UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS

FACULTAD DE CIENCIAS PURAS Y NATURALES

CARRERA DE CIENCIAS QUÍMICAS

TRABAJO PARA OPTAR AL GRADO DE LICENCIADA EN CIENCIAS QUÍMICAS

OPTIMIZACIÓN DEL MÉTODO WALKLEY Y BLACK

PARA LA DETERMINACIÓN DE MATERIA ORGÁNICA
EMPLEANDO MATERIAL DE REFERENCIA INTERNO
(MRI)
POR: MARIZOL CHOQUE MARTINEZ
TUTOR: RIGOBERTO CHOQUE ASPIAZU PhD.

LA PAZ – BOLIVIA

Enero, 2024
 DEDICATORIA

Dedico el presente proyecto :

A mi querida madre, Maritza Martinez por brindarme su infinito amor incondicional,

principios, valores, fortaleza, por todo el apoyo y comprensión por darme la

oportunidad de estudiar y hacer realidad mis metas trazadas por no dejar que me rinda.

A mi hermano Cristian Danyr Choque Martinez por ser mi compañía, por

aconsejarme, y darme un ejemplo de perseverancia y paciencia por comprenderme e

impulsarme a seguir adelante.

¡Con mucho cariño!

Marizol Choque Martinez

2
 AGRADECIMIENTOS

A nuestro supremo creador por darme el regalo de la vida.

A la Universidad Mayor de San Andrés, Facultad de Ciencias Puras y Naturales a la

carrera de Ciencias Químicas por brindarme los conocimientos forjados para mi vida
profesional.

Al Laboratorio de Química Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de

la Tecnología Nuclear – ABEN.

Doy gracias mi madre Maritza Martinez Quispe y mi hermano Cristian Danyr

Choque Martinez, sin su apoyo no podría haber alcanzado esta meta.

Agradezco enormemente a mi Tutor Rigoberto Choque Aspiazu PhD., quien siempre

hizo un espacio por guiarme en el desarrollo del presente Proyecto, gracias por su
conocimiento, paciencia y sin duda su motivación fue fundamental para la culminación
del presente trabajo.

Agradecer a la Lic. Rocío Choque otorgarme los medios necesarios para cumplir los
objetivos y metas de este trabajo, por colaborarme en el análisis fisicoquímico de las
muestras por todo el conocimiento transmitido.

Quiero agradecer a mi tribunal Sulema Valdés Castro PhD. quien hizo un espacio
para poder revisar el presente trabajo, así mismo por el conocimiento brindado para la
culminación del trabajo.

Agradezco al docente de la materia Luis Morales Escobar MSc. Por tomarse el

tiempo en impartir la materia guiándome en el trayecto.

3
 INDICE

RESUMEN ......................................................................................................... 10

CAPITULO I ..................................................................................................... 11

1. INTRODUCCIÓN ............................................................................................ 11

1.1. Antecedentes ............................................................................................ 13

1.2. Planteamiento del problema ..................................................................... 15

1.3. Objetivos .................................................................................................. 16

1.3.1. Objetivo general ................................................................................... 16

1.3.2. Objetivos específicos ........................................................................... 16

1.4. Justificación.............................................................................................. 17

CAPITULO II .................................................................................................... 19

2. MARCO TEORICO .......................................................................................... 19

2.1. SUELO ..................................................................................................... 19

Importancia del suelo ...................................................................................... 20

2.2. PARAMETROS FISICOQUIMICOS ..................................................... 21

Textura............................................................................................................. 21

Estructura ........................................................................................................ 21

Color ................................................................................................................ 22

Profundidad efectiva ....................................................................................... 22

Densidad aparente .......................................................................................... 22

2.2.1. pH del suelo ......................................................................................... 22

4
 2.2.2. Conductividad eléctrica ........................................................................ 25

2.2.3. Potasio .................................................................................................. 27

2.2.4. Fosforo del suelo .................................................................................. 27

2.2.5. Materia Orgánica del suelo .................................................................. 29

2.3. EL MUESTREO ...................................................................................... 30

2.4. PREPARACION DE LA MUESTRA ..................................................... 31

2.5. METODO DE WALKLEY Y BLACK ................................................... 34

Principio del método: ...................................................................................... 34

Reacciones involucradas (Estado de oxidación inicial de C) .......................... 34

Algunos puntos críticos del procedimiento: .................................................... 35

Diagramas de flujo .......................................................................................... 36

Colores de suelo .............................................................................................. 39

2.6. MATERIALES DE REFERENCIA CERTIFICADOS ........................... 42

2.7. MATERIALES DE REFERENCIA INTERNOS .................................... 43

2.8. TRATAMIENTO ESTADÍSTICO .......................................................... 44

2.8.1. Desviación estándar ............................................................................. 44

2.8.2. Coeficiente de variación ....................................................................... 45

2.8.3. Límite de confianza .............................................................................. 45

2.8.4. Repetibilidad y reproducibilidad de las mediciones ............................ 46

CAPITULO III .................................................................................................. 48

3. UBICACIÓN GEOGRAFICA Y PUNTO DE MUESTREO ............................. 48

3.1. Ubicación y acceso al área de estudio ...................................................... 48

5
 3.1.1. Centro de Investigaciones y Aplicaciones Nucleares .......................... 48

3.1.2. Uso de suelos ....................................................................................... 48

3.1.2.1. Actividad agropecuaria .................................................................. 48

3.1.3. Suelos del Altiplano y su característica ............................................... 49

3.2. Material de Referencia Interno (MRI) ..................................................... 51

3.2.1. Registro .................................................................................................... 53

3.2.2. Pre tratamiento de muestras ..................................................................... 53

3.3. Determinación de homogeneidad ............................................................. 53

3.3.1. Número de unidades y submuestras a medir ........................................ 54

3.4. Determinación de estabilidad ................................................................... 54

CAPITULO IV................................................................................................... 56

4. METODOLOGIA ............................................................................................. 56

4.1. Optimización del método Walkley y Black para la determinación de

Materia Orgánica ...................................................................................................... 56

4.2. Análisis de los parámetros fisicoquímicos del MRI ................................ 58

4.2.1. pH y conductividad eléctrica (CE) en agua destilada ......................... 58

4.2.2. Determinación de fósforo ..................................................................... 59

4.2.3. Determinación de potasio (K) .............................................................. 61

4.3. Determinación de Homogeneidad ........................................................... 62

4.4. Determinación de Estabilidad .................................................................. 62

CAPITULO V .................................................................................................... 63

6
 5. RESULTADOS Y DISCUSIONES .................................................................... 63

5.1. Homogeneidad y reproducibilidad de los parámetros fisicoquímicos de

suelos …………………………………………………………………………………………………………………63

5.1.1. Parámetros fisicoquímico ..................................................................... 63

OPTIMIZACION DEL METODO WALKLEY Y BLACK ...................... 63

pH y conductividad eléctrica ....................................................................... 68

Determinación de fósforo ............................................................................ 69

Determinación de potasio ............................................................................ 70

5.2. Evaluación de los parámetros del material de referencia interno (MRI) 71

5.2.1. Homogeneidad ................................................................................. 71

5.2.2. Estabilidad ........................................................................................ 72

CAPITULO VI................................................................................................... 76

6. CONCLUSIONES ............................................................................................ 76

7. BIBLIOGRAFIA ............................................................................................... 78

8. ANEXOS ........................................................................................................... 82

7
 INDICE DE FIGURAS

Figura 1. Variación en la disponibilidad de nutrientes y poblaciones de hongos y

bacterias en función del pH .............................................................................................. 24

Figura 2. Procedimiento del método Walkley y Black empleado en Laboratorio de

Química Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la Tecnología Nuclear

– ABEN ............................................................................................................................ 37

Figura 3. Procedimiento de la optimización del método Walkley y Black ................ 38

Figura 4. Distintos colores de suelos que indican mayor o menor presencia de materia

orgánica, hierro y limo .................................................................................................... 39

Figura 5. CIAN – Laboratorio de Química Analítica y Ambiental – ABEN (Fuente:

propia) .............................................................................................................................. 48

Figura 6. Mapa del altiplano de Bolivia (Fuente: Fernández M 2006) ...................... 50

Figura 7. Mapa Provincia Ingavi – Viacha ............................................................... 51

Figura 8. IBTEN CIAN– ABEN (Fuente: Google Earth, noviembre 2023) .............. 52

Figura 9. Localización del punto de muestreo Cian, IBTEN (Fuente: Google Earth,

noviembre 2023) .............................................................................................................. 52

Figura 10. Grafica de materia orgánica con titulante sal de Mohr ............................. 73

Figura 11. Grafica de materia orgánica con titulante Sulfato Ferroso ....................... 73

Figura 12. Grafica de materia orgánica con titulante Sulfato Ferroso y reducción de

volumen de H2SO4 .......................................................................................................... 74

Figura 13. Grafica de la estabilidad de Materia Orgánica .......................................... 74

Figura 14. Gráfico resumen final ............................................................................... 75

8
 INDICE DE TABLAS

Tabla 1. Tipo de suelos según el pH neutralidad y la alcalinidad .............................. 25

Tabla 2. Contenido de materia orgánica método Walkley y Black ............................ 30

Tabla 3. Cantidad de muestra aproximada de suelo a ser pesada (comunicación

personal) ........................................................................................................................... 42

Tabla 4. Concentración de estándares de PO4−3 ......................................................... 60

Tabla 5. Resultado de la determinación de materia orgánica (MO) ........................... 63

Tabla 6. Resultados del análisis estadístico ................................................................ 64

Tabla 7. Análisis de varianza de un factor ................................................................. 65

Tabla 8. Valores de varianza ...................................................................................... 65

Tabla 9. Valores de la media optenida ....................................................................... 67

Tabla 10. Resultado de pH y CE de CIAN, Viacha ................................................... 68

Tabla 11. Resultado de pH y CE de CIAN, Viacha ................................................... 68

Tabla 12. Resultado del determinación de fosforo (Olsen) en la provincia Ingavi-

Viacha .............................................................................................................................. 69

Tabla 13. Resultado del determinación de fosforo valor medido valor asignado ...... 69

Tabla 14. Resultado de la determinación de potasio (K) en la provincia de ingavi-

Viacha .............................................................................................................................. 70

Tabla 15. Resultado de la determinación de potasio (K) valor asignado valor medido

.......................................................................................................................................... 71

Tabla 16. Valores promedios, desviación estándar y coeficiente de variación del

análisis de material de referencia interno. ....................................................................... 72

9
 RESUMEN
El uso de materiales de referencia certificados es una práctica necesaria en los
laboratorios analíticos, a menudo estos materiales son costosos o no están disponibles, y
estos problemas llevaron a los laboratorios a desarrollar materiales de referencia internos
(MRI). Esto se aplica a los materiales de referencia de la matriz del suelo, ya que su
composición química depende del origen de la muestra.

El objetivo del presente trabajo es optimizar el método Walkley y Black para la

determinación de materia orgánica empleando Material de Referencia Interno las
modificaciones realizadas al método son el cambio de titulante de sulfato ferroso
amoniacal a sulfato ferroso heptahidratado así como la reducción de H2SO4 lográndose de
esta manera reducir costos y cantidad de reactivos empleados con resultados adecuados
para el análisis de Materia Orgánica (tabla 5: resultados de la determinación de MO).

La caracterización del suelo empleado fue realizada empleando las técnicas de:
volumetría, potenciometría, conductimetría, espectrofotometría de absorción atómica a la
muestra de suelo (MRI), mismos que se realizaron en el Laboratorio de Química Analítica
y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la Tecnología Nuclear – ABEN y se
determinó parámetros de eficiencia mediante contrastes estadísticos en donde se
verificando la homogeneidad por la repetibilidad de los resultados para cada uno de los
parámetros químicos considerados enfatizando como prioridad Materia Orgánica. Durante
la evaluación de la homogeneidad de la optimización del método los coeficientes de
variación (CV) presentan valores menores al 7% estos análisis tienen una muy buena
precisión, además de presentar una estabilidad adecuada con el tiempo, concluyendo de
esta manera que la optimización del método es adecuada, aceptable y que se puede
emplear como un método para determinar la cantidad de materia orgánica en suelos
reduciendo de esta manera la cantidad de reactivos empleados, por ende, la disminución
del costo que estas representan, así como los impactos ambientales que ocasionan los
residuos que se generan.

Palabras clave: Material referencia interno, materia orgánica, optimización,

homogeneidad, estabilidad

10
 CAPITULO I

1. INTRODUCCIÓN
El suelo es la capa de materiales minerales y orgánicos que cubre la superficie terrestre
y en la cual las plantas se desarrollan y toman los alimentos necesarios. Está formado por
sustancias en estado sólido, líquido y gaseoso. La parte sólida es en su mayor parte
mineral, formada por los residuos de la descomposición de la roca madre. Pero comprende
siempre una fracción orgánica que es de enorme importancia y esencial para la
productividad del suelo. Esa fracción orgánica está constituida de plantas y animales vivos
o muertos, así como de sus productos. (Docampo R)

El carbono está presente en el suelo de diferentes formas, pero la más importante es la

orgánica, considerada como un indicador de calidad de suelo debido a su efecto benéfico
sobre las propiedades físicas, químicas y biológicas del suelo que son importante para el
desarrollo de la vida. (Alemán I., Guido F., 2016)

Para determinar la materia orgánica en suelos pueden emplearse métodos volumétricos

gravimétricos y colorimétricos. Entre los métodos más sencillos están los que consume un
oxidante que actúa sobre el carbono.

La determinación de la materia orgánica en suelos es un procedimiento que se realiza

en forma rutinaria en muchos laboratorios del mundo, porque la materia orgánica (MO) y
otras propiedades físicas y químicas del suelo establecen la fertilidad del mismo. Aunque
la evaluación de la MO fue, y es, un tema muy interesante, todavía quedan varias
preguntas relacionadas con la determinación de este parámetro.

