TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INGENIERÍA AMBIENTAL

Mapa Conceptual: Espectrometría de Masas

Materia: Análisis Instrumental

Mayo, 2023.
 Espectroscopía de Masas

es Instrumentación Aplicaciones Fundamento

Se fundamenta en la separación de
Una técnica micro • Sistema de Se utiliza para medir pesos partículas moleculares o atómicas
analítica usada entrada de moleculares muy bajos a por su diferente masa. En esta
para identificar muestras. concentraciones técnica es prioritario la obtención
compuestos • Cámara de extremadamente bajas, por de iones a partir de moléculas
desconocidos, ionización debajo de nanogramos por orgánicas en fase gaseosa, una vez
para cuantificar • Acelerador mililitro obteniendo estos iones se separan
compuestos • Analizadores de acuerdo con su masa y a su
conocidos, y para • Detector carga
elucidar la • Análisis de las
estructura y secuencias
propiedades aminoacídicas de
proteínas y péptidos Etapas
químicas de
moléculas. • Evaluación de las
impurezas durante el
desarrollo de
fármacos Ionización de la
• Evaluación de la muestra.
pureza de los Acelerador de los
principios Se consigue por Iones por un
farmacéuticos bombardeo campo eléctrico.
activos mediante
electrones según Convertimos una
• Análisis sistemático
el proceso: fracción
de drogas en orina,
significativa de
sangre y cabello M+e-áM++2e- los átomos
• Detección de
formados en la
Capacidad para trastornos
etapa 1 en un
combinar hereditarios de
flujo de iones,
aminoácidos, ácidos
generalmente
con grasos y biosíntesis
positivos y de
orgánica.
Dispersor de los carga única.
iones según su
Otras técnicas de relación
separación como: masa/carga.
• Electroforesis
capilar
• GC
• HPLC
Detección de iones y producción de la
correspondiente señal eléctrica. El
ordenador al que está conectado el aparato
recoge las distintas señales y las reproduce
en forma de espectrograma.
TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INGENIERÍA AMBIENTAL

Investigación Espectrometría de Masas

Materia: Análisis Instrumental

Mayo, 2023.
Introducción

La espectrometría de masas es una técnica microanalitica que se utiliza para identificar

compuestos que son desconocidos, para así cuantificar compuestos conocidos y de
esta manera conocer la estructura molecular y las propiedades que tiene la molécula.

Esta técnica tuvo su origen en el año 1886, aunque sus inicios se desarrollo hasta
1980 cuándo se utilizó un método de ionización por electropulverización.

Es una técnica que puede realizarse con cantidades mínimas de muestra y brindarnos
información relevante de nuestro analito, la cuál se considera una ventaja en
comparación a otras técnicas.

Objetivos

• Conocer el fundamento de la espectrometría de masas.

• Analizar como se obtiene un espectro de masas.
• Detallar la instrumentación de la espectrometría de masas.
• Identificar las partes en que se divide un espectro de masas.

Resumen

El proceso de la espectrometría de masas se comprende de cuatro etapas: ionización

de la muestra, aceleración de los iones, dispersión de los iones según su masa/carga
y en la detección de los iones y producción de la correspondiente señal eléctrica.
Es una técnica que consta de 5 partes esenciales como lo son: un sistema de entrada
de muestras, la cual se divide en 3 tipos; una cámara de ionización que cuenta con
dos categorías y 2 subcategorías; un sistema acelerador; un analizador de masa del
cuál existen 6 diferentes tipos dependiendo de lo que se requiera es el que se utilizara;
y un detector que nos brinda la información que posteriormente vemos en el espectro
de masas.
El espectro de masas se lee de acuerdo con la fragmentación patrón ya que, debido a
esto, la intensidad relativa de los distintos picos nos brinda información sobre la
proporción en que se encuentra cada componente, también podemos observar el pico
base ya que es el que se encuentra al 100%.

Generalidades

La espectrometría de masas tuvo sus inicios en la década de los 80, cuando se utilizo
el método de ionización por electropulverización de una solución acuosa consiguiendo
producir pequeñas gotas de una muestra que se reducen de tamaño al evaporarse el
agua que las transporta, mientras los iones de proteínas permanecen en forma de
suspensión libre. Sin embargo, este tipo de espectrometría comenzó a surgir en el año
1886 cuando Goldstein descubrió los iones positivos y posteriormente W. Wien le dio
forma cuando consiguió analizarlos por deflexión magnética en 1898, y después en el
año 1912 se crearía el primer espectrómetro de masas por el científico J.J. Thomson.
Ahora bien, la espectrometría de masas es una técnica analítica que nos permite
identificar y determinar estructuras, así como analizar trazas de moléculas en una
mezcla química, obteniendo así la masa molecular y la abundancia de los
componentes de dicha mezcla. Y nos permite estudiar las interacciones no covalentes
como el análisis de la unión proteína-ligando, con lo cual se pueden identificar ligandos
específicos a determinados receptores.

