INTRODUCTION

Un laboratoire de biologie médicale ou LBM est un lieu où sont prélevés et

analysés divers fluides biologiques (sang, urines ……) d'origine humaine dans
des conditions strictes et sous la responsabilité des biologistes eux-mêmes
pharmaciens ou médecins, sur lesquels ils effectuent des analyses biochimique,
hématologique, microbiologique ……, Dans le but d'aider au diagnostic médical.

Ce rapport représente le travail que j’ai effectuée lors de mon stage au sein de
laboratoire d’analyse médicale Dr GUELLA, qui est déroulé du 24/01/2021 au
18/02/2021. Pendant cette période je me suis familiarisée avec un environnement
technique et un ensemble d’applications.

Le but de ce rapport n'est pas de faire uniquement une présentation exhaustive

de tous les aspects théoriques que j'ai pu apprendre ou approfondir, mais aussi de
compléter la partie théorique par un développement pratique, ceci m’a permis
d’acquérir des connaissances et une excellente expérience, et de découvrir le
quotidien de la vie professionnelle d’un biologiste.

- Je vous expose dans ce rapport en premier lieu une présentation du

laboratoire (Localisation, Horaire de travail……).

- Ensuite je vous explique les différents aspects de mon travail durant le stage.

- Et en fin la conclusion.

1
 1. Présentation du laboratoire
1.1. Localisation

Le laboratoire d’analyses médicales

Dr. GUELLA dans lequel j’ai effectué
mon stage a ouvert ses portes en aout
2020 il se situe dans une grande rue juste
en face du stade municipal (Bahi Amar)
Sa position centrale fait qu'il se trouve à
15 minutes de Bir el Djir, 15 minutes du
centre-ville, 15 minutes des amandiers et à 9 minutes du centre commercial. Il est
accessible en tramway ou en bus (Ligne U, 34 ou 03).

1.2. Description

Le laboratoire comprend :

- Un local de réception, d’accueil ;

- Un bureau de secrétariat et d’archives ;

- Une salle de prélèvements permettant l'isolement des patients ;

- Trois salles techniques, (biochimie /sérologie /hormonologie, hématologie

/hémostase, et microbiologie)

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 - Un bureau du médecin ;

- Un Vestiaire et un Sanitaire ;

- Une petite chambre pour les déchets

1.3. Horaires du travail

Le laboratoire est ouvert du samedi au jeudi, et les employés suivent l’horaire

normal du travail de 7h30 à 16h30 (parfois plus tard s’il reste des analyses à faire).

1.4. Phases du travail du laboratoire

1.4.1.Phase pré-analytique

Le secrétariat : On trouve dans ce côté deux secrétaires, leur travail consiste

en réception des patients, l’enregistrement des données nécessaires (nom, prénom,
âge, type d’analyse, code de patient, la date…), assurer les transactions
financières, répondre aux appels téléphoniques internes et externes et de remettre
les résultats (bulletin médical).

3
La salle de prélèvement : laboratoire d’analyses médicale doit disposer d'au
moins une salle de prélèvements permettant l'isolement des patients. Un
prélèvement est effectué par une personne habilitée, Selon certaines spécifications
(à Jeun ou non…) et selon l’analyse qu’il faudra réaliser.

- Accompagner et installer le patient dans la salle

de prélèvements ;
- Préparer tout le matériel nécessaire aux
prélèvements (garrot, coton, épicrânienne…) ;
- Etiqueté les tubes et effectuer le prélèvement ;
- Accompagner le patient vers la sortie :
- Déposer les échantillons et les bons d'examen dans
la zone de tri des échantillons
- Nettoyer et ranger la salle avant le prochain
patient.
1.4.2.Phase analytique

Processus technique permettant l'obtention d'un résultat d'analyse biologique

cette phase utilisent de plus en plus souvent des automates très sophistiqués qui
permettent d'améliorer la rapidité du rendu de résultats et la reproductibilité des
résultats.

1.4.3.Phase post- analytique

C'est la phase de validation technique à cette phase, le médecin procède à une

validation biologique. Dans le cas contraire, il programme une nouvelle analyse
de l’échantillon prélevé, et si nécessaire la réalisation d’un nouveau prélèvement
et de son analyse. Les résultats validés sont transmis au médecin et au patient.

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 Matériel et méthodes

2. Tâches effectuées

Pendant mon stage j'ai pu observer et m'exercer sur plusieurs paillasses du

laboratoire. J'ai aussi découvert une véritable équipe du travail et les
responsabilités qui incombent à chacun. Je vais présenter ci-dessous les différents
domaines que j'ai explorés.

2.1. Matériel du prélèvement

Dans les salles de prélèvement, il y a le nécessaire pour effectuer tous types de

prélèvements :

- Aiguille épicrânienne : dispositif médical stérile à usage unique, composé

d'une aiguille raccordée à une tubulure souple qui se termine par un raccord
permettant l'adaptation à la ligne de perfusion.

- Plateaux métallique contenant du pansement, corp de pompe,

- Le garrot : dispositif destiné à interrompre la circulation du sang,

- Les tubes de prélèvement, portoire,

- Alcool 70 %, coton, gants, poubelle à aiguilles.

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 2.2. Différents tubes de prélèvements :

Il y a 4 types de tubes possibles identifiables par la couleur de leurs bouchons.

La couleur de chaque tube est normalisée et Pour chaque tube il y a des
caractéristiques différentes :

➢ Tube à bouchon rouge ou Tube sec :

Ce tube ne contient aucun anti coagulant, le sang va donc

pouvoir coaguler dans le tube (effet recherché). Il contient
seulement un activateur de la coagulation (microparticules de
silice). Après centrifugation, nous obtiendrons donc du sérum.

Ce tube servira notamment pour les analyses suivantes :

En sérologie, Biochimie (ionogramme, urée, créatinine,

cholestérol, ...), Hormonologie (TSH, LH, FSH, PSAT…), pour les marqueurs en
cancérologie ...

