TINCIONES Y TECNICAS

DE OBSERVACIÓN
MICROSCOPICA
 Tinciones
 Una tinción o coloración es una técnica auxiliar
utilizada en microscopía para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio.

 Los colorantes y tinturas son sustancias que

usualmente se utilizan
en biología y medicina para resaltar estructuras
en tejidos biológicos que van a ser observados
con la ayuda de diferentes tipos de microscopios.

 Los diferentes colorantes pueden ser utilizados

para aumentar la definición y examinar grandes
cortes de tejido (resaltando por ejemplo fibras  Los tejidos que adquieren el
musculares o tejido conectivo), mismo color del colorante
poblaciones celulares (por ejemplo clasificando reciben el nombre de
diferentes células sanguíneas) o incluso para ortocromáticos
resaltar organelas dentro de células individuales.
 Los tejidos que adquieren un
color diferente al del colorante
son metacromáticos.
Citoquímica
 Identifica los componentes químicos y
bioquímicos de las células.

 Se pueden identificar iones, que es muy

difícil porque son muy diminutos y éstos se
encuentran unidos a proteínas.
 Lunes

TIPO DE OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS

Observación en fresco
Son preferibles en las situaciones siguientes:

 La morfología de las bacterias se altera cuando se desecan y tiñen.

 Cuando las bacterias se observan para determinar movilidad.
 Para observar los cambios citológicos que ocurren durante la
división celular.
 Por este método se observan fácilmente algunas inclusiones celulares
como vacuolas y materias grasa.

Observación con tinciones

 Para observar las características morfológicas de las bacterias.
 Identificación y diferenciación de microbios entre especie y dentro de
la misma especie (tinción diferencial o selectiva).
 Lunes

TIPO DE OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS

Observación en fresco
preparación en fresco simple
preparación en gota pendiente
Observación con tinciones
Tinción simple: un solo colorante.
Tinción diferencial: más de un colorante.
Tinción especial
 Tinción negativa: colorea el medio que rodea a la
bacteria permaneciendo ésta sin teñir. 
Procedimiento para un preparado en fresco
("entre porta y cubre")

Colocar una gota de SSF o Tomar la muestra con el asa de

agua en un porta siembra o un gotero

Muestra

Porta objeto
 Observación microscópica
Observación en fresco
Bacterias: Leptospiras, treponemas (M. campo
oscuro)
 Observación microscópica
Observación en fresco: (SSF)
Parásitos : Trofozoitos, larvas.
 Observación microscópica
Observación en fresco
Hongos: Levaduras
 Observación microscópica
Observación en fresco con modificaciones
 Hongos
 NaOH 10% (hifas)
Procedimiento para un preparado en fresco
en gota pendiente
 COLORANTE: DEFINICIÓN

• Son compuestos orgánicos que tienen alguna

afinidad específica por algún componente.

• Los colorantes son compuestos químicos

utilizados para aumentar el contraste.
 COLORANTES: Tipos
Sales colorantes: más comúnmente usados
 básicos: Consisten en un catión coloreado unido a un anión
incoloro. Tiñen la célula bacteriana uniformemente (ácidos
nucleicos y los polisacáridos ácidos )
 (cromatina nuclear de pro y eucariotas)
 (más usados en citología bacteriana).
• Ej: clorhidrato (-) de azul de metileno (+). la safranina, la fucsina básica, el
cristal violeta
 ácidos: Tienen el catión incoloro unido a un anión coloreado. No
tiñen la célula bacteriana, pueden usarse como color de contraste
(coloración negativa). Tiñen estructuras citoplasmáticas de las
células eucariotas(Rx básicas)
 Ej: eosinato (-) de sodio (+),la fucsina ácida y el rojo Congo.
 COLORANTES: Tipos
Colorantes liposolubles
• Se combinan con los componentes lipídicos de
la célula, usados para revelar la localización de
los depósitos de grasa. Ej. Negro Sudán.
 COLORACIONES: Tipos
• Vitales
– Son aquellas que se practican sobre células que están vivas,
mediante la introducción de un colorante en la circulación
de un organismo vivo.
– Ejem: el verde Jano y el azul de metileno.
• Supravitales
– son aquellas que se realizan sobre células o tejidos vivos,
pero que están aislados del organismo del que proceden.
• No vitales
– se realizan sobre células muertas.
 TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
Frotis o película (extensión)

