Exercicios8 - PCR e Eletroforese

UNIVERSIDADE DE CAXIAS DO SUL – UCS
PRINCÍPIOS DE BIOLOGIA MOLECULAR - CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

Profa. Raquel Balestrin
Discente: Edgard Fernando Bonno…………………….……………………………………………………Turma D

Exercícios: PCR e Eletroforese
PCR
1. O que é necessário para realizar uma reação em cadeia da DNA-polimerase (PCR)?
DNA a ser amplificado (conhecido). Primers específicos. Enzima DNA polymerase (enzima de alta fidelidade
e estabilidade). Tampão da enzima. Cloreto de Magnésio, dNTPS, água.
2. Em biologia molecular, o que é PCR e o que é necessário para a sua execução?
Técnica “in vitro” que permite que o DNA de uma região selecionada do genoma seja amplificado um bilhão
de vezes, desde que parte de sua sequência nt seja conhecida
3. Em uma PCR, cada ciclo tem uma etapa de desnaturação, uma de anelamento e uma de
alongamento. A temperatura de desnaturação é sempre elevada (superior a 90°C), para promover o
rompimento das pontes de hidrogênio entre bases complementares, e a temperatura de alongamento
é determinada pela DNA-polimerase termoestável utilizada, por exemplo, a DNA-polimerase de
Thermus aquaticus, que tem atividade máxima em temperaturas em torno de 75°C. O que determina
a temperatura de anelamento a ser utilizada no ciclo? Explique.
A etapa de anelamento dos primers, a temperature depende essencialmente ao tamanho e a sequência do

primer utilizado (ricos em AT ou GC), permitindo a hidibrização DNA-DNA dos primers que flanqueiam a região
alvo.
4.
5. Assinale V ou F para cada uma das proposições sobre a Técnica de PCR em Tempo Real. (31/32)
a. (V) A técnica de PCR em tempo real depende do uso de fluorescência, que é medida ao final
da reação, tal como o produto de PCR comum é corrido em gel de agarose, geralmente
visualizado em luz UV.
b. (V) tem como parâmetro importante o Ct (cycle threshold), que indica qual o ciclo da
reação no qual a amplificação começa a ser detectada a níveis superiores ao ruído
(background) e passa a acontecer de forma exponencial.
c. (F) não pode ser aplicada na detecção de SNP (single nucleotide polymorphisms –
polimorfismos de nucleotídeo único), apesar de sua alta sensibilidade.
d. (F ) É possível o uso de corantes fluorescentes intercalantes de DNA, tais como o
Sybergreen®, ou de sondas específicas acopladas a flouróforos de escolha. A primeira
técnica é mais específica que a segunda.
e. (V) O uso de sondas do tipo Taqman, acopladas a diferentes fluoróforos, permite realização
do experimento em multiplex.
f. (F ) Embora a PCR em tempo real seja extremamente precisa, ela não pode ser aplicada a
estudos de carga viral.
5) Observe as ilustrações dos géis abaixo e identifique o tamanho aproximado dos fragmentos de DNA
(bandas) analisados usando como base o marcador de tamanhos moleculares de fragmentos de DNA (M
= Molecular Length Marker).
Marcador 2:…… 85pb – Marcador 3:….. 90pb e 180pb – Marcador 4:……… 180pb – Marcador5:…….. 90pb
Marcador2:….15pb – Marcador3:……5pb – Marcador 4:……75pb – Marcador5:……..70pb –

Marcador6:.....70pb – Marcador7:……15 e 75pb – Marcador8:….50pb – Marcador9:….5 e 48pb
6. A respeito da eletroforese de ácidos nucleicos, assinale a opção correta.

