Médecine régénératrice du disque intervertébral : étude

morphologique de l’approche du Nucleus Pulposus chez

le modèle brebis
Cyrille Decante

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Cyrille Decante. Médecine régénératrice du disque intervertébral : étude morphologique de l’approche
du Nucleus Pulposus chez le modèle brebis. Médecine humaine et pathologie. Nantes Université, 2022.
Français. �NNT : 2022NANU1031�. �tel-03955612�

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 THESE DE DOCTORAT DE

NANTES UNIVERSITE

ECOLE DOCTORALE N° 605

Biologie Santé
Spécialité : technologies biomédicales, vectorisation, nanomédecine,
thérapie cellulaire et génique, médecine régénératrice et biomatériaux

Par
Cyrille DECANTE
Médecine régénératrice du disque intervertébral : étude morphologique
de l’approche du Nucleus Pulposus chez le modèle brebis

Thèse présentée et soutenue à Nantes, le 13 décembre 2022.

Unité de recherche : INSERM, UMRS1229, RMeS Regenerative Medicine and Skeleton

Rapporteurs avant soutenance :

Stéphanie Pannier Professeur des Universités / Praticien Hospitalier – Université de Paris Cité
Institut Imagine, UMR1163

François Rannou Professeur des Universités / Praticien Hospitalier – Université de Paris Cité
T3S, UMRS1224
Composition du Jury :
Président du jury : François Rannou Professeur des Universités / Praticien Hospitalier – Université de Paris Cité
T3S, UMRS1224

Examinateur : Christelle Nguyen Professeur des Universités / Praticien Hospitalier – Université de Paris Cité
T3S, UMRS1224

Dir. de thèse : Antoine Hamel Professeur des Universités / Praticien Hospitalier – Nantes Université
Laboratoire RMeS UMRS1229

Co-dir. de thèse : Marion Fusellier Maître de conférences – Nantes Université

Laboratoire RMeS UMRS1229
Invités
Jérôme Guicheux Directeur de recherche – Nantes Université
Laboratoire RMeS UMRS1229

Johann Clouet Professeur des Universités / Praticien Hospitalier – Nantes Université

Laboratoire RMeS UMRS1229
Remerciements :

À Monsieur Jérôme Guicheux, Directeur de Recherche INSERM,

Pour l’accueil au sein du laboratoire RMeS, ou même plutôt au sein de LIOAD depuis mon
Master 2. Merci de m’avoir proposé de travailler sur ce vaste sujet aux multiples facettes. Merci
d’avoir accepté de juger ce travail.

À Madame Marion Fusellier, Maître de Conférence - Docteur Vétérinaire

Pour ton investissement, ton encadrement, tes corrections, mais aussi ta gentillesse, ta
bienveillance. Un grand MERCI. Tu as su être de bons conseils tout au long de ces quelques
années, tu as su me rappeler qu’il faut – je te cite – « battre le fer tant qu’il est chaud », et tu
as su m’écouter quand j’en avais besoin. C’est un réel plaisir de venir travailler à tes côtés.
J’espère que nous continuerons ainsi. Sois assurée de ma profonde reconnaissance.

À Monsieur Antoine Hamel, Professeur des Universités – Praticien Hospitalier,

Pour tout ce que vous m’avez apporté depuis mes débuts en médecine, en chirurgie, en
Anatomie. Merci pour tous vos conseils et corrections malgré vos nombreuses occupations.
Travailler à vos côtés est un honneur. Veuillez trouver ici le témoignage de mon profond
respect.

À Monsieur Johann Clouet, Professeur des Universités – Praticien Hospitalier

Merci pour ton encadrement lors de mon Master 2 et tes précieux conseils jusqu’à maintenant.
J’espère continuer de pouvoir travailler avec toi. Les manip’ à tes côtés sont toujours de bons
moments. Merci d’avoir accepté de juger ce travail.

À Madame Stéphanie Pannier et Monsieur François Rannou, Professeurs des Universités –

Praticiens Hospitaliers pour me faire l’honneur d’être rapporteurs de ce travail, et à Madame
Christelle N’Guyen, Professeur des Universités – Praticien Hospitalier, pour me faire
l’honneur de juger ce travail. Veuillez croire en ma grande considération.

3
À l’ensemble des membres du laboratoire RMeS que j’ai côtoyé de près ou de loin
Pour votre soutien, votre aide, votre bonne humeur. Je remercie en particulier Boris Halgand,
pour ta bienveillance, surtout à mes débuts à vos côtés pendant mon Master 2. Merci Julie
Lesœur pour ta patience, ton aide et pour tout ce que tu m’as appris en histologie. Merci à
tous les doctorants, post-doctorants, encadrants – chercheurs, personnels et mention spéciale
pour le bureau des c*****es (il s’appelle toujours comme ça ?) pour la bonne ambiance que
vous avez su créer au 1er.

Aux personnels de l’École Vétérinaire ONIRIS et du CRIP

Et en particulier à Dominique, Stéphane, Christian, mais aussi Patrice, Ingrid, au Docteur
Floriane Etienne, au Professeur Olivier Gauthier et tous les autres… Venir à ONIRIS et en
particulier au Service d’Imagerie est toujours un plaisir.

Au laboratoire d’Anatomie, et notamment à Messieurs Stéphane Lagier et Yvan Blin,

Merci pour votre bonne humeur, pour votre écoute, pour tous ces services que vous avez pu
me rendre, parfois à la dernière minute.

Au service de Chirurgie Infantile du CHU de NANTES, et en particulier aux Docteurs

Emmanuelle Mayrargue, Antoine Chalopin et David Gaudet, pour avoir fait face à mes
absences afin de mener à bien ce travail.

À Nora Bouhsina,
Ma « co-thésarde », merci pour ces moments, pour ton écoute, le partage de nos galères.
J’espère que nous continuerons à travailler ensemble

À Nathaly Gavira
Qui a été une de mes premières internes et que j’ai co-encadré pendant son Master 2. Ton
travail a permis d’enrichir les travaux en cours sur les modèles animaux et tu peux en être
fière. Je te remercie de m’avoir considéré, de m’avoir écouté, et d’avoir su répondre à mes
attentes.

4
À mes parents, François et Sabine Decante
Finalement, sans forcer le destin, mes travaux de recherche m’ont emmené en quelque sorte
vers la médecine vétérinaire. Et même si certains me regardent parfois du coin de l’œil,
pensant revoir un ancien élève, je suis fier d’arpenter les allées de l’ex-ENVN. Merci pour votre
soutien et l’intérêt que vous portez pour mes travaux.

À mes frères et sœur Suzanne, Arnaud et Guy qui adorent parler Médecine, Anatomie,
Sciences et Recherche avec moi, hâte que nous nous retrouvions.

À Maud, ma femme
Je te dois énormément. Merci pour tout.

À mes filles, Louise et Chloé

Vous êtes pour moi la meilleure des thérapies régénératrices, bien au-delà de la thérapie
cellulaire, de l’ingénierie tissulaire ou même de la thérapie génique :)

5
Table des Matières :
ABREVIATIONS : .......................................................................................................................................................................... 9
LISTE DES FIGURES : .................................................................................................................................................................. 10
LISTE DES TABLEAUX : ............................................................................................................................................................... 12
LISTE DES PUBLICATIONS : ........................................................................................................................................................ 13
LISTE DES COMMUNICATIONS ORALES : ................................................................................................................................... 14
ENCADREMENT : ....................................................................................................................................................................... 15
INTRODUCTION ............................................................................................................................................ 17
PARTIE I - LE DISQUE INTERVERTÉBRAL : ÉTAT DE L'ART ............................................................................... 21

A. Généralités : la colonne vertébrale .................................................................................................... 22

B. Embryologie ....................................................................................................................................... 25
1) Formation des vertèbres, des plateaux cartilagineux et des anneaux fibreux ............................................... 25
2) Formation du noyau pulpeux (NP).................................................................................................................. 25
C. Les constituants du disque intervertébral .......................................................................................... 27
1) Le noyau pulpeux ............................................................................................................................................ 27
2) L’anneau fibreux ............................................................................................................................................. 29
3) Les plateaux cartilagineux .............................................................................................................................. 30
D. Vascularisation du disque intervertébral ........................................................................................... 31
E. Innervation du disque intervertébral ................................................................................................. 31
F. Notion de « privilège immunitaire » du noyau pulpeux. .................................................................... 31

A. Relation structure – fonction : état d’hydratation du noyau pulpeux et pression intra-discale......... 33

B. Rôle du DIV en condition statique : absorption des chocs et redistribution des charges appliquées . 34
C. Mouvements et contraintes appliqués au DIV ................................................................................... 35

A. Lombalgies : définitions et épidémiologie.......................................................................................... 37

B. Physiopathologie de la lombalgie discogénique ................................................................................ 38
1) Lombalgie discogénique : une maladie multifactorielle. ................................................................................ 38
2) Vieillissement et dégénérescence du disque intervertébral .......................................................................... 39
3) Un évènement initiateur de la dégénérescence discale : la rupture du dialogue cellulaire ........................... 40
4) Dégénérescence discale : modifications locales à l’échelle moléculaire et cellulaire .................................... 42
5) Conséquences biomécaniques de la dégénérescence du DIV ........................................................................ 43
C. Caractérisation de la dégénérescence discale en histologie .............................................................. 44
D. Imagerie du disque intervertébral ..................................................................................................... 45
1) Radiographie................................................................................................................................................... 46
2) Tomodensitométrie ........................................................................................................................................ 46
3) L’IRM : Imagerie par Résonance Magnétique ................................................................................................. 47
a. Principes généraux ......................................................................................................................................................... 47
b. Notion de T1 et T2 ......................................................................................................................................................... 48
c. Étude du DIV en pondération T1.................................................................................................................................... 49
d. Étude du DIV en pondération T2.................................................................................................................................... 50
e. Les classifications de la dégénérescence du DIV ............................................................................................................ 50
f. « T2 weight signal intensity », relaxométrie et cartographie du disque intervertébral................................................. 53
4) Autres méthodes d’exploration du disque intervertébral .............................................................................. 55
5) À part : la discographie ................................................................................................................................... 56

A. Traitement fonctionnel ...................................................................................................................... 58

B. Traitement médicamenteux............................................................................................................... 59
C. Traitements chirurgicaux ................................................................................................................... 60
1) Arthrodèse vertébrale .................................................................................................................................... 60
2) Arthroplastie totale du DIV ............................................................................................................................. 62

6
 A. La réparation exogène ....................................................................................................................... 63
1) La thérapie cellulaire ...................................................................................................................................... 63
2) L’ingénierie tissulaire ...................................................................................................................................... 66
B. Réparation endogène ........................................................................................................................ 66
1) La biothérapie moléculaire ............................................................................................................................. 66
2) La thérapie génique ........................................................................................................................................ 68

PARTIE II - DEGENERESCENCE DU DISQUE INTERVERTEBRAL ET MEDECINE REGENERATRICE : LES MODÈLES

ANIMAUX..................................................................................................................................................... 69

A. Expérimentation animale : généralités .............................................................................................. 70

B. Les modèles de dégénérescence du DIV ............................................................................................. 71
1) Modèles de dégénérescence spontanée ........................................................................................................ 71
a. Dégénérescence naturelle ......................................................................................................................... 71
b. Dégénérescence accélérée ........................................................................................................................ 72
2) Modèles de dégénérescence induite .............................................................................................................. 74
a. Modèles secondaires à une modification mécanique ............................................................................... 74
b. Modèles secondaires à une lésion chirurgicale du DIV ............................................................................. 75
c. Modèles secondaires à un traitement chimique ou enzymatique du DIV ................................................ 75
d. Modèles secondaires à un traitement physique ....................................................................................... 76
C. Les critères de choix du modèle animal pour la médecine régénératrice du DIV ............................... 76
1) Morphologie du rachis et des DIV .................................................................................................................. 77
2) Physiologie et mécanismes de la dégénérescence du disque intervertébral ................................................. 78
3) Caractéristiques biomécaniques du DIV ......................................................................................................... 78

A. Les similitudes avec l’Homme ............................................................................................................ 80

B. Objectifs de la Thèse .......................................................................................................................... 82

A. Méthodologie..................................................................................................................................... 83
1) Description de l’étude et de la population ..................................................................................................... 83
2) Mesures morphométriques ............................................................................................................................ 84
3) Variabilité intra-individuelle et analyses statistiques ..................................................................................... 84
B. Résultats ............................................................................................................................................ 86
1) Variabilité intra-individuelle ........................................................................................................................... 86
2) Mesures morphométriques des vertèbres lombaires ovines et lombaires et anatomie comparée .............. 86
a. Comparaison d’une vertèbre lombaire de brebis avec une vertèbre lombaire humaine ......................... 86
b. Comparaison d’une vertèbre ovine crâniale (L1) avec une vertèbre ovine caudale (L7) .......................... 90

A. Méthodologie..................................................................................................................................... 92
1) Description de l’étude et de la population ..................................................................................................... 92
2) Analyse IRM .................................................................................................................................................... 92
3) Analyses statistiques....................................................................................................................................... 93
B. Résultats ............................................................................................................................................ 93
1) Étude qualitative de la dégénérescence : score de PFIRRMANN ................................................................... 93
2) Étude quantitative de la dégénérescence : Relaxométrie du signal T2 du NP ............................................... 95

7
PARTIE III - LES VOIES D'ABORD DU DISQUE INTERVERTÉBRAL ................................................................... 119

A. La voie d’abord trans-annulaire (VTA) ............................................................................................. 121

B. La voie trans-pédiculaire (VTP) ........................................................................................................ 122
C. Objectifs de la thèse ......................................................................................................................... 125

A. Méthodologie................................................................................................................................... 126
1) Description de l’étude et de la population ................................................................................................... 126
2) Mesures morphométriques appliquées à l’abord du DIV ............................................................................. 126
3) Variabilité intra-individuelle et analyses statistiques ................................................................................... 129
B. Résultats .......................................................................................................................................... 129
1) Variabilité intra-individuelle ......................................................................................................................... 129
2) Mesures appliquées à la VTP ........................................................................................................................ 130
3) Mesures appliquées à la VTA ........................................................................................................................ 131

PARTIE IV - DISCUSSION ET PERSPECTIVES .................................................................................................. 149

CONCLUSION .............................................................................................................................................. 161

REFERENCES ............................................................................................................................................................................ 163
ANNEXES ................................................................................................................................................................................. 187

8
Abréviations :

AINS : anti-inflammatoire non stéroïdien

AF : anneau fibreux (Annulus Fibrosus)

EP : plateaux cartilagineux (end-plate)

CEST : Chemical Exchange Saturation Transfert

CSM : cellule stromale mésenchymateuse

CTGF : Connective Tissue Growth Factor

DIV : disque intervertébral

GDF : Growth Differenciation Factor 5

IGF : Insuline Growth Factor

IL : interleukine

MMPs : métalloprotéase matricielle (matrix mettaloprotease)

NP : noyau pulpeux (Nucelus Pulposus)

TGF : Transforming Growth Factor

TNF : tumor necrosis factor

VEGF : Vascular Endothelial Growth Factor

NGF : Nerve Growth Factor

Shh : Sonic Hedgehog

SRM : Spectrométrie par résonance magnétique

T2wsi : T2 weight signal intensity

VTA (TAA) : voie trans-annulaire

VTP (TPA) : voie trans-pédiculaire

9
Liste des Figures :

Fig. 1 Vue sagittale (a) et coupe sagittale (b) de la colonne vertébrale de l’Homme ................... 22

Fig. 2 Vues sagittale, crâniale, ventrale et dorsale d’une vertèbre lombaire ................................ 23

Fig. 3 Vue sagittale d’un segment rachidien ....................................................................................... 24

Fig. 4 Schématisation de la formation des vertèbres et des disques intervertébraux à partir des
sclérotomes et de la notochorde : vue crânio-ventrale .................................................................... 26

Fig. 5 Coupes histologiques sagittales thoraciques d’embryons de souris à 11.5, 12.5, 13.5 et
17.5 jours. Coloration à l’hématoxyline-éosine-safran. Formation des vertèbres et des DIV à
partir des sclérotomes et de la notochorde ....................................................................................... 26

Fig. 6 Représentation schématique du disque intervertébral .......................................................... 27

Fig. 7 Représentation d’un agrégat d’aggrécane associé à une chaine d’acide hyaluronique... 28

Fig. 8 Représentation schématique de l’organisation en lamelles de l’anneau fibreux. ............ 30

Fig. 9 Variation de la pression intra-discale selon la position chez l’homme .............................. 34

Fig. 10 Répartition des contraintes au sein du disque intervertébral ........................................... 35

Fig. 11 Mouvements possibles entre 2 vertèbres grâce à 6 degrés de liberté permis par le DIV.
Les flèches bleues représentent les mouvements des corps vertébraux ..................................... 36

Fig. 12 Illustration du cercle vicieux de la dégénérescence discale ............................................... 43

Fig. 13 Schématisations et représentations graphiques de la repousse de 𝑀𝑧 #####⃗ durant la

#########⃗ durant la relaxation transversale ....... 48
relaxation longitudinale et de la décroissance de 𝑀𝑥𝑦

Fig. 14 IRM en coupe sagittale d’une brebis de 1 an en pondération T1 (a) et T2 (b). ............... 49

Fig. 15 Exemple de cartographie T2 d’un DIV humain, en coupe sagittale, en fonction de la

classification de PFIRRMANN. ............................................................................................................... 54

Fig. 16 Exemple d’arthrodèse vertébrale antérieure (ALIF) .............................................................. 61

Fig. 17 Arthroplastie totale du DIV ....................................................................................................... 62

Fig. 18 Reconstruction scanographique en 3 dimensions d’une vertèbre L3 ovine et d’une

vertèbre L3 humaine ............................................................................................................................... 89

Fig. 19 Reconstruction scanographique en 3 dimensions d’une vertèbre L1 ovine et d’une

vertèbre L7 ovine...................................................................................................................................... 91

10
Fig. 20 Score qualitatif de PFIRRMANN initial (J-0) et à 6 mois de l’inclusion (6 mois) ............. 93

Fig. 21 Évolution du score de PFIRRMANN sur 6 mois ..................................................................... 94

Fig. 22 Score de PFIRRMANN à 6 mois des 2 sous-groupes grade II et grade III. ........................ 94
Fig. 23 Évolution du temps de relaxation T2 du NP à 6 mois ......................................................... 95

Fig. 24 Voie d’abord trans-annulaire (VTA) ....................................................................................... 122

Fig. 25 Voie d’abord trans-pédiculaire (VTP) ................................................................................... 123

Fig. 26 Illustrations des repérages per-opératoires pour effectuer le point d’entrée de la VTP
selon Vadalà et al. chez la brebis et chez l’Homme ....................................................................... 123

Fig. 27 Coupes scanographiques d’un rachis humain. Illustration des 11 mesures faites sur les
scanners humains et ovins................................................................................................................... 127

Fig. 28 Coupe scanographique transversale d’un rachis humain passant par le plan d’un DIV
lombaire. Illustration des 7 mesures faites sur les scanners humains et ovins ....................... 128

Fig. 29 Comparaison de l’angle « a » et de l’angle « b » chez la brebis et l’Homme ................. 130

Fig. 30 Comparaison de l’angle « a(VTAmoy) » chez la brebis et l’Homme ............................... 132

Fig. 31 Coupes sagittales d’un rachis lombaire d’une brebis (a) et d’un humain (b) dans le plan
passant par l’axe des voies trans-pédiculaires ................................................................................ 154

Fig. 32 Vue sagittale d'un segment rachidien : le triangle de Kambin ......................................... 156

11
Liste des tableaux :

Tableau I : classification de Thompson ................................................................................................ 40

Tableau II : score histologique de BOOS .............................................................................................. 44

Tableau III : score de BOOS modifié ...................................................................................................... 45

Tableau IV : classification de PFIRRMANN .......................................................................................... 51

Tableau V : classification de PFIRRMANN modifiée .......................................................................... 52

Tableau VI : classification de MODIC .................................................................................................... 53

Tableau VII : les modèles de dégénérescence spontanée du DIV ................................................... 73

Tableau VIII : description des 24 mesures scanographiques effectuées sur chaque vertèbre
humaine et ovine ...................................................................................................................................... 85

Tableau IX : modèle linéaire à effets mixtes : analyse de la variabilité intra-opérateur. ........... 86

Tableau X : mesures scanographiques des vertèbres lombaires ovines et humaines ................ 88

Tableau XI : description des 18 mesures scanographiques concernant la VTP et la VTA....... 128

Tableau XII : modèle linéaire à effets mixtes : analyse de la variabilité intra-opérateur ......... 129

Tableau XIII : mesures scanographiques appliquées à la VTP sur DIV ovins et humains ....... 130

Tableau XIV : mesures scanographiques appliquées à la VTA sur DIV ovins et humains ...... 131

12
 Liste des publications :

§ Collateral effects of targeting the nucleus pulposus via a transpedicular or transannular

surgical route: a combined X-ray, MRI, and histological long-term descriptive study in
sheep (2021 European Spine Journal, IF : 2,634)
C. Decante, J. Clouet, A. Hamel, L. Le Fournier, O. Gauthier, D. Rouleau, J. Lesoeur, B. Halgand, C. Le
Visage, J. Guicheux, M. Fusellier

§ Correlation between magnetic resonance, X-ray imaging alterations and histological

changes in an ovine model of age-related disc degeneration. (2021, eCells and Materials,
IF : 3,7)
N. Bouhsina*, C. Decante*, J.B. Hardel, S. Madec, J. Abadie, A. Hamel, C. Le Visage, J. Lesoeur, J. Guicheux,
J. Clouetᵠ and M. Fusellierᵠ (* Co-first authors, ᵠ Co-last authors)

§ Intervertebral disc surgical approach in Human, ovine and canine models: detailing trans-
pedicular and trans-annular approach for treatment of degenerative intervertebral disc
disease (soumis à Scientific Reports, IF : 4,379)
N. Gavira*, C. Decante*, N. Bouhsina, D. Rouleau, B. Miannay, N. Bronsard, A. David, R. Jossier, O. Gauthier,
A. Hamel, J. Guicheux, J. Clouetᵠ and M. Fusellierᵠ (* Co-first authors, ᵠ Co-last authors)

13
 Liste des communications orales :

§ C.Decante, J.Clouet, L.Lefournier, O.Gauthier, D.Rouleau, J.Lesoeur, B.Halgand, C.Le Visage,

J.Guicheux, M.Fusellier, A.Hamel « Médecine régénératrice du disque intervertébral (DIV) :
validation de la voie d’abord transpédiculaire in vivo chez la brebis » Société Française
d’Orthopédie Pédiatrique (SOFOP) Bruxelles 2019

§ C.Decante, J.Clouet, A.Hamel, L.Lefournier, O.Gauthier, D.Rouleau, J.Lesoeur, B.Halgand, C.Le

Visage, J.Guicheux, M.Fusellier « Regenerative medicine of intervertebral disc: comparison of
the transpedicular and transannular approaches of ovine lumbar intervertebral disc in a
longitudinal follow up » Biospine Rome 2019

§ C.Decante, J.Clouet, J.Guicheux, M.Fusellier « Regenerative medicine of intervertebral disc:

collateral effects of targeting the Nucleus Pulposus via a transpedicular or transannular
surgical route: a combined X-ray, MRI, and histological long-term descriptive study in sheep »
Journée Scientifique de l’École Doctorale Biologie Santé Bretagne-Loire 2020 - format digital

14
 Encadrement :

§ Co-encadrement de Nathaly Gavira (novembre 2019 – Novembre 2020) Master Biologie –

Santé : signaux et images en biologie et médecine (SIBM)
« Imagerie et anatomie comparées du rachis lombaire chez les modèles humain, ovin et canin :
application dans les voies d’abord du disque intervertébral »

15
16
Introduction

17
 La lombalgie se définit, selon la Haute Autorité de Santé, comme une douleur

rachidienne située entre la charnière thoraco-lombaire et le sillon inter-glutéal. Considérée

comme le « Mal du siècle » par l’Organisation Mondiale de la Santé, 84% de la population

mondiale souffrira de douleurs rachidiennes et en particulier de lombalgie au moins une fois

au cours de sa vie [1]. L’incidence ne cesse d’augmenter ces dernières années faisant de la

lombalgie un motif fréquent de recours aux soins, d’arrêts de travails souvent répétés et

d’invalidité. Les retentissements personnels, professionnels et sociétaux sont considérables et

les impacts économiques sont majeurs (plus de 2 milliards d’euros par an en France [2], plus

de 100 milliards de dollars par an aux États-Unis [3,4]) faisant de la lombalgie un véritable

problème de santé publique. Parmi toutes les causes de lombalgies, 40% sont secondaires à la

dégénérescence du disque intervertébral (DIV) et se nomment à ce titre « lombalgie

discogénique » [5].

Le DIV est un fibrocartilage situé entre 2 corps vertébraux adjacents. Souvent

comparé à un amortisseur, son rôle est mécanique : il participe à la stabilité et à la mobilité

du rachis. Le DIV est composé en son centre d’un noyau pulpeux ou Nucleus Pulposus (NP) qui

est hautement hydraté, entouré d’un anneau fibreux ou Annulus Fibrosus (AF) et amarré aux

vertèbres adjacentes par deux plateaux cartilagineux. Au sein du NP, 2 types cellulaires

cohabitent : les nucléopulpocytes et les cellules notochordales. Le dialogue entre ces 2

populations permet notamment l’inhibition de l’apoptose et la prolifération des

nucléopulpocytes, ainsi que la synthèse des constituants de la matrice extra-cellulaire retenant

les molécules d’eau. Mais à maturité squelettique, il existe chez l’Homme une disparition

spontanée des cellules notochordales entrainant un déséquilibre plus ou moins marqué entre

anabolisme et catabolisme au sein du DIV. Cette cascade d’évènements conduit à la

dégradation de la matrice extra-cellulaire et à la perte des propriétés biomécaniques du DIV

qui se déshydrate et se fibrose : c’est la dégénérescence discale.

Aujourd’hui les traitements de la lombalgie discogénique sont symptomatiques et

s’attachent à atténuer les douleurs pour diminuer leur retentissement et améliorer la qualité

de vie du patient. Qu’il soit fonctionnel, médicamenteux ou chirurgical, aucune thérapie ne

permet aujourd’hui de traiter les lésions du DIV. L’amélioration des connaissances de la

physiopathologie discale permet cependant d’envisager de nouvelles stratégies

18
thérapeutiques cette fois-ci « étiopathogéniques » : c’est la médecine régénératrice du DIV.

L’objectif est de restaurer l’équilibre métabolique du DIV en injectant au sein du NP un

substitut régénérateur limitant l’activité pro-inflammatoire, stimulant les acteurs anaboliques

et reconstituant les composants de la matrice extra-cellulaire [6]. Différentes stratégies sont

envisagées comme la réparation exogène basée sur la thérapie cellulaire couplée à l’utilisation

de biomatériaux, ou encore la réparation endogène basée sur la biothérapie moléculaire et la

thérapie génique. Les résultats sont prometteurs et laissent espérer la découverte d’un

traitement régénérateur efficace.

Le développement d’un traitement régénérateur injectable impose de réfléchir sur la

voie d’abord, c’est-à-dire sur le trajet que l’opérateur devra emprunter pour accéder au DIV.

Le choix de la voie d’abord nécessite une réflexion cohérente avec le projet scientifique. Dans

le contexte de la médecine régénératrice du DIV, elle doit être la moins invasive possible et

doit préserver le DIV traité. Le « Gold Standard » est aujourd’hui la voie d’abord trans-

annulaire qui consiste à traverser l’AF du DIV. Simple de réalisation, elle présente cependant

un inconvénient : la ponction de l’AF risque de le fragiliser et d’induire une dégénérescence

accélérée du DIV. Une alternative est la voie d’abord trans-pédiculaire qui consiste à traverser

successivement le pédicule, le corps vertébral et le plateau cartilagineux de la vertèbre sous-

jacente. Séduisante car elle épargne l’AF, la voie trans-pédiculaire induit cependant de

nouvelles lésions qui doivent être évaluées.

L’extrapolation des résultats in vitro et l’étude des conséquences des voies d’abord du

NP ne sont pas réalisables directement chez l’Homme. Il est donc nécessaire de sélectionner

un modèle animal. Ainsi, le choix du modèle doit prendre en compte les questions posées et

l’objectif de l’expérimentation pour que celui-ci soit pertinent. Pour étudier la faisabilité et les

conséquences de l’abord du NP, mais aussi pour évaluer l’efficacité et l’innocuité d’un nouveau

traitement régénérateur sur le DIV, il est nécessaire que les conditions expérimentales soient

très proches de ce qui pourrait être observé chez l’Homme. Un modèle animal de grande taille

présentant de fortes similitudes avec l’Homme serait le plus pertinent. Parmi les modèles

animaux à disposition, la brebis est particulièrement intéressante : de fortes similitudes

biologiques et morphologiques entre les DIV humains et les DIV ovins ont été décrites et il

existe comme chez l’Homme une dégénérescence spontanée des DIV chez la brebis.

19
Néanmoins, peu de travaux ont étudié cette dégénérescence spontanée et il est nécessaire de

caractériser précisément cette dégénérescence chez la brebis par des méthodes non invasives

également utilisables chez l’Homme.

L’objectif de ce travail de thèse a donc tout d’abord été d’apporter des données

morphologiques et physiopathologiques du modèle ovin en démontrant le caractère spontané

de la dégénérescence discale. Puis, nous avons étudié la faisabilité des voies d’abord du NP et

leurs conséquences sur le DIV chez la brebis pour permettre de choisir la voie d’abord la plus

pertinente.

20
 Partie I

Le disque intervertébral : état de l’art

21
 Anatomie du disque intervertébral

A. Généralités : la colonne vertébrale

La colonne vertébrale, ou rachis (du grec ancien ῥάχις, rakhis « épine dorsale »), est

une chaine osseuse articulée composée chez l’Homme de 24 vertèbres mobiles (7 vertèbres

cervicales, 12 vertèbres thoraciques, 5 vertèbres lombaires) et de 8 à 10 vertèbres soudées (5

vertèbres sacrées, 3 à 5 vertèbres coccygiennes). Élément principal du squelette axial, le rachis

est situé entre la boite crânienne et le pelvis. Il contient notamment la moelle spinale et les

méninges spinales situées dans le canal vertébral [7].

Le rachis mesure environ 70cm chez l’homme, 60cm chez la femme [8]. Debout, en

situation physiologique, il présente quatre courbures sagittales qui sont propres à l’espèce

humaine (Fig. 1). Il existe ainsi une courbure cervicale et une courbure lombaire convexes vers

l’avant appelées « lordoses » cervicale et lombaire ; et des courbures thoracique et sacro-

coccygienne concaves vers l’avant appelées « cyphoses » thoracique et sacro-coccygienne. De

face, la colonne vertébrale est rectiligne.

Fig. 1 Vue sagittale (a) et coupe sagittale (b) de la colonne vertébrale de l’Homme. Il existe quatre courbures
physiologiques chez l’Homme en position debout : la lordose cervicale, la cyphose thoracique, la lordose
lombaire et la cyphose sacrée

22
 Les vertèbres (du latin vertebra : articulation, jointure) ont une anatomie semblable,

exceptées la première et la deuxième vertèbres cervicales (Fig. 2). La partie ventrale de la

vertèbre est appelée « corps vertébral ». De forme cylindrique, il s’articule avec les corps

vertébraux adjacents par l’intermédiaire des disques intervertébraux solidement attachés aux

plateaux vertébraux. La partie dorsale de la vertèbre est « l’arc neural », comprenant les lames,

les processus transverses, les massifs articulaires crâniaux et caudaux et le processus épineux.

Chaque arc neural s’articule avec les vertèbres adjacentes par l’intermédiaire des 4 massifs

articulaires : 2 facettes crâniales et 2 facettes caudales. Enfin, il existe 2 pédicules qui relient

le corps vertébral à l’arc neural formant ainsi le canal vertébral, limité ventralement par le

corps vertébral, dorsalement par les lames et le processus épineux et latéralement par les

pédicules. Il y passe la moelle spinale jusqu’en L1 puis la queue de cheval contenues dans les

méninges, les vaisseaux spinaux et épiduraux.

Fig. 2 Vues sagittale, crâniale, ventrale et dorsale d’une vertèbre lombaire. Le canal vertébral est limité
ventralement par le corps vertébral, dorsalement par les lames et le processus épineux et latéralement par
les pédicules. Il contient la moelle spinale, les méninges ainsi que les vaisseaux spinaux et épiduraux.

23
 Ainsi entre 2 vertèbres adjacentes, il existe 3 articulations : une articulation fibro-

cartilagineuse (ou symphyse) : le disque intervertébral (DIV), et 2 articulations synoviales : les

articulations zygapophysaires. Entre chaque vertèbre, il existe deux foramens intervertébraux

(droit et gauche). Le foramen intervertébral est limité crânialement par le pédicule de la

vertèbre crâniale, caudalement par le pédicule de la vertèbre caudale, ventralement par le DIV

et les corps vertébraux et dorsalement par les massifs articulaires. Dans chaque foramen

intervertébral passe un nerf spinal, anciennement appelée racine nerveuse (Fig. 3).

Fig. 3 Vue sagittale d’un segment rachidien. Les vertèbres s’articulent entre elles grâce au disque
intervertébral et aux articulations zygapophysaires.

Chez l’homme, il existe donc 23 disques intervertébraux. Le disque intervertébral est

un fibrocartilage de hauteur variable, atteignant 12mm d’épaisseur dans le secteur lombaire

et faisant environ 4cm de diamètre [9]. Il est composé de trois structures distinctes (qui seront

détaillées dans le chapitre I- C Les constituants du disque intervertébral) : le noyau pulpeux

(ou Nucleus Pulposus), l’anneau fibreux (ou Annulus Fibrosus) et les plateaux cartilagineux [10].

24
 B. Embryologie

1) Formation des vertèbres, des plateaux cartilagineux et des anneaux fibreux

Lors de la gastrulation (3e semaine de gestation chez l’Homme), la notochorde

apparait au sein du mésoblaste. C’est la notochorde qui définira l’axe longitudinal de

l’embryon et qui orchestrera la formation des vertèbres et des DIV grâce à de nombreuses

voies de signalisation. De part et d’autre de la notochorde, les somites apparaissent au sein

du mésoblaste para-axial. Ces somites contiennent le matériel cellulaire pour la constitution

du squelette axial, de la musculature du tronc ainsi que des tissus sous-cutané et cutané [11].

Sous l’action de certaines molécules de signalisation, telles que Sonic hedgehog et

Noggin, la portion ventro-médiale des somites évolue et se différencie en sclérotome [12,13].

Les cellules mésenchymateuses du sclérotome migrent ensuite autour de la notochorde. Un

réarrangement cellulaire se produit au sein des sclérotomes. Il apparait 2 régions de faibles

condensations cellulaires : une région crâniale et une région caudale, séparées par un amas de

cellules plus condensées formant la limite intra-segmentaire (ou fissure de Von Ebner) [11].

C’est le phénomène de resegmentation des sclérotomes.

Les vertèbres se formeront dans les zones peu condensées dès lors que les cellules

se différencieront en chondrocytes hypertrophiques [14]. La partie la plus ventrale donnera

donc les corps vertébraux et les plateaux cartilagineux, la partie la plus dorsale donnera les

arcs dorsaux. Une vertèbre est ainsi issue de la partie caudale et de la partie crâniale de 2

sclérotomes adjacents (Fig. 4, Fig. 5).

Les zones plus condensées des sclérotomes évolueront vers des structures fibro-

cartilagineuses dans lesquelles les cellules s’allongent et s’organisent en cercles concentriques

autour de la notochorde. A terme, cette structure tissulaire sera organisée et formera l’anneau

fibreux (AF) du DIV [12,15,16].

2) Formation du noyau pulpeux (NP)

Les NP sont des reliquats de la notochorde [17,18]. En effet la notochorde régresse

dans les régions des futurs corps vertébraux alors que les cellules de la notochorde

s’accumulent au centre des futurs DIV (Fig. 4, Fig. 5). Les mécanismes moléculaires

responsables de la transformation de la notochorde restent encore peu connus, deux

25
hypothèses sont évoquées. La première est le phénomène d’apoptose et de proliférations

différentielles des cellules notochordales [19]. La seconde repose sur l’apparition de

contraintes mécaniques des corps vertébraux en formation, repoussant les cellules de la

notochorde vers les futurs DIV [20,21].

Fig. 4 schématisation de la formation des vertèbres et des disques intervertébraux à partir des sclérotomes
et de la notochorde : vue crânio-ventrale. a) À partir de la 3e semaine, les sclérotomes entourent la
notochorde et le tube neural. b) Resegmentation des sclérotomes : apparition au sein des sclérotomes d’
amas cellulaires condensés formant les limites intra-segmentaires (fissures de Von Ebner) qui formeront
les futurs anneaux fibreux du DIV. c) apparition des ébauches des corps vertébraux suite à l’association de
2 paires de sclérotomes adjacents, poursuite de la formation des anneaux fibreux et modification de la
notochorde : régression à hauteur des futurs corps vertébraux et accumulation à hauteur des futurs DIV.
d) Aspect morphologique d’un rachis mature.

Fig. 5 Coupes histologiques sagittales thoraciques d’embryons de souris à 11.5, 12.5, 13.5 et 17.5 jours.
Coloration à l’hématoxyline-éosine-safran. Formation des vertèbres et des DIV à partir des sclérotomes et
de la notochorde. (AF : anneau fibreux, CV : corps vertébral, fCV : futur corps vertébral, fDIV : futur disque
intervertébral, NP : noyau pulpeux, NTC : notochorde. Les flèches blanches montrent la gaine péri-
notochordale). Barre d’échelle : 100µm. Travaux de Maëva Dutilleul et Anne Camus)

26
 C. Les constituants du disque intervertébral

Le disque intervertébral (DIV) est donc composé d’un noyau pulpeux, entouré d’un

anneau fibreux et de deux plateaux cartilagineux (Fig. 6). Il est majoritairement composé d’eau

(70 à 80%), de collagènes (15%), de protéines constituants la matrice extra-cellulaire (9%), les

cellules ne représentant que 1% de l’ensemble [16].

Fig. 6 Représentation schématique du disque intervertébral (d’après Marchand et al. [10])

1) Le noyau pulpeux
Le noyau pulpeux - ou Nucleus Pulposus - (NP) est une structure fortement hydratée

(plus de 80%) assimilable à un hydrogel. Cet état d’hydratation s’explique grâce à sa matrice

extra-cellulaire riche en protéoglycanes et notamment en aggrécanes qui retiennent les

molécules d’eau [22]. La matrice extra-cellulaire est également constituée de collagènes,

majoritairement de type II.

À l’échelle moléculaire, l’aggrécane est un protéoglycane chargée négativement. Il est

composé de centaines de chaines de chondroïtine sulfate et une trentaine de kératane sulfate.

L’aggrécane s’associe à l’acide hyaluronique et à une petite glycoprotéine pour former des

agrégats de haut poids moléculaire attirant les cations et notamment les ions sodium Na+, et

donc l’eau par osmose [23,24] (Fig. 7).

27
Fig. 7 Représentation d’un agrégat d’aggrécane associé à une chaine d’acide hyaluronique. Cet agrégat
moléculaire chargé négativement attire les cations et donc par osmose les molécules d’eau. (Alberts et al.
2014 [24]).

Au sein du NP, la densité cellulaire est faible : environ 3000 cellules/mm3 chez un

sujet jeune [25]. Deux populations cellulaires cohabitent au sein du DIV sain :

- Les cellules notochordales : reliquat de la notochorde, les cellules notochordales

sont de grandes cellules (25 à 85µm) contenant de larges vacuoles. Chez l’Homme, ces cellules

tendent à disparaitre à maturité squelettique.

- les nucléopulpocytes : Ce sont de plus petites cellules situées dans le NP.