Ventajas de la Espectrometría de masas

❖ Es muy sensible a comparación de otras técnicas

❖ Es excepcional para identificar componentes desconocidos en una solución de
muestra
❖ Puede funcionar al combinarse con otras técnicas como la cromatografía de
gases o la cromatografía líquida.
❖ Es preciso
❖ Es rápido
❖ Funciona con cantidades pequeñas de analito que son en partes por millón.
❖ Da la masa molecular relativa de cada molécula.

Desventajas de la Espectrometría de masas

❖ Tiene un costo elevado

❖ Necesita de un técnico especializado
❖ No puede ser portátil
❖ No se diferencian isómeros de la molécula con la misma relación carga
❖ Se pueden llegar a necesitar columnas quirales para separar enantiómeros
❖ No separan isómeros ópticos y geométricos

Etapas del Proceso de Espectrometría de masas

❖ Sistema de Ionización

Las fuentes de Ionización que existen son varias. Si la ionización es en fase

gaseosa se utilizan técnicas de impacto eléctrico, también está la de ionización
química y ionización de campo. Por otro lado, si la ionización es en fase liquida, las
técnicas utilizadas son las siguientes: desorción de campo, bombardeos con
átomos rápidos, espectrometría de masas de iones secundarios, ionización por
termonebulización, ionización por electrovaporización, ionización química a presión
atmosférica, desorción de matriz asistida por LASER.

También esta el sistema de ionización por elección para el análisis de péptidos

(ESI) que nos brinda la formación de una familia de iones, a partir de un ión
generado por la acción de desolvataciones. Esta técnica no llega a interferir con los
enlaces covalentes débiles o no covalentes, lo cuál permite la observación de
fragmentos de moléculas de proteínas, se utiliza en analitos puros, polares o
polarizables y únicamente con solventes polares. Sin embargo, esta técnica
 requiere contar con un analito en solución en un medio polar para poder aplicar un
elevado campo eléctrico sobre él y poder generar iones moleculares gaseosos
intactos.

❖ Electrovaporación (SE)

La ionización por el sistema de ionización por elección se basa en la generación de

una nube de gotas, formadas por un solvente polar, cargadas eléctricamente, que
son sometidas a la acción de un campo eléctrico fuerte. Los iones analizados
pueden corresponder a moléculas enteras o a fragmentos de ellas.
El analito se introduce en una aguja, al equipo, que es mantenida en un alto
potencial eléctrico. Al final de la aguja, la solución es dispersada en pequeñas gotas
altamente cargadas conteniendo moléculas de proteínas. Las microgotas cargadas
electrostáticamente son sometidas a un fuerte campo eléctrico, sufren una
contracción de volumen y sus componentes pasan al estado gaseoso, cuando el
número de cargas electrostáticas del mismo signo, que se encuentran en la
superficie de la gota, es mayor que las que puede estabilizar una gota del mismo
tamaño teniendo en cuenta las repulsiones de Coulumb, se produce la explosión
de Raleigh que es la liberación de moléculas de la superficie de la gota que pasan
al estado gaseoso llevándose una o varias cargas, con la finalidad de disminuir el
número de cargas y las fuerzas repulsivas en la superficie. Dicha explosión genera
una microgota cargada electrostáticamente de menor tamaño, la cual sigue
teniendo en su superficie un número alto de cargas del mismo signo, y que, por la
acción del campo eléctrico aplicado, vuelve a contraerse, y si no cumple con la
relación número de cargas repulsivas en la superficie de nuevo se produce una
explosión de Raleigh. Con las sucesivas contracciones y explosiones de la gota se
van generando moléculas gaseosas ionizadas de los componentes originales de la
misma, y por tanto de la solución de partida. Estos iones formados son
transportados a la cámara de vacío del espectrómetro de masas, en donde son
separados y detectados de acuerdo con su relación de masa/carga.

❖ Aceleración de Iones

Estos iones producidos son transferidos al analizador donde son acelerados y

separados según su relación masa/carga utilizando diferentes principios físicos
según sea el tipo de analizador que puede ser sector magnético, o bien, eléctrico,
cuadrupolos, trampas de iones, analizadores de tiempo de vuelo, FT-ICR.

