Efecto Analgésico, Caracterización Fitoquímica Y Análisis Toxicológico Del Extracto Etanólico DE HOJAS DE Pereskia Lychnidiflora
Efecto Analgésico, Caracterización Fitoquímica Y Análisis Toxicológico Del Extracto Etanólico DE HOJAS DE Pereskia Lychnidiflora
Efecto Analgésico, Caracterización Fitoquímica Y Análisis Toxicológico Del Extracto Etanólico DE HOJAS DE Pereskia Lychnidiflora
RESUMEN
Objetivo. Evaluar el efecto analgésico del extracto etanólico de las hojas de Pereskia lychnidiflora, la prospección de
metabolitos secundarios y el análisis toxicológico. Materiales y métodos. La actividad analgésica fue evaluada mediante
la prueba del ácido acético y la formalina en ratones NIH a una concentración de 30, 50 y 100 mg/kg de peso corporal,
utilizando como control Ibuprofeno a 200 mg/kg y agua destilada como blanco. La prospección de metabolitos secundarios
se realizó por el método de cromatografía de capa fina y la toxicidad del extracto fue evaluada in vivo según la dosis
máxima de 2000 mg/kg de peso corporal. Resultados. La prospección fitoquímica determinó la presencia de alcaloides,
taninos, triterpenos y esteroles como mayores constituyentes químicos. Se determinó que el extracto etanólico de Pereskia
lychnidiflora posee una actividad analgésica similar al Ibuprofeno. No se observaron signos de toxicidad en los ratones de
experimentación y se clasifica el extracto como no tóxico con una DL50 mayor de 2000 mg/kg. Conclusión. El extracto
etanólico de Pereskia lychnidiflora tiene un efecto analgésico antiinflamatorio que podría estar condicionado por la presencia
de alcaloides, taninos y esteroles (terpenoides) presentes en esta especie vegetal y puede ser clasificado como no tóxico.
Palabras clave: Plantas medicinales; Fitoterapia; Analgésicos; Pruebas de Toxicidad; Ratas; El Salvador (fuente: DeCS BIREME).
1
Escuela de Biología, Facultad de Ciencias Naturales y Matemáticas, Universidad de El Salvador. San Salvador, El Salvador.
2
Centro de Investigación y Desarrollo en Salud, Universidad de El Salvador. San Salvador, El Salvador.
3
Laboratorio de Investigación en Productos Naturales, Facultad de Química y Farmacia, Universidad de El Salvador. San Salvador, El Salvador.
4
Laboratorio Clínico, Hospital Nacional Rosales, Ministerio de Salud Pública. San Salvador, El Salvador.
a
Licenciada en Biología; b licenciado en Química y Farmacia; c licenciado en Laboratorio Clínico; d doctor en Química Orgánica.
Recibido: 08/03/2018 Aprobado: 28/11/2018 En línea: 21/12/2018
Citar como: Guerra R, Gómez LJ, Castillo UG, Toloza G, Sánchez-Pérez JP, Avalos N, Mejía JG, Nuñez MJ, Moreno MA. Efecto analgésico, caracterización
fitoquímica y análisis toxicológico del extracto etanólico de hojas de Pereskia lychnidiflora. Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2018;35(4):581-9. doi:10.17843/
rpmesp.2018.354.3532
581
Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2018;35(4):581-9. Guerra R et al.
Identificación de antraquinonas
MATERIALES Y MÉTODOS
Se realizó una cromatografía de capa delgada utilizando
MATERIAL VEGETAL gel de sílice G UV254 y una fase móvil de n–hexano–
acetato de etilo (1:1) como fase estacionaria y fase móvil
Las hojas de Pereskia lychnidiflora DC fueron colectadas respectivamente. Una vez secada la placa cromatográfica
en el Cantón La Laguna, Lago de Coatepeque, Municipio se asperjó con una solución al 10% de KOH en metanol.
de El Congo, (latitud 113º53’39.88’’ N; longitud 89º32’45.64’’ La aparición de manchas rojas indica la presencia de
W), Departamento de Santa Ana, El Salvador, en junio de antraquinonas (14).
2016 y fueron identificadas por la curadora del Herbario
del Museo de Historia Natural de El Salvador. Las hojas se Identificación de flavonoides
secaron a 40 °C por 48 horas en estufa de aire circulante
y posteriormente fueron fraccionadas en un molino de Se tomaron 2 mL del extracto etanólico en un vidrio reloj
cuchillas. y se agregó una pequeña tira de magnesio metálico (2x5
mm), luego, se adicionó gota a gota ácido clorhídrico
PREPARACIÓN DEL EXTRACTO concentrado. La aparición de una coloración rojiza indica la
presencia de flavonoides (15).
