LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA KEDOKTERAN BLOK CHEM II PEMERIKSAANKARBOKSIHEMOGLOBIN (METODE HINSBERG-LANG)

Disusun Oleh : Kelompok1 1. Iman Hakim Wicaksana 2. Imelda Widyasari S. 3. Mutia Milidiah 4. Sendyka Rinduwastuty 5. Mayubu Kartika 6. Anisa Kapti Hanawi 7. Rosellina A.S. 8. Muhammad Fadlil Azka 9. Laila Noviatin N.F. G1A010004 G1A010016 G1A010029 G1A010041 G1A010053 G1A010066 G1A010081 G1A010093 G1A010105

KEMENTERIAN PENDIDIKAN NASIONAL UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU ILMU KESEHATAN JURUSAN KEDOKTERAN PURWOKERTO 2012

LEMBAR PENGESAHAN

Oleh : Kelompok1 1. Iman Hakim Wicaksana 2. Imelda Widyasari S. 3. Mutia Milidiah 4. Sendyka Rinduwastuty 5. Mayubu Kartika 6. Anisa Kapti Hanawi 7. Rosellina A.S. 8. Muhammad Fadlil Azka 9. Laila Noviatin N.F. G1A010004 G1A010016 G1A010029 G1A010041 G1A010053 G1A010066 G1A010081 G1A010093 G1A010105

Disusun untuk memenuhi persyaratan mengikuti ujian praktikum Biokimia Kedokteran Blok CHEM II pada Fakultas Kedokteran Dan Ilmu-Ilmu Kesehatan Jurusan Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman Purwokerto

Diterima dan disahkan Purwokerto,8 Juni 2012 Asisten

Yuditya Dwi Cahya G1A008024

BAB I PENDAHULUAN

A. Judul Praktikum Pemeriksaan Karboksihemoglobin (Metode Hinsberg-Lang)

B. Tanggal Praktikum Senin, 4 Juni 2012

C. Tujuan Praktikum 1. Mahasiswa akan dapat mengukur kadar hemoglobin dengan metode Hindsberg-Lang. 2. Mahasiswa akan dapat menyimpulkan hasil pemeriksaan karboksihemoglobin dalam darah pada saat praktikum setelah membandingkannya dengan nilai normal. 3. Mahasiswa akandapatmelakukanpemeriksaanpenunjanguntukmembantumenegakkandiagn osadenganbantuanhasilpraktikum yang dilakukan.

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

A. Dasar Teori 1. Pengertian CO Karbonmonoksida(CO) adalah gas yang berasal dari pembakaran yang tidak sempurna dari bahan yang mengandung karbon seperti minyak, bensin, kayu, dan batu bara. Gas CO adalah polutan yang paling sering ditemui di lapisan terbawah atmosfer. Gas ini bersifat tidak berbau, tidak berwarna, tidak berasa, dan tidak mengiritasi. Karbonmonoksida tidak mengiritasi tetapi sangat beracun, maka dari itu gas CO disebut sebagai silent killer. Symptom dari gas CO tidak terlalu spesifik. Paparan ringan berakibat sakit kepala, myalgia, mual, dan penurunan neurofisiologis.

2. Sumber-sumber CO a. Endogen CO juga dihasilkan di dalam tubuh manusia, oksidasi heme oleh enzim oksigenase (HO) memproduksi sejumlah CO, zat besi, dan biliverdin. Heme adalah struktur utama dari hemoglobin (Hb) dan banyak ditemukan di dalam sel darah merah. Kadar CO yang terukur pada jaringan menunjukkan akumulasi terbanyak di otot, hati, jantung, limpa, dan ginjal. Selain itu penelitian terkini juga membuktikan bahwa CO diproduksi di plasenta dan tali pusat manusia. Namun lokasi dengan kadar CO endogen tertinggi belum diketahui secara pasti (Venditti, 2011). b. Eksogen Karbon monoksida berasal dari alam termasuk dari lautan, oksidasi metal di atmosfir, pegunungan, kebakaran hutan dan badai listrik alam (DepKes, 1999). Selain itu ada pula sumber buatan akibat aktivitas manusia antara lain asap kendaraan bermotor, terutama yang menggunakan bahan bakar bensin.