El acelerador de iones que se utilizó en este trabajo fue la trampa de iones

cuadrupolar. El QIT consiste en tres electrodos hiperbólicos. Al aplicar un voltaje
se genera un potencial de campo cuadrupolar en tercera dimensión, en donde los
iones quedan atrapados en una trayectoria oscilante, pero estable. Durante la
detección de los iones, el sistema de electrodos altera este movimiento oscilante y
produce inestabilidades en la trayectoria de los iones por lo cual éstos son
liberados.

❖ Detector
 Los iones procedentes del sistema acelerador llegan al detector el cual
generalmente esta constituido por un cátodo emisor que al recibir el impacto
producido por las partículas cargadas emite electrones.

Estos electrones son acelerados hacia un diodo el cual emite varios electrones más
al recibir el impacto de cada electrón. Este proceso se repite varias veces hasta
obtenerse una cascada de electrones que llega al colector lográndose una corriente
fuertemente amplificada. La corriente obtenida puede amplificarse de nuevo por
procedimientos electrónicos y se lleva a un sistema registrador.

Esquema de la muestra pasando por los componentes de un instrumento de

Espectrometría de masas

Muestra

Selección
𝟏𝟎−𝟓 − 𝟏𝟎−𝟖 𝒕𝒐𝒓𝒓 de iones
Sistema de Fuentes Analizador Detector
entrada de iones de masas

ionización

Manejo
de datos
Procesador de la
señal
Bomba de
vacío

Dispositivo de
lectura

Partes de la Espectrometría de masas

❖ Sistema de entrada de muestras

En el sistema de entrada de muestras, un micromol o menos de muestra se

convierte al estado gaseoso por calentamiento a unos 400°C y se introduce
lentamente en la cámara de ionización. La finalidad del sistema de entrada es
permitir la introducción de una muestra representativa en la fuente de iones con la
 mínima perdida de vacío. En los espectrómetros de masas más modernos
encontramos diferentes tipos de sistemas de entrada:

a) Sistemas indirectos de entrada

Es un sistema clásico y simple, en el cual la muestra se volatiliza
externamente y se introduce en la región de ionización que esta baja
presión. El sistema de entrada es normalmente de vidrio para evitar posibles
pérdidas por adsorción.

b) Entrada por sonda indirecta

Los líquidos y sólidos no volátiles se pueden introducir en la región de
ionización mediante un soporte para muestra o sonda, el cual se inserta a
través de un cierre de vació. El sistema de cierre se utiliza para controlar la
cantidad de aire que entra después de la inserción de la sonda en la región
de ionización. Las sondas también se usan cuando la cantidad de muestra
es limitada ya que se pierde mucha menos cantidad.

c) Sistemas de entrada cromatográficos y de electroforesis capilar

Es un tipo de sistema de entrada especial, esta indicado su uso cuando al
espectrómetro de masa va acoplado un sistema de cromatografía de gases
o de líquidos de alta eficacia o a columnas de electroforesis capilar que
permiten la separación y determinación de los componentes de mezclas
complejas.

❖ Cámara de ionización
Las fuentes de iones de este tipo de espectrometría tienen características
comunes, pese a la variabilidad de tipos existente y es que todas transforman los
componentes de una muestra en iones. En muchos casos el sistema de entrada
y la fuente de iones están combinados en un único componente. En todos los
casos, se obtiene un haz de iones positivos o negativos que posteriormente se
acelera hacia el interior del analizador de masas o sistema separador a través del
acelerador.

La formación de iones del analito es el punto de arranque de un análisis por este

tipo de espectrometría. El aspecto de los espectros de masas para distintas
especies moleculares depende en gran medida del método utilizado para la
formación de los iones.

Estos iones se dividen en 2 categorías:

1. Fuentes de fase gaseosa: es estas primero se volatiliza la muestra y

después se ioniza. Están generalmente restringidas a compuestos
térmicamente estables que tengan puntos de ebullición menores de unos
500°C. Y hay diferentes tipos, que son: Impacto de electrones, Fuentes de
ionización química y fuentes de ionización por campo.
 2. Fuentes de desorción: En estas la muestra en estado sólido o líquido, se
transforman directamente en iones gaseosos. Son aplicables a muestras
no volátiles y térmicamente inestables.

También se pueden clasificar en 2: fuentes duras las cuales comunican

suficiente energía a las moléculas para que estén en un estado de energía
altamente excitado; y en fuentes blandas, que dan lugar a poca fragmentación
y el resultado es un espectro con muy pocos picos con información útil.

