Metodos Histoquimicos 1
Metodos Histoquimicos 1
Metodos Histoquimicos 1
GERMAN OSORIO
• LA FINALIDAD DE UNA COLORACIÓN es crear un contraste entre el BLANCO Y EL MEDIO
QUE LO RODEA.
PRINCIPIOS FUNDAMENTALES
Mecanismos de unión
• PROBLEMAS MÁS COMUNES EN LA TINCIÓN
1. Tinción excesiva
2. Coloración pálida.
3. Precipitados de los colorantes.
1. Excesiva celularidad.
2. Excesiva dilución celular.
3. Contaminación sanguínea.
4. Presión excesiva.
5. Secado defectuoso.
6. Fijación inadecuada.
7. Coloración inadecuada.
TINCION DE GRAM
Tinción de
gram
Compuesta Diferencial
Divide a las
Varios
bacterias en
reactivos
dos grupos
GRAM POSITIVO
GRAM NEGATIVO
FUNDAMENTO DE LA COLORACION DE GRAM
ANATOMIA PATOLOGICA
• Use rojo neutro en lugar de safranina; organismos gram negativos
generalmente se tiñen mal debido a que su lípido bacteriano de la pared se
elimina en el procesamiento de tejidos
• Nota: con la tinción de hematoxilina y eosina en las secciones de parafina,
las bacterias aparecen como barras azules o cocos independientemente de la
reacción del gramo; las colonias aparecen como grupos azules difusos
MICROBIOLOGIA
• La estrategia de diagnóstico rápido para muestras de lavado
bronquioalveolar consiste en la tinción de Gram y el ensayo bacteriano ATP
( Arch Pathol Lab Med 2005; 129: 78 )
• No es adecuado para superficies con quemaduras ( Arch Pathol Lab Med
2003; 127: 1485 )
BACTERIAS
METODO OBJETIVO
GRAM MAYORIA DE LAS
BACTERIAS
BAAR MICOBACTERIAS,
NOCARDIA
TINCIONES DE PLATA HONGOS Y AMEBAS
MUCICARMIN CRIPTOCOCOS
GIEMSA CAMPYLOBACTER,
LEISHMANIASIS,
TRYPANOSOMA,
PLASMODIUM
La coloración de Gram
• Secciones de parafina de 8 µm de grosor teñidas con hematoxilina y eosina (A) y con PAS y
hematoxilina (B). Las secciones pertenecen a campos similares del digestivo. La tinción de fucsia
corresponde al reactivo de Schiff, el cual marca mucopolisacáridos de las células caliciformes.
• Esophageal candidiasis, PAS stain
A PAS stain demonstrates the abundant glycogen that is present within the
cytoplasm of the hepatocytes. The process of glycogen storage is promoted by the
hormone insulin from beta cells of pancreatic islets, while glycogenolysis with
gluconeogenesis is stimulated by glucagon release from alpha cells of the islets of
Langerhans. Bile canaliculi between the plates of hepatocytes drains toward the
triad at the left.
PAS DIASTASA (CONTROL)
PAS AZUL ALCIAN
REACTIVOS
• Solución de hematoxilina férrica de Weigert.
• Solución de escarlata de Biebrich – fucsina ácida:
• 1 cc de ácido acético glacial.
• Solución acuosa de ácido fosfomolíbdico (utilizar ácido fosfotúngstico en la
misma proporción, si se va a teñir con verde luz):
• Solución de azul de anilina o Solución de verde luz al 2%.
• Solución diferenciadora: solución acuosa de ácido acético glacial al 1%.
TRICROMICO DE MASSON
• Requiere mordentaje en Bouin.
• Tincion con hematoxilina férrica.
• Se tiñen las secciones con un tinte ácido como escarlata de Biebrich.
• Todos los elementos acidófilos del tejido tales como el citoplasma, el músculo y el
colágeno se unirán a los tintes ácidos.
• Las secciones entonces se tratan con ácido fosfotúngstico y/o fosfomolíbdico. Ya
que el citoplasma es mucho menos permeable que el colágeno, los ácidos
fosfotúngsticos y fosfomolíbdicos permiten que la escarlata de Biebrich difunda del
colágeno pero no del citoplasma.
• Los ácidos fosfotúngsticos y fosfomolíbdicos tienen numerosos grupos ácidos que
probablemente actúen como medio de unión entre el colágeno y el (verde luz)
azul de la anilina, que es el tinte del colágeno.
• Probablemente, el pH de la solución fosfotúngstico/fosfomolíbdico también
aumente la coloración y ayude al colágeno en la difusión o el retiro de los colorantes.
• Se usa acido acetico como diferenciador.
TRICROMICO DE MASSON (colagenas)
• Colageno tipo 1: azul oscuro
• Colageno tipo 2 y 3: azul claro
• Tejido muscular: pardo rojizo
• Tejido epitelial: rojizo.
• Nucleos : negro o violeta
• Citoplasma: rojo o rosado
• Las coloraciones tricrómicas, son tinciones especiales que permiten visualizar claramente las
fibras de colágeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseñados para dar resistencia; en
menor intensidad se tiñen las fibras reticulares. Se emplean tres colorantes para diferenciar los
núcleos, citoplasma y las fibras de colágeno.