Las hojas secas y molidas de P. lychnidiflora (45,6 g)
fueron extraídas con alcohol etílico 95º (2x300 mL) en un Identificación de glicósidos cardiotónicos
baño ultrasonido VWR (Modelo 97043-988) a temperatura
ambiente (25 °C). Una parte del extracto (50 mL) fue Se preparó una cromatografía en capa delgada utilizando
almacenada para realizar el análisis fitoquímico y la otra fue gel de sílice G UV254 como fase estacionaria y una fase
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móvil compuesta por una mezcla acetato de etilo-metanol- utilizaron ratones machos y hembras NIH en estado juvenil
agua (8:1,5:0,5), se utilizó K-Strofantidina de testigo. Una nulíparas y no grávidas, cuyo peso osciló entre 20 y 23 g.
vez seca la cromatoplaca se asperjó con una solución Todos los animales permanecieron a una temperatura de
del reactivo de Kedde (volúmenes iguales de ácido 22 ±2 ºC y humedad relativa entre 50-60%, con un ciclo
3,5-dinitrobenzoico al 2% en metanol y de KOH al 5,7% luz-oscuridad de 12/12 horas, marcados con ácido pícrico
en agua). La aparición de manchas color violeta indican la para su identificación individual. Previamente, los animales
presencia de glicósidos cardiotónicos. fueron examinados clínicamente para certificar su estado
de salud. La alimentación consistió en una dieta a base de
Identificación de saponinas concentrado peletizado para roedores y agua a voluntad.
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Media hora después de la administración del extracto, Tabla 1. Resultados de la prospección de metabolitos
se provocaron las contorsiones abdominales a todos los secundarios del extracto etanólico de hojas de Pereskia
ratones por inyección vía intraperitoneal de una solución de lychnidiflora.
ácido acético al 1%, en volumen de 0.1 mL a cada animal.
El número de contorsiones realizadas se registraron en un Metabolito Prueba realizada Resultado
periodo de 20 minutos. Dragendorff +
Alcaloides Mayer +
PRUEBA DE FORMALINA Wagner +
Antraquinonas CCF Bornträger -
Para esta prueba se utilizó la misma metodología descrita Flavonoides Shinoda -
anteriormente a nuevos grupos de animales machos. El Glicósidos
CCF kedde -
estímulo doloroso se indujo por la inyección subplantar cardiotónicos
de 20 μL de formalina al 1%, en la pata trasera derecha Saponinas Espuma -
del ratón. En la prueba se distinguieron dos fases: Fase 1, Sesquiterpenlactonas CCF Baljet -
Clorhidrato de
indicativa del dolor neurogénico; los primeros cinco minutos +
quinina
y Fase 2, indicativa del dolor inflamatorio; entre los 15 a 30 Gelatina +
Taninos Tricloruro de
minutos después de la administración de la formalina (19). + (V)
hierro
Para evaluar ambas fases, se midió el tiempo acumulado Terpenoides Komarowski + (MR y AV)
en segundos por medio de un cronómetro durante el cual,
+: presencia; -: ausencia; CCF: cromatografía de capa fina; V: verde, MR:
el animal se lame la pata.
moradas a rosadas, AV: azul a verdes.
ANÁLISIS ESTADÍSTICO
sistema respiratorio, circulatorio, nervioso central y
Todos los datos obtenidos fueron estadísticamente autónomo, actividad motora y patrones de comportamiento.
evaluados con los programas SPSS 21.0 y Statgraphics En la Tabla 2, se observa que los grupos de hembras
Centurion XVI.I, con apoyo de Microsoft Excel 2013. aumentaron de peso, no así el grupo machos tratados con
Se utilizó la prueba de Shapiro Wilk para las pruebas de el extracto, que mostraron una disminución del 5%.
normalidad. La prueba de hipótesis incluye para los datos
generados del ensayo de toxicidad, el análisis T de Student No se encontraron alteraciones macroscópicas (superficie,
para muestras independientes; y para los datos obtenidos de color, consistencia y tamaño) de los órganos de los grupos
las pruebas de analgesia, la prueba de hipótesis incluye el experimentales. Asimismo, no se encontraron diferencias
análisis de varianza de una sola vía (ANOVA) seguido de un significativas en el peso de órganos entre los grupos
test de Tukey para comparaciones múltiples. Se consideró tratados y los controles de ambos sexos (Tabla 3); con
que la diferencia entre los grupos tratados y el grupo control excepción de una disminución estadísticamente significativa
es significativa con un valor de p<0,05. Todos los resultados de los valores promedios de peso del bazo en machos
son expresados como el promedio y la desviación estándar tratados con el extracto en estudio respecto a sus controles.
(ensayo de toxicidad) y como el promedio y error estándar Además, en el examen histopatológico de órganos no se
del promedio (pruebas de analgesia) de los grupos observaron alteraciones en ninguno de los casos (Figura 1).
experimentales.
