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Mtodos aplicados para

-caroteno
Dra. Paz Robert C.
Universidad de Chile
Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacuticas
Dpto. Ciencia de los Alimentos y Tecnologa Qumica
Qumica de Alimentos y Materias Grasas
Taller FAO, 2008
Estructura bsica

Tetraterpeno de 40 carbonos, simtrico


y lineal formado a partir de 8 unidades
isoprenoides de 5 C unidas de manera
tal que el orden se invierte en el centro.

Amplio sistema de doble enlace


conjuado.
Anlisis de
Carotenoides
-caroteno
Provitamina A
Provitamina A
Carotenos principales
Composicin
completa
Dependiendo del grado de informacin deseado
Caractersticas espectrales
Caroteno Solvente

max
1%
A
1 cm
!caroteno
Acetona "4#$% 45# 4&8 !
cloroformo "4'5% 4() 485 #'$(
etanol "4#5% 450 4&8 #(#0
*e+ano "4#5% 450 4&& #5$#
,spectro de absorci-n de
carotenoides son dependientes del
solvente
).
A
)cm
usado en el c/lculo de la concentraci-n
tambin var0a marcadamente con el solvente
Carotenoides en soluci-n obedecen la 1ey de
1ambert!2eer. 3u absorbancia es directamente
proporcional a la concentraci-n.
2ritton, )$$54 5odriue6!Amaya. #00)
TRANS CAROTENO
EPOXICAROTENOS
APOCAROTENOS
COMPUESTOS E
!A"O PESO MO#ECU#AR
CIS-CAROTENOS
o$idacin
isomeri%acin
o$idacin
POSI!#E ES&UEMA E E'RAACI(N E CAROTENOS
Prdida de color
Prdida valor nutritivo
Prdida de sabor
Molculas altamente
insaturadas
... 7someri6aci-n cis

causa leve prdida de color, disminuci-n


de # a ( nm en la , aparici-n de un pic8
en la rei-n 9:
)5!cis
)'!cis
trans
1icopeno
Procedimiento Analtico

;uestreo y preparaci-n de la muestra

,+tracci-n con acetona en frio

Transferencia "partici-n% a ter de petr-leo,


*e+ano, eter et0lico

3aponificaci-n y lavado

Concentraci-n en evaporador rotatorio


"<'5=C%

3eparaci-n cromator/fica

7dentificaci-n y cuantificaci-n.
Muestreo y preparacin de la muestra.
1. Homogenizacin de
la materia prima
2. Extraccin con
acetona en fro
Particin a ter de petrleo
Separacin OCC
)M* porcenta+es crecientes de
acetona en ,ter de petrleo
M-O * Celite ./*/0
Espectro de a1sorcin U232IS4 R54 orden de el6cin cromato-r5ica
reacciones espec75icas8
Fases Estacionarias-OCC

Al>mina

30lica

CaC?
'

Ca(OH)
2

MgO

ZnCO
3

Tierras silceas "tierra de diatomeas,


8ieselu*r, *yflosupercel%

Celulosa, almid-n, de+tran cross!lin8ed


"sep*ade+%, @olietilen

;e6clas de ellos
5odriuea!Amaya, #00)
Criterios de identificacin OCC
,spectro de absorci-n 9:!:is
de acuerdo con el crom-foro
suerido
@ropiedades cromator/ficas
concordantes en dos sistemas
diferentes. ?rden de salida
?CC y 5
f
"T1C%.

,structura fina del espectro


".777 A 77%B)00
2ritton, )$$5
Espectro de absorcin
max

zeinoxantina 421 445 474

-criptoxantina 421 445 475

Luteina 421 445 475

-criptoxantina (425) 449 476

zeaxantina (424) 449 476


Espectro de absorcin
max
Mtodos Oficiales AOAC

Carotenos en plantas frescas C*!45


"$4).)5% Amtodo espectrofotomtrico.