➢ Tube à bouchon bleu

Ce tube contient un anti coagulant : le citrate de sodium. Il sera

utilisé pour :

Les bilans de coagulation (TP, TCK, Fibrinogène), Vitesse

sanguine……

➢ Tube à bouchon violet

Ce tube contient un anti coagulant : l’EDTA. Ce tube est utilisé

notamment pour :

- les numérations FNS (globules blancs, globules rouges,

plaquettes…),

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 - l’hémoglobine glyquée (HBA1c),

- le groupage sanguin GS.

➢ Tube à bouchon vert

Ce tube contient un anti coagulant : l’héparine de lithium

. Utilisé pour : bilan lipidique, glucidique, rénale, hépatique…

2.3. Réactifs du laboratoire

Les réactifs sont toute substance chimique ou biologique préparée spécialement

en vue de son utilisation in vitro, isolément ou en association, dans les analyses
de biologie médicale, la conservation se fait à froid pour certains et pour d’autre
dans une température ambiante. Les réactifs sont utilisés dans le domaine :

Hématologie - Biochimie - Sérologie - Hormonologie - Hémostase -

Microbiologie - Immunologie ….

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 2.4. Automates d’analyse médicales

Les automates sont programmés pour effectuer un grand nombre d'analyses

simultanément sur le même échantillon de sang et/ou de plasma, dans un délai
court, à moindre coût pour le laboratoire et avec un système performant de
maîtrise de la qualité.

Les principaux automates que j’ai eu la chance de manipuler au cours de mon

stage sont :

2.4.1. Automate de Biochimie

Marque : Bio Labo (Kenza One)

Connecté à un ordinateur avec un Système Ouvert

ou Fermé il contient 23 positions de réactifs (20
réfrigérées) et 12 positions échantillons permettant
la réalisation de dosages pour les bilans : Lipidique
(cholé, HDL, TG…), Glucidique, Rénale (Urée,
Créa.), Hépatique (ASAT, ALAT…), Cardiaque…

2.4.2. Automate d’immuno- hormonologie

Marque : Mindray (CL900i)

Connecté à un ordinateur, et avec un

Système de dosage immunologique par
chimiluminescence permettant la réalisation
des paramètres : FT3 FT4 TSH, ß-HCG FSH,
LH, Prolactine, PSAT, TESTO, PROG... etc.

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 2.4.3. Spectrophotomètre (analyseur semi-automatique de biochimie)

Marque : Mindray (BA-88A)

Est un appareille qui permet d'analyse et de

déterminer l'absorbance d'une substance
chimique en solution. Permet la réalisation des
paramètres suivant : Fer sérique, protéinurie
…

2.4.4. Automate d’hématologie

Marque : Sysmex (XN-330)

Est un appareil permettant d'effectuer une

numération de formule sanguine (NFS). En d'autres
termes, il effectue une analyse quantitative et
qualitative des globules rouges (érythrocytes), des
globules blancs (leucocytes) et des plaquettes
sanguines (thrombocytes)…….

2.4.5. Automate d’hémostase

Marque : Stago (Star max)

Analyseur de coagulation, permettant la

réalisation de dosages d’hémostase pour les
paramètres : TP, TCK, Fibrinogène.

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 2.4.6. Incubateur

Marque : nuve incubator (EN- 055)

L'incubateur est le meilleur équipement pour la

culture et le stockage des cultures bactériennes. C’est
un équipement nécessaire pour tout laboratoire
effectuant des cultures microbiologiques avec des
conditions spéciales qui régulent les facteurs de
croissance tels que la température, l'humidité, la
ventilation et le CO2.

2.4.7. Microscope- optique

Marque : micros AUSTRIA

Le microscope optique est un instrument équipé

d'un objectif et d'un oculaire permettant de grossir
l'image d'un objet afin d'en percevoir les détails. Il
permet de visualiser l'infiniment petit avec une
grande précision et une qualité d'image irréprochable.
Permettant l’observation du frottis sanguin, le
nombre de réticulocyte……etc.

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 3. Analyses du laboratoire
3.1. FNS (Numération Formule Sanguine)

Intérêt :

L'hémogramme ou numération de la formule sanguine (NFS) permet de

comptabiliser tous les éléments du sang : globules rouges (hématies), globules
blancs (leucocytes) et plaquettes (thrombocytes).

Procédures recommandées :

- On mélange l'échantillon du sang doucement et complètement.

- On retire le bouchon de tube et on le met au niveau de l’appareil dans la

position favorable.

- On appuis sur le bouton juste à côté afin que l’aiguille sorte et entre dans le
tube pour prendre la quantité du sang nécessaire.

- Après quelques secondes les résultats affichés dans l'écran.

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 3.2. FSP (Frottis sanguin périphérique)

Le frottis sanguin est un examen microscopique qui permet :

- La confirmation du comptage plaquettaire.

- D’effectuer le différentiel leucocytaire.

- L’examen morphologique des globules rouges et des globules blancs.

Dans quels cas doit-on effectuer un frottis sanguin ?

 Anomalie lors d’analyse sanguine ou d’un hémogramme (numération des

cellules sanguines).

 Repérer des anomalies de morphologie ou de nombre des globules blancs

(anomalie leucocytaire, neutropénie, thrombopénie), des globules rouges
(anémies, polyglobulie) et des plaquettes

Préparation d’un frottis sanguin :

- Prenant un tube à EDTA contenant du sang récemment prélevé

- On mélange le tube une dizaine de fois pour bien mélanger les composants
sanguins.

- A laide dune micropipette on dépose une goutte de 3 ou 4 millimètres de

diamètre sur l’extrémité de la lame, identifiée par les coordonnés du patient.

- Avec une deuxième lame on réalise l’étalement adéquat du frottis sanguin.

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- On laisse la lame se sécher à l’air.

- Une fois la lame est séchée on passe à la coloration qui s’appelle la coloration
Wright modifiée qui est un système rapide pour colorer la lame, on la trompe dans
le méthanol 5 seconde puis dans le colorant orange et enfin dans le colorant bleu.

- On rincer la lame avec l’eau distillé propre qui possède un pH neutre ce qui
permet d’avoir une coloration équilibrée

- Et finalement on laisse la lame se sécher à l’air et on passe à l’observation

microscopique.

