis F. Phil. Journal of
Pharmacy & Pharmacognosy Research 1(1):30-38.
Gayosso-García Sancho LE, Yahia EM y Gónzalez-Aguilar GA 2011. Identification
and quantification of phenols, carotenoids, and vitamin C from papaya (Carica
papaya L., cv Maradol) fruit determined by HPLC-DAD-MS/MS-ESI. Food
Research International 44(5):1284-1291.
Ghani MA, Barril C, Bedgood Jr DR, Prenzler PD. 2017. Measurement of antioxidant
activity with the thiobarbituric acid reactive substances assay Food Chemistry.
230:195-207.
Gómez-Romero M, Segura-Carretero A, Fernández-Gutiérrez A. 2010. Metabolite
profiling and quantification of phenolic compounds in methanol extracts of
tomato fruit. Phytochemistry 71:1848-1864.
González-Laredo RF, Rocha-Guzmán NE, Gallegos-Infante JA. 2012. Fitoquímicos
antioxiantes en alimentos. En: Álvarez-Parrilla E, Gonzáles-Aguilar GA, De la
Rosa LA, Ayala-Zavala JF. Antioxidantes en alimentos y salud. 1ª ed. México,
D.F.: Clave Editorial. p 133-154.
111
González-Moreno S, Perales-Varela H, Salcedo-Alvarez MO. 2008. La fluorescencia
de la clorofila a como herramienta en la investigación de efectos tóxicos en el
aparato fotosintético de plantas y algas. Revista de Educación Bioquímica
4:119-129.
Granato D. Shahidi F, Wrolstad R, Kilmartin P, Melton LD, Hidalgo FJ, Miyashita K,
van Camp J, Alasalvar C, Ismail AB, Elmore S, Birch GG, Charalampopoulos
D, Astley SB, Pegg R, Zhou P, Finglas P. 2018. Antioxidant activity, total
phenolics and flavonoids contents: Should we ban in vitro screening
methods?. Food Chemistry 264:471-475.
Gutiérrez-Castillo AC, Paasch-Martínez LH, Calderón-Apodaca NL. 2008.
Salmonelosis y campilobacteriosis, las zoonosis emergentes de mayor
expansión en el mundo. Vet. Méx 39:81-90.
Hedrén E, Diaz V, Svanberg U. 2002. Estimation of carotenoid accessibility from
carrots determinated by an in vitro digestion method. European Journal of
Clinical Nutrition 56:425-430.
Inácio-Alves A, Mota-Ramos A, Stringheta PC, Lago-Vanzela ES. 2013. Carotenoids
as bioactive compounds. En Yamaguchi M, editor. Carotenoids. Food
sources, production and health benefits. Nueva York. Nova Science Publihers.
p 1-34.
Jabeen SS, Alam A, Saleem M, Ahmad W, Bibi R, Hamid FS, Shah HU. 2015.
Withering timings affect the total free amino acids and mineral contents of tea
112
leaves during black tea manufacturing. Arabian Journal of Chemistry.
Manuscrito aceptado.
Jacobo-Valenzuela N. 2011. Caracterización química, funcional y nutrimental de
harinas de calabaza cehualca (Curcúbita moschata Duchense) precocidas por
extrusión. [Tesis de doctorado]. Durango, Durango: Instituto Tecnológico de
Durango, México.
Jayaraman SK, Manoharan MS, Illanchezian S. 2008. Antibacterial, antifungal and
antitumor cell suppression potential of Morinda citrifolia fruit extracts.
International Journal of Integrative Biology 3:44-49.
Kamiya K, Tanaka Y, Endang H, Umar M, Satake T. 2004. Chemical constituents of
Morinda citrifolia fruits inhibit copper-induced low-density lipoprotein oxidation.
Journal of Agricultural and Food Chemistry 52:5843-5848.
Kang YR, Park J, Jung SK, Chang YH. 2018. Synthesis, characterization, and