Selain itu asap rokok juga mengandung CO, sehingga para perokok dapat memajan dirinya sendiri dari asap rokok yang sedang dihisapnya (DepKes, 1999). Secara alamiah CO diproduksi oleh Hydrozoa (siphonophores), suatu makhluk laut, juga oleh reaksi reaksi kimia yang terjadi dalam atmosfer (Slamet, 1994). Selain Hydrozoa, bakteri seperti Streptococccus fecalis, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, dll dapat memproduksi CO (Penney, 2000). Kemudian, pembakaran yang menggunakan bahan bakar seperti alat pemanas dengan menggunakan minyak tanah, gas, kayu dan arang yaitu kompor, pemanas air, alat pembuangan hasil pembakaran dan lain-lain juga merupakan penghasil gas CO (Badan POM,2004).

3. Pembentukan COHb dalam tubuh Di samping peran utama hemoglobin (Hb) sebagai pendistribusi O2 ke jaringan, hemoglobin juga berikatan dengan CO. Ikatan antara Hb dengan CO membentuk carboxyhemoglobin (COHb). Dengan adanya ikatan ini, maka kemampuan darah untuk mendistribusikan oksigen menjadi berkurang. Afinitas CO terhadap hemoglobin adalah 200 kali lebih tinggi daripada afinitas O2 terhadap hemoglobin, akibatnya bila CO dan O2 terdapat bersama-sama di udara akan terbentuk COHb dalam jumlah lebih banyak daripada O2Hb (Sumardjo, 2006). Efek ini menggeser reaksi ke kiri, menghambat distribusi O2 ke jaringan, dan dapat menyebabkan hipoksia (Venditti et all, 2011). hemoglobin dengan CO adalah sebagai berikut: HbO2 + COHbCO+O2 Reaksi antara

Gb 1. Ikatan antara Hb dengan CO dan O2 Karbonmonoksida masuk melalui dari jalur pernapasan ke alveoli adalah dalam bentuk gas, tetapi ketika melalui membran pertukaran dengan darah ada dalam fase cair. Di dalam fase gas, mekanisme penting dari transport CO adalah aliran konvektif oleh otot pernafasan dan difusi di alveolus dalam paru-paru. Dalam fase cair, CO berdifusi melewati membran alveolus kedalam plasma, masuk kedalam sel darah merah kemudian berikatan dengan Hb. CO dengan cepat dipertukarkan dalam alveolus ke sel darah merah karena area pertukaran yang sangat luas dan perbedaan konsentrasi CO antara udara dan darah yang drastis. Diketahui juga bahwa proses masuknya CO lebih cepat daripada proses eliminasinya (Salem dan Katz, 2006). Karbonmonoksida didistribusikan dalam tubuh lewat ikatan dengan

hemoglobin dan myoglobin. Di dalam darah (intravaskular) , CO berikatan dengan Hb untk membentuk COHb, sedangkan di jantung dan otot rangka (ekstravaskular), CO berikatan dengan myoglobin(Mb) untuk membentuk karboksimyoglobin (COMb). Hampir semua CO yang berada diluar pembuluh darah berikatan dengan Mb. Namun ada sejumlah kecil ikatan antara CO dengan sitokrom (Salem dan Katz, 2006).

Waktu paruh CO untuk keluar dari darah dari setiap individu bervariasi. COHb yang berlebihan tidak baik untuk tubuh namun untuk orang dewasa jumlah normal yang ditolerir tubuh adalah 0 1.5% dari total hemoglobin. Dalam tubuh manusia dewasa COHb memiliki waktu paruh 2-6.5 jam. Dalam tubuh neonatus, waktu paruhnya berkisar antara 11-20 menit (Penney, 2000). Untuk konsentrasi COHb 2-10%, waktu paruhnya adalah 2-6 jam, sedangkan waktu paruh pada laki-laki(4,5 jam) yang tidak merokok lebih panjang daripada wanita(3,2 jam). Selama tidur, eliminasi COHb lebih lambat menjadi 8 jam pada pria dan 4,3 jam pada wanita. Hal ini dikarenakan frekuensi pernafasan yang lambat saat tidur dan jumlah Mb yang rendah pada wanita (Salem dan Katz, 2006). Kombinasi dari CO dengan hemoglobin didefinisikan dengan persamaaan Haldane. Dimana O2Hb adalah persentase dari oksihemoglobin. pO2 dan

pCOadalah tekanan parsial dari O2 dan CO, dan M adalah faktor dari afinitas relative dari CO dan O2 ketika hemoglobin jenuh sebanyak 50%. Nilai normal M untuk dewasa, baik normal dalam keadaan keracunan CO (Penney,2000). Bagaimanapun tingkat ikatan dan disosiasi dari Hb lebih lambat untuk CO daripada O2. Karenanya, satu molekul CO dan 218 molekul O2 akan membentuk COHb dan O2Hb dalam jumlah yang sama. M=(COHb)(pO2) / (O2Hb) (pCO)