Eosinophile

Plaquette

Neutrophile

Monocyte Lymphocyte
Basophile

Érythrocyte

Observation microscopique d’un frottis sanguin au grossissement x 100.

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 3.3. Taux de réticulocyte

Les réticulocytes sont des globules rouges immatures fabriqués par la moelle
osseuse. Leur taux sanguin élevé est le signe d’une anémie ou d’une hémorragie
aiguë. Au contraire, un taux bas peut témoigner d’une anomalie de la moelle
osseuse

Principe

Les réticulocytes contiennent de fines granulations qui peuvent être colorées

par le bleu brillant de crésyl. On colore une lame de sang avec ce produit et on
observe au microscope un certain nombre d'hématies. A partir de cette observation
on peut calculer soit le nombre de réticulocytes par litre de sang, soit la proportion
d'hématies qui sont des réticulocytes.

Méthode

- dans un tube sec on met 120ul de sang total + 100ul de bleu

de Crésyl brillant.

- On mélange bien le tube + Incubation 5 min à 37°

- A laide dune micropipette on dépose une goutte sur l’extrémité de la lame,

identifiée par les coordonnés du patient. Et avec une deuxième lame on réalise un
étalement mince et on laisse la lame se sécher.

- Pour l’observation microscopique on choisit la queue de l'étalement là où les

hématies sont bien séparées les unes des autres et on commence de compter le
nombre des hématies (au moins 100 hématies) et des réticulocytes dans plusieurs
champs.

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- Un exemple d’un champ qui contient :
✓ Quatre réticulocytes (hématies
qui contiennent de fines
granulations bleu-violet foncé).

✓ 100 hematies coloré en bleu pale.

3.4. Bilan de coagulation du sang

Les tests de coagulation permettent de mesurer la capacité du sang à coaguler,

ainsi que le temps nécessaire à la coagulation. Ces tests peuvent aider le médecin
à évaluer un risque de saignement excessif ou de formation de caillots. On parle
aussi, plus généralement, des analyses biologiques de l’hémostase

Pour vérifier que le sang coagule correctement ou pour dépister une anomalie
de la coagulation sanguine, il existe différents examens sanguins, dont :

Le taux de prothrombine (TP) : il s’agit de la transformation d'une vitesse de

coagulation (appelé temps de Quick) en pourcentage entre 80 et 100%

Le temps de céphaline activée (TCA) : permet de mesurer le temps que met

le sang à coaguler entre 24 et 41 secondes

Le dosage de diverses protéines impliquées dans le processus de coagulation :

le fibrinogène sa valeur entre 2 et 4 g/l.

Ces examens se mesure sur l’automate de l’hémostase (stago).

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3.5. Vitesse de sédimentation

La vitesse de sédimentation ou VS est un test qui mesure la vitesse à laquelle

les globules rouges chutent dans un tube de sang placé à la verticale pendant un
temp donné (1h à 2h). Cet examen permet de détecter une inflammation ou une
infection

Lorsque la vitesse de sédimentation est très augmentée (autour de 100 mm par

heure), il est possible que la personne souffre :

- d’une infection,

- d’une tumeur maligne ou d’un myélome multiple,

- d’une maladie rénale chronique,

- d’une maladie inflammatoire.

D’autres pathologies non inflammatoires comme l’anémie ou

les hypogammaglobulinémies peuvent également faire augmenter la VS.

Au contraire, une diminution de la vitesse de sédimentation peut se voir en cas

de :

- hémolyse (destruction anormale des globules rouges)

- hypofibrinémie (baisse du taux de fibrinogène),

- hypogammaglobulinémie,
- polyglobulie (qui empêche la sédimentation)

- prise de certains anti-inflammatoires à fortes doses

La méthode

- On prend le tube contenant l’échantillon à examiner c à d le sang.

- Le sang citraté est ensuite aspiré dans un tube de westergren, jusqu’à la

graduation 0.

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 - Le tube est ensuite fixé au portoir, bien verticalement pendant une heure il est
important d’éviter les chocs et les vibrations).

Après une heure, on note en millimètres la hauteur du plasma surnageant à

partir de la graduation zéro (cette mesure de la vitesse de sédimentation peut
s’effectuer après une heure et deux heures de sédimentation mais en pratique la
mesure de la première heure est suffisante).

Les valeurs usuelles :

• 1ère heure < 6mm

• 2eme heure < 20 mm

3.6. Analyses biochimiques

Les paramètres biochimiques sont effectués par l’analyseur automatique de

biochimie Kenza One et sont les suivantes :

1/ Bilan glucidique

Définition Valeur normal

Paramètres
C’est le taux de sucre dans le sang
Glycémie Son dosage permet le suivi des patients diabétiques 0,7 - 1,10 g/l

Hyper glycémie provoque Il consiste en l'absorption d'une

quantité standard de glucose par voie orale avec suivi de la 0,7 - 1,10 g/l
HGPO réponse physiologique de l'organisme
(glycémie et insulinémie)

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 2/ Bilan lipidique
Définition Valeur normal
Paramètres

Les triglycérides Ils sont composés d’acides gras et de glycérol. Ils sont Homme : 0.45-1.75
stockés dans les tissus adipeux et ils fournissent de l’énergie.
Femme : 0.35-1.40

Cholesterol: < 2 g/l

C’est le plus important lipide de l’organisme. Il est fabriqué
Le cholestérol par le foie, l’intestin et les glandes et il est apporté par HDL: 0,60-0,94 g/l

total l’alimentation. Il existe deux types de cholestérol : le HDL

LDL: 1.10 - 1.60 g/l
(le bon cholestérol) et le LDL (le mauvais cholestérol).

3/ Bilan rénale
Définition Valeur normal
Paramètres
C’est une substance toxique qui se trouve dans les urines
Urée provenant de la dégradation protéique. Son dosage permet de 0,17 et 0,49 g/l
rechercher une insuffisance rénale.

