Cuaderno de Practicas 2015-16
Cuaderno de Practicas 2015-16
Cuaderno de Practicas 2015-16
BIOLOGÍA I
GRADO EN CIENCIAS AMBIENTALES
UNED
CURSO 2015-16
NOMBRE:
APELLIDOS:
E-MAIL:
Prácticas de Biología I (Grado en Ciencias Ambientales) 2015-2016
PRÁCTICAS PRESENCIALES
ÁCIDOS NUCLEICOS
1.- Explique los fundamentos de la extracción de DNA, indicando la función que tiene cada componente del
tampón de
El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la
cromatina. Así, para extraerlo será necesario homogeneizar el tejido y romper las células para separar el núcleo, romper
también la envoltura nuclear para liberar su contenido, luego separar el ADN de las proteínas que lo protegen y, por
último, precipitarlo para extraerlo de la solución. Una vez realizado esto, el ADN aparecerá como un agregado de fibras
blanquecinas que se adhieren a la varilla de vidrio. Por último, se puede situar sobre un porta, teñirlo con un colorante
básico y observarlo al microscopio.
PARTE EXPERIMENTAL
1- HOMOGENEIZACIÓN DE LA MUESTRA
-Pesamos mediante una balanza 25gr de guisantes en un vaso de precipitados, y preparamos una solución de lisis
compuesta por:
-80ml de agua destilada (solvente).
-0,9gr de NaCl, estabilizante de la doble hélice de DNA.
-1ml de EDTA, agente cuya función es capturar los iones de Mg2+ que se encuentran en suspensión y así evitar que las
DNAsas degraden el DNA.
-1ml de una solución al 10% de SDS, que sustituimos por 1ml de detergente comercial a 9ml de agua.
-Lo agitamos todo y añadimos agua hasta los 100ml.
-Mezclamos los 25gr de guisantes con 50ml de la solución de lisis y lo batimos a máxima velocidad durante 5 segundos.
A continuación lo dividimos en cuatro fracciones de 5ml en tubos de ensayo, una de las muestras la seguiremos batiendo
unos 2 minutos más, será la muestra B. Seguidamente pondremos a incubar las muestra A, B y D durante 15 minutos en un
baño de agua a 55ºC agitándolas cada 5 minutos. Una vez pasado el tiempo de incubación enfriamos las muestras con hielo
picado durante 10 minutos para ralentizar la lisis.
La muestra C la ponemos a incubar a 100ºC durante 10 minutos, luego la dejamos a temperatura ambiente y a continuación
la enfriamos 10 minutos con hielo picado.
La finalidad de la lisis celular es romper la membrana celular donde esta contenido el DNA.
1
Cuaderno de prácticas
2- FILTRADO
Para realizar el filtrado dispondremos de una gasa con tres capas en un embudo, y se pasará la extracción, quedándose los
restos de los guisantes en la gasa y el extraído en el tubo de cristal.
El objetivo del filtrado es separar las partes no homogeneizadas de la extracción y obtener una solución acuosa donde se
encuentra el DNA.
Seguidamente cogemos la muestra D y añadimos 1ml de HCL, lo mezclamos bien y lo incubamos durante 15 minutos a
temperatura ambiente.
3-PRECIPITADO
RESULTADOS OBTENIDOS
A- Muestra control.
En este tubo se observa el DNA precipitado en forma de maraña muy visible, y en el fondo del tubo el resto del material.
B- Muestra fragmentación mecánica.
Esta muestra la hemos tenido 2 minutos más en la batidora. En este tubo se observa el DNA precipitado pero no en
forma de maraña visible. El DNA ha sufrido rotura de puentes de hidrogeno, por la acción mecánica de la batidora.
C-Muestra desnaturalizada por calor.
En esta muestra se han roto las hebras de DNA de modo longitudinal. A medida que pasa el tiempo, el DNA se re
naturaliza formando un ovillo.
D-Muestra con hidrólisis ácida.
En esta muestra no se observa el DNA precipitado, se han roto las hebras de DNA, de modo transversal en trozos muy
Pequeños. El ácido ha producido una rotura del nucleótido entre la pentosa y la base nitrogenada, por lo tanto se
produce una desnaturalización.
2.- La extracción de DNA es una técnica empleada también llevar a cabo técnicas moleculares como la clonación.
Explique los pasos necesarios que deben realizarse para clonar un fragmento de DNA en un plásmico. Defina
los siguientes términos: BAC, DNA helicasa, secuencia palindrómica, fago.
Consiste en la obtención de un gran número de fragmentos idénticos de ácido nucleico a partir de uno original. Los pasos
necesarios son:
1) Extracción y fragmentación específica del DNA del organismo que nos interesa.
Para ello se aísla primero el fragmento de ADN que se quiere clonar, para este aislamiento emplearemos las
endonucleasas de restricción, capaces de reconocer y cortar al ADN en zonas concretas que nos puedan interesar.