4. Dampak COHb terhadap tubuh Pada kadar COHb kurang dari 10%, biasanya tidak menunjukkan gejala yang berarti, tetapi setiap komplikasi seperti anemia yang mengurangi kapasitas transpor O2 dapat menunjukkan gejala pada persentase COHb yang lebih rendah. Pada 10 sampai 20 persen COHb, sakit kepala dan dilatasi pembuluh darah kutan dapat tampak, sedangkan pada 20 sampai 30 persen, sakit kepala lebih kuat. Pada 30 sampai 40 persen karboksihemoglobin, sakit kepala yang serius, pusing, disorientasi, mual, dan muntah terjadi. Pada kadar melampaui 40 persen, pasien

biasanya kolaps dan gejala lain lebih berat. Gejala-gejala ini menunjukkan kegagalan transpor O2 demikian juga hambatan langsung dari pengikatan O2 ke sitokrom seperti sitokrom oksidase atau mioglobin.

BAB III METODE PRAKTIKUM A. AlatdanBahanPraktikum 1. Alat a. Spuit 3 cc b. Torniquet c. Plakon d. Pipet ukur 5 ml e. Mikropipet (10 l-100 l) f. Yellow tip g. Beaker glass h. Spatula i. Tabung reaksi 10 ml j. Rak tabung reaksi k. Spektrofotometer l. Kuvet 2. Bahan a. Sampel darah b. EDTA c. Ammonia 0,1 % d. Sodium dithionit

B. Tata Urutan Kerja 1. Persiapan sampel whole blood a. Diambil darah probandus sebanyak 1 cc dengan menggunakan spuit. b. Darah kemudian dimasukkan ke dalam vaccum met yang berisi EDTA. 2. Diambil amonia 0,1% sebanyak 20 ml dan dimasukkan ke dalam glass beaker. 3. Diambil sampel whole blood sebanyak 10 l dengan menggunakan yellow tip. 4. Sampel whole blood dimasukkan ke dalam glass beaker yang berisi amonia 0,1 %, lalu dikocok.

5. Campuran kemudian dipisah ke dalam 2 tabung reaksi, masing-masing sebanyak 5 ml. a. Tabung 1 ditambahkan sodium dithionit sebanyak 1 spatula, diberi label sampel b. Tabung 2 tidak ditambah sodium dithionit, diberi label blangko 6. Diinkubasi selama 5 menit pada suhu kamar. 7. Diukur absorbansinya pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 546 nm dan nilai faktor 6,08.

C. Nilai Normal Nilai normal persentase kadar untuk pemeriksaan kadar HbCO dalam darah dapat dijabarkan sebagai berikut : 1. CO Endogen 2. HbCO 3. Batas toleransi HbCO 4. 5 % : 0,07 % :<1% : 2-5 % : mulai timbul gejala/tidak normal/keracunan

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Hasil Pengamatan Probandus Umur Jenis Kelamin Tabung 1 (Blanko) Tabung 2 (Sample) : Anisa Kapti Hanawi : 18 tahun : Perempuan : 0,06 % : 0,32 %

Sehingga, Kadar HbCO Keterangan : 0,32 % : Normal

B. Pembahasan Berdasarkan hasil pengukuran kadar COHb dari sampel darah, didapatkan hasil yang tidak melebihi batas toleransi kadar COHb. Secara normal sebenarnya darah mengandung COHb sebanyak 0,5 %. Jumlah ini berasal dari CO alami yang diproduksi oleh tubuh selama metabolisme pemecahan heme, yaitu komponen dari hemoglobin dan sisanya berasal dari CO yang terpapar melalui udara. Produksi CO di dalam tubuh sendiri ini bisa sekitar 0,1+1%dari total COHb dalam darah. Bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah EDTA, ammonia 0,1 %, dan sodium dithionit. EDTA berfungsi sebagai zat anti koagulanagar darah yang disimpan di tabung tidak menggumpal. Ammonia 0,1 % digunakan sebagai larutan blangko dan sodium dithionit digunakan sebagai indikator adanya CO yang mampu bereaksi dengan Hb sehingga menghasilkan COHb dalam darah.