❖ Acelerador

En este sistema las partículas ionizadas producidas por el impacto de los

electrones son obligados a atravesar una primera ranura acelerada por una
pequeña diferencia de potencial. Entre esta primera y una segunda ranura existe
una diferencia de potencial muy elevada que imprime a las partículas su velocidad
final. Una tercera ranura actúa como colimador del haz de partículas.

❖ Analizador

Para la separación de iones con diferente relación m/e se dispone de varios

dispositivos. Lo ideal es que el analizador fuera capaz de distinguir entre
diferencias muy pequeñas de masa. Además, los analizadores deberían de
permitir el paso del número suficiente para producir corrientes iónicas fáciles de
medir. Al igual que sucede con los monocromadores ópticos, a los que los
analizadores análogos, estas dos propiedades no son compatibles y se debe de
llegar a un equilibrio que esta regido por la resolución del espectrómetro de masa.

Existen diferentes tipos de analizadores de masas:

1. Analizadores de sector magnético

2. Espectrómetros de doble enfoque
3. Espectrómetro de masa cuadrupolar
4. Analizadores de masas de tiempo de vuelo
5. Analizadores trampa de iones
6. Transformada de Fourier

❖ Detector

Los iones procedentes del sistema acelerador llegan al detector el cual

generalmente esta constituido por un cátodo emisor que al recibir el impacto
producido por las partículas cargadas emite electrones. Estos electrones son
aceleradores hacia un dinodo el cual emite varios electrones más al recibir el
impacto de cada electrón.

Este proceso se repite varias veces hasta obtenerse una cascada de electrones
que llega al colector lográndose una corriente fuertemente amplificada, por un
 procedimiento muy similar al que se utiliza en los tubos fotomultiplicadores. La
corriente obtenida puede amplificarse de nuevo por procedimientos electrónicos
y se lleva a un sistema registrador.

Fragmentación del patrón

Es cuando la muestra orgánica vaporizada pasa a la cámara de ionización de un

espectrómetro de masas, es bombardeada por una corriente de electrones. Estos
electrones cuentan con una energía lo suficientemente alta para derribar un electrón
de una molécula orgánica y formar así un ion positivo.

Este ion se llama el ion molecular – o a veces se le denomina ion padre y generalmente
se le da el símbolo 𝑀+ . El punto en esta segunda versión representa el hecho de que
en algún lugar del ion habrá un solo electrón desapareado. Esa es la mitad de lo que
originalmente era un par de electrones; la otra mitad es el electrón que se elimino en
el proceso de ionización.

Las moléculas moleculares son enérgicamente inestables, y algunos de ellos se

romperán en trozos más pequeños. El caso más simple es que un ion molecular se
rompe en dos partes, una de las cuales es otro ion positivo y la otra es un radica libre
sin carga. 𝑀± → 𝑋 + + 𝑌 −

El radical libre no cargado no va a producir una línea en el espectro de masas. Solo

las partículas cargadas serán aceleradas, desviadas y detectadas por el espectrómetro
de masas. Estas partículas sin carga simplemente se perderán en la máquina,
eventualmente, serán retiradas por la bomba de vacío.

El ion 𝑋 + , viajará a través del espectrómetro de masas como cualquier otro ion positivo,
y producirá una línea en el diagrama de barras. Todo tipo de fragmentaciones del ion
molecular original son posibles, y eso significa que obtendrá una gran cantidad de
líneas en el espectro.

Cabe mencionar que las fragmentaciones responden a alguna de las siguientes reglas:

1ª Regla: Los enlaces Carbono-Carbono se encienden con preferencia en los puntos

de ramificación
2ª Regla: Los enlaces dobles o sistemas de dobles enlaces (entre ellos aromáticos)
favorecen la escisión de los enlaces acrílicos y bencílicos.
3ª Regla: Los heteroátomos, como donadores de electrones, favorecen, la
fragmentación de los enlaces del átomo de Carbono que soporta al heteroátomo
4ª Regla: Los dobles enlaces y los heteroátomos favorecen, como aceptores de
Hidrógeno, la transposición de un hidrogeno a través de un estado cíclico de transición
de seis miembros.

Masa patrón
Es el pico del espectro que aparece con valor más elevado de m/e que corresponde a
la molécula ionizada sin fragmentar. Está masa patrón nos permite determinar con
rápides y precisión la masa molecular, siempre que se opere con una tensión de
ionización no excesivamente elevada, la cual produciría la fragmentación total de la
molécula.