La determinación del contenido de carbono orgánico se basa en la estimación de la

capacidad de reducción de materia orgánica del suelo. Uno de los métodos más empleados
es el método Walkley-Black, además de la calibración previa empleando el método
estándar, este método presenta una o más de las siguientes desventajas analíticas:

1) la oxidación incompleta y variable del carbono orgánico debido a las bajas e

incontroladas condiciones de digestión, depende completamente de la reacción
exotérmica del sistema H2SO4-H2O y por lo tanto de la velocidad de adición de ácido.
11
 2) Breve tiempo de reacción.

3) Evaluación visual de los puntos estequiométricos gracias a indicadores redox

(difenilamina, o-fenantrolina, ion férrico, y otros).

4) Incertidumbre al determinar el cambio de color;

5) Inestabilidad del titulante (Fe2+) frente a la oxidación por la luz y el aire, por lo que
la valoración diaria de este analito lleva mucho tiempo; además de

6) la cantidad de reactivos empleados es elevada

7) el alto costo de los reactivos empleados (Walkley y Black, 1934; León y Aguilar,
1987; Houba et al., 1989)

En la mayoría de los laboratorios de análisis de suelos se emplean materiales de

referencia interno debido al bajo costo del mismo, llegando a estandarizar métodos de
ensayo para mejorar la precisión y exactitud, sin embargo, existen parámetros que al
realizar un análisis de normalización de datos no cumplen, lo que no permite evaluar todos
los parámetros considerados. En cuanto a Materia Orgánica existen una serie de
modificaciones al método establecidas en los diferentes laboratorios en este sentido, en el
presente trabajo, se abordan estos problemas (específicamente costos y cantidad de
reactivos) con la finalidad de optimizar el método de Walkley y Black para la
determinación de materia orgánica en suelos. Por otro lado, se emplea material de
referencia interno MRI, para obtener un método razonablemente rápido, de alta precisión,
bajo costo y con menor cantidad de ácido empleado, evitando de alguna manera una
disminución de la contaminación ambiental. Es decir, con la optimización del método se
pretende eliminar las dificultades experimentales e interferencias más comunes detectadas
en la determinación de materia orgánica empleado este método.

En este sentido, en el Laboratorio de Química Analítica y Ambiental de la Dirección

de Aplicaciones de la Tecnología Nuclear – ABEN pretende realizar una Optimización
del método Walkley y Black buscando reducir costos y cantidad de reactivos empleados
para obtener resultados apropiados para el análisis de Materia Orgánica empleando un
Material de Referencia Interno que cumpla con las características de homogeneidad y
estabilidad.
12
 Para realizar este procedimiento primero se realiza una evaluación del MRI empleado
para determinar los parámetros que se analizan, la preparación de la muestra se realiza
siguiendo el método establecido en laboratorio; el análisis de los parámetros considerados
como ser pH, Conductividad Eléctrica, Potasio, Fosforo asimilable se realizan de acuerdo
a la metodología establecida en laboratorio excepto de Materia Orgánica donde los de
reactivos empleados sufren una variación y empleando los resultados obtenidos se estima
la exactitud, la incertidumbre y el límite de confianza para este parámetro en el MRI;
además, al igual que se evalúa la estabilidad durante los tres meses que se realizó el
análisis.

Finalizadas las pruebas de optimización del Método Walkley y Black se verifica que el
Laboratorio de Química Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la
Tecnología Nuclear – ABEN cuenta con un MRI óptimo para ser empleado la
determinación de Materia Orgánica y de esta manera tener con un método adecuado y más
económico respecto al costo y cantidad de los reactivos.

1.1. Antecedentes
En 1916, Ames y Gaither demostraron que el carbono orgánico podía cuantificarse por
oxidación con mezcla sulfocrómico.

Sobre esta base, Shollenberger, en 1926, desarrolla una técnica rápida adaptada al
análisis rutinario donde aplica calefacción externa a los tubos de reacción, a una
temperatura de 175°C, e incorpora al método la valoración del C a través de la titulación
del exceso de Cr6+ con una sal ferrosa.

En 1930, Degtjareff, utiliza peróxido de hidrógeno previo al agregado de la mezcla

sulfocrómica, afirmando que se produce una mejora en el nivel de oxidación del CO.
Cuatro años más tarde Allan Walkley y Amstrong Black demuestran el error de esa
conclusión y desestiman el procedimiento. Sin embargo, rescatan el hecho de que la
disolución del ácido sulfúrico, en la solución de peróxido, generaba suficiente calor como
para lograr un nivel de oxidación aceptable del CO.

En 1947, Walkley, publica un análisis crítico del método, basado en la amplia

aceptación que había tenido, defendiendo la estabilidad del ensayo cuando se respetan las

13
condiciones del procedimiento y reconociendo la necesidad de usar un factor de
recuperación para estimar el CO.

En el año 2005, el equipo de trabajo: Johnbrynner García Galvis, María Inés Ballesteros
González, de la Revista Colombia de Química trabajaron en: “Evaluación De Parámetros
De Calidad Para La Determinación De Carbono Orgánico En Suelos”. En el estudio de la
cuantificación de carbono orgánico en suelos por el método Walkley-Black se compararon
dos técnicas de análisis (colorimetría y volumetría) con el fin de evaluar los parámetros
de calidad y así indicar la técnica más conveniente para implementarla en el análisis de
suelos. El método colorimétrico presentó menores costos y número de reactivos por
análisis, a la vez que ofreció la mejor repetibilidad. (Alemán I., Guido F., 2016)

El empleo de materiales de referencia certificados (MRCs) en los laboratorios de

análisis de suelos es fundamental para garantizar la calidad de los resultados analíticos.
Los MRCs con parámetros de P, K, Ca y Mg para el extractante Olsen Modificado
(ampliamente utilizado en Ecuador) tienden a ser costoso debido a la gran cantidad de
matrices y uso limitado. Debido a esta dificultad, el laboratorio prepara su propio
materiales de referencia internos (MRI) para matrices de suelos ya que su
composición química depende del lugar de origen de la muestra y caracteriza el contenido
de elementos químicos del suelo disponibles para las plantas en el suelo con base en
diferentes métodos de extracción de acuerdo al país o región (Aucatoma B., 2017)

En el trabajo realizado sobre la optimización de la oxidación del cromo del carbono

orgánico en el suelo (Aguirre G.et. al. 2003), el objetivo de este estudio fue optimizar el
análisis químico de carbono orgánico del suelo, eliminar la interferencia de la oxidación
de cromo húmedo y reducir lar fuentes de error encontradas en las rutinas habituales de
laboratorio, se analizaron las condiciones experimentales para la división del cromo, la
determinación de humedad, sin perturbaciones y eficiente del carbono orgánico en el
suelo. También se determinaron factores como oxidantes, acidez, tiempo de digestión,
métodos de digestión y complejación de metales para prevenir la interferencia del cloruro.
Este método es aplicable a muestras con contenidos de carbono conocidos (sacarosa,
ftalato ácido de potasio, oxalato de sodio) y diversos oxidantes [permanganato de potasio
(KMnO4), dicromato de potasio (K2Cr2O7), cromato de potasio (K2CrO4) y solución

14
estándar sintética de yodato de potasio KIO3).)] utilizando dos métodos de calentamiento
en H2SO4 (reflujo abierto y baño de agua). Los estudios de interferencia se realizaron en
soluciones sintéticas con o sin carbono, con la adición de metales complejantes (Hg2 o
Ag) para reducir la actividad del Cl-. En el modo de reflujo abierto, ni la serie de cromo
ni la serie de dicromo pueden eliminar eficazmente la interferencia de iones cloruro Cl-,
la interferencia de sacarosa y oxalato es <10%, y la interferencia de blanco y ftalato
es>35%. La complejación del metal previene eficazmente las interferencias, mientras que
la plata suprime las interferencias en ambos medios. La adición de cantidades iguales de
Hg2 oxida del 2,3 % al 6 % de Cl- (con relación al carbono) en estándares y espacios en
blanco. El exceso de Ag genera un alto consumo de oxidante debido a la precipitación de
Ag2CrO4. El calor de reacción óptimo, el tiempo de digestión y la concentración de H2SO4
fueron: 90 °C, 2 h y una concentración de 7,2 M respectivamente. Este método se aplicó
al sistema de cromo utilizando un estándar primario y una solución sintética de iones Cl -
que interfieren que muestran valores de oxidación de carbono orgánico desde
aproximadamente 100% sin oxidación de cloruro detectable. En muestras de suelo, el
análisis comparativo empleando este método mostró una mayor oxidación del carbono
orgánico que con el método Walkley-Black, especialmente para muestras con alto
contenido de materia orgánica (medida por pérdida por ignición). (Aguirre G.et. al. 2013)

1.2. Planteamiento del problema

Una de las formas para llegar a garantizar la calidad de un análisis es el empleo de
MRC en cada lote de muestra, los MRC son ampliamente utilizados para ver la
reproducibilidad de resultados, actualmente los laboratorios dedicados a ensayos del suelo
determinan el contenido de materia orgánica por el método de Walkley y Black empleando
una técnica volumétrica, las mismas pruebas realizadas ha sufrido diversas
modificaciones, a medida que fueron realizando las diferentes ensayos siempre con el
propósito de optimizar el uso de reactivos sin afectar la calidad de los resultados
obtenidos.

Muchas veces se considera que es una determinación costosa principalmente por el uso
de los reactivos necesarios así también por las decisiones que se toman a partir de sus

15
resultados, hay una creciente inquietud acerca de la forma de realizar las determinaciones
analíticas lo que implica a su vez mayores esfuerzos.

Por tanto, se hace necesario emplear un MR para determinar el contenido de materia

orgánica de suelos, variando las cantidades de reactivos (ácido sulfúrico) al igual que se
realiza una variación en cuanto a titulante en este caso utilizando como titulante sal de
Mohr y sulfato ferroso heptahidratado, es decir, se desarrolla un método modificado de
Walkley y Black para la determinación de Materia Orgánica.

Con base en lo expresado, este trabajo de investigación pretende optimizar el método

Walkley y Black para la determinación de Materia Orgánica empleando Material de
Referencia Interno (MRI), de esta forma establecer un método modificado más eficiente
y disminuya la cantidad de reactivos empleados, el costo que involucra la adquisición de
reactivos, a la disminución de problemas en relación al sector agrícola.

1.3. Objetivos
1.3.1. Objetivo general
• Optimizar el método de Walkley y Black para la determinación de
Materia Orgánica empleando Material de Referencia Interno para el
Laboratorio de Química Analítica y Ambiental de la Dirección de
Aplicaciones de la Tecnología Nuclear – ABEN

1.3.2. Objetivos específicos

• Realizar diferentes ensayos de laboratorio con las nuevas variables
establecidas para determinar el contenido de materia orgánica en
muestras de suelo utilizando material de referencia interno (MRI)
• Optimizar el procedimiento general para la determinación de Materia
Orgánica para el Laboratorio de Química Analítica y Ambiental
perteneciente a la Dirección de Aplicaciones de la Tecnología Nuclear
– ABEN
• Comprobar si existe variaciones en los resultados obtenidos
cambiando la solución titulante y reduciendo la cantidad de ácido.

16
 • Caracterizar los parámetros fisicoquímicos de suelos: pH,
conductividad, fosforo asimilable, potasio.
• Emplear herramientas estadísticas para el tratamiento e interpretación
de resultados obtenidos.

1.4. Justificación
La fertilidad del suelo está directamente relacionada con el uso de fertilizantes que
restablecen los nutrientes del suelo y/o fertilizantes orgánicos, pero al mismo tiempo está
relacionada con el clima, la fisiografía del suelo, el trabajo cultural e incluso el factor
social de suelos agrícolas.

La importancia de determinar el carbono orgánico del suelo se basa en su efecto sobre

muchas de sus propiedades, como ser el color, la formación de agregados, la plasticidad,
la cohesión, la capacidad de retención de humedad, el intercambio catiónico, nitrógeno, y
óxido nitroso. La producción de sustancias que previenen y activan el crecimiento de
microorganismos del suelo, contribución en procesos patogénicos por sus propiedades
peptizantes, coagulantes y quelantes. La materia orgánica actúa como agente aglutinante,
permitiendo que las partículas del suelo se agrupen formando agregados que generan
porosidad en el suelo, lo cual favorece la infiltración de agua, la circulación del aire y el
crecimiento de las raíces de las plantas.

La caracterización de suelos requiere la determinación del contenido de materia

orgánica, entre otras determinaciones. Su valor permite conocer las relaciones C/N, C/P y
C/S del suelo, parámetros que alcanzan a ser muy importantes para la caracterización de
la materia orgánica.

Para determinar el contenido de carbono en suelos orgánicos empleando un nuevo

método optimizado puede proporcionar mayor confiabilidad de los resultados. El
desarrollo de este trabajo beneficiará directamente a los laboratorios de ensayos
involucrados en el análisis de carbono orgánico del suelo, ya que tendrán una referencia
científica para demostrar que el método modificado de Walkley y Black es efectivo para
la determinación de Materia Orgánica empleando material de referencia interno para el

17
Laboratorio de Química Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la
Tecnología Nuclear – ABEN reduciendo los costos (en la adquisición de reactivos) y la
cantidad de reactivos empleados ya que muchos de ellos llegan a ser perjudiciales para el
medio ambiente.

En resumen, la presencia de materia orgánica en los suelos es determinante para

mantener la fertilidad, la estructura y la salud del suelo, además, promover prácticas
agrícolas más sostenibles, reducir la erosión y favorecer la biodiversidad. Por estas
razones se justifica la necesidad de buscar un método optimizado para determinar la
cantidad de materia orgánica presente en muestras de suelos empleando MRI.

18
 CAPITULO II

2. MARCO TEORICO
2.1. SUELO

El suelo es un componente fundamental del ambiente, natural y finito, constituido por

minerales, aire, agua, materia orgánica, macro y macroorganismos que desempeñan
procesos permanentes de tipo biótico y abiótico, cumpliendo funciones vitales para la
sociedad y el planeta. (Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible, 2016)

El suelo se divide en tres capas: A, B y C. La meteorización química del suelo

(descomposición y transformación química de minerales) ocurre en las capas A y B,
mientras que la meteorización geoquímica (reacciones causadas por redox) ocurre en la
capa C y de baja hidratación, disolución y reacciones químicas). hidrólisis (Jackson et al.,
1953).