Récemment caractérisés, leur origine est encore incertaine mais au vu de l’expression de leur

marqueurs géniques, les nucléopulpocytes dérivent très probablement d’une lignée commune

avec les cellules notochordales [26]. Les nucléopulpocytes ont la capacité de synthétiser les

composants de la matrice extra-cellulaire du NP : aggrécanes et collagènes de type II, comme

les chondrocytes articulaires, mais avec un ratio différent (ratio aggrécanes/coll II : 27/1 pour

les nucléopulpocytes ; 2/1 pour les chondrocytes articulaires) [27]. C’est pour cette raison que

les nucléopulpocytes ont longtemps été appelés « chondrocyte-like » du fait de leur similitude

phénotypique. De récentes études ont confirmé l’expression par les nucléopulpocytes de

plusieurs marqueurs phénotypiques spécifiques tels que CD24, PAX1, CA12, OVOS2, HIF-a,

cytokératine 8/18/19 [28,29].

28
 2) L’anneau fibreux
L’anneau fibreux - ou Annulus Fibrosus - (AF) est une structure fibreuse composée de

couches lamellaires concentriques enveloppant le NP et s’étendant entre 2 plateaux

cartilagineux adjacents. Elle est composée de 60 à 70% d’eau. Le nombre de lamelles varie

entre 15 et 25 selon la hauteur rachidienne (les DIV lombaires contiennent plus de lamelles),

mais aussi au sein du DIV (les régions ventrales et latérales des DIV contiennent plus de

lamelles que les régions dorsales). Ces lamelles sont majoritairement composées de fibres de

collagène strictement parallèles. Elles sont inclinées par rapport au plan du DIV d’environ 30°

et ont donc une orientation hélicoïdale [30,31]. Entre deux lamelles adjacentes, les fibres de

collagènes ne sont pas orientées dans le même sens et la répartition n’est pas ubiquitaire [32].

La morphologie et la composition de l’AF varient de sa périphérie jusqu’à son centre. Ainsi,

deux régions se distinguent au sein de l’AF : l’AF externe et l’AF interne (Fig. 8).

Les collagènes sont les principaux constituants de l’AF en excluant l’eau, bien que

leur quantité diminue de sa périphérie vers son centre (75 à 90% de sa masse sèche pour l’AF

externe, 40 à 75% pour l’AF interne [33]. De même, le type de collagène varie au sein de l’AF,

le collagène de type I est majoritairement retrouvé dans l’AF externe, alors que le collagène de

type II est surtout retrouvé dans l’AF interne [34]. En plus faible quantité, il existe également

du collagène de type III, V, VI, IX et XI [35].

Comme le NP, la matrice extra-cellulaire de l’AF contient des protéoglycanes et de

l’acide hyaluronique, mais en quantité moindre. La quantité de protéoglycanes et d’acide

hyaluronique, et donc le taux d’hydratation de l’AF, augmente graduellement de l’AF externe

vers l’AF interne [36]. Ainsi la partie la plus périphérique de l’AF est plus fibreuse, moins

hydratée et possède une meilleure résistance aux tensions.

Au sein de l’AF, la densité cellulaire est d’environ 9000 cellules/mm3 [37]. Dans l’AF

externe, les cellules ont l’aspect de cellules fibroblastiques. Elles sont fusiformes et sont

orientées parallèlement aux fibres de collagène de type I qu’elles synthétisent. Au niveau de

l’AF interne, les cellules sont plus sphériques et synthétisent le collagène de type II. Elles sont

à ce titre assimilées à des chondrocytes.

29
Fig. 8 Représentation schématique de l’organisation en lamelles de l’anneau fibreux.

3) Les plateaux cartilagineux

Les plateaux cartilagineux – (end-plate : EP) sont situés sur les faces crâniales et

caudales des DIV. Il s’agit d’une « plaque » cartilagineuse de 0,6 à 1mm d’épaisseur amarrant

le DIV aux corps vertébraux adjacents [38,39]. Les plateaux cartilagineux sont plus fins en leur

centre, en regard du noyau pulpeux. Ils contiennent des chondrocytes qui synthétisent du

collagène, surtout de type II (60 à 80% de la masse sèche) ainsi que des protéoglycanes (15 à

20%). La périphérie du plateau est plus riche en collagène que le centre du plateau. À l’inverse,

le centre du plateau est plus riche en protéoglycanes que la périphérie du plateau [16].

Souvent oubliés, les plateaux cartilagineux ont pourtant un rôle majeur. Le premier

est mécanique, ils assurent un solide amarrage du DIV aux corps vertébraux adjacents. Le

second est homéostasique. Ils permettent en effet les échanges entre la vertèbre richement

vascularisée et le DIV qui est avasculaire. Ainsi, les plateaux cartilagineux agissent comme des

membranes semi-perméables apportant de l’oxygène, des nutriments et évacuant des déchets

cellulaires [40,41].

Les plateaux cartilagineux sont à distinguer des plateaux vertébraux, qui

correspondent aux surfaces osseuses crâniales et caudales des corps vertébraux. Un amalgame

est souvent fait entre ces deux structures.

30
 D. Vascularisation du disque intervertébral

Les plateaux cartilagineux contiennent de rares capillaires issus des corps vertébraux.

L’AF reçoit à sa périphérie ventrale et dorsale quelques capillaires issus des ligaments

longitudinaux. Le NP, lui, est totalement avasculaire. La vascularisation du disque est donc

pauvre, et s’appauvrit encore d’avantage avec l’âge [42].

Le disque intervertébral étant très peu vascularisé, les conditions environnementales

au sein du disque sont donc particulières, l’apport par diffusion en nutriments y est limité et

la concentration en oxygène y est faible. En effet, cette concentration est estimée à 1% au sein

du DIV, contre 2 à 7% au sein des cartilages et contre 16 à 20% au sein les autres tissus [43,44].

Les cellules intra-discales et notamment les cellules du NP s’adaptent à ces conditions de

stress hypoxique en procédant à une glycolyse anaérobie [40,45]. La production sans oxygène

d’adénosine triphosphate (ATP) entraine en revanche l’acidification du milieu extra-cellulaire

(pH : 6,9 à 7,2) par la formation d’acide lactique qui devra être éliminé également par diffusion

[6,46].

E. Innervation du disque intervertébral

Le NP et les plateaux cartilagineux ne sont pas innervés. L’AF est innervé seulement

sur sa partie la plus périphérique. La partie dorsale est innervée par le rameau méningé

récurrent correspondant. Les parties ventrale et latérales sont innervées par des branches de

la chaine ganglionnaire latéro-vertébrale [47,48]. Des études ont montré que les disques

intervertébraux dégénérés de patients lombalgiques disposent d’une innervation plus riche

avec notamment l’apparition de fibres nerveuses nociceptives pauvres en myéline [49,50].

F. Notion de « privilège immunitaire » du noyau pulpeux.

Il est admis que le DIV, et plus particulièrement le NP, est un site « immuno-

privilégié », comme le cerveau ou encore la rétine [51,52]. Cependant, l’explication

physiopathologique n’est aujourd’hui pas complètement certaine. Le NP est-il incapable de

provoquer une réaction immunitaire ou tolère-t-il l’introduction d’antigène allogénique ?

31
 Les barrières physiques comme l’AF, le plateau cartilagineux et son rôle de membrane

semi-perméable ainsi que l’absence de vascularisation du NP sont en partie responsables de

ce privilège immunitaire. Mais il existe très certainement des barrières moléculaires, comme

l’évoquent les résultats de travaux de thérapie génique au sein du DIV utilisant des adénovirus

comme vecteur. En effet, de longues durées d’expression du transgène, contrairement à ce qui

est observé lors de la transfection de tissus dits « immunocompétents » a été remarquée

[37,53]. L’étude moléculaire de cellules issus de tissus immuno-privilégiés dont les cellules du

NP a mis en évidence la présence d’une protéine transmembranaire FasL (Apolipoproteïne 1-

Ligand, CD95, famille de TNF) exprimée également par les cellules T activées, les cellules NK

et les cellules tumorales [54–56]. FasL est capable de se fixer à Fas (protéine transmembranaire

de type I exprimée par de très nombreux types cellulaires) et d’induire ensuite l’apoptose de

la cellule exprimant FAS. Le complexe FasL – Fas jouerait ainsi un rôle dans le maintien du

privilège immunitaire [54]. Pourtant lors de hernie discale, le NP expulsé est responsable d’une

inflammation locale, ce qui conforte l’hypothèse des barrières physiques participant à ce

privilège immunitaire [57,58].

Appartenant au groupe des symphyses, le disque intervertébral est une articulation

à part entière qui participe à la composition du squelette axial et à la mobilité du rachis. Sa

composition si particulière permet de comprendre son rôle.

32
 Rôle et biomécanique du disque intervertébral chez
l’Homme
Souvent comparé à un amortisseur, le DIV intervient dans 2 des grands rôles de la

colonne vertébrale. En condition statique, il participe à la redistribution des charges

appliquées. En condition dynamique, il participe aux mouvements du rachis.

A. Relation structure – fonction : état d’hydratation du noyau pulpeux

et pression intra-discale

Le NP, grâce à sa nature très hydratée, est un tissu incompressible mais déformable

et supporte 75% des contraintes du DIV en compression. Ainsi la composition du NP permet

de convertir une contrainte mécanique extérieure en une contrainte hydrostatique intra-

discale.

La quantité d’eau au sein du NP et la pression intra-discale n’est pas constante et

dépend de la pression externe appliquée sur le DIV (Fig. 9) [6,59,60]. En position allongée, la

pression intra-discale est faible et le DIV absorbe alors de l’eau et des substances nutritives.

En position debout, la pression intra-discale augmente, le DIV perd de l’eau jusqu’à obtention

d’un équilibre osmotique et hydrostatique. Sous compression prolongée (position debout avec

charge supplémentaire), le NP peut perdre jusqu’à 20% d’eau, mais lorsque la charge est

diminuée, le DIV réabsorbe de l’eau pour atteindre un nouvel équilibre osmotique et

hydrostatique [36]. Cela explique pourquoi nous sommes plus grand de 1 à 2 centimètres le

matin au réveil. C’est en position debout, avec flexion et port de charge que la pression intra-

discale est la plus importante (Fig. 9).

33
Fig. 9 Variation de la pression intra-discale selon la position chez l’homme (d’après Olmarker et al. et Wilke
et al. [58,59])

Au regard de ces échanges d’eau, le DIV présente des propriétés visco-élastiques

importantes qui varient selon la composition de la matrice extra-cellulaire [6,61,62]. En

position debout, la pression intra-discale chez un individu sain de 45 ans a été mesurée par

Wilke et al. à 0,50 MPa [59]. La pression intradiscale a été appréciée chez certains animaux en

charge sur leurs quatre membres : chez le lapin, elle est estimée entre 0,25 et 0,45 MPa [63]

chez la brebis, elle est plus élevée, à environ 1,6 MPa [64].

B. Rôle du DIV en condition statique : absorption des chocs et

redistribution des charges appliquées

La colonne vertébrale peut supporter d’importantes charges. L’organisation des

travées osseuses des vertèbres permet de répartir les contraintes entre les articulations

zygapophysaires et les DIV. En position neutre, le DIV est soumis à une force de compression

axiale. La présence de courbures rachidiennes permettrait de multiplier par 10 la résistance

du DIV à la compression [8]. Cette compression est principalement absorbée par le NP et l’AF

interne qui transmettent les forces à l’AF externe sous forme de contraintes radiales et

tangentielles. L’AF externe se trouve alors en tension (Fig. 10).

34
Fig. 10 Répartition des contraintes au sein du disque intervertébral. Flèches bleues : forces de compression
axiales, flèches marrons : répartition des contraintes au sein de la vertèbre vers les articulations
zygapophysaires et les DIV, flèche rouge : compression du NP et de l’AF interne, flèches jaunes : mise en
tension de l’AF externe, triangles noirs : diminution de la hauteur discale.

C. Mouvements et contraintes appliqués au DIV

Le DIV permet à 2 vertèbres adjacentes d’avoir 6 mouvements relatifs propres selon

les 3 degrés de liberté (Fig. 11) : rotations autour du NP, translations dans le plan du DIV et

compression-distraction du DIV [65,66]. Le DIV est donc soumis en permanence à des

contraintes en compression, en traction, en torsion, en flexion et en cisaillement [66,67]. Par

exemple, lorsque le rachis effectue une flexion ventrale, la compression est plus importante

sur la partie ventrale du DIV. Le NP se déforme et se déplace dorsalement, vers la convexité

de la déformation rachidienne. Cela accentue la tension de l’AF dans la portion dorsale du DIV

(Fig. 11a). On comprend ainsi aisément le risque de lésion de l’AF et de hernie discale

traumatique lors de l’association de la flexion du rachis et du port de charge.

Grâce à sa composition, l’AF apporte naturellement une résistance à ses contraintes.

Lorsqu’une tension est appliquée sur l’AF, les fibres de collagène au sein de l’AF en tension

vont s’orienter en direction de la force appliquée et commencer à s’étendre. La présence

d’élastine va permettre aux fibres de collagène de revenir à leur état initial lorsque la tension

n’est plus appliquée [68].

35
Fig. 11 Mouvements possibles entre 2 vertèbres dans les 3 degrés de liberté permis par le DIV. Les flèches
bleues représentent les mouvements des corps vertébraux. a) flexion-extension b) inclinaison latéro-latérale
c) rotation d) translation ventro-dorsale e) translation latéro-latérale f) compression-distraction. a) Exemple
de la flexion ventrale du rachis : la pression axiale est plus importante sur la portion ventrale du DIV,
entrainant une migration du NP dorsalement, la transmission de la compression par le NP à l’AF est plus
importante sur la portion dorsale du DIV (flèche rouge), accentuant la tension de l’AF dans la portion
dorsale du DIV (flèche jaune). (D’après Hsieh et al. et Kapandji et al. [65,66].)

Les propriétés mécaniques de l’AF varient entre l’AF interne et l’AF externe. La

résistance à la tension de l’AF externe est décrite comme étant 5 fois supérieure à celle de l’AF

interne. Cela s’explique par la composition de ces 2 régions : le collagène de type I dans l’AF

externe est connu pour ses propriétés de résistance aux tensions. Il est retrouvé notamment

dans les tendons et les ligaments. Le collagène de type II confère à l’AF interne une moins

bonne résistance aux tensions, mais une bonne résistance aux compressions, comme pour le

cartilage articulaire.

Pièce maitresse lors des mouvements de la colonne vertébrale, le DIV est sollicité tout

au long de la vie. Son vieillissement peut alors conduire à l’atteinte de son intégrité,

responsable de douleurs. Les amplitudes autorisées par les DIV ne sont pas les mêmes entre

les DIV cervicaux, thoraciques ou lombaires. DELMAS a d’ailleurs montré qu’il existait une

corrélation entre le ratio « épaisseur du DIV / hauteur crânio-caudale du corps vertébral » (qui

est de 1/6 pour l’étage thoracique, et de 1/3 pour les étages cervicaux et lombaires) et les

amplitudes autorisées par les DIV [69]. Les DIV cervicaux et lombaires autorisent des

mouvements plus amples, sont donc plus sollicités et plus sujets aux lésions.

36
 Lombalgies et dégénérescence du disque intervertébral

A. Lombalgies : définitions et épidémiologie

Selon la Haute Autorité de Santé (HAS) [70], la lombalgie se définit comme une

douleur dorsale située entre la charnière thoraco-lombaire et le sillon inter-glutéal. Elle peut

être associée à une radiculalgie, témoignant d’une irritation d’un nerf spinal. L’HAS distingue :

- Lombalgie commune : douleur lombaire sans signe d’alerte (douleur mécanique

entre 20 et 55 ans, atraumatique, sans altération de l’état général, sans fièvre, sans signe

neurologique, sans antécédent oncologique),

- Poussée aiguë de lombalgie : (remplace le terme lombalgie aiguë) : douleur lombaire

aiguë avec ou sans douleur de fond préexistante,

- Lombalgie récidivante : récidive de poussée aiguë de lombalgie dans les 12 mois,

- Lombalgie à risque de chronicité : lombalgie inférieure à 3 mois associée à des

facteurs psycho-sociaux et présentant un risque élevé de chronicisation,

- Lombalgie chronique : lombalgie durant depuis plus de 3 mois.

Souvent localisée entre la 4e vertèbre lombaire et la 1ere vertèbre sacrée, les causes de

lombalgie sont multiples : elles peuvent être la manifestation clinique d’une lésion locale

(vertèbre, articulation zygapophysaire, DIV, ligaments et muscles para-vertébraux), secondaire

à une affection traumatique, infectieuse, carcinologique ou inflammatoire ou enfin inscrite

dans un cadre nosologique plus large et devient alors un symptôme sans lésion locale

expliquant la douleur.

La qualification de la lombalgie est complexe, la douleur et son retentissement étant

des notions subjectives, propres à chaque patient. Il est d’ailleurs très difficile de relier la

symptomatologie clinique décrite par le patient avec les lésions morphologiques potentielles

[71].

Définie comme « le mal du siècle », par l’Organisation Mondiale de la Santé, la

lombalgie est considérée comme l’un des symptômes les plus communs dans notre société

moderne. 84% de la population mondiale souffrira un jour de lombalgie et l’évolution vers la

chronicité est observée dans 6 à 8% des cas [5,72]. La prévalence annuelle est estimée autour

37
de 50% [1]. Depuis quelques années, ces chiffres ne cessent d’augmenter (augmentation de

14% en France de 1995 à 2009) [73]. De 1993 à 2012, un observatoire de la médecine générale

a montré que la lombalgie touchait principalement les patients de 30 à 70 ans, et plus

particulièrement entre 40 et 60 ans. Il n’y avait pas de différence significative entre les

hommes et les femmes [74]. Les enfants peuvent également être touchés par des douleurs

lombaires invalidantes [75].

Ainsi, la lombalgie constitue un véritable problème de santé publique et de santé au

travail. En France, l’Assurance Maladie soulignait en 2017 que la lombalgie constituait le 2e

motif de recours auprès d’un médecin traitant. Une lombalgie sur cinq entraine un arrêt de

travail et est responsable de 30% des arrêts de travail de plus de 6 mois. Pour 20% des accidents

de travail, il est rapporté une lombalgie secondaire. Ainsi, la lombalgie est devenue la 1ere cause

d’exclusion du travail avant 45 ans et le 3e motif d’admission en invalidité [76]. Les impacts

professionnels, économiques (plus de 2 milliards d’euros par an en France, 100 milliards de

dollars par an aux États-Unis [3,4]) et psycho-sociaux sont donc majeurs.

Parmi toutes les lombalgies, 40% sont secondaires à la dégénérescence du disque

intervertébral et se nomment à ce titre « lombalgie discogénique » [5]. La lombalgie

discogénique fera l’objet de l’ensemble des descriptions et travaux de ce document.

B. Physiopathologie de la lombalgie discogénique

1) Lombalgie discogénique : une maladie multifactorielle.

Il est aujourd’hui admis que la lombalgie discogénique est une maladie

multifactorielle, dont les causes sont mécaniques, environnementales, psycho-sociales mais

aussi génétiques.

Certaines catégories professionnelles sont particulièrement exposées, notamment les

métiers imposant des efforts physiques importants et répétés, des postures fatigantes, des

vibrations prolongées. La lombalgie discogénique est également favorisée par certains facteurs

tels que l’âge, la sédentarisation, le tabac, l’obésité, les troubles hormonaux ou l’athérosclérose

[77].

38
 Comme précédemment cité, le polymorphisme génétique pourrait avoir un rôle non

négligeable dans l’apparition de la lombalgie discogénique [78]. Les gènes impliqués seraient

certains gènes codant pour les protéines constitutives de la matrice extra-cellulaire du DIV.

Cependant, il parait peu probable qu’un seul gène soit en cause, la survenue d’une lombalgie

discogénique dépendrait de facteurs multigéniques associés à des facteurs non génétiques.

2) Vieillissement et dégénérescence du disque intervertébral

La dégénérescence discale est un vieillissement accéléré du DIV. En effet la distinction

entre vieillissement et dégénérescence discale a été clairement établie [1]. Le vieillissement est

un phénomène physiologique, la dégénérescence correspond à une « sénescence prématurée »

secondaire à des phénomènes inflammatoires en réponse à un stress oxydatif ou à des

cytokines pro-inflammatoires [79].

La dégénérescence discale et le vieillissement résultent tous les deux d’un

déséquilibre entre anabolisme et catabolisme entrainant la dégradation de la matrice extra-

cellulaire du DIV [6]. Au cours du processus, le NP semble le premier touché, suivi de l’AF et

des plateaux cartilagineux. Le NP se déshydrate et le DIV se fibrose progressivement. Il

apparait au sein du NP et de l’AF des déchirures pouvant conduire à la fuite du NP au travers

de l’AF, c’est-à-dire une hernie discale. Parallèlement, les plateaux cartilagineux deviennent

irréguliers, se sclérosent. Des ostéophytes apparaissent sur les corps vertébraux adjacents. La

classification de Thompson permet la hiérarchisation macroscopique de la dégénérescence

discale (Tableau I) [80].

39
Tableau I : classification de Thompson : classification macroscopique de la dégénérescence du DIV (d’après
Thompson et al. [80]et d’après Zhang et al. [22])

3) Un évènement initiateur de la dégénérescence discale : la rupture du dialogue

cellulaire
Parmi les potentiels événements initiateurs de la dégénérescence discale, plusieurs

études suggèrent que la rupture du dialogue cellulaire au sein du NP entre les cellules

notochordales et les nucléopulpocytes serait impliquée dans le déclenchement de ce

processus [81–83]. Les cellules notochordales jouent un rôle protecteur envers les

nucléopulpocytes [84] et la diminution spontanée de la population cellulaire notochordale à

maturité squelettique coïnciderait avec l’amorce de la dégénérescence [6]. Plusieurs facteurs

secrétés par les cellules notochordales ont été étudiés.

- Sonic Hedgehog (Shh)

Secrété par les cellules notochordales, le facteur Shh est un facteur clé dans la

formation du DIV [19]. La voie de signalisation de Shh diminue avec l’âge, conjointement à la

disparition progressive des cellules notochordales et la disparition du facteur Shh entraine

une désorganisation du NP [85].

- Transforming Growth Factor b (TGF-b)

Le facteur TGF-b est un facteur clé dans le dialogue cellulaire entre les cellules

notochordales et les nucléopulpocytes. Son expression induit au sein du DIV une

40
augmentation significative de la production de protéoglycanes et de collagène de type II,

protège les nucléopulpocytes et induit leur prolifération [86]. Il possède des vertus anti

inflammatoires au sein du DIV car il inhibe TNF-a, puissant facteur pro-inflammatoire dans la

cascade de la dégénérescence discale [87].

- Growth Differenciation Factor 5 (GDF-5)

GDF-5 est également un facteur important retrouvé dans plusieurs mécanismes

morphologiques musculo-squelettiques, comme la formation des tendons, des ligaments ou

encore l’ossification endochondrale [88]. GDF-5 occupe un rôle prépondérant dans la

morphogénèse des DIV et son expression stimule la prolifération et l’activité métabolique des

cellules du NP et de l’AF [89]. Comme TGF-b, GDF-5 freine l’expression de facteurs pro-

inflammatoires comme TNF-a ou IL-1b [90]. L’inhibition de GDF-5 jouerait un rôle conséquent

dans la dégradation de la matrice extra-cellulaire du DIV [91].

- Connective Growth Factor (CTGF)

CTGF est une protéine de la famille des CCN (CCN2) sécrétée par les cellules

notochordales. Elle intervient largement dans le maintien de l’homéostasie discale. Son

expression stimule la prolifération des nucléopulpocytes, et stimule la synthèse de

protéoglycanes, permettant le maintien des molécules d’eau [81,92]. CTGF semble également

impliqué dans le processus de maturation des DIV, il a été observé une accumulation de

facteur CTGF dans des DIV dégénérés [93].

Ainsi, la disparition progressive à maturité squelettique des cellules notochordales

au sein du noyau pulpeux conduit à la diminution puis l’arrêt du dialogue cellulaire avec les

nucléopulpocytes. Cette disparition cellulaire programmée est alors responsable d’une

cascade d’évènements locaux conduisant à un désordre métabolique qui dans certains cas,

possiblement aggravée par d’autres facteurs extrinsèques précédemment cités, peuvent être

responsable d’une dégénérescence du DIV.

41
 4) Dégénérescence discale : modifications locales à l’échelle moléculaire et
cellulaire
Le désordre métabolique observé au cours de la dégénérescence discale est

secondaire à une cascade d’évènements « auto-entraînants » au sein du DIV et notamment du

NP (Fig. 12). En effet, à l’échelle cellulaire, la rupture de l’équilibre anabolisme / catabolisme

entraine la production de facteurs pro-inflammatoires et la dégradation qualitative et

quantitative des constituants de la matrice extra-cellulaire [6,92,94,95]. Ainsi, des enzymes de

dégradation de la matrice extra-cellulaire sont sécrétées, notamment des métalloprotéases

matricielles (MMPs) comme des collagénases (MMP-1, MMP-3), des gélatinases (MMP-2) ou des

aggrécanases (ADAMTs) [96]. La disparition des protéoglycanes de la matrice extra-cellulaire

entraine alors une diminution de la pression osmotique et une déshydratation du NP. Des

facteurs pro-inflammatoires sont également sécrétés, comme l’interleukine 1 (IL-1) et TNF-a

(Tumor Necrosis Factor a) qui diminuent le métabolisme global des cellules du DIV et

stimulent la production de VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) et donc la néo-

angiogenèse [97]. D’autres facteurs inflammatoires comme IL-6, IL-8, Prostaglandine E2

augmentent le catabolisme des cellules du DIV et stimulent la production de NGF (Nerve

Growth Factor) responsable de la néo-innervation du DIV. Cette néo-innervation est en partie

responsable des douleurs lombaires rapportées [49,50].

En plus de la déshydratation, l’installation progressive de la fibrose du DIV s’explique

par une modification du ratio collagène I / collagène II, bien observable au sein de l’AF. Le taux

de collagène II diminue au profil de l’augmentation du collagène I désorganisé induisant la

perte des propriétés mécaniques du DIV [33]. La densité cellulaire diminue en raison de

différents mécanismes tels que la sénescence prématurée des cellules, l’apoptose, ou encore

l’autophagie entrainant là aussi un rétro-contrôle positif pro-inflammatoire accentuant la

dégradation de la matrice extra-cellulaire [79,98,99].

Des modifications structurelles se produisent au niveau des plateaux cartilagineux

comme leur calcification et l’accumulation de dépôts de cristaux de phosphates de calcium

[100]. Les chondrocytes se différencient en chondrocytes hypertrophiques. Les échanges entre

les vertèbres adjacentes et le DIV s’altèrent, s’y ajoute l’accumulation de déchets métaboliques

entrainant une acidification du DIV. Il est observé là encore l’augmentation du stress cellulaire

42
et la production de facteurs pro-inflammatoires accentuant les mécanismes de dégradation

du DIV [101].

Fig. 12 Illustration du cercle vicieux de la dégénérescence discale : il existe une cascade d’évènements auto-
entraînants conduisant la dégénérescence du DIV. Les flèches vertes représentent des facteurs extrinsèques
pouvant majorer le phénomène de dégénérescence (NP : noyau pulpeux, AF : anneau fibreux, PC : plateau
cartilagineux)

5) Conséquences biomécaniques de la dégénérescence du DIV

L’altération qualitative et quantitative de la matrice extra-cellulaire et la

dégénérescence discale entrainent des modifications des propriétés mécaniques du DIV. Il

existe alors une modification des propriétés viscoélastiques, une diminution de la pression du

NP et une perte de la hauteur discale. La répartition des contraintes se modifie au sein du DIV,

et se concentre sur sa partie dorsale rendant plus propice la survenue de hernie discale

pouvant être responsable de lombo-radiculalgies [102]. Dans les premières phases de la

dégénérescence, le DIV devient d’abord hyper-mobile, jusqu’au grade 4 de la classification de

Thompson. Puis une fois le grade 5 atteint, la fibrose du DIV est tellement avancée que les

mouvements au sein du DIV diminuent [103]. Les cellules du DIV sont sensibles à ces

modifications de mobilité, notamment les cellules de l’AF grâce à des mécanorécepteurs de

surface. Ces modifications biomécaniques locales accentuent le stress cellulaire qui

produisent également des facteurs pro-inflammatoires et alimentent les cascades

d’événements cités précédemment [104]. De plus, la modification de la mobilité d’un DIV aura

irrémédiablement des conséquences sur les DIV adjacents et l’équilibre globale du rachis

[105].

43
 C. Caractérisation de la dégénérescence discale en histologie

De nombreuses classifications ont été établies pour qualifier la dégénérescence du

DIV à partir des modifications histologiques. Parmi elles, le score de Boos constitue une

classification de référence [106]. Elle se base sur les modifications histologiques du DIV et des

plateaux cartilagineux (Tableau II). À chaque critère histologique est attribué un score qui

augmente avec la dégénérescence du DIV. Elle s’effectue à partir de coupes sagittales du DIV

en utilisant des colorations histologiques classiques comme l’hématoxyline-éosine, PAS bleu-

alcian et trichrome de Masson.

Tableau II : score histologique de BOOS évaluant la sévérité de la dégénérescence du disque intervertébral

[106]

Nos travaux histologiques portant sur les modifications structurelles du NP, le score

de BOOS a été adapté en ne prenant pas en compte les modifications histologiques des

plateaux cartilagineux. Ce score de BOOS modifié se base alors sur la densité cellulaire (5

points), la dégénérescence mucoïde (4 points), l’apparition de granulations (4 points) et de

déchirures (5 points) au sein de la MEC du NP (Tableau III). Il ne prend pas en compte la mort

44
cellulaire. Le score de BOOS modifié se note donc sur un total de 18 points (0 = pas de

dégénérescence histologique, 18 = dégénérescence totale du DIV). Le score de Boos modifié ne

prenant pas en compte les plateaux cartilagineux, il peut se faire sur des coupes sagittales ou

transversales du DIV.

Tableau III : score de BOOS modifié

L’étude histologique permet une bonne analyse de l’état de dégénérescence des

disques intervertébraux. Cependant, cette méthode n’est pas compatible avec des études in

vivo car elle impose de prélever les disques. L’exploration de la dégénérescence discale par

l’imagerie offre la possibilité d’analyser le disque intervertébral de manière non invasive et est

particulièrement adaptée aux études longitudinales ou même en pratique clinique.

D. Imagerie du disque intervertébral

L’imagerie médicale ne cesse d’évoluer depuis plusieurs décennies, apportant au

clinicien des outils diagnostiques performants. Néanmoins, les causes de lombalgies sont

multiples et l’interprétation des examens d’imagerie ne peut s’envisager sans un examen

clinique. Ainsi, après un interrogatoire rigoureux du patient, à la recherche notamment de

facteurs de risque de lombalgie discogénique (activité professionnelle, surpoids, évènement

déclenchants ou antécédent traumatique…) le clinicien doit caractériser précisément la

douleur, localiser la région responsable et s’attarder à rechercher des complications

neurologiques comme une compression radiculaire ou même une compression médullaire.

45
 Bien qu’il existe une forte corrélation entre la présence d’une dégénérescence discale

diagnostiquée à l’imagerie et les douleurs lombaires rapportées [107], il existe néanmoins des

faux positifs pour lesquels une dégénérescence discale est clairement observée en IRM, alors

qu’elle n’est pas responsable des douleurs [108]. Certaines études évoquent même l’absence

de corrélation entre le tableau clinique et les modifications structurelles à l’imagerie, en

particulier pour les lombalgies sans radiculalgie [71]. La prévalence de DIV dégénérés à

l’imagerie chez des individus asymptomatiques n’est pas nulle et augmente avec l’âge [109].

1) Radiographie
La radiographie standard est le premier examen d’imagerie à envisager dans la

recherche d’une discopathie, et plus largement dans le cadre d’une douleur rachidienne [110].

Il s’agit d’un examen accessible, peu couteux, non invasif et peu irradiant. Néanmoins, la

radiographie ne montrera que des signes indirects d’une discopathie déjà avancée, le disque

étant radio-transparent. Ainsi la diminution de l’espace intervertébral traduit une diminution

de la hauteur discale, l’augmentation de la densité des plateaux cartilagineux est le témoin de

leur sclérose. L’irrégularité des plateaux et la présence d’hernies intra-spongieuses (ou

« Nodules de Schmorl ») peuvent être observées, ainsi que des ostéophytes autour des

plateaux cartilagineux. Enfin, des calcifications intra-discales sont d’autres signes indirects de

dégénérescence discale. Benneker a décrit une classification radiographique de la

dégénérescence discale prenant en compte ces signes radiographiques indirects [111]. Ainsi,

l’évaluation d’une dégénérescence discale par la radiographie est très limitée, surtout lorsque

la dégénérescence est débutante. Néanmoins il s’agit d’un bon examen de « débrouillage » en

routine clinique, et permet d’éliminer de nombreux diagnostics différentiels.

2) Tomodensitométrie
La tomodensitométrie (ou scanner) utilise les mêmes principes physiques que la

radiographie, c’est-à-dire les rayons X. Il s’agit d’un examen adapté à l’étude des tissus

minéralisés, et donc les tissus osseux, grâce à une imagerie en coupes millimétriques et à la

possibilité de réaliser des reconstructions multiplanaires. En revanche, l’étude du DIV reste

limitée en tomodensitométrie. Quelques contrastes tissulaires apparaissent laissant apprécier

la silhouette du disque, la moelle spinale, les nerfs spinaux, l’espace péridural. En plus des

46
signes indirects déjà cités en radiographie, il pourra être évoqué par exemple un conflit

radiculaire par extrusion discale. Mais là encore, il ne s’agit pas de l’examen d’imagerie de

référence pour apprécier la dégénérescence discale, mais devant les difficultés d’accessibilité

à l’IRM, la tomodensitométrie constitue une alternative intéressante en clinique, recommandée

par les sociétés savantes comme la Société Française de Radiologie ou l’American College of

Radiology, il s’agit cependant d’un examen bien plus irradiant que la radiographie.

3) L’IRM : Imagerie par Résonance Magnétique

L’IRM est, à ce jour, le seul examen d’imagerie à disposition des cliniciens capable de

détecter des signes directs de dégénérescence discale [112]. Il s’agit d’un examen

morphologique dont la résolution spatiale est excellente, notamment pour l’étude des tissus

mous. Il n’est pas invasif, non irradiant, en revanche il s’agit d’un examen plus couteux et qui

n’est malheureusement pas toujours disponible rapidement.

a. Principes généraux

L’IRM repose sur le phénomène physique de Résonance Magnétique Nucléaire (RMN),

basée sur l’étude des modifications magnétiques des protons H+ des noyaux d’hydrogène

lorsqu’ils sont soumis à des champs magnétiques intenses. En effet, les noyaux d’hydrogène

sont très présents dans l’ensemble des tissus biologiques, notamment dans les tissus

hautement hydratés comme le DIV.

#####⃗) est appliqué sur les protons H+ des tissus

- Un champ magnétique très intense (𝐵0

##⃗) résultant de l’ensemble de l’aimantation des

- Une aimantation macroscopique (𝑀

#####⃗, qui peut être décomposée dans un repère orthogonal en :

protons H+ soumis à 𝐵0

#####⃗) qui est maximale, dans le sens de #####⃗

- une aimantation longitudinale (𝑀𝑧 𝐵0

#########⃗) qui est nulle.

- une aimantation transversale (𝑀𝑥𝑦

##⃗ (et
- Une onde électromagnétique appelée onde radiofréquence (RF) qui modifie 𝑀

donc #####⃗
𝑀𝑧 et #########⃗
𝑀𝑥𝑦).

Ainsi, 2 phases sont analysées lors de l’impulsion RF :

- La phase d’excitation (à l’impulsion de l’onde RF) : #####⃗

𝑀𝑧 était maximale et devient

nulle ; #########⃗
𝑀𝑥𝑦 était nulle et devient maximale

47
 - La phase de relaxation (à l’interruption de l’onde RF) : retour à l’état d’équilibre du

système. C’est durant cette phase de relaxation que le signal va être recueilli.

b. Notion de T1 et T2

Durant la phase de relaxation, 2 phénomènes sont pris en compte : la relaxation

longitudinale et la relaxation transversale.

- La relaxation longitudinale : elle correspond à la repousse de #####⃗

𝑀𝑧, par retour des

#####⃗. Elle est modélisée par une courbe exponentielle

protons H+ à leur état initial sous 𝐵0

croissante (Fig. 13). On définit alors T1 (temps de repousse longitudinale) est défini comme le

temps nécessaire pour que #####⃗

𝑀𝑧 revienne à 63% de sa valeur maximale.

- La relaxation transversale : elle correspond à la décroissance progressive de #########⃗

𝑀𝑥𝑦

jusqu’à l’état d’équilibre sous #####⃗

𝐵0 où #########⃗
𝑀𝑥𝑦 est nulle. Elle est modélisée par une courbe

exponentielle décroissante (Fig. 13). On définit alors T2 (temps de relaxation transversale) qui

est défini comme le temps nécessaire pour que #########⃗

𝑀𝑥𝑦 décroit à 37% de sa valeur maximale. La

relaxation transversale est toujours plus rapide que la relaxation longitudinale, ainsi T2 est en

moyenne dix fois plus bref que T1.

Fig. 13 Schématisations et représentations graphiques de la repousse de #####⃗ 𝑀𝑧 durant la relaxation

#########⃗ durant la relaxation transversale [113]
longitudinale et de la décroissance de 𝑀𝑥𝑦

48
 La variation des paramètres d’acquisition et de recueil du signal permet d’obtenir des

informations sur la composante T1 du tissu (« séquence pondérée en T1 ») ou sur la

composante T2 du tissu (« séquence pondérée en T2 »). Chaque tissu présentant des

caractéristiques différentes en fonction de sa composition, cela permet d’obtenir de nombreux

contrastes tissulaires.

De très nombreux paramètres non détaillés existent permettant d’obtenir de multiples

séquences (IR, DP, FLAIR, STIR…). Elles ne seront pas détaillées dans ce document.

c. Étude du DIV en pondération T1

La séquence pondérée en T1 est souvent assimilée à une séquence « anatomique » ou

« morphologique » se rapprochant des contrastes obtenus en tomodensitométrie : l’os

spongieux apparait en hypersignal, l’os cortical est en hyposignal, les liquides en hyposignal.

Au niveau du DIV, le NP et l’AF présentent un signal intermédiaire et les plateaux cartilagineux

sont en hypersignal (Fig. 14a). L’évaluation de la dégénérescence du DIV en pondération T1 a

peu d’intérêt quand il s’agit d’étudier le NP et l’AF, leurs signaux étant proches, il est souvent

difficile d’en faire la distinction. En revanche il s’agit d’une séquence adaptée pour l’étude de

la modification des plateaux cartilagineux durant le processus de dégénérescence.

Fig. 14 IRM en coupe sagittale d’une brebis de 1 an en pondération T1 (a) et T2 (b). La pondération T2
permet une étude précise du DIV, notamment dans la distinction entre le NP et l’AF et dans l’appréciation
de l’hydratation du NP (Pondération T1 : TE = 12ms, TR = 322ms, épaisseur de coupe : 3mm ; pondération
T2 : TE = 86ms, TE = 3000ms, épaisseur de coupe : 3mm)

49
 d. Étude du DIV en pondération T2

La séquence pondérée en T2 est particulièrement adaptée à l’étude de l’hydratation

des tissus. Les liquides apparaissent en hypersignal alors que les ligaments apparaissent en

hyposignal. La distinction entre l’AF et le NP d’un DIV sain est beaucoup plus aisée en

pondération T2 car ils n’ont pas le même signal : le NP (et plus précisément le complexe NP/AF

interne) est en hypersignal car très hydraté, l’AF externe est en hyposignal car peu hydraté.

Les plateaux cartilagineux apparaissent en hypersignal (Fig. 14b).

