Relatório 2

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1. RELATÓRIO 2- SEMEIO DE BACTÉRIAS- PREPARAÇÃO DE INOCULO

Introdução
As técnicas de semeadura em laboratório de microbiologia consistem

justamente em métodos pelo qual se transfere pequenas quantidades de
microrganismos para um meio de cultura em que o material a ser analisado será
semeado, ou seja: é preparado um ambiente perfeito para que determinado
microrganismo presente em uma amostra de material cresça e se desenvolva para
análise posterior.
Existem diferentes técnicas de semeadura em laboratório de

microbiologia, sendo que o principal material utilizado como base para a cultura é
o ágar — um material gelatinoso e muito rico em carboidratos.
As técnicas de semeadura empregadas em uma análise mudam de

acordo com o tipo do meio de cultura e microrganismo que será estudado. Para
garantir que somente o organismo desejado seja semeado, é preciso ter certeza de
que o ambiente esteja totalmente estéril.
Tipos de meios de cultura existentes quanto ao estado físico:
1. Sólido: Ágar-ágar (1.5%) utilizado isolamento de colônias bacterianas.
2. Semissólido: Ágar-ágar (0.5/0.7%) utilizado para observação de

motilidade.
3. Líquido: Caldo utilizado para enriquecimento bacteriano.
2. TÉCNICAS DE SEMEIO
Para o isolamento, cultivo como também a identificação, são necessárias
técnicas adequadas de inoculação em meio de cultura, que permitam o crescimento
mm uma bactéria, o que irá determinar a escolha da técnica será o
tipo de meio utilizado, alguns exemplos são: Técnica de espalhamento em meio
sólido com swab ou alça de drigalski, Técnica de isolamento com estrias múltiplas
em meio sólido por esgotamento com alça de inoculação, semeio em meio líquido e
semeio por picada.
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Em nossa aula prática utilizamos o meio líquido BHI contendo a bactéria

e utilizamos a técnica de esgotamento, necessária para isolamento e obtenção de
culturas puras.
Meios de cultura utilizados na aula prática:
1. Ágar sangue: Meio enriquecido que permite o crescimento de bactérias

piogênicas (forma ou produz pus) e observação dos três tipos de hemólises (alfa,
beta e gama).
2. Mueller Hinton: Meio enriquecido e transparente, utilizados para

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analisar suscetibilidade de organismos a antibióticos. Também é usado para isolar e

cultivar Neisseria e Moraxella.
3. Cled: Meio de cultura enriquecido, destinado ao isolamento e cultivo de

diversos microrganismos, recomendado para amostras de urina, fornecendo uma
boa diferenciação colonial, com características diagnósticas nítidas. Permite,
portanto, a cultura e contagem de bactérias Gram-positivas ou Gram-negativas,
impedindo a formação do “véu” de Proteus spp.
4. Manitol: Meio de cultura seletivo, muito usado para o isolamento

de Staphylococcus aureus de amostras biológicas como urina, secreções, ferida etc.
Também usado na indústria alimentícia para o isolamento e identificação de
estafilococos em líquidos e produtos lácteos, carnes e derivados, incluindo
conservas e pescados. Possui alta concentração de sal (7,5%).
5. MacConkey: Meio seletivo e indicador, destinado para o crescimento

de bactérias Gram negativas e indica a fermentação de lactose. Colônias de
bactérias que fermentam lactose tornam o meio rosa choque e as bactérias que não
são fermentadoras de lactose tornam o meio amarelo claro.
6. E M B: Meio para diferenciação ligeiramente seletivo utilizado para o

isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram negativos (Enterobacteriaceae
e outros bastonetes gram-negativos) provenientes de amostras clínicas.
7. Caldo BHI: Meio para cultivo de streptococcus,

pneumococos, meningococos, enterobactérias, não
fermentadores, leveduras e fungos. Pode ser utilizado na
preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos
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antimicrobianos, para realização de teste de coagulase em tubo, para teste de

crescimento bacteriano a 42 e 44°C e para teste de motilidade em lâmina. O caldo
BHI é um meio líquido nutritivo destinado ao cultivo de microrganismos fastidiosos.
Caldo BHI
Objetivo:
8. Semeio de bactérias nos meios de culturas.
9. Observação de crescimento e morfologia das bactérias.
10. Análise de resultado de inóculo de bactérias.
Materiais utilizados:
11. Meios de cultura de bactéria
12. Tubo com caldo BHI
13. Solução de McFarland 0,5 (padrão)
14. Escala de turbidez ou McFarland
15. Pipeta semiautomática
16. Ponteira descartável
17. Uso de espectrofotômetro
18. Cubeta
19. Alça de inoculação