El suelo cubre la mayor parte de la superficie terrestre; su límite superior es el aire o el

agua superficial; sus límites horizontales son áreas donde la tierra cambia (a veces pasa
gradualmente a aguas profundas, rocas o hielo); su límite inferior puede ser roca sólida, o
puede contener pequeños depósitos de animales, raíces u otros materiales que muestren
signos de actividad biológica y no se vean afectados por los factores formadores del suelo.
(Soil Survey Staff, 1994).

También es esencial y decisivo para la estructura y función de los ciclos del agua, el
aire y los nutrientes, así como para la biodiversidad. El suelo es una parte importante de
los ciclos biogeoquímicos donde se distribuyen, transportan, almacenan y transforman los
materiales y la energía necesarios para la vida en la Tierra. (van Miegrot y Johnsson, 2009;
Martin, 1998).

Por lo anterior expuesto, el suelo puede considerarse un componente persistente del

medio ambiente en el largo plazo, relacionado con el tiempo que tarda en formarse un
centímetro de suelo, que puede tardar cientos o miles de años, dependiendo de las
condiciones, y este centímetro de suelo se puede perder en muy poco tiempo (incluso días)
por erosión, quemas, y otros. Sin embargo, existen varias situaciones en las que el suelo

19
se considera un componente no renovable. (FAO, 2007; European Union, 2010;
Australian Department of Land and Water Conservation, 2000).

A pesar de la importancia del suelo, su degradación a través del uso insostenible de la

tierra y otras actividades humanas es motivo de especial preocupación debido a los efectos
negativos en los ecosistemas, organismos y comunidades.

Actualmente la definición de suelo se maneja desde diferentes puntos de vista, por lo

tanto, se tiene varias definiciones de la misma y cada una de ellas refleja la esencia del
suelo.

Muchos consideran al suelo como un material natural muy complejo; compuesto por
material sólido que representa los aglomerados de las partículas con diferentes tamaños y
composición química, materia orgánica en diferentes estados de descomposición,
microorganismos activos, gases y vapores que ocupan los poros que no están llenos de
agua, las propiedades físico-químicos entre sólidos, líquidos y gases, en íntima relación
son afectadas por los componentes de los materiales y por el clima, (Pastor 1987).

Importancia del suelo

Cabe señalar que la importancia del suelo queda sumergida en conocimiento general
del suelo, tal es que se define de la siguiente manera:

Según el USDA (Departamento de Suelos de los Estados Unidos, 1999), los humanos
consideran al suelo muy importante porque son el soporte de las plantas, y estas
proporcionan alimentos, fibras, medicamentos y otras necesidades humanas; también
filtra el agua y recicla los desechos tóxicos presentes en la superficie; siendo el eje de la
producción de materia prima para todo rubro. A la vez la importancia del suelo se
establece por las funciones que desempeña, como el de ser soporte, suministro de agua y
nutrientes, oxígeno y calor a las plantas, (Narro 1994).

El suelo es esencial para el desarrollo de la vida. Es un sistema complejo donde tienen

lugar muchos procesos químicos, físicos y biológicos, donde viven miles de plantas y
muchas especies animales. Es un recurso natural irreemplazable y parte integral del medio
ambiente que produce la mayor parte de los alimentos del mundo. Además, proporciona

20
espacio habitable para las personas y juega un papel clave en el correcto funcionamiento
de los ecosistemas, contribuyendo al ciclo del agua, al clima, a la biodiversidad, a la huella
de carbono y a la preservación de las tradiciones culturales. (Benzing, A. 2001).

Es una capa delgada que se fue formando muy lentamente con el tiempo a medida que
las rocas se van rompiendo por el agua, los cambios de temperatura y el viento. Los
animales y plantas muertos en o cerca de la superficie son descompuestos por
microorganismos, convirtiéndolos en materia orgánica y mezclándose con el suelo. (FAO,
1996).

2.2. PARAMETROS FISICOQUIMICOS

Textura

Porta et al (1994), hace énfasis en el interés de conocer este parámetro ya que permite
inferir en otras propiedades y características directamente relacionadas con el uso y
comportamiento del suelo siendo estas:

❖ Capacidad de retención de agua disponible y de suministro para las plantas y la

facilidad de circulación del mismo (velocidad de entrada y salida).
❖ Facilidad de laboreo, el riesgo de formación de costra superficial y el riesgo a
la erosión ya sea hídrica o eólica.
❖ Capacidad de almacenar nutrientes y admitir aguas residuales y otros.

Estructura

La estructura produce efectos directos en el crecimiento vegetal, que influencian a la

aireación, velocidad de infiltración del agua, resistencia a la penetración de la raíz y
variaciones de temperatura del suelo, (Narro, 1994).

El altiplano boliviano presenta estructuras débiles a muy compactas; bloques

subangulares, finos a medios, (Chilon, 1997).

21
 Color

Los factores que afectan al color del suelo son los minerales presentes en cantidades
apreciables. En las zonas áridas y zonas semiáridas, templadas el suelo es de color claro,
(Foth, 1997).

El color del suelo pueda indicar un aproximado de la cantidad de Materia Orgánica

presente ya que ambas vienen relacionadas.

Profundidad efectiva

El volumen del suelo contenido a una profundidad será el ambiente de exploración

disponible para la planta, por lo cual no existe una profundidad ideal, (Bertsch, 1995).

Densidad aparente

Existe una relación clara entre el valor de la densidad aparente con otras propiedades y
características del suelo; entre estas se destacan la textura, contenido de materia orgánica,
la porosidad, la compactación-compresión, la conductividad térmica y la resistencia del
suelo a la penetración, (Narro 1994). El mismo autor indica que valores menores o bajos
son los más apropiados para los cultivos desde el punto de vista agrícola.

2.2.1. pH del suelo

El pH es una propiedad química del suelo que afecta significativamente el desarrollo

de los organismos, incluidos los microorganismos y las plantas. La lectura de pH es la
concentración de iones de hidrógeno reactivos (H) en la interfaz suelo-líquido debido a la
interacción de componentes sólidos y líquidos. La concentración de iones de hidrógeno es
esencial para los procesos físicos, químicos y biológicos del suelo. La acidez o alcalinidad
del suelo se mide utilizando un electrodo de vidrio con un contenido de humedad
específico o una relación suelo-agua y se expresa como un valor de pH. El valor del pH
es el menos logaritmo de la concentración de iones de hidrógeno expresado como un
número positivo entre 0 y 14. Para determinar el valor del pH se utiliza el método
potenciométrico. (Willard et al., 1974; Bates, 1983).

22
 Fundamento

Los métodos más comúnmente utilizados para medir pH del suelo son los métodos
potenciométricos o electroquímicos. Con este método se mide el potencial de un electrodo
(electrodo de vidrio) sensible a los iones H presentes en la solución de prueba; utilizando
un electrodo como referencia a medida que cambia la concentración del ion a medir, la
solución al problema no cambia, generalmente un electrodo de calomelanos o Ag./AgCl.
Un electrodo crea un potencial eléctrico a través de su pared. En la práctica, los
instrumentos se calibran utilizando soluciones tampón de pH conocido y luego se compara
directamente el potencial o el pH de la solución que se está evaluando.

El pH ejerce una influencia directa en las propiedades químicas del suelo, La

solubilización, disponibilidad y absorción de los nutrientes; saturación de bases y
generación de carga variable. A pH ≤ 5.5, la actividad biológica es baja; ya que inhibe la
actividad de las lombrices, solamente pueden desarrollarse los hongos. Mientras que el
desarrollo vegetal presenta trastornos a una acidez alta, menor o igual a pH 4, (Bertsch,
1995).

A pH muy elevado las plantas absorben los elementos fertilizantes con mayor
dificultad, porque los nutrientes que existen en el suelo se ponen a disposición para la
planta en grado diferente. Por ello los macro elementos son disponibles en medios neutros
a ligeramente ácidos (pH 6), en cambio los micros elementos a excepción del molibdeno
son más asimilables en medio ácido, pero un medio ácido suele ser pobre en bases de
cambio (Ca, Mg, y K), así como de oligoelementos, (Guerrero, 1996). Fuentes (2006),
muestra lo mencionado en un cuadro, diseñado, la disponibilidad de nutrientes y algunos
microorganismos, como se puede observar en el cuadro de la Figura 1.

23
 Figura 1. Variación en la disponibilidad de nutrientes y poblaciones de hongos y bacterias en
función del pH

Interferencias

Dado que el pH del suelo se mide en una matriz acuosa como agua o una solución
salina diluida, depende del grado de dilución (relación de dilución del suelo). Al medir en
agua, es importante controlar el agua agregada, ya que agregar agua aumenta el pH, por
lo que esta proporción debe mantenerse constante y lo más baja posible. Sin embargo, es
posible que el sobrenadante no sea suficiente para sumergir adecuadamente el electrodo y
provocar demasiada presión cuando se inserta en el suelo. Los suelos que contienen una
gran cantidad de materia orgánica tienden a formar una pasta seca pegajosa, por lo que
también es aceptable una proporción más baja de muestra a agua (1:5 o 1:10). (Karma,
1993). La alteración en suelos contaminados con hidrocarburos depende de la
concentración y el tipo de hidrocarburo; pueden variar desde una simple iridiscencia que

24
no afecta la medición hasta mediciones perturbadoras debido a la alta concentración y
viscosidad del contaminante.

Tres son las condiciones posibles del pH en el suelo, tal como se muestra en la Tabla
1.

Tabla 1. Tipo de suelos según el pH neutralidad y la alcalinidad

Tipo de suelo pH

Suelos ácidos ˂ 6,5

Suelos neutros 6,6 a 7,5

Suelos básicos ˃ 7,5

2.2.2. Conductividad eléctrica

La conductividad es la capacidad de una solución acuosa para transmitir una corriente

eléctrica, generalmente expresada en mmhos/cm, mS/cm o mS/m NOM-021-RECNAT-
2000. Es una propiedad de una solución que está estrechamente relacionada con el tipo y
valencia de los iones presentes, su concentración total y relativa, movilidad, temperatura
del líquido y el contenido de sólidos disueltos en el mismo. Por tanto, la determinación de
la conductividad eléctrica es un método indirecto para medir la salinidad del agua o de
extractos del suelo.

Con base en los valores de conductividad, pH y %Na intercambiable, los suelos se

pueden dividir en las siguientes categorías:

a) Suelo salino. Se caracterizan por una conductividad del extracto saturado a 25°C
igual o superior a 4 mmhos/cm y un contenido de sodio intercambiable inferior al 15%.
Suelen tener una costra blanca de sal, que puede ser cloruros, sulfatos y carbonatos de
calcio, magnesio y sodio.

25
 b) Suelo sódico. Se ven negros debido al alto contenido de sodio. Tiene un porcentaje
de sodio intercambiable ≥ 15%, un pH de 8,5 a 10,0 y una conductividad ≥ 4 mmhos/cm
a 25°C.

c) Suelo salino-sódico. Tienen una conductividad de 4 mmhos/cm a 25°C, una

concentración de sodio variable del 15% y un pH variable, generalmente ≥ 8,5. (Muñoz
et al., 2000).

Principalmente, si el suelo está contaminado con agua nativa, la conductividad se puede

complementar midiendo Na o bases intercambiables (K, Ca, Mg, Na).

La salinidad del suelo es un problema en todas las zonas agrícolas irrigadas, incluso en
los suelos que, para empezar, son menos salinos.

El método utilizado para determinar el contenido de sales solubles consiste

básicamente en la obtención de un extracto saturado de una muestra de suelo, el cual se
mide en el laboratorio y se evalúa su conductividad eléctrica.

En las zonas áridas y semiáridas, donde hay poca lluvia y temperaturas elevadas;
siempre está presente la tendencia de acumulación de sales, (Cepeda 1991). La misma es
determinada por el valor de la conductividad eléctrica

Interferencias

La temperatura afecta la conductividad y varía alrededor de 2% por cada grado Celsius.

Para esta determinación no se permite la preservación química de las muestras.

Cationes intercambiables (Ca, Mg, K, Na).

Los cationes de cambio retenidos principalmente son: Ca, Mg, K, y Na, (Guerrero
1996). Teniendo una reemplazabilidad de los cationes en los siguientes niveles:

Al > Ca > Mg > K > Na (Foth 1997)

26
 2.2.3. Potasio

La forma mineral del potasio se encuentra en el 60% de la corteza terrestre como parte
de minerales como el feldespato (XAlSiO8), la ortoclasa (KAlSi3O8), la albita
(NaAlSi3O8) y la anortita (CaAl2Si2O8). Aunque hay mucho potasio en el suelo, sólo una
pequeña parte está disponible para las plantas, por lo que se puede dividir en tres tipos:

1) No disponible, también conocidos como minerales no asimilables, se encuentran en

minerales naturales que fueron liberados durante cientos de años debido a la erosión
natural o descomposición dependiendo de factores ambientales como la temperatura y la
humedad.

2) Lentamente disponible, esta fracción de potasio se consume lentamente y queda

atrapado entre los coloides formados por la arcilla; Los suelos más viejos con mayor
contenido de arcilla contienen menos reservas de potasio que los arcillosos.

3) Disponible, este potasio se encuentra en la solución del suelo retenido por adsorción
en la MO y en las arcillas, también se lo conoce como intercambiable y se encuentra en
equilibrio con la solución (Jiménez Díaz & Lamo de Espinoza, 2009).

2.2.4. Fosforo del suelo

El fósforo está casi libre en el suelo. Esto se debe a que es químicamente muy reactivo,
por lo que existe en combinación con otros elementos. Proviene principalmente de apatita,
Ca5(PO4)3(F,Cl,OH). La meteorización, entre otros compuestos, forma pequeñas
cantidades de iones (HPO4)-2 y (H2PO4)-, que pueden ser absorbidos por las plantas, por
lo que el fósforo forma sales insolubles. No es un elemento que se mueva mucho en el
suelo, se mueve por difusión, que es un proceso lento, especialmente cuando hay poca
agua disponible. (INPOFOS, 1997). En suelos agrícolas, el fósforo también se suma a
través de fertilizantes orgánicos e inorgánicos. Independientemente de la fuente, el fósforo
reacciona con el calcio, el hierro, el aluminio y el manganeso para formar sales insolubles,
lo que lo hace menos disponible para las plantas. Aunque en el suelo cultivado se
encuentran grandes cantidades de fósforo, los análisis de contenido disponibles muestran

27
que es bajo pero suficiente para el crecimiento de las plantas, ya que se reemplaza en la
solución del suelo dos o tres veces al día por minerales y fertilizantes.

