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PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO MÉTODOS DE AISLAMIENTO

Ramirez Paula1 (2126203) , Potosi Yhon 2 (2170348), Berrio Rosa3 (2125571)

Escuela de Ingeniería de Alimentos, Facultad de Ingeniería, Universidad del Valle,

Cali-Colombia

RESUMEN

La práctica realizada fue de gran importancia ya que consistió en realizar la

preparación y siembra de un cultivo, la preparación de medios microbianos es el
proceso de mezclar nutrientes, inhibidores selectivos o indicadores para producir agar
o caldo que promueve el crecimiento y la diferenciación de microorganismos.
También se realizaron diferentes técnicas de siembra como: agar inclinado, tubo de
agar nutritivo de siembra recta, caldo nutritivo, medio de cultivo por cuadrantes,
siembra en zig-zag, y otro tipo de siembra que consistió en sembrar cuando el agar
todavía no está solidificado y luego se pasó a la caja de petri. El objetivo de la práctica
fue aplicar técnicas para el desarrollo de los medios de cultivo y la importancia de sus
componentes para el crecimiento bacteriano.

Palabras Claves : Medios de cultivo, Cultivos bacterianos, Caldo nutritivo, Agar.

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1. INTRODUCCIÓN
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que
crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante. (Casado, Torrico & Medina, 2012)

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra

(inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano,
para su desarrollo y multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se
incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen: Que se efectúen
asépticamente, Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén
esterilizados, Que se realicen solo los manipuleos indispensables, Que se
trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un mechero o
bien flujo laminar.
Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los
requerimientos del microorganismo a estudiar. (Garibaldi, 2009)

2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo General

Aplicar técnicas para el desarrollo de los medios de cultivo y la importancia de
sus componentes para el crecimiento bacteriano y aplicar los métodos
bacteriológicos más usuales para el crecimiento y aislamiento de
microorganismos.

2.2. Objetivos específicos

● Ejercer un correcto cultivo.
● Realizar una adecuada observación e interpretación del cultivo.

3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 Instrumentos y materiales usados.
Mechero, 6 cajas petris, agua peptona, asas (en argolla y recta), bacteria (B.
cereus), estufa, 3 tubos de ensayos grandes, 3 tubos de ensayo pequeños, una
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gradilla, cinta vinipel para sellar cajas, un erlenmeyer, jeringa, cultivo mixto y
cultivo puro.

3.2. Procedimiento experimental.

Preparación del cultivo: Primeramente se realizó el el cálculo del material
necesario y la cantidad que se quería preparar, se pesaron 2, 73 g de agar
nutritivo, luego se agregó esta agar a un erlenmeyer que contenía 134 mL de
agua peptona, se coloco a hervir hasta que tomara un color amarillo oscuro ,
posteriormente a cada uno de los tubos de ensayos grandes se le agraron 18
mL del agar ya disuelto, y a dos tubos de los pequeños se le colocaron 7 mL
del agar nutritivo disuelto, por ultimo los tubos de ensayo y el agar restante se
llevaron a esterilizar en autoclave durante () minutos a (ºC).

Método de Siembra: Esterilizar el asa en la llama del mechero hasta el rojo

vivo, en los tubos de ensayo pequeños con agar nutritivo inclinado, el agar
nutritivo y el caldo nutritivo se introdujo la bacteria B.cereus, luego para los
tres tubos de ensayo grandes se les insertó el cultivo mixto siendo la única vez
que se esteriliza el asa fue cuando se introdujo el cultivo mixto al primer tubo,
después a cada uno de las tres de las cajas petris se le adiciono el agar nutritivo
de cada tubo de ensayo y se selló con la cinta vinipel, por último el restante de
agar nutritivo que se encontraba en el erlenmeyer se distribuyó de 18 mL a las
otras tres cajas petris; a una de éstas con el cultivo mixto se utilizó la técnica
de cuadrante y se rayo de forma de zig zag, a otra también se utilizó el cultivo
mixto pero se rayo en forma de zig zag y para la última se utilizó el cultivo
puro y también se rayo de forma de zig zag.

4. RESULTADOS
4.1. Tubo de agar nutritivo inclinado
Hubo crecimiento de colonias de bacterias de color blanco.

4.2. Tubo de agar nutritivo de siembra recta

Hubo mayor crecimiento de bacterias en la parte superior del agar.
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4.3. Tubo de caldo nutritivo

Tiene un poco más de turbidez.