C’est une substance résultant de la dégradation d’une

protéine musculaire (créatine) par les reins. Elle est localisée
Créatinine dans les muscles auxquels elle apporte de l’énergie 06- 11 g/l

C’est un déchet issu de la dégradation de molécules 35 – 70 mg/l

Acide urique
azotées(purine).

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 4/ Bilan hépatique
Définition Valeur normal
Paramètres
Les transaminases sont des enzymes importants de l’organisme
ASAT ou TGO qui se trouvent dans les cellules du foie des reins, les muscles et ASAT: < 40
ALAT ou TGP dans les globules rouges. ALAT: < 40

Les Gamma GT sont des enzymes provenant de plusieurs

Gamma GT organes (foie, pancréas, rein) et participant au transfert des acides 5 - 32 UL/l
aminés entre les cellules.
Le taux de gamma GT dans le sang s'élève à l'occasion de
nombreuses maladies du foie

5/ Bilan cardiaque
Définition Valeur normal
Paramètres
La lactate déshydrogénase, mieux connue sous le nom de LDH, est
120- 240 U/L
LDH une enzyme présente dans presque tous les tissus et organes du corps
humain : muscles (dont le cœur), foie, poumons, globules rouges et
globules blancs…

Créatine C’est une protéine contenue dans les muscles, le cœur et le cerveau. 20 - 200 UI/l
Kinase Elle intervient dans le métabolisme énergétique des cellules.

6/ Bilan pancréatique
Définition Valeur normal
Paramètres

Amylase C’est une enzyme digestive sécrétée par le pancréas et les 10 à 90 UI/l
glandes salivaires qui permettent la digestion des sucres

< 190 U/l

Lipase C’est une enzyme digestive qui dégrade les lipides.

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 7/ Bilan protéique

Définition Valeur normal

Paramètres
Elle représente 60 % des protéines présentes dans le sang.
Elle sert au transport des substances endogènes et exogènes 34 - 48 g/l
Albumine
et permet le maintien de la pression oncotique.

8/ Bilan hydroélectrolytiques

Paramètres Définition Valeur normal

Ionogramme sanguin : C’est un test qui correspond au dosage des principaux Na+ :135/145mmol/l
constituants ionique du sang, il sert à surveiller
- Sodium (Na+) K+ :3,5/4,5mmol/l
l’équilibre hydroélectrolytique de l’organisme qui est
- Potassium (K+) assuré par les reins, la peau, la transpiration et le
Ca++ :2,2/2,6mmol/l
système digestif.
- Calcium (Ca++)

3.7. Fer sérique

La sidérémie ou fer sérique est le taux de fer en circulation libre dans le plasma
sanguin et non fixé à l’hémoglobine des globules rouges . Le dosage permet
d’évaluer le taux de fer dans l’organisme afin de diagnostiquer par exemple une
carence en fer une anémie, mais aussi de vérifier l’état nutritionnel du patient.

- L’examen se fait par le spectrophotomètre

Méthode
- On prépare un tube contenant (2000ul de R1 + 400ul R2) R3
- On prend 4 tubes :
• 1er tube (contrôle) 1000µl R1 + 200µl contrôle normal.
• 2 ème tube (contrôle +) 1000 µl R3 + 200µl contrôle normal.
• 3 ème tube (patient) 1000ul R1+200ul sérum du patient.
• 4 ème tube (patient +) 1000µl R3 + 200µl sérum du patient.
- Incubation 5min
20
Manipulation sur le spectrophotomètre Valeur usuelle : 65- 165 μg/dl

- Blanc d’eau → eau distillée

- Blanc échantillon → contrôle (tube 1) → Laver (H2O)

- Echantillon → control + (tube 2) → Laver (H2O)

- Blanc échantillon → patient (tube 3) → Laver

- Echantillon → patient + (tube 4)

3.8. Coefficient de saturation de la transferrine

La transferrine est une protéine du sang qui est chargée du transport du fer vers
les organes. Au même titre que la capacité totale de fixation de la transferrine.

Le coefficient de saturation est un marqueur du métabolisme du fer qui permet

de connaître les réserves en fer d'une personne.

Méthode

- On prépare un tube contenant 500µl

sérum du patient + 20 µl de réactif R1 et
on le laisse à température ambiante
pendant 10 min.

- On ajout une cuiller de poudre de la transferrine au tube précédent et on

mélange bien pendant 30 min.

- on met le tube dans la centrifugation pendant 10 min a 3000

tours.

- après la centrifugation on prend 200 µl du surnageant dans un

autre tube et on le lance dans le spectrophotomètre (Manipulation
du fer sérique).

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 Le coefficient de saturation de la transferrine (CST) :

Le rapport entre le fer sérique et la capacité totale de fixation en fer de la

transferrine : fer sérique (en mmol/L) /CTF (en mmol/L) × 100.

3.9. Analyses hormonales

- Ces analyses sont effectué par l’automate Immuno-hormonologie Mindray :

Paramètres Définition Valeur normal

La thyréostimuline, ou TSH est une hormone qui est

sécrétée par l'antéhypophyse Son rôle est de stimuler la
TSH thyroïde dans sa fonction de sécrétion d'hormones 0.35- 5.1 µUl/ml
thyroïdiennes (T3 et T4)

T4 et T3 Plus de 80 % de la production des hormones thyroïdiennes T4 : 7.7- 18pmol/l

se fait sous la forme de thyroxine, encore appelée T4.
T3 :2.63-5.7pmol/l
Tri-iodothyronine (T3) représente les 20 % de sécrétion
hormonale restant de la thyroïde.

La FSH (hormone de stimulation folliculaire) est une

hormone synthétisée par l’hypophyse, une petite glande située H : 1.7- 12 mUl/ml
FSH
à la base du cerveau. La FSH est associée au cycle menstruel
et développement des ovules chez la femme et à la production F :2.9- 12 mUl/ml
du sperme chez l’homme.

Hormone lutéinisante (LH), sécrétée par l'hypophyse, H : 1.1-7 mUl/ml

LH
provoque l'ovulation chez la femme et stimule la production
F : 1.5-8 mUl/ml
de testostérone chez l’homme.