Existen muchos métodos para medir el fósforo (P) en suelos, cada uno de los cuales
puede diferir en principio y procedimiento. La elección del método depende del propósito
del estudio, la muestra y sus características, la precisión requerida y el equipo de
laboratorio. La razón principal para medir P en el suelo es para evitar su carencia en la
planta y predecir el requerimiento de fertilizante.

El P está presente en el suelo en formas orgánicas e inorgánicas (aniónicas) asociadas

con MO (Materia Orgánica), arcillas y compuestos de Al, Fe y Ca; Para que las plantas
utilicen fósforo, debe estar presente en la solución del suelo.

Los suelos fuertemente ácidos están dominados por H3PO4, los suelos ligeramente
ácidos o moderadamente alcalinos están dominados por aniones HPO4-2, los suelos
alcalinos o fuertemente alcalinos están dominados por aniones PO4-3. Los fosfatos
inorgánicos presentes en el suelo tienen cierta relación con el valor del pH. El suelo neutro
o alcalino está dominado por el fosfato de calcio, mientras que el suelo ácido está
dominado por el fosfato de hierro y el fosfato de aluminio. Los dos últimos compuestos,
así como el fosfato cálcico que se forma en suelos alcalinos, tienen propiedades insolubles
porque son compuestos muy estables e insolubles. (Villarroel, 1988).

La evaluación y comparación de diferentes métodos es extensa (Sibessen, 1963; WoIf

y Baker, 1985; Mato, 1986; Menon, 1990); Todos los métodos están calibrados en algún
contexto para el P utilizado por cultivos o plantas. Estas calibraciones son necesarias
porque los métodos más comunes y tradicionales no miden la cantidad de fósforo
disponible en el suelo, sino el índice relativo. El P extraído fue de alguna manera calibrado
con el P en la solución del suelo. Los métodos más comunes son Bray I y II, Olsen y
Mehlich.

Capacidad de intercambio catiónico (CIC).

La CIC de un suelo variará de horizonte a horizonte, en cada uno de ellos dependerá

del contenido y tipo de arcillas, como de los componentes orgánicos, (Porta et al 1994).

28
Por lo tanto, la capacidad de intercambio catiónico y la capacidad de intercambio de
acidez, biológicamente afectan a los tipos de organismos presentes y a su actividad.

Si no se cuenta con medios para la obtención global de la CIC, se puede estimar

teóricamente usando la siguiente relación:

CIC = % M.O.*2.5 + % Y*0.57

Donde: M.O. (% materia orgánica). ; Y (% Arcilla). (Fuente: Foth 1997).

2.2.5. Materia Orgánica del suelo

El término "Materia Orgánica (MO) del suelo", se emplea de manera general, para
designar a todos los compuestos orgánicos provenientes de la descomposición de los
residuos de origen biológico que se presenta en el suelo, sean: pajas, hierbas de desarrollo
natural, abonos verdes y residuos de animales (estiércoles), etc. El producto orgánico que
resulta de la descomposición de esta MO en el suelo recibe el nombre de "Humus".

La MO del suelo es definida como la fracción del suelo que incluye los residuos de
plantas y animales, macro como microbios en todas las etapas de descomposición,
incluyendo el humus del suelo que es bastante resistente (SSSA, 1979). La MO influye
mucho en las propiedades químicas y físicas del suelo, por lo tanto, es importante conocer
el contenido de MO en el suelo.

Es difícil cuantificar directamente la cantidad de MO en el suelo, pero se puede medir

el contenido de CO y estimar la MO empleando un factor de conversión basado en el
porcentaje de CO en la MO. Se asume que la MO contiene 58% de CO y se usa el factor
de Van Bemmelen de 1,72 para estimar la MO. En realidad, este factor es muy variable
entre diferentes suelos; por tanto, se recomienda trabajar con el valor de CO y no con MO.
En el Centro de Investigaciones y Aplicaciones Nucleares (CIAN) como el factor para
determinar MO es variable se utiliza un factor de 2 para estimar la MO.

Una de las maneras para medir el carbono orgánico es mediante la oxidación con
dicromato, el método que más se usa es el de Walkley y Black (1934). La oxidación no es
completa y Walkley y Black estimaron que un promedio de 76% se oxida y sugirieron un

29
factor de conversión de 1,32 para calcular el contenido de CO en el suelo. Meblus (1960)
modificó el método introduciendo una fuente de calor externa y de ese modo producir una
oxidación completa. Para que el método sea sencillo se recomienda reportar los resultados
como CO oxidable. De esa manera no tiene que usarse el factor de conversión al CO total.

Se usa un procedimiento modificado de Walkley y Black (1934), que está basado en

una oxidación húmeda, para determinar el contenido de CO en el suelo. Se oxida la
muestra en una solución de dicromato de potasio, utilizando el calor producido por la
dilución de ácido sulfúrico concentrado:

2Cr2O72- +3C* + 16H + → 4Cr 3+ + 3CO2 + 8H2O

A continuación, en la tabla 2 se presenta una clasificación de materia orgánica

Tabla 2. Contenido de materia orgánica método Walkley y Black

Clasificación Contenido M.O. %

Muy bajos 0,0 – 1,0

Bajos 1,1 – 2,0

Moderados 2,1 – 4,0

Altos 4,1 – 8,0

Muy altos >8,0

2.3. EL MUESTREO

Lo más importante del muestreo es que la muestra de suelo sea representativa. Los
resultados pueden variar, pero esta variación debería reflejar cambios reales en el campo,
no errores de laboratorio. El valor del análisis depende en gran medida de un muestreo
eficiente.

Los cambios que se encuentran en el sitio no son sólo verticales sino también
horizontales y pueden ser naturales o inducidos. No es posible analizar todo el rango, por
lo que se han desarrollado varios procedimientos para recolectar muestras representativas

30
de esta variabilidad. (James y Wells, 1990; Cenlcafe, 1985). Si el método de muestreo se
realiza bien, no debería afectar los resultados. El método más común es el muestreo
compuesto, en el que las muestras se seleccionan aleatoriamente de un área de campo y
se combinan para producir una muestra compuesta que es más representativa de los
promedios de campo.

El número de muestras debe estar entre 15 y 40 separados por una distancia de 100 m
cada punto con una profundidad de 20 cm (Etchellers, 1986), un incremento del número
de muestras aumenta la precisión y la exactitud, pero no en una forma lineal. Por lo
general, las muestras se recolectan profundamente en la zona de las raíces o en la capa
superior del suelo. Después de quitar las hojas caídas, emplear uno un barreno. Todos los
núcleos se mezclan y toda o parte de la muestra combinada se envía al laboratorio. Todo
el equipo de muestreo debe estar limpio y libre de contaminación. Es mejor evitar
almacenar muestras húmedas por mucho tiempo. Se pueden almacenar a 4 °C antes de
enviarlos al laboratorio.

El muestreo debe tener en cuenta los siguientes aspectos:

❖ La profundidad del muestreo.

❖ El número de muestras en el compuesto.
❖ El tamaño del área de muestreo.
❖ La Influencia del cultivo.
❖ La estación.
❖ La frecuencia de muestreo.

2.4. PREPARACION DE LA MUESTRA

Es importante identificar bien las muestras de suelo antes de llevarlas al laboratorio.

Generalmente, el suelo se prepara secándolo al aire y pasándolo por un tamiz de 2 mm
(malla #10). Este tratamiento de muestras de suelo, permite la comparación entre
laboratorios y también facilita el procesamiento de muestras en los laboratorios. A veces
las muestras se colocan en un horno para que se sequen más rápido. No, la temperatura
debe ser muy alta porque cambia algunas propiedades de la tierra. La temperatura
recomendada es entre 35 y 50 ºC. (James y Wells, 1990).

31
 El secado del suelo puede causar, cambios en las características químicas y físicas del
suelo (Hesse, 1971). Después de secar y tamizar, la muestra se almacena en un recipiente
limpio hasta el análisis.

La preparación de la muestra implica:

❖ Identificar la muestra
❖ Secar la muestra al aire o en un horno
❖ Tamizarla
❖ Almacenarla en un recipiente hasta el análisis.

Caracterización fisicoquímica del suelo:

El propósito de la caracterización física y química del suelo es determinar la respuesta

de este recurso a prácticas relacionadas en diferentes sistemas de producción, así como
su sensibilidad a daños causados por actividades naturales o humanas.

El enfoque del análisis del suelo es conocer cómo es un ambiente para el desarrollo de
las plantas. Sin embargo, existen otros factores que pueden afectar el crecimiento de los
cultivos, como el clima, la disponibilidad de agua, las características físicas y
microbiológicas.

Un análisis físico del suelo puede determinar su capacidad para mover suficiente agua
y aire y, con ello, permitir la propagación de las raíces y el suministro de suficiente agua
y nutrientes. (Piraneque et al., 2013).

La presencia de materia orgánica en los suelos aporta diversos beneficios. En primer

lugar, mejora la estructura del suelo, aumentando su capacidad para retener agua y
nutrientes. También incrementa la capacidad de intercambio catiónico, es decir, la
capacidad del suelo de retener y liberar nutrientes para su disponibilidad de las plantas.
(FAO, s. f.). Además, la materia orgánica contribuye a mantener una buena porosidad y
aireación del suelo, lo que facilita el acceso del oxígeno a las raíces de las plantas.

Además de estos beneficios mencionados, la materia orgánica también cumple un papel

importante en la fertilidad del suelo.

32
 A medida que se descompone liberan nutrientes esenciales para las plantas, como
nitrógeno, fósforo y potasio, así como otros micronutrientes. Además, mejora la capacidad
de retención y liberación de estos nutrientes, evitando su lixiviación y volatilización.

La cantidad de materia orgánica en el suelo depende de la vegetación, el clima, la

estructura del suelo, el drenaje y la labranza. Los suelos minerales con mayor contenido
de materia orgánica suelen ser suelos de pradera intactos. Los suelos forestales y los suelos
de climas más cálidos contienen menos materia orgánica.

El contenido de materia orgánica presenta grandes variaciones cualitativas y

cuantitativas dependiendo de su naturaleza, métodos y velocidad de descomposición e
incorporación al suelo. (Carrillo, I. 1985)

Contiene compuestos orgánicos como:

 Hidratos de carbono, desde celulosa hasta azúcares, pasando por intermedios

(hemicelulosa, pectina, almidón y otros).
 Preproteínas, sus derivados y sustancias descompuestas en aminoácidos. - Grasas
y sus derivados
 Ligninas y sus compuestos.
 Taninos, polifenoles, resinas y otros.
 Ácidos orgánicos, principalmente ácidos gínico y fúlvico.
 Otros ingredientes (bacterias, hongos, restos de organismos vivos)

Estos compuestos orgánicos tienen diversos grados de resistencia a la descomposición

u oxidación, tanto a las reacciones bioquímicas del suelo como a los agentes oxidantes
como ser: peróxido de hidrógeno (H2 O2 ) o dicromato de potasio (K 2 Cr2 O7 ).

Este grado de estabilidad se clasifica de mayor a menor, por ejemplo: ligninas, ceras,
grasas, celulosa, ácidos húmicos y fúlvicos, hemicelulosas, proteínas, aminoácidos,
almidones, ciertos ácidos orgánicos y azúcares.

Para analizar materia orgánica en suelo se pueden utilizar métodos volumétricos, entre
los más empleados se encuentran los basados en el consumo de un agente oxidante que
actúa sobre el carbono.
33
 Walkley y Black descubre que la eficiencia de la reacción de oxidación de la materia
orgánica del suelo con una solución de K 2 Cr2 O7 en medio acido (H2 SO4 ) 77%,
determinaron que la materia orgánica de suelos agrícolas contenía aproximadamente un
58% de carbono.

Con base en estos resultados experimentales, Walkley y Black establecieron un

coeficiente (0,6708) para calcular el porcentaje de materia orgánica en suelos. (Carrillo, I.
1985)

2.5. METODO DE WALKLEY Y BLACK

Principio del método:
La muestra de suelo se trata con una solución de K 2 Cr2 O7 , que actúa como oxidante,
en un medio ácido fuerte (H2 SO4 concentrado). El calor liberado por la reacción del
H2 SO4 cuando se diluye fortalece la acción del K 2 Cr2 O7 para oxidar la materia orgánica.
El exceso de oxidante se determina mediante valoración con una solución de FeSO4 , que
actúa como agente reductor.

Cuando el contenido de cloruro del suelo es alto (p. ej., suelos salinos), esto interfieren
en la titulación porque consumen K 2 Cr2 O7 . Para evitar esta perturbación, se precipita en
forma de AgCl añadiendo Ag 2 SO4 al H2 SO4 . (Carrillo, I., 1985)

Reacciones involucradas (Estado de oxidación inicial de C)

A pesar de que experimentalmente existe una relación proporcional entre la cantidad
de CO2 desprendido en la oxidación por vía húmeda y la cantidad de ácido crómico
reducido, las reacciones involucradas no están bien establecidas.

Normalmente la representación de la oxidación del carbono en una reacción redox

considera al C de la materia orgánica en un estado de oxidación inicial igual a “cero”.

2Cr2 O7= + 3C0 + 16H + → 4Cr 3+ + 3CO2 + 8H2 O

También el hidrogeno que forma parte de la MO puede reaccionar aumentando el

consumo de dicromato. Sin embargo, este consumo disminuye notablemente en las
cadenas alifáticas de alto peso molecular y en los compuestos cíclicos.

34
 Cr2 O= 0 +
7 + 6H + 8H → 2Cr
3+
+ 7H2 O

Por otra parte, se presenta una reacción de descomposición de los radicales oxigenados
con desprendimiento de anhidrido carbónico, que se suma al generado en la oxidación del
CO.