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3. PROCEDIMENTOS:
1. Pegamos um tubo de ensaio contendo o caldo BHI e a bactéria, e um
tubo com apenas o caldo BHI.
2. Com o auxílio da pipeta, pegamos 1ml de material contaminado e

pipetamos no meio que estava estéril, utilizamos o agitador vórtex para a mistura do
material.
3. Com a escala de McFarland analisamos o grau de turbidez do meio.
4. Logo após o material foi levado para fazer a leitura no

espectrofotômetro.
Deve ser ajustado na frequência 625mm e leitura em absorbância

(quantidade de luz que é absorvida) na escala de 0,08 a 0,12mm.
5. Foi colocado a amostra na cubeta e feito a análise, obtemos o

resultado de 0,148, este resultado sendo superior ao valor de absorbância que foi
dado de 0,08 a 0,12mm.
6. Precisamos fazer um ajuste de com a solução McFarland

(H2SO4+BaCl).
7. O resultado obtido foi 0,09mm sendo um valor que se enquadrava no

valor estipulado.
8. Com a amostra bacteriológica pronta, com o auxílio da alça de

inoculação fizemos o semeio nos meios sólidos com a técnica de esgotamento.
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9. Armazenamos os meios contaminados na estufa.
10. Aguardamos uma semana para analisar o crescimento das

bactérias nos meios.
4. RESULTADOS:
Após o semeio das bactérias podemos observar seu crescimento e fazer
a classificação gram positiva ou negativa do resultado apresentado em cada meio de
cultura.
Tabela de Resultados
Meios de cultura
Ágar sangue Bactéria Gama hemolítica- Gram positiva
Mueller Hinton Houve um pequeno crescimento de bactéria
Cled Presença de colônias amareladas- Gram positiva
Manitol Presença de pequenas colônias de bactéria- Gram

positiva
MacConkey Não houve crescimento de bactéria-Gram positiva
EMB Não houve crescimento de bactéria-Gram positiva

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Cor original do meio: vermelho.
Gama hemólise (sem hemólise):

ausência de halo ao redor das
colônias (eritrócitos permanecem
íntegros).
Colônias bacterianas fermentadoras de lactose.
Lactose positiva: tornam o meio rosa
Lactose negativa: tornam o meio amarelo claro.

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Cor original do meio: amarelo palha.
A zona do diâmetro é particular

para cada droga e organismo, sendo
comparado com diâmetros
padronizados pelo NCCLS, que
determina cada microrganismo
sendo sensível, intermediário ou
resistente.
Cor original do meio: Roxo
Não teve crescimento
Cor original do meio: azul claro.
Colônias lactose positiva: cor amarela.
Colônias lactose negativa: cor azul.

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Cor original: Rosa claro
Gram positiva: Cor amarela
Gram negativa: Cor Rosa choque
Conclusão:
Concluímos que as bactérias crescem nos meios que condizem com suas
características básicas de vida. E para uma boa análise bacteriológica é necessário
a presença de um meio nutritivo, PH ideal, temperatura adequada, presença de
oxigênio, água e principalmente de um meio estéril para não atrapalhar a análise de
bactérias que se desenvolveram.
E com os semeios feito na aula prática conseguimos identificar em quais

meios as bactérias tem mais afinidade.
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5. BIBLIOGRAFIA:
(s.d.). Acesso em 19 de abril de 2019, disponível em https://pt.slideshare.net/hemillyrayanne/meios-

de-cultura-e-tecnicas-de-semeio
(s.d.). Acesso em 19 de abril de 2019, disponível em

https://bteduc.com/guias/83_A_tecnica_de_esgotamento_do_inoculo.pdf
A, H. (s.d.). Microbiologia Ilustrada 2º ed.
conteudo/artigos/farmacia/cultivo-de-microorganismos-com-tecnica-quantitativa-e-de-
esgotamento/47599. (s.d.). Acesso em 19 de abril de 2019, disponível em
http://www.portaleducacao.com
(s.d.). slide meio de cultura apresentado em sala.