La prolactine est une hormone principalement impliquée 4.79- 26.53 ng/ml

PROLACTINE
dans la production de lait maternel

La vitamine D est une vitamine liposoluble. C'est une

hormone retrouvée dans l'alimentation et synthétisée dans 30-80 ng/ml
Vitamine D
l'organisme humain à partir d'un dérivé du cholestérol ou
d’ergostérol sous l'action des rayonnements UVB du Soleil

22
 3.10. Protéinurie des 24 heures (protéine dans les urines)

Une protéinurie est définie par la présence en quantité anormale de protéines

dans les urines. Elle peut être liée à de nombreuses pathologies, en particulier
rénales.

Normalement, l’urine contient moins de 50 mg/L de protéines. Les protéines

contenues les urines sont principalement de l’albumine (principale protéine du
sang), de la mucoprotéine de Tamm-Horsfall, protéine synthétisée et sécrétée
spécifiquement dans le rein, et de petites protéines.

La protéinurie peut être découverte grâce à un test urinaire simple avec

bandelette

Le recueil des urines des 24 heures consiste à

éliminer la première urine du matin dans les toilettes,
puis à recueillir toutes les urines dans le même récipient
pendant 24 heures. Notez la date et l'heure de la première
urine sur le bocal et continuez le recueil jusqu’au
lendemain même heure.

Il faut conserver les urines dans un endroit frais, au

mieux dans un réfrigérateur et les apporter au laboratoire
dans la journée (le 2ème jour, donc).

Il faut lire le résultat dans la première minute après immersion de la bandelette

dans les urines.

Méthode

• Trempez les bandelettes dans les urines comme indiqué sur le mode
d’emploi.
• Lisez le résultat en observant la couleur de la bandelette en respectant
l’attente précisée (une minute environ).
23
 3.10.1. Dosage de la protéinurie des 24 h

Méthode

- On prend 4 tubes :
• 1er tube (blanc) 1000µl R1.
• 2 ème tube (calibrant) 1000 µl R1 + 20µl calibrant.
• 3 ème tube (contrôle) 1000ul R1+20ul contrôle.
• 4 ème tube (patient) 1000µl R1 + 20µl urine.
- Incubation 10 min.

Manipulation sur le spectrophotomètre Valeur usuelle : 0 - 150 mg/24h

- lavage par l’eau distillé

- Blanc réactif → le blanc (tube 1) → laver

- Calibrage → calibrant (tube 2) → Laver (H2O)

- Echantillon → control + (tube 3) → Laver (H2O)

- Echantillon → patient (tube 4).

3.10.2. Diurèse

C’est le volume d'urine émis en 24 heures. La diurèse normale est comprise

entre 800 et 1 500 ml par 24 heures (selon la quantité d'eau absorbée).

Méthode

- Vider la bouteille des urines dans un verre à pied

gradué.

- Mesurer la quantité des urines et noter le volume dans

un registre.

24
 3.11. Examen cytobactériologique des urines (ECBU)

L'examen cytobactériologique des urines, ou examen microscopique des urines,

ou sédiment urinaire est un examen de biologie médicale, étudiant l'urine d'un
patient. Il est fréquemment utilisé pour diagnostiquer une infection urinaire.

L’examen s’effectue de préférence le matin sinon, il est

conseillé d’attendre plusieurs heures après la dernière
miction, pour laisser le temps aux bactéries de s’accumuler
dans l’urine. Il faut d’abord nettoyer le gland ou la vulve
avec de l’eau savonneuse ou un antiseptique doux, puis
rincer à l’eau.

Les premières gouttes d’urine ne doivent pas être

recueillies : il ne faut recueillir dans le récipient stérile que
le « milieu du jet » urinaire.

3.12. Chimie des urines

Le test se compose d'une bandelette présentant des zones réactives permettant

de rechercher dans l'urine la présence de différents éléments tels que les nitrites,
les protéines, le glucose, les corps cétoniques, l'urobilinogène, la bilirubine mais
aussi d'estimer la densité ou le pH.

- Il faut lire le résultat dans les première

seconde jusqu’à 2 min après immersion de la
bandelette dans les urines.

25
 3.13. Analyses sérologiques
3.13.1. Groupage sanguin : Beth Vincent/ Simonin / Rhésus

Deux méthodes de détermination du groupe sanguin / rhésus :

Méthode de BETH VINCENT : (épreuve globulaire)

Principe :

C’est la recherche des antigènes à partir des anticorps connus.

Protocol expérimental :

- A partie d’un tube à EDTA contenant l’échantillon du sang.

- On met quatre gouttes du sang (contenant des globules rouges qui à leur tour
contenant des antigènes) à l’aide d’une micropipette sur une plaque.

- A côté de chaque goutte sanguine on met une autre goutte de la gamme de

groupage (Anti-A, Anti-B, Anti-AB ou Anti-D) contenant des Anticorps.

- On mélange chaque goutte sanguine avec la goutte d’Anticorps correspondante

en faisant un cercle de deux centimètres.

- On fait une agitation à l’aide des mains pendant deux minutes.

- On cherche l’agglutination.

Pour le système ABO

Si on trouve une agglutination dans la goutte sanguine contenant l’Anti-A et

dans la goutte contenant l’Anti-AB, on dit qu’il s’agit du Groupe A.

Si on trouve une agglutination dans la goutte sanguine contenant l’Anti -B et

dans la goutte sanguine contenant l’Anti-AB, on dit qu’il s’agit du Groupe B.

Si on trouve une agglutination dans la goutte sanguine contenant l’Anti-A, dans

la goutte sanguine contenant l’Anti-B et dans la goutte sanguine contenant l’Anti-
AB, on dit qu’il s’agit du Groupe AB.

Et si on ne trouve pas d’agglutination dans les trois gouttes sanguines contenant

respectivement l’Anti A, l’Anti-B et l’Anti-AB, on dit qu’il s’agit du Groupe O.
26
Pour le système RHESUS

Si on trouve une agglutination dans la goutte sanguine contenant l’anti-D, on

dit qu’il s’agit du Rhésus positif. Et si on ne trouve pas d’agglutination dans la
goutte sanguine contenant l’Anti-D, on dit qu’il s’agit du Rhésus négatif.