functional properties of chlorophylls, pheophytins, and Zn-pheophytins. Food
Chemistry 245:943-950.
Kao FJ, Chiu YS, Chiang WD. 2014. Effect of water cooking on antioxidant capacity
of carotenoid-rich vegetables in Taiwan. Journal of Food and Drug Analysis
22:202-209.
Kim D, Lee K, Lee J, Lee C. 2002. Vitamin C Equivalent Antioxidant Capacity
(VCEAC) of Phenolic Phytochemicals. Journal Agricultural and Food
Chemistry 50:3713-3717.
113
Krinsky NI, Johnson EJ. 2005. Carotenoid actions and their relation to health and
disease. Molecular Aspects of Medicine. 26:459-516.
Kuskoski EM, Asuero AG, Troncoso AM, Mancini-Filho J, Fett, R. 2005. Aplicación de
diversos métodos químicos para determinar actividad antioxidante en pulpa
de frutos. Food Science and Tecnology 25:726-732.
Lanfer-Marquez UM, Barros RMC, Sinnecker P. 2005. Antioxidant activity of
chlorophylls and their derivatives. Food Research International 38:885-891.
Lichtenthaler HK, Buschmann C. 2001. Chlorophylls and carotenoids: measurement
and characterization by UV-Vis spectroscopy. Current protocols in food
analytical chemistry F.4.3.1-F4.3.8.
Lim SL, Cheung PCK, Ooi VEC, Ang PO. 2002. Evaluation of antioxidant activity of
extracts from a brown seaweed, Sargassum siliquastrum. Journal of
Lin JT, Liu SC, Kuo LC, Yang DJ. 2018. Composition of phenolic compounds and
antioxidant attributes of Cyclea gracillima Diels extracts. Journal of Food and
Drug Analysis 26:193-200.
Liu Y, Perera CO, Suresh V. 2007. Comparison of three chosen vegetables with
others from South East Asia for their lutein and zeaxanthin content. Food
Chemistry 101:1533-1539.
Locher CP, Burch MT, Mower HF, Berestecky J, Davis H, Van Poel B, Lasure A,
Vanden Berghe, Vlietinck AJ. 1995. Anti-microbial activity and anti-
114
complement activity of extracts obtained from selected Hawaiian medicinal
plants. Journal of Etnnopharmacology 49:23-32.
Loranty A, Rembialkowska E, Rosa EAS, Bennett RN. 2010. Identification,
quantification and availability of carotenoids and chlorophylls in fruit, herb and
medicinal teas. Journal of Food Composition and Analysis 23:432-441.
Lourenco J, Leclercq A, Lecuit M, Charlier C. 2018. Listeriosis. EMC-Tratado de
Medicina. 22(3):1-9.
Loy S, Simón R y Delgado R. 2002. Vimang, un potencial protector de la
peroxidación lipídica en proteínas de baja densidad. Revista Cubana de
Investigación Biomédica 21(3):167-170.
Lu Q, Peng Y, Zhu C, Pan S. 2018. Effect of thermal treatment on carotenoids,
flavonoids and ascorbic acid in juice of orange cv. Cara Cara. Food Chemistry
265:39-48.
Lutz M, Henríquez C, Escobar M. 2011. Chemical composition and antioxidant
properties of mature and baby artichokes (Cynara scolymus L.), raw and
cooked. Journal of Food Composition and Analysis 24:49-54.
Mandukhail SR, Aziz N, Gilani AH. 2010. Studies on antidyslipidemic effects of
Morinda citrifolia (noni) fruit, leaves and root extracts. Lipids in Health and
Disease 9(88):1-6.
Meléndez-Martínez A, Vicario IM, Heredia FJ. 2004. Estabilidad de los pigmentos
carotenoides en los alimentos. Archivos Latinoamericanos de Nutrición.
Publicación Oficial de la Sociedad Latinoamericana de Nutrición [serie en