RCOOH → RH + CO2

Reducción del Cromo: la fracción reducida de este compuesto es proporcional al C

orgánico presente en la muestra.

Cr +6 + 3e− → Cr +3 se reduce

Oxidación del hierro, la reacción exotérmica logra elevar la temperatura para lograr la
oxidación del cromo y de la materia propiamente dicha.

Fe+2 → Fe+3 + 1e− se oxida

Se asume que el carbono tiene una valencia de 0 (Sheifa J. McKean, 1993) debido a
que el carbono que se encuentra en distintos niveles de oxidación dentro de la materia
orgánica del suelo así como el oxígeno y el hidrogeno pueden reaccionar con el dicromato
, pero si se considera la parte experimental se determina una relación proporcional entre
la cantidad de CO2 desprendido en la oxidación y la cantidad de ácido crómico reducido,
proponiendo de esta manera una compensación de las reacciones de H y O orgánicos, es
por ello que se asume que cada átomo de carbono es oxidado desde un estado de oxidación
0 a un nivel +4, reflejando de esta manera todo el intercambio de electrones en la reacción.

En resumen, la aceptación de que el carbono se encuentra en la materia orgánica del

suelo en un estado de oxidación 0 es básicamente empírica, con poco sustento
estequiométrico.

Algunos puntos críticos del procedimiento:

Existen aspectos metodológicos que llegan a afectar la dispersión de los resultados
analíticos. En términos de metodología, es esencial comprender los factores clave
involucrados en el proceso de prueba y aplicar técnicas estandarizadas en todos los
laboratorios. (Carreira,D. – INTA Castelar)

35
 Durante el procedimiento se coloca una cantidad de muestra de suelo en un matraz
Erlenmeyer de 500 mL, adicionar K 2 Cr2 O7 (1N), añadir H2 SO4 (es aquí donde se varía
el volumen de ácido) agitar y dejar reposar 30 min., añadir agua destilada, luego H3 PO4
al 85% y unas gotas de indicador difenilamina. Titular los blancos y las muestras con una
solución de Fe(NH4 )2 (SO4 )2 6H2 O (se disuelve 196,1g en 800 mL de agua que contiene
20 mL de H2 SO4 concentrado se deja enfriar y aforar a 1 L) y con una segunda solución
en este caso a partir de sulfato ferroso hidratado FeSO4 7H2 O (se disuelve 139g en 800
mL de agua que contiene 40 mL de H2 SO4 concentrado dejar enfriar y aforar a 1 L). El
punto final se alcanza por el cambio de color café verdoso a azul y finalmente a un verde
brillante. (Comunicación personal)

A continuación, en las Figuras 4 y 5 se presentan dos diagramas de flujo en el cual se

muestra la diferencia en cuanto al procedimiento viendo así la optimización que se realiza
al método original de la determinación de Materia Orgánica por el método Walkley y
Black.

Diagramas de flujo
Representando el procedimiento del método Walkley y Black empleado en laboratorio
en un diagrama de flujo:

36
Figura 2. Procedimiento del método Walkley y Black empleado en Laboratorio de
Química Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la Tecnología
Nuclear – ABEN

37
Figura 3. Procedimiento de la optimización del método Walkley y Black

38
 Colores de suelo
Los distintos colores de suelos indican mayor o menor presencia de materia orgánica,
hierro y limo se presentan en la Figura 4

Figura 4. Distintos colores de suelos que indican mayor o menor presencia de

materia orgánica, hierro y limo (Fuente: infoAgro
https://www.infoagro.com/documentos/la_absorcion_nutrientes_suelo__caracteristicas_
del_suelo.asp )

Suelos de las regiones áridas presentan muy bajo porcentaje de humus, por lo cual sus
coloraciones son generalmente claras, grises o beiges.

Suelos tropicales presentan procesos de rubificación dando las coloraciones rojizas

Los suelos de las regiones templadas presentan procesos de brunificación y dan

coloraciones pardas

Suelos humíferos por su alto contenido en materia orgánica presentan tonalidades

oscuras y negras.

39
 COLOR NEGRO: asociada a la incorporación de materia
orgánica que se descompone en humus, es decir el suelo tiene
un alto contenido de materia orgánica esto se debe a las buenas
condiciones de fertilidad en especial a la presencia de cationes
como el Ca2+, Mg2+ y K+.

COLOR ROJO: se asocia a procesos de alteración de la

materia prima bajo condiciones como de alta temperatura, baja
actividad del agua, rápida incorporación de materia orgánica y
liberación de grandes cantidades de Fe en la roca; presenta
condiciones de alta meteorización, baja fertilidad, pH ácido y
ambientes oxidante.

COLOR AMARILLO PARDO, AMARILLENTO

CLARO: esto por lo general es indicativo de
meteorización (oxidación) en un entorno aeróbico; se
encuentran en climas templados. Se asocia con
condiciones de fertilidad del suelo baja o media. Esto
suele deberse a la presencia de óxidos de Fe3+ hidratados.

COLOR PARDO: muy asociado a estados iniciales a

intermedios de alteración del suelo: relacionado con
condiciones de materia orgánica bajas a medias e
intervalos de fertilidad altamente variables.

COLOR BLANCO O AUSENCIA DE

COLOR: acumulación de minerales o elementos
que tienen coloración blanca, como calcita, dolomita
y yeso, así como algunos silicatos y sales. También
se relaciona con la remoción de componentes del
suelo.

40
 COLOR GRIS: puede ser indicativo del
ambiente anaeróbico, debido a que el suelo
está saturado con agua y oxigeno sale de los
espacios porosos. En estas condiciones las
bacterias anaeróbicas utilizan el Fe3+ y se
genera Fe2+, soluble en agua e incoloro. Otras
bacterias anaeróbicas utilizan Mn4+
reduciéndolo a Mn2+. Cuando el agua ya no
está saturada, la forma reducida se oxida y
produce colores característicos como manchas
anaranjadas.

COLOR AZULADO: en suelos de zonas costeras, deltaicas o pantanosas, la presencia

de aniones sulfato y condiciones reductoras (saturación con agua y agotamiento del
oxígeno), se forma FeS de color negro, con el tiempo se transforma en pirita (FeS2) dando
un color azul metálico.

Decoloración: esto se debe a la reducción del humus del suelo , lo que puede estar
relacionado con procesos de degradación (perdida de fertilidad) y erosión (perdida de
suelo).

La lixiviación es el proceso por el cual el suelo pierde humus y hierro hasta adquirir un
color gris claro, beige o amarillo pálido.

Como resultado de la experiencia en laboratorio. En la Tabla 3 se muestra la cantidad

de suelo aproximada a ser pesada según el color (comunicación personal)

41
 Tabla 3. Cantidad de muestra aproximada de suelo a ser pesada (comunicación
personal)

COLOR CANTIDAD aprox.

Tomar de 0,2- 0,3 g de muestra

de suelo

Tomar de 0,35- 0,45 g de

muestra de suelo

Tomar de 0,25- 0,38 g de

muestra de suelo

Tomar de 0,5- 1,0 g de muestra

de suelo

En conclusión, la materia orgánica es fundamental para mantener la fertilidad y salud

de los suelos. A través de su descomposición y liberación de nutrientes, mejora la
estructura del suelo, aumenta su capacidad de retención de agua y nutrientes, promueve la
actividad microbiana y aporta nutrientes esenciales para las plantas. Por ello, es importante
promover prácticas de manejo adecuadas que fomenten la incorporación y conservación
de la materia orgánica en los suelos agrícolas y forestales.

2.6. MATERIALES DE REFERENCIA CERTIFICADOS

Utilizado como herramienta para garantizar la calidad de los resultados analíticos o de
pruebas de laboratorio, el MRC es uno de los métodos más aceptables y fáciles de aplicar
para evaluar la precisión y exactitud de los nuevos métodos que se están implementando,

42
ya que permite el ajuste y la validación del método. Un MRC es un certificado que
documenta el valor real especificado en uno o más parámetros, junto con las
incertidumbres asociadas inherentes al material y las pruebas realizadas durante su
cuantificación.

Los valores que se generan del material ayudan a ajustar la metodología de análisis y
corregir errores que se pueden generar.

Hay ciertas propiedades físicas que debe cumplir el MRC como ser: homogeneidad
estabilidad, así como guardar similitud con las muestras a comparar (ISO Guide 30, 1992)

Sin duda alguna de las características más importantes de un MRC es la homogeneidad

en un material de referencia, es el punto de partida en cuanto a preparación y empleo del
mismo. Los líquidos y gases presentan menos problemas en cuanto a homogeneidad que
los sólidos tal es el caso de las muestras de suelos, en el caso de los suelos son mezclas de
diferentes materiales como ser compuestos orgánicos hasta minerales (Grupo de
Quimiometría y Cualimetría, 2016).

Cuando el material es preparado de forma adecuada, homogénea y estable, se realizan

los estudios de exactitud y precisión para poder determinar los analitos en el material de
esta manera asegurar sus valores, que deben ser la mejor aproximación del valor real.
(Marchandise y Colinet; 1983).

2.7. MATERIALES DE REFERENCIA INTERNOS

Cada laboratorio debe controlar sus propios procesos y resultados. Uno de los caminos
más comunes es utilizar MRC en cada lote de muestra; sin embargo, estos materiales son
costosos y en algunos casos no existen para los parámetros en estudio. Por ello, el
laboratorio prepara su propio material de referencia interno (MRI).

Se encuentran casos como el la obtención y caracterización de MRI para métodos

bioquímicos de fosfolípidos utilizando como materia prima pulmones de conejos
(Travieso, C., S., & B., 2010). Otro estudio en Cuba realizo la preparación de MRI en la
determinación de los elementos Fe, Si y Ni en minerales lateríticos, evalúa la
homogeneidad y los caracteriza por tres métodos diferentes: espectrofotometría ICP-OES,

43
espectrofotometría de absorción atómica y análisis gravimétrico, concluyendo que
funciona como MRI para el níquel y el silicio, pero no para el hierro, lo que también
indica que un material no siempre funciona con todos los parámetros requeridos en el
laboratorio, incluso si son parámetros muy similares. (Acebal-Ibarra & Pérez, 2015). En
la industria alimentaria también existe un ejemplo de obtención de MRI de mercurio en la
matriz de pescado Alfonsino obtenido de las costas de Chile, el proceso parte desde la
compra del pescado, enfriamiento, preparación, homogeneización, almacenamiento y
caracterización química, aquí en las matrices de clase es importante contar con equipos y
métodos adecuados debido a la presencia de oligoelementos. Después de todo el proceso,
se estimó que el Hg en el MRI es de 0,63 mg/kg seco con una incertidumbre asociada de
0,02 mg/kg, nivel de confianza del 95% (Lichtenberg, 2006)

2.8. TRATAMIENTO ESTADÍSTICO

Los resultados de cualquier tipo de prueba siempre están influenciados por factores
externos. La misma situación ocurre en las pruebas de análisis químicos, cambiando los
resultados. Esto se puede reducir, entre otras cosas, utilizando personal bien formado y
con experiencia, pero aun así siempre habrá errores que el ojo humano no puede detectar.
Para ello se utilizan herramientas estadísticas para detectar desviaciones o errores,
dependiendo de lo que se requiera evaluar se pueden utilizar diferentes tipos de
herramientas los más comunes son la media, mediana, moda y otros. También se puede
estimar la dispersión de resultados, desviación estándar, coeficiente de variación, y otros
. Se utilizan para identificar y corregir errores del sistema, algunas de las herramientas
utilizadas para evaluar los resultados de este estudio se definen a continuación.

2.8.1. Desviación estándar

Uno de los problemas de la varianza es elevar al cuadrado las diferencias para evitar
valores negativos. Por lo tanto, se utiliza la desviación estándar (σ), llamada desviación
estándar, en lugar de la varianza para medir la dispersión y la media en las mismas
unidades. La desviación estándar se obtiene de la raíz cuadrada de la variación.(Cástor
Guisande González, 2006)

44
 ∑ni=1(xi − x̅)2
σ=√
n−1

Al cuadrado de la desviación estándar se le denomina varianza (σ2 )

2.8.2. Coeficiente de variación

La desviación estándar hace imposible comparar dos series de datos con medias
ligeramente diferentes para determinar cuál tiene la mayor variabilidad, porque las series
de datos con la mayor variabilidad media tienden a tener también la mayor variación. Por
lo tanto, se recomienda utilizar el coeficiente de variación (CV), que se calcula como un
porcentaje que representa la desviación estándar de la media, que es una medida del error
relativo y se usa para comparar resultados medidos en distintas escalas. (Cástor Guisande
González, 2006)

σ
CV = RSD = ∗ 100
x̅

CV = Coeficiente de Variación

RSD = Desviación Estándar Relativa.

Clasificación según DANE (2008) se considera que una estimación con un coeficiente
de variación:

❖ Hasta del 7%, es precisa

❖ Entre el 8 y el 14% significa que existe una precisión aceptable
❖ Entre el 15% y 20% precisión regular
❖ Mayor del 20% indica que la estimación es poco precisa.

2.8.3. Límite de confianza

Es poco probable que la media muestral resultante sea exactamente igual a la media
poblacional. En general, existe un intervalo centrado alrededor de la media muestral que
contiene el valor verdadero con cierta confianza. La amplitud de este intervalo depende
de dos factores:

45
 a) La precisión de los valores individuales, que dependen de la desviación
estándar de la población.
b) El número de medidas de la muestra, pues el hecho de repetir las medidas
implica tener más confianza en el resultado.

El límite de confianza de una media viene dado por la expresión:

zs
x̅ =
√n

Donde el valor de z depende del grado de confianza requerido.

❖ Para límites de confianza del 95%, z 1,96

❖ Para límites de confianza del 99%, z 2,58
❖ Para límites de confianza del 99.7 %, z = 2,97

2.8.4. Repetibilidad y reproducibilidad de las mediciones

La desviación estándar de la repetibilidad se define como "la precisión de un método

expresada como la desviación estándar de determinaciones independientes realizadas por
un solo analista utilizando el mismo equipo y métodos". Por tanto, la repetibilidad define
cualquier medición repetida que se realice del material de prueba en el laboratorio. La
referencia a "mediciones independientes" significa que se deben pesar, disolver y medir
varias porciones de prueba separadas, en lugar de exponer la misma solución al
instrumento analítico varias veces. Si se hiciera esto, la desviación estándar de estas
mediciones sería la repetibilidad de la medición del instrumento en lugar de la
repetibilidad analítica.