C. Aplikasiklinis CO adalah zat yang sangat berbahaya bagi manusia ,karena dapat menyebabkan sakit dan kematian.Daya darah dalam mengambil oksigen berkurang ,sehingga menyebabkan bertambahnya ketegangan pada jantung.Karena lebih banyak darah yang harus diedarkan ke seluruh tubuh dari kadar normal.

Karbonmonoksida

danhemoglobincarboxyhemoglobinbentuk,

menggeser

oksigendan menyebabkanhipoksia jaringan. Sebagaitekanan parsialoksigen (PO2) dalam jaringanturun,jumlah karbon monoksidamemasukijaringan

danmengikathemoproteinsel, sepertimioglobindanoksidasesitokrom, peningkatan, mengganggu fungsi mereka.Setelaheksposurdan yang lebih selama pengobatandengan paru-parudan

oksigen,tekanan

parsialoksigen

tinggidi

ruangvaskularmenyebabkan

tingkatcarboxyhemoglobinmenurunlebih

cepatdaripada tingkatkarbon monoksidaterikat dalamjaringan, di manatekanan parsialoksigenyang lebih rendah.Dengan demikian, tingkat

carboxyhemoglobinmungkin tidakberkorelasi denganpresentasi klinispasien. Keracunan karbon monoksida dapat menyebabkan beberapa kelainan seperti : 1. Hipoksia dan beberapa kelainan yang berkaitan Hipoksia merupakan suatu penyakit yang disebabkan oleh kekurangan suplai oksigen ke jaringan. Idealnya ,setiap 100mL darah meninggalkan kapiler alveolus membawa sekitar 20 mL oksigen.Hanya sekitar 0,3 mL (1,5%) oksigen yang terlarut,sisanya diikat oleh Hb. Namun apabila terdapat banyak CO di udara,maka CO akan bersaing dengan O2 untuk berikatan dengan Hb.Karena afinitas CO lebih kuat dalam mengikat Hb,CO dapat mengikat 250 kali lebih cepat dari O2. Maka yang bisa berikatan dengan kuat dengan Hb adalah CO sedangkan O2 akan tergeser sehingga tidak dapat berikatan lagi dengan Hb,sehingga akan terjadi gangguan respirasi utama dalam distribusi O2 ke jaringan tubuh,tubuh akan kekurangan oksigen dan akan mengakibatkan hipoksia. Gas ini juga dapat mengganggu aktifitas seluler lainnya yaitu dengan mengganggu fungsi organ yang menggunakan sejumlah besar oksigen seperti otak dan jantung. Efek paling serius adalah terjadi keracunan secara langsung terhadap sel-sel otot jantung, juga menyebabkan gangguan pada sistem saraf( Martini ,edisi 8 halaman 855856).

Karbon

monoksida

menyebabkan

hipoksia

dengan

membentuk

carboxyhemoglobin dan pergeseran kurva disosiasi oksihemoglobin ke kiri afinitas .Ikatan karbon monoksida untuk hemoglobin lebih kuat 200 kali dari oksigen, mengakibatkan pembentukan carboxyhemoglobin bahkan dengan jumlah karbon monoksida yang relatif rendah yang dihirup. Karbon monoksida meningkatkan kadar heme sitosol, yang menyebabkan stres oksidatif, dan mengikat protein heme sitokrom oksidase platelet dan

mengganggu respirasi seluler dan menyebabkan produksi spesies oksigen reaktif, yang pada gilirannya menyebabkan necrosis neuronal dan apoptosis. selular Gangguan respirasi menimbulkan respon stres, termasuk aktivasi hypoxia-inducible factor 1, sehingga terjadi kelainan neurologis dan cedera jantung, tergantung pada dosis karbon monoksida, dengan cara regulasi gen. Paparan karbon monoksida juga menyebabkan peradangan melalui beberapa jalur yang independen. (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2771695/?tool=pmcentre z)

2. Hypoxemia Hypoxemia adalah suatu penyakit yang juga disebabkan karena Hb mengikat oksigen terlalu sedikit .yang diakibatkan karena Hb telah berikatan kuat dengan CO.