La pondération T2 est donc la séquence de choix pour étudier la dégénérescence du

DIV, particulièrement en coupe sagittale [114]. En plus des signes indirects cités

précédemment, la diminution du signal du NP témoin de sa déshydratation pourra être

analysée, ainsi que l’hétérogénéité du signal du NP, la perte de distinction entre le NP et l’AF,

les fissures au sein de l’AF, la modification de signal des plateaux cartilagineux, la présence

de hernie discale… [115,116].

L’analyse de l’ensemble de ces éléments a permis la description de nombreuses

classifications pour évaluer la sévérité de la dégénérescence discale, nous citerons ici les plus

couramment utilisées.

e. Les classifications de la dégénérescence du DIV

La classification de PFIRRMANN

Il s’agit de la classification de référence pour évaluer la sévérité de dégénérescence

discale. Elle est de ce fait largement utilisée chez l’Homme [117], et extrapolée chez les

différents modèles animaux. La classification de PFIRRMANN permet de classer la

dégénérescence du DIV selon 5 grades allant de I (DIV non dégénéré) à 5 (DIV totalement

dégénéré) ; elle se base sur l’appréciation de 4 critères IRM en coupe sagittale pondérée en T2 :

l’intensité du signal du NP, la structure du NP, la distinction NP – AF, la hauteur du DIV

(Tableau IVErreur ! Source du renvoi introuvable.).

50
Tableau IV : classification de PFIRRMANN à partir de coupes IRM sagittales en pondération T2 (d’après
Pfirrmann et al., [117]). LCS : liquide cérébro-spinal, NP : noyau pulpeux, AF : anneau fibreux, DIV : disque
intervertébral)

La classification de PFIRRMANN est une classification qualitative ordinale fiable. Il

existe néanmoins une variabilité inter-opérateur et il est parfois difficile de discriminer

l’aspect IRM de certains DIV entre le grade 1 et 2, ou entre le grade 3 et 4, Les variations

subtiles de l’aspect du DIV étant parfois difficiles à qualifier.

Classification de PFIRRMANN modifiée

La classification de PFIRRMANN dite « modifiée » a été décrite pour tenter de classer

la sévérité de la dégénérescence discale sur 8 grades, afin d’être plus précis et plus

discriminant sur l’état de dégénérescence [118]. Elle se base sur l’évaluation de 3 critères que

l’on retrouve dans la classification de PFIRRMANN (Tableau V). Si elle se veut plus précise que

la classification de PFIRRMANN, elle est finalement moins fiable et moins reproductible, ce qui

s’explique là aussi par la difficulté pour discriminer 2 grades proches [118]. La classification

de PFIRRMANN modifiée est finalement très peu utilisée.

51
Tableau V : classification de PFIRRMANN modifiée à partir de coupes IRM sagittales en pondération T2
(d’après Griffith et al. [118]; LCS : liquide cérébrospinal, NP : noyau pulpeux, AF : anneau fibreux, DIV :
disque intervertébral)

Classification de MODIC

L’altération des plateaux cartilagineux et de l’os sous-chondral adjacent aux plateaux

est également un signe de dégénérescence discale qui peut être apprécié par IRM. MODIC a

décrit une classification IRM de l’altération des plateaux cartilagineux et des corps vertébraux

adjacents au disque dégénéré [119]. Il s’agit d’une classification en 3 grades, faite à partir de

l’analyse IRM sur des coupes sagittales en pondération T1 et T2. Le grade 1 correspond à

l’apparition d’une inflammation de l’os sous-chondral adjacent, le grade 2 correspond à la

dégénérescence graisseuse de l’os sous-chondral, le type 3 correspond à la sclérose de l’os

sous-chondral. C’est une classification simple, fiable et reproductible, laissant peu de place

aux erreurs de discrimination que l’on retrouvait dans les classifications précédentes (Tableau

VI). Toutefois, bien qu’il existe une corrélation entre les grades 1 et 2 et le degré de lombalgie

[120], la classification de MODIC n’est basée que les modifications de signal des plateaux

cartilagineux et de l’os sous-chondral. Il s’agit de signes indirects de la dégénérescence discale,

et ne constitue donc pas un moyen de détection de la dégénérescence à un stade précoce.

52
Tableau VI : classification de MODIC à partir de coupes IRM sagittales en pondération T1 et T2, basée sur
l’appréciation du signal des plateaux cartilagineux et de l’os sous-chondral adjacent au DIV (d’après Modic
et al. et Bordet et al.[119,121]).

f. « T2 weight signal intensity », relaxométrie et cartographie du disque intervertébral

Les séquences IRM pondérées en T1 et T2 permettent d’obtenir des informations

qualitatives sur les temps de relaxation des tissus. La classification de PFIRRMANN, qui est

pourtant une classification de référence, ne se base que sur des critères subjectifs (hauteur

discale, signal du NP) pour établir une sévérité de dégénérescence sur seulement 5 stades. Il

existe donc par cette classification un certain degré d’imprécision, notamment pour évaluer

les modifications subtiles de l’aspect du DIV. De plus, l’appréciation des images IRM dépend

directement des paramètres d’acquisition et de recueil du signal.

Afin de pallier ces imprécisions, il est possible de calculer l’intensité du signal du NP

à partir d’images IRM pondérées en T2 : c’est le « T2 weight signal intensity » (T2wsi). Il s’agit

alors d’évaluer l’intensité du signal du NP rapportée au signal de la moelle spinale. Cela donne

alors une valeur quantitative du signal du NP. Mais là aussi, bien que la valeur soit quantitative,

elle dépend des paramètres d’acquisition et de recueil du signal IRM.

Depuis quelques années, de nouvelles séquences ont été mises au point pour obtenir

des mesures objectives des temps de relaxation caractéristiques des tissus : il s’agit des

séquences de relaxométrie ou « mapping ». Initialement développées pour étudier le tissu

cérébral, le coeur, puis les articulations, de plus en plus d’études s’intéressent à l’application

53
de ces séquences sur le DIV [122–125]. La relaxométrie permet la mesure quantitative des

temps de relaxation des tissus (T2, T2*, T1…) et permet d’établir au sein des tissus une

cartographie des différences de temps de relaxation à l’aide d’une échelle colorimétrique (Fig.

15).

En plus de la précision et du caractère quantitatif des valeurs calculées, il a été montré

une corrélation négative entre le score de PFIRRMANN et les temps de relaxation T2 et T2* du

DIV, et en particulier du NP [122,123,126,127]. Enfin de manière très intéressante, Ogon et al.

ont montré que les patients atteints de lombalgie chronique avaient un temps de relaxation

T2 de la portion dorsale de l’AF inférieur aux patients asymptomatiques [128].

Fig. 15 Exemple de cartographie T2 d’un DIV humain, en coupe sagittale, en fonction de la classification
de PFIRRMANN. Le temps de relaxation d’un NP sain est élevé (100ms) car hautement hydraté. Le temps
de relaxation du NP d’un DIV dégénéré est plus faible (entre 25 et 40ms) (d’après Stelzeneder et al., 2012
[122])

A l’heure actuelle, ces procédés d’évaluation ne sont pas encore utilisés en routine

clinique, du fait de l’absence d’équipement des IRM au sein des pôles d’imagerie ou du manque

de temps nécessaire pour réalisation de ces séquences.

54
 4) Autres méthodes d’exploration du disque intervertébral
Grâce au développement de l’imagerie par résonance magnétique nucléaire, de

nouvelles séquences IRM sont utilisées, permettant de détecter de fins changements de signal

au sein du tissu discal. Ces séquences sont très prometteuses, mais ne sont pas encore

utilisées en pratique clinique courante, pour des raisons essentiellement matérielles

(puissance des générateurs, hardware, software…).

§ La relaxométrie T1Rho

Le temps T1Rho est le temps que met l’aimantation longitudinale pour revenir à 63%

de sa valeur initiale, sous l’effet d’une onde radiofréquence longue appelée « spin-lock »

empêchant la décroissance de l’aimantation transversale T2 [129]. Initialement développée

pour étudier le cartilage articulaire, la relaxométrie T1Rho étudie les interactions entre les

macromolécules de la matrice extra-cellulaire et l’eau. Il a été montré par plusieurs travaux

une forte corrélation entre le temps T1Rho et le score de PFIRRMANN, la teneur en GAG, la

pression osmotique et même la lombalgie [130–133]. La relaxométrie semble être une

excellente séquence pour étudier le DIV, néanmoins aujourd’hui, très peu de générateurs IRM

sont capables de réaliser ces séquences.

§ Spectrométrie par résonance magnétique (SRM)

La SRM étudie les modifications de fréquence de résonance des noyaux d’un tissu.

Ces modifications de fréquence dépendent des liaisons chimiques entre les molécules du tissu

étudié. Ainsi, en couplant l’IRM et la SRM, il est possible de quantifier ces modifications de

fréquences afin d’étudier la concentration de certains métabolites au sein du tissu étudié

[134]. Cette méthode est encore peu utilisée pour le DIV, néanmoins il a été montré grâce à la

SRM une accumulation de lactate et une diminution des protéoglycanes dans des DIV

dégénérés douloureux [135].

§ L’IRM à temps écho ultra-court

Cette méthode permet de mesurer de très courts temps de relaxation T2 (< 10ms). Il

est alors possible d’étudier finement les modifications de signal des plateaux cartilagineux, là

où l’IRM conventionnelle ne les détecte pas. Des modifications du signal IRM des plateaux

cartilagineux ont été rapportées grâce à cette méthode et une corrélation entre l’apparition de

ces signes et les douleurs lombaires a été démontrée [136].

55
 § Transfert d’aimantation

Cette méthode permet de détecter les protons liés aux macromolécules au sein d’un

tissu et donc de mettre en évidence une modification de la composition du DIV [137]. Ainsi

grâce à cette séquence, il est possible de détecter les modifications tissulaires au sein du DIV

et notamment les modifications collagéniques au sein de la matrice extra-cellulaire de l’AF et

du NP [138].

§ L’imagerie CEST (Chemical Exchange Saturation Transfert)

L’imagerie CEST, ou imagerie par transfert de saturation dépendant des échanges

chimiques, repose sur l’observation du transfert de saturation entre 2 ou plusieurs groupes

de protons. Cette méthode utilise des composés contenant des protons labiles comme la

polysine ou des amides. Ces séquences reflètent notamment la concentration en

glycosaminoglycanes dans le NP [139].

§ L’IRM du sodium

Comme les ions hydrogènes, l’ion sodium est un des ions les plus abondants dans le

corps humain et sa modification de concentration au sein des tissus signe souvent une

modification de la pression osmotique et un dysfonctionnement tissulaire. Ainsi il existe une

corrélation entre la concentration en ion sodium, la concentration en protéoglycanes au sein

du DIV et le score de PFIRRMANN [140,141]. Néanmoins, la mesure des temps de relaxation

des ions sodium impose des conditions expérimentales particulières utilisant des générateurs

IRM à très haut champ magnétique, allant jusqu’à 7 Tesla.

5) À part : la discographie
Décrit dans les années 1940, la discographie est un examen complémentaire

interventionnel dans le cadre de suspicion de discopathie responsable de lombalgie. Elle

consiste à injecter du produit de contraste iodé dans le NP du disque incriminé à l’aide d’une

aiguille guidée par la fluoroscopie. L’appréciation du discogramme (aspect du DIV injecté)

permet alors de rechercher des signes de discopathie, comme la recherche de fuites du produit

de contraste, des fissures de l’anneau fibreux, de protrusions discales [142,143]. La

reproduction des douleurs décrites par le patient lors de la ponction et de l’injection du DIV

constitue un bon test diagnostic confirmant l’origine discale des douleurs. Mais, contrairement

56
aux autres examens d’imagerie, la discographie est un examen invasif : la ponction de l’AF par

une aiguille peut en effet induire une dégénérescence du disque [142], il s’agit d’ailleurs d’une

technique d’induction mécanique de dégénérescence discale que nous décrirons dans ce

manuscrit. La dégénérescence secondaire à la ponction de l’AF dépend de la taille de l’aiguille

et plus précisément du rapport entre la hauteur discale et le diamètre de l’aiguille. La

cytotoxicité de l’iode a été évoquée et démontrée sur les cellules du DIV in vitro [144]. Cette

cytotoxicité est concentration dépendante. Les produits iodés non ioniques et dimériques

semblent être les moins toxiques pour les cellules du DIV. Carragee et al. rapportent dans une

étude publiée en 2009 une nette augmentation de la prévalence à 10 ans de dégénérescence

discale avancée et/ou de hernie discale chez les patients ayant eu une discographie (35%) par

rapport au groupe contrôle (14%) [145]. Il a également montré que la discographie ne constitue

pas un examen sensible pour rechercher une discopathie [146].

Pour ces raisons, la discographie n’est presque plus pratiquée en pratique courante,

ou alors de manière très exceptionnelle en veillant à injecter un très faible volume de produit

de contraste à l’aide de l’aiguille la plus fine possible. Il sera utilisé uniquement un produit de

contraste iodé non ionique iso-osmotique [147].

L’imagerie du DIV continue de se développer, permettant aujourd’hui une excellente

résolution des tissus analysés et offrant la possibilité d’étudier de fins changements au sein

du DIV, à une échelle parfois moléculaire. Ces méthodes d’imagerie sont non invasives et

compatibles avec des études in vivo. En association avec un examen clinique précis, l’imagerie

par résonance magnétique est donc un examen de choix pour étudier l’état de dégénérescence

du DIV et ainsi proposer un traitement adapté.

57
 Les traitements de la lombalgie discogénique
La lombalgie est un handicap qui doit être pris en charge dans sa globalité. Comme

pour tout handicap, il est nécessaire d’identifier la « déficience » responsable de la douleur (ou

altération de fonction), qui aura comme conséquence une « limitation d’activité » et/ou une

« restriction de participation ». Différentes stratégies thérapeutiques plus ou moins invasives

sont disponibles pour tenter, en atténuant les douleurs, de diminuer le retentissement

fonctionnel et d’améliorer la qualité de vie du patient.

A. Traitement fonctionnel

Le traitement fonctionnel repose sur la prise en charge réadaptative du patient. À la

phase aiguë de la lombalgie, le repos et la limitation d’activité physique sont nécessaires. De

façon empirique, l’alitement réduit les poussées aiguës de lombalgie, la décharge complète

permet une diminution de la pression intra-discale et une relaxation des muscles para-

rachidiens souvent responsables d’un syndrome rachidien aggravant l’épisode douloureux.

Néanmoins, l’alitement et le repos prolongé n’ont pas montré de bénéfice dans la

prise en charge de la lombalgie [148]. En revanche, le réentrainement à l’effort est efficace

pour diminuer la lombalgie et son retentissement, ainsi que pour diminuer le risque de

chronicisation des douleurs [149]. Le travail des sangles musculaires rachidienne et

abdominale permet de stabiliser le rachis et contribue à l’amélioration des douleurs [150].

Ainsi la kinésithérapie est au centre du programme thérapeutique.

Les règles hygiéno-diététiques font partie du traitement fonctionnel de la lombalgie

discogénique. Ainsi, la lutte contre le surpoids est intégrée à la prise en charge, permettant

ainsi de diminuer les contraintes au sein du DIV [151]. La prévention et la lutte contre les

troubles musculo-squelettiques est indispensable. Elle vise à lutter contre les mauvaises

postures, les mauvaises habitudes et prône la protection et l’économie du dos.

Enfin, nous pouvons citer « l’École du dos », qui résume à elle seule les principes du

traitement fonctionnel. Son principe est clair : « ne plus seulement soigner les problèmes

articulaires et musculaires, mais proposer des méthodes d’auto-traitement et de prévention

par le mouvement » [152].

58
 B. Traitement médicamenteux

L’administration d’un traitement médicamenteux doit se faire dans un cadre médical

structuré, sous la supervision d’un médecin sensibilisé à la prise en charge médicale de la

lombalgie, en tenant compte des antécédents du patients, selon les recommandations de la

Haute Autorité de Santé [70]. Là aussi, il faut bien différencier la prise en charge

médicamenteuse d’une poussée aiguë de lombalgie de celle d’une lombalgie commune.

Dans le cadre d’une poussée aiguë de lombalgie, la prise en charge antalgique doit

être progressive, débutant par l’utilisation d’antalgique de palier I (paracétamol) associée à un

anti-inflammatoire non stéroïdien (AINS) (kétoprofène) sur une courte durée. L’utilisation

d’AINS doit se faire avec parcimonie, car les AINS peuvent être responsables d’effets

indésirables digestifs, ou encore d’une insuffisance rénale. Néanmoins, aucun médicament

antalgique n’a prouvé son efficacité à moyen terme sur l’évolution d’une poussée aiguë de

lombalgie [70].

Concernant la prise en charge médicamenteuse de la lombalgie commune, il est

recommandé en première intention d’administrer des antalgiques de palier I associés

ponctuellement à des AINS. En seconde intention, l’utilisation d’antalgique de palier II

(tramadol) peut être envisagée. La prescription de palier III (morphinique) doit rester

exceptionnelle. Lors de lombalgie chronique avec une composante neuropathique, il peut être

envisagé d’utiliser des antidépresseurs tricycliques (clomipramine chlorhydrate), des

inhibiteurs de la recapture de sérotonine (sertraline) et de noradrénaline (duloxétine), en plus

de leur vertu antalgique, ces molécules agissent sur la composante anxio-dépressive

secondaire à la douleur. En complément, l’utilisation de patchs cutanés contenant des

anesthésiques locaux ou des anti-inflammatoires est intéressante.

Enfin, il peut être envisagé des infiltrations épidurales de glucocorticoïdes. Ces

infiltrations permettent une action anti-inflammatoire locale et une efficacité à court terme à

condition que la région infiltrée soit la région responsable de la douleur. Elles sont en revanche

invasives, non dénuées de risque et ne sont pas efficaces à long terme [153].

59
 Malheureusement, en cas de discopathie majeure responsable de douleurs

réfractaires et d’un retentissement socio-professionnel marqué, ces prises en charge peuvent

ne pas suffire. Il est alors nécessaire d’envisager des traitements chirurgicaux.

C. Traitements chirurgicaux

Les traitements chirurgicaux de la lombalgie discogénique sont des traitements

radicaux, qui consiste à supprimer le disque pathologique responsable de la symptomatologie.

Il est important de préciser que la discectomie n’est pas un traitement de la lombalgie

secondaire à la dégénérescence discale. Ce n’est qu’en cas de hernie discale entrainant une

souffrance radiculaire et des signes neurologiques que l’indication de discectomie peut être

discutée, le but étant de stopper la souffrance radiculaire.

1) Arthrodèse vertébrale
L’arthrodèse vertébrale consiste à retirer le disque dégénéré et à supprimer la

mobilité entre les 2 vertèbres adjacentes au disque retiré en fusionnant leurs corps vertébraux.

Le disque est alors remplacé par un implant appelé « cage inter-somatique » qui est fixé aux

corps vertébraux. Son rôle est de restaurer la hauteur discale afin de ne pas augmenter les

contraintes sur les articulations zygapophysaires, mais aussi de restituer la taille des

foramens intervertébraux afin d’éviter tout conflit radiculaire à ce niveau. Aujourd’hui, les

cages sont dites « anatomiques » : leurs formes sont étudiées pour restituer au mieux la

hauteur discale et l’anatomie locale, la tenue primaire aux vertèbres est permise par leur

design et leur composition (titane, polyétheréthercétone – PEEK), afin de limiter au maximum

tout risque de migration. Enfin, ces implants sont remplis d’un substitut qui guidera

l’arthrodèse, c’est-à-dire la fusion osseuse. Ces substituts peuvent être de l’os autologue :

épineuse vertébrale ou crête iliaque par exemple. D’autres substituts ostéo-conducteurs

peuvent être utilisés tels que des matrices osseuses déminéralisées d’origine humaine (type

Grafton® DBM-DBF - Medtronic), des matrices d’origine animale ou des substituts synthétiques

(type phosphate tricalcique beta Calciresorb® - Ceraver). Des produits ostéo-inducteurs

peuvent parfois être utilisés (Bone Morphogenetic Proteins type Inductos® - Medtronic).

60
 Différentes voies d’abord ont été développées pour accéder au DIV et effectuer

l’arthrodèse. Parmi elles, des voies dorsales (posterior lumbar interbody fusion PLIF) trans-

foraminales (transforaminal lumbar interbody fusion TLIF), latérales (lateral lumbar interbody

fusion LLIF) ou ventrales (anterior lumbar interbody fusion ALIF) (Fig. 16). Le choix de la voie

dépend de l’étage concerné, de l’indication chirurgicale, des préférences du chirurgien…

Toutes tendent vers des abords dits « mini-invasifs », dont le but est de limiter les

décollements musculaires, d’améliorer la réadaptation post-opératoire et de diminuer la durée

moyenne de séjour en hospitalisation.

Si le taux de succès d’une arthrodèse vertébrale est excellent, allant de 80 à 100% de

réussite [154,155] et permet une amélioration globale de la symptomatologie [156], il n’en

reste pas moins que l’arthrodèse supprime un secteur de mobilité du rachis. Cela entraine

indéniablement une modification globale de la biomécanique rachidienne, et plus

particulièrement au niveau des secteurs de mobilités adjacents à l’arthrodèse. Les contraintes

adjacentes sont accrues entrainant une dégénérescence accélérée des secteurs

adjacents appelé « syndrome adjacent » [105,157]. Ainsi, il a été rapporté que 30% des patients

opérés d’une arthrodèse vertébrale lombaire présenteront un syndrome adjacent à 5 ans de

l’intervention [158].

Fig. 16 Exemple d’arthrodèse vertébrale antérieure (ALIF). a) cage inter-somatique antérieure. b)

Illustration d’une arthrodèse vertébrale antérieure, cage inter-somatique en place entre 2 corps
vertébraux, après discectomie (illustrations : H.Garbe Nuvasive®)

61
 2) Arthroplastie totale du DIV
L’arthroplastie discale consiste à remplacer le DIV dégénéré par une prothèse discale

(Fig. 17). L’objectif est de restituer le plus fidèlement possible la mobilité d’un DIV sain [159],

permettant alors de préserver la biomécanique globale rachidienne et d’éviter l’apparition de

syndrome adjacent [160]. Plusieurs prothèses discales sont disponibles sur le marché, offrant

de très bons résultats fonctionnels à court et moyen termes. De plus en plus d’études

rapportent de meilleurs résultats et moins de complications post opératoires en comparaison

à l’arthrodèse vertébrale sur un niveau [161,162]. En revanche, les travaux portant les

arthroplasties discales multi-étagées ne permettent pas ce jour de conclure [163,164]. Même

si les résultats sont encourageants, les indications sont à envisager avec précaution.

Fig. 17 Arthroplastie totale du DIV. a) Prodisc L® - Synthes. b) illustrations d’une arthroplastie totale du
DIV permettant de conserver les mobilités d’un DIV natif (illustrations : H.Garbe Nuvasive®)

Les prises en charge actuelles, qu’elles soient fonctionnelles, médicamenteuses ou

chirurgicales, sont des prises en charges symptomatiques, prenant en compte la douleur, mais

n’intervenant pas sur la dégénérescence du DIV responsable de la symptomatologie. Les

techniques chirurgicales sont efficaces et donnent de bons résultats fonctionnels, néanmoins,

il s’agit finalement d’un traitement palliatif dont les complications sont potentiellement

graves que ce soient des complications per-opératoires (anesthésiques, saignements…) ou des

complications post-opératoires (infection du site opératoire, faillite du matériel…). Le

développement des thérapies régénératrices du squelette et des tissus fibro-cartilagineux

donnent accès à de nouvelles pistes thérapeutiques et permet d’envisager d’aller plus loin que

la prise en charge symptomatique.

62
 Stratégies thérapeutiques innovantes : la médecine
régénératrice du DIV
L’amélioration des connaissances de la physiopathologie du DIV permet d’envisager

de nouvelles stratégies thérapeutiques agissant sur la dégénérescence discale. Il s’agit alors

de développer non plus un traitement symptomatique, mais un traitement

« étiopathogénique » : c’est la médecine régénératrice du disque intervertébral. L’objectif de

la médecine régénératrice du DIV est de restaurer l’équilibre métabolique au sein du DIV et

plus particulièrement au sein du NP en limitant l’activité pro-inflammatoire locale et les effets

cataboliques, en stimulant les acteurs anaboliques et en restituant la population cellulaire et

les composants de la matrice extra-cellulaire [6,165].

Différentes stratégies sont développées pour tenter de régénérer le disque

intervertébral : la réparation exogène basée sur la thérapie cellulaire et l’ingénierie tissulaire

et la réparation endogène basée sur la biothérapie moléculaire et la thérapie génique.

A. La réparation exogène

1) La thérapie cellulaire
Comme précédemment expliqué, il est maintenant admis que l’initiation du

processus de dégénérescence du DIV coïncide avec l’appauvrissement cellulaire du NP. Dans

ce contexte, l’objectif de la thérapie cellulaire du DIV est de restaurer une population cellulaire

saine au sein du NP pour permettre d’améliorer la synthèse des constituants de la matrice

extra-cellulaire et pour restaurer l’état d’hydratation du DIV. Plusieurs cellules paraissent des

candidates pertinentes : les nucléopulpocytes, les cellules souches mésenchymateuses et les

cellules pluripotentes induites.

Les nucléopulpocytes

L’injection intradiscale de nucléopulpocytes parait être pertinente [166] mais la disponibilité

de ces cellules est un réel frein à cette stratégie thérapeutique. Le prélèvement de

nucléopulpocytes ne peut s’envisager que sur des gestes de discectomie sur des DIV

dégénérés, ayant une population cellulaire déjà appauvrie et au phénotype altéré par rapport

63
à des cellules issues d’un DIV sain [167]. De plus, la culture in vitro et le maintien du phénotype

des nucléopulpocytes est complexe [168,169]. Enfin, pour des raisons évidentes, le

prélèvement de cellules discales humaines saines ne peut pas s’envisager puisque ce

prélèvement risquerait d’entrainer une dégénérescence secondaire du DIV.

Les cellules stromales mésenchymateuses (CSM)

L’injection de CSM fait l’objet de nombreux travaux dans le contexte de la médecine

régénératrice du DIV. En effet, les CSM sont des cellules multipotentes qui, une fois injectées

dans le DIV, diminuent l’activité pro-inflammatoire et catabolique locale, grâce à leurs

propriétés anti-inflammatoires et immuno-modulatrices [170]. Ces cellules indifférenciées

pourraient, une fois injectées, se différencier en un type cellulaire compatible avec le

processus de régénérescence discale. La grande disponibilité de ces cellules en fait un atout

majeur. Elles peuvent être prélevées par ponction de moelle osseuse, mais également dans le

tissu adipeux en quantité importante. Même si aucune étude n’a démontré une différenciation

cellulaire de CSM injectées, des études pré-cliniques et cliniques ont montré que l’injection de

CSM dans des DIV dégénérés permet de restaurer partiellement la hauteur discale, d’améliorer

le signal en pondération T2 sur les séquences IRM, de restituer en partie les composants de la

matrice extra-cellulaire [171,172]. Pettine et al. ont également montré que l’injection de CSM

autologue permettait une diminution des lombalgies et une amélioration du score de

PFIRRMANN à l’IRM [173]. D’autres études sont moins concluantes et ne rapportent pas de

bénéfice à l’injection dans le NP de CSM [174]. Certains travaux rapportent même des effets

indésirables secondaires à l’injection de CSM comme Vadalà et al. qui ont observé l’apparition

d’ostéophytes secondaires à une fuite du produit injecté [175]. De plus, l’injection de cellules

indifférenciées multipotentes et le non-contrôle de leur prolifération ou même de leur

différenciation laisse planer le doute quant à une différenciation non contrôlée vers des

cellules malignes. L’action immuno-modulatrice des CSM sur des cellules tumorales est

maintenant bien documentée et constitue ainsi une limite à leur utilisation [176]. C’est dans

ce contexte qu’il a été envisagé de différencier des CSM issus du tissu adipeux en

nucléopulpocytes avant de les injecter. Il est possible d’induire cette différenciation dite

« nucléopulpogénique » grâce à l’association, sous certaines conditions, de facteurs de

64
croissance tels que GDF-5 et TGF-ß1. Ces CSM différenciées en nucléopulpocytes sécrètent

alors des constituants de la matrice extra-cellulaire comme du collagène de type II ainsi que

de l’aggrécane [177]. Bien que plusieurs travaux in vitro et in vivo ont été publiés, il n’a pas été

rapporté à notre connaissance d’études pré-cliniques ou cliniques utilisant des CSM

différenciées pour régénérer le DIV.

Cellules pluripotentes induites (iPSC)

La supplémentation du NP en cellules notochordales permet d’envisager un autre axe de

recherche prometteur en médecine régénératrice du DIV. La disparition à maturité

squelettique des cellules notochordales est une étape clé de l’initiation de la dégénérescence.

L’utilisation de cellules pluripotentes induites (iPSC) constitue une nouvelle approche

thérapeutique similaire à l’utilisation de cellules embryonnaires, avec des contraintes éthiques

moindres. La différenciation d’iPSC en cellules notochordales permettrait à terme de pouvoir

supplémenter le NP appauvri et de restituer ainsi un dialogue cellulaire avec les

nucléopulpocytes de l’hôte. Cependant, l’utilisation des iPSC reste limitée et peu d’études ont

été réalisées sur le DIV. Mêmes si les premiers résultats sont encourageants, le manque de

recul sur leur innocuité et les difficultés de différenciation des iPSC rendent l’impact de ces

travaux limité [178,179].

Ainsi, la thérapie cellulaire est un véritable enjeu scientifique pour la médecine

régénératrice du DIV, les résultats sont prometteurs [180]. Néanmoins, elle présente des

limites qui sont aujourd’hui bien connues. Les conditions locales au sein du DIV ne sont pas

propices à la survie cellulaire. L’environnement avasculaire, hypoxique, acide et la pression

intra-discale entrainent une destruction rapide des cellules injectées [181]. De plus, du fait de

la fragilité des cellules injectées, il est difficile d’envisager un effet à long terme sur le DIV et

il serait paradoxal et non adapté de devoir envisager des injections intra-discales répétées, les

multiples ponctions du DIV entraineraient une dégénérescence accélérée de ce dernier. Enfin,

il a été montré que les forces de cisaillement induites à l’injection entrainent une mort accrue

des cellules injectées [182]. Au regard de ces limites, l’association des cellules à un

65
biomatériau adapté et/ou à des systèmes biologiques à libération prolongée est ainsi

largement envisagée.

2) L’ingénierie tissulaire
L’association d’un biomatériau avec les cellules injectées doit répondre à plusieurs

problématiques. Tout d’abord, le biomatériau utilisé doit avoir un rôle protecteur, et ainsi

offrir un milieu propice à la survie, mais aussi à la prolifération et à la différenciation

cellulaire. De plus, l’utilisation de biomatériaux permet d’envisager la restauration des

propriétés biomécaniques du DIV, et en particulier du NP. Parmi les biomatériaux à

disposition, la famille des hydrogels est particulièrement intéressante. Elle regroupe des

polymères capables de former des réseaux hautement hydrophiles rappelant la structure

hydratée de la matrice extra-cellulaire du NP et pouvant contribuer à restituer les propriétés

biomécaniques du DIV. Les polymères utilisés dans la formation des hydrogels peuvent être

d’origine naturelle (alginate, acide hyaluronique, chitosane, cellulose, collagène…) qui ont

l’avantage d’être biocompatibles et peu couteux, ou synthétique dont certains possèdent des

propriétés mécaniques et physico-chimiques compatibles avec l’environnement discal (poly

acide lactique co-glycolique [PLGA], poly acide lactique [PLA]…) [183]. Il n’existe actuellement

pas de consensus concernant le choix du biomatériau le plus adapté dans ce contexte.

Les études portant sur l’association de la thérapie cellulaire et des biomatériaux sont

multiples et les méthodologies mises en place sont diverses rendant l’analyse des résultats

compliquée (population cellulaire injectée, biomatériaux utilisés, modèles animaux

sélectionnés…). Néanmoins, une amélioration de l’intensité du signal T2 en IRM ainsi qu’une

restauration partielle de l’hydratation de la matrice extra-cellulaire du NP et de sa composition

a été observée à la suite de l’injection intra-discale de CSM associée à un hydrogel [184]. Peu

d’études ont été réalisés sur l’homme, les conclusions restent encore limitées.

B. Réparation endogène

1) La biothérapie moléculaire
L’injection intra-discale de facteurs biologiques constitue un autre axe de recherche

dans le projet de thérapie régénératrice innovante du DIV. L’objectif est d’induire des réponses

66
anaboliques ou anti-cataboliques sur les cellules discales présentes chez l’hôte. Ainsi le but

est d’activer la prolifération des cellules du DIV, de stimuler la synthèse des constituants de

la matrice extra-cellulaire et de diminuer les processus inflammatoires [185]. Un autre objectif

de la réparation endogène appliquée au DIV est de recruter les cellules souches résidentes et

d’induire leur différenciation. En effet, des cellules souches/progénitrices discales ont été

localisées dans différentes régions anatomiques du DIV, notamment à la périphérie des

plateaux cartilagineux, ainsi qu’à la périphérie de l’AF [186]. Ces cellules souches résidentes

seraient comparables à des CSM dont elles expriment certains des marqueurs membranaires

[179,187]. De plus, elles sont capables de se différencier en adipocytes, ostéocytes,

chondrocytes [188]. Ces cellules représenteraient une source potentielle de cellules

réparatrices autologues endogènes du fait de leur localisation et donc de leur capacité innée

à survivre dans l’environnement hostile du DIV.

Différents facteurs biologiques sont envisagés. Des facteurs pro-anaboliques tels que

GDF-5, TGF-b1 ou encore IGF-1 (Insuline Growth Factor), et/ou des facteurs anti-cataboliques

et molécules anti-inflammatoires tels que les anti-TNF-α sont proposés [189]. L’injection intra-

discale de concentré de plaquettes (PRP : Platelet Rich Plasma) contenant des facteurs

biologiques a montré une amélioration de la prolifération des cellules discales, une

stimulation de la synthèse de la matrice extra-cellulaire et une diminution à court terme des

rachialgies [190].

Cependant, l’utilisation de facteurs biologiques présente une limite majeure : les

facteurs ont une demi-vie très courte. Il est donc nécessaire là aussi d’envisager un moyen de

protéger ces facteurs. Ainsi l’utilisation de systèmes à libération prolongée comme des

systèmes microparticulaires (par exemple des micro-billes de pullulane), ou d’hydrogels (par

exemple : l’HPMC-Si : hydroxypropyl-methylcellulose silanisée) permet de protéger les

facteurs biologiques et offre une action progressive de ces derniers grâce à leur libération

prolongée [191]. Les résultats des études in vivo sur modèle animal et sur l’Homme sont

encourageants [189]. Cependant l’action des facteurs injectés est encore limitée, du fait d’une

cellularité apauvrie du DIV dégénéré, le recrutement des cellules souches résidentes reste un

véritable challenge.

67
 2) La thérapie génique
La thérapie génique est également envisagée pour le traitement de la dégénérescence

discale. La thérapie génique est une méthode thérapeutique consistant à introduire des acides

nucléiques (ADN ou ARN) dans les cellules d’un organisme pour y corriger une anomalie. Il

s’agit souvent d’apporter un gène normal et fonctionnel (appelé transgène) là où le gène de

l’hôte est altéré, ou pour palier à l’expression de ce gène. Les acides nucléiques sont introduits

dans les cellules du patient grâce à un vecteur (viral ou non viral) ou injectés directement dans

les cellules. Parmi le matériel génétique à disposition, les microARN (miARN) sont

particulièrement plébiscités. Les miARN sont de courtes séquences d’acides ribonucléiques

simples brins non-codants propres aux cellules eucaryotes. Ce sont des régulateurs post-

transcriptionnels de l’expression d’un gène : leur appariement à un ARN messager cible peut

conduire à l’inhibition de sa traduction.

Dans le contexte de la médecine régénératrice du DIV, plusieurs miARN retiennent

l’attention de la communauté scientifique. Les miARN-141, miARN-155, miARN-665 ciblent de

nombreux facteurs impliqués dans le processus de dégénérescence discale [192–194]. Le

miARN-155 est particulièrement intéressant. Il intervient dans l’inhibition des facteurs de la

dégradation de la matrice extra-cellulaire, dans l’inhibition de l’inflammation, dans l’inhibition

de l’apoptose des cellules du NP [194].

Pour garantir leurs effets, les miARN doivent être internalisés par la cellule cible.

L’utilisation de vecteurs nano-particulaires d’encapsulation comme des nanocapsules

lipidiques s’avère particulièrement intéressante dans ce contexte afin de permettre une

internalisation des miARN par les cellules du DIV. De plus, ces nanocapsules protègent les

miARN qui ont une demi-vie particulièrement courte une fois injectés dans le DIV.

Ainsi, de nombreuses stratégies régénératrices du DIV sont envisagées. Les résultats

sont prometteurs et engageront pour certains travaux des applications thérapeutiques

cliniques. Pour autant, la poursuite de ces travaux ne peut s’effectuer directement chez

l’Homme. Il est donc nécessaire de réfléchir en amont à des modèles animaux de substitution.

68
 Partie II

Dégénérescence du disque intervertébral et

médecine régénératrice :
Les modèles animaux

69
 Les modèles animaux de dégénérescence discale

A. Expérimentation animale : généralités

Afin de poursuivre les travaux de recherche fondamentaux et de démontrer

l’efficacité et l’innocuité de nouvelles thérapies, le recours à des modèles animaux est une

étape incontournable. En effet, du fait de la très faible disponibilité, voire de la non-

disponibilité de certains tissus humains, il est nécessaire de recourir à des tissus et/ou des

modèles animaux substitutifs. De plus, les expérimentations in vitro et ex vivo, même

rigoureusement conduites, ne permettent pas de reproduire fidèlement les mécanismes

physiologiques et physiopathologiques complexes du vivant. Le choix du modèle le plus

pertinent est donc une étape cruciale puisqu’aucun modèle animal ne présente une parfaite

correspondance avec les mécanismes biologiques et physiologiques de l’Homme. Le modèle

animal choisi présentera toujours des limites qu’il faudra considérer et accepter.

Outre les critères scientifiques, les aspects éthiques et réglementaires ne peuvent être

passés sous silence. En effet, l’expérimentation animale est soumise à une réglementation

stricte impliquant l’utilisation raisonnée de modèles animaux (Directive Européenne

2010/63/UE, inscrite dans les textes de lois français depuis 2013 (2013-118-FR). Toute

personne impliquée dans un projet de recherche sur modèle animal vivant doit être titulaire

d’une formation à l’expérimentation animale à jour et doit exercer dans les locaux agréés

(arrêté du 1er février 2013). Enfin, l’approbation du projet de recherche par un comité d’éthique

est obligatoire. L’évaluation éthique du projet de recherche se base sur la règle des 3R [195] :

- « Réduire » le nombre d’animaux utilisé dans l’étude au minimum nécessaire pour

obtenir des résultats significatifs,

- « Remplacer » le modèle animal envisagé si cela est possible, par des approches

alternatives in vitro, in silico,

- « Raffiner » l’étude par une réflexion sur l’amélioration des contraintes imposées

aux animaux. Cette réflexion doit graviter autour des « 5 libertés individuelles de l’animal » :

la liberté physiologique (lutte contre la faim et la soif), la liberté sanitaire (lutte contre les

maladies et les blessures), la liberté psychologique (lutte contre la peur et l’anxiété), la liberté

70
comportementale (l’éthogramme de l’animal doit rester dans les normes) et la liberté

environnementale (amélioration des conditions d’hébergement).

Concernant les expérimentations cliniques vétérinaires, c’est-à-dire les études sur

animaux domestiques, il n’existe pas en France de règlementation officielle. En effet il n’est

pas obligatoire de soumettre un projet de recherche clinique vétérinaire à une instance comme

à un comité d’éthique. Malgré tout, les mentalités évoluent et des comités d’éthiques dédiés

aux expérimentations cliniques vétérinaires apparaissent permettant de cadrer les projets, de

s’assurer du respect des 3R et de l’obtention d’un consentement éclairé des propriétaires. En

effet pour que les résultats de ces travaux puissent être publiés, de nombreuses revues

scientifiques réclament un numéro d’autorisation, même lors d’études cliniques.