La fijación

Coloración
Tinción de células para la observación microscópica

Extensión de una fina capa

de células sobre el porta

Adición del colorante

lavado y secado
Secado al aire

Se coloca una gota de aceite

de inmersión sobre el cubre objetos y
se observa con el objetivo de
Fijación por flameado del porta 100X
 PREPARACIÓN COLOREADA

Frotis o película (extensión)

• Utilizar portaobjetos limpios y desengrasados
 PREPARACIÓN COLOREADA
La fijación
Los microorganismos queden adheridos al portaobjeto (coagula las sustancias proteicas)
TIPOS
– CON CALOR (O MÉTODO DE KOCH)
– FIJACIÓN QUÍMICA: alcohol metílico, formalina al 5 % (v/v), licor de Hoffman (partes iguales
de etanol absoluto y éter)

Metanol
 PREPARACIÓN COLOREADA

Coloración. SIMPLE : Positiva o negativa

 Lunes
Tinción simple de azul de metileno

Frotis y fijación

Poner una gota de agua en un Tomar la muestra con el asa de Extender sobre el agua y fijar a
porta siembra la llama del mechero

Tinción

Cubrir la preparación con Lavar con agua, dejar secar y

Azul de Metileno 5’ observar al microscopio

Micrococcus luteus
 Lunes
Tinción negativa

Colocar una gota de Nigrosina en

un porta
Mezclar con la Nigrosina y
extender por todo el porta.
Tomar muestra del Secar al aire y observar
microorganismo con el asa,
flamear el tubo y tapar

cápsulas tanto bacterianas como de levaduras, esporas que se observan como cuerpos
refringentes y espiroquetas
 Hongos
 Tinción negativa
 PREPARACIÓN COLOREADA

Coloración. Diferencial o compuesta

se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos
Etapas:
1. tinción primaria
2. Tinción de contraste o secundaria
- Ejemplo.: COLORACION GRAM, COLORACION DE ZIEHL-
NEELSEN, ESPORAS
 TERMINOS
• Los mordientes, aunque no son
colorantes, intensifican la tinción
porque aumentan la afinidad de la
célula por el colorante. También se
pueden utilizar para producir un
engrosamiento de ciertas estructuras
celulares externas, como los flagelos,
que debido a su delgadez no podrían
ser visualizados de otra forma.
Diferencias en la pared celular
 Tinción de Gram
Tinción del frotis
Previamente fijado al calor,
Paso 1 con cristal violeta
Durante 1 minuto.
Todas las células se tiñen
de color azul-violeta.

Añadir Lugol,
Paso 2 dejar actuar 2 minutos

Todas las células siguen

de color azul-violeta.
Gram +

Decolorar con alcohol

Las células Gram +
Paso 3 siguen de color azul-violeta.
Las Gram negativas
se decoloran.

Tinción de contraste
Con safranina 2 minutos.

Las células G+
se ven azul-violeta.
Paso 4
Las G- rosas o rojas.

Gram -
 COLORACIÓN DE ZIEHL- NEELSEN

Se basa en la propiedad de la pared celular Orden

Actinomycetales. (acidos micólicos)
• Resiste la decoloración con alcohol y un ácido fuerte cuando
• VARIANTES
• Caliente : Mycobacterium
• En frío (o de Kinyoun): Cryptosporidium, Cyclospora.
Tinción de esporas Miercoles

Tinción
Frotis y fijación

1.-Poner una gota de 2.-Tomar la muestra de un 3.-Extender sobre el 1.-Cubrir la

agua en un porta cultivo de Bacillus agua y fijar a la llama preparación con Verde
del mechero Malaquita

5.-Lavar con agua, dejar

2.-Calentar, con un 3.-Lavar con agua 4.-Teñir con Safranina 1’
secar y observar al
hisopo de algodón
microscopio
empapado en alcohol y
prendido con la llama
Esporas
del mechero, hasta la
emisión de vapores.
Mantener caliente
durante 5 minutos.
Bacterias
 La tinción de flagelos de Leifson
 Se fija químicamente la suspensión bacteriana, mediante
formol, y se hace la extensión en un portaobjetos.

 Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno.

 Se cubre la preparación con una mezcla de ácido tánico y el

colorante rosanilina, de preparación extemporánea. El ácido
tánico engruesa los flagelos y la rosanilina los tiñe.

 Se retira el exceso de colorante con agua.

Por último, se deja secar al aire, antes de su observación al
microscopio. 
 PARASITOS: Plasmodium
• GIEMSA O WRIGHT
COLORACION LEISHMAN
 HONGOS
• AZUL DE LACTOFENOL
• T. MENTAGROPHYTES
 Tinción H/E
 La hematoxilina: es un colorante  Eosina: es un colorante ácido que
básico que colorea los componentes colorea los componentes básicos de la
ácidos de la célula (los ácidos célula, es decir el citoplasma.
nucleicos, los cuales se encuentran en
el núcleo).
 Adquiere un color acidofílico o
 Adquiere un color basofílico eosinofílico (sonrosada).
(azulado/negruzco).  
COLORACION DE TEJIDOS
HEMTOXILINA /EOSINA
Existen algunos tejidos que no son teñidos
con hematoxilina y/o eosina. Utilizan
colorantes especiales:

Carbohidratos (oligosacáridos, polisacáridos

y glucógeno): PAS o ácido
peryódico de Schiff.

Células caliciformes: rojo carmín.

Células nerviosas: sales de oro.

Fibras de colágeno: tricrómico de Masson.

Fibras elásticas: fucsina y resorcina.

Fibras reticulares: sales de plata.

Tejido adiposo: Sudán III y IV, y el

aceite rojo O.
Reacción de Azul Alsialza: identifica los
mucopolisacáridos o glicosaminoglicanos (deparan
sulfato, dermatán sulfato, queratán sulfato y acido
hialurónico).
 Ácido peryódico de Schiff (PAS)
• Tiñe carbohidratos y
macromoléculas con
carbohidratos.
• El ácido peryódico rompe la
unión entre carbonos → forma
aldehídos → reactivo de Schiff
→ rojo púrpura
• Se usa para detectar:
– Glucógeno en la célula
– Membrana basal debajo de
epitelios
– Moco en glándulas
 Tinción PAS
 Detecta gránulos de glucógeno, los cuales
tiñe de azul intenso o morado.

 Células que tiñen su Núcleo PAS (+):

• Plaquetas

• Neutrófilos

• Linfocitos

• Eritroblastos

• Megacariocitos

Útil para Diagnóstico de:

Leucemias agudas
 Tinción Tricrómica de Masson
Coloración de fibras
colágenas I y elásticas.
Se emplean 3 colorantes
para identificar el
núcleo, el citoplasma y
las fibras colágenas
 Tricrómico de Masson

Es una técnica para la coloración de

fibras colágenas y elásticas.

Se observan cuatro coloraciones

distintas:

1.Tejido conjuntivo de verde.

2.Tejido muscular de verde pardo.

3.Eritrocitos de rojizo.

4.Núcleos azul y/o negro y citoplasma y

fibras musculares rosa.
 Mucicarmín o Rojo Carmín
 Usado en la identificación de sitios
de tumores primarios, ayudando a la
distinción de células escamosas
indiferenciadas mucina-negativas de
los adenocarcinomas mucina-
positivos.

 Núcleo y membrana se tiñen de rosa

oscuro.

 Tiñe el citoplasma de amarillo.

 Colorante azul de metileno
Se usa:
– teñir partes del cuerpo antes de
cirugías
– Antiséptico
– Teñir muestras de laboratorios
– Tx metahemoglobinemia
 Colorantes Wright y Giemsa
La tinción de Wright es La tinción de Giemsa es
usada para: usada para:
• Diferenciar • Frotis sanguíneos
las células de la sangre. • Parásitos sanguíneos
• Teñir punciones • Diferenciar zonas alto
medulares contenido de ADN:
cromosomas
Tinción Rojo Congo

Para teñir:

 Depósitos de
Amiloide
(AMILOIDOSIS)

Amarillo el Núcleo

Citoplasma: Verde