115
línea]. 54. Disponible de [https://idus.us.es/xmL
ui/bitstream/handle/11441/26409/Estabilidad%20de%20los%20pigmentos%20
carotenoides%20en%20los%20alimentos.pdf?sequence=1&isAllowed=y].
Consultado el 15 de marzo de 2017.
Meng HC, Gao J, Zheng HC, Damirin A, Ma CM. 2015. Diacetylated and acetone-
conjugated flavan-3-ols as potent antioxidants with cell penetration ability.
Journal of Functional Foods I2:256-261.
Meshkini A. 2015. Acetone extract of almond hulls provides protection against
oxidative damage and membrane protein degradation. Journal of Acupuncture
and Meridian Studies 9(3):134-142.
Milde J, Elstner EF, Graβmann. 2007. Synergistic effects of phenolics and
carotenoids on human low-density lipoprotein oxidation. Molecular Nutrition
Food Research 51:956-961.
Misra MK, Misra K, Brar SK, Verma M. 2013. Carotenoids in Herbal Medicines. En
Yamaguchi M, editor. Carotenoids. Food sources, production and health
benefits. Nueva York. Nova Science Publihers. p 127-142.
Motshakeri M, y Ghazali HM. 2015. Nutritional, phytochemical and commercial quality
of Noni fruit: a multi-beneficial gift from nature. Trends in Food Science &
Technology 45:118-129.
Mou B. 2005. Genetic variation of beta-carotene and lutein contents in lettuce.
Journal of the American Society for Horticultural Science 130(6):870-876.
116
Nelson SC, Elevitch CR. 2006. Noni: The complete guide for consumers and growers.
Holualua, Hawaii:Permanent Agricultural Resources 47-59 p.
Nerurkar PV, Hwang PW, Saksa E. 2015. Anti-diabetic potential of noni: the ying and
the yang. Molecules 20:17684-17719.
Nofouzi K, Mahmudi R, Tahapour K, Amini E, Yousefi K. 2016. Verbascum
speciosum methanolic extract: Phytochemical Components and antibacterial
properties. TEOP. 19:499-505.
[OMS] Organizacion Mundial de la Salud. 2018. Listeriosis. Nota descriptiva.
Disponible de: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/listeriosis/es/
Consultado el 01 de diciembre de 2018.
[OMS] Organización Mundial de la Salud. 2017. La OMS publica la lista de las
bacterias para las que se necesitan urgentemente nuevos antibióticos.
Disponible de http://www.who.int/mediacentre/news/releases/2017/bacteria-
antibiotics-needed/es/. Consultado el 01 de Marzo de 2017.
[OMS] Organizacion Mundial de la Salud. 2013. Salmonella (no tifoidea). Nota
descriptiva N°139. Disponible de:
http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs139/es/. Consultado el 31 de
marzo de 2017.
[OMS] Organización Mundial de la Salud. 2002. Estrategia de la OMS sobre medicina
tradicional 2002-2005. Disponible de
http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/67314/1/WHO_EDM_TRM_2002.1_sp
a.pdf. Consultado el 15 de Mayo de 2017.
117
Ornelas-Paz JJ, Yahia EM, Gardea-Bejar A. 2007. Identification and quatification of
xanthophyll esters, carotenes, and tocopherols in the fruit of seven mexican
mango cultivars by Liquid Chromatography-Atmospheric Pressure Chemical
Ionization-Time-of-Flight Mass Spectrometry [LC-(APcI+)-MS]. Journal of
Pak-Dek MS, Abdul-Hamid A, Osman A, Soh CS. 2008. Inhibitory effect of Morinda
citrifolia L. on lipoprotein lipase activity. Journal of Food Science 78(8):595-
598.
Pamplona JD. 2006. Salud por las plantas medicinales. 1ra ed. Madrid,
España:Editorial Sfeliz, S.L. 36 p.
Pannangpetch P, Laupattarakasem P, Kukongviriyapan V, Kukongviriyapan U,
Kongyinyoes B, Aromdee C. 2007. Antioxidant activity and protective effect
against oxidative hemolysis of Clinacanthus nutans (Burm.f) Lindau.
Songklanakarin Journal of Science and Technology 29(Suppl.1):1-9.
Pareek S, Sagar NA, Sharma S, Kumar V, Agarwal T, Gonzalez-Aguilar GA, Yahia
EM. 2017. Chlorophylls: Chemistry and Biological functions. En Yahia EM,
editor. Fruit ans vegetable phytochemicals: Chemistry and human health.
Second Edition. John Wiley & Sons. p 269-284.
Pasaporte MS, Rabaya FJR, Toleco MM, Flores DM. 2014. Xanthophyll content of
selected vegetables commonly consumed in the Philippines and the effect of
boiling. Food Chemistry 158:35-40.
118
Pawlus AD, Kinghorn AD. 2007. Review of the ethnobotany, chemistry, biological
activity and safety of the botanical dietary supplement Morinda citrifolia (noni).
Journal of Pharmacy and Pharmacology 59:1587-1609.
Pérez-Guerra Y. 2007. Oxidación de las LDL (lipoproteínas de baja densidad) y su
relación con la patogénesis de la aterosclerosis. Revista CECIC Ciencias
Biológicas 38(1):3-11.
Pistón M, Machado I, Branco CS, Cesio V, Heinzen H, Ribeiro D, Fernandes E,
Campos-Chisté R, Freitas M. 2014. Infusion, decoction and hydroalcoholic
extracts of leaves from artichoke (Cynara cardunculus L. subsp. cardunculus)
are effective scavengers of physiologically relevant ROS and RNS. Food
Research International 64:150-156.
Quito LS, Torres GS. 2007. Estudio de prefactibilidad técnico-económico de una