B. Les modèles de dégénérescence du DIV

Il existe 2 grandes catégories de modèles de dégénérescence du DIV appliquées dans

diverses espèces animales, les modèles de dégénérescence spontanée et les modèles de

dégénérescence induite.

1) Modèles de dégénérescence spontanée

a. Dégénérescence naturelle

Les premiers modèles à disposition sont les modèles présentant une dégénérescence

spontanée du DIV, liée à l’âge et au vieillissement naturel des tissus. Ce sont les modèles qui

paraissent les plus pertinents car ils se rapprochent théoriquement de la physiopathologie de

dégénérescence discale de l’Homme. Néanmoins, à l’échelle cellulaire, les mécanismes

initiateurs de la dégénérescence du DIV ne sont pas toujours similaires. En effet, il a été

observé comme chez l’Homme une disparition précoce des cellules notochordales chez le

mouton, l’alpaga, le babouin, le macaque ou encore chez certaines races canines [196–200].

D’autres modèles de dégénérescence naturelle ont été décrits mais chez lesquels il persiste

des cellules notochordales à l’âge adulte, c’est le cas de la souris, du rat des sables ou du lapin

[201–203].

71
 b. Dégénérescence accélérée

Des prédispositions peuvent amener à une dégénérescence accélérée du DIV. Ces

prédispositions peuvent être intrinsèques au modèle. Le cas du modèle canin est

particulièrement intéressant, il existe une dégénérescence discale spontanée chez le chien, qui

est plus ou moins marquée et/ou plus ou moins précoce en fonction de la race [204]. Chez

certaines races dites « chondrodystrophiques », (comme le Basset Hound, le Teckel, les

Bulldogs, le Beagle, le Lhassa Apso, le Pékinois, le Cavalier King Charles, le Welsh Corgi

Pembroke…), il existe une disparition prématurée des cellules notochordales et une

dégénérescence discale plus précoce que chez les chiens « non chondrodystrophiques ». Chez

ces derniers, les cellules notochordales sont encore présentes à l’âge adulte [196].

D’autres prédispositions peuvent conduire à une dégénérescence accélérée du DIV,

comme des prédispositions métaboliques chez le rat des sables diabétique ou des

prédispositions orthopédiques comme des modèles de déformation cyphoscoliotique chez la

souris ou chez le chien chondrodystrophique [201,205,206]. Enfin, il existe de multiples

modèles transgéniques de dégénérescence du DIV chez la souris. Ces modèles expriment ou

n’expriment plus certains gènes impliqués dans l’homéostasie discale. Le Tableau VII résume

les modèles de dégénérescence spontanée du DIV.

Dans le contexte de l’étude de la physiopathologie de la dégénérescence du DIV de

l’Homme et du développement de thérapies régénératrices, les modèles de dégénérescence

spontanées paraissent les plus pertinents. Mais il s’agit de modèles plus coûteux, il est en effet

nécessaire d’élever et de soigner ces animaux le temps de les faire grandir et vieillir. De plus,

il s’agit de modèles qui ne sont pas aussi standardisés et contrôlés que ce que l’on souhaiterait

puisque par définition, on ne contrôle ni l’apparition ni le délai de survenue d’une

dégénérescence. Au regard de ces limites, les modèles de dégénérescence induite ont été

décrits.

72
 Tableau VII : les modèles de dégénérescence spontanée du DIV (d’après Fusellier et al. [207] ). Il a été
montré chez les espèces surlignés en gras une disparition précoce des cellules notochordales.

Apparition de la
Modèle de dégénérescence spontanée Espèce Lésions observées Référence
dégénérescence
Diminution de la cellularité du NP, surexpression de
Souris SM/J 17 semaines Choi et al, 2018 [208]
MMP13, Col10a1, Ctgf, Runx2
Augmentation du score de Pfirrmann, diminution de
Souris C57BL/6 14 mois Ohnishi et al, 2017 [203]
l'index IRM
Sclérose des plateaux cartilagineux, pincements
Rat des sables 2 à 12 mois Gruber et al, 2002 [201]
discaux
Augmentation du grade de Pfirrmann et du score
histologique de Boos. Diminution de l'expression de
Lapin 6 à 30 mois Clouet et al, 2011 [202]
COL2A1 et AGC1, augmentation de l'expression de
COL1A1, MMP-13, BMP2, MGP et p21
Diminution du signal IRM en T2 et de l'index
12 à 36 mois Leung et al, 2008 [209]
Dégénérescence eau/oxide de deutérium
naturelle Stolworthy et al, 2015
Alpaga 10 ans Augmentation du grade de Pfirrmann
[210]
Diminution de la hauteur discale, calcification discale,
ostéophytes, diminution du signal IRM du NP, du
4 à 7 ans Nisolle et al, 2016 [198]
temps de relaxation T2, modifications des plateaux
Mouton
cartilagineux et des corps vertébraux (Modic)
/ Spondylose, lésions dégénératives dans l'AF Orbell et al, 2007 [211]
6 ans Calcification du NP and diminution de la teneur en PG Melrose et al, 2009 [212]
Diminution de la hauteur discale, ostéophytes,
Macaque 22 ans Nuckley et al, 2008 [200]
augmentation de la rigidité
Diminution de la hauteur discale et du signal IRM en Craig Platenberg et al,
Babouin 14 ans
T2, augmentation du score histologique. 2001 [199]
Augmentation du grade de Pfirrmann et du grade de Bergknut et al, 2012
Chondrodystrophie Chien 2 à 4 ans
Thompson [196]
Sclérose des plateaux cartilagineux, pincements
Diabète Rat de sables 2 à 12 mois Gruber et al, 2002 [201]
discaux
Diminution de la densité cellulaire, perte de
Souris 2 mois et demi distinction de la limite NP/AF, herniation - étages Mason et al, 1984 [205]
Cyphoscoliose cervical et thoracique
Augmentation du grade de Pfirrmann - étage
Chien 1 à 4 ans Faller et al, 2014 [206]
thoracique
Diminution de la hauteur discale, herniation,
Souris Col9a1 -/- 12 mois Kimura et al, 1996 [213]
ostéophytes, modifications histologiques
Hypoplasie vertébrale, teneur basse en GAG dans Sahlman et al, 2001
Souris Col2a1 - 1 mois
l'AF, les plateaux cartilagineux et les vertèbres [214]
Diminution de la résistance aux contraintes Sarver et al, 2004 Sal
Souris Col1a1 - 2 mois
mécaniques [215]
Souris Mstn Diminution de la teneur en PG dans les plateaux
6 mois Hamrick et al, 2003 [216]
(GDF8) -/- cartilagineux et dans l’AF
Dégénérescence Diminution du signal IRM dans le NP, perte de la
accélérée structure lamellaire de l'AF, diminution de la teneur
Souris GDF5 -/- 20 mois Li et al, 2004 [217]
en PG, inhibition des gènes de l'aggrécane et
collagène I
Watanabe et al, 2002
Modèles Souris cmd +/- 1 mois Chondrodysplasie
[218]
transgéniques
Watanabe et al, 2002
Souris LP -/- In utero Chondrodysplasie
[218]
Ankylose progressive, sclérose des plateaux
Souris ank +/+ 3 mois Sweet et al, 1981 [219]
cartilagineux
Diminution de la hauteur discale, de la teneur en PG,
Souris ERCC1 - 8 à 20 semaines Vo et al, 2010 [220]
augmentation de l'apoptose
Scoliose et cyphose progressive, ostéopénie, lésions
Souris Nf1 -/- 1 à 12 mois Rhodes et al, 2015 [221]
discales
Souris MEm1/m1 2 semaines Cyphoscoliose, synostose vertébrale, ostéopénie Juneja et al, 2014 [222]
Diminution de la densité cellulaire du NP,
augmentation de la teneur en collagène de la matrice
Souris Cavtm1Mls Bach et al, 2016 [223]
extra-cellulaire et de l'expression de TGFß,
augmentation de l'apoptose

73
 2) Modèles de dégénérescence induite
Le recours à des modèles de dégénérescence induite peut s’avérer pertinent dans

certaines situations expérimentales où la survenue, l’intensité et l’évolution de la

dégénérescence doivent être standardisées. L’induction d’une dégénérescence discale peut

également être souhaitée sur des modèles ayant des atouts pertinents, mais qui ne présentent

pas de dégénérescence discale spontanée.

a. Modèles secondaires à une modification mécanique

Le principe des modèles mécaniques est de créer des contraintes mécaniques non

physiologiques sur le DIV ciblé pour induire sa dégénérescence [224], ou de modifier les

contraintes d’un segment rachidien pour provoquer la dégénérescence des DIV adjacents à ce

segment [225]. De nombreux modèles mécaniques ont été décrits :

Modèles murins bipèdes

Il s’agit de modèles où l’opérateur contraint l’animal à ne se servir que de ses membres

pelviens, par un geste sur les membres thoraciques (contention, amputation…) [226]. Les

contraintes au sein du rachis de ces quadrupèdes sont donc modifiées. Pour des raisons

éthiques évidentes, ces modèles ont été abandonnés.

Compression du DIV

La compression du DIV entraine une augmentation de la pression au sein du NP, une

augmentation de la tension de l’AF pouvant aller jusqu’à l’apparition de lésions annulaires et

de fuite du NP. À l’échelle cellulaire, la compression du DIV entraine une disparition rapide

des cellules notochordales [227]. Des modèles de compression statique ont été décrits,

notamment chez le rat, en induisant une hyper-courbure sur la queue [228]. Il a ainsi été

montrée une perte significative de la hauteur discale et une diminution en collagène de type

II dans la concavité de l’hyper-courbure. D’autres modèles par compression dynamique et

répétée ont été décrits. Chez le rat, après mise en place d’implants vertébraux dans les 2

vertèbres adjacentes au DIV, Ching et al. ont montré l’induction d’une dégénérescence

secondaire à la compression du DIV, la vitesse de survenue et l’intensité de la dégénérescence

étaient corrélées à la fréquence et à l’intensité de la compression [229].

74
Modification de la stabilité rachidienne

La dégénérescence de DIV peut également être induite par la création d’une instabilité d’un

segment rachidien secondaire à la réalisation d’arthrectomies vertébrales dorsales ou à la

résection de processus épineux et des ligaments sus et inter-épineux [230,231]. La fusion d’un

ou plusieurs étages rachidiens par une arthrodèse vertébrale dorsale modifie les contraintes

au sein des DIV adjacents à l’arthrodèse. Cette méthode d’induction a été notamment décrite

chez le lapin, le mouton et le chien [232–234].

b. Modèles secondaires à une lésion chirurgicale du DIV

La lésion d’un ou plusieurs constituants du DIV peut entrainer l’initiation de sa

dégénérescence sous certaines conditions. La réalisation d’une annulotomie, c’est-à-dire d’un

défaut de l’AF a été largement étudiée dans ce contexte, pouvant aller du large défaut de l’AF,

à la ponction à l’aiguille [235,236]. En effet, il a été montré que la simple ponction percutanée

de l’AF peut entrainer sous certaines conditions la dégénérescence accélérée du DIV,

dépendant du rapport entre la hauteur du DIV et le diamètre de l’aiguille [237].

La nucléotomie, c’est-à-dire l’aspiration partielle ou totale du NP entraine également

une dégénérescence du DIV, même lorsqu’elle est réalisée sans léser l’AF [238]. Cette méthode

d’induction a été décrite sur des gros modèles animaux comme le mouton, le chien ou encore

le cochon [239,240].

Enfin, des lésions du plateau cartilagineux peuvent entrainer une dégénérescence

discale. Le plateau cartilagineux est une zone d’ancrage du DIV, mais aussi une interface

d’échanges de nutriments et de déchets entre le DIV et le corps vertébral. Léser le plateau

cartilagineux entraine une altération de ces échanges conduisant à l’induction d’une

dégénérescence discale. Cinotti et al. ont décrit un modèle porcin de dégénérescence discale

induite secondaire à des perforations du plateau cartilagineux caudal à l’aide d’une broche de

1,5mm de diamètre, par voie retro-péritonéale [241].

c. Modèles secondaires à un traitement chimique ou enzymatique du DIV

L’injection d’enzymes protéolytiques au sein du NP a été largement décrit pour

induire la dégénérescence du DIV. Les enzymes les plus utilisées sont la chondroïtinase ABC,

75
la chymopapaïne, la hyaluronidase ou certaines collagénases [242–245]. Ces modèles sont

intéressants car l’apparition de la dégénérescence est rapide (quelques jours à quelques

semaines), elle peut être effectuée sur des modèles de DIV ex vivo [246], en revanche, le

processus de dégénérescence s’éloigne des conditions physiologiques.

Le traitement chimique des DIV a également été étudié, comme la création de lésions

ischémiques du plateau cartilagineux, par l’injection de molécules anti-cancéreuses comme la

bléomycine ou la pingyangmycine qui altèrent les échanges nutritionnels avec le corps

vertébral [241,247].

d. Modèles secondaires à un traitement physique

La production de variations de température au sein du NP par des techniques comme

le laser ou la cryothérapie entraine également une dégénérescence du DIV. [248,249]. Cette

dégénérescence est plus progressive que les modèles enzymatiques, notamment pour les DIV

traités au laser où l’évolution de la dégénérescence est similaire à une dégénérescence

spontanée [248].

C. Les critères de choix du modèle animal pour la médecine

régénératrice du DIV

Concernant les travaux sur la médecine régénératrice du DIV, que ce soit dans le cadre

d’études fondamentales portant sur la physiopathologie de la dégénérescence du DIV ou dans

le cadre de travaux de recherche translationnelle évaluant la pertinence de nouvelles thérapies

régénératrices, il est nécessaire d’établir des critères de choix afin de sélectionner le modèle

animal le plus pertinent. Comme aucun modèle ne dispose d’une physiologie du DIV

comparable en tout point à l’Homme, la sélection du modèle le plus approprié implique des

compromis qui doivent être considérés pour chaque objectif expérimental.

Outre les critères réglementaires et éthiques évoqués précédemment, il est nécessaire

de prendre en compte d’autres critères lors du choix du modèle animal.

76
 1) Morphologie du rachis et des DIV
L’anatomie du rachis varie peu au sein de la classe des mammifères, néanmoins, il

existe quelques différences qui doivent être prises en compte. Ainsi la taille et la morphologie

du rachis doivent être considérées, notamment lorsque les objectifs expérimentaux gravitent

autour du développement de techniques chirurgicales. En effet, certaines espèces ne sont pas

de taille suffisante pour permettre de tester des protocoles chirurgicaux ou des dispositifs

médicaux implantables. Ainsi, ce sont les modèles canins, porcins, ovins et caprins qui sont

les plus utilisés au regard de leur ressemblances anatomiques pour le développement de

techniques et d’instrumentations chirurgicales [250,251].

L’aspect du DIV est globalement similaire entre les espèces. Il garde chez les

mammifères une forme de haricot et le NP reste légèrement excentré dorsalement, sauf chez

le bovin chez lequel le NP est plus central [252]. En coupe sagittale, les DIV humains et ovins

sont biconvexes, alors que chez le porc, le DIV est convexe crânialement et concave

caudalement [253]. Concernant la hauteur discale, dans la région lombaire, les DIV sont plus

épais ventralement que dorsalement, même en l’absence de lordose lombaire. Le volume

global du DIV est une valeur importante à prendre en compte, surtout lorsque le projet est

d’injecter un substitut au sein du DIV. Plus la taille du modèle est importante, plus le DIV sera

épais. Si on considère la « hauteur discale relative » qui correspond à la hauteur discale

rapportée à sa surface dans le plan transversal, alors la hauteur discale relative chez l’homme

est plus importante que celle de la plupart des mammifères. De manière intéressante, si l’on

considère non plus la taille du DIV, mais plutôt sa forme (notamment rapport longueur /

largeur), les DIV lombaires des modèles murins sont les plus proches des DIV de l’homme, en

excluant les primates non humains [254]. Néanmoins, plus le DIV est fin, plus les échanges de

nutriments se font aisément. Ainsi, même si la morphologie des DIV murins est proche des

DIV humain, les échanges nutritionnels ne sont pas comparables au DIV humains, du fait de

leur différence de taille.

La morphologie des vertèbres lombaires est sensiblement la même entre les

mammifères. Ce sont surtout les dimensions et les proportions qui changent d’une espèce à

l’autre. Ces variations sont à prendre en considération dans le choix du modèle animal, surtout

lorsqu’il s’agit d’études d’implants chirurgicaux rachidiens. Chez les modèles comme le

77
mouton, le cochon ou encore le veau, la largeur moyenne des corps vertébraux est plus petite

que chez l’Homme, alors que le diamètre dorso-ventral moyen est plus grand que chez

l’Homme. Le volume moyen du corps vertébral d’une vertèbre lombaire est 2 fois plus

important chez l’Homme que chez ces modèles animaux [255]. Concernant les pédicules, le

diamètre cranio-caudal moyen est plus important chez les grands modèles (tels que le mouton,

le babouin, le porc, le veau) que chez l’Homme, le diamètre latéro-latéral est assez similaire

entre l’Homme et les grands modèles à disposition, hormis le modèle ovin, qui possède des

pédicules plus étroits [256,257].

2) Physiologie et mécanismes de la dégénérescence du disque intervertébral

Il est maintenant admis que chez l’Homme, comme chez l’animal, la dégénérescence

du DIV est secondaire à une cascade d’évènements conduisant au sein du NP à une diminution

de la cellularité, une dégradation qualitative et quantitative de la matrice extra-cellulaire et

une perte des propriétés biomécaniques du DIV [183,258].

Chez l’Homme, la disparition spontanée des cellules notochordales à maturité

squelettique semble être un des principaux évènements initiateurs de la dégénérescence du

DIV [259]. Ainsi, lors de travaux portant sur la dégénérescence discale et surtout dans le cadre

d’études envisageant une thérapie régénératrice du DIV, il est nécessaire de choisir un modèle

présentant aussi une disparition précoce des cellules notochordales, comme le mouton,

l’alpaga, le babouin, le macaque ou encore certaines races canines [196–200] . Choisir un

modèle dans lequel persisteraient des cellules notochordales à maturité squelettique biaiserait

les résultats expérimentaux : ces cellules pourraient une fois stimulées contribuer à un

processus de réparation du DIV dégénéré [260].

La teneur en collagène, en protéoglycanes et donc la teneur hydrique des DIV varient

selon les espèces. Elles sont similaires à l’Homme chez le mouton, la chèvre et le babouin. A

l’inverse, à masse égale, les DIV de cochons contiennent 2 fois moins de collagène que les DIV

de l’Homme [261].

3) Caractéristiques biomécaniques du DIV

D’un point de vue biomécanique, le rachis lombaire humain diffère de celui des

mammifères. L’Homme est le seul bipède permanent, alors que les mammifères sont tous des

78
quadrupèdes, hormis les primates non humains ou certaines espèces murines qui peuvent

être qualifiées de bipèdes non permanents. Un modèle biomécanique animal identique à

l’Homme n’existe pas et l’influence de la bipédie sera toujours source de discussions.

La posture verticale et donc le poids de l’Homme modifient nécessairement les

contraintes appliquées aux DIV lombaires. Mais, la tonicité musculaire et les tensions

ligamentaires nécessaires pour stabiliser le rachis lombaire chez les mammifères quadrupèdes

mobilisent des forces qui sont plus importantes que les forces induites par la position

verticale [262]. Ainsi, les effets de la position érigée semblent largement contrebalancés par

cette tonicité musculaire et ces tensions ligamentaires [263]. Ces forces sont d’ailleurs plus

importantes chez les quadrupèdes afin de stabiliser le rachis lombaire en position horizontale

[262]. Après normalisation des variables inter-espèces (gabarit et poids du modèle, hauteur

discale, volume du NP…) la résistance du DIV aux contraintes mécaniques semble assez

similaire entre l’Homme et les espèces quadrupèdes comme la souris, le rat, le lapin, le

mouton, le cochon, le veau ou encore le babouin [261].

La lordose du rachis lombaire humain est une caractéristique propre à l’Homme.

Aucun mammifère ne présente de lordose lombaire similaire, même chez les primates non

humains. Il est difficile d’omettre cette caractéristique inédite, les contraintes en compression

sont donc a priori plus importantes dans la portion dorsale du DIV de l’Homme. Néanmoins,

les pathologies herniaires existent chez le quadrupède et notamment chez le chien, laissant

penser que des contraintes similaires existent.

Enfin, les amplitudes permises par les DIV lombaires ne sont pas les mêmes entre les

espèces. Les mouvements de flexion/extension du rachis lombaires sont moins amples chez

le mouton, le cochon, ou le veau par rapport à l’Homme [253]. Concernant les amplitudes en

torsion du rachis lombaires, elles sont globalement similaires entre la souris, le lapin, la

chèvre, le veau, le babouin et l’Homme, après normalisation des variables inter-espèces [264].

Finalement, il faut prendre en considération l’ensemble de ces critères lors du choix

du modèle animal, en tenant compte des objectifs expérimentaux. Il doit s’agir d’un modèle

fiable, standardisé et reproductible. Le délai d’apparition de la dégénérescence doit être

idéalement connu. L’âge du modèle est un critère important : un modèle jeune est moins cher

79
mais le squelette immature, l’absence de dégénérescence des DIV et la persistance des cellules

notochordales seront des limites. Un animal âgé est plus fragile, la dégénérescence peut être

trop avancée, d’autres facteurs biologiques liés à l’âge peuvent interférer avec les résultats.

Les conditions d’accueil et de stabulation, ainsi que le plateau technique

interventionnel doivent être adaptés au modèle choisi pour que les travaux expérimentaux

soient réalisables et surtout interprétables, en respectant les règles des 3R. Enfin, de manière

plus globale, le coût du modèle est un critère incontournable, l’achat, l’accueil, l’alimentation

et les soins éventuels à lui apporter doivent être pris en compte.

Le modèle brebis

A. Les similitudes avec l’Homme

Parmi les modèles à disposition exposés dans les paragraphes précédents, le modèle

ovin semble être un modèle particulièrement pertinent. Il s’agit tout d’abord d’un modèle

robuste, qui supporte bien l’anesthésie et les interventions chirurgicales. Son coût à l’achat et

à l’élevage est modéré ; la brebis sera préférée au bélier pour des raisons de facilité d’élevage

en groupe.

Chez la brebis, il existe comme chez l’Homme une dégénérescence spontanée

naturelle des DIV. Les cellules notochordales prédominent au sein du NP de la jeune brebis,

mais sont absentes chez la brebis mature, en particulier chez la brebis âgée de plus de 4 ans

[265]. Cette similarité avec l’Homme fait de la brebis un modèle de dégénérescence discale de

choix.

La taille de la brebis est également intéressante puisque la morphologie du rachis et

des vertèbres sont semblables [251,255,261,266]. Ce sont surtout les proportions de la

vertèbre de brebis qui diffèrent avec l’Homme. De plus, le rachis ovin présente une cyphose

unique, contrairement à l’Homme. Concernant les DIV, ils sont plus fins chez la brebis,

l’épaisseur du DIV est globalement la même entre la portion ventrale et la portion dorsale,

contrairement à l’Homme chez lequel la portion ventrale du DIV est plus épaisse. La

composition chimique du DIV de brebis est assez proche de l’Homme [261,266,267].

80
 Quelques aspects divergent avec l’Homme, en particulier l’aspect biomécanique lié au

fait que la brebis soit un quadrupède alors que l’Homme est le seul bipède permanent. Mais,

comme abordé précédemment, les effets de la bipédie sont contrebalancés par la tonicité

musculaire et les tensions ligamentaires présentes pour stabiliser le rachis lombaire [262,263].

Finalement, la résistance du DIV aux contraintes est assez similaire entre l’Homme et le

modèle brebis [261].

Ainsi, au regard de ces différents aspects, le modèle brebis est le modèle le plus utilisé

dans le domaine de la médecine régénératrice du DIV et plus largement dans le cadre de

travaux portant sur la dégénérescence discale [268]. En revanche, beaucoup d’études utilisent

la brebis en induisant une dégénérescence discale et peu de travaux ont étudié le caractère

spontané de la dégénérescence discale.

81
 B. Objectifs de la Thèse

L’objectif de cette première partie est d’enrichir les données disponibles sur le modèle

brebis dans le cadre de travaux portant sur la dégénérescence du disque intervertébral.

Tout d’abord, il s’agissait d’effectuer un travail de recueil de données

morphométriques à partir de scanners ovins et humains. Ce travail descriptif et comparatif a

pour ambition de compléter les données morphologiques actuellement disponibles. Il s’agit

d’un prérequis nécessaire dans ce contexte scientifique, notamment pour développer des

approches non invasives du disque intervertébral. De plus, l’étude morphologique d’un

modèle animal largement utilisé en recherche préclinique est indispensable pour ensuite

pouvoir extrapoler des techniques chirurgicales et des dispositifs implantables sur l’Homme.

Enfin, ce travail a pour ambition d’apprécier la dégénérescence discale spontanée chez

la brebis. Par des techniques d’imagerie comme la radiographie standard et l’IRM, et par l’étude

histologique des altérations du DIV, l’objectif est de caractériser la dégénérescence naturelle

des DIV ovins.

Ces travaux ont fait l’objet de résultats rapportés dans 2 articles :

§ Intervertebral disc surgical approach in Human, ovine and canine models: detailing trans-
pedicular and trans-annular approach for treatment of degenerative intervertebral disc
disease (soumis à Scientific Reports, IF : 4,379)
N. Gavira*, C. Decante*, N. Bouhsina, D. Rouleau, B. Miannay, N. Bronsard, A. David, R. Jossier, O. Gauthier,
A. Hamel, J. Guicheux, J. Clouetᵠ and M. Fusellierᵠ (* Co-first authors, ᵠ Co-last authors)

§ Correlation between magnetic resonance, X-ray imaging alterations and histological changes
in an ovine model of age-related disc degeneration. (2021, eCells and Materials, IF : 3,7)
N. Bouhsina*, C. Decante*, J.B. Hardel, S. Madec, J. Abadie, A. Hamel, C. Le Visage, J. Lesoeur, J. Guicheux,
J. Clouetᵠ and M. Fusellierᵠ (* Co-first authors, ᵠ Co-last authors)

82
 Morphologie des vertèbres de la brebis et anatomie
comparée à l’Homme : étude scanographique

A. Méthodologie

1) Description de l’étude et de la population

Il s’agit d’une étude descriptive monocentrique réalisée à partir d’images

scanographiques de rachis lombaires ovins et humains. Ce travail, utilisant des modèles

animaux, a été approuvée par le Ministère français de l'Agriculture et le comité d'éthique des

Pays de la Loire (Numéro d'approbation éthique : CEEA-PDL APAFIS 6170).

Trois brebis ont été utilisées pour ce travail formant le groupe « ovin ». Une était de

race Vendéenne, deux de race Mule, provenant d’un élevage accrédité (GAEC HEAS, Les

Rabelais, 44850 Ligné). L’âge moyen était de 2,7 ans (2 ou 3 ans). Lors de leur inclusion, les 3

brebis ont été euthanasiées (sédation par de la kétamine 5mg/kg intra-veineuse, puis

euthanasie par surdose de pentobarbital de sodium intra-veineuse). Les rachis ont été analysés

par tomodensitométrie (Light Speed®, GE Medical Systems, Oniris, Nantes, France, hélicoïdal,

épaisseur de coupe 0.625mm,120kV, 100mA). L’acquisition se faisait en décubitus ventral.

Deux brebis avaient 7 vertèbres lombaires, une brebis avait 6 vertèbres lombaires.

Une population humaine a été étudiée en parallèle. Cinquante-sept scanners lombaires

humains ont été utilisés formant le groupe « humain ». L’âge moyen était de 67,3 ans (25 à 90

ans). Trente scanners ont été réalisés en décubitus dorsal (sous-groupe SPH – Supine Position

Human) : 11 femmes (36,7%) et 19 hommes (63,6%). Ces scanners étaient issus de la base de

données « Lombonice 2005 » (Light Speed®, GE Medical Systems VCT, Nice, France, helicoidal,

épaisseur de coupe 0.625-1.25mm, 120kV, 147-451mA). Vingt-sept scanners ont été réalisés

en décubitus ventral (sous-groupe PPH – Prone Position Human) : 17 femmes (63%) et 10

hommes (37%). Ces scanners étaient issus d’une base de données Nantaise, effectués à

l’occasion d’une procédure interventionnelle abdominale.

83
 2) Mesures morphométriques
Des mesures scanographiques ont été effectuées sur les vertèbres lombaires ainsi que

dans les espaces entre les corps vertébraux, correspondant aux disques intervertébraux sur

des coupes axiales, coronales et sagittales. Toutes les mesures réalisées sont répertoriées dans

la figureFig. 18. et le Tableau VIII. Les mesures ont été réalisées par un seul opérateur, à l’aide

du logiciel Horos® (Horos Software® 3 .0). Les aires ont été calculées après avoir défini des

régions d’intérêt (ROI).

3) Variabilité intra-individuelle et analyses statistiques

La variabilité intra-individuelle dans la prise des mesures scanographiques a été

évaluée après 15 séries de mesures d’une vertèbre lombaire, en utilisant un modèle linéaire à

effets mixtes. Une variabilité inférieure à 15% était définie comme satisfaisante.

Aucune analyse statistique n’a été effectuée entre les 2 modèles.

84
Fig. 18. Coupes scanographiques sagittale, transversales et frontale d’un rachis humain. Illustration des
24 mesures faites sur chaque vertèbres humaine et ovine. La description de chaque mesure est reportée
dans le Tableau VIII

Tableau VIII : description des 24 mesures scanographiques effectuées sur chaque vertèbre humaine et
ovine (distances en mm, surfaces en mm2, angles en degrés)
Mesure Élément mesuré Axe de la coupe scanographique
Corps vertébral
A longueur cranio-caudale (= hauteur)de la portion ventrale Sagittal
B longueur cranio-caudale (= hauteur) de la portion dorsale Sagittal
C Diamètre latéro-latéral du plateau vertébral crânial Transversal
D Diamètre ventro-dorsal du plateau vertébral crânial Transversal
E Surface du plateau vertébral crânial Transversal
F Diamètre latéro-latéral du plateau vertébral caudal Transversal
G Diamètre ventro-dorsal du plateau vertébral caudal Transversal
H Surface du plateau vertébral crânial Transversal
Pédicule
I Diamètre crânio-caudal Sagittal
J Diamètre transversal Transversal
K Longueur ventro-dorsale Transversal
Canal vertébral
L Diamètre ventro-dorsal Transversal
M Diamètre latéro-latéral Transversal
N Surface Transversal
Disque intervertébral
O Épaisseur ventrale du DIV crânial à la vertèbre étudiée Sagittal
Processus épineux
P Longueur ventro-dorsale Sagittal
Q Angle entre le bord crânial du processus épineux et le plateau vertébral crânial Sagittal
Processus transverse
R Longueur cranio-caudale de la racine du processus transverse Frontal
S Longueur latéro-médiale Transversal
T Distance maximale entre les 2 processus transverses (envergure de la vertèbre) Transversal
U Angle du processus transverse avec la verticale Frontal
massifs articulaires
V Distance entre les 2 massifs articulaires crâniaux Transversal
W Distance entre les 2 massifs articulaires caudaux Transversal
Rachis lombaire
X Longueur cranio-caudale du rachis lombaire Sagittal

85
 B. Résultats

Au total, 20 vertèbres ont été étudiées dans le groupe ovin, 285 vertèbres ont été

étudiées dans le groupe humain.

1) Variabilité intra-individuelle
L’analyse de la variabilité intra-individuelle a montré une grande reproductibilité des

mesures scanographiques (< 15%), hormis pour l’angle Q qui correspond à l’angle entre le bord

crânial du processus épineux et le plateau vertébral crânial (Tableau IX).

Tableau IX : modèle linéaire à effets mixtes : analyse de la variabilité intra-opérateur. Il existait une grande
reproductibilité des mesures scanographiques, sauf pour l’angle Q.

Mesures A B C D E F G H I J K L
Valeurs
2 1,7 3,2 1,6 2,7 1,2 1,8 1,3 0,9 2,7 3,4 2,1
(%)

Mesures M N O P Q R S T U V W
Valeurs
1,5 1,8 4,6 1,3 72,5 3,5 1,8 0,3 2,7 0,6 0,9
(%)

2) Mesures morphométriques des vertèbres lombaires ovines et lombaires et

anatomie comparée
Le Tableau X répertorie les mesures scanographiques effectuées.

a. Comparaison d’une vertèbre lombaire de brebis avec une vertèbre lombaire humaine

L’analyse scanographique des vertèbres lombaires ovines et humaines a permis de

comparer leur morphologie (Fig. 18).

Taille globale, processus transverses, processus épineux

La vertèbre ovine était plus haute que la vertèbre humaine, en raison de son corps vertébral.

Son envergure était également plus importante, en raison de longs processus transverses. La

longueur totale ventro-dorsale de la vertèbre ovine était en revanche plus petite que la vertèbre

humaine. L’espace entre 2 corps vertébraux (c’est-à-dire la hauteur discale) était plus petit

chez la brebis.

86
Le corps vertébral

Le corps vertébral de la vertèbre ovine était plus haut que l’homme dans le sens crânio-caudal,

mais dans le plan transversal le diamètre du corps vertébral était plus petit chez la brebis. La

surface des plateaux vertébraux était plus petite chez la brebis (4,2cm2 ±0,29) que chez

l’Homme (14,5cm2 ±2,9).

87
Tableau X : mesures scanographiques des vertèbres lombaires ovines et humaines. Les valeurs correspondent aux moyennes ± déviation standard

88
Fig. 18 Reconstruction scanographique en 3 dimensions d’une vertèbre L3 ovine et d’une vertèbre L3
humaine en vues frontale, sagittale et transversale. Anatomie comparée. (Barre d’échelle : 25mm)

Pédicules

Les pédicules lombaires de brebis avaient une morphologie bien différente des pédicules

humains. Ils étaient plus étroits dans le plan transversal (brebis : 7,5mm ±1,6 ; Homme :

11,7mm ±4,4). En revanche, leur diamètre crânio-caudal était plus important (brebis : 25,8mm

± 2,8 ; Homme : 15mm ±2,1).

89
Canal vertébral

Le canal vertébral était plus petit chez la brebis que chez l’homme. Mais de manière

intéressante, si on étudiait la taille du canal vertébral rapportée à la surface du plateau

vertébral crânial, le canal vertébral chez la brebis était proportionnellement plus grand que

chez l’Homme.

b. Comparaison d’une vertèbre ovine crâniale (L1) avec une vertèbre ovine caudale (L7)

La morphologie des vertèbres lombaires changeait entre la vertèbre la plus crâniale et

la vertèbre la plus caudale (Fig. 19). C’étaient surtout les vertèbres L6, et L7 lorsqu’elle était

présente, qui étaient différentes des autres vertèbres lombaires. Les vertèbres caudales étaient

plus volumineuses, l’envergure des vertèbres augmentait dans le sens crânio-caudal.

C’était au niveau des corps vertébraux, et donc des disques intervertébraux que les

différences étaient les plus remarquables. Si la hauteur et le diamètre ventro-dorsal des corps

vertébraux augmentaient peu dans le sens crânio-caudal, le diamètre latéro-latéral augmentait

de telle sorte que les plateaux vertébraux étaient plus étirés dans le sens latéro-latéral. Ainsi

les DIV étaient plus larges aux étages caudaux. Les DIV crâniaux de brebis avaient donc une

morphologie plus proche des DIV humains que les DIV caudaux.

Il existait aussi des différences morphologiques au niveau des pédicules. Le diamètre

crânio-caudal des pédicules augmentait de la vertèbre L1 jusqu’à la vertèbre L4, puis diminuait

de la vertèbre L4 jusqu’à la vertèbre L7. Le diamètre transversal lui augmentait de la vertèbre

L1 jusqu’à la vertèbre L7.

90
Fig. 19 Reconstruction scanographique en 3 dimensions d’une vertèbre L1 ovine et d’une vertèbre L7 ovine
en vues frontale, sagittale et transversale. Anatomie comparée. (Barre d’échelle : 25mm)

91
 Dégénérescence spontanée du DIV chez la brebis : étude
longitudinale sur 6 mois

A. Méthodologie

1) Description de l’étude et de la population

Il s’agit d’une étude longitudinale descriptive monocentrique sur 6 mois réalisée chez

la brebis. Ce travail in vivo a été approuvé » par le Ministère Français de l’Agriculture et le

comité d’éthique des Pays de Loire (Numéro d’approbation éthique CEEA-PDL APAFIS 6170).

Quinze brebis ont été incluses pour ce travail. Leur âge moyen était de 4,7 ans (de 3

à 7 ans). Toutes provenaient d’un même élevage accrédité (GAEC HEAS, Les Rabelais, 44850

Ligné). Lors de l’inclusion, un examen vétérinaire a été réalisé afin de s’assurer de leur bonne

santé, et notamment de l’absence de signe de lombalgie. Une IRM rachidienne a été réalisée à

l’inclusion, puis à 1, 3 et 6 mois. Toutes les IRM ont été réalisées sous anesthésie générale

selon la même procédure (induction par diazépam 0,2 mg/kg IV, kétamine 2-5 mg/kg IV à

effet et propofol 1-3 mg/kg à effet puis entretien de l’anesthésie à l’isoflurane après intubation

trachéale). L’acquisition IRM se faisait en décubitus ventral. Un examen vétérinaire a été

effectué avant et après chaque anesthésie.

2) Analyse IRM
L’état de dégénérescence des DIV a été évalué sur une IRM 1,5 Tesla (Inveon., Siemens

Medical Solutions, Erlangen, Allemagne). Lors de la première IRM, 2 à 3 DIV lombaires ont été

sélectionnés aléatoirement. L’état de dégénérescence naturelle des DIV a été évalué sur des

coupes sagittales en utilisant le score qualitatif de PFIRRMANN en séquence T2 (Temps de

répétition : 3000ms ; Temps écho : 86ms ; Angle de bascule : 120°, épaisseur de coupe : 3mm).

Puis la mesure du temps de relaxation T2 a été mesuré en relaxométrie (Temps de répétition :

1510ms ; Temps écho (ms) : 13,8/27,6/41,4/55,2/69 ; Angle de bascule : 180°, épaisseur de

coupe : 3mm). Pour mesurer le temps de relaxation T2, une région d’intérêt (ROI) incluant le

NP des DIV a été dessinée manuellement sur la séquence sagittale T2. Ce ROI a été ensuite

dupliqué sur l’image en relaxométrie et le temps de relaxation T2 moyen du NP a été collecté.

92
L’analyse IRM a été effectué par 2 opérateurs en utilisant le logiciel Horos® (Horos Software®

3 .0).

3) Analyses statistiques
La variation du score de PFIRRMANN et la variation du temps de relaxation T2 ont été

analysées en utilisant un test de rang signé de Wilcoxon pour échantillons appariés. Les

différences observées était significative si p<0,05. La corrélation entre le score de PFIRRMANN

et le temps de relaxation T2 a été analysée par un test de corrélation de Pearson. La corrélation

était considérée comme significative si p<0,05. Les analyses statistiques ont été effectuées

avec le logiciel R.

B. Résultats

1) Étude qualitative de la dégénérescence : score de PFIRRMANN

Au total, 40 DIV ont été analysés en IRM. À l’inclusion, 40% des DIV (16) présentaient

un état de dégénérescence grade II et 60% (24) présentaient un état de dégénérescence grade

III. À 6 mois, 20% des DIV (8) présentaient un état de dégénérescence grade II, 78% (31)

présentaient un état de dégénérescence grade III, 2% (1) présentaient un état de

dégénérescence grade IV (Fig. 20).

Fig. 20 Score qualitatif de PFIRRMANN initial (J-0) et à 6 mois de l’inclusion (6 mois)

93
 Le grade relatif était calculé en soustrayant le grade à 1, 3 et 6 mois au grade initial.

À 6 mois, le score de PFIRRMANN augmentait en moyenne de 0,23 (±0,07) (Fig. 21).