2) Unión de los fragmentos de DNA: fragmento del DNA que nos interesa + vector de transformación y replicación.
Se liga a un transportador o vector (plásmidos, fagos , etc..) mediante el empleo de varias enzimas entre ellas las ligasas.
2
Prácticas de Biología I (Grado en Ciencias Ambientales) 2015-2016
3
Cuaderno de prácticas
FOTOSÍNTESIS
PRACTICA
Materiales
Espinacas frescas
Agua destilada
Etanol
Acetona
Éter de petróleo
Papel Whatmman nº 1
Mortero
Mano de mortero
Pipetas Pasteur
Tubos de ensayo
Tapones de corcho
Vasos de precipitado
Placa petri
Embudos
Gasas
Microscopio óptico
Secador de pelo
Arena
Lavamos bien las espinacas y las cortamos en trozos, evitando las nerviaciones. Pesamos 5g de hojas y las colocamos en el
mortero junto con arena, que filtramos antes para que esté limpia de impurezas, a continuación añadimos 20ml de etanol y lo
maceramos hasta obtener una solución verde oscura.
Filtramos el extracto pasándolo a un matraz con un embudo y una cuádruple de gasas, para eliminar la arena y los restos de
hojas.
Realizaremos dos tipos de cromatografías, la de reparto en papel y la de absorción con una tiza blanca.
Cromatografía en papel
Colocamos en un tubo de ensayo 3ml de solvente, para el cual utilizaremos 9 partes de éter de petróleo y una parte de
acetona, lo tapamos y lo dejamos un rato para que la atmosfera se sature con el solvente.
Preparamos dos tiras de papel Whatmman, que adaptamos para ponerlo dentro del tubo de ensayo de manera que no toque
las paredes del tubo.
Pintamos con una pipeta una línea con el extracto de clorofila en las dos tiras del papel a dos centímetros de un extremo.
Secamos las tiras con un secador para eliminar la acetona. Repetimos el proceso de pintar la línea y secarla tres veces.
A continuación colocamos el papel con un clip enganchado a un tapón de corcho dentro del tubo de ensayo, de forma que el
extremo pintado quede en la parte inferior del tubo sin que la línea pintada toque el toque el solvente.
Cuando observamos que los pigmentos se han separado, sacamos el papel y lo secamos con un secador.
Se observan zonas coloreadas a distintas alturas, debido a la separación de las moléculas.
Cromatografía de adsorción
Colocamos el extracto en una placa Petri de cristal y ponemos una tiza sobre ella. Lo tapamos con un vaso para que en el
interior se mantenga la atmosfera saturada, lo dejamos durante 5 minutos.
Debido a que la tiza es porosa y los componentes de la tinta se disuelven en el etanol, éste los va separando hasta diferentes
alturas a medida que asciende y se va evaporando.
4
Prácticas de Biología I (Grado en Ciencias Ambientales) 2015-2016
La clorofila a y b son pigmentos que absorben la luz en las regiones azules y rojas del espectro visible y reflejan la luz verde, la
clorofila a tiene un color verde claro mientras que la clorofila b tiene un color verde oscuro. En cuanto a su estructura son muy
parecidas, constan de una larga cola de subunidades de isopreno que le conforman un carácter hidrófobo y una cabeza
compuesta por una estructura de anillo con un átomo de magnesio en medio. La diferencia entre ambas clorofilas es la cadena
R en la que la clorofila a, es un grupo metilo, mientras que la clorofila b, es un grupo aldehído.
Tanto la clorofila a como la b, están compuestas por una cola con carácter hidrofóbico, de forma que se encuentra incrustada
en la membrana tilacoidal de los cloroplastos mientras que la cabeza es el lugar donde se absorbe la luz (carácter hidrófilo)
La “clorofila b” tiene mayor peso molecular, por ello en la cromatografía se observa en primer lugar a la clorofila b, molécula de
mayor tamaño y con carácter polar, mientras que la clorofila a tiene un menor tamaño y es apolar, por lo que correrá más
distancia. Sin embargo, la banda localizada de la clorofila a tiene mayor intensidad, indicativo de que está en mayor proporción.
En cuanto al caroteno, es un pigmento carotinoide, que absorben la luz en las regiones azul y verde del espectro visible y refleja
luz amarilla – naranja.
3.- Relativo a la fotosíntesis, comente la posible razón de que existan distintos pigmentos en la planta.
la clorofila es la encargada de realizar la síntesis en las plantas, y en algunas arqueo bacterias como las algas, existe del tipo A y
B.
Los carotenos y xantofilas, son pigmentos extra que ayudan en la síntesis. Además las plantas o algas que los contienen, poseen
colores diferentes, como amarillo o rojo.