Groupe sanguin A, Rhésus positif

Méthode de SIMONIN : (épreuve sérique)

Principe

C’est la recherche des anticorps à partir des antigènes connus.

Protocol expérimentale

- On prend deux échantillons de globules rouges dont on sait leurs groupes

sanguins (c à d le type d’antigènes) : hématie A et hématie B et l’échantillon de
sérum.

- On met sur une plaque deux gouttes : une des globules rouges connues de groupe
A et l’autre des globules rouges connues de groupe B, Puis on met à coté de
chaque goutte de globules rouges, une goutte du sérum du patient.

- On mélange chaque goutte de globules rouges avec la goutte de sérum

correspondante et on fait une agitation à l’aide des mains pendant deux minutes.

- On cherche l’agglutination.
27
 Analyse du résultat

On sait que :

-le groupe A = Ag A + Ac B.

-le groupe B = Ag B+ Ac A.

-le groupe AB = Ag A + Ag B et absence d’Ac.

-le groupe O = absence d’Ag et présence Ac A + Ac B.

Alors si on trouve une agglutination dans la goutte des globules rouges du

groupe A (contenant les antigènes A), on dit que le sérum à tester contient des
anticorps A donc son groupe sanguin est Groupe B.

Si on trouve une agglutination dans la goutte des globules rouges du groupe B

(contenant les antigènes B), on dit que le sérum à tester contient des anticorps de
type B donc son groupe sanguin est Groupe A.

Si on trouve une agglutination dans les deux gouttes de globules rouges A et B,

on dit que le sérum à tester contient des anticorps A et B donc son groupe sanguin
est Groupe O.

Finalement si on ne trouve pas d’agglutination dans les deux gouttes de globules

rouges A et B, on dit que le sérum à tester ne contient pas d’anticorps donc son
groupe sanguin est le Groupe AB.

Confirmation du rhésus négative

- Dans un tube sec on met 200µl des hématies du groupe O (négative) et on

remplit le tube par le NaCl.

- On effectue 3 lavages après chaque centrifugation.

- Apres les 3 lavage on prend 50 ul du culot lavé sur une plaque + 50µl Anti D
spin et on cherche agglutination.

28
 3.13.2. Préparation des hématies A et B

La préparation des hématies test A et B c’est pour l’épreuve de Simonin.

La méthode

- On prend deux tubes du groupe sanguin A et B et on les centrifuge pendant 10

min a 3500 tours.

- Après la centrifugation on élimine les sérums et on récupère les globules

rouges du tube A et du tube B.

- On prélève 1 ml des hématies A dans un tube sec et on remplit le tube par le

NaCl. (Les même étapes pour les hématies B).

- On réalise 3 lavages par le NaCl après chaque centrifugation (successive) pour

les 2 tube des hématies A et B.

- Dans 2 tube sec on met :

• 1000µl du NaCl + 100 µl du culot lavé des hématies A (tube 1).

• 1000µl du NaCl + 100 µl du culot lavé des hématies B (tube2.)

- En fin on conserve les tubes au réfrigérateur.

3.13.3. Test de Coombs indirect (TCI)

Le test indirect à l'anti globuline (Coombs indirect) est utilisé pour détecter les
Ac IgG contre les globules rouges présents dans le plasma d'un patient

En cas de grossesse un test de COOMBS indirect est réalisé à la recherche

d’anticorps irréguliers en prévention d’une éventuelle allo-immunisation fœto-
maternelle. Chez les patientes de groupe Rhésus négatif, une injection
d’immunoglobuline est fréquemment réalisée préventivement lorsqu’elles portent
un bébé de groupe Rhésus positif.
29
 La méthode

- Centrifugation du tube du groupe sanguin O positive 10 min a 3500 tours.

- On récupère les hématies et on élimine le sérum.

- On prend 200 µl des hématies dans un tube sec et on réalise 3 lavages par le
NaCl.

- On prépare une solution du 5% contenant 50µl des hématies + 950µl du NaCl.

- Dans un autre tube sec on met 100µl de solution du 5% +200µl sérum du

patient puis incubation 45 min à 37° C

- On refait les 3 lavage par le NaCl jusqu’à on obtient un culot au fond du tube.

- On ajout une goutte de AGH (anti-globulines humaines) au culot récupéré

puis centrifugation 1min a 1000 tours.

Solution de AGH

- On fait la lecture :

• Réaction négative : absence d’agglutination.

• Réaction positive : présence d’agglutination (on refait tous le test par
le groupage sanguin O négative).

30
 3.13.4. Test CRP (Protéine C Réactive)

La protéine C réactive est une protéine sérique spécifique de la réaction

inflammatoire, synthétisée par le foie, précocement au cours d’une réponse
inflammatoire. Le dosage de la protéine C réactive est un test régulièrement utilisé
pour confirmer l'existence d'une inflammation, mais permettant aussi d'en suivre
l'évolution car la protéine C disparaît rapidement dès la fin de l'inflammation.

Il se fait de 2 manières : manuellement ou automatisé (par l’automates Kenza

One).
Manuellement valeur usuelle < 6mg/l
C’est une technique semi-quantitative par agglutination passive sur une plaque

➢ On prend une plaque composée de 6 cercles noirs.

➢ A l’aide d’une micropipette on prélève 50µl de réactif CRP et on la
dépose au niveau du premier cercle noir.
➢ On rajouter ensuite 50µl de sérum humain obtenu après la centrifugation
➢ On prend 50µl de réactif témoin (+) dans le cercle noir 2 et 50µl de réactif
témoin (-) dans le cercle noir 3.
➢ On mélange doucement la plaque environ 2min
➢ Finalement on passe à l’observation des résultats (présence ou non
d’agglutination) afin de préciser l’intervalle des résultats.
➢ En cas de présence d’agglutination on fait la dilution (1/2,1/4,1/8…).

Résultat du CRP sur une plaque avec une dilution de 1/8 (36mg/l)
31
- L’absence d’agglutination : signifie l’absence de la protéine C donc CRP
négative.