Fig. 21 Évolution du score de PFIRRMANN sur 6 mois

Dans le sous-groupe de DIV initialement grade II, 50% des DIV (8) restaient au même

grade, 50% (8) évoluaient vers un grade III. Dans le sous-groupe de DIV initialement grade III,

96% des DIV (23) restaient au même grade, 4% (1) évoluaient vers un grade IV. Aucune

différence significative n’a été retrouvée, que ce soit pour le sous-groupe grade II ou pour le

sous-groupe grade III (respectivement : p=0,06 et p=1) (Fig. 22).

Fig. 22 Score de PFIRRMANN à 6 mois des 2 sous-groupes grade II et grade III. 50% des grades II évoluaient
vers un grade III, 4% des grades III évoluaient vers un grade IV. Ces différences n’étaient pas significatives
(respectivement p=0,6 et p=1)

94
 2) Étude quantitative de la dégénérescence : Relaxométrie du signal T2 du NP
Les mêmes DIV ont été analysés en relaxométrie T2. À l’inclusion, le temps de

relaxation T2 du NP était en moyenne de 67,3ms ±2,4. À 6 mois, il existait une diminution

significative du temps de relaxation T2 du NP (en moyenne = 62,9ms ±1,8 à 6 mois ; p=0,02)

(Fig. 23). Il existait une forte corrélation négative entre l’augmentation du grade de

PFIRRMANN et la diminution du temps de relaxation T2 du NP à 6 mois (p=0,02, coefficient

de corrélation ρ = -0.9799, Intervalle de confiance à 95% [-0.9996 ; -0.3239]).

Fig. 23 Évolution du temps de relaxation T2 du NP à 6 mois. Il existe à 6 mois une diminution significative
du temps de relaxation T2 du NP (p=0,02).

95
 Article expérimental : dégénérescence spontanée du DIV
chez la brebis : corrélation entre l’altération du signal IRM et les
modifications histologiques
Correlation between magnetic resonance, X-ray imaging alterations and
histological changes in an ovine model of age-related disc degeneration.
(2021, eCells and Materials, IF : 3,7)
N. Bouhsina*, C. Decante*, J.B. Hardel, S. Madec, J. Abadie, A. Hamel, C. Le Visage, J.
Lesoeur, J. Guicheux, J. Clouetᵠ and M. Fusellierᵠ (* Co-first authors, ᵠ Co-last authors)

Résumé :

La brebis est un des nombreux modèles animaux utilisés pour étudier la

physiopathologie de la dégénérescence discale et les stratégies régénératrices de la maladie

du disque intervertébral (DIV). Jusqu’à maintenant, peu d’études se sont réellement

intéressées au vieillissement des DIV lombaires ovins. Notre objectif était donc d’évaluer

concomitamment le développement de la dégénérescence discale spontanée liée à l’âge par

analyses radiographique, IRM et histologique.

Huit jeunes brebis (< 48 mois) et quatre brebis ayant atteint la maturité squelettique

(> 48 mois) ont été incluses. La hauteur discale, le grade de Pfirrmann, le grade de Pfirrmann

modifié, le T2-wsi et le temps de relaxation T2 ont été évalués par radiographie et par IRM. Le

score histologique de Boos modifié a été déterminé.

Les résultats obtenus montrent une évolution des grades de Pfirrmann (2 à 3), de

Pfirrmann modifié (2 à 4), ainsi que des scores de Boos (7 à 13) en fonction de l’âge. En

parallèle, l’intensité du T2-wsi (1,18 à 0,75), le temps de relaxation T2 (114,36 à 70,65 ms) et

la hauteur discale (4,1 à 3,2 mm) diminuaient de manière significative. Une corrélation entre

imagerie et histologie a pu être définie (p < 0,0001).

Cette étude décrit l’intérêt de la brebis comme modèle de dégénérescence discale liée

à l’âge en corrélant les altérations tissulaires histologiques avec les modifications mises en

évidence par radiographie et IRM. Compte tenu des similitudes structurelles avec les humains,

notre étude démontre que les moutons méritent d'être envisagés comme un modèle animal

pertinent pour étudier les stratégies de régénération IVD sans nécessité d’induire la

dégénérescence.

96
 Correlation between magnetic resonance, X-ray imaging alterations, and
histological changes in an ovine model of age-related disc degeneration

N. Bouhsina§1,2,3, C. Decante§1,2,4, J.B. Hardel3, S. Madec1,3, J. Abadie5,6, A. Hamel1,2,4, C. Le Visage1,2, J.

Lesoeur1,2, J. Guicheux*1,2,7, J. Clouet$1,8,9, and M. Fusellier$1,2,3

1 INSERM, UMRS 1229, Regenerative Medicine and Skeleton (RMeS), Université de Nantes, ONIRIS,
Nantes, F-44042, France
2 Université de Nantes, UFR Odontologie, Nantes, F-44042, France

3 Department of Diagnostic Imaging, CRIP, ONIRIS, College of Veterinary Medicine, Food Science and

Engineering, Nantes, F-44307, France

4 CHU Nantes, Service de Chirurgie Infantile, PHU5, Nantes, F-44093, France

5 AMaROC, ONIRIS, College of Veterinary Medicine, Food Science and Engineering, Nantes, F-44307,
France
6 CRCINA, INSERM, Université d’Angers, Université de Nantes, Nantes, France

7 CHU Nantes, PHU4 OTONN, Nantes, F-44093, France

8 Université de Nantes, UFR des Sciences Biologiques et Pharmaceutiques, Nantes, F-44042, France

9 CHU Nantes, Pharmacie centrale, PHU11, Nantes, F-44042, France

* Corresponding author: [email protected], +33 240412916 § Co-first authors

$ Co-last authors

Abstract

Sheep are one of the many animal models used to investigate the pathophysiology of disc
degeneration and the regenerative strategies for intervertebral disc (IVD) disease. Few studies to date
have thoroughly explored aging of ovine lumbar IVDs. Our objective was hence to concomitantly assess
the development of spontaneous age-related lumbar IVD degeneration in sheep using X-ray, MRI, and
histological analyses.
Eight young ewes (< 48 months old), and four skeletally mature ewes (> 48 months old) were
included. Disc height, Pfirrmann and modified Pfirrmann grades, and T2-wsi and T2 times were
assessed by X-ray and MRI. The histological modified Boos score was also determined.
The Pfirrmann (2 to 3) and modified Pfirrmann (2 to 4) grades, as well as the Boos scores (7 to
13) gradually increased with aging, while the T2-wsi intensity (1.18 to 0.75), T2 relaxation time (114.36
to 70.65 ms), and disc height (4.1 to 3.2 mm) decreased significantly. All of the imaging modalities
strongly correlated with the histology (p < 0.0001).
This study describes the suitability of sheep as a model of age-related IVD degeneration by
correlation of histological tissue alterations with the changes evidenced by X-ray and MRI. Given the
structural similarities with humans, our study demonstrates that sheep warrant being considered to be
a pertinent animal model to investigate IVD regenerative strategies without induction of the
degeneration.

Keywords: Intervertebral disc, degeneration, sheep, MRI, X-ray, histology

97
Introduction

Low back pain (LBP) is a major issue not only from a medical perspective but also in terms of
its societal and economic impact. Indeed, LBP is one of the most common causes of disability and it
constitutes a significant economic burden (Geurts et al., 2018; Hoy et al., 2014; Kigozi et al., 2019) with
an estimated cost of $ 87.6 billion in 2013 in the United States, which is the third-highest health cost after
diabetes and ischemic heart disease (Dieleman et al., 2017). LBP is multifactorial and can be related to
changes occurring either in the intervertebral disc (IVD), the endplates, the facet joints, the vertebral
bone marrow, or the spinal muscles. IVD degeneration is thought to be one of the main causes of LBP
(Khan et al., 2017), and 266 million individuals worldwide are affected by LBP due to degenerative disc
disease each year (Ravindra et al., 2018). LBP due to IVD degeneration is also referred to as discogenic
back pain (Luoma et al., 2000; De Schepper et al., 2010). IVD degeneration is defined as an “aberrant
cell-mediated response to progressive structural failure” (Adams and Roughley, 2006). Age is one of
the main factors associated with the degeneration, although various mechanical, genetic, nutritional,
and environmental factors can mimic the age-related changes that occur in IVDs (Adams and Roughley,
2006). Age-related changes in the IVD correspond to naturally occurring cell senescence, whereas
pathological IVD degeneration refers to the precocious modifications in the tissue composition caused
by these various factors (Wang et al., 2016). The initiating mechanisms differ between IVD senescence
and degeneration, but since they result in the same histological modifications of the IVD tissue, the term
“IVD degeneration” is frequently used to define both mechanisms.

In light of the high prevalence of discogenic back pain, it appears essential to understand the
complex mechanisms that lead to IVD degeneration. Greater understanding of this pathogenesis would
help with the development of treatments to reduce the degenerative process, limit its onset, or repair
damaged IVDs. For this purpose, many in vitro, in vivo, and ex vivo studies have been carried out (Alini
et al., 2008; Clouet et al., 2019; Fusellier et al., 2020). As the investigation of human tissues can be limited
due to the difficulties with obtaining human histological material, preclinical animal models are an
attractive option.

Numerous preclinical animal models have been developed to study IVD degeneration and to
investigate the changes that occur in the various structures (the Annulus Fibrosus (AF), the Nucleus
Pulposus (NP), and the endplate) of the IVD and at different levels (cellular, extracellular matrix,
neurovascular, etc.) (Fusellier et al., 2020). The most suitable model has to be ethical and cost-effective,
and the conditions for the study should be reproducible. Above all, the model has to mimic the
pathological features of human IVD as closely as possible (Alini et al., 2008; Singh et al., 2005). To
investigate IVD pathophysiology, spontaneous and induced IVD degeneration have been widely used
in animal models. The induction of the IVD degeneration can be triggered mechanically (e.g., by fusion
with consequent instability of adjacent segments), chemically (e.g., by chemonucleolysis), or by injury
(e.g., by endplate injury, annulotomy, or nucleotomy) (Daly et al., 2016). Nevertheless, induction of IVD
degeneration is invasive and can be time-consuming, as a considerable amount of time can be required
to allow the onset and development of the degenerative process depending on the induction modality
used. For example, discectomy induces IVD degeneration in approximately 6 weeks (Sloan et al., 2020),
while instability only induces this degeneration after at least 9 months (Fusellier et al., 2020).
Additionally, IVD degeneration triggered by inductive methods can drastically influence the outcomes
of the tested regenerative therapies, particularly in case of chemonucleolysis due to residual enzyme
activity (Fusellier et al., 2020). Moreover, human IVD degeneration is not always caused by injury, as
aging is one of the main factors involved, and many patients diagnosed with IVD degeneration do not
exhibit LBP. Consequently, inducing degeneration does not always result in the intended purpose of
mimicking the changes that occur naturally in human degenerative IVDs. Thus, age-related
spontaneous IVD degeneration animal models appear to be the most appropriate way to investigate
this affliction. Spontaneous IVD degeneration has been well described in a number of species (e.g., sand

98
rat (Gruber et al., 2002), chondrodystrophic dog (Bergknut et al., 2012), rabbit (Clouet et al., 2011), mouse
(Ohnishi et al., 2018), non-human primates such as baboon (Craig Platenberg et al., 2001) and macaque
(Nuckley et al., 2008), as well as in sheep (Nisolle et al., 2016)). In this last study, the naturally occurring
changes were evaluated by imaging modalities (MRI and CT), but the histological features were not
described or correlated to the changes seen with the imaging modalities. In addition to anatomical
similarities, ovine and human IVDs have also been reported to have biomechanical and histological
features in common (Daly et al., 2016; Reid et al., 2002; Schmidt and Reitmaier, 2013; Sheng et al., 2010;
Wilke et al., 1997a; Wilke et al., 1997b). Sheep IVDs can, therefore, be considered to be a pertinent model
of human IVD degeneration (Reitmaier et al., 2017). Therefore, the aim of the current study was (1) to
assess the age-related spontaneous IVD degeneration in ovine lumbar spine by concomitant use of
imaging features (MRI and X-ray) and histological tools and (2) to determine whether there is a
correlation between the imaging modalities and the histology in this species. The authors hypothesized
(i) that spontaneous degeneration of the lumbar ovine IVD can be assessed with both imaging and
histological features, and (ii) that imaging correlates with histological scoring of IVD degeneration in
the sheep model. If there is such a correlation, the imaging characteristics of IVD degeneration could
provide an alternative to systematic histological assessment of degeneration, which would be of
considerable relevance in longitudinal studies using sheep as a large animal model.

Materials and Methods

Cohort
Twelve sheep were used for this study. Eight were skeletally immature female sheep that were
less than 48 years old (group 1), and four were skeletally mature females that were more than 48 months
old (group 2). As epiphyseal fusion of the vertebral bodies occurs at the age of four years and is one of
the last epiphysial fusions in sheep (Barone, 2010; Moran and O’Connor, 1994), we included ewes older
than four years old in the second group.
The cohort came from an accredited farm (GAEC HEAS farm, Ligné F-44850, France. All of the
sheep underwent distant and close physical, orthopaedic, and neurological examinations. In order to
evaluate the presence or absence of low back pain and the neurological disorders, palpation of the
lumbar area was performed, and a criterion scale was applied to evaluate the behaviour of and the pain
in the sheep. This scale assesses the alertness (normal, increased, reduced, or lethargic), the posture
(standing or lying down), the standing posture -if applicable (stationary, normal movement, careful
movement, movement without flexion of the hindlimbs), the head position while standing (normal or
low), the head position while moving (normal or low), the presentation of the back and the hindlimbs
(normal or abnormal, arched back), the vocalization (normal bleating, moaning, cringing), the appetite
(normal, dysorexia, or anorexia), the reaction when the operator approached (quick escape, slow escape,
no escape). The animals were excluded if they present any orthopaedic or neurological disorders. All of
the animal experiments were carried out in accordance with EU Directive 2010/63/EU. This study was
approved by the French Ministry of Agriculture and the ethics committee of the Pays de la Loire (Ethics
Approval number: CEEA-PDL APAFIS 6170).

X-ray and MRI imaging

The sheep were anesthetized for the imaging procedures. The anaesthetic protocol included
intravenous injections of diazepam (0.2-0.4 mg/kg) and ketamine (2-5 mg/kg), and induction by
intravenous injection of propofol (1-3 mg/kg) followed by inhalation of 1-3% isoflurane.
Plain radiographs of the lumbar spine were taken using a radiography machine (Convix 80 generator®
and Universix 120® table, Picker International, Uniontown, Ohio, USA). Sagittal and dorsoventral
radiographs were performed with a collimator-to-film distance of 100 cm, an exposure of 20-30 mAs,
and a penetration power of 70-85 kV. Fluoroscopy included in the radiography equipment was used to
check the absence of rotation (superposition of the ilium wings and crests and of the transverse

99
processes of the lumbar vertebrae). Magnetic Resonance Imaging of the entire lumbar spine was
performed on a 1.5 T MR scanner (Magnetom Essenza®, Siemens Medical Solutions, Erlagen, Germany)
using a standard body coil to obtain sagittal and axial T2-weighted images and sagittal T2 mapping
images. The MRI acquisition parameters are listed in Table 1.

Imaging analysis.
The imaging data were analysed using Horos software 3.0® (Horos Project, Geneva,
Switzerland). X-ray images were used to determine the number of lumbar IVDs, as they vary between
5 and 6 in sheep, and to verify the absence of major bone disease (congenital malformation of the
vertebrae, old fracture, tumour) or spondylodiscitis. The lumbar midpoint disc height (MDH) of all of
the lumbar intervertebral spaces was measured on the sagittal radiographs between the midpoint of the
caudal endplate of the cranial vertebra and the midpoint of the cranial endplate of the caudal vertebra
as described by Lee et al (Figure 1) (Lee et al., 2017).
Lumbar IVDs were evaluated on T2-weighted sagittal MRI sequences using the five-point
Pfirrmann grading system (Pfirrmann et al., 2001), which is based on MR signal intensity, distinction
between the NP and AF, the IVD structure, and IVD height. In an effort to better detect the early changes
in degenerative IVDs, the modified Pfirrmann grading system was also applied (Griffith et al., 2007).
This method is based on eight grades characterized by the signal from the NP and the inner AF
compared with the cerebrospinal fluid signal, the distinction between the inner and the outer part of
the dorsal AF, and the proportion of the reduction in disc height. These two human grading systems
have already been applied for ovine IVD evaluation in previous studies (Daly et al., 2018; Pennicooke
et al., 2018). The T2-weighted signal intensity (T2-wsi) was measured on MR images of a midsagittal
slice. This consisted of the ratio of the mean NP signal intensity divided by the mean spinal cord signal
intensity measured at the same IVD level. Finally, for the T2 relaxation time measurements, a region-
of-interest (ROI) that included the NP of each lumbar disc was manually drawn on the sagittal T2-
weighted image. This ROI was duplicated onto the corresponding T2 mapping image, and the mean T2
relaxation time of the NP was collected.
The Pfirrmann grading, the modified Pfirrmann grading, and the T2 relaxation time
measurements were acquired from the MR images by two independent blinded observers. Five
readings of these three parameters were performed by each observer, with a one-week interval between
the readings.

Histological Analysis
After having completed the imaging procedures, the animals were euthanized by intravenous
injection of pentobarbital at 140 mg/kg.
The lumbar IVDs were harvested and fixed with 4% paraformaldehyde for 2 or 3 days. The
IVDs were then placed in a decalcifier (Shandon TBD-2 Decalcifier®, 6,764,004, Thermo Fisher Scientific,
Waltham, MA, USA) for one month before being prepared for sectioning using the Kawamoto method
(Kawamoto and Shimizu, 2000). They were frozen in isopentane and dry ice before being embedded in
Super Cryoembedding Medium® (SCEM®) (Section Lab, Hiroshima, Japan) and frozen again in
isopentane and dry ice until the SCEM® became fully frozen. The samples were cut at -30 °C in an axial
orientation into 7-μm slices with a cryostat (CryoStar NX70®, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA,
USA). The samples were stained with Hematoxylin Eosin Safran (HES) and Alcian blue (AB) according
to a standard protocol (Lucas et al., 2012). If the quality of the samples were considered insufficient to
be accurately analysed, they were excluded from the histological analysis. Exclusion criteria
corresponded to an obtention of partial NP on the slice during the sectioning.
These histological sections were analysed using a modified Boos scoring (Boos et al., 2002) that
focuses on the NP. The AF and the endplates weren’t assessed in this study. This scoring is based on
the analysis of four criteria (decrease in cell density, granular changes, mucous degeneration, and tear
and cleft formation), and it is aimed at characterization of the histomorphology of the IVD and
evaluation of the degenerative changes in the extracellular matrix (ECM). The modified Boos scoring

100
ranged from 0, which corresponded to a healthy IVD without signs of degeneration, to 22, which
corresponded to complete IVD degeneration. Granular and mucous degeneration was ranked from 0
(no changes) to 4 (complete degeneration). Cell death and tear and cleft formation were ranked from 0
to 4. Cell proliferation was ranked from 0 to 6. The lowest score (0) corresponded to an absence of
changes and the highest score (4 or 6) corresponded to complete degeneration. Two independent
observers performed a blind evaluation of the histological samples. When the scoring differed by more
than two points, the sample was reexamined jointly by the two observers who agreed on a new score
that was retained for further analysis. If not, the mean of the two values was used.

Statistical analysis
The statistical analysis was performed with R software (version 4.0.3, The R Foundation,
Vienna. Austria). The intra-rater reliability was assessed for the Pfirrmann grading, the modified
Pfirrmann grading, and the T2 relaxation time using a linear mixed-effects model. Intra-rater reliability
was considered to be high if the value was less than 15% and moderate if the value was between 16 and
50%. The weighted kappa coefficient (κ) was used to determine interobserver reliability for the
Pfirrmann and the modified Pfirrmann gradings. Agreement was excellent for κ > 0.8, good for κ = 0.6
– 0.8, moderate for κ = 0.4 – 0.6, fair for κ = 0.2 – 0.4 and slight for κ = 0.0 – 0.2. For these two parameters,
the five readings were reviewed and the grade that was assigned the most to each IVD by each observer
was retained for the determination of the inter-rater reliability. When the intra-rater reliability was good
for the T2 relaxation time, the mean of the five values was retained for the calculation of the inter-rater
reliability. A coefficient of determination was used to evaluate the inter-rater reliability for the T2
relaxation time. Reliability was considered to be excellent if R2 was above 0.75, good if R2 was between
0.6 and 0.75, moderate if R2 was between 0.4 and 0.59, and poor if R2 was under 0.4.
All of the data are presented as medians, the standard error or the mean (SEM), and the range.
Correlations between age and the Pfirrmann grades, the modified Pfirrmann grades and the modified
Boos scores were analysed using Spearman correlation tests. Correlations between age and the MDH,
T2-wsi, and T2 relaxation times were analysed using Pearson correlation tests. For these tests, the actual
age of each ewe was considered and not the group they had been assigned to, and thus age was
considered as a continuous parameter. Correlations between the histology and each imaging parameter
were also studied using Spearman correlation tests. Correlations were considered significant if the p-
value was < 0.05. For all of the imaging and the histological parameters, significant differences between
the age groups were assessed using a Wilcoxon Mann-Whitney test. Differences were statistically
significant when the p-value was < 0.05. For every linear mixed-effects model used for the statistical
analysis (intra-rater reliability for Pfirrmann grading, modified Pfirrmann grading and T2 relaxation
time and correlations between all of the imaging and the histological parameters), the normality and
the independence conditions of the residuals were validated by recommended graphs according to the
method described by Pinheiro and Bates (Pinheiro and Bates, 2000) for mixed- effects models.

Results

Cohort
The cohort was composed of 12 Vendée sheep. The mean body weight was 31 kg for group 1,
and 73 kg for group 2. The mean age of each group was 20,75 months for group 1, and 90 months for
group 2. The cohort was in good health, except for one animal that exhibited a moderate respiratory
impairment. The clinical, orthopedic, and neurological examinations revealed that none of the sheep
had a musculoskeletal or neurological disorder or signs of LBP. None of the sheep exhibited a major
vertebral disease, and hence none of the animals were excluded from the study.

101
Changes in X-ray and MRI parameters
A total of 66 IVDs were studied using imaging modalities. The midpoint disc heights (MDH)
were determined on X-ray images. MR images were used for the Pfirrmann and the modified Pfirrmann
grading, as well as to determine the T2-wsi and the T2 relaxation times. 44 IVDs were assessed in group
1, and 22 in group 2 (animals older than 48 months). In each group, the lumbar spine of half of the
animals was composed of 5 IVDs while the other half had 6 IVDs.
Analysis of the intra-rater reliability revealed very strong agreement for the Pfirrmann grading,
with intra-rater values of 0.10 and 0.14. Similarly, the T2 relaxation times had very strong intra-rater
values of 0.01 and 0.05. The intra-rater reliability was moderate to poor for the modified Pfirrmann
grading, with intra-rater values of 0.27 and 0.88. The inter-rater analysis revealed good agreement for
the Pfirrmann grading (k = 0.64) and moderate agreement for the modified Pfirrmann grading
(k = 0.54). The T2 relaxation time measurements had excellent inter-rater reliability (p-value < 0.0001, R2
= 0.87). The slope of the regression line between the two observers did not differ significantly from 1
(0.99; CI = 0.91 – 1.07) and the line intersect did not differ significantly from 0 (7.49; CI = -1.5 – 16.48).
The median MDH values decreased from 4.1 mm (SEM: 0.03; range: 1.8) in group 1 to 3.2 mm (SEM:
0.05; range: 1.6) in group 2 (Figures 1 and 2). Hyperintense signals of the endplates were observed on
both T1- and T2-weighted images in 3/4 of the sheep in group 2 (Figure 1). These variations in the signal
intensity correspond to Modic type 2 changes with fatty marrow replacement in the endplate (Modic et
al., 2007). Modic signs were not observed on the endplates of the group 1.
The median values of the Pfirrmann score increased from 2 (SEM: 0.07; range: 2) in group 1 to
3 (SEM: 0.06; range: 1) in group 2 (Figure 3A and 3B). The IVDs of the group 1 were mainly rated grade
I (13/44) or II (27/44). Only four IVDs of these sheep were rated grade III. By contrast, the group 2 had
IVDs with Pfirrmann grades III (15/22) and IV (7/22).
The modified Pfirrmann grades had a similar distribution. The median value increased from 2
(SEM: 0.07; range: 2) in group 1 to 4 (SEM: 0.10; range: 3) in group 2 (Figure 3C). The IVDs of group 1
were mainly rated grade I (10/44) or II (27/44). Seven of the 44 IVDs were rated grade III in this group.
In group 2, the IVDs were rated grade III (7/22), IV (9/22), V (4/22), and VI (2/22).
In terms of the T2-wsi, the values decreased with age. The median T2-wsi value was 1.18 (SEM:
0.02; range: 0.41) and 0.75 (SEM: 0.08; range: 0.92) for groups 1, and 2, respectively (Figure 4A).
The value of the T2 relaxation time also decreased with age. The median T2 relaxation time value was
114.36 (SEM: 0.57; range: 195.24), and 70.7 (SEM: 0.83; range: 92.3) for groups 1 and 2, respectively
(Figure 4B).

The statistical analysis revealed a significant correlation between age and the MDH (p-value =
0.014, rho = - 0.30). Significant differences between the MDH values were found between groups 1 and
2 (p-value < 0.0001) (Figure 2).
The statistical analysis revealed a significant correlation between age and the Pfirrmann grade
(p- value < 0.0001, rs = 0.62). There were statistically significant differences between groups 1 and 2 (p-
value < 0.0001) (Figure 3).
The statistical analysis revealed a significant correlation between age and the modified
Pfirrmann grade (p-value < 0.0001, rs = - 0.67). There were statistically significant differences between
groups 1 and 2 (p-value < 0.0001) (Figure 3).
The statistical analysis revealed a significant correlation between age and the T2-wsi (p-value
< 0.0001, rho = 0.82). There were statistically significant differences between groups 1 and 2 (p-value <
0.0001) (Figure 4A).
The statistical analysis revealed a significant correlation between age and the T2 relaxation time
values (p-value < 0.0001, rho = - 0.73). Significant differences were found between groups 1 and 2 (p-
value < 0.0001) (Figure 4B).

102
Histological analyses
Individual modified Boos scores based on histological analysis were determined for 56/66 IVDs
(group 1: n = 35/44; group 2: n = 21/22). Nine IVDs from group 1 and one IVD from group 2 were
removed from histological analysis because of poor quality at the end of the histological procedures.
The IVDs of group 1 were characterized by a low value for the modified Boos score, and the extracellular
matrix (ECM) appeared to be well organized, with numerous nucleopulpocytes (Figures 5Aa and 5Ab).
Moreover, neither granular changes, mucous degeneration, or tears were observed. In some IVDs of
group 1, the modified Boos score increased yet slightly, and nucleopulpocytes proliferation resulted in
the formation of clusters that were randomly distributed in the NP (Figures 5Ac and 5Ad). Analogous
to the mucous degeneration, there was a big increase in granular changes between the sheep of group
1 and the sheep of group 2. In group 2, tears and clefts were observed in some of the IVDs, while
numerous empty cells were also noted (referred to as “ghost cells”), which were taken to reflect cell
death (Figures 5Ae and 5Af). Well-defined nests with clusters of large cells exhibiting large intracellular
vacuoles and amorphous nuclei resembling notochordal cells were identified in the central NP of the
group 1 IVDs. The modified Boos scores increased with age, with a variation from 3 to 9 in group 1
(with a median value of 7, SEM: 0.11; range: 6), and from 9 to 19 in group 2 (with a median value of 13,
SEM: 0.19; range: 10) (Figure 5B). The statistical analysis revealed a significant correlation between age
and the Boos scoring (p-value < 0.0001, rs = 0.77). The modified Boos scores were significantly increased
between groups 1 and 2 (Figure 5B).
A positive correlation was found between the modified Boos scores and the Pfirrmann (p <
0.0001, rs = 0.84) and the modified Pfirrmann grades (p < 0.0001, rs = 0.82) (Figure 6). Similarly, a
negative correlation was found between the Boos scores and the MDH (p < 0.0001, rs = 0.52), the T2- wsi
(p < 0.0001, rs = 0.70), and the T2 mapping (p < 0.0001, rs = 0.52).

Discussion

This study evaluated the correlation between the MDH on X-rays, MRI, and histological
characteristics to assess age-related spontaneous lumbar IVD degeneration in sheep. By showing a
strong correlation between age, imaging and histological parameters, the present investigation has
validated the hypothesis that lumbar IVD age-related degeneration occurs in ovine. To the best of the
authors’ knowledge, this is the first study that concomitantly analysed and correlated imaging
observations with histological changes related to the spontaneous degeneration that occurs in aging
ovine lumbar IVD according to the second hypothesis. In particular, major changes related to age were
observed in lumbar ovine IVDs by four years of age, when the epiphyseal fusion of the vertebral bodies
is complete.
This study assessed the lumbar IVD degeneration in sheep of different ages. Among the various
large animal models, the ovine model is commonly used to investigate lumbar IVD degeneration,
notably because of its similarities with the human lumbar spine (Daly et al., 2018; Hasler et al., 2010;
Lyons et al., 1981; Nisolle et al., 2016; Reid et al., 2002; Reitmaier et al., 2017; Schmidt and Reitmaier,
2013; Schwan et al., 2019; Wilke et al., 1997a; Wilke et al., 1997b). In particular, the human and ovine
IVD have a high degree of similarity in terms of the water and collagen contents, as well as the collagen
orientation angle (Lyons et al., 1981; Reid et al., 2002). This parallel between human and ovine IVDs
explains why sheep have been widely used as a model to study this tissue and why the present
investigation focused on this large animal model. The human IVD is known to degenerate with age but
characterization of the IVD aging process in sheep has not been thoroughly documented in the
literature. Indeed, the vast majority of studies that have used sheep as a model provoked the
degeneration to investigate the IVD changes that occur during this process (Fusellier et al., 2020;
Reitmaier et al., 2017). Inducing degeneration is invasive and resource-intensive, while it also implies
that the IVD undergoes a number of injuries and overloading that cannot mimic progressive age-

103
dependent degeneration. Developing new treatment tracks in the field of regenerative medicine in
preclinical studies justifies the objective of finding the most suitable animal model for studying disc
degeneration (Fusellier et al., 2020). To investigate such treatments, degenerative discs of preclinical
animals are needed, but spontaneous lesions are preferable. For all of the studied parameters, significant
differences were found between the sheep in group 2, which were more than four years of age, and the
first group, which comprised skeletally immature sheep. Thus, in the light of this study, skeletally
mature sheep could be a good spontaneous age-related model for research studies of degenerative IVD
modalities and for studying biotherapies without the need to induce degeneration. Mild signs of IVD
degeneration were observed in young sheep that were two or three years old. In light of this result, it
may be interesting to study the pathophysiological processes occurring during early disc degeneration.
Another similarity with human IVDs that explains the relevance of this study using sheep as a
model is the loss of notochordal cells in the NP with age. The onset of IVD degeneration is caused by
different intrinsic and extrinsic factors which induce modifications in the cellular population,
particularly in the NP (Colombier et al., 2014). Among the variations which can be observed in the cell
density in the early stages of the degenerative process, the loss of notochordal cells is predominant.
Notochordal cells play a crucial role in the activity and the survival of nucleopulpocytes (Hunter et al.,
2003; Erwin et al., 2006). Human notochordal cells are lost with skeletal maturity (Butler, 1988; Trout et
al., 1982), which results in an imbalance in NP homeostasis, and is suspected to be a major event in early
NP degeneration. Interestingly, comparison between species has revealed a comparable change in
notochordal cells during growth of a 4-year-old mature sheep and chondrodystrophic dogs compared
to the human NP (Hunter et al., 2004). As chondrodystrophic dogs are known to undergo spontaneous
IVD degeneration (Bergknut et al., 2012), the authors assumed that a similar process could occur in
sheep. Here, and as evidenced by the histological data, the presence of cells exhibiting characteristics
similar to those of notochordal cells was noted in group 1, which had not reached complete skeletal
maturity. Interestingly, no such cells were observed in the IVD of the sheep of group 2, which were
more than four years of age. Thus, the authors hypothesized that these cells could be nests of
notochordal cells and that they may disappear around four years of age in sheep. Immunohistochemical
assessment using specific markers of notochordal cells (i.e., CD24, CK-8, CK-18, and GAL3) has
confirmed the loss of these cells in aging human IVD (Liu et al., 2018; Weiler et al., 2010). A study
focusing on the presence or absence of these cells in sheep of different ages would be of interest.
In the current study, ovine lumbar IVD degeneration was investigated by MDH measured on
X-rays, and MRI changes as well as the histological alterations were assessed using well-known
parameters to investigate IVD degeneration, namely reduction of the IVD height, the Pfirrmann grade
(Pfirrmann et al., 2001), and the Boos score (Boos et al., 2002). These parameters are commonly used in
IVD disease research studies. The results obtained revealed a substantial inter-rater variability for the
Pfirrmann grading, with a kappa value of 0.64. This value is slightly below the kappa values reported
in the literature (0.69 to 0.81) (Pfirrmann et al., 2001). This can be explained by a certain difficulty to
differentiate grade 2 and grade 3, with one observer being slightly more severe than the other (data not
shown). Nonetheless, although the interobserver disagreement was greater than the reference, a
difference between two grades was present in only 3% of all of the IVDs (2/66), which is close to the
reference value of 1.3% (Pfirrmann et al., 2001). Surprisingly, the modified Pfirrmann grading had a
poor intra-rater reliability for one observer (0.88). This value may be explained by the narrow difference
that can exist between two grades in this eight-point classification. The consequence of this narrow
difference, which makes the modified Pfirrmann grading even more subjective, is reflected by five
readings that varied between two grades for the majority of the IVDs (data not shown). On the other
hand, a difference of two grades between the five readings was only found in 3/66 of the IVDs. The use
of these three parameters combined with repetition of the collection of the data for the Pfirrmann
grading allowed to limit this variation to be limited and thus bolster the conclusions.
Modic type 2 changes were observed in sheep of group 2 but there were no Modic type 1 nor
type 3 changes. More, Pfirrmann grades > 4 were found in 7 IVDs from group 2, of which 6 were found
in the same sheep. It could be assumed that this particular sheep could have exhibited signs of LBP. Yet,

104
surprisingly, the clinical and orthopedic examinations did not reveal any abnormalities, and no history
of LBP was reported by the breeder. Numerous studies have assessed and discussed the relationship
between LBP and IVD degeneration based on MRI. Among the various imaging parameters, Modic type
1 changes and high Pfirrmann grades have been correlated to LBP (Rahyussalim et al., 2020). Even
though changes in the Pfirrmann grading were observed in group 2, Modic type I modifications, which
are known to strongly correlate with LBP, were not present. These features suggest that the degenerative
lesions are centered on the IVD and that they do not extend to the endplates or the vertebra, which can
limit the inflammation and the pain. Generally, Pfirrmann and Modic type 1 changes are present
concomitantly. The results of this study suggest the LBP may be more related to endplate inflammatory
modifications than strict IVD changes. In animal models, this relationship between IVD degeneration
changes and the severity of the clinical signs has not been investigated much, except in a rat model and
transgenic mouse models (Shi et al., 2018). Further studies are needed to establish a scoring that can
objectively describe LBP in sheep, and to assess whether there is a correlation between LBP and IVD
degeneration in this large animal model.
Histology is considered to be the gold standard for investigating IVD degeneration though the
ethical considerations and the 3R’s principles favour limiting the number of animals sacrificed for IVD
research. This parameter was hence included in this study. Early events of the IVD degeneration such
as cell modifications mainly occur in the NP thus the histological analysis focused on this tissue in this
study. A strong correlation between the imaging findings and the histological changes in the NP was
found, thus suggesting that imaging modalities could be an alternative to histological assessment of
IVD degeneration. However, the study was conducted on a small number of animals. More, in group 1,
the number of IVDs which have received a modified Boos score was smaller than the number of IVD
assessed by imaging. On the contrary, in group 2, all but one IVDs have been histologically assessed.
Yet the number of IVDs assessed by histology in group 1 still remained higher than in group 2 and all
the data yielded conclusive and statistically significant results. As the objective of this study focused on
IVD degeneration, which is unlikely to happen in animals of group 1, and in consideration of the 3R’s
principles, which aim to reduce the number of animals used in experimental research, it was decided
not to euthanized additional animals for this study.
In the present study, the T2 relaxation time, also called T2 mapping, correlated with both age
and histological data. In order to increase the sensitivity and the accuracy of the results, new imaging
methods have been developed to study IVD degeneration. In particular, quantitative methods such as
T2 mapping. This method involves determination of the T2 relaxation time, which has been shown to
correlate with the water content of the tissue (Marinelli et al., 2009). In humans, numerous studies have
demonstrated the correlation between T2 times and disc degeneration, especially in the early stages
(Marinelli et al., 2010; Menezes-Reis et al., 2016; Stelzeneder et al., 2012; Takashima et al., 2012; Yoon et
al., 2016). The T2 relaxation time decreases when the disc degenerates, reflecting reductions in the water
and the proteoglycan contents of the NP. Only one study to date has performed T2 relaxation time
measurements in sheep (Nisolle et al., 2016). Although the same statistical variations were described,
with a decrease in the NP T2 time with age, a degree of caution is warranted when comparing the results
of the present study with the results of the previously mentioned study. Indeed, our MRI parameters
are not transferable as our in this case the section thickness was half the thickness reported by Nisolle
et al. (3 versus 6 mm, respectively). Moreover, no unit of measure for the relaxation time was specified
in the latter study. Furthermore, in the present study, the T2 relaxation times correlated separately with
age and the Boos scores and these results suggest that the T2 relaxation time could be a reliable tool to
investigate IVD degeneration in sheep. More, this imaging modality might be a substitute for systematic
histological treatment of ovine IVDs. Such an approach could also be useful for longitudinal
investigations using MRI-based assessment in regenerative therapy studies. Further studies are needed
to develop the quantitative MRI modality to evaluate disc degeneration and to establish reference
mapping values in this species.

105
Conclusions

Sheep undergo spontaneous IVD degeneration, as confirmed by imaging modalities and

histological assessment. Experimentally-induced IVD degeneration is invasive and resource-intensive
(Osti and Vernon-Roberts, 1990). Additionally, a strong correlation between the histology and the
findings from the imaging modalities was found, thus suggesting that this could allow for a reduction
of the number of sheep sacrificed for IVD degeneration studies. In particular, the development of
quantitative MRI in order to evaluate progression of IVD degeneration appears to have ample merit.
Thus, further studies are warranted to evaluate the relevance of these new MRI sequences for
assessment of IVD degeneration.

Abbreviations
IVD Intervertebral disc
MRI Magnetic Resonance Imaging LBP Low Back Pain
AF Annulus Fibrosus
NP Nucleus Pulposus
T2-wsi T2-weighted signal intensity ECM Extracellular matrix

Acknowledgments:
The authors thank Dominique Rouleau, Ingrid Leborgne, Patrice Roy, Gwenola Touzot-Jourde, and
Jennifer Flynn for their help with management of the animals during the in-vivo part of the study, the
anaesthesia, and harvesting of the lumbar spines.
The authors thank Dr Chantal Thorin, PhD in Statistics, for the statistical analysis.
The authors also thank Sophie Domingues for editing the manuscript.

Funding:
This research was funded by the ANR Générique 2014 REMEDIV project, the Paris scientifiques region
Pays de la Loire 2015 BIO2 project, and the ANR JCJC 2016 STIMUDISC project.

Conflicts of Interest:
The authors declare no conflict of interest. The funders had no role in the design of the study; in the
collection, analyses, or interpretation of the data; in the writing of the manuscript; or in the decision to
publish the results.