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Sumário
1. RELATÓRIO 2- SEMEIO DE BACTÉRIAS- PREPARAÇÃO DE INOCULO ............................................... 1
2. TÉCNICAS DE SEMEIO ...................................................................................................................... 1
3. PROCEDIMENTOS: ........................................................................................................................... 5
4. RESULTADOS: .................................................................................................................................. 6
5. BIBLIOGRAFIA: ............................................................................................................................... 10

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1. RELATÓRIO 2- SEMEIO DE BACTÉRIAS- PREPARAÇÃO DE INOCULO

As técnicas de semeadura em laboratório de microbiologia consistem

Existem diferentes técnicas de semeadura em laboratório de

As técnicas de semeadura empregadas em uma análise mudam de

Tipos de meios de cultura existentes quanto ao estado físico:

1. Sólido: Ágar-ágar (1.5%) utilizado isolamento de colônias bacterianas.

2. Semissólido: Ágar-ágar (0.5/0.7%) utilizado para observação de

3. Líquido: Caldo utilizado para enriquecimento bacteriano.

Em nossa aula prática utilizamos o meio líquido BHI contendo a bactéria

Meios de cultura utilizados na aula prática:

1. Ágar sangue: Meio enriquecido que permite o crescimento de bactérias

2. Mueller Hinton: Meio enriquecido e transparente, utilizados para

analisar suscetibilidade de organismos a antibióticos. Também é usado para isolar e

3. Cled: Meio de cultura enriquecido, destinado ao isolamento e cultivo de

4. Manitol: Meio de cultura seletivo, muito usado para o isolamento

5. MacConkey: Meio seletivo e indicador, destinado para o crescimento

6. E M B: Meio para diferenciação ligeiramente seletivo utilizado para o

7. Caldo BHI: Meio para cultivo de streptococcus,

antimicrobianos, para realização de teste de coagulase em tubo, para teste de

8. Semeio de bactérias nos meios de culturas.

9. Observação de crescimento e morfologia das bactérias.

10. Análise de resultado de inóculo de bactérias.

11. Meios de cultura de bactéria

12. Tubo com caldo BHI

13. Solução de McFarland 0,5 (padrão)

14. Escala de turbidez ou McFarland

15. Pipeta semiautomática

16. Ponteira descartável

17. Uso de espectrofotômetro

19. Alça de inoculação

2. Com o auxílio da pipeta, pegamos 1ml de material contaminado e

3. Com a escala de McFarland analisamos o grau de turbidez do meio.

4. Logo após o material foi levado para fazer a leitura no

Deve ser ajustado na frequência 625mm e leitura em absorbância

5. Foi colocado a amostra na cubeta e feito a análise, obtemos o

6. Precisamos fazer um ajuste de com a solução McFarland

7. O resultado obtido foi 0,09mm sendo um valor que se enquadrava no

8. Com a amostra bacteriológica pronta, com o auxílio da alça de

9. Armazenamos os meios contaminados na estufa.

10. Aguardamos uma semana para analisar o crescimento das

Ágar sangue Bactéria Gama hemolítica- Gram positiva

Mueller Hinton Houve um pequeno crescimento de bactéria

Cled Presença de colônias amareladas- Gram positiva

Manitol Presença de pequenas colônias de bactéria- Gram

MacConkey Não houve crescimento de bactéria-Gram positiva

EMB Não houve crescimento de bactéria-Gram positiva

Cor original do meio: vermelho.

Gama hemólise (sem hemólise):

Colônias bacterianas fermentadoras de lactose.

Lactose positiva: tornam o meio rosa

Lactose negativa: tornam o meio amarelo claro.

Cor original do meio: amarelo palha.

A zona do diâmetro é particular

Cor original do meio: Roxo

Não teve crescimento

Cor original do meio: azul claro.

Colônias lactose positiva: cor amarela.