La función de los pigmentos clorofílicos, es la de captar las partículas de luz solar (fotones) y en combinación con los sustratos
de la fotosíntesis (agua) (fotólisis) liberan en la primera etapa (fotoquímica) oxígeno a la atmósfera. Esto ocurre en los
cloroplastos, que dentro de estos contienen en las membranas tilacoides las moléculas de clorofila a y b. Existen 3 tipos de
pigmentos: los carotenos, es un pigmento amarillo anaranjado que se encuentra en ciertas células vegetales y da su color a la
zanahoria. La clorofila, que se encuentra en los cloroplastos de cada célula. Es indispensable para que se lleve a cabo la
fotosíntesis. El otro pigmento se llama xantofilas, son sustancias cristalinas de color amarillo oscuro, que se encuentra
juntamente con la clorofila en los cloroplastos de las plantas.
5
Cuaderno de prácticas
Parte experimental
1.- Indique el resultado obtenido en cada parte de la práctica. El número de símbolos (+) indica mayor actividad, en
el caso de no observar actividad se indica con un símbolo (-).
REACCIÓN ENZIMÁTICA
Reacción=color (- , + ,
Tubo Extracto tubo A Catecol (gotas) Agua destilada (gotas)
++)
1 1 ml 0 1 ml +
2 0 1 ml 1 ml -
3 1 ml 1 ml 0 +++
4 250 l 1 ml 750 l ++
3- A continuación cogemos el tubo B y lo hervimos en un baño de agua durante 15 minutos, después añadiremos las
Gotas del sustrato de catecol según la tabla.
6
Prácticas de Biología I (Grado en Ciencias Ambientales) 2015-2016
-Mezclamos una solución de 0,1M de ácido cítrico y 0,2M de fosfato disódico para obtener el buffer que necesitamos para
la reacción.
REACCIÓN
2.- En la práctica se ha realizado un experimento de inhibición de la enzima ¿Qué tipo de inhibición realizamos
cuando utilizamos calor?, ¿y con feniltiourea?
La PTU, es un inhibidor de la enzima catecolasa, actúa atrapando los cationes de Cu 2+ que la enzima necesita para
funcionar. Este tipo de inhibición, se denomina inhibición competitiva.
Mientras que en la inhibición por calor, la enzima catecolasa, pierde su estructura (desnaturalización) y por lo tanto pierde
su función.
La inhibición por competición producida por la PTU es reversible, mientras que la inhibición por calor, es irreversible
3.- En los tubos 6, 7 y 8 se estudia el efecto del pH sobre la enzima. Explique el resultado obtenido razonando las
posibilidades por las que la enzima se comporta así.
La actividad enzimática de la catecolosa, tiene más eficiencia a un pH ácido (pH2.5) y por ello la reacción del catecol y el
extracto, facilitado por la catecolosa, produce más Benzoquinona.
A un pH neutro (pH7.1) la actividad enzimática se ve reducida ligeramente aunque la reacción sigue generando
Benzoquinona.
A un pH básico (pH9.2) la actividad enzimática está mermada, aunque se produce pequeñas cantidades de Benzoquinona.
7
Cuaderno de prácticas
4.- En la siguiente tabla se muestran los datos obtenidos al estudiar la actividad de dos isoformas de una enzima a
distintos pH. Realice la gráfica de cada una de ellas y explique las ventajas que ofrece a una célula tener dos
isoformas distintas de una misma enzima.
pH
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Isoforma 1 0.00 5.00 8.00 25.00 48.00 75.00 55.00 50.00 25.00 12.00 5.00
Isoforma 2 0.00 4.00 8.00 16.00 25.00 35.00 41.00 75.00 100.00 60.00 20.00
120
100
80
60
40
20
0
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
ISOFORMA 1 0 5 8 25 48 75 55 50 25 12 5
ISOFORMA 2 0 4 8 16 25 35 41 75 100 60 20
La ventaja que una célula tenga las dos isomorfas de la enzima, es que las reacciones en las que estén implicadas
sean más eficientes.
8
Prácticas de Biología I (Grado en Ciencias Ambientales) 2015-2016
CICLO CELULAR
1.- Estimación del índice mitótico y duración relativa de las fases del ciclo celular. Cuente el número de células en
las fotos que se suministran, indicando la fase en la que se encuentra cada una.
Interfase 52 80 41 38 211
Profase 1 1 4 6 12
Metafase 2 4 1 0 7
Anafase 0 1 0 0 1
Telofase 0 2 2 2 6
Total 55 88 48 46 237
a. Calcule el porcentaje de células en cada una de estas fases y, a partir de estos datos, obtenga el índice mitótico
(IM) de la población
d. Asumiendo que la duración total del ciclo en estas condiciones, a una temperatura ambiente de
aproximadamente 22º C, es decir el tiempo que pasa desde que una célula se forma por división de otra hasta que
ella misma se divide para dar dos nuevas células, es de 15 horas; estime la duración real en minutos de cada una
de estas fases.