planta para elaborar una bebida a base de noni (Morinda citrifolia) y borojó
(Borojoa patinoi) [Tesis de Licenciatura]. Quito, Ecuador: Escuela Politécnica
Nacional.
Raju M, Varakumar S, Lakshminarayana R, Krishnakantha TP, Baskaran V. 2007.
Carotenoid composition and vitamin A activity of medicinally important green
leafy vegetables. Food Chemistry 101:1598-1605.
Rocha-Guzmán NE, Medina-Medrano JR, Gallegos-Infante JA, Gonzalez-Laredo RF,
Ramos-Gómez M, Reynoso-Camacho R, Guzmán-Maldonado H, Gonález-
Herrera SM. 2012. Chemical evaluation, antioxidant capacity, and consumer
acceptance of several oak infusions. Journal of Food Science 77(2):162-166.
119
Rodriguez-Amaya DB, Kimura M, Godoy HT, Amaya-Farfan J. 2008. Updated
brazilian database on food carotenoids: factors affecting carotenoid
composition. Journal of Food Composition and Analysis 21:445-463.
Ruiz MJ, Colello R, Padola NL, Etcheverría AI. 2017. Efecto inhibitorio de
Lactobacillus spp. sobre bacterias implicadas en enfermedades transmitidas
por alimentos. Revista Argentina de Microbiología 49(2):174-177.
Saini RK, Nile SH, Park SW. 2015. Carotenoids from fruits and vegetables: chemistry,
analysis, occurrence, bioavailability and biological activities. Food Research
International 76:735-750.
[SAGARPA]. Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y
Alimentación. 2015. Disponible de
http://infosiap.siap.gob.mx/aagricola_siap_gb/ientidad/index.jsp. Consultado el
13 de marzo de 2017.
Salleh MN, Runnie I, Roach PD, Mohamed S, Abeywardena Y. 2002. Inhibition of
low-density lipoprotein receptor in HepG2 cells by tropical plant extracts.
Journal of Agricultural and Food Chemistry 50:3693-3697.
Sánchez C, Baranda AB, Martínez de Marañón I. 2014. The effect of High Pressure
and High Temperature processing on carotenoids and chlorophylls content in
some vegetables. Food Chemistry 163:37-45.
Sangeetha RK, Baskaran V. 2010. Carotenoid composition and retinol equivalent in
plants of nutritional and medicinal importance: Efficacy of β-carotene from
Chenopodium album in retinol-deficient rats. Food Chemistry 119:1584-1590.
120
Sáyago-Ayerdi SG, Velázquez-López C, Montalvo-González E, Goño I. 2014. By-
product from decoction process of Hibiscus sabdariffa L. calyces as a source
of polyphenols and dietary fiber. Journal of the Science of Food and
Agriculture 94:898-904.
Selvam P, Raj K, Vimisha V, Harikrishnan R, Sarija R, Umalekshmi R. 2009.
Antimicrobial activity of fruit extracts of Morinda citrifolia. Journal of Applied
Chemical Research 10:61-63.
Sen-Gupta S, Ghosh M. 2013. In vitro antioxidative evaluation of α- and β-carotene,
isolated from crude palm oil. Journal of Analytical Methods in Chemistry
351671.
Serafini MR, Santos RC, Guimaraes AG, Dos Santos JPA, Santos ADC, Alves IA,
Gelain DP, Nogueira PCL, Quintans-Júnior LJ, Bonjardim LR, Araújo AAS.
2011. Morinda citrifolia Linn leaf extract possesses antioxidant activities and
reduces nociceptive behavior and leukocyte migration. Journal of Medicinal
Food 14(10):1159-1166.
Sharma MC, Sharma S. 2010. Phytochemical screening of methanolic extracts and
antibacterial activity of Eclipta alba and Morinda citrifolia L. Middle-East
Journal of Scientific Research 6(5):445-449.
Shukla S, Mehta A, Mehta P, Bajpai VK. 2012. Antioxidant ability and total phenolic
content of aqueous leaf extract of Stevia rebaudiana Bert. Experimental and
Toxicologic Phatology 64:807-811.
121
Sindhu ER, Preethi KC, Kuttan R. 2010. Antioxidant activity of carotenoid lutein in
vitro and in vivo. Indian Journal of Experimental Biology 48:843-848.
Singleton VL, Orthofer R, Lamuela-Reventos RM. 1999. Analysis of total phenols
and other substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent.
Methods Enzymology 299:152-178.
Sojka TV, Gironés-Vilaplana A, Djilas S, Mena P, Cetkovic G, Moreno DA,
Canadanovic-Brunet J, Vulic J, Stajcic S, Vincic M. 2015. Chemical
composition and potencial bioactivity of strawberry pomace . RSC Advances
5:5397-5405.
Subczynski WK, Markowska e, Sielewiesiuk J. 1991. Effect of polar carotenoids on
the oxygen diffusion-concentration product in lipid bilayers. An EPR spin label
study. Biochimica et Biophysica Acta 1068:68-72.
Sudjaroen Y. 2012. Evaluation of ethnobotanical vegetables and herbs in Samut
Songkram province. Procedia Engineering 32:160-165.
Sunder J, Jeyakumar S, Kundu A, Kumar De A. 2011. Antibacterial activity in solvent
extract of different parts of Morinda citrifolia plant. Journal of Pharmaceutical
Sciences and Research 3(8):1404-1407.
Taiz L, Zeiger E. 2002. Plant Physiology. 3ª Ed. Sinauer Associates. 690 p.
Turpín-Saorín J. 2010. Valoración de la actividad antioxidante en sopas
deshidratadas mediante los ensayos de la desoxirribosa y de la peroxidación
lipídica. [Tesis de Maestría]. Maestría en Tecnología de los Alimentos,
Nutrición y Bromatología. Universidad de Murcia. 53 p.