Pico base
Es el ion que se detecta en mayor proporción y en el espectro de masas a su línea se
le da una abundancia relativa del 100%; que es la abundancia con la que se detectan
el resto de los fragmentos y es reportada como una relación porcentual relativa al pico
base.

Ion molecular
Proporciona la masa molecular del analito y es la primera pista utilizada para
interpretar un espectro de masas. La relación masa/carga del ion molecular se basa
en la masa del isótopo más abundante para cada elemento.

Dado que muchos espectros de masas tienen resolución de masa unitaria, la masa
isotópica normalmente se redondea al número entero más cercano, esto se denomina
masa nominal.

En gran parte de los espectros de masas, el ion molecular se identifica fácilmente como
el ion con relación masa/carga más alta. Sin embargo, esta asignación debe realizarse
con precaución porque la mayor masa para cargar el ion puede ser una impureza, un
isótopo del ión molecular o un fragmento.

Intensidad relativa

La intensidad relativa de un pico representa su intensidad en comparación con el pico

base. Se representa como % respecto al pico base que es 100%. Por convención, este
dato se indica en la izquierda del espectro de masas.
Aplicaciones Cualitativas y Cuantitativas

Cualitativas

❖ Determinación del peso molecular

Este tipo de determinación necesita conocer la identidad del pico ion molecular.

❖ Determinación de la formula molecular

Las formulas moleculares se logran determinar siempre que el pico ion molecular
pueda ser identificado y también su masa exacta.

❖ Identificación de compuestos por su fragmentación patrón

La fragmentación de la mayor parte de las moléculas produce un gran número de
picos que permiten la identificación de más compuestos y el reconocimiento de
grupos funcionales.

❖ Identificación de productos de reacción o de productos metabólicos

Se usa en cinética química y en farmacología pudiéndose llegar a identificar
impurezas y metabolitos a concentraciones de pocas partes por millón.

❖ Caracterización y análisis de polímeros

El polímero se piroliza en condiciones controladas y los productos volátiles se
hacen pasar a un espectrómetro para su análisis.

❖ Análisis de sangre
Gracias a la rapidez del método, se puede emplear incluso como control durante
un proceso quirúrgico. Así se puede determinar a gran velocidad las
concentraciones hemáticas de monóxido y dióxido de carbono, oxigeno,
nitrógeno, gases anestésicos.

❖ Estudiar la abundancia de isótopos

Se utiliza para análisis de dilución de isótopos, estudios con trazadores
isotrópicos, estudiar la edad de las muestras por su proporción de isótopos con la
ventaja frente a los radiactivos que se pueden medir los isótopos no radioactivos.

❖ Identificación de compuestos puros

Este espectro nos proporciona el peso molecular del compuesto y su fórmula, así
como la presencia de diferentes grupos funcionales, para así conocer el
compuesto, esto al realizar la comparativa del espectro que obtenemos con
espectros con compuestos ya conocidos y ver si coinciden.

Cuantitativas

❖ Determinación cuantitativa de especies moleculares o tipos de especies

moleculares en muestras orgánicas, biológicas y ocasionalmente inorgánicas.
Este tipo de muestras generalmente se realizan en una columna
 cromatográfica o de electroforesis capilar para finalmente pasar al
espectrofotómetro.
❖ Determinación de la concentración de elementos en muestras inorgánicas y,
en menor medida, de muestras orgánicas y biológicas. Las concentraciones
de esta muestra se obtienen directamente del espectrómetro de masas y se
crean curvas de calibrado que nos permiten realizar el análisis cuantitativo.

Conclusión

La espectrometría de masas es una técnica que con el paso de los años se ha ido
mejorando, proporcionando así su uso prolongado y aplicable para obtener
información de ciertos compuestos que necesitemos.

Con la realización de está investigación, ahora conozco las aplicaciones que tiene está
técnica, así como, la manera en que esta constituida y el como se trabaja, para de ser
necesario utilizarla en algún futuro, tener las bases para realizar dicha tarea.

Así como conocer la manera en que se fragmenta y se pueden leer los picos que nos
dan como resultado.

Está técnica tiene ventajas y desventajas, entre las que están su elevado costo como
desventaja, como su versatilidad para trabajar de forma combinada con otras técnicas
como lo es la cromatografía de gases, y es utilizado en diferentes campos como en
medicina, arqueología y biología molecular, por mencionar algunos.
TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INGENIERÍA AMBIENTAL

Tríptico de Principios y aplicaciones de la

Espectrometría de masas

Materia: Análisis Instrumental

Mayo, 2023.
Referencias
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