- La présence d’agglutination : signifie la présence de la protéine C donc CRP

positive, avec précisément de la valeur après dilution (12mg/l, 24mg/l, 36mg/l…)

3.13.5. Teste ASLO (antistreptolysine O)

Cet examen mesure la quantité d’anticorps antistreptolysine O (ASLO) dans le

sang. L’ASLO est un anticorps dirigé contre la streptolysine O, une toxine
produite par le streptocoque du groupe A.

Protocole expérimentale valeur usuelle < 200 µl/ml

➢ Sur une plaque on met deux gouttes, une correspond à 50 µl du sérum à

et l’autre correspond à 50 µl du réactif ASLO.
➢ A l’aide d’un cure-dent on mélange les deux gouttes.
➢ Puis on mélange la plaque sur pendant 2 minutes.
➢ La lecture se fait à l’œil nue en remarquant la présence ou l’absence
d’agglutination. (Tel que le test du CRP)
➢ En cas de présence d’agglutination, on fait la dilution par le NaCl
(1/2,1/4,1/8…).

3.13.6. Test FR (Facteur Rhumatoïde)

Le facteur rhumatoïde (FR) est une immunoglobuline, de type IgM le plus

souvent, ayant une activité anticorps dirigée contre les immunoglobulines G
humaines ou animales. Il était classiquement recherché par la réaction de Waller-
Rose ou le test au latex (particules de polyester recouvertes d’immunoglobulines
humaines).

32
 Waaler Rose

WAALER-ROSE est basé sur les propriétés spécifiques d'hémagglutination du

facteur rhumatoïde, utilisé dans les réactions de type Waaler-Rose

Le test est composé d'hématies de mouton sensibilisées par une fraction gamma
globuline IgG d’un sérum de lapin anti-hématies de mouton.

La manipulation est simple et rapide. Elle est effectuée sur sérum pur et les
résultats sont obtenus en 3 minutes. Valeur usuelle < 8mg/l

Protocole expérimentale

- Sur une plaque on met deux gouttes, une du sérum

à et l’autre du réactif Waaler rose.

- A l’aide d’un cure-dent on mélange les deux

gouttes. Puis on attend 2 min pour mélanger la
plaque.

- La lecture se fait à l’œil nue en remarquant la

présence ou l’absence d’agglutination. (Tel que le
test du CRP)

- En cas de présence d’agglutination, on fait la dilution par le NaCl.

- La présence du facteur rhumatoïde dans le sérum entraîne l'apparition

d’agglutinats marrons, visibles à l'œil nu. Dans le cas contraire, le mélange reste
homogène de couleur marron.

33
Latex

Le test au latex est un test, dont le but est de mettre en évidence le facteur
rhumatoïde

Ce test immunologique d'agglutination est comparable à la réaction de Waaler-

Rose,

Protocole expérimentale Valeur usuelle < 8mg/l

➢ Sur une plaque on met deux gouttes, une du sérum à et l’autre du réactif
latex.
➢ A l’aide d’un cure-dent on mélange les deux gouttes.
➢ Puis on mélange la plaque sur pendant 2 minutes.
➢ La lecture se fait à l’œil nue en remarquant la présence ou l’absence
d’agglutination. (Tel que le test du CRP)
➢ En cas de présence d’agglutination, on fait la dilution par le NaCl.

Résultat de Test du Latex Négative (Absence d’agglutination)

34
 3.13.7. TPHA ou SYPHILIS

Le TPHA (Treponema Pallidum Hémagglutinations Assay) est un test

biologique d'agglutination passive directe utile au diagnostic de la syphilis
(maladie sexuellement transmissible en forte recrudescence), par la détermination
d’anticorps de treponema pallidum dans le sérum humain.

Méthode

- Sur une plaque de TPHA ont choisi 3 positions : A, B, C

- Sur A on met : 150ul de diluant +10ul de sérum (patient).

- Sur B : on met 75ul d’hématie teste.

- Sur la position C : on met 75ul d’hématie témoin.

- On prend 25ul de A et on le met en B.

- On prend 25ul de A en on le met sur C.

- On laisse incuber 45 min à l’abri de la lumière.

Résultat
A

B C

Résultat négative
Présence d’une cellule compactée en un bouton rouge central au fond du puits
35
 A

B C

Résultat légèrement positive

Présence d’un voile de cellule couvrant environ 1/3 du fond du puits.
3.13.8. VDRL (Venereal Disease Research Laboratory)

Il est utilisé pour le diagnostic sérologique de la syphilis, et c'est un exemple de

test de floculation sur lame. Dans ce test, l'antigène de la cardiolipine est utilisé
pour détecter des anticorps dirigés contre des antigènes non tréponèmiques
appelés cardiolipines, ce qui en fait donc un test non spécifique, contrairement au
TPHA.

Méthode

- Sur une plaque, on met deux gouttes une correspond à 20 µL du réactif VDRL
et l’autre correspond à 50 µl du sérum à tester à l’aide d’une micropipette.

- On mélange les deux gouttes à l’aide d’un cure-dent après on effectue des
mouvements circulaires pour
homogénéiser la goutte pendant 8 minutes

- On passe à la lecture à l’œil nu

(présence ou l’absence de l’agglutination).

36
 3.14. Les tests Rapide

3.14.1. Test de grossesse ß – HCG

L’hormone HCG (hormone gonadotropique chorionique), aussi appelée

improprement béta-HCG, est secrétée uniquement chez la femme enceinte dès le
début du développement de l’embryon aux environs du neuvième jour de la
grossesse.

Mode d’emploi

- Placer la cassette sur une surface propre et plate.

- Tenez le compte-goutte à la verticale et déposez

3 gouttes du sérum sur le puit du test.

- Attendez l'apparition des lignes colorées.

- Vous pouvez lire le résultat au bout de 10

minutes.

Résultat

Attendez l’apparition des bandes colorées. En fonction du taux de concentration

hormonale sur l’échantillon, on peut parfois observer un résultat positif en 40
secondes. Cependant, pour confirmer un résultat
négatif, veuillez tenir compte de la durée du temps
de réaction qui est de 10 min. Ne lisez pas le résultat
après 30 min car ce type de test est conçu
uniquement pour une réaction rapide.