Author Contributions:
MF, JC, CLV, AH, and JG conceived the study. MF, NB, and JC coordinated the study. SM, MF, CD, and
NB performed the X-ray radiography and MRI. NB and JBH performed the data analysis and the
statistical analysis of the imaging data. JL, JA, NB, CD, and JBH performed the histological staining and
the Boos scoring analysis. NB, JBH, and CD wrote the paper. MF, JC, JA, SM, JL, and AH helped with
the writing and reviewing of the manuscript. JG and CLV helped with the writing of the paper,
approved the final version, and with obtaining funding.

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111
Figures

Figure 1: sagittal X-ray, T2-weighted sagittal and T2 mapping MR images for the two ovine groups
(group 1 (< 48 months old) (a, c, e) and group 2 (> 48 months old) (b, d, f). On the radiographs, the
midpoint disc height (MDH) was measured between the middle of the two adjacent endplates (white
stars) in groups 1 (a) and 2 (b). One animal in group 2 exhibited NP calcification (black arrow). On the
MR images, Pfirrmann grade I was characterized by a homogeneous area, isointense to the
cerebrospinal fluid (Nucleus Pulposus) with a clear distinction between this structure and the Annulus
Fibrosus (c). Grade IV was characterized by an inhomogeneous area, hypointense to the cerebrospinal
fluid (Nucleus Pulposus) with a loss of distinction between this structure and the Annulus Fibrosus (d).
Hyperintensity of the endplates on T2-weighted images and T1-weighted images (data not shown) was
present in three sheep of group 2. These changes correspond to Modic type 2 changes (white head
arrows). The T2 relaxation time was measured on T2 mapping images. The NP had a high relaxation
time value (> 100 ms), indicated in red images on the colour maps (e), whereas this value was lower in
the AF and the degenerated NP (< 50 ms) and is shown in blue or green on the colour maps (f).

112
Figure 2: variations in the midpoint disc heights (MDHs) of ovine intervertebral discs between skeletally
immature (group 1) and skeletally mature (group 2) sheep. The MDH of each lumbar ovine
intervertebral space was measured between the midpoint of the caudal endplate of the cranial vertebra
and the midpoint of the cranial endplate of the caudal vertebra. The results are expressed as medians.
The correlation between the two groups for MDH values was assessed. (* p < 0.05, statistical difference
between two groups).

113
Figure 3: Assessment of ovine age-related IVD degeneration using MRI Pfirrmann and modified
Pfirrmann grading. (3A) T2-weighted sagittal and axial MR images and an axial slice of a lumbar ovine
intervertebral disc classified as Pfirrmann grade I from group 1 (< 48 months old) (a, c, e) and grade IV
from group 2 (> 48 months old) (b, d, f). When the MRI signal of the Nucleus Pulposus of the degenerated
disc was absent, its gross anatomy was inhomogeneous (f) in contrast to a healthy disc (e). The graphs
represent the variations in (3B) the Pfirrmann grading and (3C) the modified Pfirrmann grading
between skeletally immature (group 1) and skeletally mature (group 2) sheep. The results are expressed
as medians. Correlations between the two groups for the Pfirrmann and the modified Pfirrmann
gradings values were assessed. (* p < 0.05, statistical difference between two groups).

114
Figure 4: Variations (A) in the T2-weighted-signal intensity (T2-wsi) and (B) in the T2 relaxation time
values of ovine intervertebral discs between skeletally immature (group 1) and skeletally mature (group
2) sheep. The T2-wsi was measured on MR images of a midsagittal slice. (A) The T2-wsi represents the
ratio of the mean NP signal intensity divided by the mean spinal cord signal intensity measured at the
corresponding ovine IVD level. It was measured on MRI sagittal T2-weighted images. (B) The mean T2
relaxation time of the NP was measured by manually drawing a region-of-interest (ROI) that included
the NP of each lumbar ovine disc on the sagittal T2-weighted image and by copying this ROI onto the
corresponding T2 mapping image. The results are expressed as medians. Correlations between the two
groups for the T2-wsi and the T2 relaxation time values were assessed. (* p < 0.05, statistical difference
between two groups).

115
Figure 5: Histological assessment of age-related Nucleus Pulposus (NP) degeneration in sheep. (5A)
Histological analysis of lumbar ovine intervertebral discs by Hematoxylin Eosin Safran (a, c, e) and
Alcian blue (b, d, f) staining according to the different grades of degeneration: (a, b) healthy lumbar
ovine disc with a Boos score of 4 ; (c, d) mildly degenerated lumbar ovine disc with a Boos score of 9;
(e, f) severely degenerated lumbar ovine disc with a Boos score of 19. In healthy IVDs, the round nucleus
of the nucleopulpocytes was stained brown with Hematoxylin Eosin Safran (a) and pink with Alcian
blue (b) (spotted arrows). Mucous degeneration was characterized by irregular areas that stained pink
with Alcian blue. Some small areas can be noted in the mildly degenerated IVD (d) (stars), whereas they
are abundantly present in the severely degenerated disc (f). Granular changes (circles) also appeared
with this stain (d). The extent of the tissue changes was such that the granules were distributed sparsely
and tears were noted (dashed circles) in the most degenerated disc (f). Some ghost cells (arrowheads)
and cell proliferation forming clusters (arrows) can be noted in the mildly degenerated IVD with
Hematoxylin Eosin Safran staining (c). There were almost no cells in the histological samples of the fully
degenerated discs (e) (spotted arrows: nucleopulpocytes; stars: mucous degeneration; circles: granular
changes; dashed circles: tears; arrowheads: ghost cells; arrows: cell proliferation). (5B) The graph
represents the variations in the modified Boos scores between skeletally immature (group 1) and
skeletally mature (group 2) sheep. The results are expressed as medians. The correlation between the
two groups for the modified Boos scoring was assessed. (* p < 0.05, statistical difference between two
groups).

116
Figure 6: Modified Boos scoring of the Nucleus Pulposus (NP) according to the Pfirrmann grading. A
modified Boos scoring was applied to the NP of each lumbar ovine intervertebral disc and was
correlated to the Pfirrmann grade determined on the MR images. A positive correlation was found
between the Boos scores and the Pfirrmann grades (p < 0.0001, rs = 0.84).

117
118
 Partie III

Les voies d’abord du disque intervertébral

119
 Généralités : les abords du rachis lombaire
Le développement de thérapie régénératrice du DIV impose de réfléchir sur l’abord

du disque, c’est-à-dire sur le trajet anatomique et chirurgical que l’opérateur devra emprunter

pour accéder au DIV. L’abord du DIV et notamment du NP impose une réflexion cohérente

avec le projet scientifique, que ce soit pour injecter un agent thérapeutique dans le NP, ou

même pour accéder au DIV afin d’induire une dégénérescence sur un modèle in vivo. Il existe

de nombreuses manières d’aborder un DIV et plus globalement un rachis en fonction du

modèle utilisé, de sa morphologie et de sa tolérance à une procédure chirurgicale. Il faut

également tenir compte de l’étage abordé, et enfin des habitudes de l’opérateur. Seul l’abord

du rachis lombaire sera développé.

Une des approches historiquement utilisées pour accéder au DIV lombaire est

l’approche trans-péritonéale par laparotomie xypho-pubienne [269,270]. Ce long abord permet

l’accès de presque toute la moitié ventrale des DIV lombaires, offrant la possibilité d’effectuer

n’importe quelle procédure. Mais, outre la nécessité d’avoir des compétences chirurgicales

certaines, il s’agit d’un abord invasif et morbide, avec des risques de lésions d’organes ou

même des vaisseaux rétro-péritonéaux. Cette voie d’abord n’est pas appropriée dans un projet

de médecine régénératrice où l’accès au DIV doit être le moins invasif possible. Une autre

approche du DIV est l’approche rétro-péritonéale par lombotomie pour les DIV lombaires les

plus crâniaux offrant un accès à la partie latérale du DIV [271] ou par laparotomie sous

péritonéale pour les DIV les plus caudaux [272], ne pouvant pas être abordés par lombotomie

du fait de la présence de l’aile iliaque. Là aussi ces abords permettent d’effectuer toutes les

procédures. Bien que ces 2 voies d’abord soient mieux tolérées que la laparotomie trans-

péritonéale, car elles sont extra-péritonéales, elles requièrent également de solides

compétences chirurgicales et restent trop invasives dans le contexte de la médecine

régénératrice du DIV.

Plus récemment, des abords mini-invasifs des DIV ont été décrits [273]. L’abord est

extra-péritonéal et l’incision cutanée est centimétrique. À l’aide de la fluoroscopie et de

matériels endoscopiques dédiés (caméra, instruments endoscopiques, canules…) ces abords

sont dorsaux ou dorso-latéraux. Les gestes réalisables sont variés : ponction, annulotomie,

120
nucléotomie… Bien que ces procédures soient très peu invasives, elles nécessitent là encore

une véritable expertise, en plus d’utiliser du matériel très spécifique et coûteux. Ces abords

mini-invasifs sont en revanche beaucoup utilisés en clinique, notamment pour effectuer des

herniectomies ou même des arthrodèses vertébrales, comme nous l’avons évoqué dans le

chapitre dédié aux traitements chirurgicaux de la lombalgie discogénique.

Dans le contexte de la médecine régénératrice du DIV basée sur l’injection intra-

discale d’agents thérapeutiques, les abords percutanés seront les abords à privilégier. En effet,

il s’agit d’abords non invasifs où une simple ponction sera effectuée, permettant ainsi

d’épargner les structures anatomiques adjacentes, d’éviter d’induire les lésions associées et

de favoriser une récupération rapide dans les suites. Différentes approches percutanées du

DIV ont été décrites.

Les voies d’abord percutanées du DIV

A. La voie d’abord trans-annulaire (VTA)

La voie d’abord trans-annulaire consiste en une ponction percutanée du DIV par voie

dorso-latérale [143]. Le sujet est installé en décubitus ventral ou latéral. À l’aide d’une aiguille

sous contrôle fluoroscopique, une ponction para-rachidienne est effectuée dans le plan du NP

visé en traversant l’AF (Fig. 24).

Considérée comme le « gold standard », du fait de sa simplicité de réalisation et du

caractère très peu invasif, la VTA présente cependant un inconvénient majeur : le passage au

travers de l’AF risque d’induire une dégénérescence du DIV, comme cela a été montré sur

différents modèles animaux [236,274,275]. Cette accélération de la dégénérescence a

également été montrée chez l’Homme ayant eu une discographie [145]. La taille de l’aiguille

semble être le facteur influençant directement la survenue d’une dégénérescence secondaire.

Elliott et al. ont conclu que si le rapport entre le diamètre de l’aiguille et la hauteur discale

était inférieur à 25%, alors la ponction de l’AF n’induisait pas de dégénérescence discale. Si le

rapport était compris entre 25 et 40%, il apparaissait des modifications tissulaires minimes au

121
sein du DIV. Enfin si le rapport était supérieur à 40%, la dégénérescence discale secondaire

était systématique [237].

Fig. 24 Voie d’abord trans-annulaire (VTA) a) illustration de la voie trans-annulaire sur un DIV lombaire
humain. b) vues fluoroscopiques per-opératoires d’une voie trans-annulaire réalisée sur une brebis
(ONIRIS®, Service Transversal d’Imagerie Médicale)

Au regard de ces résultats, il convient donc d’utiliser une aiguille la plus fine possible.

Néanmoins il s’agit là d’une limite technique car pour pouvoir effectuer convenablement une

VTA, l’aiguille doit être suffisamment rigide et donc volumineuse, sinon l’orientation de

l’aiguille vers le DIV et le passage de l’AF n’est pas possible. De plus, si l’on souhaite éviter

toute dégénérescence secondaire, il est nécessaire d’utiliser un modèle animal qui a une

hauteur discale suffisamment grande. Dans ce contexte, il est nécessaire d’envisager d’autres

moyens d’accéder au NP sans devoir léser l’AF.

B. La voie trans-pédiculaire (VTP)

Afin d’éviter de traverser l’AF, une alternative a été décrite : la voie trans-pédiculaire.

Il s’agit d’injecter dans le NP en passant par la vertèbre caudale au DIV en traversant

successivement le pédicule, le corps vertébral et le plateau cartilagineux (Fig. 25). C’est l’équipe

italienne de Vadalà qui a décrit cette voie d’abord chez le modèle ovin et chez l’Homme [276].

Le sujet est installé en décubitus ventral ou latéral, le geste s’effectue à l’aide d’un

trocart sous contrôle radioscopique. Le point d’entrée dans la vertèbre caudale se situe chez

122
l’Homme à l’intersection de la droite tangente au bord caudal du processus transverse avec la

droite verticale passant à 3mm en dehors du bord latéral du massif articulaire crânial.

Fig. 25 Voie d’abord trans-pédiculaire (VTP) a) reconstruction en 3 dimensions de la voie trans-pédiculaire

sur vertèbre de brebis (Vadalà et al. [276]) b) images fluoroscopiques per-opératoires d’une voie trans-
pédiculaire réalisée sur une brebis (ONIRIS®, Service Transversal d’Imagerie Médicale)

Chez le modèle ovin, le point d’entrée se situe à l’intersection entre la droite passant

au centre du processus transverse avec la droite verticale tangente au massif articulaire

crânial. Le trocart est ensuite orienté crânialement, ventralement et en dedans. Selon Vadalà,

l’orientation du trocart est de 49,6° ±6,2 dans le plan frontal et 47,5° ±5,1 dans le plan sagittal,

sans distinction entre l’Homme et la brebis [276].

Fig. 26 Illustrations des repérages per-opératoires pour effectuer le point d’entrée de la VTP selon Vadalà
et al. chez la brebis et chez l’Homme (d’après Vadalà et al. [276]). Chez la brebis, le point d’entrée se situe
à l’intersection entre la droite passant au centre du processus transverse avec la droite verticale tangente
au massif articulaire crânial. Chez l’Homme, le point se situe à l’intersection de la droite tangente au bord
caudal du processus transverse avec la droite verticale passant à 3mm en dehors du bord latéral du massif
articulaire crânial.

Face à la VTA, la VTP présente de nombreux avantages. Il s’agit en effet d’une voie

d’abord percutanée qui ne passe pas au travers de l’AF. De plus il s’agit d’une voie autorisant

des gestes sur le NP qui ne peuvent pas être réalisés par la VTA sans entrainer de lésions

importantes de l’AF comme la réalisation d’une nucléotomie. Ce geste peut être proposé à des

123
fins thérapeutique, par exemple pour remplacer le NP par du biomatériau, ou alors comme

propose Vadalà, pour induire une dégénérescence sans lésion de l’AF [238,246].

La VTP présente cependant des limites. Tout d’abord, elle impose un certain savoir-

faire. Elle ne peut pas être réalisée sur le DIV lombaire le plus caudal, du fait de la présence

des ailes iliaques, De plus, de nouvelles lésions secondaires à la VTP ont également été

décrites, comme des faux trajets dans le canal vertébral, des fractures du plateau cartilagineux

ou encore des fragments d’os intra-discaux [277].

Ainsi, il est nécessaire de déterminer la voie d’abord la plus pertinente avant

d’extrapoler les résultats. Cette voie d’abord doit être faisable chez l’Homme et chez le modèle

animal utilisé. De plus, elle doit s’inscrire complètement dans le contexte de la médecine

régénératrice : elle doit être non invasive, elle doit préserver le DIV sans induire de

dégénérescence secondaire. Enfin elle doit permettre d’injecter des agents thérapeutiques.

124
 C. Objectifs de la thèse

Dans cette deuxième partie, l’objectif est de comparer la faisabilité de la VTA et de

la VTP sur la brebis et l’Homme, puis d’étudier les conséquences de ces 2 voies d’abord à

moyen terme sur le DIV de brebis.

Pour cela, une étude scanographique a été effectuée pour comparer les 2 voies

d’abord. Il s’agit alors de préciser l’orientation du l’aiguille ou du trocart pour permettre

l’accès au NP et de limiter au maximum les lésions associées. Il s’agit d’une étape importante

pour comparer ces voies d’abord entre l’Homme et la brebis, tout en validant leur faisabilité.

Ensuite, une étude longitudinale sur brebis jeune a permis d’apprécier les

conséquences sur le DIV de la VTA et de la VTP. Ce travail avait pour but de permettre à terme

de sélectionner la voie d’abord la plus pertinente dans le contexte de la médecine régénératrice

du DIV.

Ces travaux ont fait l’objet de résultats rapportés dans 2 articles :

§ Intervertebral disc surgical approach in Human, ovine and canine models: detailing trans-
pedicular and trans-annular approach for treatment of degenerative intervertebral disc
disease (soumis à Scientific Reports, IF : 4,379)
N. Gavira*, C. Decante*, N. Bouhsina, D. Rouleau, B. Miannay, N. Bronsard, A. David, R. Jossier, O. Gauthier,
A. Hamel, J. Guicheux, J. Clouetᵠ and M. Fusellierᵠ (* Co-first authors, ᵠ Co-last authors)

§ Collateral effects of targeting the nucleus pulposus via a transpedicular or transannular

surgical route: a combined X-ray, MRI, and histological long-term descriptive study in sheep
(2021 European Spine Journal, IF : 2,634)
C. Decante, J. Clouet, A. Hamel, L. Le Fournier, O. Gauthier, D. Rouleau, J. Lesoeur, B. Halgand, C. Le
Visage, J. Guicheux, M. Fusellier

125
 Travail expérimental : mesures morphométriques
appliquées à l’abord du DIV chez l’Homme et la brebis, étude
scanographique comparative

A. Méthodologie

1) Description de l’étude et de la population

Ce travail a été effectué sur les mêmes images scanographiques que l’étude

morphométrique réalisée sur vertèbres ovines et humaines détaillée dans la Partie II.

Concernant le groupe humain, seuls les 27 scanners réalisés en décubitus ventral ont été

utilisés (sous-groupe PPH). Il s’agit en effet d’effectuer des mesures morphométriques sur un

sujet positionné tel qu’il le serait lors de la réalisation d’une VTA ou d’une VTP. Pour rappel,

le groupe ovin était constitué de 3 brebis, une avait 6 vertèbres lombaires, les 2 autres avaient

7 vertèbres lombaires. Le sous-groupe PPH était constitué de 27 humains. Sur chaque sujet,

les mesures ont été effectuées sur les DIV thoraco-lombaires (T13-L1 chez la brebis, T12-L1

chez l’Homme), ainsi que sur tous les DIV lombaires, excepté le DIV le plus caudal pour les

mesures concernant la VTP.

2) Mesures morphométriques appliquées à l’abord du DIV

Des mesures scanographiques ont été effectuées sur les vertèbres ainsi que dans les

espaces entre les corps vertébraux correspondant aux disques intervertébraux. 2 groupes de

mesures ont été réalisées. Ces mesures ont été réalisées par un seul opérateur, à l’aide du

logiciel Horos® (Horos Software® 3 .0).

11 mesures étaient en rapport avec la voie trans-pédiculaire (Fig. 27). Dans les 3 plans,

une mesure angulaire (a,b,c) permettait de définir un axe théorique de la VTP appelé

« axeVTP » obtenue par reconstruction scanographique. Ensuite, des mesures entre le point

d’entrée cutané de « axeVTP » et la ligne des épineuses ont été réalisés (d,e) ainsi que des

mesures sur « axeVTP » entre le centre du NP, le point d’entrée osseux et le point d’entrée

cutané (f,g) La longueur h était la somme de f et g et correspondait à la longueur minimale

théorique du trocart. La position du point d’entrée osseux a été évaluée par rapport à la racine

du processus transverse en calculant le rapport j correspondant au rapport entre la distance

126
« point d’entrée osseux – épaule de la transverse » sur la distance « épaule de la transverse –

aisselle de la transverse ». La position du point d’entrée osseux a été aussi évaluée par rapport

au massif articulaire crânial en mesurant la distance entre la verticale passant par le point

d’entrée osseux et le bord latéral du massif articulaire crânial.

Fig. 27 Coupes scanographiques d’un rachis humain. Illustration des 11 mesures faites sur les scanners
humains et ovins. Le point rouge correspond au point d’entrée osseux théorique. La description de chaque
mesure est reportée dans le Tableau XI

7 mesures étaient en rapport avec la voie trans-annulaire. Elles ont été effectuées sur

une coupe scanographique passant strictement dans le plan axial du DIV (Fig. 28). 2 axes

étaient définis sur cette coupe. « axeVTAmin » correspondait à l’axe théorique de la VTA

passant au plus près du canal vertébral sans le traverser. « axeVTAmax » correspondait à l’axe

théorique de la VTA passant au plus près de l’espace rétro-péritonéal sans le traverser.

« axeVTAmoy » était la bissectrice de l’angle formé par « axeVTAmin » et « axeVTAmax ». Les

angles entre la ligne médiane passant par le processus épineux et ces 3 axes ont été mesurés

(l,m,a(VTAmoy)). Les distances entre la ligne des épineuses et les points d’entrée cutané de

« axeVTAmin » et de « axeVTAmax » ont été mesurées (n,o). Enfin, les longueurs théoriques

de l’aiguille entre le centre du NP et les points d’entrée cutanées de « axeVTAmin » et de

« axeVTAmax » ont été mesurées (p,q).

Toutes les mesures sont répertoriées dans le Tableau XI.

127
Fig. 28 Coupe scanographique transversale d’un rachis humain passant par le plan d’un DIV lombaire.
Illustration des 7 mesures faites sur les scanners humains et ovins. La description de chaque mesure est
reportée dans le Tableau XI

Tableau XI : description des 18 mesures scanographiques concernant la VTP et la VTA. La ligne médiane
correspond à la ligne passant par l’axe du processus épineux. « AxeVTP » correspond à l’axe théorique du
trocart de la VTP. « axeVTAmin » correspond à l’axe théorique de la VTA passant au plus près du canal
vertébral sans le traverser. « axeVTAmax » correspond à l’axe théorique de la VTA passant au plus près
de l’espace rétro-péritonéal sans le traverser. « axeVTAmoy » est la bissectrice de l’angle formé à
l’intersection de « axeVTAmin » et « axeVTAmax » (distances en mm, angles en degrés)

Mesure Élément mesuré Axe de la coupe scanographique

Concernant la VTP
« axeVTP »
a Angle entre « axeVTP » et plan du DIV Sagittal
b Angle entre « axeVTP » et ligne médiane Transversal
c Angle entre « axeVTP » et plan du DIV Frontal
Point d’entrée cutanée - longueur du trocart
d Distance entre point d’entrée cutané et plan du DIV Sagittal
e Distance entre point d’entrée cutané et la ligne des épineuses Transversal
f Distance entre point d’entrée cutané – point d’entrée osseux sur « axeVTP » Transversal passant par « axeVTP »
g Distance entre point d’entrée osseux – centre du NP Transversal passant par « axeVTP »
h Longueur théorique minimale du trocart (f+g) Transversal passant par « axeVTP »
i Plus petite distance entre « axeVTP » et canal vertébral Transversal passant par « axeVTP »
Point d’entrée osseux
Rapport entre la distance point d’entrée osseux – épaule de la transverse avec la
j Frontal
distance épaule - aisselle de la transverse
Distance entre verticale passant par le point d’entrée osseux et le bord latéral du
k Transversal
massif articulaire crânial
Concernant la VTA
« axeVTAmin », « axeVTAmax », « axeVTAmoy »
l Angle entre « axeVTAmin » et ligne médiane Transversal
m Angle entre « axeVTAmax » et ligne médiane Transversal
a(VTAmoy) Angle entre « axeVTAmoy » et ligne médiane Transversal
Point d’entrée cutanée – longueur de l’aiguille
n Distance entre point d’entrée de « axeVTAmin » et ligne médiane Transversal
o Distance entre point d’entrée de « axeVTAmax » et ligne médiane Transversal
p Longueur théorique minimale de l’aiguille sur « axeVTAmin » Transversal
q Longueur théorique minimale de l’aiguille sur « axe VTAmax » Transversal

128
 3) Variabilité intra-individuelle et analyses statistiques
La variabilité intra-individuelle dans la prise des mesures scanographiques a été

évaluée après 15 séries de mesures sur un DIV, en utilisant un modèle linéaire à effets mixtes.

Une variabilité inférieure à 15% était définie comme satisfaisante.

Concernant les analyses statistiques, le test non paramétrique de Wilcoxon Mann-

Whitney a été utilisé pour comparer les angles a, b et l’angle a(VTAmoy) entre la brebis et

l’Homme. Les analyses statistiques ont été effectuées avec le logiciel R.

B. Résultats

Au total, les mesures appliquées à la VTP ont été réalisées sur 17 DIV de brebis et

108 DIV humains. Les mesures appliquées sur la VTA ont été réalisées sur 20 DIV de brebis et

sur 135 DIV humains (les DIV lombaires les plus caudaux ont été exclus pour les mesures

appliquées à la VTP).

1) Variabilité intra-individuelle
L’analyse de la variabilité intra-individuelle a montré une grande reproductibilité des

mesures scanographiques (< 15%), hormis pour la distance k qui correspond la distance entre

la verticale passant par le point d’entrée osseux et le bord latéral du massif articulaire crânial

(Tableau XII).

Tableau XII : modèle linéaire à effets mixtes : analyse de la variabilité intra-opérateur. Il existait une
grande reproductibilité des mesures scanographiques, sauf pour la distance k

Mesures a b c d e f g h i j k
Valeurs
6,3 1,5 3,2 6,0 1,7 1,9 4,5 - 9,3 11,1 16,2
(%)

Mesures l m a(VTAmoy) n o p q
Valeurs
4,3 1,5 4,4 4,2 2,0 1,2 2,0
(%)

129
 2) Mesures appliquées à la VTP
Les mesures sont répertoriées dans le Tableau XIII.

Tableau XIII : mesures scanographiques appliquées à la VTP sur DIV ovins et humains. Les valeurs
correspondent aux moyennes ± déviation standard

L’axe de la VTP

Dans le plan sagittal, l’angle « a » était significativement différent entre le groupe ovin et le

sous-groupe humain PPH (respectivement 47,4° ±2,6 et 36,3° ±5,8 ; p<0,0001). Dans le plan

transversal, il n’y avait pas de différence significative entre l’angle b du groupe ovin et l’angle

b du groupe humain (respectivement 46,1°±1,9 et 44,8°±2,5). Ainsi, la convergence de la VTP

était la même, qu’elle soit réalisée chez la brebis ou chez l’Homme. En revanche, la VTP était

plus ascendant chez la brebis que chez l’Homme.

Fig. 29 Comparaison de l’angle « a » et de l’angle « b » chez la brebis et l’Homme. L’angle « a » était

significativement différent entre le groupe ovin et le sous-groupe humain PPH (respectivement 47,4 ±2,6
et 36,3 ±5,8 ; p<0,0001) (o : groupe ovin, PPH : sous-groupe humain en position décubitus ventral)

Point d’entrée cutané – longueur théorique du trocart

Chez la brebis, le point d’entrée cutané était situé en moyenne à 53,2mm sous le plan du DIV

abordé et à 49,3mm en dehors de la ligne des épineuses (respectivement « d » et « e »). Chez

130
l’Homme, le point d’entrée cutané était situé en moyenne à 65,7mm sous le plan du DIV abordé

et à 79mm en dehors de la ligne des épineuses (respectivement « d » et « e »). La longueur

minimale théorique du trocart « h » était de 71,2mm chez la brebis et de 123mm chez

l’Homme. Ces données permettent de guider l’opérateur lors de la réalisation d’une VTP. En

revanche, elles sont à interpréter avec précaution car il s’agit de distances qui dépendent

directement de la morphologie du modèle, notamment sa taille, son poids et sa couche

graisseuse sous cutanée.

Point d’entrée osseux

Chez la brebis, le point d’entrée osseux se situait à l’intersection de la droite verticale passant

à 4,2mm en dehors du bord latéral du massif articulaire crânial, avec la droite horizontale

passant au centre de la racine du processus transverse (rapport j : 0,4 ±0,1). Chez l’Homme,

le point d’entrée osseux se situait à l’intersection de la droite verticale passant à 2,3mm en

dehors du bord latéral du massif articulaire crânial, avec la droite horizontale étant juste au-

dessus de l’aisselle du processus transverse (rapport j : 0,8 ±0,2).

3) Mesures appliquées à la VTA

Les mesures sont répertoriées dans le Erreur ! Source du renvoi introuvable..

Tableau XIV : mesures scanographiques appliquées à la VTA sur DIV ovins et humains. Les valeurs
correspondent aux moyennes ± déviation standard

Axes de la VTA

L’angle a(VTAmoy) était significativement différent entre le groupe ovin et le sous-groupe

humain PPH (respectivement 63,5° ±14,6 et 49,2° ±12,7 ; p<0,001) (Fig. 30). Ainsi, l’axe moyen

de la VTA était plus convergent chez la brebis que chez l’Homme.

131
Fig. 30 Comparaison de l’angle « a(VTAmoy) » chez la brebis et l’Homme. L’angle a(VTAmoy) » était
significativement différent entre le groupe ovin et le sous-groupe humain PPH (respectivement 63,5° ±14,6
et 49,2° ±12,7 ; p<0,001). (o : groupe ovin, PPH : sous-groupe humain en position décubitus ventral)

Point d’entrée cutané – longueur théorique de l’aiguille

Le point d’entrée cutanée était en moyenne entre 55,7mm et 91,6mm en dehors de la ligne des

épineuses chez la brebis, et entre 69,7mm et 114,1mm en dehors de la ligne des épineuses

chez l’Homme, dans le plan du DIV abordé (respectivement « n » et « o »). La longueur

minimale de l’aiguille était de 83,6mm chez la brebis et de 132,7mm chez l’Homme (« q »). Ces

données permettent là aussi de guider l’opérateur lors de la réalisation d’une VTA. En

revanche, elles sont également à interpréter avec précaution car il s’agit de distances qui

dépendent directement de la morphologie du modèle, notamment sa taille, son poids et sa

couche graisseuse sous cutanée.

Par cette étude scanographique, nous avons montré que la VTP et la VTA sont

réalisables chez le modèle ovin et chez l’Homme et nous avons défini des repères pour la

bonne réalisation de ces 2 voies d’abord. Il est maintenant bien admis que la VTA et la VTP

induisent des lésions secondaires sur le DIV [141,232,270,271,273]. Ainsi, il est nécessaire

d’étudier les conséquences de ces 2 voies d’abord par une étude longitudinale sur modèle

brebis. Ce travail permettra alors de choisir la voie d’abord la plus appropriée dans le contexte

de la médecine régénératrice du DIV pour accéder au NP afin d’y injecter un agent

thérapeutique.

132
 Travail expérimental : Étude des conséquences de la voie
trans-pédiculaire (TPA) et de la voie trans-annulaire (TAA) sur la
brebis : suivi longitudinal sur 7 mois

Collateral effects of targeting the nucleus pulposus via a transpedicular or

transannular surgical route: a combined X-ray, MRI, and histological long-term
descriptive study in sheep
(2021 European Spine Journal, IF : 2,634)
C. Decante, J. Clouet, A. Hamel, L. Le Fournier, O. Gauthier, D. Rouleau, J. Lesoeur, B. Halgand, C. Le
Visage, J. Guicheux, M. Fusellier

Résumé :

Objectif : Dans le contexte de la médecine régénératrice basée sur l’injections de cellules régénératrices,

de facteurs biologiques ou de biomatériaux au sein du nucleus pulposus (NP) ; 2 voies d’abord ont été

décrites : l’approche trans-annulaire (VTA) et l’approche trans-pédiculaire (VTP). L’objectif de notre

travail était de comparer les conséquences à long terme de la VTA et de la VTP sur le disque intervertébral

(DIV) grâce à un suivi longitudinal sur modèle ovin.

Matériels et méthodes : Ces 2 voies d’abord (VTA et VTP) ont été réalisées sur 12 DIV de 3 brebis. Six

DIV n’ont pas été traités et ont été utilisés comme DIV contrôle. La faisabilité, le trajet ainsi que l’intégrité

du DIV et de ses rapports ont été étudiés en IRM (intensité du signal T2 : T2wsi), en micro-scanner et en

histologie (score de Boos). Les brebis ont été suivies pendant 1, 3 et 7 mois.

Résultats : Les 2 voies d’abord VTA et VTP permettait d’accéder au NP. Elles induisaient une

dégénérescence du NP, mise en évidence en IRM par la diminution du T2wsi et en histologie par

l’augmentation du score de Boos. À 7 mois, il persistait un défaut dans le plateau cartilagineux des DIV

abordés, une hernie intra-spongieuse était observée (comparable à une Hernie de Schmorl) ainsi que la

présence de fragments osseux au sein du NP.

Conclusions : La VTP induisait plus de lésions secondaires que la VTA. Les lésions induites par la VTP

sont à considérer dans le choix de la voie d’abord du NP dans le contexte de la médecine régénératrice

du DIV.

Mots-clés : dégénérescence du disque intervertébral, voie d’abord trans-pédiculaire, voie d’abord trans-

annulaire, médecine régénératrice.

133
 Collateral effects of targeting the nucleus pulposus via a transpedicular or
transannular surgical route: a combined X-ray, MRI, and histological long-term
descriptive study in sheep
C. Decante* , J. Clouet*
1,2
, A. Hamel1,2, L. Le Fournier6, O. Gauthier1,7, D. Rouleau1,8, J. Lesoeur1,3, B.
1,3,4,5

Halgand1,3,9, C. Le Visage1, J. Guicheux1,3,10!, M. Fusellier1,8

* Co-first author
! Corresponding author

1 Inserm, UMR 1229, RMeS, Regenerative Medicine and Skeleton, Université de Nantes, ONIRIS,
Nantes, F-44042, France
2 CHU Nantes, PHU5 HME Chirurgie Infantile, Nantes, F-44093, France
3 Université de Nantes, UFR Odontologie, Nantes, F-44042, France
4 Université de Nantes, UFR Sciences Biologiques et Pharmaceutiques, Nantes, F-44035, France
5 CHU Nantes, Pharmacie Centrale, PHU11, Nantes, F-44093, France
6 CHU Angers, Department of Neurosurgery, Angers, F-49033, France.
7 Department of Surgery, CRIP, Oniris College of Veterinary Medicine, Food Science and
Engineering, Nantes F-44307, France
8 Department of Diagnostic Imaging, CRIP, Oniris College of Veterinary Medicine, Food Science
and Engineering, Nantes F-44307, France
9 CHU Nantes, Nantes, F-44093, France
10 CHU Nantes, PHU4 OTONN, Nantes, F-44093, France

Corresponding author:
Prof. Jerome Guicheux, Ph.D.
INSERM UMRS 1229 - RMeS, School of Dental Surgery
1-Place Alexis Ricordeau, 44042, Nantes Cedex I
France
Phone: +33240412916, Fax: +33240083712
Email: [email protected]

134
Abstract

Purpose In the context of regenerative medicine strategies, based in particular on the injection of
regenerative cells, biological factors, or biomaterials into the nucleus pulposus (NP), two main routes
are used: the transpedicular approach (TPA) and the transannular approach (TAA). The purpose of our
study was to compare the long-term consequences of the TPA and the TAA on intervertebral disc (IVD)
health through a longitudinal follow-up in an ovine model.

Methods The TPA and the TAA were performed on 12 IVDs from 3 sheep. Six discs were left untreated
and used as controls. The route and injection feasibility, as well as the IVD environment integrity, were
assessed by MRI (T2-weighted signal intensity), micro-CT scan, and histological analyses (Boos’
scoring). The sheep were assessed at 1, 3, and 7 months.

Results Both the TPA and the TAA allowed access to the NP. They both induced NP degeneration, as
evidenced by a decrease in the T2wsi and an increase in the Boos’ scores. The TPA led to persistent end-
plate defects and herniation of NP tissue (Schmorl’s node-like) after 7 months as well as the presence of
osseous fragments in the NP.

Conclusions The TPA induced more severe lesions in IVDs and vertebrae compared to the TAA. The
lesions induced by the TPA are reason to consider whether or not this route is optimal for studying IVD
regenerative medicine approaches.

Keywords Intervertebral disc degeneration · Transpedicular approach · Transannular approach ·

Regenerative medicine

135
Introduction

Low back pain (LBP) is an extremely frequent symptom and in 40% of cases it is associated with
intervertebral disc (IVD) degenerative disease (DDD) [1–3]. Current therapies for LBP mainly manage
the pain experienced by patients using pharmacological treatments that include NSAIDs and analgesics.
Treatment of the most advanced cases of LBP typically involves surgery (e.g. spine fusion and total disc
replacement). Despite significant technical improvements, these surgical procedures remain invasive.
Spine fusion and total disc replacement have been reported to have similar rates of complications, while
a lower rate of adjacent segment degeneration has been observed with arthroplasty [4].
The improvement of our knowledge regarding IVD degeneration has recently fostered the
development of cell- based regenerative medicine as an etiopathogenic option for treatment of DDD [5,
6]. Adding mesenchymal stem cells (MSC) that exhibit a broad range of biological properties (anti-
inflammatory, anti-catabolic, and pro-regenerative) to the NP is of particular interest. An increasing
body of preclinical and clinical evidence has been generated in support of the notion that intradiscal
injection of MSC may be a clinically translatable option for managing DDD [7–10].
To demonstrate the preclinical relevance of such cell- based therapies, several DDD animal
models have been described, involving mice, rabbits, pigs, and sheep [11]. However, no particular
animal model stands out among the various models that have been devised to date. The ovine model
exhibits spontaneous DDD with a physiopathology that is quite similar to that of human DDD [11, 12].
Moreover, there are a number of anatomical and biomechanical similarities between human and sheep
IVDs and vertebrae [13, 14].
A key aspect that affects the efficacy of IVD cell-based therapies is in regard to the choice of the
surgical approach to safely inject the cell-based therapeutic product into the NP while also limiting the
risk of exacerbating the DDD. The current “gold standard” for targeting the NP is the percutaneous
dorsolateral surgical route involving needle puncture of the annulus fibrosus (AF), referred to as the
transannular approach (TAA) [15, 16]. However, it is now well recognized that the TAA can lead to in-
depth alteration of the mechanical properties of the AF. Such AF impairments are known to lead to an
increased risk of NP herniation and accelerated IVD degeneration [17–21], as has also been described in
human IVDs following AF puncture-mediated discography [22]. In addition, it should also be stressed
that puncture of the AF, with a critically sized diameter needle, is a widely used animal model of
surgically induced DDD [17, 23, 24]. In the context of IVD regenerative medicine, it is, therefore,
essential to consider alternative approaches than the TAA. Vadalà et al. have described a promising
transpedicular approach (TPA) [25] that consists of reaching the NP through the caudal vertebra by
successively crossing the pedicle, the vertebral body, and the endplate, thereby protecting the AF from
lesions. Despite encouraging results [26] related to the surgical feasibility of this route, using an ex vivo
ovine model, we recently reported that the TPA can induce the migration of intradiscal osseous
fragments or endplate fracture [27], as evidenced by micro-computed tomography and histological
analyses. However, this preliminary ex vivo study did not take into account the complex in vivo
mechanical environment of IVDs and it did not address the long-term in vivo effects after the TPA. To
address both of these clinically relevant issues, the aim of the present study was to compare the long-
term consequences of the TPA and the TAA on IVDs and vertebral endplate integrity through a
longitudinal follow-up in an ovine model.

Materials and Methods

Ethical Aspects, animals, and treatment conditions

All of the animal handling and surgical procedures were approved by the French Ministry of
Agriculture and by the ethics committee of the Pays de la Loire Region (Ethics approval number
APAFIS: 8401); and they were performed in the accredited Centre of Research and Pre-clinical

136
Investigations (CRIP) at the ONIRIS-National Veterinary School of Nantes. Three young healthy sheep
(Vendée breed, 30–40 kg, 8–10 months, GAEC HEAS farm, Ligné F-44850) were used. Six lumbar IVDs
(T13-L1, L1-L2, L2-L3, L3-L4, L4-L5, and L5-L6) per animal were used for the experiments (n = 18). For
each sheep, four IVDs were randomly treated (Table 1): two IVDs were accessed by the transpedicular
approach (TPA) and two were accessed by the transannular approach (TAA). Two IVDs were not
treated and hence used as controls (CTL). The housing conditions were the same for the three sheep. To
evaluate the feasibility of injection into the NP, iodine contrast agent (iCA) was randomly injected for
each sheep in one IVD treated by TPA and one IVD treated by TAA. The iCA was ioxaglic acid
(Hexabrix® 320 mg/ml, Guerbet, France) diluted to 10% in a physiological saline solute. After the
surgery, the sheep were followed for 1, 3, or 7 months before being euthanized to remove the lumbar
spine. One additional sheep was used as a day 0 reference for the histological analyses.