122
Vargas-Murga L, De Rosso VV, Mercadante AZ, Olmedilla-Alonso B. 2016. Fruits and
vegetables in the brazilian household budget survey (2008-2009): carotenoid
content and assessment of individual carotenoid intake. Journal of Food
Composition and Analysis 50:88-96.
Visht S, Chaturvedi S. 2012. Isolation of natural products. Current Pharma Research.
2(3):584-599.
West BJ, Deng S, y Palu AK. 2009. Antioxidant and toxicity tests of roasted noni
(Morinda citrifolia) leaf infusion. International Journal of Food Science &
Technology 2142-2146.
West BJ, Tani H, Palu AK, Tolson CB, y Jensen CJ. 2007. Safety tests and
antinutrient analyses of noni (Morinda citrifolia L.) leaf. Journal of the Science
of Food and Agriculture 87:2583-2588.
Wolfe KE, Liu RH. 2003. Apple peels as value-added food ingredient. Journal of
Wu X, Gu L, Holden J, Haytowitz DB, Gebhartdt SE, Beecher G, Prior RL. 2004.
Development of a database for total antioxidant capacity in foods: a
preliminary study. Food Composition and Analysis 17:407-422.
Yahia EM, Ornelas-Paz JJ, Emanuelli T, Jacob-Lopes E, Queiroz-Zepka L,
Cervantes-Paz B. 2018. Chemistry, Stability, and Biological Actions of
Carotenoids. En: Yahia EM, editor. Fruit and Vegetables Phytochemicals.
Cheichester, UK: Wiley Blackwell. p 285-346.
123
Yashaswini S, Venugopal CK, Hedge RV, Mokashi AN. 2014. Noni: A medicinal plant
for the tropics. African Journal of Plant Science 8:243-247.
Zhang W-M, Wang W, Zhang J-J, Wang Z-R, Wang Y, Hao W-J, Huang W-Y. 2016.
Antibacterial Constituents of Hainan Morinda citrifolia (Noni) leaves. Journal
of Food Science 81:1192-1196.
Zhao M, Yang Q, Lin L, Sun B, Wang Y. 2017. Intracellular antioxidant activities of
selected cereal phenolic extracts and mechanisms underlying the protective
effects of adlay phenolic extracts on H2O2-induced oxidative stress in human
erythrocytes. Journal of Functional Foods 31:160-171.
Zhou SH, Fang ZX, Lü Y, Chen JC, Liu DH, Ye XQ. 2009. Phenolics and antioxidant
properties of bayberry (Myrica rubra Sieb. Et Zucc) pomace. Food Chemistry
112:394-399.
Zin ZM, Abdul-Hamid A, Osman A, Saari N. 2006. Antioxidative activities of
chromatographic fractions obtained from roots, fruit and leaf of Mengkudu
(Morinda citrifolia L.). Food Chemistry 94:169-178.
Zin ZM, Abdul-Hamid A, Osman A. 2002. Antioxidative activity of extracts from
Mengkudu (Morinda citrifolia L.) root, fruit and leaf. Food Chemistry. 78:227-
231.
Znidarcic D, Ban D, Šircelj H. 2011. Carotenoid and chlorophyll composition of
commonly consumed leafy vegetables in Mediterranean countries. Food
Chemistry 129:1164-1168.
124
ABREVIATURAS
bh Base húmeda
bs Base seca
Col Colaboradores
DMSO Dimetilsulfóxido
EAG Equivalentes de ácido gálico
EC Equivalentes de catequina
EHF Extracto hidrofílico
ELF Extracto lipofílico
EMeOH Extracto metanólico
FAO Organización para la Alimentación y la Agricultura de las Naciones
Unidas (del inglés, Food and Agriculture Organization of United
Nations)
HPLC Cromatografía de Líquidos de Alta Presión (del inglés High-
Performance Liquid Chromatography)
LDL Lipoproteínas de baja densidad (del inglés Low-Density Lipoprotein)
TBA Ácido tiobarbitúrico
TCA Ácido tricloroacético
125
ANEXOS
El contenido de clorofilas en productos derivados de la hoja de noni.
Clorofila a Clorofila b Clorofilas totales
(mg/g bs) (mg/100 g bh) (mg/g bs) (mg/100 g bh) (mg/g bs) (mg/100 g bh)
HC 3.97 ± 0.25a 76.72 ± 4.77 1.57 ± 0.11a 30.29 ± 2.17 5.53 ± 0.36a 107.02 ± 6.93
D-5 ND ND ND
D-10 ND ND ND
R-5 2.30 ± 0.10b 42.34 ± 1.91 1.18 ± 0.02b 21.70 ± 0.30 3.48 ± 0.10b 67.34 ± 1.92
R-10 1.53 ± 0.10c 28.32 ± 1.99 0.66 ± 0.10c 12.24 ± 1.86 2.18 ± 0.15c 42.26 ± 3.04
de 5 min y R-10: Residuo de 10 min. ND: No detectado. El valor de clorofilas totales
representa la suma de las clorofilas (a y b) individuales Letras diferentes en la misma
columna indican diferencia estadística significativa entre las medias. Media de 3
repeticiones ± desviación estándar (Fisher, α=0.05).
126
Compuestos fenólicos totales de productos derivados de hoja de noni.
Compuestos fenólicos totales
(mgEAG/g bs) (mgEAG/100 g bh)
D-5 *1.12 ± 0.09f 0.90 ± 0.07