Après le temps de réaction de 30 min il est

possible qu'une ligne apparaisse, n'en tenez pas compte. Tout résultat après une
durée de 30 min est considéré comme non valide.

37
3.14.2. Test Covid 19 (antigénique)

Le test antigénique permet de savoir rapidement si une personne est contaminée

au Covid-19. Il s'effectue par un prélèvement dans les narines qui va permettre de
rechercher la présence d'antigènes.

38
 Kit de test rapide Covid 19-Ag

Résultat

39
 Conclusion

Au terme de ce rapport, ce stage pratique au sein de Laboratoire

d’analyse médicale Dr GUELLA était une très bonne expérience bien
qu'il s'est passé dans une période très courte mais il m’a permis
d’approfondir mes connaissances, notamment dans le milieu de la
biologie médicale et sur les technologies innovantes qui sont mises au
service du patient, ainsi de confronter mes acquis théoriques à la
réalité pratique du monde de laboratoire et de me rapprocher beaucoup
plus de la vie professionnelle.

Tous ces acquis vont me permettre d’élargir mes connaissances

scientifiques et médicales sur le registre du Laboratoire d’analyses par
une pratique quotidienne.

40
 Remerciement

Avant tout développement sur cette expérience professionnelle, il me

paraît de commencer ce rapport de stage par des remerciements, à
ceux qui m’ont beaucoup appris au cours de ce stage, et même à ceux
qui ont eu la gentillesse de faire ce stage un moment très profitable et
agréable.

Je tien tout particulièrement a remercie Dr GUELLA Mohammed

Djawed, pharmacien biochimiste et ex maitre-assistant des hôpitaux
de m’avoir accepté en tant que stagiaire au sein de son laboratoire et
d’avoir consacré une partie de son temps à me guider dans les
missions qui m’ont été confiées au cours de ce stage

Je remercie également les laborantins, Madame Dehri Amet-Allah,

Mlle Boukhobza Hassiba et Mlle Beldjenate Amina, pour leur accueil
chaleureux, leur patience, leur bonne humeur générale et leur soutien
technique, sachant répondre à mes interrogations.

Et finalement j’aimerai aussi remerciée Slimani Asma, Mokhefi Riadh

et Mestari Rahima qui était eux aussi des pharmaciens stagiaires mais
aussi des amies qui m’ont tout aussi aidé au cours de cette formation.
 SOMMAIRE

REMERCIEMENT

INTRODUCTION ............................................................................................ 1

1. Présentation du laboratoire......................................................................... 2

1.1. Localisation ......................................................................................... 2

1.2. Description .......................................................................................... 2

1.3. Horaires du travail ............................................................................... 3

1.4. Phases du travail du laboratoire .......................................................... 3

1.4.1.Phase pré-analytique ..................................................................... 3

1.4.2.Phase analytique........................................................................... 4

1.4.3.Phase post- analytique................................................................... 4

MATERIEL ET METHODES ....................................................................... 5

2. Tâches effectuées ....................................................................................... 5

2.1. Matériel du prélèvement ..................................................................... 5

2.2. Différents tubes de prélèvements :...................................................... 6

2.3. Réactifs du laboratoire ........................................................................ 7

2.4. Automates d’analyse médicales .......................................................... 8

2.4.1. Automate de Biochimie ............................................................... 8

2.4.2. Automate d’immuno- hormonologie ........................................... 8

2.4.3. Spectrophotomètre (analyseur semi-automatique) ..................... 9

2.4.4. Automate d’hématologie .............................................................. 9

2.4.5. Automate d’hémostase ................................................................. 9

 2.4.6. Incubateur................................................................................... 10

2.4.7. Microscope- optique .................................................................. 10

3. Analyses du laboratoire ........................................................................... 11

3.1. FNS (Numération Formule Sanguine) .............................................. 11

3.2. FSP (Frottis sanguin périphérique) ................................................... 12

3.3. Taux de réticulocyte .......................................................................... 14

3.4. Bilan de coagulation du sang ............................................................ 15

3.5. Vitesse de sédimentation.................................................................. 16

3.6. Analyses biochimiques .................................................................... 17

1/ Bilan glucidique ............................................................................... 17

2/ Bilan lipidique .................................................................................. 18

3/ Bilan rénale ...................................................................................... 18

4/ Bilan hépatique ................................................................................ 19

5/ Bilan cardiaque ................................................................................ 19

6/ Bilan pancréatique ........................................................................... 19

7/ Bilan protéique ................................................................................. 20

8/ Bilan hydroélectrolytiques ............................................................... 20

3.7. Fer sérique ......................................................................................... 20

3.8. Coefficient de saturation de la transferrine ...................................... 21

3.9. Analyses hormonales ........................................................................ 22

3.10. Protéinurie des 24 heures (protéine dans les urines) ...................... 23

3.10.1. Dosage de la protéinurie des 24 h ........................................... 24

3.10.2. Diurèse ..................................................................................... 24

3.11. Examen cytobactériologique des urines (ECBU) ........................... 25

 3.12. Chimie des urines ............................................................................ 25

3.13. Analyses sérologiques ..................................................................... 26

3.13.1. Groupage sanguin : Beth Vincent/ Simonin / Rhésus ............. 26

3.13.2. Préparation des hématies A et B .............................................. 29

3.13.3. Test de Coombs indirect (TCI) ................................................ 29

3.13.4. Test CRP (Protéine C Réactive) .............................................. 31

3.13.5. Teste ASLO (antistreptolysine O) ........................................... 32

3.13.6. Test FR (Facteur Rhumatoïde) ................................................ 32

3.13.7. TPHA ou SYPHILIS................................................................ 35

3.13.8. VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) .................... 36

3.14. Tests Rapide ................................................................................... 37

3.14.1. Test de grossesse ß – HCG ...................................................... 37

3.14.2. Test Covid 19 (antigénique)..................................................... 38

CONCLUSION............................................................................................... 40