Carotenos y +antofilas en plantas


secas y alimentos me6clados C*!45
"$&0.(4%A mtodo espectrofotomtrico

Carotenos y carotenoides en
productos de macaroni C*!'# "$'8.04%

Carotenos y carotenoides en *uevos


C*!'# "$'8.04%
Carotenos en plantas frescas

@imentos solubles en rasa, e+tra0dos y cromatorafiados para


remover clorofilas e *idro+icarotenos, los cuales son determinados
espectrofotomtricamente y e+presados como beta!caroteno
;9,3T5A
,+tracci-n
Acetona A*e+ano "40C(0%
C?19;DA
,luci-n
acetonaE*e+ano ")C$%
,3@,CT5?F?T?;,T5G
A
4'( nm
;?E*yflosupersel ")E)%
Carotenos y xantofilas en plantas secas y alimentos
meclados
;uestra aua
He+ano!acetona!etanol
absoluto!tolueno ")0C&C(C&%
3aponificaci-n en caliente
3aponificaci-n en fr0o
3ilica el IC*yflosupersel ")E)%
Carotenos
Carotenos

He+anoEacetona "$(C4%, 4'( nm


;HC
;HC

He+anoEacetona "$0C)0% 4&4 nm

Jeino+antina, cripto+antina
KHC
KHC

He+anoEacetona "80C#0% 4&4 nm

1uteina, 6ea+antina
+antofilas
+antofilas

He+ano4acetonaEmetanol "80E)0E)0%

:iola+antina, neo+antina, otros


;?E*yflosupersel ")E)%
Carotenos

He+anoEacetona
"$0C)0%
Total
+antofilas

He+ano4acetonaEmetan
ol "80E)0E)0%
!eparacin-"P#C
Fase inversaFases enla!a"as
5@!)8 - C)8
5@!8 - C8
C!'0
Dtrilo, amino
Fase #nversaH$%C
Columnas enla6adas 5@!)8E Aplicable a
carotenoides de todos los niveles de
polaridad.
;ateriales 5@ son inertes, formaci-n de
artefactos es m0nima.
3e puede trabajar en elusi-n con radiente
!eparacin-"P#C
Fase &ormal

Slice
compuestos son elu0dos de acuerdo a su polaridad, >til para
separaci-n de +antofilas, los carotenos son pobremente
resueltos
Al'mina( Ca(OH)
2
@ara alunas separaciones especiales. @resentan
dificultades pr/cticasE tienen una vida corta y necesitan un
control riuroso de *umedad
Fase &ormal
Ca"?H%
#
Al>mina
30lice
Criterios de identificacin-"P#C
$iempos de retencin t
r
~$iempo de retencin relati%o
$&& ' t
r(i
) t
r(st
Adicin a la muestra del componente
supuesto* normalmente se a+re+a a la
muestra( el supuesto componente i y se
%e cual pico crece.
Correlaciones +r,ficas de estructura
-retencin
Criterios de identificacin "P#C
Espectro de absorcin -.-.is
de acuerdo con el cromforo
su+erido
Propiedades cromato+r,ficas
concordantes en dos sistemas
diferentes.
_Espectro de masas /ue
confirme por lo menos la masa
molecular.
Cuantificacin
*Curva de calibraci-n
Comparaci-n con muestras de
concentraci-n conocida
C
s
AC
st
L A
s
AA
st

3tandard 7nterno
F
i
"C
i
AC
st
% L "A
st
AA
i
%
Caracter7sticas espectrales de carotenoides
identi5icados
!raccin !ase movil "dentificacin #f$$
1 %& acetona '(2)* ((+ (,) -./aroteno 012+ '(2%* (%0 (,,
2 10& acetona '(22* ((( (,2 3einoxantina 01(4 (21 ((% (,%
4 20&acetona (%0 5pocarotenal prob. 012+
( 40.(0& acetona '(2(* ((2 ()+ 5nteroxantina prob 0112 '(22* ((% (,2
% )0& acetona '(22* ((2 (,2 6utena 0112 '(21* ((% (,(
zeaxantina '(2(* ((2 (,)
) 100& acetona (42 (%+ (++ #ubixantina 01%2 (4( ()0 (20
, 10& agua.acetona ((2 ()+ %00 6icopeno 012+ ((( (,0 %02
$ Davies1 12,)7 #odriguez.5ma8a1 1222
$$ Placa de slice1 !M metanol %& en benceno
M9x long de onda M9x long de onda
6iteratura$
Rosa mos96eta (Rosa Rubiginosa)
"P#C 0&osa Mos/ueta1
Col)mna* +$1, s-mmetr-( .)( 2./ mm
Fase m0vil* acetonitrilo* metanol* acetato "e etilo (1.* 2/* 1.)
Fl)2o* 1ml3min
-caroteno
Licopeno
Rubixantina
$omate
2ana3oria
Identi5icacin por T
rr
con patrones e$tra7dos8

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