D-10 *1.58 ± 0.12e 1.27 ± 0.10
b
HC EMeOH 5.24 ± 0.15 101.21 ± 2.93
R-5 EMeOH 4.42 ± 0.21c 81.16 ± 3.95
R-10 EMeOH 4.35 ± 0.37c 80.74 ± 6.76
a
HC EHF 6.82 ± 0.21 131. 81 ± 4.18
R-5 EHF 2.49 ± 0.18d 44.64 ± 1.73
R-10 EHF 1.90 ± 0.09e 35.34 ± 1.65
EMeOH: Extracto metanólico, EHF: Extracto hidrofílico.
*Representa el contenido por gramo de muestra de HC liofilizada utilizada para
elaborar la decocción.
127
Capacidad de inhibición del radical DPPH de productos derivados de la hoja de noni.
Capacidad de inhibición de DPPH
(μmolET/g bs) (μmolET/100 g bh)
D-5 *2.75 ± 0.26g 2.10 ± 0.21

D-10 *2.57 ± 0.22g 2.06 ± 0.18
HC EMeOH 8.65 ± 0.39b 167.25 ± 7.46
R-5 EMeOH 7.15 ± 0.26c 131.54 ± 4.87
R-10 EMeOH 7.09 ± 0.16c 131.56 ± 2.30
HC ELF 4.54 ± 0.23f 87.73 ± 4.37
R-5 ELF 5.77 ± 0.62de 106.16 ± 11.49
de
R-10 ELF 5.92 ± 0.55 109.88 ± 10.19
HC EHF 13.97 ± 1.33a 270.15 ± 25.80
R-5 EHF 5.54 ± 0.48e 101.87 ± 8.79
R-10 EHF 6.54 ± 0.41cd 121.33 ± 7.56
EMeOH: Extracto metanólico, ELF: Extracto lipofílico, EHF: Extracto hidrofílico.
*Representa la capacidad antioxidante por gramo de muestra de HC liofilizada
utilizada para elaborar la decocción.
128
Capacidad de inhibición de radicales OH• en el ensayo de degradación de 2-desoxi-
D-ribosa de productos derivados de la hoja de noni.
Capacidad de inhibición de radicales OH•
(mgEC/g bs) (mgEC/100 g bh)
D-5 *3.36 ± 0.03a 2.69 ± 0.03