3. Kelainan Kardiovaskuler CO juga dapat mengakibatkan gangguan kardiovaskuler,seperti kelainan jantung dan kelainan neurologis karena terjadi pengikatan HbCO yang kuat daripada pengikatan HbO2. CO yang terkandung dalam asap rokok dan emisi kendaraan bermotor,dapat berefek pada kardiovaskuler.Dapat menyebabkan beberapa penyakit seperti sesak napas,kejang ,koma bahkan kematian,karena terpapar CO yang masuk ke tubuh melalui inhalasi.

CO juga terdapat sekitar 14,76 29,73% pada keramik.Maka,para pekerja di pabrik keramik juga rentan terpapar oleh CO yang berefek buruk pada sistem kardiovaskuler dan respirasi (Margaretha, Suratmi). 4. Keracunan CO pada konsumen rokok Dalam rokok terkandung zat-zat seperti nikotin dan tar.Dalam tar itu terkandung CO yang dapat berdampak buruk.Terjadi peningkatan

karboksihemoglobin pada penggunaan

tembakau di rokok.Pada perokok

berat,terjadi peningkatan kadar HbCO sekitar <10% - 15%(Ernst and Zibrak, N Engl J Med. 1998;339:1603-8),dan pada wanita sekitar usia 48 tahun yang merupakan perokok terjadi peningkatan kadar HbCO sekitar 24,2 %.Dengan peningkatan kadar HbCO di dalam tubuh ini maka dapat mengakibatkan efek yang buruk bagi tubuh,karena yang lebih banyak diikat oleh Hb itu adalah karbon monoksida,maka Hb tidak dapat mengikat oksigen secara normal.

BAB V KESIMPULAN

1. Hasil yang di perolehdaripemeriksaankadarkarboksihemoglobinprobandusadalah 0,32 % makatidak melewati ambang batas karenakurangdr 1% 2. karboksihemoglobinadalah hemoglobin yang dapatmengikatsuatu gas

hasilpembakaran yang tidaksempurna. 3. AplikasiklinisdaripemeriksaanHbCO, diantaranya: - asfiksia - hipoksia - asidosis respiratory

DAFTAR PUSTAKA

DepKes, 1999. Parameter Pencemar Udara dan Dampaknya Terhadap Kesehatan. Available At :

www.depkes.go.iddownloadsUdara.PDF, diakses 28 Mei 2012 Framingham Heart Study, F. M. (Circulation. 2010 October 12; 122(15): 14701477. ). Exhaled Carbon Monoxide and Risk of Metabolic Syndrome and Cardiovascular Disease in the Community. NIH Public Access, 14701477. Frederic Martini, P., & Ph.D., J. L. (2009). Fundamentals Of Anatomy and Physiology. United States Of America: Pearson Education,Inc,. Haefele, E. (2009). The Paramedic. America,New York: McGraw-Hill

Companies,Inc. InfoPOM Badan POM Volume 5 No. 1 Januari 2004. 2004. Keracunan yang Disebabkan Gas Karbon Monoksida. Jakarta: Badan POM. Manuscript. (available in PMC 2010 October 9). Dual Pathways of Carbon Monoxide-Mediated Vasoregulation: Modulation by Redox Mechanisms. NIH Public Access, 775783. . Penney, D. G. (2000). Carbon Monoxide Toxicity. Florida: CRC Press LLC. Salem, H., & Katz, S. A. (2006). Inhalation Toxicology. Florida: CRC Press Taylor & Francais Group. Slamet. 1994. Karbonmonoksida dan Dampaknya terhadap Kesehatan. Available at: http://www.chem-istry.org/artikel_kimia/kimia_lingkungan/karbonmonoksida-dan-dampaknyaterhadap-kesehatan/ Sumardjo, D. (2006). Pengantar Kimia: Buku Panduan Kuliah Mahasiswa Kedokteran Dan Prodram Strata I Fakultas Bioeksakta. Jakarta: EGC. Venditti, C. C., Casellman, R., & Smith, G. N. (2011). Effects Of Chronic Carbon Monoxide Exposure On Fetal Growth And Development In Mice. Biomed Central.