En cuanto a los valores de bioquímica sanguínea, no
RESULTADOS existe diferencia estadísticamente significativa entre los
grupos tratados con el extracto evaluado y sus respectivos
ANÁLISIS DE LA PROSPECCIÓN DE LOS controles, a excepción del aumento de los valores de
METABOLITOS SECUNDARIOS
bilirrubina del grupo hembras tratadas con el extracto
etanólico de P. lychnidiflora (Tabla 3).
Los resultados obtenidos en la prospección de los
metabolitos secundarios son expresados en la Tabla 1.
Este estudio revelo la presencia de alcaloides, taninos PRUEBA DEL ÁCIDO ACÉTICO
(condensados), triterpenos y esteroles como metabolitos
mayoritarios. En la Tabla 4 y Figura 2A, se observa que la administración
del extracto de P. lychnidiflora disminuyó el número de
TOXICIDAD AGUDA ORAL contorsiones abdominales en todos los grupos tratados
con este extracto; con valores porcentuales de inhibición
Durante los chequeos clínicos que se realizaron diariamente de 70%, 76,88% y 82,94% para las concentraciones de 30,
a los animales tratados con el extracto etanólico de P. 50 y 100 mg/kg respectivamente; frente a un 90,55% de
lychnidiflora, no se observaron alteraciones en los diferentes inhibición observado en el grupo tratado con el fármaco de
sistemas estudiados: piel, ojos y membranas mucosas, referencia (Ibuprofeno 200 mg/kg).
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Tabla 2. Variación de los valores promedios de peso corporal en los grupos experimentales.
Figura 1. Cortes histológicos de órganos de animales tratados con el extracto etanólico de Pereskia lychnidiflora de 2,000 mg/kg de peso
corporal. Técnica histopatológica clásica para bloques parafinados, cortadas a 5 μm y coloreados con hematoxilina–eosina. Aumento 40x.
De izquierda a derecha: Intestino, hígado, estomago, riñón, corazón, bazo, pulmón.
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Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2018;35(4):581-9. Guerra R et al.
Tabla 3. Valores promedio de peso de órganos y valores de bioquímica sanguínea de los grupos experimentales.
Hembras Machos
Órgano
Grupo Peso promedio (DE) Valor de p* Peso promedio (DE) Valor de p*
Control 1,276 (0,103) 1,434 (0,202)
Hígado
Tratamiento 1,154 (0,167) 0,202 1,346 (0,153) 0,460
Control 0,426 (0,433) 0,106 (0,015)
Corazón
Tratamiento 0,092 (0,013) 0,159 0,128 (0,128) 0,210
Control 0,202 (0,259) 0,178 (0,028)
Pulmón
Tratamiento 0,192 (0,023) 0,535 3,53 (7,53) 0,376
Control 0,182 (0,019) 0,242 (0,033)
Riñón
Tratamiento 0,26 (0,191) 0,492 0,22 (0,023) 0,141
Control 0,636 (0,164) 0,668 (0,025)
Estómago
Tratamiento 0,778 (0,124) 0,413 0,498 (0,073) 0,256
Control 0,122 (0,013) 0,092 (0,004)
Bazo
Tratamiento 0,100 (0,034) 0,160 0,08 (0,016) 0,005
Control 2,008 (0,383) 1,766 (0,07)
Intestino delgado
Tratamiento 1,862 (0,197) 0,47 1,542 (0,433) 0,286
Control 0,758 (0,099) 0,776 (0,136)
Intestino grueso
Tratamiento 0,884 (0,073) 0,051 0,906 (0,138) 0,172
Control 0,12 (0,01) 0,25 (0,05)
Bilirrubina
Tratamiento 0,16 (0,02) <0,001 0,16 (0,01) 0,110
Respecto de los órganos, los cambios en el tamaño, evaluación de los cortes histológicos en los órganos de
forma, superficie, color, consistencia y peso; determinan los animales expuestos al extracto de estudio, orientan
la presencia de daños toxicológicos (24). Además, el peso a que el uso de las hojas de esta especie vegetal tiene
relativo de los órganos es fundamental para diagnosticar un perfil de seguridad adecuado. Por otro lado, fuera de
si el órgano fue expuesto a la lesión o no (25). En este la disminución en el peso del bazo de animales tratados
sentido, la ausencia de alteraciones macroscópicas con el extracto de P. lychnidiflora, no hay otros indicios
en las necropsias, así como microscópicas durante la que enlazan los resultados a la seguridad.
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Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2018;35(4):581-9. Efecto analgésico de Pereskia lychnidiflora
Tabla 4. Valores promedios y porcentaje de inhibición de la prueba del ácido acético y prueba de la formalina en los
grupos experimentales.