D-10 *3.34 ± 0.04a 2.67 ± 0.03
HC EMeOH 2.44 ± 0.07b 47.09 ± 1.26
R-5 EMeOH 0.61 ± 0.02e 11.13 ± 0.29
d
R-10 EMeOH 1.24 ± 0.05 23.07 ± 0.87
HC EHF 1.23 ± 0.09d 23.79 ± 1.85
R-5 EHF 1.60 ± 0.14c 29.45 ± 2.48
d
R-10 EHF 1.33 ± 0.01 24.76 ± 0.21
129
Capacidad de inhibición de la oxidación de lipoproteínas de baja densidad (LDL) de
productos derivados de la hoja de noni.
Capacidad de inhibición de oxidación de LDL
(µmolET/g bs) (µmolET/100 g bh)
D-5 *8.66 ± 0.08b 6.93 ± 0.07

D-10 *9.39 ± 0.09a 7.51 ± 0.06
HC EMeOH 9.68 ± 0.36a 187.10 ± 6.99
R-5 EMeOH 7.29 ± 0.23c 134.09 ± 4.30
R-10 EMeOH 4.61 ± 0.15d 85.50 ± 2.81
HC EHF 8.53 ± 0.64b 164.89 ± 12.46
R-5 EHF 1.43 ± 0.11e 26.36 ± 2.03
R-10 EHF 1.59 ± 0.07e 29.57 ± 1.32
130