A- Pode ser realizada em géis de poliacrilamida ou de agarose. A escolha entre os dois
dependerá primariamente do tipo de ácido nucleico a ser analisado, por exemplo, RNA ou DNA.
B- Para eletroforese, os ácidos nucleicos precisam ser misturados a um tampão de amostra, que deve
conter um agente espessante.
C- Deve ser realizada em amperagem constante, a ser determinada pela concentração do gel no qual
serão aplicados os ácidos nucleicos.
D- Géis de poliacrilamida são frequentemente utilizados no controle de qualidade de síntese de
oligonucleotídios. A escolha da poliacrilamida permite a detecção de oligonucleotídio sintetizado com
erro devido a substituição de uma base por outra, em um único poço.
7 - Acerca da extração, purificação e eletroforese de ácidos nucleicos, assinale a opção correta.
A) Diferentemente do que ocorre com bactérias, a purificação de DNA genômico de células eucarióticas
pode ser realizada utilizando-se a sonicação para a quebra das células, uma vez que o DNA eucarioto está
protegido no núcleo, e envolto por histonas.
B) A contaminação de RNA total em uma preparação de DNA pode ser eliminada sem o tratamento da
amostra com RNase H.
C) Se uma preparação de DNA plasmidial se encontra contaminada com DNA genômico não degradado, é
possível separá-los por meio da realização da eletroforese da amostra em gel de agarose, seguida do
isolamento da banda plasmidial a partir do gel e da eluição do DNA plasmidial da banda.
D) A utilização de centrifugação em gradiente de cloreto de césio é uma das etapas da purificação de DNA,
que, contudo, não pode ser utilizada para a separação de RNA.
8 - Acerca da eletroforese de ácidos nucleicos, assinale a opção correta.

A) A escolha entre a utilização de um gel de poliacrilamida ou de agarose baseia-se principalmente no
tamanho dos fragmentos a serem analisados ou separados, sendo aquele utilizado preferencialmente para
pequenas moléculas, e este para grandes moléculas.
B) Os tampões TAE e TBE (Tris-acetato-EDTA e Tris-boratoEDTA, respectivamente) podem ser utilizados
para a eletroforese de forma simultânea; a escolha entre um ou outro deve ser feita apenas por motivos
econômicos.
C) A integridade do RNA total extraído pelo protocolo que utiliza fenol e sais não pode ser verificada em
géis de agarose comum, mas sim apenas em géis tratados com agentes inibidores de Rnase.
9 - A técnica de eletroforese permite separar fragmentos de proteínas e ácidos nucleicos por tamanho
e carga elétrica. Com base na figura abaixo, que representa uma corrida de eletroforese de DNA,
marque a alternativa CORRETA:
a) Os fragmentos maiores de DNA migram mais rápido do
que os fragmentos menores, devido ao seu alto peso molecular.
b) A utilização do Marcador Molecular é indicada para auxiliar
na estimativa da concentração dos fragmentos de DNA que
aparecerem no gel.
c) A coloração da amostra no gel é feita por um corante
intercalante de DNA que tem afinidade com as ligações
fosfodiéster da referida molécula.
d) A migração das amostras ocorre no sentido do polo negativo
(–) para o polo positivo (+), devido a carga negativa do fosfato
localizado no nucleotídeo de DNA.

Exercicios8 - PCR e Eletroforese

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Exercicios8 - PCR e Eletroforese

Enviado por

Dados do documento

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Exercicios8 - PCR e Eletroforese

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

UNIVERSIDADE DE CAXIAS DO SUL – UCS

PRINCÍPIOS DE BIOLOGIA MOLECULAR - CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

Discente: Edgard Fernando Bonno…………………….……………………………………………………Turma D

2. Em biologia molecular, o que é PCR e o que é necessário para a sua execução?

A etapa de anelamento dos primers, a temperature depende essencialmente ao tamanho e a sequência do

Marcador2:….15pb – Marcador3:……5pb – Marcador 4:……75pb – Marcador5:……..70pb –

6. A respeito da eletroforese de ácidos nucleicos, assinale a opção correta.

8 - Acerca da eletroforese de ácidos nucleicos, assinale a opção correta.

Você também pode gostar