Informe Laboratorio

Taller de Investigación
Plegamiento de
Proteínas
Asignatura: Laboratorio de Biología Celular y Molecular.

Docente: Patricia Navarrete
Fecha: de Junio 2024
Grupo:
Nombre: Martina Gangas Bravo
Sede Temuco, Junio 2024

Introducción
En el campo de la biología molecular, es esencial conocer el manejo de técnicas y equipos,

los cuales nos permiten manipular y analizar material genético a modo de investigación o
de clarificar un diagnóstico, permitiendo conocer y comprender de manera profunda los
procesos biológicos a nivel molecular. Dentro de las técnicas fundamentales se encuentran
la Reacción de Polimerasa en Cadena (PCR) y la Electroforesis.
La PCR se utiliza para amplificar secuencias específicas del ADN, basada en la replicación
enzimática, lo que nos permite obtener múltiples copias de un fragmento de ADN a partir
de una pequeña cantidad de muestra. Es una técnica indispensable en la investigación
genética y diagnóstico debido a su alta sensibilidad y especificidad, pudiendo usarse, por
ejemplo, para detección del Coronavirus, Mycoplasma Pneumoniae, Meningitis, VIH, etc.
En cuanto a la Electroforesis, es una técnica que permite la separación y análisis de

fragmentos de ADN, mediante la carga del fragmento en gel de agarosa, provocando la
migración celular en función de su tamaño, los cuales se visualizan utilizando tintes
específicos bajo luz UV, permitiendo la evaluación de la integridad y el tamaño del ADN.
En la biología molecular, uno de los principales desafíos es la obtención y análisis preciso y

reproducible del material genético, por lo cual, el objetivo general de esta investigación es:
Desarrollar habilidades teóricas y prácticas en técnicas básicas de biología molecular,
incluyendo la Reacción de Polimerasa en Cadena (PCR) y la Electroforesis, con el fin de
obtener, analizar y caracterizar material genético de para aplicaciones en investigación
científica y diagnósticos moleculares.
Objetivos Específicos
- Reconocer y manejar adecuadamente los equipos de biología molecular para

asegurar resultados precisos y reproducibles
- Interpretar los resultados obtenidos de las técnicas de biología molecular
- Comprender principios teóricos y aplicación en investigación y diagnóstico
molecular
Material y Método
1. Equipos y herramientas o Matraz Erlenmeyer (100

o Micropipetas y puntas de mL).
micropipeta estériles.
2. Reactivos:
o Tubos de microcentrífuga
o Agarosa en polvo.
(1.5 mL y 2.0 mL).
o Tampón TAE 1X (Tris-
o Centrífuga de
Acetato-EDTA).
microcentrífuga.
o Gel Red (1000X).
o Vórtex.
o Tampón de carga 10X.
o Termociclador.
o Marcador de peso
o Espectrofotómetro.
molecular de ADN (100 bp
o Cámara de electroforesis y
ladder).
fuente de poder.
o Tampón de lisis F.
o Transiluminador UV.
o Proteinasa K.
o Peines y bandejas para gel
o Tampón de unión B.
de agarosa.
o Isopropanol.
o Placa calefactora o baño
o Solución de lavado A.
de agua termorregulado.
o Tampón de elución B.
o Buffer TE (Tris-EDTA)
3. Muestras biológicas: Saliva fresca recolectada en tubos de recolección
esterilizados.
Se realiza la extracción de ADN de una muestra biológica utilizando un kit de aislamiento

de ADN de saliva, para lo cual, idealmente se debe realizar una buena higiene bucal para
eliminar partículas que puedan interferir con la síntesis del ADN. Posteriormente, escupe
saliva en un tubo esterilizado. Se transfieren 250 µL de saliva a un microtubo y se añaden
250 µL de tampón de lisis F, mezclando con vórtex. Se agregan 20 µL de Proteinasa K, se
mezcla y se incuba a 55°C por 10 minutos. Luego, se añaden 200 µL de tampón de unión B,
se mezcla y se incuba a 55°C por 5 minutos. Finalmente, se añaden 720 µL de isopropanol,
se mezcla para precipitar el ADN y facilitar su aislamiento.
Se ensambla una columna con un tubo de recolección y se aplica el lisado, centrifugando a

6000 rpm. Se repite hasta pasar todo el lisado. Luego, se lava el ADN con 500 µL de
solución de lavado A y se centrifuga a 8000 rpm, repitiendo el lavado. Se seca la columna
centrifugando a máxima velocidad por 2 minutos. Finalmente, se diluye el ADN con 100 µL
de tampón B, incubando a 55°C por 5 minutos y centrifugando para recoger el ADN.
La determinación de pureza y concentración del ADN extraído es un paso importante

después de la extracción de ADN para asegurar que el ADN es adecuado y permitirá un
estudio con resultados certeros
Se transfieren 5 µL de cada muestra de ADN a tubos rotulados y se agregan 995 µL de

buffer TE, mezclando con vórtex. Se mide la absorbancia a 260 y 280 nm en una cubeta de
espectrofotometría, ajustando a cero con buffer TE. La absorbancia a 260 nm se usa para
calcular la concentración de ADN, y la a 280 nm para evaluar la pureza del ADN. La relación
A260/A280 indica la pureza del ADN.
Para la electroforesis, es importante preparar la cámara de electroforesis según las

instrucciones, asegurándose que los electrodos estén bien colocados y que la cámara esté
lista para recibir el gel.
Resultados
Estos procedimientos extracción de ADN, determinación de pureza y concentración, y