06 Vazquez Herrera Carolina PDF

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

06 Vazquez Herrera Carolina PDF

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

06 Vazquez Herrera Carolina PDF

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS

MAESTRÍA EN CIENCIA Y TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS

Caracterización fitoquímica y evaluación de la actividad

Q.F.B. CAROLINA ISABEL VÁZQUEZ HERRERA

Para obtener el Grado de

DR. ARMANDO CARRILLO LÓPEZ

DR. ELHADI M. YAHIA

Culiacán, Sinaloa, México Febrero, 2019

Hortalizas de la Maestría en Ciencia y Tecnología de Alimentos de la Facultad de

Ciencias Químico Biológicas de la Universidad Autónoma de Sinaloa y en el

Laboratorio de Fitoquímicos y Nutrición de la Facultad de Ciencias Naturales de la

con financiamiento del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT), y del

Programa de Fortalecimiento y Apoyo a Proyectos de Investigación de la Universidad

Autónoma de Sinaloa (PROFAPI-UAS, Proyecto PROFAPI-2014/061). Carolina

Isabel Vázquez Herrera recibió beca del CONACYT.

A las instituciones que hicieron posible este proyecto, la Universidad Autónoma de

A mis compañeros de generación, Yesenia, Jordi, Cynthia, Fernanda, Yazmín,

A mis compañeros de laboratorio en Querétaro, el Dr. Braulio Cervantes, Alex,

A la M.C. Alma Astorga, cuyo apoyo y disposición fue invaluable en el trabajo

A todos y cada uno los profesores de la Maestría en Ciencia y Tecnología de

A Harry y a mi familia, que de no tenerlos siempre presentes, ningún esfuerzo

ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................... vi

ÍNDICE DE CUADROS ................................................................................................ vii

II. INTRODUCCIÓN .................................................................................................... 5

III. REVISIÓN DE LITERATURA ................................................................................. 7

1. Compuestos fenólicos ...................................................................................... 7

b. Compuestos fenólicos no flavonoides ........................................................ 10

2. Clorofilas y carotenoides ................................................................................ 10

3. Actividad biológica de los fitoquímicos........................................................... 13

a. Actividad antioxidante .................................................................................... 14

1) Ensayo de inhibición de radical DPPH ................................................... 16

2) Ensayo de inhibición de radicales •OH en la degradación de 2-desoxi-D-

3) Ensayo de inhibición de la oxidación de lipoproteínas de baja densidad

(LDL) inducida por cobre ............................................................................... 19

dihidrocloruro de 2,2-azobis (2-metil-amidinopropano) ................................. 20

b. Actividad antimicrobiana ............................................................................. 21

B. EL NONI (Morinda citriflia L.) ......................................................................... 24

1. Descripción botánica, origen y distribución .................................................... 24

2. Importancia económica .................................................................................. 25

3. Productos derivados de noni .......................................................................... 27

4. La hoja de noni ............................................................................................... 28

IV. JUSTIFICACIÓN ................................................................................................... 37

VI. OBJETIVOS .......................................................................................................... 39

A. OBJETIVO GENERAL ................................................................................... 39

B. OBJETIVOS ESPECÍFICOS .......................................................................... 39

VII. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................ 40

1. Elaboración de las decocciones y obtención de los residuos de decocción de

e. Sólidos solubles totales (°Brix) ................................................................... 44

2. Caracterización fitoquímica ............................................................................ 45

a. Compuestos fenólicos totales..................................................................... 45

1) Extracción de la muestra ......................................................................... 45

3) Determinación del contenido de compuestos fenólicos totales .............. 46

b. Carotenoides totales y clorofilas totales ..................................................... 47

1) Extracción de la muestra ......................................................................... 47

2) Curva de calibración de β-caroteno ........................................................ 48

3) Cuantificación de carotenoides totales y clorofilas totales ..................... 48

c. Carotenoides individuales identificados y cuantificados por HPLC ........... 49