Surgical procedure
The surgical procedure was performed under general anaesthesia (induction: diazepam 0.2
mg/kg IV, ketamine 2 to 5 mg/kg IV, propofol 1 to 3 mg/kg, then placed under gaseous anaesthesia NO:
2 L/min, O2: 2 L/min, isoflurane: 2%). The sheep were placed in a ventral decubitus position. The entire
surgical procedure was performed under fluoroscopic guidance (OEC9800plus®, General Electric GE
Healthcare, Little Chalfont, UK). For the TPA condition, the percutaneous technique was adapted from
the surgical approach described by Vadalà et al. [25] and Le Fournier et al. [27]. It was carried out using
a 2-mm Jamshidi® (ADHESIA MEDICAL, Flaxlanden, France) bone marrow biopsy needle employing
a hollow trocar. When the trocar was under the endplate, a threaded 1.5-mm Kirschner wire was used
to slowly cross the endplate to the NP through the cannula with a drill under video-fluoroscopic
guidance. The iCA was injected with a spinal needle (Mila Spinal Needle® 20G, 20 cm, Mila
International Inc, Florence, KY, USA). Unlike in the Vadalà et al. protocol, no endplate repair was
performed. For the TAA condition, a transannular approach was performed percutaneously, as in the
classic posterolateral procedure, with a 22G needle (Spinocan® 22G, 88 mm, B Braun, Berlin, Germany).
The iCA was injected using this spinal needle. For both of the conditions, the amount of iCA injected
was 100 µL.

MRI procedure follow-up

MRI of the entire lumbar spine was performed under anaesthesia as described for the surgical
procedure. It was carried out before the surgery on each sheep to exclude spontaneously degenerated
IVD or major anatomical abnormalities such as spinal malformations. The images were used as a
reference for the in-vivo follow-up. MRI was performed immediately after the surgery, then once a
month until the sheep were euthanized, in order to assess the change in the NP signal. The last MRI was
performed immediately before the euthanasia. A 1.5T MRI scanner (Magnetom Essenza®, Siemens
Medical Solutions, Erlangen, Germany) with a standard spine coil was used to obtain T2-weighted
images in all three planes (TR: 3000 ms; TE: 86 ms) with the following parameters: matrix: 512 × 358;
field of view 350 × 350 mm; and slice thickness: 3 mm with no interslice gap.

Computed tomography scan (CT scan) procedure

The three sheep were euthanized at 1, 3, or 7 months (sedation: ketamine 5 mg/kg, then
euthanasia: intravenous injection of a sodium pentobarbital overdose). The entire lumbar spine was
harvested and isolated as an “endplate- IVD-vertebra” segment by cutting the vertebrae transversely
with a band saw. The caudal vertebral body was sectioned below its transverse process, just above the
caudal endplate, in order to preserve the canal of the TPA. To observe the effects of the TPA on the
vertebrae, the endplates crossed by the drill and the IVDs were analysed by CT scanning (Inveon®,
Siemens Medical Solutions, Erlangen, Germany) with the following parameters: low magnification,
time of exposure 550 ms, 80 kV, 500 µA, and slice thickness 59 µm.

137
Image analysis
The images were analysed with Osirix® software (Osirix Foundation, Geneva, Switzerland).
For the MRI images, the T2-weighted signal intensity (T2wsi) was determined on MRI images of a
midsagittal slice. The T2wsi was determined by the ratio of the NP weighted mean signal intensity
divided by the spinal cord signal, and it was compared with the preoperative images. The CT scan
images were also analysed with Osirix® software. The volume of the osseous fragments in the IVDs
was calculated after defining the region of interest and it was expressed in mm3.

Histological analyses
The “endplate-IVD-vertebra” segments were obtained by sawing the vertebral bodies
immediately above the cranial endplate and just beneath the caudal endplate. The endplates were then
sanded to reduce the bone thickness (Metaserv® 2000, 800, Buehler, Switzerland). Segments were fixed
in 4% paraformaldehyde, decalcified in TBD-2® decalcifier solution for twelve days (Thermo Fisher
Scientific, Waltham, MA, USA), frozen and then first sectioned transversely, taking care to preserve the
caudal endplate. Secondly, the IVD with the caudal endplate was sectioned sagittaly to observe the
route of the TPA and the endplate disruption. Sections of 10 µm were generated with a cryostat
(CryoStar NX70®, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). The sections were stained with
haematoxylin eosin (HE) and 0.1% Alcian blue (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) as previously
described [28]. Masson’s trichrome staining was carried out on the sagittal segments to assess the effects
of the TPA on the endplates. The histological transversely sections were also analysed using a
modification of Boos’ scoring [29]. Briefly, this Boos scoring was based on the analysis of four criteria
regarding the integrity of the Nucleus pulposus: a decrease in cell density, granular changes, tear and
cleft formation (except for the cleft induced by needle puncture of the endplate), and mucus
degeneration. Some of the parameters were ranked from 0 to 4 (granular and mucus degeneration) and
others were ranked from 0 to 5 (a decrease in cell density, and tear and cleft formation) depending on
the intensity of the parameters tested (0, lowest; 4 or 5, highest). The stained sections were observed
with a slide scanner and all of the sections were analysed with NDP view® software (Hamamatsu,
Japan). The day 0 Boos’ scores were obtained from an additional sheep who was euthanized
immediately after the surgery. Three independent investigators who had expertise with reading
histological slides performed a blind evaluation of the histological samples. The reported results are the
means of the scores from each investigator.

Results

Route and injection feasibility

Six TPA, as well as six TAA, were carried out in this study (two TPA and two TAA on each
sheep). In terms of the accuracy of the procedure, all (100%) of the TPA and the TAA were successful
based on the fluoroscopic guidance and the postoperative MRI data (Fig. 1a, b). No pedicle fracture or
encroachment into the spinal canal was observed. Injection into the NP by the TPA was feasible, as
confirmed by the fluoroscopic guidance. One case of iCA backflow was observed (Fig. 1c), localized in
the canal of the TPA and inside the vertebra. No iCA backflow was observed after the TAA.

Analysis of IVD integrity

CT scan analysis
The IVDs and lumbar vertebrae were analysed by CT scanning at 1, 3, and 7 months in order to study
bone lesions induced by the TPA and the TAA. No false route in the spinal canal was observed with the

138
TPA. No pedicular fracture sequelae were observed. The endplates had been crossed without inducing
secondary endplate fractures.
At 7 months, the path in the vertebrae induced by the TPA was still visible. Osteocondensation around
the canal and the initiation of bone filling were observed but the bone healing was incomplete.
However, no bone filling was observed at the level of the endplate defect. Osseous fragments were
found in all of the IVDs treated by the TPA (Fig. 2). These fragments were larger on the IVDs at the 7-
month follow-up (mean 2.32 mm3), compared to fragments at the 3 and the 1-month follow-up (mean
0.59 mm3 and 0.27 mm3, respectively). No osseous fragments were found in the control IVDs or in the
IVDs treated by the TAA.

Histological analysis
To determine whether the TPA can result in endplate lesions, we performed histological analyses at 1,
2, and 7 months. The TPA inevitably causes endplate lesions. At 7 months, the endplate lesions induced
by the TPA were not cicatrized and the endplate defects were filled by tissue that was similar to the NP
in appearance (Fig. 3). Indeed, NP extravasation through the caudal vertebral body was observed. It
was comparable to an intrabody disc herniation analogous to a Schmorl node (Fig. 3). The diameter of
these disc herniations was, on average, 1.1 mm. As expected, no endplate lesions were found in the
control or in the TAA conditions.

Degenerative effect of the TPA and the TAA

MRI T2-weighted signal intensity (T2wsi)

To evaluate the impact of the TPA and the TAA on the NP degenerative status, MRI was performed
and the T2wsi was measured once a month until euthanasia. For the control IVDs, the T2wsi images
revealed a spontaneous decrease at 7 months (33.5% and 19.7%) (Fig. 4). Although a statistical analysis
was not possible due to the limited number of animals, for the IVDs treated by the TPA, the decrease in
the T2wsi tended to be more pronounced than that observed in the control IVDs, or in the IVDs treated
by the TAA (47.5% and 33.3% for the TPA; 34.1% and 26.3% for the TAA). Regardless of the reach, no
obvious effect of iCa injection was observed on IVDs at 7 months.

Boos’ scoring
To further determine whether the different surgical routes can induce IVD degeneration, Boos’ scoring
was performed on all the IVDs (Fig. 5). Compared to the control condition, the IVDs treated by the TPA
and the TAA exhibited a progressive increase in Boos’ scores from day 0 (6, 7 and 6, respectively) to 7
months (7, 13 and 11, respectively). Although statistical analysis was not possible due to the limited
number of samples per group, this increase appeared to be more pronounced at each time point after
the TPA compared to the TAA. In the same way as above, no effect of iCA injection was observed on
IVDs at 7 months.

Discussion

Understanding of the IVD degenerative process has allowed innovative DDD therapies to be
developed, notably cellbased therapies based on the injection of cells or biological factors into the NP.
Access to the NP needs to be minimally invasive to preclude adverse impacts on the IVD, and the TPA
could be an alternative approach to avoid compromising the integrity of the AF. Vadalà et al. were the
first to describe the TPA, demonstrating its feasibility in an ovine model [25], with very low periand
post-operative complications in an in vivo study [26]. To further assess whether the TPA may be a
valuable route to target the NP in the general context of IVD regenerative medicine, we performed an

139
in vivo study with a long-term longitudinal follow-up that involved comparison of the TPA with the
TAA.
To develop these innovative therapies, and before transposing the NP approach to humans,
animal models of DDD that closely mimic the spontaneous IVD degeneration observed in humans are
required. First, the physical dimensions should allow safe surgical targeting of the NP, as is the case in
humans. Secondly, the pathogenesis and the biomechanical properties should be similar to those of
human IVDs. Thirdly, the model should be readily available, and the animal agistment should be as
straightforward and inexpensive as possible. Unfortunately, none of the available models generated to
date exhibit all of the required features. As already mentioned, the ovine model has biomechanical
similarities, and it exhibits spontaneous DDD that is quite similar to that of human DDD at the cellular
level [12, 14]. Moreover, the size of sheep allows surgical techniques to be used that can be transposed
to humans. Comparable models are available, and the porcine model has already been used in
numerous studies in the context of IVD regenerative medicine [30, 31]. The anatomical features of
lumbar spine and IVDs are similar between pigs and humans [32], especially in terms of the size of the
pedicles, which is a very relevant aspect for studying the TPA. Moreover, the biomechanical similarities
are now well-accepted [33]. However, in pigs, notochordal cells persist in the NP, even after skeletal
maturity has been reached [34], which contrasts with the situation in humans and sheep. In light of the
pivotal role of the loss of notochordal cells in IVD degeneration [35], it seems reasonable to speculate
that sheep, unlike pig, is a relevant preclinical model for assessing cell-based IVD regenerative
medicines.
As previously described [25, 27], and confirmed in our study, the TPA allows access to the NP.
Unlike a recent study performed by our group [27], no evidence of pedicle fracture or encroachment
into the spinal canal was noted in our study. Among the three discographies performed by the TPA,
one case of leakage of the iCA through the transpedicular canal in the vertebra was observed. This
leakage and backflow may be explained by the high swelling pressure observed in healthy IVDs,
particularly in the ovine model [36]. Further experimentation is needed to confirm this hypothesis.
Moreover, degenerated and dehydrated IVD may have a lower swelling pressure [37], although the NP
of a degenerated IVD is more fibrous [35] and injection into the NP can also be difficult. Leakage of
intradiscal injected substitute, particularly when injecting a cell therapy product, is a major concern, as
it has been shown in rabbits that these leaks can lead to osteophyte formation [38].
In addition, the TPA can give rise to venous embolisms, as previously described [27], due to the
high swelling pressure of the NP. Other bone lesions after the TPA not found in our study but
previously described, such as a pedicle fracture or a false passage, can induce biomechanical disorders
and spondylarthritis [26, 27]. These can lead to medullar lesion or neurological impairment.
Contrarily to Le Fournier et al. [27], no endplate fracture occurred, probably because a drill was
used for the procedure to access the NP through the endplate. However, osseous fragments were
observed in all of the NP treated by the TPA, as also described in Le Fournier et al. [27]. Intuitively,
these fragments may have been carried directly into the IVD by the TPA. Moreover, these fragments
could be the result of intradiscal calcification secondary to an inflammatory process, especially as these
osseous fragments appeared larger at 7 months compared to at 1 or at 3 months. Indeed, the TPA may
induce intradiscal osteogenesis when blood and microscopic bone fragments from the vertebral body
remain in the IVD. This would, theoretically, increase the risk of vertebral fusion, thereby amounting to
a failure of the IVD regenerative medicine approach. A previous in vivo longitudinal follow-up study
of the TPA in an ovine model did not confirm this hypothesis [26]. Nevertheless, the nucleotomies that
were performed in this study could have aspirated bone fragments, thereby leading to an
underestimation of the risk of intradiscal osteogenesis.
The histological and CT analyses did not show healing of the endplates at 7 months after the
TPA, thus confirming data recently obtained by Vadalà et al. [39]. Interestingly, endplate defects were
filled by tissue that was similar to the NP in appearance. The high swelling pressure of the NP could
explain its extravasation through the endplate, which could then prevent it from healing [36], according
to the biological inhibitory effects of IVD cells on osteoblasts, as recently described [40]. The critical

140
endplate defect induced by the TPA is a major limitation of this approach because endplates are
considered to be pivotal structures for maintaining IVD homeostasis, especially for providing nutritive
support to IVDs and for elimination of waste products. Lesions or sclerosis of the endplate decrease the
diffusionmediated exchange between endplates and IVDs [41] and they accelerate IVD degeneration
[42]. Moreover, endplate defects have been shown to initiate the cascade of events that leads to DDD
[43]. A height intradiscal pressure is need for fluid and metabolite exchange and the decrease in IVD
pressure reduced theses exchanges, as it is already demonstrated in particular in post-traumatic disc
degeneration [44]. Vadalà et al. repaired the endplate after the TPA by sealing the edge of the tunnel
using a press-fit porous polyurethane cylinder [25, 39]. However, filling the TPA tunnel does not solve
the problem of reflux during the procedure. Furthermore, even when the scaffolds were colonized by
cells, the histological analyses by Vadalà et al. indicated that the endplates were not fully repaired [39].
Our study showed that there was a deleterious effect of the TPA on the IVD, with an increase
in the Boos’ scores. Based on the T2wsi longitudinal follow-up, the NP tended to undergo a degree of
degeneration. Indeed, the decrease in the T2wsi was greater when the IVDs were treated by the TPA as
compared to the control. This decrease reflects NP dehydration, which represents a first step in the
initiation of the IVD degenerative process. Although our observations could not be proven by statistical
analysis due to the limited number of animals, they are in agreement with those of Cinotti et al. [45],
who described a porcine model of DDD induced by endplate lesion that was carried out as in our study
using a 1.5-mm Kirschner wire. Our results are also in agreement with those of Vadalà et al., who
described a stepwise ovine model of IVD degeneration with intact AF induced by an endplate lesion
[39]. Although MRI is nowadays among the best in vivo investigative methods to detect DDD, T2-
weighted images are not the most sensitive sequence. The use of the MR relaxation time (T2 and T2*
mapping) could be more sensitive for detection of early IVD degeneration [46]. Thus, T2 mapping
should be used later on to follow induced IVD lesions.
The results of our longitudinal follow-up (lack of healing of the endplate, intradiscal osseous
fragments, T2wsi decrease, Boos’ score increase) indicate that care must be taken when choosing an
approach to the NP in the context of regenerative medicine. Due to the risk of osseous fragments in the
NP, we consider it preferable to associate the TPA with a nucleotomy in the context of cell therapy
involving injection of exogenous cells and growth factors. Lesions of the AF by large-sized material
necessary for nucleotomy by the TAA could be avoided with this approach. However, nucleotomy is
not desirable in the context of endogenous repair, as the injection of biological factors must stimulate
local endogenous cells and it could be deleterious to IVD resident regenerative cells [47]. In this context,
the TAA appears to be more appropriate. Currently, the TPA would be too intrusive and it would carry
the risk of early DDD induction and loss of the injected factors by leakage. Although the TAA is
controversial [17, 22], a study has shown that the risk of DDD induction after injection through the AF
is not constant, as it depends on the ratio between the gauge of the needle and the height of the IVD
[23]. According to Elliott et al., when the gauge of the needle is less than 40% of the height of the IVD,
AF puncture with this needle does not induce accelerated DDD [23]. Carragee et al. [22], used 22 and 25
gauge needles, corresponding to less than 10% of the height of the IVD, thus suggesting that, in this
case, the AF puncture was not responsible for the DDD. While there is a discrepancy in needle size
which may have contributed to increased degeneration in TPA with the larger needle size [23], the
principal aim of this work was to compare two currently used routes to access the NP. We have decided
to use the NP approaches as they have been described in detail and they are used in the literature [22,
23, 25, 27]: the TAA generally entails use of a needle of approximately 0.7 mm in ovine IVDs, and the
TPA involves use of a needle of approximately between 1.5 and 2 mm. In the context of the development
of IVD regenerative medicine strategies, it is widely acknowledged that the structural integrity of the
AF needs to be preserved. Use of a large-size needle (1.5 mm), in addition to making the TAA surgically
more difficult due to the limited height of the IVD, would most likely have resulted in damage to the
annulus fibrosus, especially since on a number of occasions we have noticed that lumbar IVDs of sheep
(when less than 1 year old) can be very thin (between 2 and 3.5 mm), as indicated by our X-ray, MRI,
and histological data (data not shown). In this context, using a 1.5 mm needle to perform the TAA would

141
most likely have led to IVD degeneration. Regarding the needle used for TPA, it remains technically
unfeasible to perform the TPA with a 0.7 mm needle, since such a needle with a sufficient length and
mechanical resistance to penetrate through the skin and endplate to the NP is not commercially
available.
As the optimal route for targeting the NP in regenerative medicine has yet to be established,
other strategies based on homing of endogenous progenitor cells to the diseased tissue warrant further
consideration. A number of targeted systemic treatments could be specifically designed to mobilize and
attract such endogenous progenitors to the degenerated IVD and contribute to its repair [48, 49].
Presently, it is thought that discographies by the TAA are likely to induce acceleration of DDD
or an increase in disc lesions [22, 50]. DDD is probably secondary to the iodine contrast agent (iCA)
injection. Kim et al. recently showed that iCA is toxic to NP cells [51]. This toxicity is dependent,
however, on the dose and on the nature of the agent [51, 52]. Even though these in vitro results have to
be verified under in vivo conditions, the DDD was thus probably induced by the injection of iCA rather
than the AF puncture. Therefore, we strongly advocate avoiding the use of iCA when testing innovative
cell therapies. In this in vivo study no effect of iCA injection was clearly observed on IVDs. However,
the concentration of iodinated contrast agent used may not be sufficient to induce an IVD degeneration
and the sample size was reduced. It would then be necessary to consider the effect of iCa on IVD
through a longitudinal follow-up taking into account the dose injected, as in the study of Kim et al. [51].

Conclusion
To access the NP without inducing AF lesions, the TPA could be a suitable alternative to the
conventional TAA dorsolateral NP access in the context of IVD regenerative medicine based on the
injection of cells, biological factors or biomaterial into the NP. The TPA is, however, not without
consequences, and the lack of healing of endplates at 7 months is a major limitation that may lead to
accelerated DDD. Therefore, given to different trends observed in our work, we favour use of the TAA,
which appears to be less invasive and does not induce any deleterious degenerative processes. This
suggestion should be reassessed under specific conditions (a study of the efficacy of regenerative
treatments). The TPA could nevertheless be indicated when injection into the IVD is preceded by a
nucleotomy, and when the therapeutic objective is to replace the NP while keeping the AF intact. Thus,
this study should be seen as a preliminary work that highlights the urgent need for additional studies
in this regard, notably to more precisely assess the tissue consequences of the surgical routes used to
target theNP.

Acknowledgements This study was supported by grants from the Société Française de Neurochirurgie, the Société
Française de Chirurgie du Rachis, the Agence de la Biomédecine, the Institut National de la Santé et de la Recherche
Médicale (INSERM), the Région des Pays de la Loire, ANR générique 2014 (REMEDIV project), the Fondation pour
la Recherche Médicale FRM Bioingénierie (DBS20131128442), the Région des Pays de la Loire Research Program
"Longévité Mobilité Autonomie" (LMA). The authors gratefully acknowledge the technical assistance that they
received from the personnel of the CRIP (i.e. Patrice Roy, Christian Raphael, Stéphane Madec, Ingrid Leborgne,
and Gildas Vaillant) and the SC3M platform (Service Commun de Microscopie électronique, Microcaractérisation
et Morpho-histologie-imagerie fonctionnelle of the INSERM UMS016-SFR François Bonamy), as well as Sophie
Domingues (Longdom publishing) for editing the manuscript.

Conflict of interest All of the authors declare that they have no potential conflicts of interests.

Human and animal rights All applicable international, national, and/ or institutional guidelines for the care and
use of animals were adhered to. All procedures involving animals performed in this study were in accordance with
the ‘‘3Rs’’ rule (Replacement, Reduction, and Refinement), the ethics standards of the institution and the practice
at which the study was performed.

142
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Publisher’s Note Springer Nature remains neutral with regard to jurisdictional claims in published maps and
institutional affiliations.

145
Figures

Table1 Summary of the surgical procedures performed on the sheep IVDs. The mention « iCa» indicates
iodine contrast agent was injected on IVD (CTL: no treatment, TAA: transannular approach, TPA:
transpedicular approach)

Fig. 1 Representative images are shown preoperative (a), postopera- tive (b) sagittal MRI and
peroperative dorsoventral fluoroscopy (c) during TPA of the L2–L3 disc level. The path of the TPA (red
arrow on (b)) through the endplate to the NP confirmed the TPA feasibility in ovine model. Peroperative
dorsoventral fluoroscopy (c) showed one case of iCA reflux through the path of the TPA (blue arrow).
T2wsi was subsequently determined as described in Materials and Methods (green circles). (NP: Nucleus
pulposus, iCA: iodine contrast agent, TPA: transpedicular approach). Scale bar: 25 mm.

146
Fig.2 CT scan reconstructions of IVDs and caudal vertebrae. Rep- resentative pictures of 3D analysis
reconstructions. The volumes of the osseous fragments in the IVDs were determined as described in the
Materials and Methods section. No osseous ectopic fragments were observed in the IVDs treated by the
TAA or in the control IVDs. The volumes of the osseous ectopic fragments were determined (the values
are indicated on the images). (CTL: control IVDs, TPA: trans- pedicular approach, TAA: transannular
approach). Scale bar: 5 mm

Fig.3 Representative section are shown IVD, endplates and verte- brae integrity after control, TPA and
TAA surgical approaches. Mas- son’s trichrome staining was performed as described in Materials and
Methods. Endplate lesions were observed after TPA conditions with an absence of healing after seven
months. This endplate defects were filled by NP-like tissue similar to a Schmorl node (Red Arrow). No
endplate lesion was observed for CTL and TAA conditions. (IVD: intervertebral disc, EP: endplate, V:
vertebra). Scale bar: 1 mm

147
Fig.4 Representative graph is shown the decrease in T2wsi after surgery. Lumbar IVDs of sheep were
treated according to either the CTL, TAA and TPA conditions and MRI analysis of T2wsi of sheep
lumbar were performed at the indicated times as described in Materials and Methods. For IVDs treated
by TPA, the decrease in T2wsi tended to be more pronounced than those observed in control IVDs or
IVDs treated by TAA. (IVD: intervertebral disc, CTL: control, TPA: transpedicular approach, TAA:
transannular approach)

Fig.5 A representative graph is shown of the IVD degeneration impact of the TPA and the TAA on the
Boos’ scores and the NP cell density. Lumbar IVDs of sheep were treated according to either the CTL,
TAA, or TPA conditions as described in the Materials and Methods section. The Boos’ scores were
determined for the different conditions after the indicated times as described in the Materials and
Methods section. (IVD: intervertebral disc, CTL: control, TPA: trans- pedicular approach, TAA:
transannular approach)

148
 Partie IV

Discussion et perspectives

149
 Discussion autour de notre travail

La lombalgie discogénique est un problème de santé publique fréquent, aux enjeux

socio-professionnels et économiques majeurs car elle est responsable d’arrêts de travail

prolongés, de reconversion professionnelles, d’invalidités et donc de dépenses de santé

importantes. Le traitement de la lombalgie discogénique s’attache à atténuer les douleurs,

pour soulager le patient et permettre sa réhabilitation. Les traitements sont symptomatiques,

mais aucun ne restaure la lésion discale responsable de la lombalgie. La physiopathologie de

la dégénérescence discale est actuellement mieux connue : il s’agit d’une cascade

d’évènements cellulaires et moléculaires complexes au sein du disque, aboutissant à la rupture

d’un équilibre métabolique fragile. Cette dégénérescence conduit à des processus

inflammatoires locaux et à la perte des propriétés mécaniques du DIV. Au regard de ces

connaissances nouvelles, des traitements étiopathogéniques sont envisagés par la

communauté scientifique pour tenter de freiner la dégénérescence discale et rétablir son

homéostasie : c’est la médecine régénératrice du DIV. Mais avant de pouvoir appliquer ces

thérapies innovantes chez l’Homme, des travaux pré-cliniques sur des modèles animaux de

substitution doivent prouver leur efficacité, mais aussi leur innocuité. Le choix du modèle

animal est donc une étape cruciale. Outre les considérations éthiques incontournables et les

critères plus globaux (simplicité d’élevage, robustesse, coût…) le modèle doit présenter de

fortes similitudes morphologiques, biologiques et biochimiques avec l’Homme.

Le modèle ovin : caractérisation in vivo de la dégénérescence discale spontanée par

l’imagerie

Parmi les modèles animaux à disposition, le modèle brebis est particulièrement

intéressant. En effet, les DIV ovins présentent comme chez l’Homme une dégénérescence

spontanée. À l’échelle cellulaire, la disparition progressive des cellules notochordales, grands

acteurs de l’homéostasie discale, témoigne de la forte ressemblance du processus de la

dégénérescence chez l’Homme. Cependant, bien que le modèle ovin soit un modèle largement

150
utilisé dans le cadre de travaux portant sur la dégénérescence discale, peu d’études ont été

consacrées à l’observation et la caractérisation de sa dégénérescence naturelle spontanée.

Ce travail de thèse a permis de confirmer l’existence d’un processus dégénératif

spontané du DIV mais a aussi permis de montrer que la modification du signal IRM du DIV

était observable chez la brebis ayant acquis sa maturité squelettique au cours d’une période

de 6 mois. Le temps de relaxation T2, qui était corrélé négativement au score de Boos modifié

dans notre travail, offre un moyen fiable d’évaluer objectivement l’altération du DIV in vivo,

même sur une courte période de 6 mois, durée compatible avec des travaux scientifiques.

La mesure du temps de relaxation T2 est particulièrement pertinente car elle offre

une mesure quantitative objective du signal du NP, là où le score de PFIRRMANN atteint ses

limites. En effet, bien que fiable, le score de PFIRRMANN est peu discriminant et ne statue la

dégénérescence discale que sur 5 grades, les modifications subtiles du DIV ne sont parfois pas

suffisamment prononcées pour faire changer le DIV de grade de dégénérescence.

La corrélation entre le score de PFIRRMANN et le temps de relaxation T2 du NP a fait

l’objet de plusieurs publications [122,127,278,279]. Cette méthode quantitative permet de

mettre en évidence de fines modifications du signal du NP, même sur des individus jeunes,

comme l’ont montré Menezes-Reis et al. à partir d’une population humaine asymptomatique

âgée de 20 à 40 ans [280]. Le temps de relaxation T2 est également corrélé aux altérations

histologiques du NP, notamment à l’état d’hydratation du NP et sa teneur en protéoglycanes

[281], confirmant que l’analyse du temps de relaxation T2 est un moyen fiable et non invasif

pour apprécier la dégénérescence du DIV longitudinalement. En revanche, peu de travaux ont

été effectués chez des animaux présentant une dégénérescence spontanée du DIV, les études

précitées étant toutes des études menées sur des populations humaines. À notre

connaissance, seuls Nisolle et al. ont étudié chez la brebis la dégénérescence spontanée du

DIV en utilisant également la mesure du temps de relaxation T2 du NP [198]. Bien que nos

résultats soient en accord, les conditions de réalisation des imageries IRM étaient différentes :

il est donc difficile de comparer nos travaux. Il faut en effet être particulièrement attentif aux

conditions d’acquisition IRM, car il s’agit d’une méthode de mesure très sensible. Le moment

dans la journée doit être pris en compte, le signal du DIV n’étant pas strictement le même au

cours du nycthémère [124]. Sharma et al. soulignent d’ailleurs qu’il est préférable de comparer

151
le temps de relaxation T2 des DIV chez un même individu en présélectionnant des DIV sains,

plutôt que de les comparer avec un groupe contrôle externe, les variabilités inter-individuelles

étant importantes, l’appréciation de l’état de dégénérescence risquerait d’être biaisée [282].

Le modèle ovin : similitudes anatomiques et biomécaniques

La taille du modèle brebis est également un atout majeur, l’anatomie du rachis se

rapprochant de l’anatomie humaine. Il existe de fortes similitudes morphologiques entre le

rachis lombaire ovin et humain comme nous l’avons montré dans ce travail de thèse. D’autres

travaux se sont intéressés à l’anatomie du rachis lombaire ovin dans ce contexte et nos

descriptions sont en accord avec la littérature [251,255,261,266]. Le modèle brebis est donc

particulièrement pertinent dans le cadre de travaux pré-cliniques chirurgicaux, comme la mise

au point de dispositifs implantables rachidiens ou le développement d’ancillaires

chirurgicaux. Il est néanmoins important de souligner que des variations existent entre le

modèle ovin et l’Homme comme la taille et la forme des pédicules. Ces variations doivent être

connues et prises en compte avant tout travail pré-clinique chez la brebis.

Le modèle ovin est un modèle quadrupède, comme tous les mammifères. L’Homme

étant le seul bipède permanent, un modèle biomécanique identique à l’Homme n’existe pas et

l’influence de la bipédie sera toujours source de discussions. Mais, comme abordé dans la 2e

partie de cet écrit traitant des critères de choix du modèle animal pour la médecine

régénératrice du DIV, il est maintenant admis que les effets de la bipédie sont contrebalancés

par la tonicité musculaire et les tensions ligamentaires présentes pour stabiliser le rachis

lombaire du quadrupède [262,263]. Finalement, la résistance du DIV aux contraintes est assez

similaire entre l’Homme et le modèle ovin [261].

L’abord du Nucleus Pulposus : la voie trans-pédiculaire

Dans le contexte du développement d’une thérapie régénératrice du DIV basée sur

l’injection intra-discale d’un substitut régénérateur, il est nécessaire de réfléchir sur la

méthode d’injection la plus adaptée. Devoir fragiliser l’anneau fibreux en le traversant invite

à revoir l’abord du DIV. La voie trans-pédiculaire est une méthode séduisante puisqu’elle

préserve l’anneau fibreux. Elle offre la possibilité de réaliser une nucléotomie, qui serait non

152
réalisable techniquement par la voie trans-annulaire sans entrainer une large lésion de

l’anneau fibreux. Néanmoins la voie trans-pédiculaire présente ses propres inconvénients.

Outre les lésions secondaires décrites, elle impose un certain savoir-faire chirurgical et reste

difficile à réaliser, même sous contrôle fluoroscopique. Notre travail de thèse effectué à partir

de données scanographiques confirme cependant que l’abord trans-pédiculaire est possible

chez la brebis et chez l’Homme. Ainsi pour garantir la sécurité du geste sans risquer d’induire

de lésions secondaires, la réalisation d’une voie trans-pédiculaire sous navigation

scanographique parait indiquée au vu de nos observations. De plus le scanner permettrait de

se passer de l’injection intra-discale de produit de contraste pour s’assurer de la bonne

position du trocart, les produits iodés semblant être toxiques pour les cellules du DIV [144].

Afin de réaliser au mieux une voie trans-pédiculaire chez la brebis et chez l’Homme,

notre travail a pu préciser les axes que l’on doit donner au trocart pour garantir sa bonne

position. Nos résultats vont dans le sens des travaux de Vadalà [276], et apportent des

précisions. Nous recommandons un point d’entrée osseux du trocart et des axes dans la

vertèbre qui diffèrent entre la brebis et l’Homme. De plus, le rapport entre les nerfs spinaux

et le trajet du trocart est à prendre en compte. Nous avons pour cela effectué un travail de

dissection complémentaire. Quatre VTA ont été réalisées sur un rachis de brebis ex vivo à

l’aide d’une broche motorisée sous fluoroscopie. Nous avons tenu compte du point d’entrée

et des axes obtenus dans notre travail scanographique. Secondairement, le rachis a été congelé

puis coupé à la scie à ruban dans le plan passant par l’axe des broches. Chez l’Homme, la

procédure a été effectuée sur une table de dissection virtuelle (Anatomage® Table 7.0, Milan),

en utilisant les axes obtenus dans notre travail. La distance entre les nerfs spinaux et le trajet

de la voie trans-pédiculaire a ensuite été mesurée. Chez la brebis comme chez l’Homme, les

nerfs spinaux adjacents restaient à distance du trajet de la voie trans-pédiculaire

(respectivement 14,1mm et 19mm).

153
Fig. 31 Coupes sagittales d’un rachis lombaire d’une brebis (a) et d’un humain (b) dans le plan passant
par l’axe des voies trans-pédiculaires. Les voies trans-pédiculaires ont été effectuées à partir des données
obtenues dans notre travail scanographique. Chez la brebis, 4 voies trans-pédiculaires ont été réalisées
sur un rachis ex vivo à l’aide d’une broche motorisée sous fluoroscopie. Chez l’Homme, la procédure a été
effectuée sur une table de dissection virtuelle (Anatomage® Table 7.0, Milan). La distance entre les nerfs
spinaux et le trajet de la voie trans-pédiculaire a ensuite été calculée. Chez la brebis comme chez l’Homme,
les nerfs spinaux adjacents restaient à distance du trajet de la voie trans-pédiculaire (respectivement
14,1mm et 19mm). barre d’échelle : 20mm.

Notre étude longitudinale a montré que la voie trans-pédiculaire n’était pas sans

conséquence sur le DIV et des lésions secondaires ont été observées à 7 mois indiquant qu’il

faut être prudent lors du choix de la voie d’abord. En effet, bien que notre travail ait été

effectué sur un nombre restreint de brebis, la voie trans-pédiculaire entrainait une diminution

du signal T2 du NP et une augmentation du score de BOOS. L’absence d’analyse statistique ne

permettait pas de conclure formellement, néanmoins ces résultats sont en défaveur de

l’utilisation de la voie trans-pédiculaire dans un contexte où le geste doit être le moins invasif

possible sur le DIV. La mesure du temps de relaxation T2 dans notre étude longitudinale aurait

été plus pertinente que l’appréciation du signal T2 par le calcul du T2wsi. Malheureusement

au moment de cette étude, nous n’étions pas équipés des logiciels adéquats.

154
 L’absence de cicatrisation du plateau cartilagineux traversé est un aléa majeur. En effet

le plateau cartilagineux est une interface d’échange entre le DIV et la vertèbre et sa non-

cicatrisation entraine irrémédiablement la perturbation des échanges, ayant des conséquences

directes sur l’homéostasie discale. L’utilisation de broches motorisées dans notre étude était

possiblement responsable de lésions thermiques du plateau cartilagineux, mais permettait de

ne pas entrainer de fractures du plateau cartilagineux. Léser le plateau cartilagineux est une

méthode d’induction de dégénérescence décrite chez le porc et chez la brebis [238,241]. De

plus l’extravasation de NP dans la vertèbre caudale diminue la pression intra-discale ayant

certainement des conséquences mécaniques sur le DIV [283]. Enfin, l’exposition du NP à la

circulation sanguine dans le corps vertébral entraine vraisemblablement une réaction auto-

immune et l’induction d’une réponse inflammatoire locale pouvant entrainer une

dégénérescence du DIV [284]. Vadalà et al. ont décrit chez la brebis une méthode de réparation

du plateau cartilagineux qui permet de lutter contre l’extravasation du NP. Néanmoins, même

lorsque le plateau cartilagineux était réparé, il observait une altération secondaire des DIV

abordés par voie trans-pédiculaire à 6 mois [238].

L’abord du Nucleus Pulposus : la voie trans-annulaire

Concernant la voie trans-annulaire (VTA), nous avons montré qu’elle était réalisable

chez la brebis et chez l’Homme. Cependant, d’après nos travaux effectués à partir d’images

tomodensitométriques, l’axe moyen de la VTA était plus convergent chez la brebis que chez

l’Homme (respectivement 63,5° ±14,6 et 49,2° ±12,7 ; p<0,001). Bien que les intervalles

théoriques d’angles de visée pour réaliser la VTA soient importants chez la brebis comme chez

l’Homme (respectivement [49,7 ;77,3] et [38,8 ;58,2]), il est important de souligner que l’axe

pour réaliser la VTA n'est pas la même entre la brebis et l’Homme. Cette différence doit être

connue de l’opérateur afin d’éviter de léser les structures adjacentes (moelle spinale, nerfs

spinaux, structures rétro-péritonéales). À notre connaissance, aucune lésion nerveuse

secondaire n’a été rapportée dans la littérature. Néanmoins, lors de la réalisation de la

ponction, il est important de considérer le nerf spinal homolatéral comme un rapport intime,

la ponction de l’AF étant faite dans la partie ventrale du triangle de Kambin dont la limite

crâniale est le nerf spinal [285] (Fig. 32).

155
Fig. 32 Vue sagittale d'un segment rachidien : le triangle de Kambin est limité crânialement par le nerf
spinal, caudalement par le plateau vertébral crânial de la vertèbre caudale et dorsalement par les massifs
articulaires des vertèbres

Aucune fuite secondaire à une injection par voie trans-annulaire n’a été rapportée,

contrairement à la voie trans-pédiculaire où les fuites constituent une limite supplémentaire.

Enfin, si le diamètre de l’aiguille utilisé est inférieur à 40% de la hauteur discale, alors selon

Elliott et al. la ponction de l’anneau fibreux n’entraine pas de dégénérescence discale

secondaire [237]. Dans notre travail, le diamètre de l’aiguille utilisé était de 22G (0,644mm),

donc inférieur à 40% de la hauteur discale. La dégénérescence secondaire était moins

importante sur les DIV abordés par voie trans-annulaire que sur les DIV abordés par voie trans-

pédiculaires.

Au regard de ces observations, lorsque l’agent thérapeutique est injectable à l’aide

d’une aiguille de petit diamètre, la voie d’abord à privilégier parait être la voie trans-annulaire.

Il convient alors d’utiliser le diamètre d’aiguille le plus petit possible. Néanmoins il s’agit là

d’une limite technique car pour effectuer convenablement cette voie d’abord, l’aiguille doit

être suffisamment volumineuse et rigide, sinon l’orientation de l’aiguille vers le DIV et la

ponction de l’anneau fibreux n’est pas possible. Parallèlement, le modèle utilisé lors d’une

étude préclinique doit être suffisamment grand pour que le rapport diamètre de l’aiguille –

hauteur discale soit inférieur à 40%.