La desviación estándar de reproducibilidad es "la precisión de un método expresada

como la desviación estándar de las determinaciones realizadas en diferentes laboratorios".
Esperamos que la reproducibilidad sea mayor que la repetibilidad porque cada laboratorio
tiene su propia repetibilidad (que puede ser aproximadamente la misma). pero esto ahora
se verá agravado por diferencias entre laboratorios que reflejan diferentes sesgos para
garantizar la reproducibilidad. La experiencia demuestra que la reproducibilidad entre
laboratorios es de dos a tres veces mayor

46
 Si el laboratorio ha determinado una estimación razonable de la desviación estándar de
la repetibilidad, las mediciones repetidas de rutina se pueden comparar con este valor. Sea
la desviación estándar de repetibilidad σr. La desviación estándar de la diferencia entre
dos mediciones es √2σr y el intervalo de confianza del 95% para la diferencia esperada de
0 es ±1,96 ∗ √(2σr ) = 2,8 ∗ σr

Por lo tanto, si la diferencia entre los resultados repetidos medidos en condiciones de

repetibilidad es mayor que 2,8 ∗ σR , debería preocuparse de que haya algún problema con
la prueba. Puede utilizarse como parte de un procedimiento de control de calidad para
garantizar resultados consistentes. Se pueden definir diferencias correspondientes para la
desviación estándar de reproducibilidad (σ_R) para validar los resultados encontrados
entre laboratorios. La diferencia máxima permitida de 2,8 ∗ σR se denomina límite de
repetibilidad (r) y 2,8 ∗ σR se denomina límite de reproducibilidad (R) (Brynn, 2006)

47
 CAPITULO III

3. UBICACIÓN GEOGRAFICA Y PUNTO DE MUESTREO

3.1. Ubicación y acceso al área de estudio
3.1.1. Centro de Investigaciones y Aplicaciones Nucleares
El Centro de Investigaciones y Aplicaciones Nucleares (CIAN) - Laboratorio de
Química Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la Tecnología Nuclear
– ABEN se encuentra en el municipio de Viacha a 32 km de la ciudad de La Paz, situada
entre las coordenadas: 16º39’30.1’’ y 68º16’55.7’’ Longitud Oeste (Figura 5 ingreso al
centro de investigaciones).

Figura 5. CIAN – Laboratorio de Química Analítica y Ambiental – ABEN (Fuente:

propia)

3.1.2. Uso de suelos

3.1.2.1. Actividad agropecuaria

Velasco (2001), citando a Montes de Oca (1992), indica que la zona agro-ecológica a
la que pertenece el municipio de Viacha, es la del Altiplano norte. La flora existente en la

48
zona está comprendida por especies cultivadas y silvestres. Las especies más cultivadas
son: cebada, papa, avena, alfalfa, quinua, además de haba y papaliza. Entre las especies
silvestres están: la paja brava (Stipa sp.), c’hilliwa (Festuca dolopchophyla ), wira wira
(Aachicroline sp.), muni muni (Bidens andicola), Astragalus sp. Y Poa gymanantha ; entre
las arbustivas y arbóreas: Braccharis sp., Buddleia coriacea , Polylepis sp.; y entre las
propias de lugares húmedos están Distichia muscoloides, Oxychole andina.

Entre las especies de fauna de la región, se cuentan con poblaciones propias que han
sido menguadas en gran proporción como: la perdis (p’isaqa), zorro andino (kamaque),
lagartija (jararankhu), ratón andino (achacu), pato silvestre (q’ankalla), gaviota del
altiplano (leque - leque), tórtola (curucuta)y buitre (sihuicara).

El clima de la zona se caracteriza por ser seco durante gran parte del año, pues la
estación de lluvias es muy corta. Más del 60 % de las precipitaciones pluviales tienen
lugar entre los meses de diciembre a febrero.

3.1.3. Suelos del Altiplano y su característica

Los suelos utilizados en el ensayo son los más característicos del área altiplánica
ubicada al oeste del país, específicamente en el altiplano norte.

Los suelos de esta región como se puede ver en la Figura 7 se han formado sobre
materiales depositados en la era cuaternaria y son de origen fluviolacustre, aluviales en la
parte plana y coluviales en las pendientes. Estos suelos se caracterizan por presentar
acumulaciones y materiales consolidado de gravas, arenas, limo, arcilla y caliza. Son
suelos de escasa profundidad, de reacción neutra a básica, con horizontes diferenciados y
elevada variación espacial producto de su origen fluviolacust

49
Figura 6. Mapa del altiplano de Bolivia (Fuente: Fernández M 2006)

50
 Figura 7. Mapa Provincia Ingavi – Viacha

3.2. Material de Referencia Interno (MRI)

El Material de Referencia Interno, MRI es una muestra proveniente del Centro de

Investigaciones Aplicaciones Nucleares-Viacha.

Mamani R. (2028) tomó muestras de suelo en un anterior estudio en el cual preparo el

material de referencia interno en el CIAN perteneciente actualmente a la ABEN, eligió un
punto aleatorio para muestrear, la capa superficial con vegetación que se eliminó de la
capa arable y muestreado a una profundidad de 18 cm tomando 20 kg de muestra (Figura
6). Las coordenadas del punto de muestreo son: 16º39’32’’ y 68º16’53’’ Longitud Oeste.

51
 Figura 8. IBTEN CIAN– ABEN (Fuente: Google Earth, noviembre 2023)

Figura 9. Localización del punto de muestreo Cian, IBTEN (Fuente: Google Earth,
noviembre 2023)

52
 3.2.1. Registro

Se revisará que cada muestra tenga la etiqueta con los datos requeridos para su
identificación y se asignará un número interno que las identificará en el proceso de análisis
y reporte de resultados. Todos los resultados ayudan a la optimización del método Walkley
y Black para la determinación de Materia Orgánica.

3.2.2. Pre tratamiento de muestras

Previo al análisis se realizan tratamientos al Material de referencia, las muestras

recolectadas se secan a temperatura ambiente en las instalaciones del CIAN en un
ambiente cerrado; las muestras secas se homogenizan y posteriormente se realiza una
molienda para luego cuartear las muestras en el cuarteo se toma 2 partes para el análisis
fisicoquímico y otras 2 partes para determinar características físicas.

La porción para análisis fisicoquímico es tamizada con un tamiz de 1 mm y para

determinar parámetros físicos con un tamiz de 2 mm.

La ubicación geográfica y punto de muestreo se realizó en un análisis anterior (Mamani

R., 2018) por lo cual esta es una referencia de la misma, el punto de muestreo no se realiza
en el presente trabajo ya que la muestra empleada (MRI) con anterioridad es la misma que
se usa en la Optimización del método Walkley y Black para la determinación de Materia
Orgánico.

3.3. Determinación de homogeneidad

Se deberá realizar pruebas de homogeneidad para detectar posible heterogeneidad de

elementos de interés y poder estimar su magnitud. Esta inspección se realiza después de
que el material haya sido envasado definitivamente como unidades utilizables (latas,
botellas, etc.).

Teóricamente, un material se considera completamente homogéneo en relación con

una determinada propiedad, si no existen diferencias entre los valores de las propiedades
de una u otra parte (objeto). Sin embargo, en la práctica, un material se considera
homogéneo para una determinada propiedad si la diferencia entre sus valores en una u otra

53
parte (elemento) es menor que la diferencia en comparación con otros componentes de
incertidumbre. (ISO Guide 35, 2006).

Un material puede ser suficientemente homogéneo para que la propiedad de interés

sea considerada por el MRC, aunque puede no serlo para otras propiedades, a menos que
esta falta de uniformidad afecte significativamente la incertidumbre normalmente
asociada con el método utilizado para determinar la propiedad de interés ( ISO Guide 35,
2006).La heterogeneidad puede manifestarse por lo menos de dos formas:

− Distintas submuestras de una unidad del candidato a MRC pueden diferir en

la propiedad de interés (heterogeneidad dentro de la unidad).
− Distintas unidades del candidato a MRC pueden presentar diferencias en la
propiedad de interés (heterogeneidad entre las unidades).

3.3.1. Número de unidades y submuestras a medir

Para determinar la uniformidad de las unidades de material producidas a partir del

mismo lote, se recomienda a los fabricantes seleccionar muestras al azar para que cada
unidad tenga las mismas posibilidades de ser seleccionada. Según la Comisión Europea
(1994), se debe utilizar la siguiente fórmula para obtener el número mínimo apropiado de
unidades de un lote de N unidades: "El número de 'individuos' de unidades enteras que se
acerque más a tres veces la raíz cúbica de la número total de unidades."

3
h = 3 ∗ √N

Para probar la homogeneidad dentro de cada unidad se debe analizar 2 o más

submuestras por unidad seleccionada y realizar los cálculos de comparación

utilizando un análisis de varianza (ANOVA) (Sepúlveda, 2000).

3.4. Determinación de estabilidad

Determinar la incertidumbre declarada en el certificado MRC requiere una evaluación

adecuada del impacto en la estabilidad a corto y largo plazo y una evaluación adecuada
de la heterogeneidad del lote (ISO Guide, 2006). Hay dos formas de realizar estudios de
estabilidad:

54
 - Estudio de estabilidad clásico: Las muestras individuales producidas durante el
mismo período se evaluaron a lo largo del tiempo. En este caso, el trabajo se realiza en
condiciones reproducibles, lo que genera grandes incertidumbres (debido a la
inestabilidad del sistema de medición incluido).

- Estudio de estabilidad isocrónico: Esto se hace para que todas las mediciones puedan
realizarse en condiciones repetibles (por ejemplo, mediciones con calibración). El término
"isócrono" enfatiza que todas las mediciones se toman simultáneamente (al final del
estudio). En general, este tipo de investigación tiene menos incertidumbre que los métodos
clásicos (ISO Guide, 2006).

Ambos métodos se utilizan para determinar la estabilidad a corto y largo plazo. Para
estudios de corto plazo, se evalúa el desempeño de los materiales bajo las condiciones
mínimas requeridas durante el transporte (ISO Guide, 2006).

Los estudios de estabilidad incluyen los siguientes componentes de estabilidad:

• Repetibilidad de la medición.
• Inestabilidad del material.
• Inestabilidad del sistema de medición (en el estudio clásico).
• Aspectos de reproducibilidad (en el estudio clásico se debe considerar las
calibraciones).
• Homogeneidad entre unidades (en la certificación de batchs) (ISO Guide,
2006).

De los factores antes mencionados, se puede deducir que, siempre que sea posible, se
debe preferir el estudio isocrónico, ya que éste sólo se ve afectado por tres factores:

• Repetibilidad de la medición.
• Inestabilidad del material.
• Homogeneidad entre unidades (ISO Guide, 2006).

55
 CAPITULO IV

4. METODOLOGIA
Para la optimización del método Walkley y Black, determinación de Materia Orgánica
empleando Material de Referencia Interna (MRI), se realizaron diferentes pruebas en los
Laboratorios de Química Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la
Tecnología Nuclear – ABEN.

El proceso de optimización del método Walkley y Black para la determinación de MO

empleando MRI se describe a continuación.

4.1. Optimización del método Walkley y Black para la determinación de Materia

Orgánica

El contenido de carbón orgánico (CO) fue determinado por el método de oxidación

con dicromato de potasio. Como la oxidación no es completa para calcular el contenido
de CO se multiplica por un factor de 1,3, 2 es decir multiplicándolo por factores empíricos
como el de Van Benmelen 1,724 (Jackson, 1964). El uso del factor se ha generalizado
considerando que la materia orgánica del suelo tiene un 58 % de carbono (Barreira, 1978).
El factor de conversión del porcentaje de carbono orgánico a porcentaje de materia
orgánica puede variar entre 1,9 para suelos superficiales y 2,5 para muchos subsuelos
(Broadbent, 1953).

PROCEDIMIENTO DEL MÉTODO ORIGINAL CON SAL DE MOHR

• Pesar 0,5 g aproximadamente (depende del color del suelo) de muestra de suelo
en un matraz Erlenmeyer de 250 mL.
• Agregar con una micropipeta 5 mL una solución de dicromato de potasio
(K2Cr2O7) 1N.
• Añadir 10 mL de ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado (trabajar bajo campana)
y dejar en reposo por 30 min.
• Agregar 150 mL de agua destilada y añadir con una micropipeta 3 mL de ácido
orto fosfórico concentrado.
• Añadir con una micropipeta 0,5 mL de indicador de difenilamina.

56
 • Titular con una solución de sulfato ferroso amoniacal (NH4FeSO4 0,5 N) hasta
que vire de verde intenso a verde pálido.

PROCEDIMIENTO MÉTODO 1 CON SULFATO FERROSO

HEPTAHIDRATADO

• Pesar 0,5 g aproximadamente (depende del color del suelo) de muestra de

suelo en un matraz Erlenmeyer de 250 mL.
• Agregar con una micropipeta 5 mL una solución de potasio (K2Cr2O7) 1N.
• Añadir 10 mL de ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado (trabajar bajo campana)
y dejar en reposo por 30 minutos.
• Agregar 150 mL de agua destilada y añadir con una micropipeta 3 mL de ácido
orto fosfórico concentrado.
• Añadir con una micropipeta 0,5 mL de indicador de difenilamina.
• Titular con una solución de sulfato ferroso 0,5 N (preparada a partir de FeSO4
7 H2O) hasta que vire de verde intenso a verde pálido.

METODO OPTIMIZADO REDUCCION DE VOLUMEN

• Pesar 0,5 g aproximadamente (depende del color del suelo) de muestra de

suelo en un matraz Erlenmeyer de 250 mL.
• Agregar con una micropipeta 5 mL una solución de dicromato de potasio
(K2Cr2O7) 1N.
• Añadir 5 mL de ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado (trabajar bajo campana)
y dejar en reposo por 30 minutos.
• Agregar 150 mL de agua destilada y añadir con una micropipeta 3 mL de ácido
orto fosfórico concentrado.
• Añadir con una micropipeta 0,5 mL de indicador de difenilamina. Titular con
una solución de sulfato ferroso 0,5 N (preparada a partir de FeSO4 7 H2O) hasta
que vire de verde intenso a verde pálido.