análisis mediante electroforesis permiten obtener datos precisos y reproducibles, por lo
cual su manipulación debe ser realizada de manera estricta conforme a lo indicado, dado
que cualquier alteración, en cualquiera de las etapas puede sugerir una falla importante
en el resultado.
El ADN se aisló con éxito utilizando la columna de purificación. La mayoría de los

contaminantes fueron eliminados durante los pasos de lavado. El proceso de centrifugado
y elusión permitió recuperar ADN de alta pureza, obteniendo una muestra óptima para
analizar.
La electroforesis permitió separar y visualizar fragmentos de ADN de diferentes tamaños,

lo cual es útil para diversas aplicaciones en biología molecular, como la verificación de
productos de PCR.
Dentro de los resultados obtenidos, los hitos que mas destacan fue la preparación de la
agarosa, que al disolverse y luego enfriarse formara una matriz, en la cual al adicionar
tinciones va a permitir la visualización de ADN bajo luz UV, las cuales según la carga
estándar, van a ubicarse en las bandas según el tamaño y peso molecular.
El ADN diluido mostró concentraciones adecuadas según la absorbancia medida a 260 nm.
La relación A260/A280 indicó una pureza aceptable de las muestras, ya que, una relación
de ~1.8 indica que el ADN es puro sugiriendo poca contaminación proteica, confirmando
una muestra óptima para la el procesamiento, sin interferencias significativas que puedan
alterar el resultado.
Discusión
Los resultados muestran la importancia de cada paso en el análisis de ADN, donde cada
etapa requiere una atención meticulosa para la obtención de datos precisos y
reproducibles, y, cualquier variación en estos pasos puede afectar significativamente los
resultados finales.
La extracción de ADN de saliva mediante el Saliva DNA Isolation Kit demostró ser un
método eficiente para obtener ADN de alta calidad. La pureza del ADN, indicada por la
relación A260/A280, estuvo cerca del valor óptimo de 1.8, lo que sugiere que los
contaminantes proteicos y fenólicos fueron eliminados de manera efectiva.
La espectrofotometría se utilizó para evaluar la pureza y concentración del ADN extraído,

teniendo un papel crucial, ya que la presencia de contaminantes puede afectar la
eficiencia de la PCR y otros procedimientos, debiendo realizar ajustes en el protocolo de
extracción.
La PCR permitió amplificar las secuencias ADN de manera eficiente. Al realizar este
procedimiento los parámetros deben ser ajustados para cada conjunto de primers y
plantilla de ADN, dado que, puede afectarse por variaciones en la concentración de
reactivos
La Electroforesis permitió visualizar los productos de PCR. Las bandas obtenidas fueron
nítidas y bien definidas, indicando que hubo una correcta separación de los fragmentos de
ADN según su tamaño, donde el uso de un marcador de peso molecular fue de gran
utilidad para comparar y determinar el tamaño de los fragmentos de ADN amplificados.
En conclusión, los métodos y técnicas utilizados en este estudio demostraron ser efectivos
para la extracción, purificación, amplificación y análisis de ADN de saliva.
Conclusión
Las técnicas realizadas demostraron la eficacia de los protocolos de extracción,
purificación, amplificación y análisis de ADN. Estos resultados subrayan la importancia de
seguir rigurosamente los protocolos y mantener la calibración adecuada de los equipos, lo
que proporciona eficiencia y eficacia de las técnicas moleculares para investigación
genética y diagnósticos, debido a su alta precisión y sensibilidad.
Referencias Bibliográfias
- Peña-Castro, J., Gregorio-Ramírez, O. & Barrera-Figueroa, B. (2013). Los métodos

experimentales que permiten el estudio de las macromoléculas de la vida:
historia, fundamentos y perspectivas. Educación química, 24(2), 237-246.
Disponible en: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-
893X2013000200009&lng=es&tlng=es
- Documentos Técnicos para el Laboratorio Clínico (2019) Recomendaciones Para
Lectura E Interpretación De Electroforesis E Inmunofijación De Proteínas.
Instituto de Salud Pública. Disponible en: https://www.ispch.cl/sites/default/files/
Recomendaciones%20para%20lectura%20e%20interpretaci%C3%B3n%20de%20EP
%20e%20inmunofijaci%C3%B3n%20de%20prote%C3%ADnas%20%28suero%20y
%20orina%29.pdf
- Documentos Técnicos para el Laboratorio Clínico (2019) Protocolos de Laboratorio
PCR. Instituto de Salud Pública. Disponible en: https://www.ispch.gob.cl/isp-covid-
19/protocolos-de-laboratorio-pcr/
- National Human Genome Research Institute (2024) Reacción de Polimerasa en
Cadena (PCR). Glosario de términos genómicos y genéticos. Disponible en:
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Reaccion-en-cadena-de-la-
polimerasa
- National Human Genome Research Institute (2024) Electroforesis. Glosario de
términos genómicos y genéticos. Disponible en:
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Electroforesis
- Angarita, M., Torres, M. & Díaz, A. (2017). Técnicas de Biología Molecular en el
desarrollo de la investigación. Revista Habanera de Ciencias Médicas, 16(5), 796-
807. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1729-
519X2017000500012&lng=es&tlng=es.
- Seelenfreund D. (2020) Conoce qué es el examen de PCR, y qué dificultades
implica su realización. Universidad de Chile. Disponible en:
https://www.uchile.cl/noticias/165397/conoce-que-es-el-examen-de-pcr-y-que-
dificultades-implica

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