H2Od: grupo control negativo tratado con agua destilada; IBU: grupo control positivo tratado con ibuprofeno; Pl: grupos tratados con extracto etanólico
de P. lichnidiflora.
* Prueba de ANOVA/ Tukey.
Sobre el aumento de los valores promedio de bilirrubina en el estar acompañado por el incremento de las transaminasas
grupo de animales expuesto al extracto vegetal, esto, podría y la disminución de glucosa en sangre, ni por alteraciones
ser un indicador de daño de la función hepática, pero al no macroscópicas o microscópicas en hígado (26), dichos
60 A
50
40
30
*
20
* *
10
0
H2Od IBU 200 mg/kg Pl 30 mg/kg Pl 50 mg/kg Pl 100 mg/kg
Grupos
20 B 60 B2
1
50
15
40 *
* *
10 30
20
5
10
0 0
H2Od IBU 200 mg/kg Pl 30 mg/kg Pl 50 mg/kg Pl 100 mg/kg H2Od IBU 200 mg/kg Pl 30 mg/kg Pl 50 mg/kg Pl 100 mg/kg
Grupos Grupos
Figura 2. A. Prueba del ácido acético. B1. Prueba de formalina: Fase 1, indicativa del dolor neurogénico. B2.
Prueba de la formalina: Fase 2, indicativa del dolor inflamatorio. Comparación entre los grupos controles agua
destilada (H2Od) e Ibuprofeno 200 mg/kg (IBU 200 mg/kg) y los grupos tratados con el extracto etanólico de
las hojas de Pereskia lychnidiflora (Pl) a concentraciones de 30, 50 y 100 mg/kg. Los datos se expresan como
el promedio + error estándar del promedio. Se consideró que la diferencia entre los grupos tratados y el grupo
control negativo es significativa (*) cuando el valor de p < 0,05 (ANOVA/ Tukey).
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Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2018;35(4):581-9. Guerra R et al.
valores de bilirrubina probablemente no son evidencias del Los resultados apuntan a la actividad analgésica del
daño de la función hepática. extracto etanólico de P. lychnidiflora, actividad biológica que
es apoyada por los resultados de la evaluación fitoquímica
Respecto de la evaluación de la actividad nociceptiva, los preliminar, donde se determinó la presencia de taninos,
resultados de la prueba del ácido acético demuestran el alcaloides y esteroles (terpenoides), familias químicas que
potencial analgésico de esta especie vegetal y concuerdan
han sido reportadas como responsables de la actividad
con la actividad analgésica reportada para otras especies
analgésica de este género (6,32).
de este género (6,27). Estos resultados indican además la
actividad antiinflamatoria del extracto etanólico de hojas
de P. lychnidiflora, en tanto que la prueba del ácido acético En conclusión, el estudio de toxicidad del presente
al dañar membranas celulares del peritoneo genera trabajo, demuestra que el extracto etanólico de Pereskia
la liberación de prostaglandinas y otros mediadores de la lychnidiflora no tiene efectos graves a la salud en los
inflamación (28), por lo que, la reducción de las contorsiones animales de experimentación y puede clasificarse como de
abdominales es indicativo de la reducción en la liberación uso seguro. En cuanto a las pruebas analgésicas, el extracto
de estos mediadores. Del mismo modo, los resultados de la evaluado tiene un efecto analgésico antiinflamatorio que
segunda fase de la prueba de la formalina, son indicadores podría estar condicionado por la presencia de alcaloides,
de un efecto analgésico contra un dolor de origen taninos y esteroles (terpenoides) presentes en esta especie
inflamatorio (29), en tanto que, en esta fase, la inyección vegetal; apoyando de esta manera su uso tradicional como
de formalina está asociada a la liberación nuevamente tratamiento alternativo para el dolor en El Salvador.
de mediadores inflamatorios incluyendo prostaglandinas,
histaminas, bradiquininas y serotonina (30). Contribuciones de los autores: RG, LJG, GT, NA, UGC, JPS,
JGM, MJN y MAM han participado en la concepción del artículo,
El extracto actúa en ambas fases durante la prueba de la la recolección de datos, su redacción y aprobación de la versión
formalina; aunque con mayor efectividad en la fase del dolor final. Además, JGM realizó el análisis estadístico, y MJN y MAM
central o inflamatorio, esto concuerda con otra investigación, obtuvieron el financiamiento.
en donde afirman que este tipo de analgésicos que actúan
central y periféricamente son activos en ambas fases de Fuentes de financiamiento: Autofinanciado.
la prueba de la formalina (31); pero, son más eficaces en la
segunda fase en la que en general dosis más bajas son Conflictos de interés: Los autores declaran no tener conflictos de
suficientes para causar el efecto antinociceptivo. interés con la publicación de este artículo.
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