57
Color del suelo

El color del suelo es una característica muy importante, es un indicador visual de la

cantidad de muestra se llega a pesar, estas varían si la muestra presenta un color oscuro
negro, rojo tomar una masa entre 0,2 - 0,3g; si la muestra es de un color pardo, amarillo
pardo tomar una masa entre 0,35 - 0,45 ; si la muestra es de color pardo claro, blanco
tomar una masa entre 0,5 – 1,0 g. aunque es una estimación aproximada se debe verificar
al realizar las determinaciones.

Además de la MO se realiza la determinación de parámetros básicos del suelo que se

desarrollan a continuación.

4.2. Análisis de los parámetros fisicoquímicos del MRI

Los cuatro parámetros fisicoquímicos del MRI determinados son pH, conductividad
eléctrica, fosforo asimilable y potasio (K) siguiendo los procedimientos estandarizados de
Laboratorio de Química Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la
Tecnología Nuclear – ABEN, siguiendo procedimientos que se describen:

4.2.1. pH y conductividad eléctrica (CE) en agua destilada

La medida de pH del suelo fue determinada en extractos de suelo y agua destilada,
utilizando un pH-metro. La Conductividad Eléctrica (CE) del suelo en extracto de suelo-
agua destilada fue determinada utilizando un conductímetro.

Para el análisis se realiza el siguiente procedimiento:

• En una balanza pesar 20 g de muestra de suelo en un vaso de precipitado de

250 mL.
• Medir en una probeta 100 mL de agua destilada y transferir a la muestra
pesada.
• Agitar el extracto de suelo-agua destilada empleando un agitador mecánico por
1 h.

58
 • Dejar en reposo el extracto-agua destilada por 24 horas para realizar la lectura
de pH y CE.
• Realizar la lectura de pH y CE en el extracto-agua destilada.

4.2.2. Determinación de fósforo

El estudio ha sido realizado con dos métodos de análisis de fósforo, estos métodos se
eligieron por el tipo de suelos acido o básico esto relacionado con el pH del suelo, en este
caso el método empleado debido al pH que presenta el MRI es el método Olsen que se
desarrolla a continuación:

Método Olsen

Olsen es el método recomendado para suelos calcáreos. En general puede usarse en

suelos neutros a alcalinos.

Extracción de la muestra

• Pesar 1,0000 g de muestra de suelo en vasos de precipitados de 100 mL.

• Agregar 0,5 g aproximadamente de carbón activado y agitar para homogenizar
la mezcla.
• Medir en una probeta 20 mL de bicarbonato de sodio (NaHCO3) 0.5 N a pH
8,5 y añadir a la muestra homogenizada.
• Inmediatamente agitar el extracto muestra-bicarbonato de sodio (NaHCO3)
con agitación mecánica durante 30 min.
• Filtrar la solución sobrenadante con papel filtro en viales de plástico.

Preparación de las muestras:

• Preparar las muestras en matraces aforados de 10 mL, agregar 1 mL de muestra

extraída.

59
• Agregar agua desionizada hasta la cuarta parte, añadir 0,2 mL de una solución
de molibdato de amonio, agitar y agregar 1 gota de cloruro de estaño (SnCl2
2H2O) se produce una coloración azul intenso.
• Aforar hasta los 10 mL con agua desionizada
• Tomar en cuenta que desde que se agita cada muestra se debe esperar 20 min
para que la solución se estabilice.

Preparación de los estándares de fosfatos.

• Preparar los estándares en matraces aforados de 50 mL.

• Para la curva de calibración de PO4−3, se prepararon estándares de 0 a 1,0 ppm
a partir de una solución patrón de PO4−3 de 250 ppm.
• Cada estándar se prepara como se muestra en la Tabla 4:

Tabla 4. Concentración de estándares de PO4−3

Estándar Concentraciones Alícuota (μL) Aforo (mL)

PO4−3 (ppm) PO4−3 250 ppm
1 0,000 0,0 50
2 0,200 40 50
3 0,400 80 50
4 0,600 120 50
5 0,800 160 50
6 1,000 200 50

• A cada matraz aforado se agrega agua desionizada hasta la cuarta parte, se

añade 2 mL de una solución de molibdato de amonio se agita y se agrega a
cada matraz 5 gotas de cloruro de estaño (SnCl2 2H2O) produciendo una
coloración azul intenso debido a la reducción del molibdofosfórico a azul de
molibdeno.

60
 • Se debe tener en cuenta que desde que se agita cada estándar se debe esperar
20 minutos para que la solución se estabilice.
• Luego se realiza la lectura en el espectrofotómetro a 640 nm.

Las lecturas de absorbancias de cada estándar y de las muestras se realizan en un

espectrofotómetro UV-VISIBLE.

Para el análisis de fósforo se trabaja a una longitud de onda máxima de 640 nm y una
lámpara de tungsteno. Para las lecturas de estándares y muestras se utiliza dos celdas de
cuarzo de 1 cm de paso óptico en una celda se coloca agua desionizada para el blanco y
la otra para estándares y muestras.

4.2.3. Determinación de potasio (K)

El método se basa en el desplazamiento de los cationes potasio empleando una solución

de acetato de amonio (CH3COONH4).

En el mismo filtrado se determina el sodio y potasio

Para el análisis se sigue el siguiente procedimiento:

− Empleando una balanza pesar 1,5000 g de muestra de suelo en un matraz

Erlenmeyer de 125 mL.
− Añadir 20 mL de acetato de amonio (CH3COONH4) 1 N.
− Cubrir con Parafilm y agitar el extracto de suelo-acetato de amonio empleando
un agitador mecánico por 1 h.
− Dejar en reposo el extracto acetato de amonio por 24 h.
− Una vez reposado se filtra el extracto en viales de vidrio.
− El extracto CH3COONH4 se emplea directamente para el análisis de K.
− La lectura se realiza en un flamómetro de llama

El rumbo de la investigación es la determinación de Materia Orgánica optimizando el

método de Walkley y Black empleando Material de Referencia Interno (MRI) para esto
se sigue el siguiente procedimiento
61
 4.3. Determinación de Homogeneidad

De las muestras de suelos obtenidas para cada orden se tomaron 8 para evaluar la
homogeneidad, esta cantidad se determinó utilizando la siguiente ecuación: citada por
(Lichtenberg, 2006)

3
h = 3 ∗ √N

Para la selección de cuales muestras se realizó un sorteo aleatorio en el programa Excel.

4.4. Determinación de Estabilidad

Del material de referencia se realizó el análisis de fósforo, potasio, después de tres

meses en la misma muestra de MRI tomadas y analizadas para homogeneidad, para la
eliminar datos anómalos se utilizó el test de Grubbs comparados con los valores críticos
de G (P=0.05) en un contraste de dos colas.

(media − valor verdadero) ∗ √n

t cal
s

Donde tcal es el valor calculado de t, la media es el promedio de las muestras, el valor

verdadero es el promedio de los resultados de homogeneidad, n es el número de
observaciones y s es la desviación estándar de las muestras.

62
 CAPITULO V

5. RESULTADOS Y DISCUSIONES

5.1. Homogeneidad y reproducibilidad de los parámetros fisicoquímicos de suelos

5.1.1. Parámetros fisicoquímico

OPTIMIZACION DEL METODO WALKLEY Y BLACK

Resultado de la determinación de materia orgánica (MO) obtenido en el Laboratorio de

Química Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la Tecnología Nuclear
– ABEN Viacha.

Tabla 5. Resultado de la determinación de materia orgánica (MO)

% MO

RELACION SAL DE MORH SULFATO REDUCCION DE

FERROSO H2SO4

Promedio 0,659 0,645 0,664

Desviación 0,039 0,040 0,039

estándar

CV 5,84 6,18 5,91

N° de muestras 14 6 8

63
 Tabla 6. Resultados del análisis estadístico

%MO ref. %MO Mod1 %MO Mod2

Media 0,659 0,645 0,664

Error típico 0,0103 0,0163 0,0139

Mediana 0,66 0,62 0,67

Moda 0,62 0,62 0,62

Desviación estándar 0,039 0,040 0,039

Varianza de la muestra 0,0015 0,0016 0,0015

Curtosis -2,22 -0,46 -2,14

Coeficiente de asimetría 0,01 1,21 -0,17

Rango 0,08 0,09 0,09

Mínimo 0,62 0,62 0,62

Máximo 0,70 0,71 0,71

Suma 9,23 3,87 5,31

Cuenta 14 6 8

CV 5,84 6,18 5,91

Límite de confianza (95,0%) 0,022243 0,041846 0,032819

Mediante un análisis de varianza se puede conocer si existen diferencias significativas

entre los valores de %MO entre los tres métodos ensayados, así como posibles variaciones
dentro de cada método ensayado.

Se plantean las hipótesis:

– H0: las medias poblacionales de los grupos de datos no son significativamente

diferentes.

64
 H0 : μ1 = μ2 = μ3 = ⋯ = μI

– H1: las medias poblacionales de los grupos de datos son significativamente

diferentes

H1 : μ1 ≠ μ2 ≠ μ3 ≠ ⋯ ≠ μI

Se obtiene el Análisis de varianza de un factor:

RESUMEN

Tabla 7. Análisis de varianza de un factor

Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza

%MO ref. 14 9,23 0,6593 0,00148

%MO Mod1 6 3,87 0,6450 0,00159

%MO Mod2 8 5,31 0,6638 0,00154

ANALISIS DE VARIANZA

Tabla 8. Valores de varianza

Origen de las Suma de Grados Promedio F Probabilidad Valor

variaciones cuadrados de de los crítico
libertad cuadrados para F

Entre grupos 0,00129464 2 0,00064732 0,426 0,6580682 3,385

Dentro de los 0,03803036 25 0,00152121

grupos

Total 0,039325 27

Si Fcalc > Fcrit Rechaza H0, comparando los valores de F: 0.426 > 3.385 no se cumple
y, por tanto, se Acepta H0, por lo que con un nivel de confianza del 95% las medias
poblacionales de los de datos de los métodos ensayados no son significativamente

65
diferentes. Al no existir diferencia significativa entre los métodos se puede seleccionar el
método modificado 2 para realizar las determinaciones de Materia Orgánica en suelos.

El valor del %MO en el material de referencia corresponde a 0.6359%, determinado

por Mamani R. (2018), entonces asumiendo este valor como verdadero se pueden
comparar las medias obtenidas por los tres métodos ensayados para evaluar si existe
diferencia significativa con el Valor de Referencia.

Se plantea la Hipótesis

− H0: La media calculada por el método ensayado no difiere significativamente del

valor supuesto

− H1: La media calculada por el método ensayado difiere significativamente del

valor supuesto

Se calcula el parámetro de prueba t de Student de acuerdo con la siguiente ecuación:

√n
t = (x̅ − μ) ∗
s

dónde

x̅ : La media calculada para el conjunto de resultados

μ: Valor de referencia

s: la desviación estándar del conjunto de resultados sobre la cual se calculó la media

n: el número de resultados

Se comparar el valor calculado con el valor crítico de un parámetro, para el nivel de

significancia asumido α, el número calculado de grados de libertad ν = n – 1.

Si el valor t no supera el valor crítico tcrit, t ≤ tcrit, entonces se puede inferir que la
media obtenida no difiere significativamente del valor establecido – aceptación de la
hipótesis Ho

66
 Tabla 9. Valores de la media optenida

MUESTRA VALOR MEDIA s n t tcrit l t l< tcrit

RERERENCIA

1 0,6359 0,659 0,039 14 2,271 2,160 Rechazo Ho

2 0,6359 0,645 0,040 6 0,559 2,571 Acepto Ho

3 0,6359 0,664 0,039 8 2,007 2,365 Acepto Ho

Se puede concluir que las medias del método Walkley y Black determinación de
Materia Orgánica con el método de referencia medido actualmente difiere
significativamente del MRC obtenido por primera vez (Mamani, 2018) sin embargo, los
métodos modificados no difieren significativamente de MO.

Para las muestras de los tres procedimientos en la determinación de MO se obtuvieron

buenos resultados; con valores de desviación estándar y del coeficiente de variación (CV)
que está dentro del rango de aceptación como se puede ver en la Tabla 5 y 6.

La desviación estándar muestra la dispersión en la que los puntos de datos difieren de

la media, una desviación baja indica que los puntos de datos están muy cerca a la media,
mientras que una desviación alta muestra que los datos están dispersos en un rango mayor
de valores por tanto el valor de la desviación estándar en tablas muestra una dispersión
baja es decir los valores son cercanos a la media.

Viendo el coeficiente de variación el cual se utiliza para comparar la dispersión ,

variación del conjunto de datos de medidas diferentes mientras mayor sea el coeficiente
de variación mayor será la dispersión en los datos, en las Tablas 5 y 6 el CV no sobrepasa
el 6% el cual nos indica cuan preciso es el valor al igual que la reproducibilidad de los
resultados.

Si se observa cada uno de los resultados obtenidos en cuanto a % de contenido de M.O.

que los contenidos son de 0,66; 0,64; 0,66 % y de acuerdo a estos valores pertenecen a la
categoría muy bajo según la clasificación de Villarroel (1988).

67
 pH y conductividad eléctrica

Se realizo la determinación de pH y conductividad eléctrica y se obtuvieron los

resultados que se presentan en la Tabla 10.

Tabla 10. Resultado de pH y CE de CIAN, Viacha

RELACIÓN pH CE (mS/cm )

Media 8,732 0,733

Desviación estándar(σ) 0,131 0,00354

CV 1,500 0,483

Nº de muestras 10 10

Intervalo de confianza 0,0937 0,002

(95,0%)

Estos resultados son de un análisis anterior que se realizó a la misma muestra (MRI)
(Mamani R.,2018) el cual nos sirve como referencia y punto de comparación.