4.4. Cultivo en cuadrantes

En el último cuadrante se logró detallar bien las dos colonias presentes en la
superficie del agar.
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4.5. Cultivo mixto en zig-zag

Se puede observar que en la parte que fue más separada la muestra se
concentran
las dos colonias.

4.6. Cultivo puro en zig-zag

En este medio cultivo solo hay colonias de una sola bacteria y en la parte en
que la siembra fue más separada se puede apreciar mejor las colonias.

4.7. Cultivo caja 10-1

Solo se aprecia el crecimiento de una de las colonias.
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4.8. Cultivo caja 10-2

Hubo crecimiento de ambas colonias, pero una de ellas solo creció en un
pequeño lugar.

4.9. Cultivo caja 10-3

Hubo un notable crecimiento de colonias por todo el medio de cultivo.
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5. DISCUSIÓN

Los métodos de siembra para medio solido usados fueron por estrías y por punción ,
ambos en tubos de ensayo con agar nutritivo en los que después de la incubación se
pudo observar el crecimiento de la colonia de bacterias B.cereus en la superficie del
agar; La siembra en medios líquidos como en el caldo nutritivo también se le
introdujo el inóculo y se sembró la bacteria B.cereus, se observó el crecimiento
bacteriano a través de toda la superficie del medio liquido, otro método usado en
medio sólido fue la siembra en caja Petri de un cultivo puro, por la técnica del
agotamiento de asa, donde se extiende la muestra formando estrías desde el borde
superior hasta el otro lado, primeramente muy unidas y se van separando hasta llegar
al borde inferior de la caja, luego de haber pasado el tiempo de incubación se pudo
observar el crecimiento de colonia sobre la superficie del agar con bordes con forma
ondulada y festoneada.Otros métodos usados en el laboratorio fueron para el
aislamiento de cultivos mixtos, se hizo una separación de las bacterias por medio
técnicas como la de agotamiento de asa y estrías escocesa, donde se busca diluir o
disminuir la densidad de la colonia y que desarrollen colonias independientes. La
separación por agotamiento de asa y la hecha por cuadrantes, dejo ver dos tipos de
colonias de bacterias desarrolladas sobre la superficie del agar, una de ellas con forma
circular y borde entero, la otra con forma irregular y borde ondulado.

Otra técnica de aislamiento y recuento de colonias de bacterias fue hecha por medio
de diluciones sucesivas a partir del cultivo mixto en tres tubos de ensayo con agar
nutritivo, en el primer tubo se introduce el asa con la muestra de bacterias y luego sin
esterilizar se hace la siembra en otros 2 tubos mas; luego se traslada el agar a cajas
Petri para su incubación, marcandolas con 10-1 , 10-2 y 10-3 . En la caja de 10-3 se pudo
observar dos tipos de colonias de bacterias, unas en su mayoría con forma circular y
el otro tipo eran más pequeñas y de forma ovalada. En la caja de 10-2 se observó las 2
colonias, sin embargo una de ellas solo formó una pequeña colonia en el centro de la
superficie del agar con forma circular y borde ondulado y la otra colonia se esparció
por toda la superficie en diminutos puntos con forma ovalada. En la caja de 10-1 solo
se observó un tipo de colonia de bacteria repartida por todo el agar en pequeños
puntos grises con forma circular.

6. CONCLUSIONES
● Realizar un buen método de siembra de un cultivo de bacterias,
permite realizar una mejor observación y clasificación de una colonia.
● Los métodos de siembra, aislamiento y recuento de colonias se puede
facilitar mucho si se realiza un cultivo nutritivo teniendo en cuenta que
factores favorecen el crecimiento del microorganismo.
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7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Casado, M., Torrico, G., Medina, M. (2012). Medios de cultivo en un

laboratorio de microbiología. Recuperado de:
https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un
-laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf

Garibaldi, J.(2009). Siembra y recuento de microorganismos.Universidad

Tecnológica Nacional, Facultad regional Rosario, Cátedra de Biotecnología.
Recuperado de:
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/
practicoIII.pdf

Cordova, B. S. (s. f.). Cultivos mixtos (1). Scribd.

https://es.scribd.com/document/426452742/Cultivos-mixtos-1

Fonseca, A. S. (2017, 11 junio). CULTIVO DE MICROORGANISMOS:

MEDIOS DE CULTIVO Y MÉTODOS DE SIEMBRA.
https://www.academia.edu/33416018/CULTIVO_DE_MICROORGANISMOM
EDIOS_DE_CULTIVO_Y_M%C3%89TODOS_DE_SIEMBRA