156
 Médecine régénératrice du DIV : perspectives scientifiques

Un autre modèle animal pertinent : le modèle canin

Parmi les autres modèles animaux à disposition, le modèle canin est un modèle très

intéressant. Outre le fait qu’il s’agisse d’un modèle animal de taille adaptée, il existe chez le

chien une dégénérescence discale spontanée plus ou moins marquée en fonction de la race.

En effet, les races canines peuvent être distinguées en 2 catégories : les races

« chondrodystrophiques » et les races « non-chondrodystrophiques ». La chondrodystrophie

est une affection autosomique récessive conduisant à une anomalie de l’ossification

endochondrale. Cette affection ayant conduit à la sélection de certaines races (Teckel,

Bulldogs, Cavalier King Charles…), prédispose à la survenue précoce et plus fréquente de

processus dégénératif du disque intervertébral [204,286] . Ainsi, la dégénérescence discale

s’observe dès l’âge de 2 à 4 ans chez ces chiens chondrodystrophiques. À l’échelle cellulaire,

une disparition précoce des cellules notochordales a été mise en évidence à la différence des

races non-chondrodystrophiques où les cellules notochordales persistent à l’âge adulte [196].

La physiopathologie de la dégénérescence discale chez ces espèces étant relativement

semblable à celle décrite chez l’Homme, le chien chondrodystrophique constitue un modèle

animal très pertinent.

En médecine vétérinaire, la dorsalgie chez le chien chondrodystrophique est un motif

de consultation fréquent et la discopathie une cause fréquente des douleurs rachidiennes. Ces

chiens constituent alors une population tout à fait intéressante dans le cadre d’un protocole

de recherche clinique. Ainsi au laboratoire RMeS, une étude clinique, nommée DISCODOG, est

menée sur cette population (AAP, Région Pays de la Loire RFI Bioregate, porteurs : Johann

CLOUET – Marion FUSELLIER). Ce projet repose sur le développement d’une thérapie

régénératrice endogène basée sur l’injection intra-discale de microARN155 encapsulé chez des

chiens chondrodystrophiques. Pour s’assurer de la sécurité et du bon déroulement du

protocole scientifique sur ces animaux domestiques, des travaux préliminaires sur ce modèle

sont nécessaires.

157
 À notre connaissance, peu de travaux morphologiques portent sur le chien

chondrodystrophique et il est important de s’assurer que la morphologie rachidienne de ces

chiens soit compatible avec un tel protocole. Comme pour notre travail morphologique sur

modèle ovin, une analyse scanographique appliquée à l’abord du DIV a été effectuée sur des

scanners de chiens chondrodystrophiques (Bulldog) et non-chondrodystrophiques (Labador –

Golden Retriever), afin de valider la faisabilité de l’abord discal et de définir des repères pour

les opérateurs. De plus, il est capital de pouvoir apprécier de manière fiable les modifications

de signal au sein du DIV. La faisabilité des séquences IRM de relaxométrie a donc été étudiée

sur des chiens au CHUV ONIRIS. Ces résultats étant concluants, l’inclusion des premiers chiens

est en cours.

Thérapie régénératrice du DIV : sélection des patients candidats

Nos différents travaux ont permis d’établir une forte corrélation entre les

modifications de signal IRM et l’altération histologique du NP durant le processus de

dégénérescence discale. Néanmoins, il sera nécessaire de définir un intervalle dans ce

processus dégénératif dans lequel une thérapie réparatrice serait indiquée. En effet, il est fort

probable que ces traitements ne soient pas pertinents en cas de dégénérescence trop avancée.

La matrice extra-cellulaire étant trop perturbée, il est difficile d’espérer une réparation du DIV,

que le traitement soit exogène ou basé sur la stimulation endogène. Dans le cas particulier où

le NP est trop altéré, alors que l’anneau fibreux et les plateaux sont sains, un remplacement

du NP par un substitut hybride associant biomatériaux et traitement régénérateur semblerait

adapté. Il s’agirait de partir d’une matrice saine enrichie de cellules et/ou de molécules

recrutant les cellules progénitrices et stimulant la production des éléments constituant la

matrice extra-cellulaire.

Il convient alors de sélectionner les DIV qui pourraient bénéficier d’une telle thérapie.

Ces DIV doivent être la cause de la lombalgie et doivent présenter une altération isolée du

signal du NP : PFIRRMANN 2 voir 3. Mais le score de PFIRRMANN étant probablement

insuffisamment discriminant pour détecter l’initiation de l’altération du signal du NP, la

relaxométrie à but diagnostique y trouve toute sa place. Il est cependant nécessaire de

158
rapporter la modification du signal du NP à la symptomatologie : il est admis que l’IRM détecte

parfois d’authentiques altérations du signal du DIV alors que ces altérations ne sont pas

toujours responsables des douleurs rachidiennes [108].

159
160
Conclusion

161
 Par ce travail de thèse, nous confirmons que le modèle animal brebis est un modèle

particulièrement pertinent dans l’étude préclinique de la médecine régénératrice du DIV. Il

s’agit d’un modèle de grande taille, dont la morphologie rachidienne est proche celle de

l’Homme. De plus, il s’agit d’un modèle présentant une dégénérescence discale naturelle

spontanée, dont la physiopathologie présente de fortes similitudes avec l’Homme. Ainsi, nous

avons pu caractériser cette dégénérescence par des méthodes d’imagerie et d’histologie : il

existe une véritable corrélation entre les altérations histologiques et les modifications de

signal IRM du NP. La mesure du temps de relaxation T2 est particulièrement pertinente car

elle offre une mesure quantitative objective du signal du NP et détecte ainsi les modifications

subtiles de celui-ci, là où le score de PFIRRMANN atteint ses limites. Enfin, il est possible

d’apprécier la dégénérescence du DIV sur 6 mois chez des brebis ayant atteint leur maturité

squelettique, délai compatible avec des études pré-cliniques in vivo.

Grâce à l’imagerie tomodensitométrique, nous avons montré que l’abord du NP est

faisable par voie trans-annulaire (VTA) et par voie trans-pédiculaire (VTP) chez la brebis et

chez l’Homme et nous avons pu préciser des repères pour l’opérateur. Pour injecter un agent

thérapeutique au sein du NP, la voie d’abord à privilégier doit rester la VTA, en utilisant une

aiguille de petit diamètre (moins de 40% de la hauteur discale). En effet, bien que séduisante,

la VTP nous parait trop invasive et induit de nouvelles lésions dont certaines ne sont pas sans

conséquences pour le DIV. Elle n’est cependant pas à oublier et reste une voie particulièrement

intéressante pour réaliser une nucléotomie en préservant l’intégrité de l’AF et ainsi par

exemple remplacer le NP par un substitut régénérateur hybride associant un biomatériel et un

traitement régénérateur.

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Annexes

Soumis à Scientific Reports

CT scan-based morphometric comparison of human, ovine and canine lumbar

spine generates instrumental data for intervertebral disc percutaneous surgery

N. Gavira*1,2, 3, C. Decante*1,2, 3 , N. Bouhsina1,4 , D. Rouleau4, B. Miannay5, N. Bronsard6 , A. David7 , R.

Jossier8 , O. Gauthier1,9 , A. Hamel1,2, 3 , J. Guicheux1,10,11 , J. Clouet!1,12,13 , and M. Fusellier!1,4

* Co-first authors.
! Co-last authors.

1 INSERM, UMRS 1229, Regenerative Medicine and Skeleton (RMeS), Université de Nantes, ONIRIS,
Nantes, F-44042, France.
2 CHU Nantes, Service de Chirurgie Infantile, PHU5, Nantes, F-44093, France

3 Laboratoire d’Anatomie, Faculté de Médecine, Université de Nantes

4Department of Diagnostic Imaging, CRIP, ONIRIS, College of Veterinary Medicine, Food Science and

Engineering, Nantes, F-44307, France

5Data-Prisme La Réunion, https://www.data-prisme.com/

6 CHU Nice, Service orthopédie et traumatologie, France

7 CHU Nantes, Service d’imagerie médicale, PHU6, Nantes, F-44093, PHU6 France

8 Clinique VetRef 49070 Beaucouzé, France

9 Department of Surgery, CRIP, Oniris College of Veterinary Medicine, Food Science and Engineering,

Nantes F-44307, France

10 Université de Nantes, UFR Odontologie, Nantes, F-44042, France

11 CHU Nantes, OTONN PHU4, Nantes, F-44093, France

12 Université de Nantes, UFR des Sciences Biologiques et Pharmaceutiques, Nantes, F-44042, France

13 CHU Nantes, Pharmacie, PHU11, Nantes, F-44042, France

Corresponding author:
Dr Marion FUSELLIER, DVM, PhD
Department of Diagnostic Imaging,
ONIRIS, College of Veterinary Medicine, Food Science and Engineering,
Nantes, F-44307
France
Phone: +33240687864
Email: [email protected]

187
Declaration

Funding : This study was supported by grants from the Société Française de Chirurgie du Rachis, the
Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM), the Région des Pays de la Loire
and RFI BIOREGATE (DISCODOG Project) and Agence Nationale de la Recherche ANR-16-CE18-
0008-01.

Conflict of interest / Competing interests:

All of the authors declare that they have no potential conflicts of interests.

Availability of data and material:

yes.

Author contributions:
All authors contributed to the study conception and design. Material preparation, data collection and
analysis were performed by [Nathaly Gavira] and [Cyrille Decante]. The first draft of the manuscript
was written by [Nathaly Gavira] and all authors commented on previous versions of the manuscript.
Statistical analysis was validated by Bertrand Miannay. All authors read and approved the final
manuscript.

Code availability:
yes

Ethics approval:
All applicable international, national, and/or institutional guidelines for the care and use of animals
were adhered to. All procedures involving animals performed in this study were in accordance with
the ‘‘3Rs’’ rule (Replacement, Reduction, and Refinement), the ethics standards of the institution and
the practice at which the study was performed. This study was approved by the French Ministry of
Agriculture, by the ethics committee of the Pays de la Loire Region (Ethics approval number APAFIS:
8401) and by the Centre of Research and Pre-clinical Investigations (CRIP) at the ONIRIS-National
Veterinary School of Nantes. This study was also performed in accordance with the ethical standards
as laid down in the 1964 Declaration of Helsinki and its later amendments or comparable ethical
standards. the study is reported in accordance with ARRIVE guidelines.
For experiments involving human participants, informed consent have been obtained from all subjects
and/or their legal guardian(s). All the human tissues used come from cadaveric anatomical specimen
donated to Research, the consents having been obtained during their lifetime. Local Institutional
Review Board and Ethics Committee approval was obtained for the use of human anatomical
specimens.

Acknowledgments
The authors gratefully acknowledge the technical assistance that they received from the personnel of
the CRIP (Centre de Recherche et d’Investigation Pré-clinique, i.e., Patrice Roy, Stéphane Madec and
Ingrid Leborgne), from Stéphane Lagier and Yvan Blin (Laboratoire d’Anatomie, Faculté de Médecine,
Nantes) and Sophie Domingues (Longdom publishing) for editing the manuscript.

188
Structured Abstract

Purpose: The aims of this study were to describe and compare lumbar spine anatomy and intervertebral
disc (IVD) percutaneous approaches (transpedicular (TPA) and transannular (TAA) approaches) using
CT-scan in human, ovine and canine models to complete the comparative anatomy and IVD data on
these models in the context of regenerative medicine.

Methods: A total of 57 human, 3 ovine and 49 canine lumbar spine CT-scans were performed.
Concerning dogs, 29 CT-scans from chondrodystrophic breed and 20 CT-scans from non-
chondrodystrophic breed were available. Vertebral and IVD morphometric data, cutaneous landmarks,
instrumental length and route’s angle (sagittal and transversal angles for TPA and transversal angle for
TAA) were measured.

Results: With 23 morphometric measurements for each vertebra and a total of more than 15000
measurements, this study builds a pertinent anatomical database for these 3 species. For TPA, sagittal
angle was 36.3° in human group, 47.4° in ovine group and 45.5° in canine group. Transversal angle was
44.8°, 46.1° and 48.4°, respectively in human, sheep and dog. Significant differences were noted between
human and the other animal models for sagittal angles (p<0.0001) and between human and canine for
transversal angle (p<0.0001). For TAA, mean angle was 49.2° in humans, 63.5° in ovine and 67.5° in
canine with significant differences between human and the other animal models (p<0.0001).

Conclusion: This study offers a solid database of morphometric lumbar spine characteristics and precise
landmarks for IVD’s approach. This work allows to define a standardized protocol to help researchers
and surgeons in translational studies from animal model to clinic.

Keywords:
Intervertebral disc, human and animal model, transpedicular and transannular approach, regenerative
medicine

Background

Degenerative intervertebral disc disease (DDD) is responsible for approximately 60% of low back pain
(LBP) (1). Because of its socio-economic impact related to treatments and loss of productive time (2),
recent research have focused on improving our understanding of the pathogenic mechanisms leading
to intervertebral disc (IVD) spontaneous degeneration and of regenerative ways of treatment (3).
Researchers have been working on innovative therapeutic product injection (biomaterial, regenerative
cells sources, biological factors…) to regenerate the Nucleus pulposus (NP) (4). The approach’s choice to
safely inject into the NP is crucial. Currently, the percutaneous dorsolateral route under fluoroscopic
control, namely transannular approach (TAA), is considered as reference for reaching the NP by needle
puncture of the annulus fibrosus (AF) (5). Regarding the potential risk of accelerated IVD degeneration
post-injection through the AF, new approach have been investigated, notably the trans-pedicular
approach (TPA) (6,7). Briefly, TPA consists in reaching the NP, without AF lesion, through the caudal
vertebra by successively crossing the pedicle, the vertebral body, and the endplate.
In this context, validation of the feasibility on the NP routes on these two models in order to guarantee
safety is necessary before applying them to humans. Beyond the technical approach, the choice of
animal model is unmissable (8). Animal models should mimic the human vertebral anatomy and, if
possible, present a similar IVD degeneration. The ovine model is frequently used in orthopedic spinal
research because of histological and anatomical similarities with the human spine, allowing the use of
similar surgical techniques and medical device (9,10,11). Ovine model is considered as an ideal

189
preclinical model to assess these 2 injection’s routes. The canine model is less frequently used because
of ethical questioning and its great heterogeneity. Among the breeds, chondrodystrophic dogs exhibit
early DDD and thus could constitute a relevant model in the context of the development of clinical tests
in IVD regenerative medicine (12,13).
Therefore, knowledges about lumbar anatomy in ovine, canine and human models is particularly
relevant to anticipate potential limitations to a future human transposition. Thus, the aims of this study
were to describe and compare lumbar spine anatomy and IVD percutaneous approaches in human,
ovine and canine models using CT-scan in order to define safe limits in the context of discal injection
procedures.

Materials and Methods

Population and group distribution

The human group (H) is composed of patients and consists of 57 CT-scans. This group had a total of 285
vertebrae and 342 IVD and was divided into 2 groups. The first group contained 30 Supine Position
Human (SPH) CT-scans (Light Speed®, GE Medical Systems VCT, Nice, France, helicoidal, slice
thickness 0.625-1.25mm, 120kV, 147-451mA). Gender distribution was 11 women (36.7%) and 19 men
(63.6%). Mean age was 60.7 years (35-87 years). SPH are abdominal CT-scans from the “Lombonice
2005” database. The second group contained 27 Prone Position Human (PPH) CT-scans from Nantes’
database (Somaton ®, Definition AS, Siemens, Nantes, France helicoidal, slice thickness 1.5-4mm, 100-
140kV, 385-657mA). Gender distribution in PPH group was 10 women (37%) and 17 men (63%) Mean
age was 67.3 years (25-90 years) and mean weight was 75 kg ±18.5. PPH CT-scans were performed
during interventional procedures.
The ovine group consists in 3 CT-scans (Light Speed®, GE Medical Systems, Oniris, Nantes, France,
helicoidal, slice thickness 0.625mm, 120kV, 100mA) and has 20 vertebrae and 23 IVD. The 3 ovines were
euthanized after the approval of the ethical committee. Two ovine had 7 lumbar vertebrae and one had
6 lumbar vertebrae. They were 3 females, one from Vendée and the other Mule’s race. Mean age of sheep
was 2.7 years (extreme values: 2-3 years).
The canine group consists in 49 CT-scans (343 vertebrae and 392 IVD) from dogs under general
anesthesia consulting the veterinary clinic VetRef (Angers). The first group noted LG for Labrador and
Golden retriever, contained 20 prone position CT-scans from dogs. There were 18 Labrador and 2
Golden retrievers. Mean age was 6.5 years (1-13 years). The group has 10 females (50%) and 10 males
(50%). The second group, noted FB for French bulldog, contained 29 prone position CT-scans from dogs
under general anesthesia. Mean age was 4.8 years (2-9 years). They were 8 females (27.6%) and 21 males
(72.4%). All CT-scan were performed under general anesthesia (Aquilion®, Toshiba, Vetref, Angers,
France, helicoidal, slice thickness 1-2mm, 120kV, 200mA).

Anatomical measurements
CT-scan measurements from all the bony anatomical vertebral reliefs and IVDs have been performed
as shown in Figure 1. The image data were analyzed and measurements were performed by the same
investigator (Horos software 3.0®) (Figure 1).

Landmarks measurements
Concerning the TPA, 3 angles were measured (Figure 2).
Concerning the TAA, all measurements were performed in a strictly IVD’s parallel CT-scan imaging
and summarized in Figure 3. aTAA angle was the mean between minimal angle (l) and maximal angle
(m). Minimal (n) and maximal (o) distances between the medial line and the cutaneous entry point for
(l) and (m) were measured avoiding spinal canal and abdominal compartment. Finally, distances
between the cutaneous entry for (l) and (m) angles and NP were measured. They were noted (p) and
(q) respectively.
Lumbar spine anatomical sagittal sections in a plane of TPA routes for human, sheep and dog.

190
To analyze the distances between the nerve roots and the TPA routes, an additional dog and sheep were
used. In these 2 models, 4 TPA were performed ex vivo with a Kirschner wire under radioscopy using
angles previously established. Spines were then removed, frozen and sections were performed in the
plane of the wires. For Human, a section in the theoretical sagittal plan of the TPA was made by a virtual
dissection table (AnatomageÒ Table 7.0 – Milan). The distances between the Kirschner wires and the
adjacent nerve roots were measured.

Statistical analysis
The statistical analysis was performed with R software. R is a programming language for statistical
computing and graphics supported by the R Core Team and the R Foundation for Statistical
Computing. The intra-rater reliability was assessed using a linear mixed-effects model and considered
to be good if the value was less than 0.15. The same vertebra was measured 15 times at 24h interval by
the same investigator. Mean values and standard deviations were calculated with Excel (Microsoft
2004).
Concerning morphometric data, no statistic test was performed to avoid irrelevant comparison.
To compare human, ovine and canine routes, only PPH group was used in human group because they
are in the same position. For TPA, we decided to compare sagittal (a) and transversal (b) angles between
the 3 models (human, ovine and canine). For TAA, (aTAA) mean angle was compared between the 3
models. PPH group was compared to ovine group with Wilcoxon Mann-Whitney’s test for TPA
approach and with Student’s test for TAA approach. Finally, PPH group was compared to canine group
with Student’s test for both approaches.

Results

Anatomical measurements
CT-scan measurements from all the bony anatomical vertebral reliefs and IVDs are presented in Table
I. Comparing the measures between human and animals, the cranio-caudal vertebral body distances
(A and B) were almost similar between ovine, LG group and Human. This measure was 1.8 fold smaller
in FB group compared to Human. In all animal groups, vertebral bodies were narrower (latero-lateral
distance C and F) and less deep (ventro-dorsal distance D and G) than in Humans. Regarding pedicles,
cranio-caudal distance (I) was higher in ovine (25mm ± 2.8) and LG (19.9mm ± 2.9) compared to Human
(15mm ± 2.1) and almost identically between Human and BF (13.9mm ± 1.9). Interestingly, latero-medial
distance of pedicles (J) was smaller in all animal groups (ovine: 7.5mm ± 1.6; LG: 5.3mm ; LG: 5.3mm ±
1.6 ; FB: 4.3mm ± 1) compared to those in Human (11.7 ± 4.4). Additionally, spinal canal (L, M, N) was
narrower and spinous process (P) shorter in all animal groups. Size of transverse process (S and T)
appeared different between animals and Human, with a longer size in ovine and a shorter one in canine.
Finally, size of IVD (O) in animals groups appeared thinner (ovine: 6.8mm ± 1.3 ; LG: 7.1mm ± 2.1 ; FB:
6.1mm ± 1.6) than in Human (10.5mm ± 3.3). For all measurements in Human and in canine models, no
difference was found between males and females.

Routes’ comparison (TPA and TAA)

In all species, regarding the iliac wings volume, lumbo-sacral IVD (L5-S1 or L7-S1 depending on species)
was systematically inaccessible by TPA or TAA. Interestingly, contrarily to TPA that need a cranial
inclination of the needle, TAA allows to target one supplemental spine level above the lumbo-sacral
IVD.
Trans-pedicular approach (TPA)
In Human, sagittal angle (a) was statistically different between Supine Position Human (SPH) group
and Prone Position Human (PPH) group (respectively 40.2° ± 7.8 and 36.3° ± 5.8; p=0.0006) (Figure 4).
Transversal angle (b) was different between SPH group and PPH group (respectively 46.8° ± 7.2 and
44.8° ± 5.3; p<0.0001). In ovine group, sagittal angle (a) was 47.4 ± 2.6° and transversal angle (b) was
46.1° ± 1.9. In canine group, sagittal angle (a) was not statistically different between LG (Labrador and

191
Golden) and FB (French Bulldog) (respectively 45.5° ± 2.7 and 45.5° ± 3.5; p=0.96). Transversal angle (b)
was statistically different between LG and FB (respectively 47.5° ± 2.2 and 49.1° ± 3.5; p<0.0001).
Statistically differences for the sagittal angle (a) were found when comparing PPH group and ovine
group, as well as when comparing PPH group and canine group with p<0.0001 for both comparisons.
Additionally, a statistical difference of transversal angle (b) was determined between PPH group and
canine group (p<0.0001) but there was no difference between PPH group and ovine group (p=0.19)
(Figure 4). In the PPH group, the cutaneous distance between the spinous process and the cutaneous
entry point was 66 ± 21mm caudally in the sagittal plane (d) and 79 ±19 mm laterally in the transversal
plane (e). In the PPH group, the mean needle length was 123 ± 29mm (h) (Table II). For all measurements
in Human and in canine models, no sex specific differences were observed.
Trans-annular approach (TAA)
In Human, (aTAA) was 49° (± 12.3°), 48.9° (± 12°) and 49.2° (± 12°) in H, SPH and PPH groups,
respectively (Figure 5). No statistical difference was observed between SPH and PPH groups (p=0.77).
In ovine group, aTAA was 63.5° (± 14.6°). In canine group (aTAA) was 67.5° (± 24.9°), 65.2° (± 26.1°) and
68.8° (± 24.1°) for all dogs, LG and FB groups respectively. There was no significant difference between
LG and FB (p=0.86). Comparing Human to animal models, there was a significative difference (p<0.0001)
between aTAA of PPH group and ovine group, as well as PPH group and canine group. In the PPH
group, the cutaneous distance between the spinous process and the cutaneous entry point was 79 ± 19
mm laterally for the smaller angle (n)and the mean needle length for this cutaneous entry point was 111
± 26mm laterally (h) (Table III). For all measurements in Human and in canine model, no sex specific
differences were observed.

Intra-rater reliability
The intra-rater reliability was measured in order to insure results’ quality. Intra-rater reliability revealed
very strong agreement for all measures except for two conditions: Q value (mean 1.5°± 1.1) and k
measure (mean 3.8mm ± 0.6).

Discussion

This study provides with precise anatomical lumbar spine values for human, ovine and 2 canine breeds,
one chondrodystrophic and one non-chondrodystrophic (Golden/Labrador Retriever and French
Bulldogs). While measurements of human and ovine spine anatomy are in accordance with the
literature(14–16), it is the first time, to our knowledge, that they are characterized for a non-
chondrodystrophic medium-sized breed (Golden/Labrador Retriever) and a chondrodystrophic
brachymorphic breed (French Bulldogs). Moreover, this study expands IVD routes guideline for
human, ovine and canine models. Historically, IVD percutaneous approaches were used to perform
discography replaced now by non-invasive explorations. Recently, in the context of IVD regenerative
medicine based on the injection of cells, biological factors or biomaterials into the NP, minimally
invasive IVD approaches arouse interest. The current “gold standard” for targeting the NP is the
percutaneous dorsolateral route involving needle puncture of the annulus fibrosus (AF) (TAA’s
equivalent) (5). However, it is now well recognized that the TAA can lead to in-depth alteration of the
mechanical properties of the AF. Such AF impairments are known to lead to an increased risk of NP
herniation and accelerated IVD degeneration, as demonstrated in animal models (17) and in humans
studies (18).

TPA was described by Vadalà et al. in human and ovine models (6,19) and considered as an alternative.
Nevertheless, TPA exhibits significant risks of secondary lesions: spinal canal disruption with possible
neurological consequences, vertebral endplate’s fracture and end-plate healing defects (20). Vertebral
canal disruption risk increases when the size of the animal model decrease. Vadalà et al. suggest angles
of 49.6° in the sagittal plane and 47.5° in the frontal plane to target the NP through caudal vertebra (6)
regardless of model (ovine and human). In our study, a higher number of measurements on a significant

192
number of IVDs have been defined and demonstrated TPA’s orientations were not the same between
species (example for TPA’s sagittal (a) angle: 36.3° for Humans, 47.4° for sheep and 45.5° for dogs).
These differences could be explained by the patient’s position on the operating table as demonstrated
in this study (significant difference between the TPA’s sagittal angle (a) in supine position (40.2°) and
in prone position (36.3°)). Thus, preoperative planning by imaging in prone position would avoid as
much as possible vertebral canal disruption. Furthermore, nerve roots must be considered. TPA routes
were widely distant from adjacent nerve roots, as we have shown in anatomical sections of a human, a
sheep and a dog (respectively: 19mm, 14,1mm, 14,3mm) (Figure 6). Concerning TAA, Kambin’s triangle
(21) must be considered and the minimal TAA angle shall be chosen to avoid nerve root injury.
Technically, choosing the minimal TAA angle correspond to the shortest needle with a smallest dead
volume and facilitate NP injection.
The TAA is controversial regarding AF lesions (17,18). O’Connell et al. have shown that the risk of DDD
induction after AF lesion post-injection is not constant, as it depends on the ratio between the diameter
of the needle and the height of the IVD (22). According to Elliott et al., when the gauge of the needle is
less than 40% of the height of the IVD, AF puncture does not induce accelerated DDD (23). This
precaution seems easy to implement and should be systematic in clinical practice.
These two IVD approaches appear feasible, according to relevant CT-scan measurements. It is well
known that angles measurements may change slightly (e.g. 5% variation for Cobb’s angle) without
major clinical consequences or implications (24). The same is true when significant differences in angles
between models are observed. However, this study showed angles measured in TPA have small
standard deviations, indicating it is necessary to be accurate in order to perform TPA. It was not
identical for TAA: to perform a safety approach, the angle of the needle can be within a minimal angle
(l) and maximal angle (m). Thus, performing TPA required more precision than TAA, regardless of the
model used.
This study provides lots of theorical accurate landmarks and will guide surgeons, radiologists,
veterinarian in their reflection before performing IVD approaches for DDD depending on the species
treated. For example, when considering TPA, ovine and canine models allow a greater margin of error
in the sagittal plane (greater cranio-caudal pedicle distance), but carries a greater risk of spinal canal
disruption (reduced latero-medial pedicle distance) (20). In DDD research, ovine model appears as an
ideal first model to assess these 2 routes injection in a preclinical research. Chondrodystrophic dogs
(French Bulldogs) constitute a relevant veterinary model as they exhibit early DDD. Non
chondrodystrophic dogs (Golden/Labrador Retriever) could be the control group. These successive
models appear essential to us in order to guarantee the routes safety before applying them to humans.

Conclusion and perspectives

This study offers a solid database of morphometric lumbar spine characteristics and precise surgical
landmarks for IVD’s injection in human, ovine and canine models.
In the context of IVD regenerative medicine research based on injections into the NP, this descriptive
study will help surgeons and scientists in translational protocol from preclinical in sheep and canine
models to clinical human studies.

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Figures

Fig. 1 Measurements from all the bony anatomical vertebral reliefs and IVDs in CT-scan.
a) Sagittal view: ventral vertebral body’s cranio-caudal distance (A), dorsal vertebral body’s cranio-caudal distance
(B), pedicle cranio-caudal distance (I), IVD cranio-caudal distance (O), spinous process ventro-dorsal distance (P),
spinous process angle (Q) and total lumbar spine length (X).
b) Transversal view: cranial end-plate’s latero-lateral distance (C), cranial end-plate’s ventro-dorsal distance (D),
cranial end-plate’s area (E), caudal end-plate’s latero-lateral distance (F), caudal end-plate’s ventro-dorsal distance
(G) caudal end-plate’s area (H), pedicle latero-medial distance (J) pedicle ventro-dorsal distance (K), vertebral canal
ventro-dorsal distance (L), vertebral canal latero-lateral distance(M), vertebral canal area (N), lateral process medio-
lateral distance (S) and latero-lateral lateral process total distance (T), cranial articular latero-lateral distance (V)
and caudal articular latero-lateral distance (W).
c) Frontal view: transverse process cranio-caudal distance (R) and transverse process angle (U).

195
Fig. 2 Measurements of angles and surgical landmarks in a CT-scan for Trans Pedicular Approach
(TPA).
a) Angle (a): measured in the sagittal plane between the direction of the surgical instrument targeting IVD’s
center and the transversal plane. Angle (b): measured in the transversal plane between spinous process axis and
the sagittal plane. Angle (c): measured in frontal plane between the surgical instrument axis and the transversal
plane. (d): cutaneous distance between IVD’s transversal plane and cutaneous entry point in sagittal plane. (e):
cutaneous distance between spinous process and cutaneous entry point.
b) The cross-section is oriented in the needle plane in order to measure the distance between the cutaneous
entry point and the bony entry point (f), the distance between the bony entry point and the NP (g). (h): total minimal
needle length (h=f+g). (i): minimal distance between the needle way and the spinal canal.
c) ratio between the distance “bony entry point-canal edge of the transverse process” and the cranio-caudal
total transverse process distance measured in frontal plane (j), distance between the bony entry point and the
articular process’ lateral edge measured in transversal plane (k).

Fig. 3 Measurement of Trans Annular Approach angles in a CT-scan in transversal view.

Minimal angle (l) was defined by the intersection between the medial line and the most medial axe of reaching NP
by TAA without spinal canal disruption. Maximal angle (m) was defined by the intersection between the medial
line and the most lateral axe of reaching NP by TAA avoiding rib and retroperitoneal cavity. Minimal (n) and
maximal (o) distances between the medial line and the cutaneous entry point for (l) and (m) were measured.
Distances between the cutaneous entry for (l) and (m) angles and NP were measured and noted (p) and (q)
respectively.

196
Fig. 4 Comparison of landmark measurement in Human, sheep and dogs in Trans Pedicular Approach (TPA).
The sagittal angle (a) and the transversal angle (b) between SPH (supine position human : light blue) vs PPH (prone
position human : darker blue) had significant differences ( p=0.0006 and p<0.0001 respectively). The sagittal angle
(a) between LG (Labrador and Golden retriever: white) vs FB (French Bulldog: olive green) had no statistically
significant difference (p=0.96). The transversal angle (b) between LG vs FB had a significant difference (p<0.0001).
The sagittal angle (a) and transversal angle (b) between C (canine model: LG + BF in green) and PPH had a
statistically significant difference (p<0.0001 for both) . There was a significant difference between PPH and O(ovine
model: pink) for sagittal angle (a) (p<0.0001) but not for transversal angle (b) (p=0.19).

Fig. 5 Comparison of landmark measurement in Human, sheep and dogs in Trans Annular Approach (TAA).
In Trans Annular Approach (TAA) there is no significant differences for (aTAA) angle between SPH (supine
position human in light blue) vs PPH (prone position human in dark blue) (p=0.77) nor between LG (Labrador and
Golden retriever in white) versus FB (French Bulldog in green) (p=0.86). Nevertheless, there was a significant
difference between SPH vs O (ovine model in pink) and between SPH vs C (canine model: LG + FB in green)
(p<0.001 for both).

197
Fig. 6Lumbar spine anatomical sagittal sections of a human (a), a sheep (b), a dog (b) and in a plane of TPA
routes.
For the sheep and the dog spines, 4 TPA were performed ex vivo with a Kirschner wire under radioscopy using
angles (a), (b) and (c) previously established. Spines were then removed, frozen and sections were performed in
the plane of the wires. For the human spine, a section in the theoretical sagittal plan of the TPA was made by a
virtual dissection table (AnatomageÒ Table 7.0 – Milan). The distances between the Kirschner wires and the adjacent
nerve roots were measured. Adjacent nerve roots (blue circle) were at distant from TPA (sheep : 14,1mm, dog :
14,3mm, human : 19mm). Scale bar: 20mm

Tables

Table I Morphometric measurements (mean and standard deviation SD) in CT scans of human group (H: blue),
ovine (O: pink), Labrador/Golden (LG: white) and French Bulldogs (FB: green).
A: ventral vertebral body’s cranio-caudal distance. B: dorsal vertebral body’s cranio-caudal distance. C: cranial end-
plate’s latero-lateral distance. D:cranial end-plate’s ventro-dorsal. E: cranial end-plate’s area. F: caudal end-plate’s
latero-lateral distance. G: caudal end-plate’s ventro-dorsal distance. H: caudal end-plate’s area. I:pedicle cranio-
caudal distance. J: pedicle latero-medial distance. K: pedicle ventro-dorsal distance. L: vertebral canal ventro-dorsal
distance. M: vertebral canal latero-lateral distance. N:vertebral canal area. O: IVD cranio-caudal distance. P: spinous
process ventro-dorsal distance. Q: spinous process angle. R: transverse process cranio-caudal distance. S: lateral
process medio-lateral distance. T:latero-lateral lateral process total distance. U: transverse process angle. V: cranial
articular latero-lateral distance. W: caudal articular latero-lateral distance. X: total lumbar spine length.

198
Table II TPA’s measurements (mean and standard deviation SD) for human group (H), supine position human
(SPH), prone position human (PPH), ovine (O), canine model (C), Labrador and Golden retriever (LB) and
French Bulldog (BF).
a angle: angle in the sagittal plane. b angle: angle in the transversal plane. c angle: angle in the frontal plane. d:
distance between the IVD’s transversal plane and the cutaneous entry point in the sagittal plane. e: distance
between the spinous process and the cutaneous entry point in the transversal plane. f: distance between the
cutaneous entry point and the bony entry point. g: distance between the bony entry point and the nucleus pulposus.
h: the total minimal needle length (h=f+g). i: the minimal distance between the needle way and the spinal canal. j:
the ratio between the distance “bony entry point-canal edge of the transverse process” and the cranio-caudal total
transverse process distance measured in frontal plane. k: the distance between the bony entry point and the articular
process lateral edge measured in transversal plane.

Table III TAA’s measurements (mean and standard deviation SD) for human group (H), supine position human
(SPH), prone position human (PPH), ovine (O), canine model (C), Labrador and Golden retriever (LB) and
French Bulldog (BF).
l: minimal angle between the medial line and the most medial axe of reaching the nucleus pulposus (NP) without
spinal canal disruption. m: maximal angle between the medial line and the most lateral axe of reaching the NP
avoiding rib and retroperitoneal cavity. aTAA angle: mean between l and m angles. n: distance between the medial
line and the cutaneous entry point for l angle. o: distance between the medial line and the cutaneous entry point
for m angle. p: distance between the cutaneous entry point for l angle and the NP. q: distance between the cutaneous
entry point for m angle and the NP.

199
Titre : Médecine régénératrice du disque intervertébral : étude morphologique de l’approche du
Nucleus Pulposus chez le modèle brebis

Mots clés : disque intervertébral, voie d’abord, dégénérescence discale, brebis

Résumé : Définie comme le « mal du siècle », la dégénérescence discale spontanée chez la brebis
lombalgie concernera au moins une fois 80% de la par des méthodes d’imagerie et d’histologie. Ce
population mondiale. Parmi les lombalgies, 40% travail a montré une dégénérescence discale
d’entre elles sont secondaires à la dégénérescence spontanée appréciable en 6 mois chez la brebis et il
du disque intervertébral (DIV). Actuellement, les existe une corrélation entre les altérations
traitements proposés sont symptomatiques mais histologiques et les modifications de signal IRM du
l’amélioration des connaissances DIV.
physiopathologiques du DIV permet d’envisager le Afin d’injecter un agent thérapeutique au sein du
développement de nouvelles approches DIV, il est nécessaire de réfléchir sur la voie
thérapeutiques cette fois-ci étiopathogéniques : d’abord. La voie trans-annulaire (VTA) est la voie
c’est la médecine régénératrice du DIV. Afin de d’abord de référence, mais elle risque de fragiliser
démontrer l’efficacité de ces thérapies in vivo, l’anneau fibreux (AF). La voie trans-pédiculaire
différents modèles animaux de dégénérescence (VTP) préserve l’anneau fibreux mais induit de
discale ont été décrits. Parmi les modèles nouvelles lésions qui doivent être évaluées.
proposés, la brebis constitue un modèle L’objectif de ce travail était d’étudier par l’imagerie
intéressant. En effet, il existe une dégénérescence la faisabilité de la VTP et de la VTA chez la brebis
discale naturelle chez la brebis dont la et chez l’Homme, puis d’analyser les conséquences
physiopathologie est très proche de la de ces 2 voies d’abord sur le DIV ovin grâce à un
dégénérescence discale observée chez l’Homme. suivi longitudinal. Les 2 voies d’abord sont
De plus, les similitudes morphologiques réalisables chez la brebis et chez l’Homme. Dans le
rachidiennes de ce modèle de grande taille contexte de la médecine régénératrice du DIV,
confirment sa pertinence dans ce contexte. nous recommandons d’utiliser la voie trans-
L’objectif de ce travail était d’étudier la morphologie annulaire afin d’injecter un agent thérapeutique, à
des vertèbres lombaires ovines et de caractériser la l’aide d’une aiguille de petit diamètre.

Title : Intervertebral disc regenerative medicine : morphological study of Nucleus Pulposus surgical route in
sheep

Keywords : intervertebral disc, surgical route, degenerative disc disease, sheep

Abstract : Defined as the “disease of the century”, months in the ovine model and a correlation
low back pain (LBP) will affect 80% of the population. between IVD histological alteration and MRI signal.
40% of LBP is due to the intervertebral disc (IVD) In order to inject a therapeutic agent into IVD, it is
degeneration. Currently, treatments are symptomatic, necessary to consider the surgical route. The
but the improvement in the physiopathological transannular approach (TAA) is now the “gold
knowledge of IVD makes it possible to envisage standard”, but it is well recognized that the TAA can
etiopathogenic approaches: the IVD regenerative lead to in-depth alterations of the mechanical
medicine. To demonstrate in vivo the efficacy of properties of the annulus fibrosus (AF). The
theses therapies, degenerative IVD animal models transpedicular approach (TPA) preserves the AF
have been described. Among them, the sheep is an but induces new lesions that must be evaluated.
interesting model. Indeed, natural IVD degeneration The purpose of this work was therefore to study the
is observed in sheep, that is really similar to the feasibility of the TAA and TPA in sheep and
human IVD. Moreover, spinal morphological humans using imaging techniques, and then to
similarities of this large model confirm its relevance in analyse the consequences of these two surgical
this context. routes in sheep during a longitudinal follow-up. Both
The purpose of this study was to analyse the routes are feasible in sheep and humans. In the
morphology of ovine lumbar vertebrae and to context of IVD regenerative medicine, we
characterise spontaneous IVD degeneration in sheep recommend to perform the transannular approach
using imaging and histological methods. This work to inject a therapeutic agent, using a small diameter
showed spontaneous disc degeneration over 6 needle.