Tabla 11. Resultado de pH y CE de CIAN, Viacha

pH CE dS/cm

Valor asignado 8,73 0,73

Valor medido 8,50 0,70

CV 1,50 0,48

El valor de pH como de conductividad eléctrica anterior como el medido para este

trabajo muestran valores cercanos es decir que a pesar del tiempo transcurrido el material
de referencia mantiene un valor no tan alejado del medido inicialmente mostrando que el
tiempo no afecta de sobremanera el valor de la misma de igual manera se muestra un
coeficiente de variación menor al 2% el cual nos indica la precisión del valor.

68
 Determinación de fósforo

Realizado el procedimiento con el método Olsen se obtienen los resultados que se

presentan en la Tabla 12.

Tabla 12. Resultado del determinación de fosforo (Olsen) en la provincia Ingavi-

Viacha

CIAN

RELACIÓN mg P/kg

Media 18,011

Desviación estándar(σ) 1,655

CV 9,188

Nº de muestras 10

Intervalo de confianza (95,0%) 1,184

Observando la Tabla 13 el coeficiente de variación (CV) para la muestra de Viacha es

≤ 10%. Se determinó el contenido de fósforo asimilable de la muestra de Viacha que es
18,01 mg/kg y de acuerdo al contenido de P asimilable pertenece a la categoría medio
según la clasificación de Villarroel (1988) estos valores pertenecen a un análisis anterior
(Mamani R., 2018).

Tabla 13. Resultado del determinación de fosforo valor medido valor asignado

Fosforo ppm

Valor asignado 18,01

Valor medido 17,50

CV 9,19

69
 Comparando los valores de fósforo se observa la diferencia que existe entre ambos
valores esto se debe a la diferencia de tiempo que hay mostrando un coeficiente de
variación menor al 10% el cual significa que existe una precisión aceptable.

Determinación de potasio

Se realizó la determinación de Potasio y se obtuvieron los resultados presentados en la

Tabla 14:

Tabla 14. Resultado de la determinación de potasio (K) en la provincia de ingavi-

Viacha

meq K /100g

RELACIÓN CIAN

Media 0,4520

Desviación estándar(σ) 0,0300

CV 6,63716

Nº de muestras 10

Intervalo de confianza 0,0215

(95,0%)

En la determinación de K se realizó 10 repeticiones mostrando un contenido de K de

0,45 meq/100g y de acuerdo a esto pertenece a la categoría bajo este análisis fue realizado
con anterioridad (Mamani R., 2018)pero es un punto de comparación para la siguiente
tabla.

70
 Tabla 15. Resultado de la determinación de potasio (K) valor asignado valor medido

Potasio meq/100 g

Valor asignado 0,45

Valor medido 0,41

CV 6,64

Los valores de K medidos en este trabajo no difieren en gran magnitud con los valores
medido en un anterior trabajo mostrando un coeficiente de variación menor al 7 %
mostrando de esta manera la precisión del valor resultante.

5.2. Evaluación de los parámetros del material de referencia interno (MRI)

5.2.1. Homogeneidad
Para MRI establecido en un trabajo anterior (Mamani R., 2018) solo presenta el
coeficiente de variación≤ 7% para los parámetros: pHH2Ol, CE, %MO y K; mientras que
para los parámetros de %MO y P presentan valores de CV que están en el rango de 8 -
14% que significa que existe una precisión aceptable según DANE (2008).

En la Tabla 13 se han colocado valores del promedio, la desviación estándar y el

coeficiente de variación de los análisis de las 6 muestras tomadas para las 3
modificaciones del método mostrando de esta manera que los valores de la media no varía
en gran magnitud de igual forma se muestra los valores de la desviación estándar, ahora
el coeficiente de variación si presenta una ligera variación no mayor al 7% en cuanto a
resultados siendo precisa, no se puede decir lo mismo del valor de coeficiente de variación
del trabajo anterior el cual a pesar de tener un valor de precisión aceptable no es precisa
como los valores obtenidos en este trabajo.

71
 Tabla 16. Valores promedios, desviación estándar y coeficiente de variación del
análisis de material de referencia interno.

Parámetro Unidades MRI (optimizado) MRI (anterior)

Media σ CV Media σ CV

MO (sal de % 0,6349 0,0201 3,170 0,6359 0,0788 12,391

Mohr)

MO (sulfato % 0,647 0,0370 5,711

ferroso)

MO (red. De % 0,652 0,0232 3,567

H2SO4)

Según la evaluación estadística se verifica que la muestras y los resultados obtenidos

llegan a garantizar que MRI (optimizado) y MRI (anterior) son muestras homogéneas.

5.2.2. Estabilidad

Se realiza la evaluación de estabilidad en el análisis de Materia Orgánica (MO) por el

método Walkley y Black empleando diferente titulante y variando volumen de H2SO4,
del material de referencia se realizó el análisis de MO después de tres meses tomadas y
analizadas para homogeneidad, para determinar si existen diferencias significativas en el
tiempo o estabilidad.

En la Figura 10 se presenta la determinación de MO empleando como titulante la sal

de Mohr

72
 MO con Sal de Mohr
0.72

0.70

0.68

% MO 0.66

0.64

0.62

0.60
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo dias)

Figura 10. Grafica de materia orgánica con titulante sal de Mohr

En la figura 11 se presenta la determinación de MO empleando como titulante sulfato

ferroso

MO con Sulfato Ferroso

0.72

0.70

0.68
% MO

0.66

0.64

0.62

0.60
0 1 2 3 4 5 6 7
Tiempo (dias)

Figura 11. Grafica de materia orgánica con titulante Sulfato Ferroso

En la figura 12 se presenta la determinación de MO con la reducción de ácido sulfúrico

73
 MO reducción de H2SO4
0.72

0.70

0.68

% MO
0.66

0.64

0.62

0.60
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Tiempo (dia

Figura 12. Grafica de materia orgánica con titulante Sulfato Ferroso y reducción de
volumen de H2SO4

En la Figura 13 se presenta la estabilidad de la determinación de MO

ESTABILIDAD
0.80
0.75
0.70
0.65
% MO

0.60
0.55
0.50
0.45
0.40
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (dias)

SAL DE MORH SULFATO FERROSO REDUCCION DE H2SO4

Figura 13. Grafica de la estabilidad de Materia Orgánica

74
 El Material de Referencia Interno empleado fue elaborado en el laboratorio de Química
Analítica y Ambiental de la Dirección de Aplicaciones de la Tecnología Nuclear – ABEN
con anterioridad siendo la misma caracterizada en los parámetros fisicoquímicos de pH
en extracto acuoso, pH en extracto de KCl, Conductividad Eléctrica (CE), Acidez de
Cambio, Nitrógeno, Materia Orgánica, Fósforo asimilable y Cationes intercambiables
(Ca, Mg, Na, K), en el trabajo actual los parámetros analizados fueron pH, Conductividad
Eléctrica, Potasio y Fosforo asimilable y como objetivo principal en la modificación del
método Walkley y Black par a la determinación de Materia Orgánica evaluando variables
de la preparación de MRI (homogeneidad, estabilidad y repetibilidad).

Verificar la homogeneidad y la estabilidad de las muestras son condiciones mínimas

ya que ambos parámetros se estiman mediante análisis estadístico de las medidas de
muestras seleccionadas.

Figura 14. Gráfico resumen

75
 CAPITULO VI

6. CONCLUSIONES

La optimización el método Walkley y Black para la determinación de materia orgánica

empleando Material de Referencia Interno consiste en el cambio de titulante de sulfato
ferroso amoniacal por sulfato ferroso heptahidratado y la mejor optimización que se
alcanzo es la reducción de H2SO4.

La caracterización de la muestra de suelo (MRI), se realizó por el método volumetrico,

todo el análisis químico se realizó en el Laboratorio de Química Analítica y Ambiental de
la Dirección de Aplicaciones de la Tecnología Nuclear – ABEN determinando los
parámetros de eficiencia mediante contrastes estadísticos verificando la homogeneidad
por la repetibilidad de los resultados para cada uno de los parámetros químicos
considerados, siendo prioritario la determinación de Materia Orgánica.

A partir de los resultados obtenidos de los análisis de la muestra de MRI se concluye

que:

La optimización del método Walkley y Black es adecuada para la Determinación de

Materia Orgánica debido a que los valores obtenidos empleando sal de Mohr son de
0,66% con sulfato ferroso heptahidratado 0,65% y con la reducción de ácido sulfúrico
0,67% estos valores no están alejados entre si a pesar de que se realizo variaciones y
reducciones durante el procedimiento.

Los ensayos de laboratorio con las nuevas variables establecidas fueron realizados de
forma apropiada tomando los diferentes valores en las modificaciones alcanzando
resultados similares de Materia Organica (media) como se muestra en el siguiente
resumen:

76
 METODO MATERIA DESVIACION COEFICIENTE LIMITE DE
ESTANDAR DE VARIACION
ORGANICA CONFIANZA

sal de Mohr 0,63 % 0,039 5,84 0,02224

sulfato ferroso 0,65 % 0,040 6,18 0,04185

reducción de ácido 0,65 % 0,039 5,91 0,03282

Mostrando de esta manera la precisión y la cercania de los resultados alnzando un limite

de confianza optimo.

La optimización realizada permite alcanzar una variación adecuada para poder ser
implementada este procedimiento para la Determinación de Materia Orgánica en muestras
de suelo.

De acuerdo a la evaluación de la homogeneidad del MRI los coeficientes de variación

en la determinación de Materia Orgánica presentan valores ≤ 7%que se considera como
precisa.

Los parámetros fisicoquímicos de suelo como ser pH, conductividad, fosforo

asimilable y potasio también presentan valores similares a los medidos con anterioridad
como se muestra en el siguiente resumen:

PARAMETRO VALOR VALOR

FISICOQUIMICO ANTERIOR ACTUAL

pH 8,73 8,50

CE (mS/cm) 0,73 0,70

Fosforo (ppm) 18,01 17,50

Potasio (meq/100 g) 0,45 0,41

Mostrando que estos parámetros no cambian significativamente con el tiempo.

77
 Finalmente se concluye que la muestra es estable con el tiempo al igual que con la
optimización del método, por lo tanto, este material de referencia interno MRI al igual que
el procedimiento (optimización del método Walkley y Black) pueden ser empleados para
la determinación de Materia Orgánica en el análisis de suelos reduciendo de gran manera
el costo de reactivos empleados así mismo la contaminación generada por las mismas.

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81
 8. ANEXOS

Anexo 1 . Curvas de calibración para la determinación de P y K

Curva de calibración para la determinación de P asimilable por el método Olsen de un

trabajo anterior (Mamani R., 2018) el cual es empleado como referencia en este trabajo:

Curva de calibración para la determinación de K

82
 Anexo 2. Parámetros utilizados para la interpretación de los resultados del análisis
químico de los suelos según Villarroel, (1988)

Reacción (pH) del suelo

Conductividad eléctrica del suelo en extracto de saturación

Fosforo asimilable

Método Olsen

83
Potasio Intercambiable

Método: Fotómetro de llama Perkim – Elmer (meq/100 g de suelo)

Materia Orgánica

Método de Walkley y Black

84
Anexo 3. Datos de masa de muestra y volumen de ácido y de titulante de estudio de
estabilidad de Materia Orgánica en muestras de Material de Referencia Interno

MATERIA ORGANICA (TITULANTE: SAL DE MOHR)

ml
CÓDIGO PESO ml K2Cr2O7 ml H2SO4 Titulante %MO
MRC-2 0,51 5 10 9,6 0,69
MRC-3 0,5 5 10 9,9 0,70
MRC-3 0,52 5 10 9,6 0,68
MRC-3 0,5 5 10 9,5 0,62
MRC-3 0,55 5 10 9,5 0,64
MRC-3 0,5 5 10 10 0,62
MRC-3 0,5 5 10 9,7 0,62
MRC-3 0,5 5 10 10,1 0,62
MRC-3 0,5 5 10 9,2 0,70
MRC-3 0,5 5 10 9,4 0,62
MRC-3 0,5 5 10 9,7 0,70
MRC-3 0,5 5 10 9,9 0,70
MRC-3 0,5 5 10 9,3 0,62
MRC-3 0,5 5 10 9,6 0,70

MATERIA ORGANICA (TITULANTE: SULFATO FERROSO)

ml ml
CÓDIGO PESO K2Cr2O7 ml H2SO4 Titulante %MO
MRC-2 0,5 5 10 9,7 0,62
MRC-3 0,5 5 10 9,5 0,62
MRC-3 0,52 5 10 9,2 0,68
MRC-3 0,5 5 10 9,2 0,62
MRC-3 0,55 5 10 9,2 0,71
MRC-3 0,5 5 10 9,5 0,62

85
MATERIA ORGANICA: REDUCCION DE H2SO4

ml ml
CÓDIGO PESO K2Cr2O7 ml H2SO4 Titulante %MO
MRC-2 0,5 5 5 9 0,70
MRC-3 0,5 5 5 9,4 0,70
MRC-3 0,52 5 5 9,2 0,68
MRC-3 0,5 5 5 9,2 0,62
MRC-3 0,55 5 5 9,2 0,71
MRC-3 0,5 5 5 9,5 0,62
MRC-3 0,53 5 5 9,5 0,66
MRC-3 0,5 5 5 10,1 0,62

Anexo 4. Imágenes del lugar d trabajo,

Lugar de trabajo para la determinación de materia orgánica

Flamómetro de llama para la determinación de potasio

86
Laboratorio de volumetría

Laboratorio de espectrometría UV – VIS

Anexo 5. Balanzas empleadas en el procedimiento para pesar las muestras de suelo

Balanzas analíticas de diferentes marcas : 1)

87
Anexo 6. Equipos empleados para los distintos parámetros fisicoquímicos presentes en el
trabajo como ser pH, CE, Fosforo asimilable y potasio.

pH – metro THERMO SCIENTIFIC, conductímetro OAKTON

Equipo de espectrofotómetro UV-VISIBLE de doble haz (heλius α)

Flamómetro

88
 Anexo 7. Imágenes del cambio de color durante el procedimiento en la determinación
de materia orgánica

Momento antes y después de la titulación de Materia Organica

89
Anexo 8. Certificado de Pasantia de la Agencia Boliviana de Energia Nuclear

90