9
Cuaderno de prácticas
10
Prácticas de Biología I (Grado en Ciencias Ambientales) 2015-2016
11
Cuaderno de prácticas
2.- Existen distintos productos que pueden afectar al ciclo celular y se vierten al medio. Para evaluar el efecto de
dos de ellos se han probado en raíces de una planta con un tratamiento de dos horas. El conteo de cuatro
muestras ha dado los siguientes resultados:
PRODUCTO 1
FASE Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4 Total
PRODUCTO 2
FASE Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4 Total
Telofase 35 54 98 75 262
Sabiendo que en esta planta cada fase del ciclo celular tiene la siguiente duración relativa:
Interfase 81%
Profase 9%
Metafase 3 %
Anafase 2.5 %
Telofase 4.5 %
Indique el efecto que puede estar ejerciendo cada uno de los productos razonando la respuesta.
El efecto producido por la sustancia en las raíces aumenta el número de células en división y por lo tanto disminuye el número
de células en Interfase.
Para llegar a esta conclusión, lo primero que hice fue calcular el % de células que hay en cada fase:
PRODUCTO 1
12
Prácticas de Biología I (Grado en Ciencias Ambientales) 2015-2016
PRODUCTO 2
Al comparar los datos aportados por el recuento de células en las distintas fases, en comparación con la duración relativa de
cada fase del ciclo celular de las raíces, se observa que hay una disminución de células en Interfase y un aumento de células en
división.
De hecho el IM de las raíces tratadas es de 28,35% y 22,43 respectivamente mientras que el IM de las raíces sin tratar es de
19%, esto supone un incremento del índice mitótico en un 9.35% en el producto 1 y un 3,43 en el producto 2 respecto de las
raíces no tratadas.
Por lo tanto, la sustancia con el que se han tratado a las raíces, aumento el número de células en división.
El objetivo de esta práctica es analizar el ciclo de de vida de las células diferenciadas y meristemáticas, no diferenciadas, que se
encuentran en las etapas del ciclo celular caracterizando las diferentes fases de la mitosis. Utilizaremos los meristemos
terminales de las raíces de bulbos de una cebolla.
PARTE EXPERIMENTAL
Materiales
Bulbos de cebolla
Microscopio óptico
Orceína aceto-clorhídrica
Etanol
Ácido acético
Cafeína
Vasos de precipitados
Porta objetos
Cubre objetos
Vidrio de reloj
Pipeta Pasteur
Pinzas
Bisturí
Mechero de alcohol
1- Cortamos una raíz de 1cm de la parte apical de una cebolla, que ha sido preparada con anterioridad en un vaso de
precipitados con agua, para que germinen las raíces.
2- Lo pasamos a un vidrio de reloj, con una pipeta Pasteur añadimos orceína acético-clorhídrica.
3- Cogemos el vidrio de reloj por los bordes con unas pinzas y lo calentamos con el mechero de alcohol, para evitar que llegue
a ebullición, lo movemos poco a poco solo queremos que emita los vapores. El tiempo de duración es de 15 minutos, que
hemos estimado para la tinción. Luego lo dejamos enfriar.
4- A continuación colocamos la raíz en un porta y cortamos con un bisturí la parte apical unos 3mm (el resto se desecha).
Le añadimos una gota de ácido acético y le colocamos el cubre, con cuidado de no dejar burbujas.
5- Por ultimo presionamos el cubre con el dedo para aplastar el material y que se extienda bien, hasta formar una monocapa y
poderlo apreciar en el microscopio.
13
Cuaderno de prácticas
RESULTADO
14
Prácticas de Biología I (Grado en Ciencias Ambientales) 2015-2016
a) Calcular el porcentaje de células en cada una de estas fases y a partir de estos datos obtendremos el índice mitótico (IM) de
la población.
b. Estimar la duración relativa de la interfase y de la mitosis ¿Cuál es la fase más larga o que más tiempo dura de la
mitosis?
-Teniendo en cuenta que se verán en mayor número las fases que más tiempo duran, la fase que más tiempo durara será la
Interfase con un 89,28% de las células en esta etapa. Y la mitosis con un 10,72% de porcentaje del nº total de células.
La fase más larga de la mitosis es la profase con un 9,48%.
c. ¿Cuál es la fase más corta de la mitosis?
La fase más corta de la mitosis es la anafase con un 0,21% de células encontradas en esta etapa de la mitosis
d. Asumiendo que la duración total del ciclo en estas condiciones, a una temperatura ambiente de
aproximadamente 22º C, es decir el tiempo que pasa desde que una célula se forma por división de otra hasta que
ella misma se divide para dar dos nuevas células, es de 15 horas; estime la duración real en minutos de cada una
de estas fases.
15